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Taxa de gestao em guas receptoras de embrio cclicas e acclicas tratadas com progesterona de longa ao. B. R. TRIDAPALI

Pregnancy rate in cyclical and acyclic embryo recipient mares treated with progesterone long action. B. R. TRIDAPALI

RESUMO

Em um programa comercial de transferncia de embries realizado no perodo de agosto a outubro de 2011 em dois haras localizados na cidade de Avar SP, 71 embries foram transferidos. Foi realizado neste experimento um estudo comparativo da taxa de gestao em trs diferentes grupos de guas receptoras de embrio; um grupo de 37 guas acclicas (Grupo I) tratadas com progesterona de longa ao (P4 LA), outro grupo de 16 guas cclicas normais (Grupo II) sem serem suplementadas com P4 LA e um ultimo grupo de 18 guas cclicas, porem no se enquadravam como receptoras aptas (Grupo III) tratadas com P4 LA. A taxa de

gestao no Grupo I foi de 56,76% (21/37), no Grupo II 31,25% (5/16) e no Grupo III 61,11 (11/18). Concluiu-se que a taxa de gestao no diferiu entre os Grupos (p > 0,05) PALAVRAS-CHAVE: guas, embrio, transferncia, progesterona

2 ABSTRACT

It was held in this experiment a comparative study of the pregnancy rate into three different groups of embryo recipients mares; a group of 37 acyclic mares (Group I) treated with progesterone long-acting (P4), another group of 16 normal cyclical mares (Group II) without being supplemented with P4 and a last group of cyclical but little fertile 18 mares (Group III) treated with P4. 71 embryos were transferred on a commercial program of embryo transfer held during the period from August to October 2011 in two farms located in Avar SP Brazil. The pregnancy rate in the Group I was 56.76% (21/37), in Group II 31.25% (5/16) and in Group III 61.11% (11/18). It was concluded that the pregnacy rate did not differ between groups (I-II); (IIII); (II-III). KEY-WORDS: mares, embryo, transfer, progesterone

INTRODUO

de grande amplitude o crescimento mundial da equideocultura, principalmente devido importncia do cavalo na pratica de diversos esportes e lazer. Segundo um estudo feito pelo Centro de Estudos em Economia Aplicada da ESALQ, dentre os diversos segmentos do complexo do agronegcio do cavalo destaca-se o turismo rural e atividades eqestres, com uma estimativa de mais de 100 mil usurios, movimentao de cerca de R$ 21 milhes e gerao de aproximadamente 1.500 postos de trabalho no
pas

(MARIZ, 2008). Assim, houve um grande aumento da criao de

cavalos no segmento esportivo nas ltimas dcadas (VIANNA, 2000). Arruda et al. (2001) descreveram que o desenvolvimento de novas

3 tcnicas reprodutivas possibilitaram o melhor aproveitamento dos animais, sendo a transferncia de embries (TE) a ferramenta mais promissora para essa finalidade. A obteno de um maior nmero de potros por ano tornou-se cada vez mais comum no mundo equino (KUMAR et al, 2008). Squires et al. (2003) constataram que a transferncia de embries tem sido a soluo mais utilizada para o aumento do nmero de descendentes/ano/matriz. A transferncia de embrio apresenta tambm alguns fatores que afetam negativamente o ndice de prenhez e causam perda embrionria precoce. A habilidade do tcnico, o mtodo de transferncia, a qualidade dos embries transferidos e o estado reprodutivo e nutricional das receptoras so alguns exemplos desses fatores (ARRUDA et al., 2001; FLEURY et al., 2001). Vrios autores documentaram as taxas de gestao, Imel et al. (1981) verificaram ndice de 27%, enquanto que Foss et al. (1999) constataram 82,9%. Para as perdas embrionrias, autores como Imel et al. (1981), Squires et al. (1988), Mckinnon et al. (1988) e Rocha Filho et al. (2004) documentaram uma variao de 5 a 45% O sucesso em um programa de transferncia embrionria pode ser afetado por um fator muito importante, como o manejo e a seleo das receptoras (VANDERWALL & WOODS, 2007; McKINNON & SQUIRES, 2007). A receptora ter que fornecer condies uterinas favorveis necessrias para reconhecer e garantir o desenvolvimento do embrio (FLEURY et al., 2007). Segundo Oliveira e Souza (2003), o ciclo reprodutivo das guas constitudo por duas pocas, ou seja, so polistricas estacionais. H um perodo de estao reprodutiva (primavera e vero) e estao no reprodutiva (outono e inverno). Este fato ocorre devido ao tempo em que a gua fica na presena da luz (fotoperodo). A fase de transio (agosto at outubro) antecede a estao reprodutiva, neste perodo as

4 guas comeam seu ciclo, porm o nmero de guas ciclantes limitado e muitas guas encontram-se acclicas. Testa et al. (2005) descreveram o benefcio do uso de receptoras em anestro ou incio de ciclo, pois permite um incio mais precoce e um final mais tardio dos programas de transferncia de embrio. O uso de progesterona em guas receptoras em anestro e ou na fase de transio tem sido descrito por vrios autores, e suas funes para este fim so diversas. Caiado et al. (2007) descreveram a melhora do tnus uterino (reduz e diminui a contratilidade impedindo a expulso do embrio), Rocha Filho et al. (2004) descreveram a induo do ciclo artificial em receptoras, principalmente quando o nmero de guas cclicas limitado. O objetivo deste trabalho foi comparar a taxa de prenhez em receptoras sob trs tratamentos diferentes: um grupo de guas acclicas suplementadas com progesterona de longa ao, outro grupo de guas cclicas normais sem tratamento e um terceiro grupo de guas cclicas suplementadas com progesterona.

MATERIAIS E MTODOS

Durante o perodo de agosto a outubro de 2011 foi realizado um programa de transferncia de embries equinos em dois haras no municpio de Avar SP, o Haras Escaramua e o Haras Carrera. Ambos os haras possuam guas doadoras e garanhes da raa Quarto de Milha, porm no Haras Escaramua tambm havia doadoras da raa Paint Horse. As guas receptoras no possuam raa definida e em ambos os haras o manejo nutricional e sanitrio era o mesmo. As guas se encontravam em piquetes com Cynodon dactylon), recebiam dois quilogramas de rao Triumph por animal por dia, alm de feno de alfafa.

5 O estado reprodutivo das receptoras era avaliado via palpao retal e exame ultrasonografico transretal (Mindray DP 2200), as quais foram separadas em trs grupos de acordo com a atividade ovariana e estado uterino. No Grupo I encontravam-se 37 receptoras acclicas tratadas com progesterona de longa ao; no Grupo II 16 receptoras cclicas sem tratamento com progesterona; e Grupo III 18 receptoras cclicas tratadas com progesterona. No Grupo I era realizado o seguinte protocolo hormonal: inicialmente era administrado 3,0 mg de benzoato de estradiol (Botufarma Botucatu, Brasil) at o tero ser diagnosticado via ultrasonografia com uma boa estratificao endometrial, de grau 2 a 3, bom tnus uterino, com consistncia macia e formato tubular caracterizando o estro (HAFEZ & HAFEZ, 2000). Aps um dia do trmino da aplicao do estrgeno, era iniciado o tratamento com a progesterona de longa ao denominada P4 LA (Biotech Botucatu, Brasil), na dose de 3,0 g intramuscular. Com os exames ultrasonograficos transretais era possvel diagnosticar o aumento do tnus da cervix e seu consequente fechamento, com diminuio do edema e aumento do tnus uterino. Este ambiente uterino era perfeito para a chegada e a implantao do embrio. Os embries foram transferidos a partir do segundo dia do incio do tratamento com P4 at o stimo dia e estavam com um desenvolvimento de 7 e 8 dias no momento da transferncia. No Grupo II (receptoras cclicas), foi realizado o controle folicular a partir de ultrasonografias transretais. Quando era diagnosticado um folculo acima de 35 milmetros e um bom edema uterino (presena de liquido caracterizando reas anecicas irregulares) era administrado 1,0 mg de um anlogo do hormnio GnRH chamado deslorelina (Biotech Botucatu, BRASIL), com a funo de induzir a ovulao no ovrio. Este procedimento era realizado no mesmo dia em que se fazia a induo da ovulao

6 com o mesmo hormnio e dose na gua doadora do embrio. As receptoras cclicas do Grupo III se encontravam com baixa atividade folicular, mas ainda sim ovulavam, porm o corpo lteo que se formava era pequeno e no era capaz de produzir progesterona suficiente para preparar o tero e cervix para a implantao do embrio. Neste caso foi adotado o seguinte procedimento: era administrado via intramuscular 1,5 g de P4 LA logo aps a ovulao das guas, e os embries eram transferidos do dia posterior at sete dias aps a aplicao de P4 LA. Todos os embries transferidos neste experimento se encontravam na fase de blastocisto expandido e eram de boa qualidade, com classificao um, ou seja, sem defeitos morfolgicos com nenhuma ou pouca extruso celulares, estdio compatvel com o perodo ps ovulao, e nenhuma ou pouca alterao de colorao. E classificao dois, ou seja, maior nmero de alteraes morfolgicas e extruses celulares e pelo menos 50% da massa celular ntegra (VIANA, 2009). Assim o fator qualidade do embrio no interferiu nos resultados deste estudo. No momento da transferncia do embrio nas receptoras dos grupos I e III, era realizado mais uma dose de 3,0 g de P4 LA, e aps sete dias realizava-se o diagnstico de gestao atravs do ultrasom. Nas guas confirmadas prenhes era administrada a mesma dose de P4 LA em intervalos de 14 dias at que a gestao completasse 120 dias. O delineamento foi inteiramente ao acaso, considerando somente o efeito de tratamento, o efeito de haras no foi considerado, pois em ambos o manejo nutricional e sanitrio era o mesmo. A anlise estatstica foi feita pelo mtodo Bayesiano, considerando a resposta presena ou no da gestao com uma distribuio binomial, isto yi ~ binomial (), sendo a taxa de gestao, (0 < < 1). Considera-se como diferentes, ao

7 nvel de 5% de significncia, os tratamentos cujos intervalos de credibilidade (ICr) para as diferenas mdias no contemplam o valor zero. A analise foi realizada utilizando o software WinBUGS (Spiegelhalter et al., 1994). Foram gerados 60.000 de valores em um processo MCMC (Monte Carlo Markov Chain), considerando um perodo de descarte amostral de 10.000 valores iniciais, assim a amostra final contm 50.000 valores gerados. A convergncia das cadeias foi verificada por meio do pacote CODA do programa R (R Development Core Team, 2011), pelo critrio de Heidelberger e Welch (1983).

RESULTADOS E DISCUSSO

A Tabela 1 apresenta as taxas de gestao observadas em cada um dos grupos experimentais. Na tabela 2 encontra-se os intervalos com 95% de credibilidade (P2,5%;P97,5%) a posteriori para os contrastes Bayesianos.

Tabela 1: Taxa de prenhez de receptoras eqinas acclicas tratadas com progesterona (Grupo I), receptoras cclicas no tratadas com progesterona (Grupo II) e receptoras cclicas tratadas com progesterona (Grupo III). n Grupos Experimentais Taxa de Gestao Grupo I Grupo II Grupo III
37 16 18

56,76% (21/37) 31,25% (5/16) 61,11% (11/18)

8 Tabela 2: Intervalos com 95% de credibilidade (P2,5%;P97,5%) a posteriori para os contrastes Bayesianos. Contrastes Diferena a posteriori P 2,5% P 97,5% Grupo I - Grupo II Grupo I - Grupo II Grupo II - Grupo III 0.2294 -0.03682 -0.2662 -0.04087 -0.2896 -0.5483 0.4783 0.2244 0.04059

Zero pertencente ao ICr(Dif, 95%), indica no significncia para o contraste.

Na Tabela 2, os intervalos com 95% de credibilidade dos contrastes, no contemplam o valor zero e, portanto, no indica diferena significativa, sendo assim, as taxas de gestao observadas nos trs grupos apresentadas na Tabela 1 no diferem estatisticamente a 5% de probabilidade. Os resultados dos tratamentos encontrados so semelhantes aos observados por diversos autores. Fleury et al. (2001) realizaram estudo onde compararam o ndice de prenhez em receptoras com diferentes idades de corpo lteo, e constataram bons ndices, chegando a 88,9% de prenhez em guas com corpo lteo de seis dias de idade. Pinna et al (2007) em seu estudo comparativo, utilizando guas cclicas e guas acclicas suplementadas com P4 LA chegaram a bons ndices de prenhez, como 49% e 54,6% respectivamente. Rocha Filho et al. (2004) compararam as taxas de gestao em receptoras cclicas e acclicas suplementadas com progesterona de curta e longa ao, e no obteve diferena, assim foi confirmado que todos os tipos de progesterona so eficazes para a preparao de receptoras acclicas, tambm foi visto que no h diferena na taxa de gestao entre as guas cclicas (75,0%) e guas acclicas tratadas com P4 (75,9%). Caiado et al. (2007), visaram a utilizao precoce de receptoras para transferncia de embries, utilizando dois tipos de tratamento hormonal, e tambm comparou-se as taxas de gestao entre os grupos. Foram formados quatro grupos: um recebendo P4 em veculo oleoso no segundo dia ps ovulao (D2); outro recebendo

9 progestgeno chamado Altrenogest, tambm no D2; um grupo controle sem tratamento no D2 e outro controle de guas no quinto dia ps ovulao (D5). As maiores taxas de prenhez foram observadas no grupo sem tratamento no D5 (76,3%) e no grupo com tratamento com P4 soluo oleosa no D2 (72,72%). O grupo recebendo Altrenogest e o grupo controle no D2 apresentaram respectivamente 52,38% e 30,00%. Ambos os dados obtidos no diferiram entre si, corroborando assim o uso de P4 para a preparao das receptoras. As diversas funes da progesterona exgena administrada nos grupos I e III mimetizam a presena de corpo lteo encontrado nas receptoras cclicas. Como j citado anteriormente por alguns autores, a melhora do tnus uterino, o aumento da atividade das glndulas secretoras do endomtrio facilitando a implantao do embrio, e a manuteno da gestao inicial so as principais funes da progesterona, que favorecem e aumentam a flexibilidade do uso das receptoras acclicas e sub-frteis. Este fato torna esta categoria semelhante s receptoras cclicas, assim o programa de transferncia de embries no afetado. O protocolo de uso de progesterona em receptoras possui um custo elevado, um frasco de 100 ml vendido por R$250,00 reais no mercado, e geralmente usado um frasco por gua at os 120 dias de gestao. Quando no adotado este protocolo em um programa de transferncia de embries e o haras possui problemas com a ciclicidade das receptoras, o proprietrio obrigado a alugar receptoras de centrais de reproduo, podendo gastar em torno de R$2000,00 reais por gua alugada at confirmar a prenhez. Ao comparar os valores, observada a economia gerada quando se usa um protocolo hormonal com progesterona de longa ao em receptoras de embrio. O grupo III certamente foi o mais privilegiado com a realizao deste

10 estudo, pois essa categoria de guas receptoras impossibilita que o mdico veterinrio siga normalmente com o programa de transferncia embrionria. Muitas vezes as guas deste grupo entrariam para a categoria de descarte, fato que geraria mais despesas para o proprietrio, que teria que investir e comprar novas guas. O protocolo de progesterona de longa ao realizado neste grupo possibilitou manter as guas nos haras, assim quando essas sassem definitivamente do perodo de transio e entrassem na estao reprodutiva teriam a chance de apresentarem ciclos reprodutivos normais

CONCLUSES

Com os resultados observados neste presente estudo, possvel afirmar que o uso de P4 LA em receptoras de embries acclicas e cclicas com um debilitado estado ovariano e uterino permite obter boas taxas de gestao, sendo semelhantes aos ndices encontrados em receptoras cclicas normais. Deste modo, conclui-se que o uso da progesterona de longa ao em receptoras, principalmente no inicio de estao de monta (garante potros bem nascidos em relao ao ano hpico) e quando a quantidade de receptoras escassa, vivel para ser utilizada nos programas de transferncia de embries eqinos, pois torna todas as receptoras aptas para a inovulao e seqente gestao, garantindo assim bons ndices de prenhez em um programa de transferncia de embries.

AGRADECIMENTOS

Ao mdico veterinrio Renato Vilem e aos funcionrios dos Haras Carrera e Escaramua, pelo auxlio na coleta de dados e cuidados com os animais.

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