REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE MENTOURI-CONSTANTINE
FACULTE DES SCIENCES
DEPARTEMENT DE CHIMIE
Nd'ordre:..
Srie: .
THESE

PRESENTEE A L'UNIVERSITE MENTOURI- CONSTANTINE
POUR L'OBTENTION DU TITRE DE

DOCTORAT en SCIENCES
SPECIALITE: CHIMIE ORGANIQUE
OPTION: PHYTOCHIMIE
Prsent par
Brahim Harkati

THEME









Soutenue le 17 janvier 2011

Devant la commission d'examen:

K. Medjroubi Prof. Universit Mentouri, Constantine Prsident
S. Akkal Prof. Universit Mentouri, Constantine Rapporteur
M-G. Dijoux-Franca Prof. Universit de Lyon, France Co-encadreur
N. Ghuerraf MC Universit larbi ben M'hidi, Oum El- Bouaghi Examinateur
D. Harzallah Prof Universit Ferhat Abbas, Stif Examinateur

VALORISATION ET IDENTIFICATION STRUCTURALE DES
PRINCIPES ACTIFS DE LA PLANTE DE LA FAMILLE
ASTERACEAE: Scorzonera Undulata.




Ddicace




Cette thse est ddie :


A la mmoire de ma mre


A mon pre


A ma femme et mes enfants
Remerciements

Je tiens tout dabord remercier mon directeur de thse, Monsieur le Professeur
AKKAL Salah pour mavoir accueilli au sein de son groupe de recherche et permis de faire
mon travail de thse dans lenvironnement stimulant dun groupe de recherche trs
dynamique. Je le remercie galement de mavoir donn la possibilit de prsenter mes
rsultats dans une publication scientifique.

Jai eu la chance et aussi le plaisir deffectuer ce travail de recherche dans le laboratoire
de Botanique et Pharmacognosie, facult de mdecine et pharmacie de Lyon France dirig par
le professeur M-Genevive Dijoux-Franca. Je tiens lui exprimer mes sincres
remerciements pour mavoir accueilli au sein du laboratoire de pharmacognosie, pour mavoir
fait confiance et mavoir permis de raliser ce travail dans de meilleures conditions tout en me
laissant une grande libert, pour son soutien et sa grande gnrosit. Je le remercie galement
davoir accept de faire partie de mon jury de thse.

Mes vifs remerciements vont galement Monsieur le professeur Kamel Medjroubi de
lUniversit Mentouri de Constantine pour le grand honneur quil nous a fait en acceptant de
prsider le jury de ma soutenance de thse de doctorat.

Jaimerais galement remercier Monsieur le Professeur D. Harzallah de lUniversit de
Stif pour avoir accept de faire partie de mon jury de thse.

Jadresse galement mes remerciements Monsieur Nour-eddinne Gherraf Matre de
confrences lUniversit de Oum El Bouaghi pour avoir accept de juger ce travail.
Je remercie sincrement Monsieur le Professeur Hocine Laouar de lUniversit de Stif
pour lidentification du matriel vgtal.

Je remercie sincrement madame Christine bayat ingnieur du laboratoire de Botanique
et Pharmacognosie de la facult de mdecine et pharmacie de Lyon, qui ma guid tout au long
de ce travail travail au laboratoire de pharmacognosie Lyon. Recevez ici lexpression de ma
profonde gratitude.
Je remercie galement Monsieur Floriant bellevert ingnieur du laboratoire de
pharmacognosie de Lyon pour la ralisation des huiles essentielles.

. Je remercie galement tous les membres du laboratoire de Lyon pour leur soutien et
les facilits accordes pour la ralisation de ce travail : Monsieur le Matre de confrences
Jol, Monsieur le Dr Serge et Madame Monique et Darbour

Jexprime galement mes remerciements mes collgues de laboratoire qui participent
au bon fonctionnement du laboratoire, avec lesquels il est possible dchanger conseils et
informations, et qui assurent une atmosphre agrable de travail : Noufou, Zabat, Safa,
stphane et Michelle.
























Sommaire


Introduction gnrale .. 1
Rfrence .. 3

Chapitre I


I Etude botanique 4
I.1 Caractre gnraux des Astraces 4
I.1.2 Appareil reproductif ... 4
Linflorescence ..... 4
La fleur .. 5
Fruits .. 5
Graine .... 5
I.1.3 Classification des Astraces . 5
I. 2
Travaux antrieurs et principaux mtabolites secondaires isols
du genre Scorsonera
6
I. 2.1 Triterpnes ......... 6
I. 2.2 Les flavonodes . 08
I. 2.3 Les coumarines .. 10
I. 2.4 Les sesquiterpnes ......... 11
I. 2.5 Divers ......... 12
I. 2.6 Les huiles essentielles 13
I. 3 Les terpnes ... 14
I. 3.1 Gnralits ......... 14
I. 3.2 Classification . 14
I. 3.2.1 Hmiterpnes ......... 14
I. 3.2.2 Monoterpnes ........ 14
I. 3.2.3 Sesquiterpnes ....................... 14
I. 3.2.4 Diterpnes .. 15
I. 3.2.5 Triterpnes ......... 16
I. 3.2.5.1 Introduction ... 16
I. 3.2.5.2 Biosynthse des triterpnes ... 18
I. 3.2.5.3 Intrts des triterpnes ... 22
I. 3.2.6 Tetraterpnes... 22
I. 3.2.7 Polyterpnes 22
I.4 Les flavonodes .......... 22
I.4.1 Variation de la structure de llment centrale en C
3
des flavonodes 23
I.4.2 Intrt des flavonodes ... 25
I.4.3 Analyse structurale des flavonodes .. 26
I. 4.3.1 Spectroscopie UV-Visible ..... 26
I.4.3.2
Rsonance Magntique Nuclaire (R. M. N)
......
28
I.4.3.2. a R. M. N. du proton ..... 28
I.4.3.2. b Analyse des signaux provenant des protons de la partie osidique 29
I.5 Coumarine . 29
I.5.1 Classification . 29
I.5.1.1 Coumarines simples ... 30
I.5.1.2 Furanocoumarines .. 30
I.5.1.3 Pyranocoumarines .. 31
I.5.1.4 Dicoumarines ..... 32
I.5.1.5 Tricoumarines .... 32
I.5.2 Biosynthse des coumarines .. 33
I.5.3 Intrt des coumarines ... 36
I.6 Les huiles essentielles .... 37
I.6.1 Procde classique dextraction des huiles essentielles... 37
I.6.2 Production des huiles essentielle : lhydrodistillation.... 38
I.6.4 Principales structures chimiques des huiles essentielles.... 39
I.6.5
Analyse chromatographique et identification des constituants dans un
mlange
42
I.6.6 Les huiles essentielles et leur activit anti-microbienne......... 43
I.7 Activit antiradicalaire sur DPPH.. 44
Rfrence .. 45


Chapitre II

II Etude phytochimique de Scorzonera Undulata.................. 52
II.1 Introduction 52
II.1.2 Position systmatique ........ 52
II.1.3 Synonymie du Scorsonera Undulata . 53
II.1.4 Description de la plante Scorsonera Undulata . 53
II.1.5 Air gographique .. 53
II.1.6 Utilisation traditionnelle de Scorzonera Undulata 55
II.2 Travaux personnels 55
II.2.1 Rcolte de la plantes Scorsonera Undulata .. 55
II.2.2 Extraction des racines de Scorsonera Undulata ....... 55
II.2.3 Fractionnement et Sparation Grossire de Lextrait DCM .. 55
II.2.4 tude de la fraction su14b . 57
II.2.4 .1 Colonne ouverte pour la faction SU14b. 57
II.2.5 Etude de la fraction SU15e . 60
II.2.6 Etude de la fraction SU14d . 61
II.2.6 Etude de la fraction SU14g.. 61
II.2.7 Etude l'extrait mthanolique .. 62
II.2.7.1 Chromatographie liquide haute performance (HPLC). 63
II.2.7.1 Purification de lextrait MeOH .. 64
II.2.7.1.a. Purification par colonne . 64
II.2.7.2 Etude la fraction SU49a . 65
II.2.7.3 Etude de la fraction SU50 n ... 66
II.2.7.4 Etude de la fraction SU49e 67
II.2.8 Dtermination des huiles essentielles dans Scorsonera Undulata 67
II.2.8.1 Mode opratoire ......... 68
II.2.8.2 Analyse par spectromtrie de masse... 69
II.2.9 Activit antioxydant .. 71
II.2.9.1 Technique .. 72
II.2.9.2 Rsultats ......... 73
II.2.10 Activit microbienne . 76
II.2.10.1 Prparation des dilutions des huiles essentielles........ 76
II.2.10.2 Ensemencement de la souche bactrienne.. 76
II.2.10.2 Ensemencement de la souche bactrienne.. 76
II.2.10.3 Teste de lactivit inhibitrice.. 76
Rfrence ... 78

Chapitre III


III Dtermination structurale des composs isols 80
Appareillage 80
III.1 le compos SU 23a 81
III.2 le compos SU 37a ................ 91
III.3 le compose SU50i . 95
III.4 le compos SU56C 101
III.5 le compose SU 70a ................ 110
III.6 le compose SU 28C ... 120
III.7 Interprtation des huiles . 123
III.7.1 Etude comparative . 124
III.7.2 Test antibactrien sur Escherichia coli... 124
III.8 Interprtation de lactivit biologique 125
Rfrence 126
Conclusion gnrale.............. 128
















Abrviations et symboles
1, 2, Symboles utiliss pour les composs mentionns
dans la littrature
SU 23, 37 Symboles utiliss pour les composs identifis
dans cette tude
MeOH Mthanol
DMSO Dimthylsulfoxyde
CDCl3 Chloroforme deutri
TFA acide trifluoroactique
GC-MS chromatographie gazeuse couple la
spectromtrie de masse

SM Spectroscopie de masse
EI impact lectronique
uma Unit de masse atomique
UV Ultraviolet
RMN Rsonance Magntique Nuclaire
RMN
1
H Spectre Rsonance Magntique Nuclaire du
proton
RMN
13
C Spectre Rsonance Magntique Nuclaire de
carbone 13
DEPT 135 Spectre de carbone 13 ralis en Distortionaless
Enhancement by Polarisation transfer
HMQC Heteronuclear multiple Quantum Corrlation
HMBC Heteronuclear multiple Bond Connectivity
COSY Spectroscopie de corrlation
Et al. Et autre auteurs
CCM Chromatographie sur couche mince
ppm Partie par million
Dplacement chimique
nm Nanomtre
Hz Hertz
J Constante de couplage
s Singulet
d Doublet
dd Doublet des doublets
m Multiplet




t Triplet
HPLC chromatographie liquide haute performance
MPLC chromatographie moyen pression
VLC chromatographie liquide sous vide
RP18 Silice greffe
CI
50
Concentration inhibitrice 50 %
DPPH 1-1 Diphnyl 2- Picril Hydrazine
Rf Rapport frontal
I indice de Kovats
HE huile essentiel
NADPH nicotinamide adnine dinuclotide phosphate
IPP isopentnyl diphosphate
Na sodium













Introduction gnrale







Introduction gnrale
1

Introduction
Dans le rgne vgtal, les mtabolites secondaires jouent des rles cologiques
importants, notamment en contribuant aux phnomnes de communication et de dfense.

Depuis lantiquit, quelques caractristiques des principes actifs taient connues pour
lhomme et certaines pices ont t utilises pour leurs particularits de parfum, leur saveur et
leur effet de conservateur Bauer et al [1]. Lexploitation de ces composs seffectuait sous
forme dhuiles extraites de plantes (huiles essentielles) par le moyen de la distillation, cette
technique tant employe en Inde et Perse il y a plus de 2000 ans [2].

La majorit des populations ont recours des plantes mdicinales pour se soigner, par
manque daccs aux mdicaments prescrits par la mdecine moderne mais aussi parce que ces
plantes ont souvent une relle efficacit. Aujourdhui, le savoir des tradipraticiens est de
moins en moins transmis et tend disparatre. Cest pour cela que lethnobotanique et
lethnopharmacologie semploient recenser, partout dans le monde, des plantes rputes
actives et dont il appartient la recherche moderne de prciser les proprits et valider les
usages Pelt [3]. La recherche de nouvelles molcules doit tre entreprise au sein de la
biodiversit vgtale en se servant de donnes ethnopharmacologiques. Cette approche permet
de slectionner des plantes potentiellement actives et daugmenter significativement le
nombre de dcouvertes de nouveaux actifs [4].

LAlgrie, pays connu par ces ressources naturelles, dispose dune flore
singulirement riche et varie. On compte environ 3000 espces de plantes dont 15%
endmique et appartenant plusieurs familles botaniques [5].

Lobjectif de mon travail de thse consiste la valorisation de la flore de la rgion
aride de lEst Algrien, par la recherche des composs qui peuvent trouver une utilisation
thrapeutique. Pour cela, une plante, de la famille Asteraceae, a fait lobjet dune tude
phytochimique : scorzonera undulata

Ce travail sera prsent comme suit :
Ltat des connaissances bibliographiques botaniques et phytochimiques sur le
genre Scorzonera et leur famille Asteraceae sera prsent dans un premier chapitre

Introduction gnrale
2

Dans un deuxime chapitre, nous aborderons un aperu gnral sur les composs
terpniques, notamment, les triterpnes et les flavonodes
Le troisime chapitre sera consacr au travail personnel consistant en la sparation
et la purification des composs obtenus. Nous prsenterons galement dans ce chapitre une
activit antioxydante dextrait apolaire et polaire et une activit antimicrobienne des huiles
essentielles.
Linterprtation des rsultats et la dtermination structurale des composs isols
seront dtailles dans le quatrime chapitre.

Enfin, une conclusion gnrale qui portera sur une lecture attentive des diffrents
rsultats obtenus.

















Introduction gnrale
3

Rfrences

1. Bauer, K., D. Garbe, and H. Surburg. 2001. Common Fragrance and Flavour Materials:
Preparation, Properties and Uses Wiley-VCH,, Weinheim

2. Guichard, E. 2002. Interactions between flavor compounds and food ingredients and
their influence on flavor perception. Food Reviews International 18: 49-70.

3. Amlie, L (2007). Contribution a ltude phytochimique de quatre plantes malgaches

4. Pelt J.M. (2001) Les nouveaux actifs naturels. Marabout. Paris

5. Gaussen H., and Leroy H. F., (1982). Prcis de botanique, vgtaux suprieurs, 2eme
Ed., 426.
.























Chapitre I
Chapitre I

4

I ETUDE BOTANIQUE

I.1 Caractre gnraux des Asteraceae


Le mot Aster du grec signifie toile, en relation avec la forme de la fleur.
Les Asteraceae (anciennement appeles Composes) sont une famille appartenant aux
Dicotyldones comprenant plus de 1500 genres et plus de 25000 espces dcrites dont
750 endmiques, C'est une des familles la plus importante des Angiospermes. Ce sont
presque toujours des plantes herbaces avec souvent des racines charnues :
rhizomateuses, tubreuses ou pivotantes [1].
Cette famille prsente des caractres morphologiques divers : herbes annuelles
ou vivaces, plus rarement des arbustes, arbres ou plantes grimpantes et quelques fois,
plantes charnues [2]. Bien que gnralement ce soit des plantes herbaces feuilles
isoles [1]. L'aspect de lappareil vgtatif est trop variable pour caractriser les
Asteraceae sur ce seul critre. En revanche, cette famille est trs homogne au niveau de
ses inflorescences trs caractristiques : le capitule.
Le fruit est un akne gnralement surmont dun pappus provenant du calice.

I.1.2 Appareil reproductif

Linflorescence

Linflorescence des Asteraceae est le capitule.
Un capitule comprend un rceptacle plan ou plus moins bomb sur lequel sont insrs de
l'extrieur vers l'intrieur, en ordre spirale :
- Dabord des bractes striles vertes (parfois cailleuses, crochets ou pineuses)
formant un involucre.
- Ensuite des petites bractes fertiles non vertes ou paillettes, axillant chacune une
fleur.Lensemble forme une inflorescence compose, do lancien nom de la famille.
Les capitules sont parfois isoles (pquerette), mais, plus gnralement ils sont leur
tour diversement regroups :
- en grappe, en pi, en cyme, ou encore en corymbe chez le groupe des Radies, voire en
capitule.

Chapitre I

5



Figure [I.1] : Inflorescence en capitule.

La fleur
Les fleurs sont donc regroupes en capitules qui peuvent compter plusieurs
centaines de fleurs. Les capitules sont parfois rduits quelques fleurs (genre Achillea)
voire, exceptionnellement une seule fleur (genre Echinops) [2].
Les fleurs sont sessiles, axilles par une bracte mre.
Le calice est trs rduit.
Ces fleurs, ptales soudes, peuvent tre tubuleuses (on parle de fleurons)
ligules (on parle de demi-fleurons) ou trs rarement bilabies.
Il y a 5 tamines dont les anthres sont soudes en tubes (androce synanthre).
L'ovaire, form de 2 carpelles est uniloculaire et ne possde qu'un ovule.

Fruits
Ce sont des aknes (fruits secs indhiscents unismins) possdant, le plus
souvent, un pappus provenant du dveloppement du calice aprs la fcondation.

Graines
Elles sont exalbumines.


I.1.3 Classification des Asteraceae

On distingue quatre sous familles [2]:
Tubuliflores ou carduaces
Liguliflores ou chicoraces
Labiactiflores
Radies ou corymbifre



Chapitre I

6

Tableau [I.1] : Classification des Asteraceae [3].



I. 2 Travaux antrieurs et principaux mtabolites secondaires isols du genre
Scorsonera

Le genre Scorsonera fait partie de la famille Asteraceae dont les reprsentants, de part
leur intrt conomique et thrapeutique, ont fait lobjet de nombreuses tudes
phytochimiques. Nanmoins, vu le nombre despces non encore tudies, ce genre constitue
encore une source importante des produits naturels tel que les terpnes, les coumarines, les
flavonodes et dautres mtabolites secondaires tels que, les sesquiterpnes etc. Voici
quelques exemples de molcules des principales classes de mtabolites secondaires dans le
genre Scorsonera.

I. 2.1 Triterpnes

Les espces du genre Scozonera renferment des triterpenodes en particulier squelette
ttracyclique telle que: -sitosterol, -D-glucopyranoside, (3 , 22E)-stigmasta-5,22-dien-3-
yl, stigmasta-5,22-diene, stigmasterol 3-O--glucoside,. Des triterpnes squelette
SOUS-
FAMILLE
TUBULIFLORES LIGULIFLORES LABIATIFLORES RADIEES

Capitules

homogames homogames
homogames ou
htrogames
htrogames
Fleurs
Tubuleuses +/-
Fleurons
Ligules 5 dents
Demi-Fleurons
Bilabies en
priphrie
Tubuleuses au
centre ou seulement
Bilabies
Ligules 3 dents
la priphrie,
tubuleuses au
centre
Libre interne non non non non
Canaux
scrteur
Dans lendoderme
ddoubl
non non
Dans lendoderme
ddoubl
Lactifres non
Articuls, en
rseau
non non
Cellules
scrtrices isole
Dans le liber de la
tige
non non non
Canaux olifre oui oui oui oui
Chapitre I

7

pentacyclique sont galement prsents dans le genre de scozonera tel que: lup-20(29)-en-3-ol,
acide olan-12-n-28-oque.
Les composs terpniques (tableau I.2) ont t galement isols des plantes : S. columnae,
tomentosa, hispanica etc
Tableau [I.2] : Triterpnes ttracycliques et pentacycliques de quelques espces du genre
Scorzonera.
Plante Structure Rf

Scorzonera
columnae
pr-i
HO
Me H
Me
H
Me
Et
H


1 Stigmast-5-en-3 -ol
Me
O
HO
Me
Me
H Me
H Me
Me
H


2 Lup-20(29)-en-3 -ol
4
pr-i
O
Me H
Me
H
Me
Et
H
O
HO
OH
HO
HO

3 Stigmasta-5,22-diene, 3 -( -D-
glucopyranosyloxy)-
Me
O
AcO
Me
Me
H Me
H Me
Me


4 Lup-20(29)-en-3 -ol, acetate



Scorzonera
tomentosa
pr-i
HO
Me H
Me
H
Me
Et
H


1 Stigmast-5-en-3 -ol
Me
O
HO
Me
Me
H Me
H Me
Me
H


2 Lup-20(29)-en-3 -ol
5
Scorzonera
hispanica

Me Me
Me Me
HO
Me Me CO 2H H
H
H Me

5 Olean-12-en-28-oic acid, 3 -
hydroxy-
pr-i
O
Me H
Me
H
Me
Et
H
O
HO
OH
HO
HO

6 -D-Glucopyranoside, (3)-
stigmast-5-en-3-yl


6
Chapitre I

8




I. 2.2 Les flavonodes

Les flavonodes sont des composs phnoliques moins rpandus dans ce genre. Ils sont
prsents dans presque tous les organes de la plante (racines, fleurs, tiges et jouent un rle


pr-i
HO
Me H
Me
H
Me
Et
H


7 Stigmasta-5,22-dien-3-ol,
(3,22E)-

pr-i
HO
Me H
Me
H
Me
Et
H


1 Stigmast-5-en-3 -ol





















Scorzonera
mongolica













CH
2
OH
R



R=
O
O


8 3-tetradecanoyloxy-28-hydroxylolean-18-ene


R=
O
O



9 3 -dodecanoyl-28-hydroxylolean-18-ene












7










Chapitre I

9

important dans le systme de dfense comme antioxydants. Chez le genre Scorsonera,
les flavonodes sont surtout reprsents comme flavones et flavonols.


Tableau [I.3] : Structures chimiques des flavonodes isols de quelques espces du genre
Scorsonera.






Plante Structure Rf
OH O
OH
OH
OH


10 Querctine

OH O
OH
OH
OH
HO


11 Luteoline


Scorzonera
columnae


OH O
OH
HO
OH


12 Apigenine
O
O
O
O
HO
HO
OH
O
OH
OH
HO
OH
O
OH
OH
S
R
R S
R
13 Quercetine 3-(6-E-p-coumaroyl--D-
glucopyranoside)
4



Scorzonera
austriaca








O
OH
HO
O
OH
O
O
OH
OAC
HO
CH
2
O C
O
C C OH
H H

14 luteolin 3-(6-E-p-coumaroyl--D-glucopyranoside)

8


Chapitre I

10

I. 2.3 Les coumarines

Les coumarines sont trs rpandues dans le genre Scorzonera, on les trouve sous
forme de coumarines simples et pyrano-coumarines ainsi que de dimres de coumarines
avec liaisons C-C ou ther [9].

Tableau [I.4] : Les coumarines isoles de quelques espces du genre Scorzonera.

Plante Structure Rf

Scorzonera
tomentosa



O
O
O
O
OH
OH
OH
OH
OMe

15 1H-2-Benzopyran-1-one, 3-[4-(-
D-glucopyranosyloxy)phenyl]-
3,4- dihydro-8-methoxy-, (3S)-

O
O
OH
OMe

16 1H-2-Benzopyran-1-one, 3,4-
dihydro-3-(4-hydroxyphenyl)-
8-methoxy-
10

O
O
HO
OCH
3
OH


17 1H-2-Benzopyran-1-one, 3,4-
dihydro-6,8-dihydroxy-3-(4-
methoxyphenyl)-

O
O O
O
HO
HO
H
HO
OCH
3
OH


18 1H-2-Benzopyran-1-one, 8-
(-D-glucopyranosyloxy)-3,4-
dihydro-6-hydroxy-3-(4-
methoxyphenyl)-,



Scorzonera
cretica




O
O O
O
O
O
HO
HO
OH
H
HO
OCH3
OH HO
HO
H3C

19 1H-2-Benzopyran-1-one, 8-[[6-O-(6-deoxy--L-mannopyranosyl))-
-D-glucopyranosyl] oxy]-3,4-dihydro-6-hydroxy-3-(4-
methoxyphenyl)-
11

Scorzonera
austriaca
O O

20 Daphnetin
8
Chapitre I

11

I. 2.4 Les sesquiterpnes

Les sesquiterpnes constituent un groupe de substances naturelles trs
importantes dans le genre de Scorzonera ayant une large varit dactivits biologiques.
Ils ont possdent des proprits ; neurotoxique [12], anti-inflammatoire [13], anti-
leucmique [14], antifungique [15], anti-tumoral [16].

Tableau [I.5] : Les sesquiterpnes isoles de quelques espces du genre Scorzonera.
Plante Structure Rf

Scorzonera
austriaca
Me
Me
HO
O
H
2
C
OH
O
H
H
H
H
R
R S
R
R
R
S

21 Azuleno[4,5-b]furan-2(3H)-one, decahydro-3,8-dihydroxy-3,9-
dimethyl-6- methylene-
17
Me
H
2
C
O
CH 2
O
O
O
HO
CH 2 HO OH
OH

22 Azuleno[4,5-b]furan-2(3H)-one, -(-D-
glucopyranosyloxy)decahydro-3- methyl-6,9-bis(methylene)-,
18










Scorzonera
hispanica
H
2
C
O
CH
2
H
2
C
O
O
O
HO
HO
OH
OH
H
H H
H
H
R
S R
S
R
R
R
R S
S

23 Azuleno[4,5-b]furan-2(3H)-one, 5-(-D-
glucopyranosyloxy)decahydro-3,6,9-tris(methylene)-,






19
Chapitre I

12

I. 2.5 Divers

Tableau [I.6] : Les diverses isoles de quelques espces du genre Scorzonera.

Scorzonera
Tomentosa
-
MeO
CO
2
H
OH
E



24 Benzoic acid, 2-[(1E)-2
-(4-hydroxyphenyl)ethenyl]-6-methoxy



O
O
OH
OH
OH
H
S
R

25 1(3H)-Isobenzofuranone, 7-
hydroxy-3-[(R)-hydroxy(4-
hydroxyphenyl)methyl]-





10






Scorzonera
hispanica

Me Me
Me
CHO
O

26 2-Heptenal, 2-methyl-6-(4-methyl-2-oxo-3-cyclohexen-1-yl)-




19
Scorzonera
columnae

OMe CH CH C
O
OH
HO

27 2-Propenoic acid, 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-, methyl ester

4
Scorzonera
hispanica

HO
O
OH
OMe
O
O
OH
OH
OH
OH
OMe


28 -D-glucopyranoside, 4-[(2R,3S)-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-5-[(1E)-
3-hydroxy-1-propen-1-yl]-7-methoxy-2-benzofuranyl]-2-methoxyphenyl


6
Chapitre I

13




I. 2.6 Les huiles essentielles

Le genre Scorzonera est connu pour produire des huiles essentielles.
- Les travaux de Boussaada et al [20] sur la partie arienne de Scorzonera undulata.
Ont permis didentifier une quarantaine de composs tels que le mthyle hexadecanoate
(30.4%), le mthyle Linolenate (23.9 %), le Heneicosane (12.2 %), le Octadecane (4.4
%), mthyle Octadecanoate (2.2 %), acide Dodecane (1.7 %), -Bisabolol (1.2 %), et le
Benyle Salicylate (1,3 %) sont les plus abondants. On peut conclure que la composition
chimique de cette huile essentielle est :
Hydrocarbure (alcane, alcne, alcool, alddehydes) 23.3 %
Terpne 3.4 %
Composs aromatiques 60.1 %
Cette huile essentielle sest rvle active in vitro contre le champignon
microscopique.
- Les composs majoritaires des huiles essentielles dans Scorzonera mongolica sont:
Hentriacontane (34.75%), A'- neogammacer-22 (29)-en-3-ol (21.47%) [21].

HO
O
OH
OMe
O
O
OH
OH
OH
OH
OMe
OMe


29 -D-glucopyranoside, 4-[(2R,3S)-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-5-[(1E)-
3-hydroxy-1-propenyl]-7-methoxy-2-benzofuranyl]-2,6-dimethoxyphenyl
Scorzonera
austriaca


HO
O
OH
OCH 3



30 12-Hydroy-desmethoxyyangonin


GLUO
O
OH
OCH
3



31 12--d-glucopyranoside-
desmethoxyyangonin
8
Chapitre I

14

I. 3 les terpnes

I. 3.1 Gnralits

Dans le rgne vgtal, les terpnes sont classs dans la catgorie des mtabolites
secondaires. Leur classification est base sur le nombre de rptitions de lunit de base
isoprne ( 5 atomes de carbone) [22, 23, 24]. A ce jour, avec plus de 30 000 molcules
identifies, les terpnes constituent lune des plus polymorphes et des plus grandes
familles de composs naturels: hmiterpnes (C
5
), monoterpnes (C
10
), sesquiterpnes
(C
15
), diterpnes (C
20
), sesterpnes (C
25
), triterpnes (C
30
), tetraterpnes,(C
40
) et
polyterpnes.

I. 3.2 Classification

I. 3.2.1 Hmiterpnes

Dans la nature, il existe peu de composs naturels ayant une formule de C
5

ramifie; parmi certains composs naturels trouvs chez les plantes qui peuvent tre
considrs comme hmyterpne, seul lisoprne toutes les caractristiques
biogntiques des terpnes [25].

I. 3.2.2 Monoterpnes

Les monoterpnes contiennent plus de 900 composs connus se trouvent
principalement dans 3 catgories structurelles: les monoterpnes linaires (acyclique),
les monoterpnes avec un cycle unique (monocycliques) et ceux avec deux cycles
(bicycliques). Ils rsultent dune fusion typique tte--queue des units disoprne [26].

I. 3.2.3 Sesquiterpene

Sesquiterpenoids sont des composs de 15 carbone forme de 3 units isoprene
et comme formule molculaire C
15
H
24
. Ils se trouvent principalement dans les parties
ariennes des plantes. Comme les monoterpnes, une molcule de sesquiterpne peut tre
acyclique ou contenir 1 2 cycles (comme le polygodial), de trs nombreuses
combinaisons sont possibles. Les drivs des sesquiterpnes obtenus par biochimie ou
synthse (oxydation ou rarrangement) sont appels sesquiterpenodes. Les
sesquiterpnes sont prsent dans les essences vgtales aromatiques ou huiles
Chapitre I

15

essentielles, par exemple le farnsol dans l'huile essentielle de citronelle. Dans les
plantes, ils ont le rle d'agent de dfense.

OH

HO

32 Farnsol 33 Nerolidol



34 Acide Abscisique
35 Cadalene

HO
HO
CHO OH OH CHO
OH
OH


36 Gossypol


Figure [I.2] : Structures des quelques sesquiterpnes.


I. 3.2.4 Diterpnes

Les diterpnes sont des substances avec 20 atomes de carbone (C
20
) prsentant
une trs grande varit structurale. Ces composs sont principalement prsents dans les
plantes suprieures dans les rsines, ainsi que dans les champignons. Il existe environ
2700 diterpnes dans la nature dont la majorit est sous forme cycliques. Parmi les
diterpnes cycliques, Le rtinol et le rtinal, deux formes de la vitamine A sont les plus
connues dans cette famille.
CO
2
H
O
OH
Chapitre I

16

I. 3.2.5 Triterpnes


I. 3.2.5.1 Introduction

Les triterpnes contiennent plus de 4000 composs construits sur plus de 40
squelettes hydrocarbons diffrents. Ce sont des composs en C-30 issus de la
cyclisation du 3S-2,3-poxysqualne, ou plus rarement du squalne lui-mme [22,
23,24]. Ils sont presque toujours hydroxyls en position C-3 du fait de louverture de
lpoxyde. Les triterpnes prsentent une trs forte unit structurale, les diffrences
majeures sont dordre strochimiques ayant trait la conformation adopte par
lpoxysqualne avant la cyclisation initiale. Le cation form lors de cette cyclisation
peut ensuite subir une srie de dplacement 1, 2 de protons et de mthyles conduisant
aux diffrents squelettes ttra- et pentacycliques qui caractrisent ce groupe de
substances naturelles [22, 23,24].


HO
H
H

37 Euferol 38 Cycloeucalnol

H H
HO
2
C
H

O
H
O
H
H
OH


39 acide 3,4-seco-8H-ferna-4(23) ,9(11)-din-3-oque 40 antiquol


Figure [I.3] : Triterpne ttracycliques.


HO
Chapitre I

17



H
H
H
AcO

41 D: C-friedomadeir-7 42 Isomadeiranyl actate





H
H
H
OH


43 Taraxryl actate 44 Taraxrone



H
H
H
OH

45 -amyrine

Figure [I.4] : Triterpnes pentacycliques.




H
H
H
O
H
H
H
O
Chapitre I

18

I. 3.2.5.2 Biosynthse des triterpnes

Les organismes vgtaux ont la possibilit de cycliser lpoxysqualne qui
conduit spcifiquement aussi bien aux triterpnes ttracycliques libres des plantes de la
famille des Euphorbiaceae et des Laticiferes quaux saponosides gnine triterpnique
pentacyclique ou aux triterpnes modifis des Rutales [22,23].
Le couplage queue--queue de deux units en C-15, farnsylpyrophosphate (FPP) suivi
dune oxydation permet llaboration de lpoxysqualne (figure I.5), prcurseur des
triterpnes et des strodes [22, 23,24].

OPP




squalne Oxydation

O

46 2,3-poxydosqualne


Figure [I.5] : Formation du squalne.



Louverture de lpoxyde amorce la cyclisation, lenzyme responsable de cette
cyclisation stabilise la conformation du polyisoprne de telle sorte que les impratifs
strolectroniques soient respects. Cest de la conformation initiale de
lpoxysqualne sur la surface de lenzyme (figure I.6) que dpend lorientation de la
biosynthse vers les triterpnes ttra- et pentacycliques et les strodes [22, 23,24].
- Si lpoxysqualne est dans une conformation chaise-bateau-chaise-bateau, la
cyclisation conduit un cation protostanyle prcurseur des cycloartanes, des lanostanes
et des cucurbitanes.
OPP
+
Chapitre I

19

- Si lpoxysqualne adopte la conformation chaise-chaise-chaise-bateau, la cyclisation
aboutit un autre cation appel dammaranyle. Ce dernier peut voluer afin de donner
naissance aux triterpnes ttracycliques squelette euphane et tirucallane et le plus
souvent il conduit aux triterpnes pentacycliques de type olanane, ursane, lupane,
multiflorane, taraxrane, taraxastane,.etc.


O





O



H
HO
H
R +

H
HO
H
R
+


cation protostanyle cation dammaranyle





1 2

O
R
Chapitre I

20

1 2

HO
H


47 Cucurbitanes 48 cycloartanes



Strodes

cation dammaranyle





HO
H
H
H
+



HO
H
H
H
H

49 cations lupanyle


Figure [I.6] : Biosynthse des triterpnes.

HO
H H
HO
H
H
Chapitre I

21

cation lupanyle





HO
H
H
H
H
+
HO
H
H
H
H

44 multiflornol



HO
H
H
H

HO
H
H
H
+

HO
H
H
H

45 -amyrine


50
taraxastrol

HO
H
H
H


51 - amyrine





HO
H
H
H
Chapitre I

22

I. 3.2.5.3 Intrts des triterpnes

Lutilisation industrielle et lintrt thrapeutique des triterpnes et strodes
reprsentent un enjeu capital dans le domaine de la recherche des substances naturelles.
Les proprits pharmacologiques diverses [22,24] attribues ces composs ont permis
leur classement en tant quun groupe de mtabolites secondaires de grande importance.
Ces composs manifestent entre autres :
- des potentialits thrapeutiques dans les diffrents domaines : cytostatiques, anti-
inflammatoires, analgsiques, insecticides, molluscicides, ..etc.
-un intrt considrable dans le secteur de lindustrie pharmaceutique particulirement la
production de mdicaments strodiques ayant des proprits : contraceptifs,
anabolisants, antiinflammatoires,etc.
- un intrt thrapeutique concernant lextraction des molcules bioactives, pour
lobtention des formes galniques simples ou pour celle de prparation phytothrapique.
- une importance conomique du fait de leur utilisation dans les industries
agroalimentaires.

I. 3.2.6 Tetraterpnes

Les carotnodes sont des tetraterpnes, les plus typiques tant les
apocarotnodes, les diapocarotnodes, les mgastigmanes.

I. 3.2.7 Polyterpnes

Les polyterpnes ou polyisoprnes se composent de plus de 8 units disoprne.
Ces terpnes se trouvent souvent sous deux formes isomriques cis- et trans. Le cis-
polyisoprne se trouve dans le caoutchouc indien, alors que le polyisoprne-trans est la
partie principale de gutta-percha. En plus Chicle reprsente un mlange de 1:2 de deux
isomres cis- et trans-. Les prenylchoinones sont des polyterpnes comptant jusqu' 10
units disoprne, parmi eux, on rencontre les vitamines K1 et K2 et la vitamine E.

I.4 Les flavonodes

Les flavonodes sont une classe de composs ubiquitaires dans les plantes
vasculaires et reprsentent un des plus grands groupes de produits naturels phnoliques.
Ils sont considrs comme les pigments universels des vgtaux. La protection des
plantes contre les radiations UV de type B et leur dfense contre les herbivores et les
Chapitre I

23

attaques microbiennes Harborne et al. [27]. Certains flavonodes ont paralllement une
activit antioxydante, anti-inflammatoire, vasculaire, oestrognique et antitumorale.
Pour ne citer que leurs principales proprits pharmacologiques [27]. Ces composs se
divisent en diffrents types : flavones, isoflavones, flavonols, flavanones, flavanes,
chalcones, anthocyanidines, catechines, ptrocarpanes, aurones.


I.4.1 Variation de la structure de llment centrale en C
3
des flavonodes


La figure (I.7) donne le schma des ractions qui permettant dinterprter la
formation des principaux flavonodes partir des chalcones [28]. La cyclisation de la
chalcones seffectue aisment, par isomrisation sous forme de flavonone qui est
stabilise par formation dune liaison hydrogne entre CO et un groupement OH en
position 5. Les flavonodes et plus particulirement leur produit dhydroxylation, les
flavonodes (ou dihydrovonols), joueraient le rle dintermdiaire dans la formation des
diffrents types de flavonodes [29].















Chapitre I

24


C
CH
HC
O
HO
OH
OH

C
CH
C
O
O
HO
OH
OH

Chalcone Flavone
Isomrisation -2H

C
CH
2
CH
O
O
HO
OH
OH

C
C
C
O
O
HO
OH
OH
OH

Flavonone -2H Flavonal

Hydroxylation

C
CH
CH
O
O
HO
OH
OH
OH

CH
CH
CH
O
OH
HO
OH
OH
OH

Dihydroflavonal (flavononol) Flavonediol-3,4

Enolisation


CH
O
OH
OH

CH
O
OH
OH


C
H
C
C
O
HO
OH
OH
OH
+
+ H
2
O


Figure [I.7] : Formation des diffrents types de flavonodes partir des chalcones [28].


Les ractions de la figure (I.7) restant en grande partie hypothtiques ; cependant
elles ont t, dans la majorit des cas, ralises au laboratoire. Plusieurs faits sont en
faveur de ce schma :
+2H
Chapitre I

25

a) Une enzyme susceptible disomries les chalcones en flavonone a t isole dans les
germinations de soja par Wong et Moustapha [30]
b) L'hydroxylation des flavononols en flavonols, a t obtenue par Mahesh et Seeshadri
[31]
c) La rduction des flavononols en flavonols ne prsente pas de difficult ; en effet, les
carbones 2 et 3 possdent une configuration trans et par consquent la dshydrognation.
d) Pachco et Grouiller [32] ont ralise la synthse chimique de diffrent htrosides des
flavonols partir des chalcones correspondants ; dautre part, Wong et al [33]. Ont
montr que des germinations de pois chiches transforment un flavononol en flavonol.
e) Pachco [34] a synthtis des anthocyanidines partir des flavononols ; pour interprter
la raction, cet auteur envisage le passage par les flavanediols-3,4.


I.4.2 Intrt des flavonodes

Les flavonodes sont l'un des plus grands groupes de mtabolites secondaires qui
jouent un rle important dans les plantes. Ils interviennent comme des composs de
dfense ainsi que dans la signalisation de la reproduction, de la pathogense et de la
symbiose [35, 36]. Les flavonodes vgtaux sont impliqus dans le mcanisme
d'intervention contre l'infection par des micro-organismes [37] ou lattaque par les
herbivores [38]. Les flavonodes sont galement impliqus dans la production de
nodosits des racines comme un systme de fixation de l'azote aprs l'infection par la
bactrie Rhizobium dans une varit de plantes lgumineuses [39]. Ils sont des sources
de pigments pour la coloration des composs de fleurs [40] et jouent un rle important
dans les interactions avec les insectes [41]. Vu lintrt pharmacologique des
flavonodes, de nombreux travaux semblent indiquer quils possdent des proprits
anti-oxydantes [42, 43], anti-inflammatoires [44, 45], anti-VIH [46, 47], antitumorals
spcialement lorsquils sont utiliss conjointement avec dautres agents
chimiothrapeutiques [48, 49], antiviraux [50], antibactriens [51], antiallergiques [52].





Chapitre I

26

I.4.3 Analyse structurale des flavonodes

Les mthodes danalyse structurale comprennent des mthodes chimiques et
physico-chimiques. Les techniques les plus couramment utilises sont :

I.4.3.1 Spectroscopie UV-Visible

La spectrophotomtrie UV-Visible est base sur le principe suivant : en milieu
alcoolique, chaque famille de flavonodes a un spectre dabsorption caractristique,
susceptible dtre modifi par laddition des ractifs. Daprs Jurd et al. [53] et Voirin et
al. [54], la nature du ractif et leffet quil produit sur le spectre dabsorption apportent
des indications sur la structure des flavonodes. Les tapes denregistrement des spectres
en prsence de ractifs sont effectues selon les tapes suivantes :

Premire tape : On enregistre le spectre dabsorption dans le mthanol neutre puis
immdiatement aprs lajout dune goutte de NaOH (0,5 N), ensuite on enregistre aprs
5 minutes.

Deuxime tape : On enregistre une premire fois le spectre dabsorption dans le
mthanol, puis cette solution on additionne AlCl
3
(1%) et on enregistre le spectre
dabsorption. Aprs cette opration on rajoute quelques gouttes dacide chlorhydrique
(6N) puis on enregistre le spectre de cette nouvelle solution.

Troisime tape : On enregistre dans la solution mthanolique puis on ajoute NaOAc
(sec) et on enregistre le spectre, aprs cette opration on rajoute cette solution quelques
gouttes de solution sature dacide borique puis on enregistre le spectre dabsorption.

Types de bandes dans les flavonodes

On distingue deux types de bandes :
La bande I correspond l'absorption du systme cinnamoyle en faisant intervenir la
conjugaison du groupement carbonyle C4 avec le noyau B [55].
La bande II correspond labsorption du systme benzoyle en faisant intervenir la
conjugaison du groupement carbonyle avec le noyau A [56-57].
Chapitre I

27

Le dplacement exact et lintensit des deux bandes I et II du spectre effectu
dans le mthanol illustrent la nature de la structure du flavonode ainsi que sa
substitution, conformment au tableau I. 7.

Tableau [I.7] : Interprtation des dplacements des maximums des bandes I et II aprs
addition des ractifs [58].

Ractifs Dplacement (nm)
Bande I Bande II
Interprtation

MeOH

310-350 250-280
330-360 250-280
350-385 250-280
Flavone
Flavonol (3-OR)
Flavonol (3-OH)

NaOH


+45 +60 sans diminution dintensit optique
+45 +60 avec diminution dintensit optique
Apparition dune nouvelle bande entre 320-
335 nm
4'-OH
3-OH, 4'-OR
7-OH

NaOAc
+5 +20 de la bande II
Dplacement faible de la bande II
7-OH
7-OH avec substituant en C-6 ou
C-8
NaOAc
+ H
3
BO
3

+12 +36 de la bande I
Faible dplacement bathochromique de la
bande I
3', 4' diOH
Orthodihydroxyl sur le noyau A


AlCl
3

+30 +36 de la bande I par rapport au spectre
AlCl3+HCl
+20 40 de la bande I par rapport au spectre
AlCl3+ HCl
Orthodihydroxyl sur le noyau B
6, 7 ou 7, 8 di - OH +
Orthodihydroxyl sur le noyau B

AlCl
3
+
HCl
+35 +55 de la bande I
+17 +20 de la bande I
+50 +60 de la bande I
5-OH
5-OH (avec 6-oxygnation)
3-OH ou 3-OH et 5-OH






Chapitre I

28

I.4.3.2 Rsonance Magntique Nuclaire (R. M. N)

I.4.3.2.a R. M. N. du proton
Concernant lanalyse des flavonodes, la spectroscopie de rsonance magntique
nuclaire de proton (RMN
1
H) permet de visualiser les relations existant entre les
protons des diffrents noyaux et dduire leur degr de substitution.
Elle permet galement de reprer les groupements mthoxyls, de dnombrer les
sucres et denvisager leur mode de liaison la gnine.

a. Analyse des signaux provenant des protons de la gnine.
Les positions relatives des protons sur les noyaux A et B sont facilement
dductibles grce aux valeurs des constantes de couplage.

Protons du noyau A
Lorsque le noyau A est disubstitu par des OH en 5 et 7, les protons H-6 et H-8
prsentent deux doublet, respectivement, entre 6.16 et 6.25 ppm avec une constante de
couplage J = 2,5 Hz et entre 6.39 et 6.56 ppm avec la mme constante de couplage. La
substitution des OH en positions 5 et/ou 7 conduit au dblindage des deux protons
voisins [59].

Protons du noyau B

Le dplacement chimique des protons du noyau B se trouve entre 6,7-7,9 ppm.
Ce dplacement chimique est bas sur les substituants dans le noyau B et le degr
doxydation du noyau C.
Quand le noyau B est monosubstitu en 4', les quatre protons H-2', H-3', H-5' et
H-6' prsentent deux doublets dont les constantes de couplages sont identiques (8.5 Hz).
Les protons H-2' et H-6' rsonnent toujours des champs infrieurs ceux des protons
H-3' et H-5'.

Protons du cycle C
Le proton H-3 dune structure flavone rsonne entre 6 et 7 ppm sous forme
dun singulet [59], pouvant tre confondu avec les protons H-6 et H-8.



Chapitre I

29

I.4.3.2.b. Analyse des signaux provenant des protons de la partie osidique.
Proton anomrique

Le proton anomrique apparat sur le spectre sous forme dun doublet dblind par
rapport aux autres protons osidiques. La valeur de la constante de couplage permet de
distinguer les anomres (J = 7-8 Hz) des anomres ((J = 3-4 Hz) [60].
Le proton anomrique li un autre ose, devient relativement loin de linfluence du
noyau flavonique, et rsonne champ plus fort que le proton anomrique li la gnine.
A titre dexemple dans le cas de Kampfrol 3-O--L-rhamnopyranosyl-(1 6)--D-
glucopyranoside le proton H-1"' du rhamnose rsonne 4,54 ppm dans le mthanol
deutri [61] alors que dans le cas du Kampfrol-3-O-rhamnoside le proton anomrique
H-1" rsonne 5,43 ppm avec une constante de couplage J = 2.1 Hz [62].

I.5 Coumarine

Les coumarines sont des substances naturelles connues, Il sagit de composs
neuf atomes de carbone possdant le noyau benzo (2 H)-1 pyrannone-2. Ce compos
driverait de la cyclisation de lacide cis cinnamique oxygn en C-2 [63]. Les
coumarines tirent son nom de kumar, nom vernaculaire de la fve tonka Coumarouna
odorata encore appele Disteryx odorata Willd. Elles sont trs largement distribues
dans le rgne vgtal. La coumarine et ses drivs dont plus de 300 structures sont
connues, se rpartissent dans 9 familles de Monocotyldones et plus 70 familles
Dicotyldones. Ils participent dans les racines des plantes symbiotiques hbergeant
Rhizobium, la formation des nodules. Elles sont responsables de lodeur
caractristique de lasprule odorante et du mlilot dessch.

I.5.1 Classification

Les coumarines sont substitues par un hydroxyle ou plus sur les six positions
disponibles. La majorit des coumarines sont substitues en C-7 par un hydroxyle.
Les auteurs [64 - 65] ont class les coumarines selon la nature des substituants sur leurs
structures en cinq catgories :


Chapitre I

30

I.5.1.1 Coumarines simples

Les coumarines les plus rpandues dans le rgne vgtal possdent des
substitutions (OH ou OCH
3
) en 6 et 7.
O
O
R
1
R
2
R
3
2
3
4
1
5
6
7
8
8a
4a

Figure [I.8] : Squelette de coumarine.


Les gnines :







Les htrosides :





I.5.1.2 Furanocoumarines :
Les furocoumarines (appeles encore furanocoumarines) constituent une
famille de composs synthtiss par certaines espces de vgtaux suprieurs
Elles drivent principalement de lOmbellifrone par condensation isopronoides
en C
5
, et souvent liposolubles [67]. Le cycle furane peut tre fusionn au cycle
R1 R2 R3
Ombellifrone H OH H
Escultol OH OH H
Scopoltol OCH
3
OH H
Herniarine H OCH
3
H
Fraxtol OCH
3
OH OH
R1 R2 R3
Esculoside (=Esculine) O-Glu OH H
Cichorioside(=Cichorine) OH O-Glu H
Scopoloside(=Scopoline) OCH
3
O-Glu H
Fraxoside OCH
3
O-Glu OH
Chapitre I

31

benznique dans deux positions linaire (drivant de la molcule de psoralne),
angulaire bases sur la structure de langlicine. De nombreux drivs de ces
structures de base existent avec des ajouts de rsidus sur les carbones des
positions 2, 5 et/ou 8 [68]. Ces rsidus peuvent tre assez simples, comme dans
les cas des hydroxypsoralnes et desmthoxypsoralnes, ou bien plus complexes
comme par exemple pour lathamantine ou lacolumbianadine. La plupart des
furocoumarines ont cependant des dnominations reprenant le nom des plantes
dans lesquelles elles ont t dcrites pour la premire fois (le bergaptne prsent
dans Citrus bergamia, la rutartine ou la rutarine dans Ruta graveolens), ou bien
encore lies leurs proprits (la xanthotoxine pour sa couleur et son activit
biologique). On dsigne dans certains cas lisomre linaire ou angulaire dune
molcule par le prfixe iso- comme par exemple dans le cas de lisopimpinelline.



O
O O

52 Psoralne 53 Anglicine

O
O O
O
O Me
Me
Me
Me

O
O O
O-isovalryl Me
Me
O-isovalryl

54 Columbianadine 55 Athamantine

Figure [I.9] : Structures de quelques furanocoumarines.

I.5.1.3 Pyranocoumarines : composs forms par la fusion d'un htrocycle pyrane
avec la coumarine
O
O
O
Chapitre I

32

1- soit dans le prolongement (forme linaire) : xanthyltine
2- soit latralement (forme angulaire) : sseline, visnadine




O O

56 Xanthyltine 57 Sseline



I.5.1.4 Dicoumarines (coumarines dimriques)
Ce sont des composs forms par la liaison deux units coumarininques
simples




O
H
HO
H
3
CO
O
O
O O

O
H
HO
HO
O
O
O O

58 Daphnortine 59 Edgeworthine




I.5.1.5 Tricoumarines (coumarines trimriques)
Ce sont des composs issus de lunion de trois entits coumariques.


O O
O
O
HO
OH

60 Triumbllatine




O O
Chapitre I

33

I.5.2 Biosynthse des coumarines


Les coumarines constituent avec les flavonodes, les chromones et les
isocoumarines, un trs vaste groupe de composs. Llment structural qui les
caractrisent la prsence dun noyau benzopyrane [69]. Les structures simples des
coumarines drives de lacide cinnamique via lacide amin phnylalanine, par
exemple la coumarine et lumbellifrone, sont trouves dans plusieurs plantes [70].
Lhydroxylation en ortho de lacide trans-cinnamique est la voie directe qui conduit aux
coumarines simples. Dautres coumarines qui ont subi un changement dans leurs
structures de base, se rencontrent dans peu de familles. En effet, la participation du
prcurseur est possible pour donner des drivs mixtes de lacide chikimique et
mvalonique que sont les furano et pyranocoumarines [71, 72].
La premire raction est la condensation du phosphonol pyruvate (PEP) avec
lrythrose-4-phosphate pour former un compos de sept carbones : le 3-dsoxy-D-
arabino-heptulosonate-7-phosphate (DAHP) [71]. La cyclisation du DAHP en 3-
dhydroquinate met en jeu une condensation aldolique intramolculaire intervenant
aprs llimination du phosphate [73].

+
PO CH
2
COO
-

COO
-
OH
OH
PO
O
O

COO
-
OH
OH
O
HO

PEP Erythrose-4-phosphate DAHP
3-dhydroquinate


COO
-
OH
OH
O


hydroshikimate d - 3 61



Une rduction du carbonyle du 3-dhydroshikimate se droule pour donner le
shikimate. Cette rduction se fait par lintermdiaire du NADPH et de la shikimate
oxydorductase. Le shikimate rsultant est ensuite phosphoryl par lATP, lui cdant un
groupe phosphate pour former le shikimate 3-phosphate. Ce dernier, en prsence dune
O
OH
HO
PO
Chapitre I

34

enzyme condensante, fixe une nouvelle molcule de PEP pour donner un ester dnol, le
5-enolpyruvyl-shikimate3-phosphate (EPSP). Ce dernier conduit au chorismate, via une
trans limination.

COO
-
OH
OH
O

COO
-
OH
OH
HO

COO
-
OH
OH
PO




COO
-
O
OH
O
COO
-

COO
-
O
OH
PO
CH
2
COO
-

Chorismate


Le rarrangement prcyclique du chorismate donne le prphnate. Ce
rarrangement est catalys par une enzyme (chorismate mutase) capable de transfrer la
chane latrale drive du PEP pour quelle soit directement lie sur le cycle.


COO
-
O
OH
O
COO
-

OH
-
OOC
O
COO
-

OH
O
COO
-

Chorismate Prphnate

La transamination de lacide phnylpyruvique conduit la formation de la
phnylalanine

OH
CH
2
CO COOH

NH
3
OH
CH
2
COOH

Ac. phnylpyruvique phnylalanine
Chapitre I

35


Par contre, la thyrosine se forme de lacide prphnique



CH
2
-CO-COOH
HO
O
OH
NAD
+
NADPH, H
+
O
CH
2
-CO-COOH
HO
O


OH
COOH
NH
2

OH
CH
2
-CO-COOH



Figure [I.10] : Biosynthse des coumarines.





Une dsamination de la phnylalanine et de la tyrosine conduit respectivement
lacide trans cinnamique et lacide coumarique.

COOH

COOH
OH

62 Ac. cinnamique 63 ac. para-coumarique



La formation de la phnylalanine partir de lacide chorismique implique un
rarrangement de Claisen catalys par lenzyme, cet acide amin est transform en
intermdiaire phnylpropanoique (acide coumarinique) qui donne la coumarine aprs
une isomrisation et lactonisation.


Chapitre I

36



COOH

COOH
OH

Ac. Cinnamique ac. ortho-coumarique


O
O

O-Glucoside
COOH

COOH
O-Glucoside

Coumarine ac--D-glucoside O-Coumarine




La structure de coumarine est drive de l'acide cinnamique par l'intermdiaire de
l'ortho-hydroxylation (a), de l'isomrisation trans-cis de la chane latrale (b) et (c), et de
la lactonisation (d). La forme trans est stable et ne pourrait pas cycliser, donc, il devrait y
avoir d'isomrisation d'une certaine sorte et l'isomrase d'enzymes est implique.


I.5.3 Intrt des coumarines

Les coumarines ont des proprits antipyrtique, analgsique, sdative, anti-
oedmateuses et anti convulsivante. Ils sont probablement responsables de leffet
anticonvulsivante [74]. Les coumarines ont indiques dans les cas de lymphoedme du
membre suprieur aprs traitement radiochirurgical du cancer du sein. Concernant les
drivs coumariniques, certains dentre-eux possdent des activits pharmacologiques,
principalement anticoagulantes. Les plus connus sont le dicoumarol et lesculoside, tout
deux veinotoniques et vasculoprotecteurs (Hostettmann, 1997) [75].







h

d
C
b
a
Chapitre I

37

I.6 Les huiles essentielles

Les huiles essentielles sont des produits obtenus soit partir des matires
premires naturelles par distillation leau, soit partir des fruits de citrus par des
procds mcaniques et qui sont spars de la phase aqueuse par des procds
physiques[76].
Dans la plante, les huiles essentielles peuvent tre stockes dans divers organes : fleurs
(origan), feuilles (citronnelle, eucalyptus), corces (cannelier), bois (bois de rose,
santal), racines (vtiver), rhizomes (acore), fruits (badiane) ou graines (carvi) [77]. La
synthse et laccumulation des huiles essentielles, classes parmi les mtabolites
secondaires, se font gnralement au niveau des structures histologiques spcialises,
souvent localises sur la surface de la plante [78].
Parmi les composants majoritaires des huiles essentielles, nous trouvons les
terpnodes qui possdent un rle cologique lors des interactions vgtales, comme
agents alllopathiques, cest--dire inhibiteur de la germination, mais aussi lors des
interactions vgtal-animal, comme agent de protection contre les prdateurs tels que les
insectes. Ils interviennent galement, par leurs odeurs caractristiques, dans lattraction
de pollinisateurs [79].
Une varit de produits odeur plus ou moins formule selon la concentration en
composs et en composs volatils rcolts, est alors obtenue. Les huiles essentielles
produites par hydrodistillation, entranement la vapeur ou expression de lcorce des
fruits, sont les produits les plus concentrs en composs olfactifs [80].
Chacun de ces composs de part leur volatilit dgage une odeur propre. Ainsi
certaines plantes peuvent avoir une odeur similaire due une molcule commune
prsente en quantit notable dans lhuile essentielle. Dans ces conditions, une fois le ou
les composs responsables dune odeur identifi, si le caractre olfactif de ces composs
savre intressant, il serait alors rentable, selon le contexte conomique, de produire
des espces vgtales susceptibles de fournir une huile essentielle haute teneur
molculaire en composs recherchs, et donc gnralement de meilleure qualit [79].

I.6.1 Procde classique dextraction des huiles essentielles

La distillation est un procd de sparation bas sur la diffrence de composition
entre un liquide et la vapeur engendre. La technique implique la condensation de la
vapeur et la rcupration des fractions liquides rsultantes. On parle de distillation
Chapitre I

38

simple ou fractionne lorsquil sagit de liquides miscibles. On peut galement procder
la distillation de liquides non miscibles. Cest le cas de lhydrodistillation des huiles
essentielles [81].

I.6.2 Production des huiles essentielle : lhydrodistillation

Lentranement la vapeur deau est lune des mthodes officielles pour
lobtention des huiles essentielles. A la diffrence de lhydrodistillation, cette technique
ne met pas en contact direct leau et la matire vgtale traiter. De la vapeur deau
fournie par une chaudire traverse la matire vgtale situe au dessus dune grille.
Durant le passage de la vapeur travers le matriel, les cellules clatent et librent
lhuile essentielle qui est vaporise sous laction de la chaleur pour former un mlange
eau + huile essentielle .
Le mlange est ensuite vhicul vers le condenseur et lessencier avant dtre spar en
une phase aqueuse et une phase organique : lhuile essentielle. Labsence de contact
direct entre leau et la matire vgtale, puis entre leau et les molcules aromatiques
vite certains phnomnes dhydrolyse ou de dgradation pouvant nuire la qualit de
lhuile. Lhydrodiffusion est une variante de lentranement la vapeur (figure I.11).



Figure [I.11] : Appareillage utilis pendant lhydrodistillation dhuile essentielle [82].

Le montage de type Schilcher [82] (figure I.11) est compos de quatre parties
principales:
1. le racteur, un ballon dans lequel on introduit la matire vgtale et leau.
2. la colonne, un cylindre en verre plac au-dessus du racteur qui recueille la phase
vapeur.
Chapitre I

39

3. le rfrigrant dans lequel se recondensent les vapeurs.
4. le vase florentin o vont se sparer la phase organique (huile essentielle) et la phase
aqueuse (eau florale).
Ce systme peut tre quip dun recyclage ou cohobage : un principe de siphon
renvoie leau florale du vase florentin vers le racteur. Un simple robinet au bas du vase
permet de recueillir lhuile essentielle la fin de la raction.
Le milieu ractionnel constitu par la matire vgtale et leau est port bullition
grce un chauffe-ballon.
La temprature est limite par la temprature dbullition de leau 100C.
La composition chimique des huiles essentielles dpend largement de linfluence des
conditions dhydrodistillation sur lessence contenue dans la plante.


I.6.4 Principales structures chimiques des huiles essentielles [83]

Les huiles essentielles sont constitues principalement de deux groupes de
composs odorants distincts selon la voie mtabolique emprunte ou utilise. Il sagit
des terpnes, prpondrants dans la plupart des essences, et des drivs du
phnylpropane, retrouv en tant que compos majoritaire dans quelques unes, telles que
les essences danis, de cannelle, de girofle, etc Divers autres constituants minoritaires
leurs sont associs. De nombreux drivs porteurs de fonctions diverses sont galement
considrs comme des composs terpniques.
Les composs terpniques sont issus dune voie mtabolique secondaire de lacide
mvalonique. Suivant le nombre entier d'units pentacarbons (C
5
) ramifies, drives
du 2-mthylbutadine (isoprne), nous pouvons raliser la classification suivante :


C
2
H
C
2
H
C
3
H


Figure [I.12] : Lisoprne.



Pour n = 2: les monoterpnes. Ces terpnes proprement dits sont des
hydrocarbures en C
10
. Ils peuvent tre acycliques, monocycliques ou bicycliques. A ces
Chapitre I

40

terpnes se rattachent un certain nombre de produits naturels fonctions chimiques
spciales, surtout alcool et aldhyde.

COOH

CH
2
OH


64 acide transgranique 65 citronellol 66 - phellandrne


Figure [I.13] : Exemple des composants monoterpniques.


Pour n = 3: les sesquiterpnes. Ce sont des hydrocarbures de formule C
15
, soit
une fois et demie (sesqui-) la molcule des terpnes (en C
10
H
16
). Un groupe particulier
de sesquiterpnes est reprsent par les azulnes, composs instables dont le nom vient
de leur coloration bleue et qui sont importants en pharmacognosie en raison de leurs
proprits anti-inflammatoires. Ces composs, non saturs, sont constitus par deux
cycles penta et hepta carbons. Nous retrouvons dans ce groupe le chamazulne (des
essences de camomille et de matricaire).

67 Cadinene 68 Eudesmol


Figure [I.14] : Exemple des composants sesquiterpniques

Pour n = 4: les diterpnes qui sont des drivs dhydrocarbures en C
20
. Ces
composs, point d'bullition lev, se rencontrent surtout dans les rsines.

69 Acide abitique


Figure [I.15] : Exemple des composants diterpniques.
Chapitre I

41



Pour n = 5: les sesterpnes. Ce sont des drivs dhydrocarbures en C
25
.
Pour n = 6: les triterpnes. Ces composs en C
30
sont trs rpandus, notamment
dans les rsines, l'tat libre, estrifis, ou sous forme htrosidique.


70 Squalne


Figure [I.16] : Exemple des composants triterpniques.



Pour n = 8 et les polyterpnes le caoutchouc naturel est lexemple plus nomme. Le
caoutchouc naturel est un polymre de l'isoprne. Il est produit par la coagulation par la
chaleur de la sve de l'hva.



71 Caoutchouc naturel.

Figure [I.17] : Exemple des composants polyterpnes.

Dans une huile essentielle, nous retrouvons presque exclusivement des mono- et
sesquiterpnes.
Les drivs du phnylpropane sont moins abondants que les terpnodes, ce sont
des arnes issues dune voie mtabolique secondaire dite de lacide shikimique lui-
mme intermdiaire de la synthse de la lignine partir du phnylpropane.
Les composs sont nanmoins importants sur le plan qualitatif et quantitatif chez
certaines espces. Par exemple, le trans-anthole qui est la molcule responsable en
grande partie de larme danis, constitue environ 80% de lhuile essentielle de fenouil
(1-3% dessence), et danis vrai (3% dessence). Les drivs phnylpropanoques et les
terpnodes sont associs en nombre et en proportions trs variables de telle sorte que le
Chapitre I

42

produit est htrogne et complexe sur le plan chimique. Ils sont biosynthtiss au sein
des mmes organes scrteurs o ils forment lessence naturelle [84].


I.6.5 Analyse chromatographique et identification des constituants dans un
mlange


La sparation des composs seffectue en gnral par CPG notamment pour les
composes volatils (mono-et sesquiterpnes) et par HPLC pour les composs pas ou peu
volatiles. Les colonnes utilises sont souvent apolaires exemple HP-5 et DB-5 du fait
des caractristiques apolaires de la majorit des composs mono-et sesquiterpnes [85].
La mthode couramment utilise pour lidentification des huiles essentielles est le
couplage CPG/SM. Il permet de connatre, dans la grande majorit des cas, la masse
molculaire dun compos et dobtenir des informations structurales relatives une
molcule partir de sa fragmentation (86, 87). En parallle, une expression
mathmatique gnrale qui donne une meilleure approximation des indices de Kovts,
recommande par la firme "Chromatographic Society" est la suivante (Evans et al, 1989)
[88]. Les indices de Kovats sont les temps de rtention relatifs des substances analyses
par rapport celles des alcanes. La formule ci-dessous dcrit le calcul des indices de
Kovats partir des temps de rtentions des composs cibles et ceux des alcanes :

=
+
Z
t t
t t
I
Rz z R
Rz Ri
) 1 (
100


O I : indice de Kovats d'une substance A
z = nombre datomes de carbone de lalcane qui sort avant le compos inconnu
t
R
= temps de rtention,
i = molcule inconnue,
z = nombre datomes de carbone de lalcane qui sort avant le compos inconnu
(z +1) = nombre datomes de carbone de lalcane qui a t lu aprs le compos
inconnu.





Chapitre I

43

I.6.6 Les huiles essentielles et leur activit anti-microbienne

Les huiles essentielles ou les volatiles, sont des produits naturels obtenus partir
de diffrentes parties de plantes (fleurs, graines, feuilles, corce, fruits, herbes et racines)
le plus souvent par la mthode de distillation la vapeur deau [89]. Les terpnodes et
les phnylpropanodes ont montr une activit antimicrobienne plus leve des terpnes
oxygns en comparaison des terpnes hydrocarbures a t observe [90-93]. Les
composants oxygns purs ont aussi montr une activit suprieure par rapport aux
huiles essentielles dans lesquelles ils se trouvent. Ceci a t observ pour la graniol et
citronllol de lhuile de granium [94] et galement pour le thymol et le carvacrol des
HE du poivron [95].
Les huiles essentielles peuvent aussi inhiber la synthse de DNA, RNA, des
protines et des polysaccharides [96]. Le tableau (I. 8) montre quelques molcules
aromatiques selon leur fonction chimique et activit biologique.

Tableau [I.8] : Classement et activit biologique de molcules aromatiques selon leur
fonction chimique.
Compos
aromatique
dveloppes Proprits
Phnol
OH

72 Carvacrol
Alcool
Terpnique
OH

73 Graniol
Stimulantes, Toniques Antiseptiques
Bactricides, Fongicides, Anti-virale,
Antiparasitaires, Irritantes
Ether-oxide,
proxyde
CH
3
CH
3
H
3
C
O

74 Cinole

Antibactriens Antifongiques
Insecticides, Lascaridole est fortement
ractif et toxique (par la liaison O-O-)
Chapitre I

44





I.7 Activit antiradicalaire sur DPPH

L'utilisation d'antioxydants est ncessaire dans les industries cosmtiques,
agroalimentaires en tant que conservateurs des corps gras. Or, dans l'oxydation d'un
corps gras, en contact avec l'oxygne de l'air, ou inclus dans une membrane biologique,
intervient un type particulier d'intermdiaires courte dure de vie, les radicaux libres,
qu'il convient de neutraliser pour assurer sa protection. C'est pourquoi les substances
antioxydantes sont souvent antiradicalaires [97]. Les radicaux libres sont galement
produits dans notre organisme sous l'action de facteurs dclenchants externes (UV,
fumes de combustion, solvants.), mais galement dans le cadre de phnomnes
biologiques importants, comme la respiration cellulaire. La production permanente de
ces molcules ractives dans notre corps est gnralement contrle par l'action de
systmes enzymatiques ou d'antioxydants. Lorsque cet quilibre prcaire est rompu en
faveur des radicaux libres, il se produit un stress oxydatif. Par les dommages ainsi causs
nos cellules, ces diffrents mcanismes semblent jouer un rle prpondrant dans les
phnomnes du vieillissement et engendrer des pathologies telles que des cancers et de
troubles neurodgnratifs. L'apport exogne d'antioxydants pourrait donc ralentir, voire
prvenir, ces dsordres physiologiques [98].



Ctones
O
CH
3
H
3
C
CH
3

75 Carvone
Calmantes, Antivirales, Antifongiques
Neurotoxiques Anti-pileptique
Hydrocarbures
aliphatiques,
sesquiterpnes
CH
3
H
3
C
CH
2
76 Limonene

Fongistatique Bactriostatique
Insecticides
Nematicide Herbicide
Chapitre I

45


Rfrence

1. Crete P. (1965) : Prcis de botanique. Masson, Paris, dition 2, P 429.

2. Bonnier. (1934). Flore complte de France, Suisse et Belgique. dition 10, P 118.

3. Deysson G. (1964) : organisation et classification des plantes vasculaire. SEDES Paris
2, P 434.

4. Menichini, F., Statti, G., Delle Monache, F. (1994): Dipartimento di Chimica,
Universita degli Studi della Calabria, Arcavacata di Rende, Italy. Flavonoid
glycosides from Scorzonera columnae. Fitoterapia 65(6), 555-6.


5. Oksuz, S., Goren, N.; Ulubelen, A. (1990): Terpenoids from Scorzonera tomentosa.
Fitoterapia 61(1), 92-3.


6. Tolstikhina V. V., Semenov A. A. (1998): Minor metabolites of Scorzonera hispanica
L. Cell culture SO RAN, Irkutsk, Russia. Rastitel'nye Resursy 34(2), 77-80.


7. Bin W., Guo Q. Li., Pei J. Qiu., Hua Shi Guan. (2007): Two new olean-type triterpene
fattyesters from Scorzonera mongolica. Chinese Chemical Letters 18, 708710.

8. Ting-Fu J., Yuan-Hong W., Zhi-Hua L., and Mei E. (2007): Determination of kava
lactones and flavonoid glycoside in Scorzonera austriaca by capillary zone
electrophoresis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 43, 854858.

9. Gray P.G.,and Grundon, M.F. (1983): Structural diversity and distribution of
coumarins and chromones in the Rutales .Chemistry and Chemical Taxonomy of the
Rutales. Academic Press, London, UK, pp. 97-146.

10. Sari A., Zidorn C., Ellmerer E. P., Ozgokce F., Ongania K. H. (2007): phenolic
compounds from Scorzonera tomentosa L. Helvetica Chimica Acta 90(2), 311-317.

11. Paraschos S., Magiatis P., Kalpoutzakis E., Harvala C., Skaltsounis A. L.
(2001): Three new dihydroisocoumarins from the Greek endemic species
Scorzonera cretica. Journal of Natural Products 64(12), 1585-1587.

12. Robles M., Aregullin M., West J., and Rodriguez E. (1995): Recent studies on
the zoopharmacognosy, pharmacology, and neurotoxicology of sesquiterpene
lactones. Planta Medica 61, 199-203.

13. Cho J. Y., Baik U. K., Jung J. H., Park M. (2000): European Journal of Pharmacology
398 399-407.

14. Kasai R., Shingu T., Wu R. Y., Hal I. H., Lee K. H. (1982): Journal of Natural
Products 45(3), 317-320.






Chapitre I

46


15. Scaltse H., Lazari D., Panagouleas C., Geogiadou E., Garcia B., Sokovic M. (2000):
Phytochemistry 55(8), 903-908.

16. Picman A. K. (1986): Biological activities of sesquiterpene lactones. Biochemical
Systematics and Ecology 14, 255-281.

17. Li J., Wu Q. X., Shi Y. P., Zhu Y. (2004): A new sesquiterpene lactone from
scorzonera austriaca. Chinese Chemical Letters 15(11), 1309-1310.

18. Bryanskii O. V., Tolstikhina V. V., Zinchenko S. V., Semenov A. A. (1992):
A sesquiterpene glucoside from cultivated cells. Khimiya Prirodnykh Soedinenii
(6), 640-645.

19. Zidorn C., Ellmerer-Muller E. P., Stuppner H. (2000): Sesquiterpenoids from
Scorzonera hispanica L. Pharmazie 55(7), 550-551.

20. Boussaada O., Saidana D., Chriaa J., Mejda D., Helal A. (2008): Chemical
composition and Antimicrobial Activity of Volatile Components of Scorzonera
undulate. Journal of essential Oil Research 20, 358-362.

21. Wang B., Li G., Guan H. (2007): Analysis of volatile oils and inorganic element of
Scorzonera mongolica maxim by GC-MS and ICP-MS. Shizhen Guoyi Guoyao
18(10), 2364-2365.

22. Bruneton J. (1999) : Pharmacognosie -Phytochimie, Plantes Mdicinales, 3
me
dition,
Ed. Tec et Doc Lavoisier, 1120 p., Paris.

23. Dey, P.M., Harborne, J.B. (1991): Methods in plant biochemistry. Volume 7,
Terpenoids. Academic press.

24. Manitto, P. (1981): Biosynthesis of natural products. John willey et sons. New york.

25. Loomis, D., and R. Croteau. (1980): Biochemistry of Terpenoids: A Comprehensive
Treatise. In: P. K. Stumpf and E. E. Conn (eds.) the Biochemistry of Plants. Lipids:
Structure and Function No. 4. p 364-410. Academic Press, San Francisco.

26. Allen, K. G., Banthorpe, D. V., and Charlwood B. V. (1977): Metabolic pools
associated with monoterpene biosynthesis in higher plants. Phytochemistry
16, 79-83.

27. Harborne, J. B., & Williams, C. A. (2000): Advances in flavonoid research
since 1992. Phytochemistry 55, 481-504.

28. Grisebach H. (1965): Chemistry and Biochemistry of Plant Pigments, T.W
Goodwin diteur, Acadimic Press, New York.

29. Heller W., and Forkmann G. (1993): Biosynthesis of Flavonoids. In The
Flavonoids: Advances in research since 1986. Harborne J.B. Ed. Chapman &
Hall.

Chapitre I

47

30. Wong E., et Moustapha E. (1966): Tetrach. Letters. 26, 3021.

31. Mahesh V., Bet Seshadri T.R. (1955): J. chem.Sac 2533.

32. Pachco H., et Grouiller A. (1966): Bull. Soc. Chim 10, 3212.

33. Wong E., Mortimer P. P., Geissman T. A. (1965): Phytochem 4. 89.

34. Pachco H. (1956): Bull. Soc. Chim. 1600.

35. Maxwell C. A., Philips D. A. (1990): Plant Physiology 93, 1552.

36. Barz W., Welle R., in: H.A. Stafford (Ed.). (1990): Flavonoid Metabolism,
CRC Press, Boca Raton, FL, USA, p. 139. 360.

37. Middleton E. M., Teramura A. H. (1993): Plant Physiology 103 741.

38. Wang C. Y., Huang H. Y., Kuo K.-L., Hsieh Y. Z. (1998): Journal of
Chromatography A 802 225.

39. Etherington J. R. (1983): Wetland Ecology, Edward Arnold Publishers, UK
.p. London.

40. Goto T., Kondo T. (1991): Angewandte Chemie 30 17.

41. Biggs D. R., Lane G.A. (1978): Phytochemistry 17 1683.

42. Rice-Evans C. A., Miller N. J., Paganga G. (1997): Trends Plant Science 2.

43. Van d. B. R., Haenen G., van d. B. H., van d. V.W., Bast A. (2000): The
predictive value of antioxidant capacity of structurally related flavonoids
using the Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) assay. Food
Chemistry 70 391.

44. Read M. A. (1995): Flavonoids: naturally occurring anti-inflammatory agents
Vascular. American Journal of Pathology 147(2), 235-237.

45. Middleton E., Kandaswami C. (1992): Effects of flavonoids on immune and
inflammatory functions. Biochemical Pharmacology 43, 1167-1179.

46. Matsuda H., Morikawa T., Toguchida I., Harima S., Yoshikawa M. (2002): Chemical
and Pharmaceutical Bulletin 50, 972.

47. Hu C. Q., Chen K., Shi Q., Kilkuskie R. E., Cheng Y. C., Lee K. H. (1994): Journal
of Natural Products 57 42.

48. Shi R. X., Ong C. N., Shen H. M. (2005): Cancer Research 65 7815.

49. Shi R. X., Ong C. N., Shen H. M. (2004): Oncogene 23 7712.

50. Amaral A. C. F., Kuster R. M., Gonalves J. L. S. and Wigg M. D. (1999): Fitotirapia
70 293-295.




Chapitre I

48


51. Mori A., Nishiro C. and Tawata S. (1987): Phytochemistry 18 (26), 2231-2234.

52. Nijveldt R. J., van Nood E., van Hoorn D. E. C., Boelens P. G., van Norren K., van
Leeuwen P. A. M. (2001): Flavonoids: a review of probable mechanisms of actions
and potential applications. American Journal of Clinical Nutrition 74 418.

53. Jurd L. (1969): Phytochemistry 8, 445-462.

54. Voirin B. (1983): Phytochemistry 22, 2107-2145.

55. Ngwendson J. N., Bedir E., Efange S. M. N., Okunji C. O., Iwu M. M., Schuster B. G.
and Khan I. A. (2003): Pharmazie 58, 587-589.

56. Barnes C. S., and Occolowitz J. L., (1964): Aust. J. Chem. 17 975.

57. Benkiniouar R. (2007): Thse de Doctorat dEtat en Chimie Organique P17.

58. Mabry T. J., Markham K. R. and Thomas M. B. (1970): The Systematic Identification
of Falvonoids, Springer-verlag, New-York.

59. Markham K. R. and Geiger H. (1994): The Flavonoids, ed. Harborne J. B., Capman
and Hall, London.

60. Markham K. R. and Mabry T. J. (1975): In The Flavonoids, (Harborne J. B., Mabry
T., and Mabry H. eds) Cahpman and Hall London, 45.

61. Sang S., Laspley K., Jeong W. S., Lachance P. A., Ho C. T., Rosen R. T. (2002):
Journal of Agricultural and Food Chemistry 50, 2459-2463.

62. Bilia A. R., Ciampi L., Mendez J., Morelli I. (1996): Pharmaceutics Acta Helvetiae
71, 199- 204.

63. Gray A. I., and Waterman P. G. (1978): Phytochemistry, 17 845.

64. Dean F. M., (1952): Fortschr. Chem. Org. Naturst. 9 225.

65. Spth E. (1937): Ber. Dtsch. Chem. Ges., 70A, 83.

66. Bourgaud F., Allard N., Guckert A., et Forlot P. (1989): Natural sources of
furocoumarins (psoralens). In Psoralens: Past, Present and Future of
Photochemoprotection and other biological activities, T.B. Fitzpatrick, Forlot, P.,
Pathak, M.A., Urbach, F., ed (Paris: John Libbey Eurotext), pp. 219-230.

67. Murray R. D.H., Mendez J., Brown S.A. (1982): The Natural Coumarines
Occurrence, Chemistry and Biochemistry, a Wiley Interscience Publication.








Chapitre I

49

68. Murray R. D. H. (1963): In Naturally Occuring Plants Coumarins, Butterworth,
London.

69. Weterman P. G., and Grundon M. F. (1983): Chemistry, Chemical Taxonomy Of The
Rutales, Academic Press London-New york.

70. Murray R. D. H. (1963): In Naturally Occuring Plants Coumarins, Butterworth,
London, 203.

71. Bernfled P. (1963): Biogenesis Of Natural Compounds, Ed. Pergamon Press, OsFord,
New York, Paris 568.

72. Richter G., (1993) : Metabolisme des Vgtaux, Physiologie et Biochimie 5
eme
ed.
Lausanne 339.

73. Stewart A. B. (1979): Planta. Med, 36 (4), 299.

74. Gupta M. B., Nath R. (1980): Anti inflammatory and antipyretic activities of
sitosterol, Planta medica 39, 157-163.

75. Hostettmann, K. (1997): Tout Savoir sur le Pouvoir des Plantes Sources de
Mdicaments. Editions Favre, Lausanne, pp. 93, 104, 135.

76. Peyron L., Richard Hubert. (1992): Lextraction des pices et herbes
aromatiques et les diffrents types dextraits. Epices et aromates. Tec et Doc
Lavoisier, APRIA., Paris.

77. Leon R. H. O. (2005): Substitution de solvants et matieres actives de synthese par un
combine solvant/actif dorigine vegetale. Thse de linstitut national
polytechnique de Toulouse, France.

78. Brunechon J. (1987): Pharmacognosie, Ecole technique de documentation, Ed.
Ravoilie.

79. Langenheim J. H. (1969): Amber: a botanical inquiry. Science. 163(872),
1157-1169.

80. Tedder J.M. (1970): Basic Organic chemistry. Ed. John Wiley & Sons. New
York.

81. Rose A. E. (1965): Technique of organic chemistry. Vol. IV: Distillation. Ed.
John Wiley & Sons. New York. 1-30.

82. Bourrel C. (1993): Analyse chimique, activits biostatiques et antioxydantes
dextraits de plantes aromatiques slectionnes. Thse de lInstitut National
Polytechnique de toulouse. Toulouse, France.

83. Ganou L. (1993): Contribution ltude des mcanismes fondamentaux de
lhydrodistillation des huiles essentielle. Thse de lINP Toulouse, France.



Chapitre I

50




84. Cu J.Q. (1990): Extraction de compositions odorantes vgtales par divers
solvants organiques. Thse de lInstitut Nationale Polytechnique. Toulouse,
France.

85. Mostafa M. mtabolisme des terpnodes chez les caprins. Thse de lInstitut
des Sciences et Industries du Vivant et de lEnvironnement (AgroParisTech).
Thse de lINRA Paris, France.

86. Longevialle P. Spectromtrie de masse des substances organiques, Masson,
Paris, 1981, 3-14 et 83-98.


87. Evans M.B., and Haken J.K. (1989): Recent Developments in the Gas
Chromatographic Retention Index Scheme. J. Chrom. 472 93-127.


88. Constantin E. (1996): Spectromtrie de masse. Lavoisier Tec & Doc, Paris. 1-
14

89. Van de Braak, S. A. A. J., and Leijten G. C. J. J. (1999): Essential Oils and
Oleoresins, CBI,Centre for the Promotion of Imports from Developing Countries,
Rotterdam.

90. Oh H. K., Sakai T., Jones M. B, and Longhurst W. M. (1967): Effects of various
essential oils isolated from Douglas fir needles upon sheep and deer rumen
microbial activity. Applied Microbiology 15, 777-784.

91. Griffin S. G., Leach D. N., Markham J., and Johnstone R. (1998): Antimicrobial
activity of essential oils from Zieria. Journal of Essential Oil Research 10, 165-174.

92. Dorman, H. J. D., and Deans S. G.( 2000): Antimicrobial agents from plants:
antibacterial activity of plant volatile oils. Journal of Applied Microbiology 88, 308-
316.

93. Cox S. D., Mann C. M., and Markham J. L. (2001): Interactions between components
of the essential oil of Melaleuca alternifolia. Journal of Applied Microbiology 91,
492-497.


94. Didry N., Dubreuil L., and Pinkas M. (1993): Antibacterial activity of thymol,
carvacrol and cinnamaldehyde alone or in combination. Pharmazie 48, 301-304.

95. Lis-Balchin, M., Deans S. G., and H. S. (1996): Bioactivity of geranium oils from
different commercial sources. Journal of Essential Oil Research 8, 281-290.






Chapitre I

51


96. Zani F., G. Massimo., Benvenuti S., Bianchi A., Albasini A., Melegari M., Vampa
G., Bellotti A., and Mazza P. (1991): Studies on the Genotoxic Properties of Essential
Oilswith Bacillus subtilis rec-Assay and Salmonella/Microsome Reversion Assay.
PlantaMedica 57, 237-241.

97. Helme J. P., Chazan J. B., and Perrin J. L. (1999): Les antioxydants In Actifs et
additifs en cosmtologie 2
eme
dition, p. 210-220, Paris.


98. Ferrari J. (2002): Contribution la connaissance du mtabolisme secondaire des
Thymelaceae et investigation phytochimique de l'une d'elles : Gnidia involucrata Steud.
ex A. Rich., Facult des sciences de l'Universit de Lausanne, Thse de doctorat, 215 p













Chapitre II
Chapitre II
52



II. Etude phytochimique de Scorzonera Undulata


II.1.1 L'introduction
Le genre Scorzonera (Asteraceae) se trouve principalement dans les rgions de
scheresse de l'Europe et de l'Asie. Elle se compose de 90 espces europennes distribuant
partout le continent, 23 espces distribuant en Chine et reprsente en Algrie 8 espces,
Scorzonera alexendrina Boiss, Scorzonera caespiosa Pomel, Scorzonera coronopifolia desf ,
Scorzonera fasciata pomel , Scorzonera lacinrata L, Scorzonera pygmoria S. et Sm, Scorzonera
undulata Vahl , Scorzonera undulata Ball. non Vahl, ssp alexendrina Boiss, et ssp deliciosa
Guiss arbitrant dans les zone aride, les hautes plateaux et dans le Sahara [1].
Quelques espces de scorsonre ont t employes dans la cuisine comme des lgumes ou
comme des plantes mdicinales en Europe et en Asie [2].



II.1.2 Position systmatique

Sous-embranchement : Angiosperme
Classe : Dicotyldones
Sous-classe : Gamoptales
Ordre : Asterales
Famille : Asteraceae
Genre : Scorzonera Undulata Vahl
Sous espce deliciosa
Nom Douiri : Alemen
Nom Arabe : Guiz
Nom Franais : Scorzonre feuilles ondules






Chapitre II
53

II.1.3 Synonymie du Scorzonera Undulata
Scorzonera Undulata subsp. deliciosa (Guss.) Maire
Scorzonera Undulata subsp. Undulata
Scorzonera Undulata Vahl
Scorzonera Undulata subsp. alexandrina (Boiss.) Maire
Scorzonera Undulata var. alexandrina (Boiss.) Baratte
Scorzonera Undulata var. filifolia Batt.
Scorzonera Undulata var. lancifolia Pomel
Scorzonera Undulata var. tetuanensis (Webb) Pau

II.1.4 Description de la plante Scorzonera Undulata

Plante vivace, atteignant 20 cm environ de haut. Feuilles en rosette dun vert gristre
longues, troites et bords onduls. Fleurs, toutes ligules, runies en capitules pdoncules,
pouvant mesurer plus de 5 cm de diamtre involucre bractes vertes lancoles bords
membraneux pointe recourbe, les internes plus longues que les externes. Ligules dun rose
violac, base souvent plus fonce, sommet tronqu et dent. 5 tamines anthres pour-
pres formant un tube autour de style 2 branches. Fruites; rnes allongs augettes
plusieurs. Dont 5 soies plus grand .que le reste [3].

II.1.5 Air gographique

Espce se rencontrant dans les zones arides, hautes plateaux (Algrie) et Sahara
septentrional.
Chapitre II
54


Figure [II.1] : Rpartition gographique de scorzonera Undulata.
P : prsence de scorzonera Undulata



Figure [II.2] : Photos de la plante scorzonera Undulata dans la rgion de la rcolte.


Chapitre II
55


II.1.6 Utilisation traditionnelle de Scorzonera Undulata
Rpute efficace contre les morsure de serpents, les Scorsonres tirent leur nom de celui du
symbole de la gurison, appel scorsone en Italien.
Undulata sapplique aux feuilles de lespce, tandis que la sous espce des rgions aride est
Alexandrina [3].

II.2 Travaux personnels

II.2.1 Rcolte de la plantes Scorzonera Undulata

La plante a t rcolt dans la rgion de El-Aouinet Est de lAlgrie au mois dAvril de
lanne 2006 dans une zone Aride. Elle est identifie par le Professeur Hocine Laouer
Universit de Stif. Le schage est effectu dans un endroit sec et labri des rayons solaires,
les racines ont t broyes et peses : 980 gramme.

II.2.2 Extraction des racines de Scorzonera Undulata

Nous avons vers 3500 ml Dichoromthane (DCM) sur 970 g de poudre des racines
contenue dans un bcher pendant 24 h la temprature ambiante. Cette opration a t rpte 3
fois avec le mme volume. Aprs filtration et vaporation du solvant, lextrait Dichoromthane
sec est 23g. Les CCM effectue sur lextrait dans diffrents systmes de solvants, montre que
lextrait DCM contient plusieurs tches.

II.2.3 Fractionnement et Sparation Grossire de Lextrait DCM

Cette technique est utilise la premire fois par Call et al. (1986) [4] pour obtenir un
fractionnement grossier de lextrait brut. Elle est rapide et conomique, une chromatographie de
partage avec une phase stationnaire de La silice Kieselgel Merck (70-230 mesh, 63-200 m) a
t ralis selon le principe de la chromatographie liquide sous vide. La quantit de la phase
stationnaire de gel de silice par rapport la masse dextrait tait dun facteur 1 30. L'extrait
DCM est introduite sous forme solide aprs ladsorption avec une quantit de silice de rapport 1
5 dans un entonnoir Bchner, un vide lger est cre par une pompe palet. Des mlanges de
Chapitre II
56

solvants ont t prpars de gradient de polarit croissante de Dichoromthane dans lhexane
ont t utiliss pour la sparation. Le filtrat de chaque gradient de solvants est scher.




.















Figure [II.3] : Lextraction de la plante Scorsonera Undulata.



Poudre de Racines de scorzonera undulata
970 gr
Filtration Filtrat
Rsidu
Distillation sous vide
23 gr
Extrait DCM
Macration dans le DCM
Macration dans le MeOH
54 gr
Extrait MeOH
Chapitre II
57




VLC


90Hexane 70 Hexane 50 Hexane 100 DCM 50 DCM
10 DCM 30DCM 50 DCM 50MeOH 100MeOH





Figure [II.4] : VLC de lextrait DCM.



II.2.4 tude de la fraction su14b

II.2.4.1 Colonne ouverte pour la faction SU14b

Lexamen en chromatographie sur couche mince de Gel de silice 60 F
254
Merck, 0,2
mm sur support daluminium de la fraction SU 14b. Le rvlateur avec le ractif de Godin,
compos de deux solutions A (Vanilline 1% dans lthanol) et B (solution thanolique dacide
sulfurique 10%). La plaque est chauffe longuement une temprature de 100
0
c aprs une
premire pulvrisation par la solution A puis une deuxime par la solution B, une couleur
voilette apparait dans le visible. On remarque que les tches ne sont pas visible dans la lumire
UV (254 et 365 nm) et le meilleur systme de sparation obtenue tait avec le systme de
solvant Hexane : Dichloramthane (7 :3).
Concentrt 11.5 gr
Extrait DCM
SU14a
0.01mg
SU14b
3, 57 g
SU14c
33.3 mg
SU14d
5.2g
Chapitre II
58

Le mcanisme de sparation des fractions complexes est la chromatographie sur colonne
ouverte. Le choix de taille de colonne selon la masse de la fraction est : la longueur de la
colonne est 47 cm le diamtre est 1.75 cm, la granulomtrie de la phase stationnaire est du gel
silice 40-63 m, lentassement de la colonne a commence par le dpt de la verre de laine dans
lembouchure dcoulement. Le gel de silice est moul dans solvant de dpart puis vers dans la
colonne en plusieurs fois jusqu stabilisation au niveau dsir.
Lintroduction de lchantillon est adsorb dans une quantit de gel de silice puis dpos
dans la colonne, lluant est prpar selon un gradient de polarit Hexane / Dichloromthane
(100:0 0 :100) Le fractionnement de cette colonne est rassemble dans le tableau (II.1).




















Chapitre II
59

Tableau [II.1] : Rsultats de la sparation par chromatographie sur colonne de la fraction SU14b de
Scorzonera Undulata.






















Systmes de
solvant
Volume utilis
en ml
fractions
Fraction
regroupe
Poids
gr

100% Hexane 900 f
1
-f
15
F
34
-f
41
0.001
95% Hexane
05% DCM
450 f
16
-f
27
F
42
-f
49
0.0793 SU15a
92% Hexane
08% DCM
600 f
28
-f
37
F
50
-f
56
0.6788 SU15b
90% Hexane
10% DCM
600 f
38
-f
47
F
57
-f
66
1.847 SU15c
88% Hexane
12% DCM
600 f
48
-f
55
F
67
-f
69
0.094 SU15d
87% Hexane
13% DCM
600 f
56
-f
63
F
70
-f
74
0.2766 SU15e
85% Hexane
15% DCM
600 f
64
-f
71
F
75
-f
82
0.2256 SU15f
83% Hexane
17% DCM
600 f
72
-f
81
F
83
-f
89
0.1121 SU15g
81% Hexane
19% DCM
600 f
82
-f
90
F
90
-f
98
0.1143 SU15k
79% Hexane
21% DCM
600 f
91
-f
98
f
106
-f
107
0.013 SU15l
50% Hexane
50% DCM
600 f
99
-f
107
f
109
-f
112
0.005 SU15i
100% DCM 600 f
108
-f
112
- - -
100% MeOH 600 f
113
-f
102



- - -
Chapitre II
60

II.2.5 Etude de la fraction SU15e
La fraction SU15e de masse 276.6 mg est fractionne par chromatographie sur une
colonne ouverte de gel de silice de diamtre 17.5 mm et de hauteur 470 mm la quantit de la
phase mobile est de 80 gr. Llution est effectue avec un gradient de polarit croissante
cyclohexane / tolune (90/ 10 0/ 100) puis suivi dun lavage de la colonne avec le MeOH. Le
rsultat de fractionnement de la colonne est comme suit:




Colonne ouverte

9 cyclohexane 7 cyclohexane 5 cyclohexane 100 tolune 100 MeOH
1tolune 3 tolune 5 tolune







Colonne de sephadex


Deux produits purs

Figure [II.5] : Fraction SU15e de lextrait DCM.

SU15e
F
1
F
24 F
25
F
50
F
51
F
68
F
69
F
81
F
82
F
91
F
37
F
39
F
40
F
48
F
49
F
56
F
56
F
62
F
69
F
81
F
82
F
91
SU 23a
9.8 mg
SU 23b
10.8 mg
Chapitre II
61


II.2.6 Etude de la fraction SU14d
La fraction SU14d de masse 5.2 g est soumise un fractionnement par une
chromatographie liquide sous vide (VLC) sur silice normale en utilisant un gradient dlution
hexane : Dichoromthane allant de (90:10 0:100) puis MeOH. Cette tape sest solde par
lobtention de 8 fractions (tableau II. 2).

Tableau [II.2] : Rsultats de la colonne de la fraction SU14d.















Parmi les sous-fractions recueillies, seul, la sous-fraction SU 33c et SU 33d ont t tudies
jusqu la dtermination structurale de ces principaux composs.
Les fractions SU33c et SU33d soumissent une purification sur plaques prparatives de silice
normale dans le systme dlution Hexane / Dichloromthane: 70/30 aboutit un mlange de
composs SU37a (12 mg)

II.2.6 Etude de la fraction SU15g
La fraction SU15g de masse 112.1 mg est fractionne par chromatographie sur une
colonne ouverte de gel de silice de diamtre 17.5 mm et de hauteur 470mm la quantit de la
Systmes de solvant
Volume
utilis en ml
fractions
Fraction
regroupe
Poids
mg

90% cyclohexane 10% DCM 500 1- 24 1 - 12 393
80% cyclohexane 20% DCM 500 25 40 13 - 15 194
70% cyclohexane 30% DCM 300 41 - 50 16 - 17 52.3 SU33c
50% cyclohexane 50% DCM 300 51 - 60 18 - 25 120 SU33d
100% DCM 300 61 - 77 40- 55 396
100% MeOH 200 78 - 87 56-64 344
65-70 207
71-87
485

Chapitre II
62

phase mobile est de 80gr. Llution est effectue avec un gradient de polarit croissante
cyclohexane / tolune (90 :10 0 : 100). Le rsultat de la colonne est comme suit ;

Tableau [II.3] : Rsultats de la colonne de la fraction SU15g.










II.2.7 Etude de l'extrait mthanolique (MeOH)


Les rsidus de lextrait dichloromthane subi une extraction solide-liquide par le
MeOH (3x3l) pendant 24 h. Aprs macration, filtration et vaporation du solvant sous pression
rduite et une temprature modre, on a obtenu 54 g (rdt. 5,57 %) dextrait mthanolique
.
Lextrait mthanoque est test par chromatographie sur couche mince bidimensionnelle
de polyamide DC
6
(Figure II.6) dans les systmes S.I et S.II.
- La 1
re
dimension S.I : Tolune-Mthanol-Mthyle thyle ctone (4 : 3 : 3)
- La 2
me
dimension S.II : Eau-Mthanol-Mthyle thyle ctone-Actyle actone (13 :3 :3 :1).
Le chromatogramme aprs la migration bidimensionnelle est examine sous UV 365nm puis
la plaque est pulvrise par le DBA est examine encore une fois par UV 365nm.
Le DBA est galement utilis dans la rvlation des flavonoides. Ce ractif est compos
dun mlange de (2-aminoethoxy) diphnylborane 98% dans lthanol et de polyethylne
glycol. Aprs pulvrisation la plaque est examine par UV 365nm.


Systmes de solvant
Volume
utilis en ml
fractions
Fraction
regroupe
Poids
90% cyclohexane 10% tolune 300 2- 12 7 - 17
80% cyclohexane 20% tolune 300 13 25 18 - 23
70% cyclohexane 30% tolune 300 26 - 38 24 - 28 13 mg SU28 c
50% cyclohexane 50% tolune 200 39 - 48 29 - 39
100% tolune 100 49 - 55 40- 55
Chapitre II
63






V






J
N


D
2
Figure [II.6] : CCM bidimensionnelle de polyamide DC
6
de lextrait mthanoque de S .Undulata.

X visualise sous lampe UV 365 nm. X pulvrise par le DBA
N noir ; Vn vert noir ; b bleue ; j jaune.


II.2.7.1 Chromatographie liquide haute performance (HPLC)

Lanalyse HPLC a t mene sur un systme Thermo Separation Products quip dune
pompe P-4000, dun dtecteur photodiode UV-6000LP. La colonne utilise est :
C-18 Merck Lichrospher 100 RP-18, 5 m (125, 4 mm)
Llution est ralis sur la colonne C-18 avec un gradient du systme (A) TFA 0.01% dans leau
et (B) TFA 0.01% dans lactonitrile, en commenant par un palier 30 % pendant 5 min, puis

Vn
Vn
V
B

Vn
Vn

rose

V

V

b v

Vn

Vn

B

B
D
1
Chapitre II
64

par un gradient linaire de 30 % 90% en 40 min. le dbit est de 1 ml/min ; le dtecteur PDA
balaye le domaine 200-400 nm.
Lextrait mthanoque est analys par HPLC qui donne le profil suivant :


Figures [II.7] : Profil de lextrait MeOH.


Les Figures (II.6 et II.7) montrent que les composs prsents dans le chromatogramme
bidimensionnelle et sur le profil dHPLC sont en faibles quantits.

II.2.7.1. Purification de lextrait MeOH
II.2.7.1. a. Purification par colonne
Cet extrait est soumis un fractionnement par une chromatographie sur colonne
ouverte sur sephadex LH- 20 en utilisant un gradient dlution isocratique. Le suivi des fractions
obtenues, est effectu par chromatographie sur couche mince de Gel de silice 60 F
254
Merck,
0,2 mm, Polyamide F
254
Merck, 0,15 mm et Gel de silice greffe RP-18 F
254
Merck, 0,2 mm
sur support daluminium visualis sous lumire UV (254 et 365 nm). Cette tape sest solde
par lobtention de 7 fractions. Les fractions obtenues sont tudies par Chromatographie liquide
haute performance HPLC.
Chapitre II
65


Lextrait MeOH
C C sephadex







Fraction tudie Fraction tudie

Figure [II.8] : Lextrait mthanolique sur colonne sephadex.



II.2.7.2 Etude de la fraction SU49b

La fraction SU49b (3.5 g) soumise une chromatographie sur colonne de gel de silice en
phase normale et lue avec un mlange de solvant Hexane-actate dthyle : (100-0 :0-100).
Des fractions de 25 ml sont recueillies et regroupes selon leur profil en CCM en phase normale
effectues dans le systme dlution Hexane-actate dthyle, pour donner 15 fractions. La
fraction 11 (54-62) est purifie sur une colonne sephadex LH- 20, pour conduire au compos
SU 50i (15 mg).









SU49b SU 49a
SU49c
SU49d SU49e SU49g SU49f
Chapitre II
66

Tableau [II.4] : Rsultats de la colonne de fraction SU49b.


II.2.7.3 Etude de la fraction SU50n

La fraction SU50 n (183 mg) a t purifie par MPLC, utilisant comme phase mobile un
mlange tolune:MeOH (20:80 0 :100), aboutissant 5 fractions de 70 ml chacune. La
fraction SU56c est purifie sur une colonne sephadex LH- 20, pour conduire au compos SU56c
(12.6 mg).
Systme de solvants
Volume
ml
Fraction
Remarque fractions
rgroup
Poids mg
80 hexane
20 actate dthyle
450 1-13 1-5 26
70 hexane
30 actate dthyle
450 14-26 6-7 41
50 hexane
50 actate dthyle
450 27-40 8-12 6.4
25 hexane
75 actate dthyle
450 41-50 17-21 6
100 actate dthyle 450 51-61 22-27 110
50 actate dthyle
50 MeOH
450 62-71 29-32 20
100 MeOH 500 71-79 33-40 42.5
100 isopropanol 200 80-89 41-45 43
46-48 71
50-52 21
54-62 15

63-74 183 SU50n
76-79 258
Chapitre II
67


Tableau [II.5] : Rsultats de la colonne de fraction SU49n.












I.2.7.4 Etude de la fraction SU49e
La MPLC a t la mthode de sparation prparative la plus utilise dans ce travail. La
fraction a t ralise sur une colonne Bchi de dimension : (46 x36 mm). Aprs son adsorption
sur la phase stationnaire le solut est dpos dans une colonne dintroduction, laquelle est soit
monte directement sur la colonne principale (pr-colonne) ou lie celle-ci par une tubulure.
Ces colonnes sont conues pour supporter des pressions allant jusqu 40 bars.Llution a
ncessit lutilisation de deux pompes moyenne pression Gilson 305 et 306, alors que la
dtection est ralise grce un dtecteur UV (Spectra System 2000, Thermo Separation
Products) fonctionnant deux longueurs dondes 254 et 365nm. La phase utilise pour les
tapes de purification en MPLC est la suivante : Gel de silice greffe. Llution est faite avec un
gradient du systme eau-mthanol en phase de polarit inverse. Un mlangeur Gilson 811B
permet de raliser ce gradient. Les fractions sont collectes grce un collecteur automatique
Bchi C-660 et rassembles sur la base des CCM. On obtient un compos pur aprs
purification sur une de sphadex (SU70a).

Systme de
solvants
Volume
ml
Fraction
Remarque fractions
rgroup
Poids
mg

80 tolune
20 MeOH
600 1-9 1-10 15.3
70 tolune
30 MeOH
360 10-15 11-13 5.8
60 tolune
40 MeOH
360 16-21 15-19 12.7 SU56c
50 tolune
50 MeOH
360 22-27 21-27 35.9
100 MeOH 360 28-39 28-39 74.5
Chapitre II
68



Figure [II.9] : Profil de HPLC de la fraction SU49e.
II.2.8 Dtermination des huiles essentielles dans Scorsonera Undulata
La dtermination des huiles essentielles dans les racines de Scorzonera Undulata est
effectue par entrainement la vapeur deau, dans un appareil spcial hydro distillateur, dans
des conditions bien prcises. Le distillat est recueilli dans un tube gradu, tandis que la fraction
aqueuse retourne automatiquement dans le ballon gnrateur de vapeur.

II.2.8.1 Mode opratoire
On pes 80 gr de matire vgtale Scorzonera Undulata que lon introduit dans un
dans le ballon, on ajoute 800 ml deau c.a.d chaque 1gr de matire vgtale 10 ml deau et
quelques fragments de pierre poreuse pour assurer la distribution homogne de lnergie.
. Pour rcupr lhuile (sous forme de gel) en rince le tube avec de DCM et hexane.

Tableau [II.6] : Conditions opratoires dhydrodistillation des racines de Scorzonera Undulata.





Quantit de matire vgtale 80 gr
Volume deau 800 ml
Temprature 100C
Temps dhydrodistillation 1 h
Chapitre II
69

II.2.8.2 Analyse par spectromtrie de masse
La chromatographie en phase gazeuse autorise le couplage de toute une srie de dtecteurs
diffrents qui permettent d'avoir une vision multiple d'un seul produit (Lucaccionni et al. 1993)
[6]. Le dveloppement important de la spectromtrie de masse (SM) dans l'identification des
constituants des huiles essentielles est rendu possible grce au couplage du CPG directement
la spectromtrie de masse (Garnero, 1978) [7]. Lors du couplage, la chromatographie (CPG)
permet dans un premier niveau de sparer et d'isoler chacun des constituants du mlange qui est
inject sparment dans la chambre d'ionisation de la spectromtrie de masse (deuxime
niveau). Grce cette innovation importante, la spectroscopie de masse est devenue la
technique la plus sensible pour obtenir des donnes importantes sur la structure de composs
organiques inconnus (Richard et al, 1992) [8].





















Chapitre II
70

Tableau [II.7] : Composition dhuile essentielle de Scorzonera Undulata [9-18].


Tr fid Indice fid Ref % fid
Non de compos ou principaux
fragmentations

1 15,36 1295,37 1295 0,04 (E,E)2,4-decadienal
2 16,10 1318,54 1317 0,08 Trans, trans-2,4-decadienal
3 17,53 1363,54 1367 0,04 Docanoic acid
4 20,31 1454,15 - 0,3 207,175, 150, 125, 83,55
5 20,53 1461,46 1455 0.11 Alpha humulene
6 21,02 1478 1471 0.22 Dodecanol
7 21,29 1487 1481 0.53 Ar-curumene
8 21,67 1499,43 1500 0.06 Pentadecane
9 21,86 1505,83 1500 0.06 Alpha-muurolene
10 22,53 1528 1526 0.16 Delta-cadinene
11 22,91 1540,43 1542 0.03 Alpha-calacorene
12 23,51 1560,23 1567 2.71 Dodecanoic Acid
13 24,03 1577,38 - 0.04 178, 161, 148, 129, 81, 55
14 24,47 1592,05 1593.2 0.37 1-hexadecene
15 24,711 1600 1600 0.53 Hexadecane
16 24,98 1607,73 1608 0.64 Humulene epoxyde
17 25,9 1634,12 - 0.04 204,161,119,93,83,69,55
18 26,25 1644,24 - 0.12 113, 98, 85, 69,57
19 26,3 1646,59 1649 0.12
alpha-muurolol
20 26,4 1646,62 - 0.04 207, 169, 141, 113, 85,57
21 26,77 1658,97 - 0.1 171,152,137,129,110,82,68,55
22 26,85 1661,26 - 0.17 110,137,98,57,82,69,191,163
23 27,13 1669,37 1674 0.11 Cadalene
24 27,53 1681 1686 0.12 alpha- Bisabolol
25 28,18 1699,45 1700 0.64 Heptadecane
26 28,40 1705,1 1705 0.22
Pentadecane, 2, 6, 10,14-
tetramethyl-

27 28,76 1714,19 - 0.27 180, 137, 124, 109, 82, 69, 57
28 29,01 1720,63 - 0.08
206,192,177,91,71,57
29 29,15 1724,24 1727 0.29 Methyl tetradecanoate
30 29,43 1731,12 - 0.17 175, 148, 145, 132, 119, 105, 69, 55
31 29,88 1742,56 - 0.47 216,187,161,137,110,96,86,68,57
32 30,14 1749,36 - 2.35 220, 177,137, 110, 95, 69,55
33 30,69 1763,12 1768 11.16 n-Tetradecanoic acid

34 30,84 1792,51 1795 0.22 1-octadecene
35 31,12 1800 1800 0.58 Octadecane
36 32,52 1809 1810 0.17 2, 6, 10, 14 tetramethyl Hexadecane
37 33,08 1821,82 - 0.4 213,185,141,115,97,82,67,57
Chapitre II
71
























II.2.9 Activit antioxydante

But : Dtermination in vitro du pouvoir antioxydant dextraits DCM et mthanolique de la
plante Scorzonera Undulata par la rduction du radical organique DPPH.

Principe :
La mthode de mesure du pouvoir antioxydant par le DPPH repose sur la capacit dun
compos rduire le DPPH [19]:

38 34,06 1844,36 1845 1.07 6, 10,14-Trimethyl-2-pentadecanone

39 34,67 1858,52 1856 1.46 Pentadecanoic acid

40 35,12 1868,77 1863.8 1.38
1,2 benzenedicarboxylic acid, bis(2-
methylpropyl) ester

41 36,45 1899,56 1900 0.46 Nonadecane
42 36,69 1904,69 1895 0.28 11-hexadecenoic acid, methyl ester
43 36,99 1911,21 - 0.07 257, 216, 187, 161, 131, 105, 81, 55
44 37,11 1913,89 - 0.28 236,194,152,125,111,96,83,55
45 37,16 1915,04 - 0.15 249, 223, 192, 149,104, 57
46 37,66 1925,89 1929 2.32 Hexadecanoic acide methyl ester

47 38,34 1940,5 1945 4.38 9-hexadecenoic acide
48 38,72 1948,70 1953 0.11 11-hexadecenoic acide

49 39,68 1969,50 1975 42.19 Hexadecanoic acid

50 40,76 1992,96 - 0.13 256, 213, 185, 157, 129, 111, 83, 55
51 41,05 1999,24 2000 0.22 Eicosane
52 43,92 2060,042 2065 0.11 Heptadecanoic acid

53 45,52 2093,96 2095,2 0.66
9,12- octadecdienoic acid, methyl
ester

54 45,83 2100,63 2092 1.31 9-octadecenoic acid, methyl ester
55 47,28 2137,14 2135 1.7
9.12-octadecdienoic acid,(Z,Z),
methyl ester
56 47,59 2144,87 2143.9 7.72 9-octadecenoic acid

57 48,48 2167,35 - 0.31
284, 241, 213, 185, 157, 129,106, 83,
55
58 50,46 2226,83 - 0.04
281, 256, 233, 207,165, 137, 109, 82,
55
59 52,35 2299,65 2300 0.13 Tricosane
60 56,03 2499,11 2500 0.16 Pentadecane
Chapitre II
72



La rduction se traduit par un changement de couleur de la solution qui vire du violet au
jaune. La raction est alors quantifie en mesurant labsorbance de la solution par
spectrophotomtrie 515 nm. Chaque compos antioxydant ragit avec le DPPH (1,1-diphenyl-
2-picryl-hydrayl) selon une cintique qui lui est propre.
Un test est ralis avec un chantillon de la solution antioxydante des dilutions
diffrentes. A laide de lappareil : thermo electron multiskan et le logiciel Ascent Software,
labsorbance est mesure 515 nm toutes les minutes jusqu atteindre un plateau.
On dtermine alors par lecture graphique la quantit doxydant /mg DPPH ncessaire pour
dgrader 50% du DPPH soit IC
50
ainsi que le pouvoir anti radicalaire (Anti Radical Power :
ARP).

II.2.9.1 Technique

Matriel :

Microplaque avec 96 puits
Appareil Multiskan Ex (Thermo electron corporation)
Logiciel : Ascent Software 2.6
Essai effectu 1 fois dabord pour savoir si lchantillon rpond au test ; puis si rponse
positive, effectuer le test 2 ou 3 fois sur le mme chantillon.
Echantillons tester : peser environ exactement 10 mg de lchantillon tester dans 1 mL de
mthanol (solution mre E1) ; vrifier la dissolution.
Exprience effectue sur 6 concentrations diffrentes de lchantillon en ordre dcroissant,
dilus dans le mthanol :
c'est--dire partir de la solution mre (E
1
) effectuer une dilution au (soit E
2
au 1/2), puis
de E
2
effectuer une dilution au (soit E
3
au 1/4),
puis de E
3
effectuer une solution au 1/2 (soit E
4
au 1/8),
puis de E
4
une dilution au 1/2 (soit E
5
au 1/16),
puis de E
5
une dilution au 1/2 (soit E
6
au 1/32).
DPPH + AH DPPH H + A
Chapitre II
73

Tmoin 100% DPPH dans le mthanol (environ exactement 4 mg de DPPH dans 50 mL de
mthanol) ; prparer extemporanment.

Blanc ractif : 100% de mthanol
Tmoin Trolox : peser environ exactement 50 mg dans 10 mL de mthanol.
Effectuer les dilutions au , , 1/8, 1/16, 1/32 comme pour les essais.
Tmoin Acide chlorognique : peser environ exactement 10 mg dans 10 mL de mthanol
Effectuer les dilutions au , , 1/8, 1/16, 1/32 comme pour les essais.
Prparer la feuille de route ci-jointe.
Remplir la microplaque 96 puits selon le tableau
Lecture 515 nm en effectuant une cintique durant 45 minutes environ jusqu stabilisation
de la raction, lecture toutes les 10 secondes.


II.2.9.2 Rsultats

Tracer la courbe de la cintique de la disparition du DPPH en prsence de lchantillon
tester en fonction du temps pour dterminer le temps de stabilisation de la raction et pouvoir
effectuer la lecture de labsorbance du produit.
Convertir les mesures dabsorbance en % DPPH restant
Tracer la courbe % DPPH restant en fonction da la quantit de lchantillon antioxydant/mole
DPPH ou mg DPPH
a. Dterminer par lecture graphique la quantit dantioxydant/mole DPPH ncessaire pour
dgrader 50% de DPPH soit IC
50
exprime en mg/mg de DPPH
A. Calcul du pouvoir antiradicalaire (AntiRadical Power = ARP)

ARP=1/IC
50
Remarque : on peut calculer IC
50
en mg/ml dantioxydant en faisant alors le calcul inverse.

B. [DPPH dans lessai]
[DPPH] en mg/mL (peser environ 4 mg dans 50 mL de mthanol)
Soit PE : 200L et volume final 220L
Chapitre II
74

[DPPH dans lessai] =
[DPPH] en mg/mg * 200
220
=
[DPPH] en mg/mg
1,1


C. [essai tester]
Soit x mg dantioxydant tester dilu dans y mL de mthanol et on effectue 5 dilutions
dcroissantes de cette solution
PE 20L et volume final 220L
[Solution tester] =
[solution dans la fiole] en mg/mL * 20
220
=
[solution dans la fiole] en mg/mL
11

[essai 1]
[DPPH]
=
[solution dans la fiole] en mg/mL * 0,1
[DPPH]


Absorbance DPPH restant en =
moyenne des absorbances de lessai [1] blanc ractif * 100
moyenne des absorbances du 100% DPPH blanc ractif dans le milieu ractionnel
%

Tableau [II. 8] : Rsultats activit antioxydante dextrait DCM








Pese en mg Dissous dans x ml Mg /ml, ou g/ l
10.16 1 10.16
1 2 3 4 5 6
Quantit doxydant teste / fiole 10.16 5.08 2.54 1.27 1 0
[essai 1] / [DPPH] 9.86 4.93 2.47 1.23 0.62 0.31 0
0.514 0.725 0.893 1.015 1.117 1.164
Moyenne des absorbances Iues 0.514 0.725 0.893 1.015 1.117 1.164
Moyenne Blanc Ractif 0.480 0.691 0.859 0.981 1.083 1.130
Absorbance DPPH restant en % 48.37 69.63 86.56 98.86 109.14 113.87 100
Chapitre II
75

.

Figure [II.10] : Evaluation de lactivit antioxydante des dextrait DCM.

Tableau [II.9] : Rsultats activit antioxydante dextrait mthanolique.


Figure [II.11] : Evaluation de lactivit antioxydante des dextrait mthanolique.

Pese en mg Dissous dans x ml Mg /ml, ou g/ l
13 1 13
1 2 3 4 5 6
Quantit doxydant teste fiole 13 6.5 3.25 1.625 1 0
[essai 1] / [DPPH] 12 ,62 6.31 3.16 1.58 0.79 0.39 0
0.131 0.123 0.109 0.109 0.334 0.659
0.143 0.119 0.108 0.103 0.465 0.67
Moyenne des absorbances Iues 0.137 0.121 0.109 0.106 0.400 0.665
Moyenne Blanc Ractif 0.103 0.087 0.075 0.072 0.366 0.631
Absorbance DPPH restant en % 10.38 8.77 7.51 7.26 36.83 63.54 100
Chapitre II
76

II.2.10 Activit antimicrobienne

II.2.10.1 prparation des dilutions des huiles essentielles

Aprs extraction de lHE par hydrodistillation, on prpare plusieurs dilution 1/2 , 1/4
, 1/8, 1/16, pour avoir 4 concentrations.

II.2.10.2 Ensemencement de la souche bactrienne
La souche Escherichia coli fournie par le laboratoire de bactriologie de lhpital Ain
Beida a t ensemence dans un bouillon nutritif dans ltuve 37
0
C pendant 18 h, avant de
lutiliser pour lactivit antibactrienne.

II.2.10.3 Teste de lactivit inhibitrice
a. Culture de la bactrie
On prend quelques gouttes du bouillon nutritif contenant la souche bactrienne laide
dune pipette pasteur, puis on les met sur glose nutritive dans une boite de ptri, on agite
lgrement pour favoriser une bonne rpartition du bouillon nutritif.

b. Application des disques
Dans chaque concentration des huiles, un disque strilis a t tromp jusqu' saturation.
Puis les quatre disques diffrentes concentrations ont t placs sur la boite de ptri ce dernier
est mise 37
o
C pendant 18 h.

c. La lecture
La lecture se fait en mesurant le diamtre dinhibition en millimtre, ce diamtre
dtermine lefficacit de la matire active.

Chapitre II
77


Escherichia coli
Figure [II.12] : La zone dinhibition est trs claire dans les concentrations.

d. Rsultats
1/2 : diamtre dinhibition est de 1,6 cm
1/4 : diamtre est de 1,3 cm
1/8: diamtre est de 1,1 cm
1/16: pas dinhibition













1/2
1/4
1/8 1/16
Chapitre II
78

Rfrence
1. Quezel P., Santa S. (1963): Nouvelle flore de lAlgrie et des rgions dsertiques
mridionales, Tome II. Edition CNRS, Paris.

2. Zidorn C., Ellmerer-Mller E. P., Sturm M. and Stuppner H. (2003): Tyrolobibenzyls E and F
from Scorzonera humilis and distribution of caffeic acid derivatives, lignans and
tyrolobibenzyls in European taxa of the subtribe Scorzonerinae (Lactuceae, Asteraceae).
Phytochemistry 63, 6167.
3. Beniston W. S. (1984): Fleurs dAlgrie. Edition 1822 / 84.
4. Coll J.C,. & Bowden B.F. (1986): The application of vacuum liquid chromatography to the
separation of terpene mixtures. J. Nat. Prod 49 (5), 934-936.

5. Lucaccioni F., Deneyer R., et Tilquin B. (1993): Pour une analyse des huiles essentielles.
Chimie nouvelle 11(43), 1253-1257.

6. Garnero J. (1978): L'volution des mthodes et techniques d'analyse dans l'tude de la
composition chimique des huiles essentielles. Labo-pharma Problmes et Techniques n277.

7. Richard H., et Multon J. L. (1992): Les armes alimentaires. Tec & Doc. Lavoisier
Paris. 439 p.
8. Ying-Xu Z., Chen-Xi Z., Yi-Zeng L., Hong Y., Hong-Zhuang F., Lun-Zhao Y., Zhong-Da Z.
(2007): Comparative analysis of volatile components from Clem. Analytica Chimica Acta 595,
328339.

9. Vasiliki S., Nikos D., Zacharias K., Helen D. S. (2006): Analysis of the essential oil
composition of eight Anthemis species from Greece. Journal of Chromatography A 1104,
313322.

10. Andrija S., Michael S., Axel P. L., Zaklina S., Nils R. (2007): Essential oil composition of
Hypericum L. species from Southeastern Serbia and their chemotaxonomy. Biochemical
Systematics and Ecology 35, 99-113.

11. Sanja C., Milka M., Marija Edita ., Anesa Jerkovic-M., Renata B. (2008): Chemical
composition and antioxidant and antimicrobial activity of two Satureja essential oils. Food
Chemistry 111, 648653.

12. Costas D., Dimitra A., Dimitrios P. (2002): A comparative study of the essential oils of Cistus
salviifolius in several populations of Crete (Greece). Biochemical Systematics and Ecology
30, 651665.

13. Tognolini M., Barocelli E., Ballabeni V., Bruni R., Bianchi A., Chiavarini M., Impicciatore M.
(2006) : Comparative screening of plant essential oils: Phenylpropanoid moiety as basic core
for antiplatelet activity. Life Sciences 78, 1419 1432.

Chapitre II
79

14. tMark T. R., Jean-Pierre D., Alastair C. L. (2004): Application of comprehensive
multidimensional gas chromatography combined with time-of-flight mass spectrometry
(GC6GC-TOFMS) for high resolution analysis of hop essential oil. J. Sep. Sci. 27, 473478.

15. Christos L., Hocine L, Nacira B., Olga G., and Ioanna C. (2007): Chemical Composition and
Antimicrobial Activity of the Essential Oil of Algerian Phlomis bovei De No subsp. Bovei.
Molecules 12, 772-781.
16. Diana A., Olga G., Iciar A., Jose B. (2001): Analysis of volatile compounds by GC-MS of a
dry fermented sausage: chorizo de Pamplona. Food Research International 34, 67-75.

17. Federica M., Filomena C., Daniela R., Carmen F., Franco P., Felice S. (2008): Phytochemical
composition, anti-inflammatory and antitumor activities of four Teucrium essential oils from
Greece. j.foodchem. 12.067.
18. Javidnia K., Miri R., Mehregan I., and Sadeghpour H. ( 2005): Volatile constituents of the
essential oil of Nepeta ucrainica L. ssp. kopetdaghensis from Iran. Flavour Fragr. J 20,
219221.

19. Brand-Williams W., Cuvelier M.E., and Berset C. (1995): Use of a free radical. Method to
evaluate antioxidant activity. Lebensm.-Wiss. U. Technol., 28, 25-30.




















Chapitre III
Chapitre III
80

III. Dtermination structurale des composs isols
Appareillages
1. Spectromtrie de masse :
Les spectres de masse haute rsolution en ionisation chimique (CI) ont t raliss
sur un spectromtre Thermo-Finnigan Mat 95XL, alors que les spectres de masse basse
rsolution et en mode lectrospray (ESI) sont enregistrs sur un spectromtre trap dion
Thermo LCQ Advantage.
2. Spectroscopie de RMN :
Les spectres RMN ont t enregistrs sur les spectromtres Bruker soit DRX 500 ou
DRX 300 MHz pour
1
H et 125 ou 75 pour
13
C, respectivement. Les solvants deutrs
utiliss sont prciss, selon la solubilit des composs. Les donnes sont traites laide du
logiciel WIN-NMR.

3. Spectromtrie UV-Visible
Les spectres UV-visible des composs isols sont enregistrs dans le MeOH sur un
spectrophotomtre Shimadzu UV-1240.






















Chapitre III
81

III.1 Le compos SU23a

3
1
5
8
12
15
17
19
21
24 23
25
27
28
29
30
O
O
1
,
2
,
26


Figure [III.1] : Actate de -amyrine (Olan-12-n-3-ol, actate).

Il sagit dun triterpne pentacyclique acyl squelette amyrine appel galement
12-olann-3-yl actate. Compos rpandu dans le rgne vgtal, il a t isol notamment
de Cynanchum thesioides [1].
Sa formule brute C
32
H
52
O
2
a t dduite du spectre de masse enregistr en mode
(EI
+
). Il montre un pic m/z 468, correspondant au poids molculaire de lactate de -
amyrine (figure III.2).



Figure [III.2] : Spectre de masse du compos SU23a.
Chapitre III
82

Ce spectre est en accord avec les donnes de la banque de donnes interroge (figure
III.3). Par ailleurs, on y retrouve les fragments caractristiques et dcrits dans la littrature
(figure III.4) [2].



Figure [III.3] : Spectre de masse de lactate de -amyrine (spectre de la banque de donnes).





Chapitre III
83



H
3
COO

m/z 468 m/z 408



E
D
C

-
E
D
C
+

m/z 218 m/z 203



-
E
D
C
+

m/z 189

Figure [III.4] : Les principales fragmentations dactate de -amyrine [2].

Le spectre RMN
13
C (figure III.5) du produit SU23a montre dans la rgion
blinde , 8 signaux entre 15.7 et 28.7 ppm correspondant aux huit mthyles angulaires
dun squelette triterpnique pentacyclique et dans la rgion dblinde , trois signaux
[- OOCH
3
]
Chapitre III
84

rsonnant 124,3, 139,6 et 171,0 ppm attribuables respectivement un carbone thylnique
(CH) et deux carbones quaternaires.


Figure [III.5] : Spectre de RMN
13
C (CDCl
3
, 75 MHz) du compos SU23a.

C-
,
1
C-13
C-12
C-3
Chapitre III
85


Figure [III.6] : Spectre de DEPT135 du compos SU23a.
Le spectre RMN
1
H (figure III.7) prsente champ fort huit signaux singulets
fins attribuables aux groupements mthyles rsonant 0.87 (3H, s, H-23), 0.88 (3H, s,
H-24), 0.98 (3H, s, H-25), 1.01 (3H, s, H-26), 1.07 (3H, s, H-27), 0.80 (3H, s, H-28), 0.80
(3H, s, H-29), 0.91 (3H, s, H-30) et un massif de protons rsonant entre 0.91 1.90 ppm
correspondant aux -CH et -CH
2
des cinq cycles. Il montre aussi champ faible, deux
signaux rsonant sous forme de triplet 5.12 et multiplet 4.4 ppm, correspondant
respectivement un proton de type oxymthine (H-3) et un proton thylnique. La valeur
du dplacement chimique de H-3 suggre une acylation au niveau du carbone C-3, plus
prcisment par un groupement CH
3
CO au regard dun signal singulet dintgration 3H
rsonant 2.05 ppm. Lexprience HSQC permet didentifier les carbones qui les portent
(figure III.11). Ils rsonnent respectivement 80.9 (C-3) et 124.3 ppm. La multiplicit de
H-12 (t, J= 3.57 Hz).

8 mthyles
C-2
,
C-12
C-3
10 mthylnes
Chapitre III
86


Figure [III.7] : Spectre de
1
H-RMN (CDCl
3
, 300 MHz) du compos SU23a.

Llucidation structurale du compos est initie partir dun carbone bien
identifiable tel que C-3. Ce dernier prsente en HMBC (figure III.8a-b), des corrlations
avec les protons H-1 ( 1.64-1.90), H-2 ( 1.60-1.63), H-5 ( 0.83), les protons des
groupements mthyles Me-23 ( 0.88) et Me-24 ( 0.87) ainsi quavec les protons du
groupement actoxy CH
3
COO rsonant 2.05 ppm li au carbone C-3. Le proton H-3
corrle avec les carbones C-2 ( 23.6), C-23 ( 28.1), C-24 ( 16.7) et un carbone
quaternaire fortement dblind rsonant 171,0 ppm attribuable au carbonyle du
groupement acyle Me-CO.

H-12
CH
3
CO
H-3
8 mthyles
Chapitre III
87


Figure [III.8a] : Spectre HMBC du compos SU23a.


O
O
H
3
C
H
CH
3
H
3
C
CH
3
H
CH
3
H
3
C
CH
3
H
CH
3
H

Figure [III.9] : Principales corrlations HMBC du compos SU23a.


H-3 :C1
,

CH
3
CO : 1
,

H-12 : C-18
H-12 : C-8
H-12 : C-9
H-27 : C13 H-11 : C13
Chapitre III
88


Figure [III.8b] : Agrandissement du spectre HMBC du compos SU23a.


Lexprience de corrlation COSY
1
H-
1
H (figure III.10) montre les couplages entre
le proton H-9 et les protons H-11 ( 1.55-1.90). Ces derniers corrlent leur tour avec un
proton dblind rsonant 5.12 ppm qui ne peut tre que le proton thylnique H-12 port
par le carbone C-12 rsonant 124.3 ppm daprs le spectre HSQC (figure III.11). Le
deuxime carbone thylnique C-13 est repr 139.6 ppm en vertu de sa corrlation
HMBC avec les protons du groupement mthyle Me-27 ( 1.07). Ces derniers corrlent
avec les carbones quaternaires C-8 ( 41.5) et C-13 ( 139.6), C-14 ( 42.1) et carbone
mthylnique C-15 ( 26.6). La double liaison se trouve ainsi localise en
12-13
, suggrant
en consquence quon est en prsence dun triterpne pentacyclique squelette amyrine.
.

H-23: C-3/ H-24:C-3
H-28: C-18
H-25 : C-9 /H-26 : C-9
H-23: C-4/ H-24:C-4
Chapitre III
89


Figure [III.10] : Spectre COSY du compos SU23a.


Figure [III.11] : Les principales corrlations HSQC du compos SU23a.

H-11 ; H-12
H-12 : C-12
H-3 : C-3
H-2
,
:C-2
,

H-2 : H-3
H-9 : H-11
Chapitre III
90

Tableau [III.1] : Donnes spectrales du compos SU23a









Position

H m J Hz C
1 1 .64 - 1.90 m 38.4
2 1.60 - 1.63 m 23.6
3 4.5 m 80.9
4 - 37.7
5 0.83 m 55.2
6 1.52 m 18.2
7 1.56 -1.37 m 32.8
8 - 41.5
9 1.55 m 47.6
10 - 36.8
11 1.90 - 2.00 m 28.1
12 5.12 t 3.57 124.3
13 - 139.6
14 - 42.1
15 0.92 m 26.6
16 1.261 m 31.2
17 - 40,0
18 1.32 m 59,0
19 0.92 m 28.1
20 - 33.7
21 0.91 m 39.6
22 1.32 m 39.6
23 0.88 s 28.1
24 0.87 s 16.7
25 0.98 s 15.7
26 1.01 s 16.8
27 1.07 s 23.2
28 0.8 s 17.5
29 0.8 s 28.7
30 0.91 s 21.3
1
,
- 171
2
,
2.04 s 21.3
Chapitre III
91

III.2 Identification du mlange SU 37a

Isol sous forme de poudre blanche, SU37a absorbe peu sous UV 254 nm et
366 nm ; sur CCM, il se colore en violette aprs rvlation la vanilline sulfurique et
chauffage. On observe un R
f
de 0,45 dans un systme hexane : dichloromthane (70:30)
sur silice normale.
Le spectre de masse (figure III-12 III.14) ralis en impact lectronique (EI +
VE+ LMR) donne les fragments suivants qui caractrisent un mlange compos du :
- Sitosterol avec : (m/z) : 414 (M
+
), 396, 329, 303, 255 (figure III.13).
et
- Stigmasterol, dont les fragmentations principales sont : (m/z) : 412 (M
+
), 396, 351, 327,
300, 271, 255, 231 (figure III.14).


Figure [III.12] : Spectre de masse du SU37a.

Chapitre III
92



Figure [III.13] : Spectre de masse du compos -sitostrol.

Figure [III.14] : Spectre de masse du compos Stigmastrol.
Chapitre III
93

Le spectre RMN du proton
1
H (CDCl
3
, 300 MHz) (figure III.16) prsente des
signaux allant de 0.68 5.3 ppm. On peut distinguer une srie de pics trs denses dans
lintervalle 0.68 ppm 2.28 ppm. Ceci signe la prsence de protons aliphatiques. Ce spectre
est caractristique des drivs strodiques. Un multiplet observ 3.53 ppm correspondant
un proton port par un carbone en alpha dun groupement hydroxyle. Le signal 5.11
ppm et 5.14 ppm, correspondant aux dplacements chimiques des protons thylniques.
Dautre part, nous identifions un doublet thylnique 5.35 ppm.
La comparaison avec les bases de donnes de la littrature (bases de donnes
Sigma-Aldrich) (figure III.17 et III.18) nous oriente vers les phytostrols. Du fait des
thylniques prsents, notre attention se porte plus particulirement vers le stigmastrol et
le -sitostrol. .
HO 3 5
7
11
15
19
18
17
20
21
23
10

HO 3
5
7
10
11
15
17
20
19
18
21
23

-sitostrol Stigmastrol
Figure [III.15] : Structures du mlange SU37a.

Figure [III.16] : Spectre
1
H-RMN (CDCl
3
, 300 MHz) du SU37a.
Chapitre III
94


Figure [III.17] : Spectre
1
H-RMN (CDCl
3
, 300 MHz) du -sitostrol.
(Source : www.sigmaaldrich.com)


Figure [III.18] : Spectre
1
H-RMN (CDCl
3
, 300 MHz) du stigmastrol.
(Source : www.sigmaaldrich.com)

Ainsi, le mlange SU37a est constitu de -sitostrol et de stigmastrol. Ces
composs font partie des strols largement rpandus dans le rgne vgtal, et ont dj t
mentionns notamment dans les parties ariennes (feuilles et tiges) de Mirabilis jalapa
Linn. [3]; et galement dans les racines o les auteurs dcrivent un mlange identique
celui dcrit dans notre tude [4].



Chapitre III
95

III.3 Interprtation de produit SU50 i
O
O
2
3
4
4a
8a
3
,
1
,
H
H
H
2
,
OH
HO
7
OCH
3
4
,
5
,
6
,
H
5
6
OCH
3
8
H
H

Figure [III.19] : (Galangustin) (Isoscutellarein-8,4
'
-dimthyle ther).

Le compos SU50i se prsente sous forme de laine de verre jaune. Il a t isol
notamment de G. angustifolia [5].

Tableau [III.2] : Donnes spectrales du compos SU50i.








Le spectre dabsorption UV-visible montrait un maximum 275.5 nm relatif la
bande II, autre 319.5nm, relatif la bande I. La valeur du maximum d'adsorption de la
bande I 319.5 nm du spectre UV-visible enregistr dans le mthanol montre qu'on est en
prsence d'un proton en position 3 quil sagit dun flavonode de type flavone [6].
Ractif Bande II Bande I
MeOH 275.5 296.5 - 319.5 359.5 -
MeOH + NaOH
211 284 302 374 - -
AlCl
3
283 308 - 343 397 -
AlCl
3
+ HCl 282.5 307 .5 - 340.5 395.5 -
NaOAc 276 284 302 346 - -
NaOAc
+H
3
BO
3

276 - 300 320 349 450
Chapitre III
96

Le spectre mthanol en prsence de AlCl
3
prsente un dplacement bathochrome de
la bande I par rapport au spectre mthanol neutre de 40 nm ce qui montre la prsence de
l'hydroxyle libre en position 5. Le spectre AlCl
3
+ HCl ne s'accompagne pas d'un effet
hypsochrome de la bande I par rapport au spectre AlCl
3
ce qui milite pour labsence d'un
systme orthodihydroxyl sur les noyaux A et B.
Le spectre mthanol aprs addition de NaOAc prsente un dplacement de la bande
II par rapport au spectre mthanol (8.5 nm) ce qui montre la substitution de la position 7.
Le spectre mthanol aprs addition de NaOH prsente un dplacement bathochrome
de la bande I par rapport au spectre mthanol (54.5 nm) avec diminution de la densit
optique ce qui montre la substitution de la position 4'.






MeOH
MeOH + NaOAc
AlCl
3

AlCl
3
+ HCl
Chapitre III
97


Figure [III.20] : Spectres UV avec les ractifs de dplacement du compos SU50i.


Cest grce aux donns spectrales RMN du
1
H et du
13
C, (tableau III.3), que lon
peut confirmer que le compos SU50 i est un flavonode. Cette molcule a un spectre RMN
1
H (300 Hz dans le DMSO-d
6
) (figure III.21) qui comporte un signal 6.28 (1H, s) qui est
caractristique dun proton aromatique. Il correspond H-6 du cycle A du noyau de base
des flavonodes. La substitution du noyau B est indique par la prsence de deux couples de
doublets couplant en position ortho 7.98 (d, J = 8.9 Hz) et 7.98 (d, J = 8.9 Hz) pour H-2
et H-6, et 7.10 (d, J = 8.9 Hz) et 7.1 (d, J = 8.9 Hz) pour H-3 et H-5. Un signal 6,85
ppm (1H, s) correspond au H-3 du cycle C. On observe aussi un signal sous forme de
singulet 3,84 ppm (intgration pour 6 protons), correspondant deux groupements
mthoxyle. Par ailleurs, on observe un signal dblind rsonant 12.58 ppm sous forme
dun singulet : ceci est caractristique dune fonction OH-C
5
en position 5, au voisinage (en
) dun groupement carbonyle.

MeOH + NaOH
5 min aprs
MeOH + NaOAc
+ H
3
BO
3

Chapitre III
98


Figure [III.21] : Spectre de
1
H-RMN (DMSO-d
6
,

300 Hz) du compos SU50i.



Le spectre RMN du
13
C (DMSO-d
6,
75 MHz) (figure III.22), indique la prsence
de 17 carbones. Parmi ceux-ci, nous distinguons neuf carbones quaternaires dont un
groupement carbonyle ( C 181.9 ppm), le carbone-3 caractristique dun flavone ( C
103.3 ppm), et cinq CH aromatiques 99.0 ; 128.2 ; 2114.7 et 128.2 .La prsence
de deux groupements mthoxyles est confirme par les carbones situs 55.5 et 61.0
ppm [7]. La formule brute est dtermine comme tant C
17
H
14
O
6
.
OH-C
5

2OMe
H-6
H-3
H-2
/
/6
/
H-3
/
/5
/
Chapitre III
99



Figure [III.22] : Spectre de
13
C-RMN (DMSO-d
6
, 75 MHz) du compos SU50i.

Ainsi, lensemble des donnes UV-visible et RMN permettent de dfinir le
compos SU 50i comme tant lisoscutellarine. Ce compos fait partie des flavonodes trs
rarement rpandus dans le rgne vgtal, et a dj t mentionn notamment dans les
parties ariennes de G. angustifolia [5].






solvant
OMe
OMe
C-4
C-2
C-4
/
C-7 C-5
C-8a
C-2
/
/6
,

C-8
C-1
/
C-3
/
/5
,

C-4a

C-3

C-6

Chapitre III
100


Tableau [III.3] : Donnes spectrales du compos SU50i.










Position
1
H, (ppm), m J (Hz)
13
C, (ppm)
2 - - 163.1
3 6.85 s - 103.3
4 - - 181.9
5 12.58 OH-C
5
- 156.2
6 6.28 s - 99
7 - - 157.1
8 - - 127.7
8a - - 149.5
4a - - 103.5
1
,
- - 122.9
2
,
7.98 d 8.9 128.2
3
,
7.1d 8.9 114.7
4
,
- - 162.3
5
,
7.1d 8.9 114.7
6
,
7.98 d 8.9 128.2
OMe-C8 3.84 - 60
OMe-C-4
,
3.84 - 55.6
Chapitre III
101

III.4 Interprtation de compos SU56c

O O
H
H H
H
O
O
H
OH
HO
HO
HO
H
H
H
H
HO
2
3
4
4 a
5
6
7
8
1
, 2
,
3
,
5
,
6
,
4
,
8 a

Figure [III.23] : Cichoriine (esculoside-7-O--D-glucoside) (2H-1-Benzopyran-2- (-D-
glucopyranosyloxy)-6-hydroxy).

Tableau [III.4] : Donnes des spectres UV avec les ractifs de dplacement du compos
SU56c.
















Le compos SU56c se prsente sous forme dune poudre blanche. Le spectre
dabsorption UV dans le mthanol (figure III.24) montre quatre maxima 226.5, 257.5,
287.5 et 346.6 nm caractristiques d'une coumarine [8].
Me OH 226.5 257 287.5 339.5
MeOH + AlCl
3
226.5 257.5 288.5 346.6
Me OH +
AlCl
3
+ HCl
226.5 - 289.5 340.5
Me OH +
NaOH
215 246.0 273.5 302 384.5
Me OH +
NaOH + 5
,
215 - 273.5 302 385
MeOH +
actate de Na
214.5 246.5 281.5 346.5
Me OH +
actate de Na
+ H
3
BO
3

216 257 286 343
Chapitre III
102




Figure [III.24] : Spectres UV-visible du compos SU56c.
Chapitre III
103


Figure [III.25] : Spectre de
1
H-RMN (500 Hz, DMSO-d
6
) du compos SU56c.


Le spectre RMN
1
H (500 Hz, DMSO-d
6
) (figure III.25) permet de mettre en
vidence la prsence de deux signaux qui apparaissent 7.90 ppm (1H, d, J = 9.9 Hz) et
6.28 ppm (1H, d, J = 8.8 Hz) sont attribus aux protons du cycle pyranne H-4 et H-3. Deux
autres signaux 7.08 ppm (1H, s) et 7.12 ppm (1H, s) correspondent aux protons du cycle
aromatique, H-5 et H-8. Ceci est confirm par les rsultats de lexprience COSY (figure
III.28) qui reprsente les points de corrlations entre les protons H-4 (7.90 ppm) et H-3
(6.28 ppm). La partie osidique est reprsente par le pic anomrique rsonant 4,92 ppm
avec une constante de couplage de 7,2 Hz : ceci montre que le sucre est de configuration .
Le proton H-2 (3,32 ppm) est localis grce la corrlation avec H-1 (4,92 ppm).
Protons de Sucre
H-4
H-5
H-8
H-3
H-1
,

Chapitre III
104


Figure [III.26] : Spectre de carbone (DMSO-d
6
, 75 MHz) du compos SU56c.

Lanalyse de spectre RMN
13
C (DMSO-d
6,
75 MHz) (figure III.26) rvle la prsence
de quinze atomes de carbone dans la structure du compos SU56c. L'analyse du spectre
DEPT 135 (figure III.27) a fourni plus d'indications, parmi ces atomes de carbone : on
dnombre un CH
2
et, par dduction, sept carbones quaternaires. On y observe galement un
signal 143.6 relatif au groupement hydroxyle lie au carbone 6.
Le spectre RMN
13
C montre bien la prsence du sucre dont la majorit des carbones
rsonnent entre 60.8 et 101.0 ppm, correspondant au carbone anomrique C1'. Le proton
anomrique corrle avec ce carbone sur le spectre HSQC (figure III.29).

C-2
C-6
C-8
Sucre C-7
C-8a
c-4
O-Sucre
Chapitre III
105


Figure [III.27] : Spectre de DEPT 135 du compose SU56c.

La ralisation de lexprience HSQC (figure III.29) a conduit ltablissement des
connections gminales
1
H-
13
C (
1
J
C-H
). Il a pu tre dmontr que les protons localiss
7.90, 7.08, 7.12 et 4.92 taient lis aux carbones respectivement situs 144.3, 112.7,
103.4 et 101.0.

6
,

C-5
C-3
C-4
C-8
C-1
,

C-1
,

C-3
,

C-5
,

C-2
,

C-4
,

Chapitre III
106


Figure [III.28] : Spectre COSY
1
H-
1
H du compos SU56c.


Figure [III.29] : Spectre HSQC du compos SU56c.


H3 :H4
H-5 : C-5
H-1
,
: C-1
,

H-4 : C-4
H1
,
:H2
,,

H-8 : C-8
Chapitre III
107

Lenregistrement du spectre HMBC (observation des corrlations htronuclaires
longue distance (
2
J
C-H
et
3
J
C-H
)) (figure III.30) a montr les corrlations entre les protons
rsonant 4.92 ppm et le carbone situ 148.8 ppm. Cette exprience a montr aussi des
crtes de corrlation entre le carbone rsonant 160.7 ppm et le proton 7.90 ppm. Pour
confirmer la position de sucre, lexprience nOe diffrentielle (figure III.31) a montr le
couplage entre le proton anomrique (4.93 ppm) et proton 7.12 ppm (H-8).


Figure [III.30] : Spectre HMBC du compos SU56c.






H-4

: C-2
H-1
,
: C-7
H-3

: C-2
H-4

: C-3
H-5
,
: C-3
H-1
,
: C-3
,

Chapitre III
108


Figure [III.31] : nOe diffrentielle du compos SU56c.













Couplage entre le proton H-8 : H-1
,

Chapitre III
109

Tableau [III.5] : Donnes spectrales du compos du compos SU56c.


























Position
1
H J
13
C COSY HMBC
1 - - - - -
2 - - 160.7 - -
3 6.28 d 9.8 113.5 - -
4 7.90 d 9.8 144.3 6,28-7.90 103.4 112.7 147.8 160.7
4a - - 113.0 - -
5 7.08 s - 112.7 - 113.0 143.6 148.8 -160.7
6 - - 143.6 - -
7 - - 148.8 - -
8 7.12 s - 103.4 3.45 - 6.28 113.0 143.6 147.8 148.8
8a - - 147 .8 - -
1
,
4.92 d 7.2 101 - 69.8 -75.8 -77.3 148.8
2
,
3.32 - 73.2 - -
3
,
3.45 - 77.3 60.8 69.8 75.8 101.0
4
,
3.16 - 69.8 - -
5
,
3 .31 - 75.8 - -
6
,
3.30 - 60.8 - -
Chapitre III
110

III.5 le compos SU70a

O
O
O
O
OH
H
HO
HO
Me
OH
O
OH
OH
OH
O
OH
HO
B
A
6
1
2
3
5
4
7
8
9
8
,
7
,
R
6
G
6
G
5
1
,
2
,
3
,
4
,
5
,
6
,
G
4
G
3
G
2
G
1
R
1
R
2
R
3
R
4
R
5

Figure [III.32] : Actoside (-D-glucopyranoside, 2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl 3-O- (6-
deoxy--L-mannopyranosyl)-, 4-[(2E)-3-(3,4-
dihydroxyphenyl)-2-propenoate] ).

Il sagit actoside. Il a t isol notamment dAcanthus ilicifolius [9].
Le spectre de masse ESI-MS du compos SU70a montre en modes positif (figure III.33) et
ngatif respectivement des ions m/z 647.2 [M+Na]
+
et 1270.8 [2M+Na]
+
, m/z 623.2
[M-H]
-
et 658.9 [M+Cl]
+
, m/z 1246.7 [2M-H]
+
et 1382.7 [2M+Cl]
+
.

Ceci correspond une
masse molculaire de 624 uma et une formule brute C
29
H
36
O
15

Figure [III.33] : Spectre de masse du compos SU70a.
Chapitre III
111

Tableau [III.6] : Donnes des spectres UV avec les ractifs de dplacement du compos
SU70a.





MeOH 205 219 247 291 331
AlCl
3
207 - 263 303 364
AlCl
3
+ HCl 205 220 249 290 332
NaOH
Aprs 5
\

210 - 260 297 380
NaOAc 210 - 249 290 331
NaOAc +
H
3
BO
3

212 - 256 294 354
MeOH
+ NaOH
5 min aprs
+ AlCl
3

+ AlCl
3
+ HCl
Chapitre III
112




Figure [III.34] : Spectres UV-visible du compos SU70a.

Le spectre dabsorption UV montrait quatre maximums 205, 219, 247, 291 et 331
nm, caractristiques dun actoside [10].
Le spectre mthanol aprs addition de NaOH prsente un dplacement bathochrome
de la bande I par rapport au spectre mthanol (49 nm) avec diminution de la densit
optique ce qui montre la substitution de la position 4'.
Le spectre mthanol en prsence de AlCl
3
prsente un dplacement de la bande I par
rapport au spectre (MeOH + AlCl
3
+ HCl) (32 nm) ce qui montre pour la prsence d'un
systme orthodihydroxyl sur les noyaux B.
Le spectre H
3
BO
3
s'accompagne d'un effet bathochrome de la bande I par rapport au
spectre mthanol (24 nm) ce qui milite pour la prsence d'un systme orthodihydroxyl sur
les noyaux A (4, 5 -diOH).


+ NaOAc + NaOAc + H
3
BO
3

Chapitre III
113













Figure [III.35] : Spectre RMN-
1
H (CD
3
OD, 300 MHz) du compos SU70a.

Le spectre RMN
1
H dans le (CD
3
OD, 300 MHz) (figure III.35) prsente diffrents
signaux stalant de 1.07 7.61 ppm :
- 2.77 ppm un signal rsonnant sous forme de triplet (J= 7.0 Hz) et un autre signal
4.04 ppm sous forme de multiplet intgrant pour 2 H correspondent des CH
2

aliphatiques.
- Entre 6.24 et 7.58 ppm, de nombreux signaux intgrant chacun pour 1H,
correspondent des protons aromatiques et galement thylniques : on peut en effet
identifier des doublets rsonnant avec des constantes correspondant des protons
thylniques : 7.58 et 6.24 doublets avec un constante J= 15,8 Hz. Les protons
aromatiques ont des multiplicits varies, du fait des nombreux signaux, tous ne sont pas
prcisment identifiables. Cependant des systmes de spin faisant penser des noyaux
aromatiques meta/para substitus peuvent tre mis en vidence : 7.04 (1H, s) ; 6.76 (1H,
d, J= 8.1 Hz); 6.94 (1H, dd, J
1
= 8.2 Hz; J
2
= 1.8 Hz) pour le cycle A; et galement 6.65
(1H, d, J = 8.8 Hz); 6.68 (1H, d, J= 1.5 Hz) ; 6.54 (1H, dd, J
1
= 8.1 Hz ; J
2
= 2.1 Hz).
H-7
H-8
H-6
H-6
H-2
H-3
R
6

H-2
H-5
H-R
1

H-7
H-G
1

Chapitre III
114

La partie osidique est reprsente par les deux pics anomriques H-G
1
et H-R
1
. Les
dplacements dans la rgion des sucres sont caractristiques dun glucose et dun rhamnose.
Pour le glucose, on note la configuration grce la constante de couplage typique de son
proton anomrique H-G
1
4.36 (1H, d, J= 7.7 Hz) [11]. Le rhamnose est identifi par son
proton anomrique qui rsonne 5.18 ppm. Les autres protons des sucres sont situs entre
4.91 et 1.07 ppm. Le doublet rsonnant 1.07 ppm, intgrant pour trois protons, est
typique dun groupe mthyle.
Le spectre RMN
13
C (CD
3
OD, 75 MHz) (figure III.36) prsente 29 signaux distincts
rpartis entre 18.4 et 168.3 ppm, le spectre DEPT 135 (figure III.37) a fournit plus
d'indications, parmi ces atomes de carbone on en dnombre trois carbones secondaires
(CH
2
): 36.5 (C- 7) ; 62.3 (C- G
6
) et 72.2 (C- 8) 168.3 un signal attribu C-9;
et parmi les 25 signaux restant, 07 savrent tre des carbones quaternaires.



Chapitre III
115


Figure [III.36] : Spectre RMN
13
C (CD
3
OD, 75 MHz) du compos SU70a.









C7
R6
C9
G1 R1
C4 C7
C5
C3
C1
C1
C2
C6

C4
C5 C3
C2
C6
C8
G3
G6
G5
G2
R4
Chapitre III
116


Figure [III.37] : Spectre DEPT 135 du compos SU70a.

Lattribution des dplacements chimiques des protons est corrobore par les
expriences homonuclaire COSY, htronuclaire HSQC et HMBC.
Lexprience COSY
1
H-
1
H (figure III.38) montre une corrlation entre :
- Les thylniques couplent entre eux, les points de corrlations entre les protons H-7
(7.58 ppm) et H-8 (6.24 ppm).
- On peut galement dterminer des corrlations entre les protons H-R
5
(3.55 ppm) et H- R
6

(1.07 ppm) ainsi que H-R
1
(5.18 ppm), H-R
2
(3.58ppm) est corrl avec H-R
3
(3.91 ppm)
pour le rhamnose. Lon observe aussi des crtes de corrlation entre le proton situ 4.36
ppm et celui rsonnant 3.38 ppm et 3.80 ppm et celui rsonnant 4.91 ppm pour le
glucose.
Sur le spectre de corrlation htronuclaire HSQC (figure III.39), le carbone (C-7)
rsonnant 148.0 ppm est corrl avec le proton (H-7) situ 7.58 ppm, le carbone
(C-8) localis 114.6.ppm avec (H-8) 6.24 ppm, C 115.2 ppm (C-6) avec 7,04 ppm
(H-6), C 103.0 ppm (C- R
1
) avec 5.18 ppm (H- R
1
), C 104.1 ppm (C-G
1
) avec 4.36
ppm (H- G
1
) et. 18.4 ppm (C-R
6
) avec 1.07 ppm (H- R
6
).
La mesure du spectre de corrlations htronuclaires observes longue distance HMBC
C7
R
6

G
6
C8
C9
G1 R1
Chapitre III
117

(figure III.40) a montr une crte de corrlation entre le proton rsonant 7.58 ppm et le
carbone situ 168.3 ppm Ces derniers corrlent avec le carbone 127.6 et 115.2. Cette
dernire exprience a permis de mettre en vidence la corrlation entre le proton H-7
,

rsonnant 36.5 ppm et le carbone situ 131.4 ppm confirmant lattachement de du
carbone C-7
,
au cycle B. le proton thylnique rsonant 7.58 ppm avec le carbone 127.6
ppm confirmant lattachement de du carbone C-7 au cycle A comme le montre
l'exprience HMBC.


Figure [III.38] : Spectre COSY du compos SU70a.



H-7:H-8
H-R
5
: H-R
6

H-R
1
: H- R
2

H-G
1
: H-G
2

H- G
3
: H- G
4

H- R
2
: H- R
3

Chapitre III
118


Figure [III.39] : Spectre HSQC du compos SU70a.

Figure [III.40] : Spectre HMBC du compos SU70a.

H-7 : C-7
H-R
6
: C-R
6

H-8: C-8
H-R
1
: C- R
1

H-G
1
: C- G
1

H-8: C-9
H- G
6

: C- G
5

H-7
,
: C-1
H- R
1
: C- G
3

H-G
1
: C- 8
,

H-7: C-1
H-7: C-9
H-6 : C-6
Chapitre III
119

Tableau [III.7] : Donnes spectrales du compos SU70a.


Ce compos fait partie des composs phnoliques rpandus dans le rgne vgtal, et
ont dj t mentionns notamment dans les parties ariennes (feuilles et tiges) de Acanthus
ilicifolius. [9]; et galement dans plantago asiatica [12].





Position
13
C
1
H HMBC
C1 127.6 - -
C2 123.2 6.94 (1H, dd, J= 8.2 ; 1.8 Hz) 116.5-123.2-146.7-149.7
C3 116.5 6.76 (1H, d, J= 8.1 Hz)
C4 149.7 - -
C5 146.7 - 127.6-146.7-149.7
C6 115.2 7.04 (1H) 116.5-148.0-149.7
C7 148.0 7.58 (1H, d, J= 15.8 Hz) 115.2-123.2-127.6-168.3
C8 114.6 6.24 (1H, d, J= 15.8 Hz) 127.6-148.0-168.3
C9 168.3 - -
C1 131.4 - -
C2 116.2 6.65 (1H, d, J= 8.8 Hz) 117.1-131.4-146.0
C3 146.0 - -
C4 144.6 - -
C5 117.1 6.68 (1H, d, J= 1.5 Hz) 121.2-131.4-146.0
C6 121.2 6.54 (1H, dd, J= 8.1 ; 2.1 Hz) 117.1-144.6-146.0
C7 36.5 2.77 - 2.78 (2H, t, J= 7.0 Hz) 72.2-117.1-121.2-131.4
C8 72.2 4.04 - 3.72 (1H chacun, m) 36.5-104.0-131.4
G1 104.1 4.36 (1H, d, J= 7.7 Hz) 72.2-75.9 ou 76.1
G2 76.1 3.38 81.6-104.1
G3 81.6 3.80 (1H, t) 70.3-72.0-75.9 ou 76.1-103.0
G4 70.3 4.91 (1H, t) 62.3-75.9 ou76.1-81.6
G5 75.9 3.53 -
G6 62.3 3.537 - 3.60 (1H chacun, dd) -
R1 103.0 5.18 (1H) 70.5-72.0-81.6
R2 72.0 3.58 -
R3 72.3 3.91 -
R4 73.7 3.30 18.4-70.5
R5 70.5 3.55 -
R6 18.4 1.07 (3H, d, J= 6 Hz) 70.5-73.7
Chapitre III
120

III.6 Le mlange SU28c
Cest un mlange de deux composs avec un gras sous forme de poudre blanche,
nabsorbe pas sous UV 254 nm et 365 nm; sur CCM, il se colore en violet aprs
rvlation la vanilline sulfurique et chauffage. On observe un R
f
de 0,40 dans un systme
hexane dichloromthane: (75:25) sur silice normale.
Le spectre de masse (figure III.41) ralis par impact lectronique (IE) donne les fragments
suivants qui caractrisent : mthyle ursolate et mthyle oleanate : (m/z): [MH]
+
= 469, 409,
209, 218 [13].


Figure [III. 41] : Spectre de masse du mlange SU28c.





Chapitre III
121


HO

m/z 468 m/z 409



HO
+
m/z 208 m/z 218

Figure [III.42] : Principales fragmentations du mlange SU28c.



O
HO
O

mthyle olanote mthyle ursolate
Figure [III.43] : Structures du mlange SU28c.

O
HO
O
[- OOCCH
3
]
O
HO
Chapitre III
122

Le spectre RMN du proton
1
H (CDCl
3
; 300 MHz) (figure III.44) prsente des signaux
allant de 0,73 5,3 ppm. On peut distinguer une srie de pics trs massif dans lintervalle
0,73 ppm 2,04 ppm. Le triplet observ 4,45 ppm correspond un proton port par un
carbone en alpha dun groupement hydroxyle. Le signal 5.3 ppm, correspond au
dplacement chimique de proton thylnique. La valeur du dplacement chimique de H-17
suggre une acylation au niveau du carbone C-17, plus prcisment par un groupement
CH
3
CO [13].


Figure [III.44] : Spectre de proton (CDCl
3
, 300 MHz) du mlange SU28c.







Chapitre III
123

III.7 Interprtation des rsultats des huiles essentielles

Figure [III.45] : Chromatogramme de lhuile essentielle des racines de Scorzonera
undulata.

Dans lhuile essentielle des racines de scorzonera undulata les composants
majoritaires sont :
Les acides gras: acide hexadecanoique (42.19%) et dautres composants appartenant
la famille dacide gras n- acide tetradecanoique (11.16%) et acide 9-hexadecenoique
(4.38%).
Les esters font une partie considrable dans la composition de lhuile : acide
hexadecanoique methyle ester (2.32%), 9- acide octadecenoique methyle ester (1.31%),
Octadecanoate (2.2 %), 1,2 acide benzenedicarboxylique, bis(2-methylpropyl) ester
(1.38%).
Les alcools : -Bisabolol (1.2 %), dodecanol (0.22 %) et alpha-muurolol (0.12 %).
Les hydrocarbures saturs : Heptadecane (0.64%), Nonadecane (0. 46%), Eicosane
(0. 22%), Pentadecane, (0. 16%) et Tricosane (0. 11%).
On remarque que lacide hexadecanoique est le produit majoritaire et daprs Marzi la
plante scozonera undulata considre comme une source de lacide palmitique [14].
Les produits majoritaires sont des acides gras (60.2 %), on remarque labsence des
monoterpnes, la prsence des ester (5.85), hydrocarbure (1.96) et des sesquiterpnes.
49
56
33
12
47
32
46
55
Chapitre III
124

III.7.1 Etude comparative
Une tude comparative des huiles essentielles entre la partie arienne et les
racines de la plante Scorzonera undulata subsp. deliciosa (Guss.) Maire est comment suit :

Tableau [III.8] : Etude comparative des huiles essentielles.











III.7.2 Test antibactrien sur Escherichia coli
Un autre paramtre important dterminant lactivit antimicrobienne des huiles
essentielles dpend en premier lieu du type et des caractristiques des composants actifs, en
particulier leur proprit hydrophobe qui leur permet de pntrer dans la double couche
phospholipidique de la membrane de la cellule bactrienne. Parmi les bactries, Escherichia
coli a t la plus tudi. Escherichia coli [15]. HE a montr la plus forte activit avec un
diamtre de croissance de 16 mm la dose de concentration 100 g.



Scorzonera undulata
Composs partie arienne les racines
2,4-decadienal % 0.5 0.12
Dodecanol % 0.4 0.22
Delta cadinene % Tr 0.16
acide Hexadecanoique methyl ester % 30 .4 2.32
acide octadecdienoique, methyl ester %
2.2 3 .67
Hydrocarbone % 13 1.85
Chapitre III
125

III.8 Discussion des rsultats dactivit antioxydante
Lextrait DCM de Scorzonera Undulata na montr aucune activit antioxydante (IC
50

non calculable) Ceci sexplique par la prsence des composs pentacyclique triterpnes.
Lextrait mthanoliques de Scorzonera Undulata a ragi lgrement au test
antioxydant avec le DPPH (IC
50
= 0.56) Ceci sexplique par la prsence des composs
phnoliques dans les extraits polaires, dont lactivit antiradicalaire a t largement tudie
[16].
Il faut cependant noter que cet extrait mthanolique nayant pas t dbarrass de leur
sucre, il se pourrait que lactivit potentielle soit masque, ce ci explique un effet
lgererement antiradicalaire.


































Chapitre III
126

Rfrence

1. Yuan H. Q., Zuo C. X., Yao X. X. (1992): bao tudies on the chemical constituents of
Cynanchum thesioides. Acta pharmaceutica Sinica 27(8) 589-94.
2. Junich K., masanabu A., and yasuka T. (1994) : triterpenoid constuents ficus
thunbergii. Chem. pharm. bull. 42(3) 608-610
3. Serge. M; Dijoux. F; Anne. M. M. (2007): Thse doctorat.

4. Stanic G., Petricic J, Todoric A, Blazevic N.(1988): Sterols in roots of Mirabilis jalapa L.
Acta pharmaceutica Jugoslavica. 38 255-257.

5. Savona G., Piozzi F., Rodriguez, B., Servettaz, O. (1982): Galangustin, a new flavone
from Galeopsis angustifolia. Heterocycles 19(9) 1581-4.

6. Mabry T. J., Markham K. R., and Thomas M. B. (1970): The Systematic Identification of
Falvonoids, Springer-verlag, New-York.

7. Agrawal P. K., and Markham K.R. (1989): Carbon-13 NMR of flavonoids. Elsevier.
Amsterdam.

8. Steinegger, M; and Brantschen A. (1959): Pharm. Acta. Helv. 34. 153.

9. Jun Wu; Si Z., Qiang X., Qingxin L., Jianshe H., Lijuan L., Liangmin H. (2003):
Phenylethanoid and aliphatic alcohol glycosides from Acanthus ilicifolius.
Phytochemistry 63 491495.

10. Yu-Tse W., Lie-Chwen L., Jung-Sung S., Tung-Hu T. (2006): Determination of
acteoside in Cistanche deserticola and Boschniakia rossica and its pharmacokinetics in
freely-moving rats using LCMS/MS. Journal of Chromatography B, 844 8995.

11. Owena R.W., Haubnera R., , Mierb W. A. Giacosac W.E. Hulld,. Spiegelhaldera B.,
Bartscha H. (2003): Isolation, structure elucidation and antioxidant potential of the
major phenolic and flavonoid compounds in brined olive drupes. Food and Chemical
Toxicology 41 703717.

12. Helle R., Sansei N., Michiko S., and Lx X. (1990): Phenolic compounds from
plantago asiatica. Phytochemistry, 29 3627-3631.

13. Nacef S., Tekaya K. A., Ben jannet H., Mighri Z. (2008): Identification de phytosterols,
dun acide triterpenique, dun o-heteroside et dune coumarine dans la partie aerienne
de la plante convolvulus dorycnium l. poussant en tunisie. J.Soc.Alger.Chim., 18(2)
159-171.

14. Marzi L., Cowper L., Takei Y., Lindert K., Lamasters J.J., and Thurman R.G. (1990):
Methyl palmitate prevents Kuppffer cell activation and improves survival after orthopic
liver transplantation in the rat. Transplant. Int ., 4 215-220
Chapitre III
127

15. Keita R. M. (2002): Etude de lactivit antifongique et antibactrienne de 14 plantes
utilises dans le traitement des I.S.T. Thse de pharmacie, Bamako, 130 p

16. Cuendet, M., Hostettmann, K., Potterat, O. (1997): Iridoid glucosides with free radical
scavenging properties from Fagraea blumei. Helvetica Chimica Acta 80 1144-1151.























































CONCLUSION GENERALE

CONCLUSION GENERALE

128

CONCLUSION GENERALE

Lobjet de notre tude a port sur ltude phytochimique de la plante Scorsonera
undulata , ainsi que sur lvaluation de lactivit antioxydant de lextrait apolaire et
polaire.
Ltude bibliographique pralable ralise sur espce a montr que lon disposait que de
peu dinformation de nature chimique et/ou biologique. Au cours de nos travaux, nous
avons isol les mtabolites secondaires majoritaires despce Scorsonera.
La mthodologie de purification a t essentiellement fonde sur la combinaison
de diffrentes mthodes chromatographiques solides-liquides sur diffrents supports
(chromatographie sur couche mince, chromatographie sur colonne ouverte,
Chromatographie liquide sous vide, Chromatographie liquide moyenne pression
(MPLC), chromatographie par filtration sur le gel de Sephadex LH-20 et
chromatographie liquide de haute performance).
La dtermination structurale des mtabolites secondaires isols a t ralise
grce lutilisation de techniques physicochimiques et spectroscopiques incluant la
spectroscopie ultraviolette (UV), la spectroscopie de masse (SM) et la spectroscopie de
rsonance magntique (RMN). En ce qui concerne la spectromtrie de masse, des
techniques telles que lionisation lectronique, lionisation chimique et les techniques de
haute rsolution ont rendu possible la dtermination du poids molculaire ainsi que la
formule brute des mtabolites secondaires isols. Pour la spectroscopie RMN, les
techniques monodimensionnelles (
1
H,
13
C, DEPT 135) et bidimensionnelles (COSY, nOe
diffrentielle, HSQC, HMBC) auxquelles nous avons fait appel, nous ont permis de
raliser la dtermination structurale dfinitive et sans quivoque de la plupart des
mtabolites secondaires isols. La spectroscopie UV permis de confirm la structure de
flavonode et de coumarine. lHPLC analytique, a t utilis pour tudie les diffrents
fractions dextraits polaire.
Ltude phytochimique des racines de Scorsonera undulata a permis disoler
pour la premire fois dans le genre de Scorzonera deux composs: Galangustin et
Actoside et six autres composs un coumarine cinq triterpnes a t identifi et deux
autres est en cours de lidentification (flavonoide et triterpne).
Actate de amyrine
CONCLUSION GENERALE

129

methyl Oleanate
methyl Ursolate
-Stigmasterol
-Sitosterol
Coumarin-O-glycoside
Pour les huiles essentielles malheureusement les produits majoritaires sont des acides gras
avec bien sur des sesquiterpnes et les hydrocarbures.
Lactivit antioxydante de lextrait apolaire est inactif par contre lextrait polaire
est lgrement actif. Lactivit antimicrobienne des huiles est lgrement actif.

=---

'-- '-` '+-- ,-'-` .- - - Scorsonera Undulata '-- ''-' ,-' --' =--' .-' -
.--- ` - -=' Galangustin et Acteoside . '- - =-' _' - ,,' ` ,-'- '-, . -
-' _'= '--' =-,- ',=- -' ' ',=- -,='--' ,-' (1D, 2D ) . ',=,',,-' ,''-'
(DPPH) '-- -=-' '=---'' IC
50
= 0.56

Scorzonera undulata ssp deliciousa (Guss.) Maire, Asteraceae : '---- '----
Galangustin, Actoside, Huiles essentielles, Activit antioxydante.





Summary

From the shade-dried and powdered roots of S. undulata ssp. deliciosa eight known
compounds; -Amyrin acetate, methyl Oleanate, methyl Ursolate, Stigmasterol, -Sitosterol,
Galangustin, Coumarin-O--glycoside and Acteoside were isolated. Their structures were
elucidated on the basis of extensive spectroscopic analysis, including 1D and 2D NMR,
chemical transformation and comparison with the related known compounds. This is the first
report of occurrence of these compounds in S. undulate ssp. deliciosa. The methanol extract of
the roots of S. undulata ssp. Deliciosa was examined for in vitro antioxidant properties using
DPPH test (radical scavenging). For essential oils the majority products are fatty acids and
Sesquiterpenes.

Key Words: Asteraceae, Scorzonera undulata ssp. deliciousa (Guss.) Maire, Galangustin,
Actoside, essential oils, antioxidant activities.


Rsum

Ce travail est consacr ltude phytochimique des racines de Scorzonera undulata ssp.
deliciousa (Guss.) de la famille des Asteraceae. Huit composs ont t isols, dont deux pour
la premire fois du genre de Scorzonera: Galangustin et Actoside. Cette tude a permis
lisolement par les mthodes chromatographiques. La dtermination des structures ont t
lucides par les mthodes spectroscopies (RMN, Masse et UV).
les produits majoritaires des huiles essentielles sont des acides gras acides et des
sesquiterpnes.
Mots cls : Asteraceae, Scorzonera undulata ssp. deliciousa (Guss.) Maire, Galangustin,
Actoside, Huiles essentielles, Activit antioxydant.