UNICENTRO

Roteiro de Aula Prtica

Fisiologia Vegetal

AULA 2 . NITRATO E NITRITO REDUTASE DE PLANTAS

INTRODUO Organismos fotossintticos eucariticos (vegetais superiores e algas verdes) obtm a maior parte do seu nitrognio a partir do nitrato (NO3-). A primeira etapa na assimilao do nitrato sua reduo a nitrito (NO2-) pela enzima nitrato redutase (NR). Posteriormente, por ao da enzima nitrito redutase (NiR), o nitrito reduzido a amnia, a qual ento incorporada em aminocidos, protenas e cidos nucleicos.

Nas plantas superiores e nas algas verdes o doador de eltrons para a reduo de NO3- a nicotinamida adenina dinucleotdeo reduzida (NADH), enquanto que nas algas cianofceas o doador a ferredoxina reduzida (Fd rd). O doador de eltrons fisiolgico para a reduo do nitrito a amnia a ferredoxina reduzina, formada na fase luminosa da fotossntese. Portanto, a reduo de NO2- a NH3 est diretamente acoplada com as reaes luminosas da fotossntese. A atividade na nitrato redutase no tecido foliar induzida pela luz e pelo nitrato e varia em funo do estgio de expanso da folha, sendo mxima quando a folha atinge sua total expanso, declinando com a maturao ou envelhecimento da folha. Alm disso, as variaes da atividade da nitrato redutase durante o ciclo vegetativo tm sido demonstradas em plantas de importncia agrcola como o feijo. A atividade da nitrato redutase pode ser determinada dosando-se o nitrito formado, atravs da reao de Griess-Ilosvay:

OBJETIVOS Demonstrar a atividade das enzimas nitrato e nitrito redutase, as quais permitem a assimilao do nitrognio pelas plantas.
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Fisiologia Vegetal

PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS REAGENTES REAGENTE 1: cido sulfanlico, cido actico e gua destilada REAGENTE 2: alfa-naftilamina e etanol

MATERIAL VEGETAL 1. 400 mg de folhas de uma gramnea recm colhida cortadas em quadrados de ~4mm

MONTAGEM DO EXPERIMENTO 2. Adicionar a dois tubos de ensaio (tubo de claro e tubo de escuro): - 2,5 mL de soluo tampo fosfato pH 7 - 1,5 mL de soluo de KNO3 100 mmol/L - 200 mg de folhas cortadas 3. Envolver completamente um dos tubos de ensaio com papel alumnio para que a reao enzimtica ocorra no escuro 4. Incubar ambos os tubos em banho-maria a 30C por 45 minutos 5. Transferir uma alquota de 1 mL da soluo de cada tubo para novos tubos de ensaio devidamente identificados (claro e escuro) 6. Adicionar 2 gotas do REAGENTE 1 em cada tubo e homogeneizar 7. Adicionar 2 gotas do REAGENTE 2 em cada tubo e homogeneizar 8. Incubar os tubos de reao a 30C por 15 minutos 9. Analisar a variao da colorao nos tubos (claro e escuro)

Tubos Claro Escuro

Intensidade da cor resultante

OBS.: O relatrio deve conter as informaes do roteiro de prtica e deve seguir o modelo de relatrio que se encontra na Internet (www.wix.com/francolodi/francolodinarede), com Introduo, Objetivos, Material e Mtodo, Resultados e Discusso, Concluso, Referncias. 2