Universitatea tefan cel Mare,Suceava Facultatea de Inginerie Alimentara Specializare: Controlul i expertiza produselor alimentare Aditivi i ingrediente n industria

alimentar

Profesor coordonator: as. Drd. Ing. Oroian Mircea Student: Cdere Adelina-Cristiana, An IV,Grupa II D

Suceava 2013

Cuprins:

Generaliti...3 Colorant natural antrachinonic : Carminul de coenil-Rspndire4 Istoric...4 Producia de coenil6 Procesul industrial7 Proprieti fizice i chimice..8 Impactul asupra sntii..9 Utilizri...10 Edulcorant sintetic cu putere mare de ndulcire: Acesulfam K Structur chimic....11 Proprieti fizice i chimice....11 Impactul asupra sntii12 Utilizri...13 Studiu de caz.......14 Bibliografie.25

GENERALITI
2

Aditivii alimentari sau E-urile sunt substanele care nsoesc aproape orice produs aflat n galantarele magazinelor, ele au sau nu valoarea nutritiv sunt folosite la prepararea unor alimente n scopul mbunatairii calitaii acestora sau pentru a permite aplicarea unor tehnologii avansate de prelucrare. Utilitatea acestor aditivi alimentari este c ei menin calitatea i sigurana produselor o perioad mai mare de timp, menin sau mbunataesc gustul produselor, asigura controlul aciditaii i a alcalinitaii produselor, menin consistena produselor de asemenea mai menin aroma sau culoarea produselor.E-urile reprezint codificarea unor aditivi alimentari, a caror utilizare a fost permis (din punct de vedere al siguranei alimentare) n rile Uniunii Europene i n rile care au aderat la acest sistem de codificare. La ora actual sunt peste 20 de tipuri de aditivi alimentari cum ar fi, conservani, antioxidani, acidifiani, corectori de aciditate, emulsificatori, gelifiani, stabilizatori, ageni de ngroare, potenatori de arome, antiaglomerani, ndulcitori, colorani, ageni de afnare, ageni de glazurare, ageni de ntarire, sruri de topire, ageni de ncarcare, amidon modificat, gaze propulsare si alii. Testele tiinifice efectuate periodic asupra acestor aditivi, ridic tot mai multe probleme de la an la an, dovedindu-se unele dintre acestea au totui un grad de nocivitate mai mare decat cel estimat iniial. rile Uniunii Europene fac eforturi deosebite pentru rescrierea listelor de aditivi alimentari, scopul fiind sigurana alimentar a consumatorului. Unele E-uri sunt considerate cancerigene, iar altele doar periculoase pentru snatate. O importan deosebit trebuie acordat respectrii cu strictee a legislaiei sanitare n vigoare cu privire la folosirea aditivilor. Acetia trebuie s prezinte o puritate ridicat, s fie lipsii de nocivitate i s se utilizeze doar n limitele maxime admise. Numai n acest fel, produsele alimentare vor contribui la starea de sntate a populaiei.

Colorant natural antrachinonic : Carminul de coenil

3

Rspndire
Carminul de coenil ( E 120 ) este un colorant natural de culoare roie , extras din coenil prin desecarea corpului insectei femela , Dactylopius Coccuss Costa ,care triete pe anumite specii de cactus.Acidul carminic reprezint colorantul de baz , fiind n concentraie de 10 % raportat la corpul uscat al insectei.

Istoric
Insecta coenila, este nativ din Mexic, America Centrala i Peru. Acolo sunt folosite din secolul X . Spaniolii sunt fascinai de stacojiu intensitii culorii, vopselei de coenil care a fost strlucitor i superior nainte de a fi cunoascut de europeni n secolul XVI. De fapt du aur i argint,coenila revine cu mai multe cercetri importante din America Central.

De 17 secole producia de coenil a fost o ncercare fr succes pentru Europa,n timp ce n coloniile spaniole producia promova cu succes. De aceea aceast industrie uoar joac un rol important n dezvoltarea Americii Centrale i de Sud. Superfamilia Coccoidea , de obicei sunt cunoscute ca insecte coenil, gndaci mnccioi sau insecte cu solzi; sunt insecte hemiptere care constituie un grup omogen i specializat de insecte fitofage mici. Ele deasemenea sunt caracterizate de un grad de adaptare la viaa parazitar i dovedind un dimorfism sexual extrem.Familia Dactylopiidae (coenila) se formeaz numai pe cactus. Aceste insecte au 3-5 mm n lungime i sunt uor identificate prin prezena unui tip de bumbac alb, ca nveli, care acoper corpul rou purpuriu,ce secret cear.

Dactylopiidae are o singur clas mai consistent i anume Dactylopius ce cuprinde 9 specii. Familia conine carminul de coenil, comercial, care este bazat pe coenila, ca vopsea (culoare) industrial, avnd ca spate pentru scopul comercial cactusul Opuntia ficus-indica.

Homeoptera, Coccidae, specia Dactylopius

Dezvoltarea n greutate complet a femelelor, este n jur de 45 mg, pierznd circa 70% din masa corpului prin uscare. Insectele female au maturitatea sexual, la vrsta de 90-120 zile, chiar nainte s nceap depunerea oulor.ntr-adevar pe disecie i examenul microscopic din colecia proaspt, de concentraie mrea de culoare aprut poate fi asociat cu un glbenu de ou.Aceasta poate fi ncorporat mai trziu n testuri, a unui embrion i presupune biosinteza culorii, continund n timpul fazei rmase, descoperirea organismului. Mecanismele biosintetice, ale acidului carminic, sunt n mare msura necunoscute.

Producia de coenil
Recoltarea de insecte de coenil se realizez nc manual i presupune curairea alb-cenusie din masa corporal a femelelor,prefacut n pulbere,imediat dupa depunerea oulor.Procesul de baz implic uciderea organismelor i uscarea corpului insectei.

Simpla uscare de ctre soare a insectelor,prevede coenila cenuie care include o pudr din ou clocite i este privit ca fiind de calitate inferioara.

Accelernd uciderea i uscarea artificial, rezult mai multe tipuri de coenil neagr.ntre 80000 i 100000 de insecte sunt necesare pentru a produce 1kg de coenil neprelucrat,pentru export.

Cultivarea recoltei n Peru este raportat pe o raz de rspndire de 120140kg/ha/an. Exporturile de obicei sunt realizate la nivel nalt de caliate i curenie. 6

Acestea de obicei implic ndeprtarea materiei externe prin cernere manual i cernere i reuscare,dac este necesar s se ajung la o umezeal de 12%. Cteva rapoarte din literatura de specialitate a statelor Mexic i America Central afirm o difereniere fcut ntre speciile de cultur i speciile slbatice de insecte. Prima specie de insecte,i anume cea de cultur,este mai vast i conine mai mult pigment(pn la 21-22%)pe baza uscat.Specia salbatic de insecte din Peru conine n mod normal cel puin 16% acid carminic.

Procesul industrial
Prelucrarea (i anume recuperarea i purificarea ) acidului carminic de pe coenila neprelucrat este privit ca un proces complicat i dificil .Curentul industrial produce practici derivate din procedura tradiional, bazat pe formarea complexului cu ioni metalici.Aceast strategie posed cteva dezavantaje i nu este capabil s transmit o siguran nalt, purificnd procesul cu beneficiu mare. Centru de Cercetare i Dezvoltare Internaional, acord un standard industrial pentru procesarea coenilei, procedeu compus din urmtoarele operaii : tratarea coenilei cu solveni organici(ex. Hexanul) ; mcinarea particulelor apropiate ca mrime ; extracia alcalina; separarea solid-lichid(ex. flocularea i filtrarea); lacuri insolubile formate cu aluminiu i sruri de calciu; recuperarea de precipitat(ex. centrifugarea); resolubilizarea acidului carminic; concentraia; formula. Detaliile privind procedurile comerciale actuale, folosite de fabricanii individuali, apr secretele comerului, excluznd rivalitatea.Cu toate acestea se cunoate care sunt caracteristicile recoltelor sczute (mai puin de 52%) i de obicei furnizeaz calitatea sczut a produselor. Acetia sufer de asemenea din lipsa de form de robustee, instabilitate datorit multiplelor cotizaii ale factorilor operaionali i nonproductibili.

Proprieti fizice i chimice

Face parte din clasa antrachinonelor.Are ca sinonime : Rou natural 4.Denumirea chimic a aditivului este : acid 7- -glucopiranozil-3,5,6,8-tetrahidroxi-1-metil-9,10dioxoantracen-2-carboxilic ( acid carminic ) , iar carmina este chelatul hidrat de aluminiu al acestui acid ( raport molar Al:acid,1:2).

Structura molecular a acidului carminic

Acidul carminic are formula molecular : C 22 H 20 O 13 i M=492,32.Este un colorant rou , scump , neconvenabil pentru vegetarieni, fiind extras din pulberea obinut prin zdrobirea capului insectei Dactylopius Coccus. Omorrea insectei se face prin imersarea sa n ap.Din extractul apos (alcool-ap) sau alcoolic ,este precipitat acidul carminic (coenila), care este legat de ionul de aluminiu , rezultnd un chelat hidratat al acestuia (conform structurii date). Acest compus complex este insolubil i se prezint sub forma unui lac denumit carmin.Varietatea de forme comerciale ale colorantului este cauzat de modele diferite utilizate pentru obinerea sa.De asemenea , varietatea preparatelor comerciale este determinat i de ionii de asociaie ai acestui colorant, ca , de exemplu , sodiu , potasiu, calciu, amoniu , precum i de prezena compuilor proteici provenii din corpul insectei.Se folosesc aproximativ 70000 de insecte pentru a obine un pound (354,6 g) de colorant.Se prezint sub form de solid , friabil, sau de pudr de culoare roie spre rou nchis.Extractul de coenil este n general un lichid de culoare rou-nchis,dar care poate fi uscat,oentru obinerea unei pudre.Prin nclzire, acidul carminic se descompune

la temperatura de 135 C. Este solubil n ap,n alcool,n eter,n acid sulfuric concentrat i n soluii de hidroxizi alcalini,este ns insolubil n eter de petrol,n benzen i n cloroform.Carminul este colorantul caracterizat prin culoarea sa intens rou strlucitor i prin marea stabilitate pe care o prezint la oxidare,lumin sau la cldur.Culoarea i solubilitatea variaz cu pH-ul i cu prezena diverilor cationi de asociaie.La pH=4,8 are culoarea galben,iar la pH=6,2 este violet.Asociat cu ionul NH + 4 ,complexul acidului carminic-aluminiu este solubil n ap la pH=3 i pH=8,5.Complexul de calciu este puin solubil n ap la pH=3,dar este solubil la pH=8,5.Aditivul alimentar trebuie s aib un coninut minim de 2% acid carminic n chelai.Coninutul de metale grele ( exprimate n Pb) este de maximum 40 mg/kg.

Acidul carminic la diferite pH-uri;

IMPACTUL ASUPRA SNTII

Aditivul E 120 este considerat inofensiv la doze foarte mici.Totui , dintre coloranii naturali acesta este singurul pe care Hyperactive Childrens Support Group l recomand s fie eliminat din alimentaia copiilor.De asemenea au fost semnalate cazuri de alergii, astm, erupii cutanate i rinite la consumarea acestui aditiv.Este considerat periculos de ctre unii autori,care arat c acidul carminic poate distruge vitamina B 12 atunci cnd este utilizat n alimente i buturi .Acetia recomand evitarea sa.Pn n prezent nu se poate face cu certitudine o evaluare toxicologic a aditivului.Totui exist unele recomandri de a fi evitat de ctre suferinzii cu Parkinson i Alzheimer.

UTILIZRI
Majoritatea ntrebuinrilor a acestui colorant natural se afl n cosmetice i industria farmaceutic.Este utilizat pentru restabilirea culorii iniiale a produselor alimentare , degradat n urma prelucrrilor termice,depozitrii i transportului ( degradri produse sub aciunea factorilor fizico-chimici,biochimici sau microbiologici).Colorantul transmite culoarea si produselor n care este incorporate.De asemena este utilizat i pentru

colorarea produselor alimentare fara culoare.pentru o mai bun percepere a gustului acestor produse. Dozele admise n produsele alimentare Aditivul E120 este utilizat singur sau n combinaie cu ali aditivi (conform legislaiei n vigoare) , n produse i n doze similare cu cele prezentate la aditivul E104.De asemenea, mai este folosit n doza de 200 mg/kg singur sau n combinaie cu ali colorani,pentru cerealele utilizate la micul dejun,n gemuri,jeleuri i marmalade , precum i n alte preparate similare din fructe,inclusiv produsele cu un numr sczut de calorii, n cantitate de 100 mg/kg,n crnai,pateuri i supe,100 mg/kg, n carne tip burger cu un coninut minim de 4% legume i sau cereale , 100 mg/kg,n crnaii chorizo,200 mg/kg , n membran comestibil qs,n Americano 100 mg/l , n bitter-soda,bitter vino , 100 mg/l.

10

Edulcorant sintetic cu putere mare de ndulcire: Acesulfam K

Structur chimic :

Acesulfam K

Proprieti fizice i chimice:

Sinonimele acesulfamului K sunt :acesulfam de potasiu , acesulfam,sarea de potasiu a 3,3-dihidro-6-metil-1,2,3-oxatiazin-4-on 2,2- dioxid.Denumirea sa chimic este sarea de potasiu a 6-metil-1,2,3oxatiazin-4(3H)-on 2,2 dioxid.Acesulfamul are urmtoare formul molecular: C 4 H 4 NO 4 KS ,iar M =201,24. Se obine industrial din esterul terbutilic al acidului acetilacetic,prin reacia acestuia cu fluorosulfonilizocianat.n urma reaciei rezult un compus intermediar , care la nclzire se descompune n Nfluorosulfonilamida acidului acetilacetic ,izobuten i dioxid de carbon.Prin ciclizarea Nfluorosulfonilamidei acidului acetil acetic se obine acesulfam K ,reacie care are loc n prezena hidroxidului de potasiu.n procedeele moderne ,pentru sinteza acesulfamului K ,se utilizeaz dicetena i un acid amido-sulfonic.Acesulfamul K se prezint sub forma unui compus solid cristalizat sau a unei pulberi cristaline , de culoare alb.Are un gust pronunat dulce , fiind de 200 de ori mai dulce dect sucroza.Este o substan nehigroscopic , iar temperature sa de topire este de 225 C.Acesulfamul K este foarte solubil n ap,dar mai puin solubil n etanol,methanol sau aceton.pH-ul soluiilor apoase este aproximativ 7.O caracteristic a aditivului o reprezint marea sa stabilitate n soluiile apoase pentru domenii de pH cuprinse ntre 3-7( att la ntuneric ct i la lumin)De asemenea, acesulfamul K prezint stabilitate la nclzire (coacere sau tratament UHT). n ceea ce privete absorbia maxim de radiaii UV, aceasta are loc la lungimea de und de 227 nm pentru o soluie de 10 mg substan n 1000ml ap.Aditivul trebuie s conin minimum 99% C 4 H 4 NO 4 KS raportat la substana uscat .La uscarea produsului la temperature de 105 C timp de 2 ore ,pierderile admisibile sunt de 1%.

11

Impactul asupra sntii

Acesulfamul K reprezint avantajul unei eliminri rapide din organism , dup ingerarea i absorbia sa.Studiile efectuate au artat de asemenea , c acest aditiv se elimin fr s sufere nici o modificare.n plus ,nu are nici un aport energetic.Totui ,n lucrarea [100] se arat c prin acumularea n organism a unor cantiti mari de aceto-acetamid ( produs de degradare a acesulfamului K ) , s-a constatat prin testele fcute pe animale c acest metabolit afecteaz glanda tiroid.Doza zilnic admis pentru acesulfam K este de 5 mg/ kg de greutate corporal,conform normelor stabilite de FAO/OMS.n SUA se admite o doz zilnic de 15 mg/kg .Doza zilnic maxim suportat de organismul uman este de 150 mg/kg greutate corporal 6.

Utilizri
Conform actului normative 438/295 din iunie 2002, acesulfamul K se adaug n cantitatea de 350 mg/l n buturi nealcoolice,ca de exemplu n buturile aromate pe baz de lapte i produse derivate sau pe baz de suc de fructe cu valoare energetic redus sau fr adios de zahr.Tot n doza de 350 mg/kg , acesulfamului K este folosit pentru deserturi i produse similare , cum sunt deserturile aromate pe baz de ap,preparate pe baz de lapte i produse derivate,deserturi pe baz de fructe i legume,cu sau fr adios de zahr,desrturi pe baz de oua,cu sau fr adaos de zahr,deserturi pe baz de cereale,deserturi pe baz de grsimi,cu sau fr adaos de zahr.La cornete i vafe pentru ngheat,fr adaos de zahr,se admite folosirea acesulfamului K n doze de 2000 mg/kg.Pentru cerealele utilizate la micul dejun, cu un coninut de fibr mai mare de 15% i cu 20% tre,cu sau fr adaos de zahr,aditivul este folosit n cantitatea de 1200 mg/kg.n cazul produselor de tip snacks gata de consum,pe baz de amidon sau nuci i alune glasate , uscate ,care conin anumite arome,ace-sulfamul K este admis n doze de 350 mg/ kg.Aditivul se mai adaug n cantitate de 500 mg/kg n produse de cofetrie pe baz de cacao sau fructe uscate , cu valoare energetic redus sau fr adaos de zahr.n cazul produselor de cofetrie pe baz de amidon sau a pastelor tarinabile pe baz de cacao,lapte,fructe uscate sau grsimi,coninutul de aditiv admis este de 1000 mg/ kg.Pentru produsele de cofetrie sub form de tablete, cu valoare energetic redus, se admite doza de 500 mg/kg.n cazul dropsurilor pentru mprosptarea respiraiei,fr adaos de zahr,acesulfamul K se folosete n cantitate de 2500 mg/kg.n guma de mestecat fr adaos de zahr, aditivul se folosete n doz de 2000 mg/kg.Pentru cidru i rachiu de pere,bere nealcoolic sau cu o concentraie de alcool de pn la 1,2% vol,pentru bere de mas,bere brun de tip oud bruin,buturi spirtoase cu o concentraie alcoolic de 15% vol,pentru fructe conservate cu valoare energetic redus sau frp adaos de zahr,acesulfamul se adauj n cantitate de 350 mg/kg.n gemuri , jeleuri i marmalade cu valoare energetic redus se admite doza de 1000mg/kg.n conservele de fructe i legume dulci acrioare,aditivul este admis n cantitate de 200mg/kg.Acesulfamul K se mai adaug n conserve i semiconserve de pete dulci-acrioare,n marinate de pete,de crustacee i molute , n cantitate de 350 mg/kg.n sosuri i mutaruri,doza este de 350 mg/kg.Pentru produsele fine de brutrie destinate unei alimentaii speciale,aditivul se folosete n cantitate de 1000 mg/kg.n preparatele complete de regim sau aporturi nutriionale utilizate sub supraveghere medical , 450 mg/ kg.n suplimentele alimentare (

12

integratori dietetici n stare lichid),acesulfamul k se adaug n cantitate de 350 mg/kg,iar pentru integratorii dietetici n stare solid, 500 mg/kg.n suplimentele alimentare / integratori dietetici pe baz de vitamine i / sau elemente minerale sub form de sirop sau masticabile ,este adugat n doz de 2000 mg/ kg.Aditivul se mai adaug n guma de mestecat cu adaos de zaharuri,n doz de 800 mg/kg. Acesulfamul K face parte din grupa edulcoranilor de sintez cu putere mare de ndulcire.Este utilizat n industria alimentar ca ndulcitor dietetic precum i din raiuni tehnologice.Fiind un ndulcitor acaloric,este utilizat pentru alimentaia bolnavilor de diabet sau n diete hipocalorice.Acesulfamul K are un domeniu larg de utilizare ,deoarece din punct de vedere tehnologic prezint o mare stabilitate termic i microbologic ,nu se caramelizeaz,higroscopicitatea sa este foarte redus i n anumite situaii,prezint proprietatea de poteniator de arome.n ceea ce privete stabilitatea acesulfamului K ,acesta nu se degradeaz n timp,la ntuneric sau expus la lumin.La pH=7,5 n soluii apoase,rezist fr s se compun un timp ndelungat.Rezistena sa la descompunere se constat chiar la valori de pH acid (pH=3).Acesulfamul K este rezistent la nclzirea produselor alimentare (200 grade C ), iar n soluii de pH=4-7 nu se descompune la temperatura de 120 grade C.Nu se degradeaz,chiar la pasteurizarea produselor alimentare acide.Un alt avantaj al utilizrii acesulfamului K const n faptul c acesta nu este metabolizat de flora intestinal sau de bacteriile ntlnite n produsele alimentare.Necesitatea utilizrii acesulfamului se datoreaz i faptului c gustul su dulce este apropiat de al zaharozei la concentraii mici i se instaleaz rapid.Dar, la concentraii mari apare un gust neplcut ,amar, mai puin intens ca al zaharinei.Acesulfamul K are un efect sinergetic cu ali ndulcitori ,fapt pentru care este utilizat n combinaie cu aspartamul sau ciclamatul de sodiu.Pe lng efectul sinergetic,se mai constat i o ameliorare a gustului dulce .n produsele din fructe i legume conservate fr zahr ,se recomand adugarea i a unui conservant (sorbat de potasiu n proporie de 0,050,1%) ,deoarece produsele sunt susceptibile de atacul microorganismelor .Este un ndulcitor acaloric ,necesar n dietele diabeticilor ,obezilor i n general pentru evitarea consecinelor neplcute ale consumului exagerat de zahr.

13

BIOLOGICAL DATA BIOCHEMICAL ASPECTS Absorption, distribution and excretion Single oral doses of 10 mg 14C-acesulfame K/kg bw given to rats and dogs were rapidly absorbed. Maximum blood levels reached were 0.75 0.2 g/ml in rats, 0.5 h after dosing, and 6.56 2.08 g/ml in dogs, 1-1.5 h after dosing. In rats, 82-100% of the dose, and in dogs, 85-100% of the dose was excreted in the urine; in both species, 97-100% of their total radioactivity was excreted in faeces, and total recovery approximated to 100%. Rats given 10 consecutive daily doses of 10 mg/kg orally did not show evidence of accumulation. Three days after dosing, the concentration in the organs and plasma was 0.4 nMol/g in liver, and less than 0.2 nMol/g in other tissues. Seven days after dosing, the concentration in dogs was less than 0.2 nMol/g in all tissues examined (Kellner & Christ, 1975a). After intravenous administration of a single dose of 10 mg C-acesulfame K/kg bw to rats, the radioactivity was excreted quantitatively in urine and the plasma half-life was 0.23 h (Kellner & Christ, 1975a).
14

Following oral administration of a single dose of 3.6-4.5 mg C-acesulfame K/kg bw to pigs, maximum blood levels ranged between 0.35-0.72 g/ml between 1-2 h after dosing and fell to undetectable levels within 48 h. Excretion occurred mainly in the urine (Kellner & Christ, 1975b).
14

Bio-transformation The metabolism of Acesulfame K was investigated in the urine and faeces of rats and dogs which had received single oral doses of 10 mg/kg bw, and in the urine and bile of pigs dosed orally with 5 mg/kg bw. The analytical methods used (thin-layer chromatography, mass spectrometry and isotope dilution) detected only the original substance in these samples (Volz, 1975). Effects on enzymes In vitro studies on acetoacetamide, a possible minor breakdown product of Acesulfame K, showed that it did not function as a substrate for thiolase, -hydroxyacyl-CoA-dehydrogenase, and -hydroxybutyrate-dehydrogenase indicating that in vivo formation of

14

acetamide is not probable (Anon., 1980b). Effects on bacteria Acesulfame K was without antibacterial activity against 12 bacterial strains in vitro, and did not show antibacterial activity in experimental septicaemia in the mouse with Streptococcus pyogenes A77 or Salmonella typhimurium. Long-term culture (30 daily passages) of Staphylococcus aureus and E. coli with a range of concentrations of Acesulfame did not affect growth characteristics nor sensitivity towards antibiotics, ampicillin, cephalothin, tetracycline or gentiamycin (Schrinner & Limbert, 1977). Nitrosation of Acesulfame K In vitro studies were performed to investigate whether Acesulfame K could form N-nitroso derivatives. Nitrosation was carried out using N2O3 in glacial acetic acid, or excess NaNO2, at pH 3 and pH 1. An N-nitroso compound was detected in low yield with N2O3 or with nitrite at pH 1 but not at pH 3. The yield at pH 1 was estimated to be 0.4 10-3% (Eisenbrand, 1979). TOXICOLOGICAL STUDIES Special studies on acetoacetamide - acute toxity and mutagenicity The oral LD50 of acetoacetamide in female rats was greater than 15 g/kg bw (Anon., 1977). Acetoacetamide was non-mutagenic in bacterial assays using four strains of Salmonella typhimurium, with and without metabolic activation (Gericke, 1977), did not induce point mutations in cultured V79 Chinese hamster cells, and was negative in the cell transformation assay using M2 mouse fibroblasts (Marquardt, 1978). Special studies on carcinogenicity Four groups of 100 male and 100 female Swiss mice were fed diets containing 0, 0.3, 1.0, or 3.0% Acesulfame K for 80 weeks. All survivors were sacrificed and autopsied, and weights of livers and kidneys were recorded. All tumours and tissues showing gross lesions suspected of being tumours and the livers of all animals were examined microscopically (haematoxylin and eosin sections). The feeding of Acesulfame K did not cause adverse effects on general appearance, behaviour or survival at any of the dietary levels but body weights were slightly decreased at the 3.0% dose level in

15

both sexes. The relative liver weight was decreased at all dose levels in males only but there was no evidence of a dose-related response. Deaths occurring during the course of the study were attributed to chronic nephropathy, severe liver degeneration, respiratory infections and lung tumours. Gross and microscopic examination revealed a variety of tumours in both test and control animals, but evaluation of the data on type of tumour, location and incidence did not indicate that the test compound was carcinogenic to mice at dietary levels up to 3% for 80 weeks (Beems & Til, 1976). See also Long-term studies in rats. Special studies on mutagenicity An oral mutagenicity study (micronucleus test) was carried out in which Acesulfame K was administered orally to male and female NMR1 mice at doses of 450, 1500, and 4500 mg/kg on two consecutive days. The animals were killed six hours after the second application, bone marrow was taken from the femur and 2000 polychromatic erythrocytes per animal counted and scored for micronuclei. The mutagenic index did not differ significantly from 1 (Baeder & Horstmann, 1977). In a dominant lethal assay, Acesulfame K was administered to male Wistar rats at dietary levels of 1.0 or 3.0% for five consecutive days prior to mating. At day 1, 8 and 15 post-treatment each male was caged with two untreated females for seven days. Pregnant females were sacrificed mid-term and scored for pregnancy rate and total and dead implants. No adverse effects were observed and it was concluded that Acesulfame K at these dietary levels did not induce dominant lethal mutations in spermatozoa of vas deferens and epididymis, testicular sperm or late spermatids (Willems, 1974). Cytogenetic investigations were conducted on bone marrow cells of Chinese hamsters treated orally with five consecutive daily doses of Acesulfame K of 0, 450, 1500, or 4500 mg/kg bw. The ratios of chromosomal abnormalities in control and treated animals were low, and values normally found in this strain were not exceeded (Mayer et al., 1978a). The ability o Acesulfame K and of acetoacetamide to induce mutations in V79 Chinese hamster cells in vitro (8-azaguanine susceptibility to resistance) was investigated at concentrations of 10-10 000 g/ml. Neither of the compounds was mutagenic in this system; acetoacetamide was slightly cytotoxic at the highest

16

concentration. The compounds were also screened for induction of transformations in M2 mouse fibroblasts at similar concentrations. Acesulfame K did not cause any transformations, but reduced plating efficiency (cytotoxicity) was observed at concentrations of 5000 and 10 000 g/ml; one (out of 14) transformed focus was observed with acetoacetamide at a concentration of 5000 g/ml but not at the higher concentration, and this was not considered to be evidence of potential oncogenic activity. In addition, Acesulfame K was not mutagenic nor cytotoxic against four strains of Salmonella typhimurium at concentrations up to 100 mg/plate (Marquardt, 1978). Acesulfame K was neither mutagenic nor cytotoxic in the Ames' test using four strains of Salmonella typhimurium (detecting both base-pair and frame-shift mutations) either with or without activation by rat microsomes (Rohrborn, 1976). Special studies on pharmacological aspects Dosages of Acesulfame K of 400 m/kg i.p., 500 m/kg orally, or 320 mg/kg subcutaneously, did not depress motor activity of mice excited by Pervitin. The hexobarbital sleeping time in mice was not changed by pretreatment with Acesulfame K at doses of 500 mg/kg per os or 160 mg/kg subcutaneously. Metrazol-induced convulsions in mice were not influenced by Acesulfame K at doses of 500 mg/kg per os, 300 mg/kg i.p., or 320 mg/kg subcutaneously; anti-convulsant activity can thus be excluded. Administration of Acesulfame K (200 mg/kg i.p.) to mice was without effect on tetrabenazine-induced ptosis and catalepsy, thus the compound is without anti-depressant properties. Acesulfame K (200 mg/kg i.p., 160 mg/kg s.c., or 500 m/kg per os) was without effect on compulsive gnawing behaviour induced by the combined application of apomorphine and imipramine, therefore antidepressant and anticholinergic effects are unlikely. At doses of 320 mg/kg s.c. or 500 mg/kg orally, Acesulfame K had no analgesic effect on mice. Predosing of rats with Acesulfame K (500 mg/kg orally or 160 mg/kg s.c.) was without anti-inflammatory effect on Aerosilinduced paw oedema, and similar doses had no antipyretic effect in rats with yeast-induced fever. Eight daily doses of Acesulfame K (0-100 mg/kg) per os had no effect on serum cholesterol, total glycerol, free glycerol or glucose levels; relative liver weights were unchanged. In acute tests, Acesulfame K had no effect on blood sugar levels in rats given 100 mg/kg orally, guinea-pigs given a similar dose i.p., or rabbits receiving 100 or 500 mg/kg orally or 50 mg/kg i.v. Acesulfame K had no diuretic effect in rats and dogs at oral dose levels of 50 mg/kg and 20 mg/kg respectively.

17

Acesulfame K given intravenously to guinea-pigs at a dose level of 24 mg/kg reduced digoxin toxicity. This effect was due to the potassium content and not to antiarrhythmic activity of the compound. Intravenous administration of 1-5 mg Acesulfame K/kg to anaesthetised guinea-pigs one minute before treatment with histamine was without effect on the bronchial musculature. Cardiovascular experiments in anaesthetized dogs showed that intravenous administration of Acesulfame K was without effect up to a dose of 6 mg/kg; doses of 12 and 24 mg/kg caused a decrease in contractility of the heart with a transient reduction of blood pressure and peripheral blood flow. The changes were compensated for in 3-5 minutes. Intraduodenal administration of Acesulfame K to anaesthetized dogs at dose levels of 0-1000 mg/kg induced a slight reduction of blood pressure at 500 mg/kg and this was accompanied by a reduction of cardiac contractility of about 20% at 1 g/kg. The effect was reversed in 50-80 minutes and other cardiovascular parameters were unchanged. In the conscious dog, after a five day treatment with Acesulfame K at 100 mg/kg per os daily, no change in blood pressure or cardiac activity could be detected. Acesulfame K at doses of 0-24 mg/kg i.v. had no anti-arrhythmic effect on anaesthetised dogs poisoned with K-strophanthin. Daily oral administration of Acesulfame K (1 g/kg) to dogs for 14 days was without effect on thromboplastin time, thrombin time, recalcification time and thromboelastography of plasma samples. No functional changes were detected after application of 50 g Acesulfame K to isolated guinea-pig heart using the Langendorff techniques; the compound did not show antiarrhythmic activity in isolated, perfused guinea-pig heart with aconitine and digitoxin-induced fibrillation. In the isolated ileum of guinea-pig, Acesulfame K at a concentration of 10 g/ml had no neurotropic or spasmolytic effect on smooth muscle. Addition of Acesulfame K to dog plasma in vitro was without effect on thrombin time, thromboplastin time or recalcification time. Investigation of the carbonic anhydrase-inhibiting effect in vitro showed that Acesulfame K had virtually no effect, concentrations of 180 mg/ml being required for 50% inhibition (Vogel & Alpermann, 1974). Special studies on reproduction A multigeneration study in rats was carried out, in which males

18

and females received Acesulfame K at dietary levels of 0, 0.3, 1.0 and 3.0% for three successive generations, each comprising two consecutive litters. A teratogenicity study was conducted with 15 females per group of the F2b and F3a generations. Rats from the F3b generation were submitted to clinical and pathological examination. Pups from the F1a litters were used for a chronic toxicity/carcinogenicity study at the same dietary levels of Acesulfame K as the parents (see Long-term studies). Fertility, number of young per litter, birth weight, growth rate and mortality during the lactation period were not adversely affected and there were no indications of increased mortality in utero. Growth rate was slightly decreased in the top dose group of the F0 and F1 generations, and the mid-dose group of the F0 generation. In the teratogenicity studies, no adverse effects were seen in appearance, food consumption, autopsy of the dams, organ weights, or litter data; no visceral or skeletal abnormalities attributable to the treatment were observed. In a four-week feeding study on rats of the F3b generation, body weights and food efficiency figures were slightly decreased in males at the highest dose level. The relative weights of the caecum were slightly increased in both sexes of the high-dose group and in males of the mid-dose group. Gross and microscopic examination did not reveal any treatment-related pathological changes (Sinkeldam et al., 1976). In a separate study, Acesulfame K was fed to pregnant rats at dietary levels of 0, 0.3, 1.0, or 3.0% from day 6 up to and including day 15 of pregnancy; a positive control group received 75 000 i.u. vitamin A/rat/day during the same period. An increase in food consumption was observed at all three dose levels of Acesulfame K, most pronounced in the 0.3% group. Mean foetal weight showed a slight, dose-related increase in the test groups but skeletal and visceral examination of the foetuses revealed no teratogenic effects attributable to the feeding of Acesulfame K. A wide range of abnormalities was induced by teratogenic doses of vitamin A in positive controls (Koeter, 1975). A reproduction study was carried out in which male and female rats were fed diets containing 0, 0.3, 1.0, or 3.0% Acesulfame K for 12 weeks prior to mating; the dams received the same diet throughout pregnancy and lactation. Observations were made on the fertility of the females, number of young per litter, sex rates, gross

19

abnormalities, mortality, body weight, and resorption quotient. Growth rate was slightly decreased in parent rats of the top dose group and in the mid-dose group females. No dose-related effects were seen in any of the observations made on the offspring, and there were no indications of increased mortality in utero. At weaning, 60 animals of each sex were selected from the litters for a two-year feeding study (see below, Long-term studies) (Sinkeldam, 1976). An embryotoxicity study with Acesulfame K was carried out in which female rabbits received doses of 0, 100, 300 or 900 m/kg bw by gastric intubation from the seventh to the nineteenth day after mating. On the twenty-ninth day of pregnancy, foetuses were delivered by Caesarean section; live and dead foetuses, resorptions and placentas were counted, weighed and examined macroscopically. The 24-hour survival was determined by incubation and half of the foetuses examined for skeletal abnormalities and the remaining half for visceral changes. One dam from the 300 mg/kg group had a premature birth. All other observations were within the range of control values and there was no evidence of compound-related malformations (Baeder & Horstmann, 1977).

20

Aspecte biochimice Absorbia, distribuia i excreia O singur doz oral de 10 mg acesulfam K/kg corp dat oarecilor i cinilor a fost rapid absorbita.Nivelul maxim atins n snge a fost 0,752 g/ml la oareci la 0,5h dup dozare i 6,562,08 g/ml la cini la 1-1,5h dup dozare. n cazul oarecilor 82-100% din doza ingerat, iar n cazul cinilor 85-100% au fost excretate prin urina; la ambele specii 97-100% din radioactiviatea total a fost excretat prin fecale, iar procentul de recuperare a fost de aproximativ 100%. oarecii crora li s-au dat 10 zile consecutiv doze orale de 10 mg/kg nu au prezentat semne evidente (clare) de acumulare a acesulfamului K.La 3 zile dup dozare concentratia de acesulfam K n organe i plasm a fost de 0,4 nMol/g n ficat i mai puin de 0,2 nMol/h n alte esuturi.La 7 zile dup dozare, n cazul cinilor, concentraia de acesulfam K o fost de mai puin de 0,2 nMol/g n toate esuturile analizate. n urma administrrii intravenoase a unei singure doze de 10 mg/kg corp de acesulfam K oarecilor, s-a constatat c radioactivitatea a fost eliminat masiv prin urin, iar semi-viaa plasmitic a fost de 0,23h. Dup administrarea orala a 3,6-4,5 mg acesulfam K/kg corp aricilor s-a constatat c eliminarea a avut loc n special prin urin, iar dup 48h de la administrare nivelul de acesulfam K n snge nu a putut fi detectat. Biotransformarea Metabolismul acesulfamului K a fost investigat prin analiza urinei i fecalelor provenite de la oareci i cini crora li s-au administrat doze orale de 10 mg/kg corp, precum i prin analiza urinei i bilei provenite de la porci carora li s-au administrat doze orale de 5 mg/kg corp acesulfam K.Metodele analitice utilizate (cromatografia n strat subire, spectrometria de mas, diluia izotopilor) au detectat doar substana originala (acesulfam K) n probele supuse analizei.

21

Efecte asupra enzimelor Studiile n vitro asupra acetoacetamidei, o substan rezultat n urma degradrii a acesulfamului K, au artat c acest nu poate fi considerat substrat pentru tiolaz, hidroxiacil-CoA-dehidrogenaza si -hidroxibutiratdehidrogenaza, ceea ce indic faptul c formarea acetamidei in vivo nu este posibil. Efecte asupra bacteriilor Acesulfam K nu a prezentat activitate bacterian asupra 12 tulpini de bacterii n vitro i de asemenea nu a prezentat activitatea antibacterian n cazul unui experiment pe oareci carora li s-a indus septicemia cu ajutorul St. Pyogenes A77 sau Salmonella Typhimurum.Aplicarea unor concentraii de acesulfam K asupra culturilor (de lung durat) de Staphylococus aureus, E.coli nu a influenat creterea (dezvoltarea) acestora i nici sensibilitatea fat de antibiotice, ampicilin, tetraciclin, gentamicin. Nitrozarea acesulfamului K Au fost fcute studii n vitro pentru a vedea dac acesulfam K poate forma N-nitrozo derivai.Nitrozarea s-a realizat prin utilizarea N2O3 n acid acetic glacial, sau NaNO2 n exces la pH=3 si pH=1.Un compus N-nitrozo a fost detectat prin utilizarea N2O3 la pH=1 dar nu i la pH=3. Studii toxicologice Doza oral DL50 de acetoacetamid n cazul femelelor oarece a fost stabilit ca fiind mai mare de 15 g/kg corp. Acetoacetamida s-a dovedit a nu fi nitrogen n cazul experimentelor efectuate pe 4 tulpini de Salmonella Typhimurium, cu i fr activare metabolic, nu a indus mutaii n culturile de celule V 79 de hamster Chinezesc,s-a dovedit a fi negativ n transformarea celulelor utiliznd fibroflaste M2 de oarece. Studii speciale asupra cresterii n greutate a cecului Studiile de scurt i lung durat au artat c n urma administrrii de acesulfam K are loc o cretere reversibil n greutate a cecului.Studiile au fost efectuate pe femele tinere

22

de sobolani Wistar, cu greutatea corporal de aproximativ 115 g crora li s-a dat acesulfam K n concentraii de 3 i respectiv 10% din raia alimentelor timp de 45, 49 i respectiv 90 zile.S-a constatat o cretere a consumului de ap i alimente, dar i o scadere n greutate a animalelor,situaie care s-a remediat n perioada de dup efectuarea studiului (experienei).Greutatea cecului a revenit la normal n aproximativ 15 zile de la ncetarea administrrii de acesulfam K. i n cazul femelelor adulte situaia a fost aceeai : n primele zile acestea au prezentat semne de anorexie, dar n 2 sptamni consumul de ap i alimente a crescut. Greutatea cecului a revenit la normal tot n aproximativ 14 zile de la ncetarea administrrii de acesulfam K. Studii speciale asupra carcinogenitaii S-au efectuat experimente pe patru grupuri a cte 100 femele i 100 masculi de oareci Surss, crora li s-a administrat acesulfam K timp de 80 sptamni n doze : 0; 0,3; 1,0 i 3,0%. Toi supravieuitorii au fost sacrificai i autopsiai, fiindu-le cntrit greutatea ficatului i a rinichilor.Deasemenea, au fost prelucrate i examinate la microscop toate leziunile suspectate a fi canceroase. n urma studiului s-a observat o scdere n greutate a animalelor precum i o scdere a greutaii ficatului acestora.Analiza microscopic a esuturilor a dezvluit apariia unor tumori canceroase, dar n urma evaluarii tipului de tumoare, locaiei i incidenei acesteia nu au existat dovezi clare care s ateste faptul c acesulfam K a fost responsabil de apritia cancerului.

Studii speciale asupra mutagenitaii n urma experienelor efectuate pe oarecii Wistar s-a constatat c acesulfam K nu este responsabil de inducerea mutaiilor n ceea ce privete spermatogeneza; de asemenea n urma experimentelor efectuate pe chinese hamsters s-a ajuns la concluzia c acesulfam K nu este citotoxic pentru celulele mduvei osoase.Acetoacetamida s-a dovedit a fi usor citotoxica n concentraii mari. Studii speciale asupra aspectelor farmacologice

23

Administrarea acesulfamului K oral sau subcutanat nu a deprimat activitatea motorie la oarecii carora li s-a dat Perxitin.De asemenea acesulfam K nu a influenat eficiena hexobarbitalului.Convulsiile induse prin administrarea de Metrazol nu au fost influenate de acesulfam K.De asemenea s-a stabilit c acesulfam K nu are efecte antidepresive i anticolinergice i nici efecte analgezice n cazul oarecilor. Administrarea de acesulfam K nu a avut efecte antipiretice n cazul febrei induse oarecilor i nici efecte antiinflamatorii; nu influeneaz colesterolul din snge, nivelul de glicerol i glucoz; nu prezint efecte antiaritmice n cazul afeciuniilor cardiovasculare. n urma experimentelor s-a concluzionat c n cazul acesulfamului K, responsabil de unele efecte adverse n urma studiilor toxicologice este ionul de K (n special mpiedic creterea n greutate). Studii speciale asupra reproducerii Studiile au fost efectuate pe oareci i iepuri, crora li s-au administrat diferite doze de acesulfam K n timpul gestaiei i perioadei de lactaie.S-a constatat c fertilitatea, numarul de pui, greutatea la natere, rata de cretere i mortalitatea n perioada de lactaie nu au fost influenate negativ i nu au existat indicii care s ateste creterea mortalitaii intrauterine. n ceea ce privete teratogenitatea, nu s-au observat efecte adverse n ceea ce privete aspectul, consumul de hran, greutatea, perioada de gestatie sau anormaliti ale scheletului i viscerelor. Obsevaii fcute pe oameni cu greutate corporala de 70-80 kg Celor 3 voluntari li s-a administrat doze unice de 30 mg acesulfam K n ceaiul de ment.Absorbia substanei a fost rapid, concentraia maxim n snge (0,28 g/ml) gsinduse dupa 1-1,5h.Eliminarea s-a facut rapid, semi-viata plasmatic fiind de aproximativ 2h.Peste 99% din doz a fost eliminat prin urin i mai putin de 1% prin fecale.Eliminare s-a facut n proporie de 98% n primele 24h.

24

Metabolismul acesulfamului K a fost studiat din serul i urina voluntarilor umani.Doar substana original (acesulfam K) a fost detectat n toate probele. Bibliografie: 1. http://www.azazza.com/search.php?keywords=Potassium%20Test 2. http://ro.wikipedia.org/wiki/List%C4%83_de_aditivi_alimentari 3. http://e.slabute.ro/e950-acesulfam-k-acesulfam-potasiu.html 4.

25