ELIMINACIN DE SALICILATOS EN EL HOMBRE. INFLUENCIA DEL PH URINARIO EN LA ELIMINACIN DE ALGUNOS FRMACOS.

Resumen Durante la prctica se llev a cabo la cuantificacin de cido acetilsaliclico (AAS) en tres grupos de muestras de orina colectadas a intervalos de 20 minutos (Tiempo mximo de evaluacin 80 minutos), provenientes de un grupo control al que se administr 250 mg de aspirina, un grupo acidtico que adems de aspirina consumi bicarbonato sdico y un ltimo grupo alcaltico al que se administr el frmaco y cloruro de amonio, lo anterior a fin de conocer la influencia del pH urinario en el aclaramiento renal. La cuantificacin del AAS se realiz mediante un mtodo colorimtrico y posterior deteccin en espectrofotmetro UV-Vis a 540 nm. Como resultado se encontr que el grupo alcaltico presenta una mayor tasa de eliminacin del frmaco en estudio frente al grupo de control y el grupo acidtico. Palabras Clave: cido acetilsaliclico, eliminacin renal, pH urinario, Cloruro de amonio, Bicarbonato de Sodio. Abstract During the practice was made the quantification of acetylsalicylic acid (ASA) in three groups of urine samples collected at intervals of 20 minutes (the maximum time of evaluation was 80 minutes), from a control group who took 250 mg of aspirin, a group "acidotic" in addition to aspirin consumed sodium bicarbonate and a final group "alkalotic" who took the drug and ammonium chloride, the above in order to determine the influence of urinary pH on renal clearance. The quantification of ASA was carried out using a colorimetric method and subsequent detection at 540 nm in a UV-Vis spectrophotometer. As a result it was found that the group "alkalotic" has a higher elimination rate of study drug compared to the control group and the group "acidotic". Keywords: Acetylsalicylic acid, renal elimination, urinary pH, ammonium chloride, sodium bicarbonate

1. Marco terico La excrecin junto con el almacenamiento y la biotransformacin o metabolismo de frmacos es otro de los mecanismos que contribuye a la terminacin del efecto farmacolgico. Adicionalmente, la mayor parte de la excrecin y eliminacin de medicamentos como tales o como sus metabolitos se realiza por el rin a travs de la orina, y en menor grado por la bilis, intestino, saliva y leche materna; en el caso de gases y productos voltiles, la eliminacin ocurre por los pulmones.

El rin, en condiciones normales, es el rgano especializado para retener las sustancias que le son tiles al organismo y para desechar lo que le es innecesario y txico, incluyendo frmacos y metabolitos. El rin recibe a travs de las arterias renales que son cortas y gruesas un flujo sanguneo muy abundante (equivalente al 25% del gasto cardiaco). Los capilares del glomrulo tienen poros grandes lo que hace que sea una estructura ms permeable a los solutos, gracias a esta propiedad los frmacos se eliminarn por filtracin glomerular si su tamao molecular no es muy grande, si no estn unidos a protenas como albumina. (1)

Estas caractersticas permiten que se filtren en la Capsula de Bowman del glomrulo renal de 100-130ml/min de plasma o 180 L/ da, de este volumen solo se eliminan por medio de la orina 1.5-2 L/da, junto con numerosos metabolitos y frmacos, el resto de agua se reabsorbe en los tbulos renales. As el rin y el hgado son los principales rganos implicados en la eliminacin de frmacos, ya que son los lugares en donde tienen lugar la excrecin renal y la depuracin heptica, lo que permite un aclaramiento paulatino de los principios activos del plasma. (2) 2. Objetivos Estudiar la ltima etapa del proceso ADME a la que es sometido el frmaco una vez ingresa el cuerpo. Entender como ocurre el proceso de eliminacin del AAS, a la vez que se cuantifica el frmaco presente en muestras de orina colectadas a distintos intervalos de tiempo. Identificar como el pH sanguneo influye en el grado de ionizacin del AAS y as en su eliminacin por la orina. Corroborar experimentalmente que valor de pH favorece la eliminacin del frmaco o la reabsorcin de ste, analizando las implicaciones farmacocinticas en cada caso. 3. Metodologa Se realizaron distintos grupos de trabajo, en cada grupo hubo presencia de un voluntario quin debi reunir ciertos requisitos entre ellos, consumir un volumen de 600 mL de agua y no haber realizado miccin dentro de las 12 horas antes del experimento; carecer de problemas gastrointestinales, fallas renales, intolerancia a salicilatos o AINEs o

administracin de stos dentro de las ltimas 12 horas; a fin de corroborar lo anterior as como la participacin voluntaria se recurri a diligenciar un formato de consentimiento informado. Antes de iniciar el ensayo cada voluntario elimin todo el volumen de orina. Tras ello cada uno tom media tableta de aspirina de 500 mg en un volumen igual al orinado, consecuentemente un nmero de los voluntarios se designa como grupo Alcaltico, otros como grupo Acidtico y se cuenta igualmente con un grupo Control, el primer grupo consumi 10 g de bicarbonato sdico, el segundo 3 g de cloruro de amonio y el ltimo solo agua. A partir de lo anterior se colect la orina a los 20, 40, 60 y 80 minutos, en cada caso se midi el volumen y pH; se tom una muestra para medir el salicilato presente despus de transcurrido cada intervalo de tiempo y a cada una de las muestras se adicion 8 mL de HCl, se agitaron y posteriormente fueron tomados 5 ml de cada una a los que se agreg 1 mL del reactivo de Trinder. Se realiz su lectura en el espectrofotmetro a 540 nm empleando como blanco la muestra tomada a los 20 minutos, denominada basal.

4. Clculos y Resultados
Tabla 1: Concentraciones y absorbancias tericas.

Concentraci n (ppm) 50 100

Absorbancia 0,082 0,165

200 600

0,333 0,99
T0 T1 T2 T3 0,88 19,63 40,25 4,21 7,07 11,35 4,208 11,273 22,623 1,683 4,509 9,049

Tabla 2.b.: Datos obtenidos grupo control.

Resultados respecto a prueba con cloruro de amonio: Se emplearon los datos del grupo conformado por Paola Achpiz y Jully Londoo.
Tiemp o (min) 0 T0 T1 T2 20 40 60 80 670 30 25 25 6,46 5,13 4,96 5,02 Blanco 0,038 0,106 0,143 Volume n (mL) pH ABS (540 nm)

Figura 1: Curva de calibracin de salicilatos.

Por tanto: Pendiente (M)= 0.0016 Intercepto (B)= 0.0006 Se procede a realizar correspondientes: los clculos

T3

Tabla 3.a.: Datos obtenidos grupo acidtico: ASA ms cloruro de amonio.

Concentrac in mg/L

Concentra cin (g/ml)

Resultados control:

respecto

al

grupo
T0

Cantida d acumul ada (g)

% salicilat o elimina do

Tiempo (min) 0 T0 T1 T2 T3 20 40 60 80

Volume n (mL)

pH

ABS (540 nm)

T1 T2 T3

23,38 65,88 89,00

4,21 9,88 13,35

4,21 14,09 27,44

1,683 5,636 10,976

270 140 60 47

6,93 6,94 6,82 6,8

Blanco 0,002 0,032 0,065

Tabla 3.b Datos obtenidos grupo acidtico: ASA ms cloruro de amonio.

Resultados respecto a prueba con Bicarbonato de sodio: Se emplearon los datos del grupo conformado por Diana Martnez y Diana Caldern.
Tiemp o (min) Volum en (mL) pH ABS (540 nm)

Tabla 2.a.: Datos obtenidos grupo control.

Concentra cin (g/ml) Cantida % d salicilat acumul o ada elimina (g) do

Concentrac in mg/L

0 T0 T1 T2 T3 20 40 60 80 350 30 40 28 5.98 7.32 7.97 8.03 Blanco (0,081) 0,081 0,169 0,224

Tabla 4.a.: Datos obtenidos grupo alcaltico: ASA ms bicarbonato de sodio. Figura 4: Variacin de PH respecto al tiempo.

Concentrac in mg/L

Concentra cin (g/ml)

Cantida d acumul ada (g)

% salicilat o elimina do

Muestra de clculo (Tiempo 40 min) Concentracin de salicilato (mg/L): Al realizar la curva de calibracin con los datos mostrados en la tabla 1, hallando el valor de la pendiente, del intercepto y conociendo el valor de absorbancia de la muestra, se despeja de la ecuacin de la recta la variable X que corresponde a la concentracin de salicilato presente. Ecuacin de la recta: Y= mx + b (1)

T0 T1 T2 T3 50,25 105,25 139,63 9,05 25,26 23,46 9,05 34,31 57,76 3,618 13,722 23,105

Tabla 4.b.: Datos obtenidos grupo alcaltico: ASA ms bicarbonato de sodio.

0.038= 0.0016x + 0.0006

Figura 2: Porcentaje eliminado con el tiempo.

de

salicilato

x = 23,375 mg/L Para hallar la concentracin microgramos por mililitro: en

Figura 3: Concentracin de Salicilato acumulado respecto al tiempo.

Para el clculo anterior se tuvieron en cuenta las diluciones realizadas, es decir 2 ml de la muestra de orina con 8 ml de HCl factor (2/10); el segundo factor (5/6) corresponde a los 5 ml del filtrado con 1 ml del reactivo de Trinder. Para el clculo de la cantidad acumulada en g de salicilato, se tiene en cuenta los microgramos obtenidos a razn del tiempo y se hace la sumatoria: Cantidad acumulada (g) = 4.2075 g + 0g = 4.2075 g Para el clculo del porcentaje de salicilato eliminado, se tiene en cuenta la cantidad acumulada de salicilato que se est eliminando a medida que pasa el tiempo con respecto a la dosis de 250 mg de aspirina consumida:

5. Anlisis de Resultados Durante la prctica el objeto de estudio fue la eliminacin del cido acetilsaliclico, un frmaco perteneciente al grupo de los AINE, as como la influencia del pH urinario en dicho proceso. Antes de entrar a evaluar los resultados obtenidos, es de relevancia tener presente que la eliminacin farmacolgica consiste en la desaparicin irreversible de un frmaco presente en el organismo y que depende de dos procesos, metabolismo y excrecin. El primero hace referencia a la conversin enzimtica de una sustancia qumica en otra diferente en el organismo, mientras que la excrecin es la eliminacin del cuerpo de un frmaco sin cambios qumicos o de sus metabolitos; la mayora de los frmacos

abandonan el cuerpo con la orina bien sea sin modificaciones o en forma de metabolitos polares, dado que los riones no eliminan bien las sustancias lipfilas (3). La velocidad con la que son excretados los frmacos es muy variante pero la mayora de los frmacos se sitan en un punto intermedio y casi siempre los metabolitos se excretan con mayor rapidez que el frmaco original. La excrecin renal depende de tres etapas esenciales: Filtracin glomerular, secrecin tubular y difusin pasiva a travs del tbulo renal; en la primera etapa, los capilares glomerulares dejan que las molculas de frmaco con peso molecular menor de 20.000 difundan al filtrado glomerular, as aunque la mayora de frmacos atraviesan sta barrera, los frmacos que se unan a protenas plasmticas (peso elevado), estarn en una concentracin en el filtrado menor a la concentracin plasmtica total. Dado que cerca de un 20% del flujo renal se filtra, entonces el 80% del frmaco que se deja pasar llega a los capilares peritubulares del tbulo proximal y all son transportados a la luz tubular, debido a la cantidad de frmaco que se somete a ste proceso, la secrecin tubular es el mecanismo ms eficaz de eliminacin renal y logra el mximo aclaramiento1 (4). Por ltimo cuando el filtrado glomerular atraviesa el tbulo, se reabsorbe agua y el volumen de orina resultante es solo el 1% del filtrado, as si el tbulo deja pasar libremente las molculas de frmaco, entonces la concentracin del frmaco en el filtrado estar en valores parecidos a los del plasma y prcticamente la mayora del frmaco se reabsorber, asi puede decirse que los frmacos liposolubles se excretaran lentamente mientras que los muy polares de baja permeabilidad tubular permanecern en el tbulo y su concentracin se incrementar de
1

La eliminacin del frmaco por los riones se expresa de forma ms adecuada por medio del aclaramiento renal, que se define como el volumen de plasma que contiene la cantidad de sustrato que elimina el rin por unidad de tiempo.

forma progresiva a medida que el agua se reabsorbe. Conociendo lo anterior es posible explicar el comportamiento obtenido en cuanto a la concentracin de frmaco eliminado tras la alcalinizacin y acidificacin de la orina. Primero debe decirse que al consumir cloruro de amonio o en el otro caso bicarbonato de sodio es claro que el pH del plasma se modifica ligeramente y el rin responde ante ese cambio, modificando la concentracin de H+ en el flujo urinario, lo que hace que vare el pH de la orina. El grado de ionizacin de frmacos que son bases o cidos dbiles como es el caso del AAS varia con el pH, lo que influye en la excrecin renal. En condiciones normales el pH de la orina se encuentra en un rango de 5-8, pero debido a que las clulas tubulares como se mencion son menos permeables a las formas ionizadas de los frmacos, cuando la orina tubular es cida predomina la fraccin ionizada de los frmacos bsicos y se favorece su eliminacin (5), pero cuando la orina tubular se torna alcalina (por ejemplo tras la administracin de bicarbonato de sodio), prevalece la forma ionizada de los frmacos que son cidos dbiles y stos son excretados ms fcil. Lo anterior puede entenderse tambin de acuerdo al efecto de atrapamiento inico que plantea que un frmaco alcalino se excreta con ms rapidez en una orina cida, ya que el pH tubular favorece la ionizacin y por tanto inhibe la reabsorcin, mientras que frmacos cidos se excretan de un manera ms rpida si la orina es alcalina (6). As el consumo de agentes alcalinizantes o acidificantes como ocurri en la prctica puede verse como una opcin para promover la eliminacin y acelerar la excrecin del ASA como ocurri con el consumo de bicarbonato de sodio, de hecho esto suele ser muy usado para el tratamiento de casos de sobredosis o intoxicacin.

Figura 5: Reparto terico acetilsaliclico (pKa 3.5).

de

cido

Adems del pH de la orina, el pKa del frmaco tambin es importante frente a la ionizacin de los frmacos, as para el caso del AAS que tiene un pKa de 3.5, que se encuentra en el plasma a un pH de 7.4 y finalmente llega a la orina, puede decirse de acuerdo a la ecuacin de Hendersson-Haselbach (ecuacin 2), que en el plasma predomina la forma ionizada del AAS y al llegar a la orina que igualmente tiene un pH por arriba de su pKa, contina prevaleciendo su forma ionizada lo que como ya se ha dicho promueve su excrecin renal. (2) En la prctica, como se describi en la metodologa, se cont con un grupo control que consisti en muestras de orina colectadas en intervalos de 20 minutos, ste grupo se designo como de control dado que el voluntario solo consumi los 250 mg de aspirina con un vaso de agua, a diferencia de los otros dos grupos donde adems se consumi cloruro de amonio (agente acidificante) y bicarbonato de sodio (alcalinizante), respecto a los resultados obtenidos, primero debe decirse que puede evidenciarse en el grupo control que el pH urinario varia muy poco es casi constante, mientras que en los otros grupos se nota un descenso y un aumento progresivo conforme el tiempo, respectivamente (fig. 4). Puede observarse (Tabla 2-4) que la concentracin de frmaco al cabo de los

80 min fue superior en el grupo alcaltico donde se obtuvo una concentracin de 23.46 g/ml, seguido del grupo acidtico donde la concentracin fue de 13.35 g/ml y por ltimo el grupo control de 11.35 g/ml, as puede corroborarse el hecho de que alcalinizacin de la orina favorece la excrecin renal del ASA y de ah que la concentracin de frmaco que se elimin en ese intervalo sea mayor, en la figura 2 y 3 puede observarse una curva un poco ms pronunciada en comparacin con la curva que da referencia de la eliminacin en condiciones normales, as la manipulacin del pH urinario se refleja en la cantidad de frmaco excretado. Otro aspecto a considerar es que conforme transcurre el tiempo, la concentracin o cantidad de frmaco se incrementa en la orina, ello puede explicarse dado que el frmaco una vez ingresa al organismo est sujeto a una serie de procesos consecuentes, de los cuales la eliminacin es el paso final, por tanto debe pasar un tiempo el cual es variable de un frmaco a otro antes de que el frmaco empiece a ser eliminado. El AAS se hidroliza con rapidez por accin de esterasas (principalmente en el higado) para transformarse en salicilato, parte de ste salicilato se oxida, una parte se conjuga para convertirse en glucornido o sulfato, antes de excretarse y el 25 % se excreta sin sufrir modificacin. La semivida plasmtica del AAS depende de la dosis y del pH urinario aunque a modo de tener una referencia se ha establecido que es cerca de 30 minutos o puede variar de 2-3 horas (7) de acuerdo a las condiciones o factores dichos, lo que es muy razonable, si se tiene presente ](como pudo evidenciarse) que durante los primeros 20-30 min la concentracin de frmaco es relativamente baja y que ya tiempo despus los cambios de concentracin comienzan a ser ms marcados. Por ltimo debe decirse en cuanto al mtodo empleado para la determinacin de la concentracin de

AAS en muestras, que fue un mtodo sencillo, que mostr resultados significativos, viables y acordes a lo reportado en la literatura respecto a la influencia del pH en el proceso de eliminacin. Cabe aclarar que aunque la idea de la prctica era obtener distintos resultados (producto de diferentes muestras de cada grupo) y realizar un promedio, lo que sera ms representativo, se presentaron inconvenientes al momento de colectar las muestras de orina, pues algunos voluntarios solo estuvieron en capacidad de orinar los primeros 40 minutos, cuando an la concentracin de salicilato presente en orina no era suficiente, no obstante los datos con que se trabajaron permitieron mostrar el comportamiento esperado. 6. Conclusiones Se obtuvieron resultados propios y conforme lo reportado tericamente en cuanto a la influencia del pH en la excrecin renal del AAS, lo que fue producto del mtodo empleado y del buen trabajo en laboratorio. Se confirm que cuando se alcaliniza el pH urinario se favorece la eliminacin de salicilatos en comparacin a cuando se acidifica.

Se identific que la variacin del PH

(en plasma y en orina) afecta de manera significativa la cantidad de frmaco eliminado, adems de reconocer que este proceso de eliminacin va de acuerdo a una cintica de primer orden y es proporcional a la concentracin plasmtica del frmaco.

El pH urinario al igual que el pKa del

frmaco son factores determinantes en la ionizacin de ste y por tanto en su excrecin renal, conceptos como el efecto del atrapamiento inico permiten entender la importancia e influencia de dichos factores. 7. Referencias

(1) MENDOZA PATIO, N. (2008) Farmacologa Mdica. Editorial Panamericana. Pg. 90-91. (2) ROSEMBAUM, S. (2011). Pharmacokinetics and Pharmacodynamics New Jersey: John Wiley & Sons, Inc. Canad. (3) Rang y Dale. (2008) Farmacologa. Sexta Edicin. Elsevier. Espaa. pg.113 (4) Rang y Dale. (2008) Farmacologa. Sexta Edicin. Elsevier. Espaa.pg.118-120 (5) MENDOZA PATIO, N. (2008) Farmacologa Mdica. Editorial Panamericana. Pg. 92 (6) Rang y Dale. (2008) Farmacologa. Sexta Edicin. Elsevier. Espaa. pg.101 (7) http://www.seup.org/seup/html/gtrabajo /manualIntoxicaciones/capitulo09.pdf. Visitado Marzo 18 2012 Otras referencias: -VELZQUEZ. (2008) Farmacologa Bsica y Clnica.18 Edicin. Editorial panamericana. Buenos aires. -http://www.dclmexico.com/espa %F1ol/salicilato_sl.pdf