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Gewebekulturen in der Kche zu Hause

es ist nicht so schwer, wie Sie vielleicht denken!


Eine Diaschau von Rick Walker

Warum sich mit Tissue Culture strt (TC)?


schnellere Ausbreitung (vielleicht 10x) - reduziert die Nachfrage nach Wildsammlung Pflanzen. keine Sorgen ber Pilze, Schdlinge, etc. langfristige Pflege von Pflanzen (stick 'em in den Khlschrank!) Identische Klone der grtnerischen Sorten leicht erzeugt (Eigentlich ist der letzte Punkt nicht ganz richtig. Scott Hyndman, marva@nebula.ispace.com, informiert mich, dass klonale Integritt durch Stressfaktoren, Genotyp, Alter der Kultur, Schneiden und bertragung Technik und zahlreichen anderen Faktoren noch untersucht wird beeinflusst in der umfangreichen wissenschaftlichen Literatur nur auf diesem faszinierenden Aspekt Pflanzengewebekultur allein.)

Einige ntzliche Definitionen


Totipotenz: bestimmte Zellen haben die Fhigkeit, als isoliert und richtig gewachsen, um eine ganze Pflanze regenerieren. Dies ist nichts Seltsames oder Ungewhnliches. Das hier gezeigte Bild zeigt, wie das gemeinsame "Spinne Pflanze" ist in der Lage ab neues Wachstum am Ende eines jeden zu schieen.

Meristem: Die Region, in einer wachsenden Pflanze, wo die Zellen sich schnell teilenden werden. Das Bild zeigt, wie das Meristem von einer Erdbeere zu schieen, um in sterilen Gewebe gezchtet werden knnen isoliert werden. Beide Bilder sind von "Pflanzen aus Reagenzglser" von Lydian Kyte wiedergegeben. Dieses Buch wird als Referenz fr Anfnger zu empfehlen, und eine vollstndige bibliographische Referenz wird spter in diesem Vortrag gehalten. Genauer gesagt, sollte dies als ein Vortrag ber "in-vitro" Ausbreitung von fleischfressenden Pflanzen. "In-vitro" bedeutet "im Glas" oder unter sterilen Bedingungen. Es ist sehr schwierig (oder manchmal nahezu unmglich, da in Nepenthes) ordnungsgem sterilisieren Meristemgewebe aus vielen CP. Einige von ihnen haben symbiotische fungii leben in ihren Zellen. Dieses Zeug Regel bricht aus und berschreitungen der Kultur, wenn meristemming

aus nicht-sterile Material versucht. Aus diesem Grund ist die zuverlssigste Weg, um eine CP-Zelllinie ab Samen. Sobald Sie eine sterile Kultur gehen, dann knnen Sie das Gewebe mit Hormonen vermehren und re-Kluft ad-nauseum. Seit einiger CP, insbesondere Pinguicula und Sarracenia, ist es mglich, Meristem Techniken mit normal angezogen Pflanzenmaterial tun. Ich werde nicht auf die Sezieren Verfahren hier, aber die sterile Technik, Medien Vorbereitung, etc., sind identisch mit den in-vitroVerfahren hier gezeigt.

Weitere ntzliche Definitionen


Auxin Hormon, das in erster Linie steuert Zellstreckung hemmt Seitentriebe, an Apikalmeristems produziert Cytokinin Hormon, das in erster Linie regt die Zellteilung. Beispiele sind 6 - (y, y, dimethylally-amino)purin (2iP), Kinetin (K), und 6-Benzylaminopurin (BAP) Toby Marsden definiert die drei klassischen Phasen des Hormon-assisted TC als: Stufe I. Errichtung / Keimung (kein Hormon) Stage II. Multiplikation (low Auxin, hohe Cytokinin) Stufe III. Whlen (high Auxin, niedrige Cytokinin) Fr den Heim-Gewebekultur, sind Hormone nicht notwendig. Die meisten Pflnzchen wie Pinguicula schon viel schneller wachsen in TC als im Boden. Sofern Sie extrem schnelle Multiplikation fr kommerzielle Zwecke bentigen, oder mit Meristem Ausbreitung sehr schwierig Arten (zB: Nepenthes) experimentieren, ist es unwahrscheinlich, dass Sie brauchen, um Hormone oder Cytokine verwenden. Viele dieser Chemikalien sind gefhrlich (erbgutverndernd oder krebserregend), und sind nicht wirklich sinnvoll, in der Kche verwenden.

Gewerbe TC media Dieses Foto zeigt ein Paket von Murashige und Skoog (MS) Tissue Culture Medien von Sigma Chemical Company verkauft. Jedes Paket bietet gengend Chemikalien 1L Medien vorzubereiten. Um dieses Medium fr CP verwenden, es muss in der Regel in der Strke verdnnt werden. Normalerweise verwende ich 1/2 Strke fr die meisten nicht-kritische Anlagen. Die vier Flaschen dargestellt jeweils 1/4 des Pakets SIGMA, wieder auf richtigen Saccharose und Agar Konzentration gebaut. Fr die meisten CP, 20-30g / l Saccharose und 6g / l Agar angemessen ist. Eine Skala, Zucker und Agar. Jede Flasche dann bequem enthlt die richtigen Chemikalien fr eine 500mL Charge von Medien. Die nchste Folie deckt die Funktionen der Hauptnhrstoffe in TC Medien.

Komponenten des TC Wachstumsmedium


Die Organics: C, H, O

AGAR - neutral Substrat Saccharose - (C12-H22-O11) bietet Energiequelle fr Zellen Inositol - (C6-H12-O6) einfacher Alkohol Zucker Hormone - Kontrolle Wachstum Fungizide - Steuerung Verunreinigungen Antibiotika - Steuerung Verunreinigungen Antioxidantien Anorganische Makronhrstoffe N ... Blattwachstums, Chlorophyll, Aminosuren, Proteinen, Zellmembranen P ... Meristem Wachstum, Fettsuren Zellmembranen, DNA-Produktion K ... Zellteilung, Wurzelbildung S ... Wurzelentwicklung Ca ... Pektin (Zellwand Kleber) entscheidend fr das Wachstum Meristem Mg ... integral mit Chlorophyllmolekle Fe ... wichtig, Pigment und Chlorophyll-Bildung Anorganische Mikronhrstoffe B ... Zucker Bewegung im Anlagenbau Mo ... Stickstoff-Fixierung Mn ... subtile (steuert lebenswichtige Enzym Wege) Cu ... subtile (steuert lebenswichtige Enzym Wege) Zn ... subtile (steuert lebenswichtige Enzym Wege) Cl Al Na Si Co (sekundr: Bedarf fr diese variiert je nach Spezies)

Mit Baby-Glschen fr eine wachsende Kammer


Stanzen eines Luftlochs in dem Deckel mit Folie als Verunreinigung Barriere Baby-Glschen machen ausgezeichnete und preiswerte wachsenden Kammern. Fr den Anfnger kann ein Loch in dem Deckel mit einem Nagel und einem Hammer erfolgen. Um Verunreinigungen zu vermeiden, wird der Deckel gehalten umwickelt mit Alufolie abdecken. Dies ermglicht leichte Atmung der Medien und gleichzeitig eine Schallwand, Bakterien und Sporen auszuschlieen. Die erweiterte TC-Enthusiasten knnen wollen Kunststoffkappen von einer kommerziellen Quelle wie Sigma Chemical Company zu erwerben. Ich benutze den "MAGENTA B-cap". Sie sind sterilisierbar, bereitzustellen Ablenkplatten und lichtdurchlssig sind. Dies macht es leicht, die Kulturen mit Overhead Ausleuchtung wachsen. Diese Kappen sind entworfen, um mit StandardBaby-Glschen verwendet werden.

A Simple Home Rezept:


Gewebekultur braucht nicht ein "High-Tech"-Angelegenheit. Viele Nicht-fussy Pflanzen knnen leicht auf einem Kochbuch "Kche-Stil" Medium gezchtet werden. Hier ist ein einfaches, von Kyte angepasst, um Pinguicula und Drosera versuchen. Es gibt viel Raum fr Experimente, und diese Formel kann sicherlich mit einigen trial and error verbessert werden.

Komponenten eines einfachen hausgemachten Medien 1/8 Tasse Tafelzucker 1 Tasse Wasser 1/2 Tasse Stammlsung (Miracid verdnnt 1/4 tsp in 1 Gallone Wasser) 1/2 Inosit Tablette (125mg) 1/4 Vitamin-Tablette mit Thiamin 2 Esslffel Agar Flocken

Zur Variation, versuchen Substituieren Kokosmilch anstelle von einem Teil des Wassers. Gemeinsame Konzentrationen in der Literatur verwendet sind 100 bis 200 ml pro Liter Kokosmilch von Medien. Inositol ist eine gemeinsame menschliche Nahrungsergnzungsmittel und kann bei Bioladen in GelKapseln gefunden werden. Agar ist manchmal in den gleichen Geschften in Grokisten Verfgung. Ein weiterer Ort fr Agar sehen ist orientalische Speisen Fachgeschften. Agar wird hufig in der asiatischen Kche als Geliermittel fr Desserts verwendet. Holen Sie sich das weieste und reinste, unflavored Vielfalt, die Sie finden knnen. Sie mssen sich mit der Konzentration experimentieren, wenn Sie nicht-standardisierten Agar verwenden. Ihr Ziel ist es, die minimale Konzentration von Agar, dass noch zuverlssig bildet ein Gel zu erreichen. Dies erzeugt ein Medium, das einen minimalen Widerstand bietet das Wurzelwachstum. Hinweis: Dieses Rezept wurde ursprnglich fr den allgemeinen Gebrauch konzipiert. Die meisten CP erfordern eine verdnnte Nhrstoffkonzentration als Nicht-CP, so knnen Sie versuchen Reduzierung Proportionen der Stammlsung und Zucker besten Ergebnisse erzielt werden. Pflanzen aus Reagenzglser Dieses Rezept ist von den sehr empfehlenswerten Buch "Pflanzen aus Reagenzglser" von Lydian Kyte von Timber Press verffentlicht (siehe Hinweise am Ende dieses Dokuments fr die Bestellung von Informationen) angepasst.

Eine kompliziertere Rezept:


Dies ist die Pinguicula Medien nach Bill Carroll im Fleischfressende Pflanze Newsletter, v11 n4, Dezember 1982, S. 93-96 empfohlen. Wie Sie sehen knnen, werden Sie wahrscheinlich nicht wollen, dieses ohne eine genaue Waage und einem gut sortierten Angebot von Chemikalien versuchen. CaNO3 1000 mg / Liter NH4NO3 300 mg / Liter KH2PO4 250 mg / Liter MgSO4 250 mg / Liter MnSO4 10 mg / Liter Fe-Chelat 20 mg / Liter Thiamin 10 mg / Liter Inositol 100 mg / Liter Saccharose 20.000 mg / Liter Agar 12.000 mg / Liter

Fr Aufnahmen Multiplikation Verwendung Kinetin oder 2iP im Bereich von 0,5 bis 2,0 mg / Liter. Auxine zur Bewurzelung waren IBA oder NAA im Bereich von 0,1 bis 1,0 mg / Liter. Bringen Medien zu kochen unter stndigem Rhren, Dosieren in Reagenzglsern oder andere Behltnisse und Dampf sterilisiert 15 Minuten bei 15PSI (120C oder 250F).

Einige kommerzielle Quellen


SIGMA Chemical Company PO Box 14508, St. Louis, MO, 63178, (800) 325-3010 (fragen Sie nach dem "Plant Cell Culture Catalog"). Sie neigen dazu, ein wenig nervs bei diesem Unternehmen, so mssen Sie mglicherweise eine "Gebhr befreiten" Kinderstube Lizenz von Ihrem lokalen Abteilung Landwirtschaft zu bekommen, bevor SIGMA wird mit Ihnen Geschfte machen. GIBCO / BRL Life Sciences (800) 828-6686 Carolina Biological Supply Burlington, NC, (919) 584-0381, 1-800-334-5551, oder caroscipub@aol.com

Mischen und Dosieren der Medien in den Jars


Egal Formel, die Sie verwenden, mssen Sie zu mischen nach den Empfehlungen des Herstellers oder nach Ihrer Formel. Ich in der Regel erhitzen das Wasser fast bis zum Sieden, bevor Sie die Agar unter krftigem Rhren. Wenn es vollstndig gelst ist, knnen Sie 1-1,5 cm von Medien in jedem Baby-Nahrung jar verzichten. Achten Sie darauf, alle Medien auf der Felge oder an den Seiten der Glser zu bekommen, wie dies spter bieten wird einen Weg fr Verschmutzung. Tauschen Sie die (vented!) Deckel auf den Glsern und stapeln sie in den Schnellkochtopf zum Sterilisieren.

Sterilisation der Glser und Medien


Ldt eine einfache Dampfkochtopf Achten Sie darauf, und verwenden Sie einen Untersetzer zu Ihrem Glser halten Sie den Boden des Herdes. Sie wollen Dampf sterilisieren, nicht kochen! Dieses kleine, Pfanne-sized Dampfkochtopf kam aus dem Whole Earth Store fr etwa 200 Dollar. Es ist ein ziemlich teuer, High-End-Edelstahl-Modell fr Gourmet Kochen. I enthalten sie hier als ein Beispiel fr "making-do" mit dem, was vorhanden ist. Diese Eindoser ist gerade gro genug, um kaum passen 7 kurze Glschen.

Ldt eine grere "Home Canner" Dampfkochtopf Das ist ein bisschen mehr industrielle Art Eindoser von "American Aluminum Company" gemacht. Es ist sehr schn zum Sterilisieren groe Chargen von Medien, Werkzeugen und zum Sterilisieren Splwasser.

Ich kaufte dieses ein mail-order von Mellinger die [siehe refs. fr Adresse], aber das gleiche Eindoser ist auch lokal am Orchard Supply und Ace Hardware. Kleinere Einheiten von der gleichen Firma kann fr rund $ 70 oder so zu haben. Obwohl Mikrowellen zur Sterilisation (siehe Literaturverzeichnis) verwendet wurden, waren die Ergebnisse fleckig. Die Trennlinie zwischen dem Erreichen der Sterilisation und Flash-berkochen die Medien ist extrem fein. Selbst unter den gnstigsten Umstnden, ist das Auftreten von Verunreinigungen wesentlich hher mit einer Mikrowelle als mit einem Dampfkochtopf. Wenn Ihre Umgebung hat eine hohe Konzentration von hitzeresistente Sporen, dann Mikrowellensterilisation wird wahrscheinlich unbrauchbar. Mit einem Dampfkochtopf kann man davon ausgehen, mit an Sicherheit grenzender Wahrscheinlichkeit, dass Ihre Medien absolut steril ist. Dann knnen Sie Ihre Aufmerksamkeit auf die Verringerung der Verschmutzung whrend Aussaaterde, Zell-Transfer zu konzentrieren, etc. Ich empfehle mit einem Dampfkochtopf fr jeden ernsthaften TC Arbeit.

Verarbeitung Verarbeitung Unabhngig davon, welche Art von Dampfkochtopf Sie sich entscheiden, sollten sie alle fr 15 PSI/250F eingestellt werden, und fhren Sie fr 15-20 Minuten. I in der Regel verlassen das Rckschlagventil geffnet, bis es eine gute Menge an Dampf zu entladen beginnt. An diesem Punkt knnen Sie sicher sein, dass das Schiff gut gefllt ist mit Frischdampf. Sie knnen dann das Ventil zu schlieen, die Hitze reduzieren und den Timer zu starten, sobald Sie auf Druck gekommen. Lassen Sie niemals einen Herd unbeaufsichtigt. Bitte lesen Sie alle Sicherheitshinweise fr Ihren Herd bevor Sie beginnen! Vergewissern Sie sich und lassen Sie den Herd auf Raumtemperatur kommen, bevor das Schiff. Wenn Sie das nicht tun, dann wird Ihr Medium ist wahrscheinlich in einem Furunkel und Schaum berall platzen. I in der Regel verlassen den Herd Nacht vor dem ffnen. Dies hat auch den Vorteil, da die Agar vollstndig geliert wird, und es wird kein Problem mit Verschtten das Medium beim Entfernen der Dosen liegen. Nachdem es vollstndig abgekhlt sind, knnen Sie sicher ffnen den Herd. Es kann eine geringe interne Vakuum, das in kontaminierten Raumluft ansaugen knnte. Es wird vorgeschlagen, dass der Herd Rckschlagventil in ein Papiertuch, das mit Isopropylalkohol getrnkt wurde gewickelt werden. Vorsichtig lassen Sie die internen Vakuum durch ffnen des Rckschlagventils. Die Raumluft wird dann durch das Papiertuch gefiltert werden.

Sterilisieren Samen oder Tissue


Gemeinsame Isopropyl "Reiben" Alkohol - voller Strke Chlor ("Clorox" Marke bleach verdnnten 10:1) H2O2 (3% Wasserstoffperoxid aus der Apotheke) Netzmittel (z. B. Kodak "photoflow", oder Flssigwaschmittel wie "Joy" Marke)

Alkohol, Bleiche und Wasserstoffperoxid markierten Samen auf Filterpapier Papier falten und Befestigung mit Kunststoff-Clip I sterilisieren Samen in wenig gefalteten Pakets aus Filterpapier durch Einweichen fr 5 Minuten in Isopropylalkohol (hufig geschttelt oder gerhrt), 2-4 Minuten von 1/10 Clorox Lsung und 1-2 Minuten 3% H2O2 als Nachsplung . Ich verlasse die Restperoxid auf dem Saatgut als weitere Infektion Prventionsmanahme. Einige Arbeiter bevorzugen, um alle Spuren von Chemikalien aus den Samen mit vorab sterilisiertem Wasser zu splen. Es kann helfen, einen Tropfen Splmittel auf die Bleichlsung hinzufgen bessere Benetzung des ligen Samenschale ermglichen. In privater Korrespondenz, hat Jan Schlauer empfohlen Beurteilung der Bleiche Timing, indem Sie die Farbe der Samenschale. Wenn Sie nur eine nderung in der Farbe (von schwarz bis braun oder braun bis strohgelb) bemerkt, ist dies ber die richtige Zeit, um das Chlor Desinfektion Schritt zu stoppen. Einweichen der Samen Es ist immer eine heikle Jonglieren zu versuchen, um die Verunreinigungen, ohne zu tten den Samen tten. Fr die beste Chance auf Erfolg, knnen Sie Ihre Samen in mehreren Chargen aufteilen. Verfahren einer Charge fr 1 Minute, die nchste fr 2, und die letzte fr 4 Minuten. Sen sie in separaten Flschchen und halten gute Aufzeichnungen. Dies wird Ihnen helfen, Ihr Urteilsvermgen und Ihre Technik zu perfektionieren.

, Die die eigentliche Impfung


Eine kommerzielle Laminar-Flow-Haube Dies ist ein weiterer Strichzeichnung von Lydian Kyte Buch: "Pflanzen von Test Tubes". Eine kommerzielle Haube wie dies vielleicht kostet $ 1500,00. Sie knnen die Filter-und VentilatorEinheiten separat kaufen, um Ihre eigenen fr viel billiger zu machen, wenn Sie praktisch mit der Arbeit in Plexiglas sind. In einer Laminar-Flow-Haube, wird die einstrmende Luft durch einen High-Efficiency-Particulite Air Filter (HEPA) gefiltert und fliet sanft ber den Arbeitsbereich. Der HEPA-Filter ist fein genug ist, um vollstndig zu entfernen Schimmelpilzsporen und Bakterien aus dem Luftstrom. John Laroche hat eine einfache "howto" geschrieben beschreibt ein wie eine zu bauen Handschuhfach, Laminar Flow Kapuze und eine Kultur Rotator. Fr die hobbyest, knnen gute Ergebnisse mit dem viel einfacheres System unten dargestellt erzielt werden. Dies ist eine Anpassung der "Handschuhfach" Art der berfhrungskammer. Einfache Aquarium Verteilergetriebe Dies ist ein 40 Liter Aquarium, auf die Seite gedreht, und mit einem Vorhang aus Plastikplanen. Ich

benutze den Overhead fluoreszierenden Leuchte fr die Beleuchtung. Die klare Abschnitt des Glases vor der Leuchte ist, wo man fr eine klare Sicht aussehen. Vor der Verwendung die Kammer, sollten Sie Tupfer an der Innenseite der Box mit einem Papiertuch, befeuchtet mit Isopropyl. Seien Sie sehr vorsichtig, damit die Dmpfe vor ableitet Beleuchtung Ihres Lampe! In dieser Hinsicht ist Isopropyl (Reinigungsalkohol) viel sicherer als, sagen wir, Lysol Spray, das Ethanol enthlt (Getreide Alkohol) und ist viel mehr brennbar. Um weiter gegen Verschmutzung zu schtzen, mchten Sie vielleicht ein Haus Luftfiltereinheit kaufen. The Holmes Unternehmen macht eine Einheit mit einem echten HEPA-Filter, fr ca. $ 70,00. Ich in der Regel lassen Sie das Gert laufen fr einen Tag oder so vor zu tun sterilen Transfer Arbeit. Dies reduziert viel von der Luft-borne Staub in der huslichen Umgebung. Dieselbe Kammer dient gut als Anbaugebiet. Reinigung der Hnde vor dem Beginn der Arbeiten Ich putze mir die Hnde mit Wasser und Seife, und reiben Sie sie mit Isopropyl. Plastic OPHandschuhe kann auch getragen werden, falls gewnscht. Ein Kurzarm-Shirt wird empfohlen zu vermeiden tragenden Partikel mit dem Gewebe.

Werkzeuge zur bertragung Arbeit verwendet Eine gute Uhr ist ntzlich fr das Timing der Sterilisation Schritte. (Achten Sie darauf, dass durch Ihre Technik ... Ich habe manchmal bekommen beteiligt sen, und links andere fr 20 Minuten in Bleiche einweichen ... dies wird nicht empfohlen!) Ein weiteres ntzliches Tool ist eine Pinzette. Dies sollte recht lang, so dass man das Material ohne sich die Hnde zu nahe an den Agar zu manipulieren. Ein 8 "Stck dnnen, steifen Draht mit Spitze in einem 1/8 geformt" loop ist hilfreich fr die Saat. Eine Pinzette und eine Rasierklinge oder einem scharfen Messer zum Teilen Klumpen von Pflanzen kann auch erforderlich sein. Alkohol-Lampe zur Sterilisierung Werkzeugen Campingfahrzeug Brenners oder zumindest eine Kerze wird bentigt, um die Drahtschlinge whrend der Aussaat Verfahren sterilisieren. Ich benutze ein Labor-style Alkohol-Lampe. Diese Art von Lampe hat eine breite Basis, um Umkippen zu vermeiden. Seien Sie vorsichtig! Beachten Sie auch, dass Isopropylalkohol brennt nicht gut berhaupt. Sie mssen denaturiert Methylalkohol fr Ihre Lampe zu kaufen. Dieser Kraftstoff verbrennt sauber und hinterlsst keine Rckstnde auf den Werkzeugen. Sterilisieren innoculating Schleife in Flammen Ich in der Regel tauchen meine Werkzeuge in Isopropylalkohol und dann "flamme" sie aus der Alkohol-Lampe. Dies hilft, sowohl den Schaft und Spitze des Werkzeugs zu sterilisieren. Nach "flammendes" von der Isopropyl, habe ich dann heizen die Spitze der Schleife, bis sie rot glhen. Es kann dann in dem Gel eingesetzt werden, whrend immer noch hei, um es abzukhlen. Diese Technik dient zwei Zwecken: 1) es hlt die Spitze hei vor Verunreinigungen zu schtzen, und 2) es nimmt ein wenig Gel auf die Spitze zu machen "sticky". Dieses Stck Klebrigkeit helfen zu holen die Samen im nchsten Schritt.

Aufnehmen der Samen die Saat Beachten Sie die MAGENTA B-CAP in der Locke der rechten Hand gehalten. Dies ist eine ntzliche sterilen Labor-Technik, die es wert ben ist. Hier ist die Vorgehensweise: 1. Die linke Hand greift die capped, sterilisiert jar mit Medien 2. Die rechten Dips das Werkzeug in einem Zylinder Isopropyl 3. Der kleine Finger und fleischigen Teil der Handflche der rechten Hand wird die Plastikkappe der Kultur jar ffnen. Der Deckel wird nicht nach unten gesetzt - dies knnte zu einer Kontamination fhren. 4. Am besten ist es, wenn die offenen Tiegels in einem Winkel weg von dem Techniker gehalten wird, so dass Luft bertragene Sporen weniger wahrscheinlich in der Lage sein auf das Medium absetzen knnen. 5. Halten sowohl den Deckel und das Werkzeug, die rechte Hand dann Flammen das Werkzeug um sie zu sterilisieren. 6. Die glhende Werkzeug wird dann in den Agar eingezogen, um sie zu khlen und ihn leicht klebrig. 7. Die klebrige Schleife wird dann verwendet, um abholen ein paar Samen aus dem Filterpapier und sie gleichmig einzahlen ber die Agar-Oberflche. 8. Die rechte Hand hielt immer noch den Plastikdeckel, jetzt ersetzt sie wieder auf den Topf. zeigt Saatgutablage Wie blich, gibt es einen Trade-off hier vorgenommen werden. Je mehr Samen st, desto besser sind Ihre Chancen auf eine erfolgreiche Keimung - ABER - auch die hhere Wahrscheinlichkeit einer Kontamination. Fr leicht sterilisiert glnzenden Samen wie Dionaea, ich in der Regel zu sen bis zu 20 Samen. Fr hrtere Samen, wie Nepenthes, knnten Sie besser beraten werden, um nur zu sen 3 oder 4.

bertragen Pflnzchen fr weiteres Wachstum


Pinguicula heterophylla in Kultur Uberweisung Pflnzchen

Pflanzen in-vitro und auch ausgepflanzt Ich habe meine Kulturen unter coolish Hause Temperaturen (60-75 F), 12 Zoll unter einem Zweirohr-40W Leuchtstofflampe gehalten. Ich halte die Kultur Glser im selben Glas Aquarium, die ich als die Aussaat Kammer verwendet. Dies hilft, um eine Kontamination aus der Luft-borne Staub zu reduzieren. Nach Ihrer Pflnzchen die Gre einer Erbse erreicht haben, haben Sie eine Auswahl an weiteren

Multiplikation in-vitro oder bertragen sie aus, um in regelmigen Boden wachsen. Wenn Sie Ihre Pflanzen weiter vermehren whlen, starten Sie den Prozess, indem einfach Ihre sterilem Material und bewegte sie in neue Medien. Auf jeder Stufe, knnen Sie in der Lage sein, die Anzahl der Kolben durch Erhhung ber 10 fache. Natrlich mssen alle Dissektion Arbeiten unter sterilen Bedingungen durchgefhrt werden. Ein Abzug mit laminarer Strmung wirklich ntzlich ist hier, wie das Pflanzenmaterial wird, um mgliche Verunreinigungen einen lngeren Zeitraum ausgesetzt werden. Wenn Sie gekonnt und schnell sind, kann es immer noch mit minimaler Ausrstung durchgefhrt werden.

Das Verschieben der Pflnzchen in regelmigen Boden


Der Schlssel zur erfolgreichen bertragung Ihrer in-vitro Pflnzchen in den Boden ist sehr whlerisch Abwaschen alle TC Medien aus den Wurzeln. Ich in der Regel setzen die Pflnzchen unter flieendem, lauwarmem Wasser und verwenden Sie die Kraft des Wassers grndlich aufzulsen off all die alten Medien. Wenn dies nicht geschieht, dann Formen unweigerlich ergreifen und zu berwltigen Ihre Pflanzen. Nach dem Auspflanzen, behandeln die Pflanzen die gleichen, wie sie noch in-vitro behandelt wurden. Eine Luftfeuchtigkeit Zelt mit einem Zip-Lock-Beutel aus helfen die Pflanzen akklimatisieren. Lassen Sie ihnen zu bleiben versiegelt fr eine Woche oder so. Sie knnen dann schrittweise zu ffnen Sie die Tasche im Laufe der weiteren Woche die Pflanzen verwendet werden, um niedrigere Luftfeuchtigkeit bekommen. Sobald sie "off gehrtet" richtig, knnen Sie sie wie jede andere Boden-gewachsene Pflanze zu behandeln.

Zusammenfassung der CP Tissue Culture Formeln und Referenzen:


Bitte entschuldigen Sie das technische Format dieser Liste. Es wird von der Familie und Gattung organisiert. Ein Groteil der Informationen ist hier durch Jan Schlauer, Andreas Wistuba, John Laroche und andere auf dem CP listserv Gruppe. Vielen Dank an dieser unerschrockenen Experimentatoren! In Fllen, wo es keine Formel aufgefhrt, knnen Sie versuchen, mit einer fr eine verwandte Gattung in der gleichen Familie. Other than that, sind Sie wahrscheinlich Neuland betreten. Bitte halten gute Aufzeichnungen und lassen Sie uns wissen, was Sie herausfinden! Sarraceniaceae {Dumort.} Darlingtonia {TORR.} Heliamphora {Benth.} 2/3 Knudsen C mit 0,1 mg / l NAA (gemeldet von Toby Marsden) Sarracenia {L.} 2/3 Knudsen C (*) mit BAP, ABA fr mult und Wurzel 1/6 MS, ist zweite Wahl Byblidaceae {DOMIN} Byblis {Salisb.} Sigmas modifizierten MS (1/2 x Makro-, 1 x Micro-) (M0153) + BAP, IBA manchmal Verglasung Probleme mit B.gigantea Bunn 1985. Australian Gartenbau. 83 (5): 103 Cephalotaceae {Dumort.}

Cephalotus {Labill.} Sigmas modifizierten MS (1/2 x Makro-, 1 x Micro-) (M0153) + BAP, IBA In-vitro-Vermehrung von Cephalotus follicularis (Australian Pitcher Plant). Hortscience 14, 521-513 Droseraceae {RASALISB.} Aldrovanda {L.} Dionaea {Soland. ex ELLIS} Hutchinson 1984. Scienta Horticulturae 22:189-194. Beebe 1980. Bot. Gaz.141 (4) :396-400. Parliman et al. 1982. J.Amer.Soc.Hort.Sci. 107 (2) :305-310. Parliman et al. 1982. J.Amer.Soc.Hort.Sci. 107 (2) :310-316. Keimung: 1/2 Strke MS Salze, voller Kraft minimal Organik, 100mg / l Casien, 100mg / l Inositol, 30000 mg / l Saccharose und 7 g / l Agar Ph bei 5,9 Replate Medium wie oben, jedoch mit 0,2 mg / l NAA und 5,0 mg / l 2iP. - John Laroche Drosera {L.} 2/3 Knudsen C (*) Janssens 1986. Med.Fac.Landbouww.Rijksuniv.Gent. 51 (1) :61-66. Anthony, J. (1992). In-vitro-Vermehrung von Drosera spp. Hortscience 27, 850. Jeff Welch berichtet ber gute Ergebnisse mit D.petiolaris-Komplex mit 1/4 MS Basalsalze plus Vitamine, 20g Saccharose und 6g / l Agar. Drosophyllum {(L.) LINK} Nepenthaceae {Dumort.} Nepenthes {L.} 2/3 Knudsen C (*) mit 0,2-2mg / l BAP fr mult. Rooting HORM nicht erforderlich. Andersons knnen ebenfalls verwendet werden (N. ephippiata mag). Highland: 1/3 MS Lowland nur: 1/2 MS, 20g / l Saccharose, 6g / l Agar. w / 0,1-0,2 BAP Multiplizieren w / 2 mg / L IBA Whlen Toby Marsden empfiehlt Zugabe von 0,1 mg / l NAA N. media Dioncophyllaceae {(engl. & Gilg) AIRY-SHAW} Dioncophyllum {Baill.} Habropetalum {AIRY SHAW} Triphyophyllum {AIRY SHAW} Lentibulariaceae {L.RICH.} Bill Carroll Medien (ICPN v11 n4 12/82, S. 93-96) 01.05 MS Genlisea {ST.HIL.} 1/5 MS G.pygmaea Pinguicula {L.} Adams et al. 1979. Hortscience 14 (6) :701-702. 1/5 ms, 30 g / l Saccharose, pH 5,8, Agar Utricularia {L.} Pringsheim & Pringsheim esp. fr Aquaristik Amer.J.Bot.49 :898-901 (1962) Carrols ist NUR fr groblttrige. sp: U.alpina, longifolia, calycifida * = Sie knnen 37,26 mg / l Na2EDTA und 27,8 mg / l FeSO4 x 7H2O hinzuzufgen. Andreas Wistuba empfiehlt, die MS-Vitamine Knudsen C Medium. Hinweis: Die meisten Medien sollten zubereitet mit Agar bei 6g / l und Saccharose bei 20 g / L.

IBA ist eine Abkrzung fr Indolbuttersure NAA ist eine Abkrzung fr Naphthylessigsure IAA ist eine Abkrzung fr Indolessigsure MS ist eine Abkrzung fr Murashige und Skoog Formel. Dies alles sind Wachstumsregulatoren zur Steuerung Whlen, Multiplikation, Kallusbildung, etc. Einige dieser Arten von Chemikalien sind potente Karzinogene und sollte mit grtem Respekt behandelt werden. Ich finde, dass fr Gelegenheitsspieler Hause TC, dass die meisten von ihnen sind nicht wirklich ntig. Sie sind fr wirklich beschleunigt Wachstum oder fr immer wegnehmen Vermehrung verwendet wird. Wenn Sie diese ausprobieren wollen, dann empfehle ich wirklich Eintauchen in Lydian Kyte Buch vor Beginn.

Allgemeine Hinweise:
1. Das Erreichen der sterilen Zustand fr zu Hause Gewebekultur, Teil I, Brian Johnson, CPS Journal 14, 18-19. 2. Das Erreichen der sterilen Zustand fr zu Hause Gewebekultur, Part II, Brian Johnson, CPS Journal 16, 9-10. 3. Gewebekultur von fleischfressenden Pflanzen in Oxford. Steve Woodward et al. CPS Journal 15, 16-19. 4. Gewebekultur von fleischfressenden Pflanzen. Gareth Davies et al. CPS Journal 12, 17-20. 5. In-vitro-Vermehrung des Fettkraut Pinguicula moranensis Richard Adams et al. Hortscience 14 (6), 701-702. 6. "In-vitro-Vermehrung von D. natalensis". S. Afr. J. Bot. 54 (1) :94-96 1988. Autoren: Crouch, IJ und Van Staden. 7. Tisserat et al. (1992). Mikrowelle Sterilisation von Pflanzengewebe Kulturmedien. Hortscience 27, 358-361. 8. RLM Pierik: In-vitro-Kultur von hheren Pflanzen Kluwer Academic Publishers, PO Box 358, Accord Station, Hingham, MA 02018-0358 (ISBN 90-247-3531-9), broschiert 9. Hutchinson 1984. Scienta Horticulturae 22:189-194 (Dionaea) 10.Beebe 1980. Bot. Gaz.141 (4) :396-400 (Dionaea) 11.Parliman et al. 1982. J.Amer.Soc.Hort.Sci. 107 (2) :305-310 (Dionaea) 12.Parliman et al. 1982. J.Amer.Soc.Hort.Sci. 107 (2) :310-316 (Dionaea) 13.Janssens 1986. Med.Fac.Landbouww.Rijksuniv.Gent. 51 (1) :61-66 (Drosera) 14.Bunn 1985. Australian Gartenbau. 83 (5): 103 (Byblis) 15.Rathore et al. 1991. J.PlantPhysiol. 139:246-248 (Nepenthes) 16.Adams et al. 1979. Hortscience 14 (6) :701-702. (Pinguicula) 17.RA Dixon: Plant Cell Culture - A Practical Approach IRL Press Inc., PO Box Q, McLean, VA 22101-0850 ISBN 0-947946-22-5 Taschenbuch 18.Methods in Plant Tissue Culture von Paul J. Bottino, 1981, 72 Seiten. 19.Versuche ber Pflanzen-Gewebekultur von John H Dodds und Lorin W. Roberts, 1993 (2nd Ed.), 232 Seiten. 20.Einfhrung in die In-vitro-Vermehrung durch Donald Wetherell, 1982, 87 Seiten. 21.Carolina Biological Supply hat 3 Bcher ber Pflanzen TC. Ihre _800_ Nummer 1-800-3345551 22."Pflanzen aus Reagenzglser - Third Edition" von Lydian Kyte und John Kleyn, (ISBN 088192-361-3) verffentlicht von Timber Press , 133 SW Second Avenue, Suite 450, Portland Oregon, 97204-3527, USA (503) 227-2878, (800) 327-5680 (Bestellung Stunden MF 8.00 bis 17.00 Uhr, Sa 8.00-Mittag, Pazifische Zeit), per Fax (503) 227-3070 E-MailBestellungen an: orders@timber-press.com. - Der Preis ist US: $ 29,95, Kanada: C $ 41,95,

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