UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA DE ICA FACULTAD DE CIENCIAS

Escuela Acadmico Profesional de Biologa

Presentado por: Diego Segura Loayza Jonathan Noriega Morales

INTRODUCCIN

Presentado por: Noriega, J. y Segura, D.

Presentado por: Noriega, J. y Segura, D.

Biologa Molecular Forense

ESTRUCTURA DEL ADN

Presentado por: Noriega, J. y Segura, D.

A)
5end
| Phosphate

B)
O
5

Base (A, T, C, or G)

HO

P O-

O
4

CH2

| SugarBase | Phosphate | SugarBase | 3end

O
H H
3

H
2

H
5

O HO P O-

H O
4

Base (A, T, C, or G)

CH2

O
H H
3

H
2

OH

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Hydrogen bonds

3 5 A=T G C hybridized strands Phosphate-sugar T=A backbone CG A=T A T A T G C C denatured G C 5 strands 3 G

5
A=T GC

T=A

CG

A=T T=A

CG CG

GC

5
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Human Genome
23 Pairs of Chromosomes + mtDNA
Located in cell nucleus

Autosomes
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/guide/

2 copies per cell

Located in mitochondria (multiple copies in cell cytoplasm)

mtDNA

3 4

9 10 11 12

16,569 bp

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 X Nuclear DNA

Mitochondrial DNA 100s of copies per cell

3.2 billion bp

Sexchromosomes

Figure 2.3, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition 2005 Elsevier Academic Press

Presentado por: Noriega, J. y Segura, D.

Presentado por: Noriega, J. y Segura, D.

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Fuente de DNA: Manos

Apoyabrazos (automvil) Cable elctrico Papel (doblada a mano)

Gorra de beisbol (borde)

Envoltura (autoadhesivo)

Lapicero

Mecate

Cartuchos gastados calibre 22

Bolsas de asa de plstico

Tapa de botella

Huella digital (individual)

Palanca con tirantes

Barra de chocolate (parte final)

Gasa y cinta adhesiva (para cubrir punta de dedos)

Guantes (interior y exterior)

Arrancador remoto de carro

Encendedor de cigarro

Cuerda

Papel de cigarro

Martillo (cabeza y mango)

Mango de destornillador Hebilla del (automvil) cinturn de seguridad

Control de nivel de seal de luz (automvil)

Esposas Bolas de carne (de 1 cm y enrolladas a mano) Notas adhesivas

Tarjeta de crdito (tarjeta ATM)

Cordones de zapato

Compartimiento de caja desmontable (pistola)

Volante de auto Cinta en la manija del club (superficie expuesta y puesto en capas) Pistola de juguete

Moneda de diez centavos

Interruptor de encendido

Timbre de la puerta

Llaves

Campanilla

Mango de cuchillo

Wiener (salsa de hot dog)

Barril exterior de la jeringa de drogas

Revista (de armas de fuego)

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Fuente de DNA: Boca y Nariz

Bolsa de aire (vehculo)
Pepa de mordida manzana marcas de

Envoltura
Borde de vaso Chicle Jamn (marca de mordida) Inhalador (dentro de la pieza bucal) Lpiz labial (superficie superior y externa del estuche)

Sellos (incluye los autoadhesivos)

Sorbete (de vasos de beber) Receptor de telfono Termo (taza adjunta) Dientes Cepillo de dientes Mondadiente Utensilios (tenedor, cuchara, etc.) Vmito (lquido/esputo como bilis) Soldadura ojos/nariz) de gafas (borde de

Pasamontaa (gorro de lana) Bilis en la vereda Marcas de mordida Tapa de botella Palo bucal cortado) solamente (algodn

Secreciones nasales (pauelo) Strudel de durazno Botellas/latas de refresco Palo de helado Salame (marca de mordida) Cuello del abrigo de esquiar

Pastel (marca de mordida) Cheesecake (marca de mordida) Alitas de pollo Barra de chocolate (marca de mordida) Colilla de cigarro

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Fuente de DNA: Cuerpo en general

Gorro de bisbol/sombrero (algodn del borde interior) de vaquero Anteojos (piezas de nariz y odos) Lgrimas (en pauelo) Pauelo de papel para la limpieza de axilas de camisa (sudor) Medias Cuchillo de bao encontrado en la trampa del bao Orina en nieve

Agujero de bala en la pared y la bala

Cabello

Restos de cadveres

Peine (para cabello)

Restos de incendio Fragmentos de lentes de contacto (de la bolsa de la aspiradora) Caspa (y restos celulares) de pasamontaa y gorros de cocina Cordn de embrin (umbilical)

Reposacabezas (automvil) Capucha (unida a la espalda de una chaqueta)

Tejido

Trampa de ducha tipo S para agua

Navaja de afeitar

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Markers Used (Biology) High

RFLP Multi-Locus Probes

RFLP Single Locus Probes

Multiplex STRs

Power of Discrimination (Genetics)

mtDNA

Low Slow

PolyMarker D1S80 single STR DQ ABO blood groups Fast

Speed of Analysis (Technology)

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Biologa Molecular Forense

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA Y OTROS MTODOS

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ORGANIC

CHELEX
SDS, DTT, EDTA and

FTA Paper
Apply blood to paper and allow stain to dry

Blood stain

proteinase K

Blood stain

Water PUNCH

INCUBATE (56 oC) Centrifuge

Phenol, chloroform, isoamyl alcohol

INCUBATE (ambient)

Centrifuge
REMOVE supernatant

VORTEX Centrifuge
TRANSFER aqueous (upper) phase to new tube

5% Chelex

WASH Multiple Times with extraction buffer REMOVE supernatant PCR Reagents

TE buffer CONCENTRATE sample

(Centricon/Microcon-100 or ethanol precipitation)

INCUBATE (56 oC) INCUBATE (100 oC) Centrifuge QUANTITATE DNA PERFORM PCR

(NO DNA QUANTITATION TYPICALLY PERFORMED WITH UNIFORM SAMPLES)

Centrifuge QUANTITATE DNA

PERFORM PCR Presentado por: Noriega, J. y Segura, D.

PERFORM PCR

Remove a portion of the mixed stain

SDS, EDTA and proteinase K (cell lysis buffer) Incubate at 37 oC Centrifuge

Perpetrators sperm mixed with victims epithelial cells

sperm pellet

SDS, EDTA and proteinase K + DTT

REMOVE supernatant
DTT lyses sperm heads
sperm pellet

Male Fraction

Female Fraction

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Importance of DNA Quantitation

(prior to multiplex PCR)
DNA amount
(log scale) 100 ng

High levels of DNA create interpretation challenges (more artifacts to review)

-A +A

10 ng

Too much DNA Off-scale peaks Split peaks (+/-A) Locus-to-locus imbalance
2.0 ng Well-balanced STR multiplex

1 ng

STR Kits Work Best in This Range

0.5 ng

0.1 ng

0.01 ng

Too little DNA Heterozygote peak imbalance Allele drop-out Locus-to-locus imbalance Stochastic effect when amplifying low levels of DNA produces allele dropout

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Female-Male Mixture Performance with Autosomal vs. Y-Chromosome DNA Markers

Female Victim DNA Profile

No signal observed

Male Perpetrator DNA Profile

DNA Profile from Crime Scene

Autosomal STR Profile

Y-Chromosome STR Profile

Figure 9.2, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition 2005 Elsevier Academic Press

Blood Group

Antigens

Antibodies

Can give blood to

Can receive blood from

AB

A and B

None

AB

AB, A, B, 0

A and AB

A and 0

B and AB

B and 0 0

None

A and B

AB, A, B, 0

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PRODUCTOS COMERCIALES

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Negative test
C T

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