TINCIN DIFERENCIAL

La tincin diferencial requiere ms de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre varios tipos de clulas bacterianas. Una tincin diferencial tpicamente consiste de tres pasos principales: Primero un colorante primario, el cual se utiliza para teir a todas las clulas en la tincin; Segundo un paso de decoloracin, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de clulas Tercero un colorante de contraste, el cual tie las clulas recin decoloradas pero no tiene efecto sobre las clulas que an retienen el colorante primario. La tincin propuesta por el mdico dans Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales ms utilizadas en bacteriologa, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reaccin de la tincin de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen molculas de cido teicoico. El cido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal violeta-yodo-cido teicoico es muy difcil de remover. Como la pared celular de las clulas Gram positivas retiene estos compuestos, es ms difcil decolorar una clula Gram positiva que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la clula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol tambin disuelve mucho de la capa exterior de lipopolosacrido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remocin del colorante primario cristal violeta de estas clulas.

BACTERIA GRAM POSITIVA

BACTERIA GRAM NEGATIVA

Cuando otro colorante, usualmente safranina, se aade, las clulas Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tincin, las clulas Gram positivas sern del color del cristal violeta, o colorante primario, y las clulas Gram negativas sern del color de la safranina que es el colorante de contraste. La Tincin Gram tiene valor diagnostico y puede ser aplicada a diversos y mltiples tipos de especmenes clnicos como lquidos corporales estriles (LCR), exudados, excreciones (orina), secreciones (esputo), abscesos y tejidos. Tambin puede aplicarse a diferentes tipos de materiales de uso hospitalario como catteres y soluciones para el diagnostico y control de las enfermedades intrahospitalarias.

PROCEDIMIENTO DE LA TINCION GRAM

1. Marcar y realizar un extendido de la muestra clnica o de una colonia sobre un portaobjetos (placa) y dejar secar. 2. Fijar el material a estudio a la placa pasndola 2 o 3 veces por la llama de un mechero de Bunsen evitando el excesivo calentamiento. 3. Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con cristal violeta durante un minuto. 4. Lavar con agua corriente. 5. Cubrir el portaobjetos con Lugol de Gram durante un minuto. 6. Lavar con agua corriente 7. Cubrir el portaobjetos con alcohol-acetona durante 5 seg. 8. Lavar con agua corriente. 9. Cubrir el portaobjetos con safranina durante un minuto. 10. Lavar con agua corriente. 11. Dejar secar al aire. 12. Observar a microscopio con aceite de inmersin, objetivo de 100x, condensador abierto totalmente para que la luz pase y se obtenga buena iluminacin.

BIBLIOGRAFIA
http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcari ontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%20Gram.pdf http://www.a14.san.gva.es/laboratorio/Web/gram.htm http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_ gram.pdf http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm http://www.acuanatura.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetincion.pdf http://faa.unse.edu.ar/document/apuntes/biol/Gram.pdf http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColoracionGRAMv2.pdf