Analrse microbioioxrca da agida.

pa,xina 31

RECUENTO DE ESPORAS DE Clostridium SULFITO-REDUCTORES Definicin: Los Clostndum sulfito reductores son aquellas bacterias de morfologa bacilar, G+, anaerobias estrictas, capaces de formar esporas y con capacidad de reducir el sulfito a sulfuro. Fundamento: La tcnica se basa en contar el nmero de colonias de bacterias esporuladas y con capacidad sulfito reductora desarrolladas en medio de cultivo slido glucosado con sulfito sdico y una sal de hierro. T~A.SM C J S > ~ ~ ~ * ; -2 14 ai5;j

Especies del gnero Clostndium tienen una supervivencia mucho mayor que cualquier otro indicador bacteriano de contaminacin fecal debido a su capacidad formadora de esporas. Si se evidencian simultneamente coliformes y Clostridium es evidente el origen fecal de la contaminacin. Si slo se detectaran Clostridiiu indicara una contaminacin fecal remota.

Agar SPS: Sulfito sdico Polimixina sulfato Sulfodiacina sdica Peptona de casena Extracto de levadura Citrato frrico Tioglicolato sdico Polisorbato 80 Agar-agar Agua destilada Procedimiento:

0.5 g 0.01 g 0.12 g 159 10 g 0.5 g 0.1 g 0.05 g 15.0 g 1.0 litro

20 m1 del medio base se reparten en tubos de 50 ml. En el momento de realizar el anlisis, entre 1 a 5 tubos se funden en un bao mara. Con el objeto de destruir las formas vegetativas, calentar la muestra de agua en bao termorregulado a 80C durante 5 minutos, dejando enfriar a continuacin hasta 60C aproximadamente.

Sembrar cada tubo de medio preparado con 20 m1del agua a 60C. Se homogeniza la muestra, se enfra rapidamente y despus de que el medio est slido se incuba. La incubacin se realiza a 37 "C durante 48 horas. Lectum de 10s resultados:
Master en Ciencia e Tecnoloxia Ambiental

Anlise mrcrobiolox~cado agua. pixina 42

Resultado positivo: Las colonias de Clostridium sulfito reductores aparecern de color negro debido a la formacin de sulfuro de hierro por reduccin del sulfito. Contar el nmero de colonias negras desarrolladas en la totalidad de la columna de agar, sin tener en cuenta las puntiformes. Con objeto de evitar la dificultad de recuento que puede producirse al confluir las colonias desarrolladas, se efectuar una primera lectura a las 24 horas y, si por este motivo no es posible el recuento a las 48 horas, se dar la lectura de las 24 horas como resultado aproximado. Resultado negativo: no aparicin de puntos negros en el interior del agar.
Expresin de los resultados:

El resultado se expresar como nmero de esporas de Clostndium sulfito reductores en el volumen de agua sembrada.

Recuento de esporas de clostridios sulfito-reductores

Medio SPS fundido 5 7 a 60C aprox.
sembrar de 1 a 5 tubos
E

20 mi

Muestra calentada dirante S minutos a 80C en un bao nlara. Dejar enfriar hasta 60C aprox.

- homogenei7ar
I r

Z + Tiicubacin 37C durante 2648 horas

(Resultado negativo)