RECUENTO DE PROBITICOS EN PRODUCTOS LCTEOS

RESUMEN: El yogurt es un alimento funcional al contener cierta clase de probiticos, que son microorganismos vivos que, cuando se consumen pueden mejorar el equilibrio microbiano de la flora bacteriana intestinal. Entre los probiticos importantes se encuentran los Bifidobacterium Bb-12 y Lactobacillus acidophilus (lactobacillus bulgaricus y streptococcus thermophilus). Para la identificcin de estos probiticos se realiz 6 diluciones las cuales fueron sembradas en agar MRS, medio selectivo para microorganismos lcticos, luego se aadi clorhidrato de clindamicina para el recuento de lactobacillus, Posteriormente las siembras se incubaron en anaerobiosis a 35c/ 24h. Pasado las 24h se procedi a la identificacin de colonias mediante el aislamiento de cepas, las cuales se ti con coloracin de gram

Palabras claves: Probiticos, Bifidobacterium, lactobacillus acidophilus, bulgaricus, thermophilus, clindamicina INTRODUCCIN: OBJETIVOS: El yogur es un producto lcteo obtenido mediante la fermentacin bacteriana de la leche. Si bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la produccin actual usa predominantemente leche de vaca.. A menudo, se le aade fruta,vainilla, chocolate y otros saborizantes, pero tambin puede elaborarse sin aadirlos; en algunos pases se conoce al de sabor natural. El yogurt es un alimento suave, viscoso de sabor propio, con una nica estructura proteica o gel dbil caractersticas que son desarrolladas durante la fermentacin de la leche por bacterias cido lcticas. Este producto lcteo se conoce de muchas maneras . No se sabe con exactitud el origen de de este producto, pero existe la creencia mundial acerca de sus efectos beneficiosos en la salud y nutricin humana. (Tamime y Robinson, 1991) Las cualidades nutrimentales del yogurt no solo vienen de la leche, sino tambin de la transformacin de estos como resultado de la actividad metablica causada por la fermentacin de los

microorganismos. Cultivos como Strptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus, que son microorganismos no mucognicos se emplean en proporciones iguales, y tien temperaturas ptimas entre 38-44c y entre 41-42c, repectivamente (Valderrama J. 2001) Prbiotico es un trmino de reciente utilizado que se aplica a productos obtenidos por fermentacin con microorganismos benficos para la salud.(Hernndez A. 2005). Las bacterias que contienen los yogurts con Probiticos recargan la barrera de proteccin que tiene el intestino para evitar el paso sustancias extraas hacia la sangre). Esta barrera conformada por bacterias que son inucuas para los seres humanos), tambin favorecen la digestin y los movimientos gstricos naturales. Agar MRS se utiliza para el crecimiento y recuento de los cultivos de Lactobacillus MATERIALES Y MTODOS: Siembra MRS:

en los productos lcteos y otros productos alimenticios. La peptona y glucosa constituyen la fuente de nitrgeno, carbono y de otros elementos necesarios para el crecimiento bacteriano. El monoleato de sorbitn, magnesio, manganeso y acetato, aportan cofactores y pueden inhibir el desarrollo de algunos microorganismos. El citrato de amonio acta como agente inhibitorio del crecimiento de bacterias Gram negativas. El medio puede ser usado para cultivar lentamente cultivo de lactobacilos tales como los microorganismos ya mencionados. Este agar debe utilizarse a un pH de 5,7 (Pascual M) El objetivo de esta prctica es Enumerar bifidobacterias y lactobacilos en productos lcteos fermentado e Identificar la morfologa de las bacterias probiticos por medio de la tincin de gram, para finalmente interpretar los resultados

Tomando todas las medidas de asepsia necesarias se tomaron 10 ml de muestra y se prepararon seis diluciones (10-1 a 10-6) utilizando agua buferada estril como diluyente. Para la siembra se utilizaron las tres ltimas diluciones (10-1, 10-2y10-3) y se sembr por duplicado, para esto se coloc 1ml de cada dilucin en las cajas utilizando diferentes pipetas para evitar contaminacin. Posteriormente se aadi el agar templado a 45C en las 7 cajas incluido el blanco que no contiene muestra. Una vez solidificado se adicion 0.75 ml de clorhidrato de clindamicina para el recuento de Lactobacillus. Finalmente se coloca las cajas de forma invertida en la jarra de anaerobiosis e incubar a 31C por 3 das Identificacin y Tincin de Gram Primeramente se realiza un aislamiento de cepas, observando y seleccionando la caja donde tenga las colonias ms separadas. Con el asa previamente esterilizada se toma una colonia y

se la fija en un porta objetos obteniendo una capa fina para una mejor observacin. Una vez seca y fijada la preparacin, se procede a su tincin y posterior observacin

RESULTADOS Y DISCUSIN: Despus de los das requeridos de incubacin se observ el crecimiento de microorganismo, para el contaje de bacterias lcticas en cajas Petri se identificaron escasas colonias pequeas redondas y cremosas, Al presentar esta morfologa se puede decir que se trata de colonias lactobacillus. En la observacin al microscopio se observ que eran bacilos gram positivos por lo cual, pertenece al grupo de los Lactobacillus, L. vulgaricus. El gnero Lactobacillus est formado por bacterias Gram positivas de forma bacilar que suelen forman largas cadenasy producen cido lctico como metabolito principal (son homofermentativas) (Hernndez A. 2005)

Muestra

Resultado 3.2x10-8UFC/g NPM/g

Norma referencial

Yogurt Toni (normal) Yogurt Toni (normal) 1.1x107UFC/g Yogurt Toni (vivaly) 3.0x108 UFC/g 7.0x105 UFC/g 3.3x108UFC/g 3.7x108UFC/g 1.3x108UFC/g 10 -6-10-7

Yogurt Toni (vivaly) Yogurt Alpina (regeneris bebible) Yogurt Alpina (regeneris bebible) Yogurt Chivera

Las muestras que presentan un recuento de colonias mayor a la 10 7 ; yogurt toni normal, yogurt toni normal con antibitico, yogurt toni vivavly, ypgurt alpina, yogurt alpina con antibitico y la muestara siete. Estas muestras al contener un nmero elevado de bacterias se dice que su funcionamiento probitica es mejor. Como lo cita la revista scielo No hay acuerdos generales en cuanto a la concentracin mnima necesaria del probitico para alcanzar ventajas teraputicas. Algunos investigadores sugieren niveles de concentracin mayores a 10-6ufc/ml, otros estipulan concentraciones mayores a 10 -7ufc/ml y 10-8ufc/ml como niveles satisfactorios (Kailasapathy y Rybka, 1997; Lourens-Hattingh y Viljeon, 2001, Kurmann y Rasic, 1991)

CONCLUSIONES: Se pudo realizar el recuento de microorganismos lcticos, habiendo crecimiento de de lactobacilos Se identific

El objetivo de esta prctica es Enumerar bifidobacterias y lactobacilos en productos lcteos fermentado e Identificar la morfologa de las bacterias probiticos por medio de la tincin de gram, para finalmente interpretar los resultados

RECOMENDACIONES: Se debe esterilizar correctamente la superficie de trabajo al igual que los materiales y el empaque de la muestra, adems se recomienda que se trabaje con un mechero encendido para conservar la esterilidad. Para una mejor obtencin e interpretacin de resultados se debe realizar la siembra de cada una de las diluciones por duplicado Cuando se realice la adicin de la sobre capa en el cultivo en cajas Petri, tener cuidado de no mojar la tapa de la caja con el medio de cultivo.

Bibliografa

Tamime, Robinson. Yogurt. 1991 Valderrama j. Propiedades y caractersticas de yogurt. Centro de informacin Tecnologica. 2001. Edicin 71

Hernnadez A. Prebiticos. Microbiologa Industrial. 2005. Pacual M. Microbiologa Alimentaria. Metodologa Analtica para Alimentos y Bebidas. 2 Edicin. J.A. Ruiz Rivera J.A. Ramrez M. Scielo revista facultad de agronoma. Elaboracin de yogurt con probiticos (Bifidobacterium spp. yLactobacillus acidophilus) e inulina. 2009 Fuente: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S037878182009000200006&script=sci_arttext

ANEXOS Muestra Placa 10-4 TNTC TNTC 10-5 TNTC TNTC Estimado 10-6 318 325 Contaje reportado NMP/g 3.2x108UFC/g Estimado

Yogurt Toni A (normal) B

Muestra Yogurt Toni (normal) Muestra

Placa A B Placa

10-4 111 112 10-4

10-5 19 18 10-5

10-6 2 4 Estimado 10-6

Contaje reportado 1.1x107UFC/g

Contaje reportado NMP/g

Yogurt Toni (vivaly Muestra Yogurt Toni (vivaly) Muestra Yogurt Alpina (regeneris bebible

A B Placa A B Placa A B

TNTC TNTC 10-4 93 0 10-4 TNTC TNTC

TNTC TNTC 10-5 5 8 10-5 TNTC TNTC

347 262 10-6 0 0 10-6 295 310

3.0x108 UFC/g

Contaje reportado NMP/g 7.0x105 UFC/g

Contaje reportado NMP/g 3.3x108UFC/g

Muestra Yogurt Alpina (regeneris bebible)

Placa A B

10-4 TNTC TNTC

10-5 TNTC TNTC

10-6 394 358

Contaje reportado NMP/g 3.7x108UFC/g

Muestra Yogurt Chivera

Placa A B

10-3 TNTC TNTC

10-4 TNTC TNTC

10-5 1500 1260

Contaje reportado NMP/g 1.3x108UFC/g

TCNICA PARTICULAR DE LOJA La Universidad Catlica de Loja UNIVERSIDAD