Clase 8 Transformacin celular

TRANSFORMACIN CELULAR La transformacin celular consiste en el paso de una clula normal a una clula anormal. La clula inicia un proceso de replicacin celular masiva perdiendo el control del ciclo celular y evadiendo la muerte celular programada. Caractersticas de una clula transformada (clula cancerosa) 1.- Inestabilidad genmica: Procesos de replicacin y reparacin incorrectos. Segregacin errnea de los cromosomas, aberraciones cromosmicas; traslocaciones, transposiciones, u otras, generando la existencia de un mayor nmero de cromosomas. 2.- Alteracin de proliferacin celular: aparicin de oncogenes (protooncogenes transformados por mutacin) y alteraciones en los genes supresores de tumores. 3.- Adquisicin de potencial invasivo y angiognesis: ya que los tumores requieren mayor irrigacin sangunea como modo de transporte celular. 4.- Adquisicin de potencial metasttico.

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Este conjunto de genes tambin son genes de transcripcin que activan una cascada de genes relacionados con la morfologa celular, no la alteran directamente. TUMORES Se producen por alteraciones en la expresin de genes que regulan el crecimiento celular. Las alteraciones pueden ser provocadas por una baja capacidad de expresin de un gen, represin de su expresin, ganancia de funcin, expresin de gen en mayor cantidad que lo normal, entre otras. Estas alteraciones pueden ser provocadas por agentes qumicos, fsicos o por determinados virus capaces de transmitir oncogenes de una clula a otra. Tipos de genes asociados con cncer Son genes que normalmente regulan el crecimiento y divisin celular durante el ciclo celular. Esto incluye: Genes para factores de crecimiento. Genes para sus receptores. Molculas intracelulares de vas de transduccin de seales. Factores de transcripcin de seal.

Imagen de un cultivo de fibroblastos.- Las imgenes superiores corresponden a microscopa convencional y las inferiores a microscopa electrnica. A la izquierda se encuentran las clulas normales y a la derecha las transformadas, que se tornan redondas. Los fibroblastos poseen la capacidad de inhibicin por contacto. Los fibroblastos son colocados en una placa de cultivo, cuando cubren su totalidad y topan los bordes de sta, dejan de proliferar, dando como resultados una monocapa de clulas. Los fibroblastos transformados pierden esta capacidad, generando la formacin de un cmulo de clulas con una gran cantidad de capas.

La transformacin celular incluye una gran cantidad de cambios relacionados con capacidad de excrecin de un conjunto de genes que regulan el paso de una clula normal a una clula tumoral.

En la imagen se observa un grupo de clulas vecinas a la gran clula, que liberan factores de crecimiento estimulatorios (verde). Estos son captados por receptores a nivel de membrana y se produce una transduccin de seal que activa factores de transcripcin que transcribirn genes involucrados en la regulacin del ciclo celular. Si se tiene un factor regulador mutado, podra provocar que la estimulacin de crecimiento celular sea gatillada aun en ausencia del factor. Si est mutado de modo que siempre enva una seal de que debe activar a los factores de transcripcin que transcriben los genes que regulan el ciclo celular, ocurrir un aumento en la replicacin celular. Lo alterado es una zona del receptor de membrana que mantiene activada la seal aun en ausencia del factor de crecimiento correspondiente.

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Tambin puede ocurrir la inhibicin de crecimiento celular (rojo). En este caso las clulas vecinas liberan factores de crecimiento inhibitorios que provocan la activacin de factores de transcripcin que transcriben genes que impiden el crecimiento celular. Si se produce una mutacin o prdida de uno de estos factores citoplasmticos que regulan la activacin de factores de transcripcin que permiten la formacin de protenas inhibitorias, ocurrir que aun en presencia de la seal inhibitoria no se podr transcribir la protena inhibitoria que realice la funcin, ya que faltar uno de los intermediarios citoplasmticos. Una mutacin en cualquiera de las dos vas (estimulatoria o inhibitoria) provocar un ciclo celular anormal que conducir a generar clulas tumorales.

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telangiectasia mutated), ATR (ATM- and Rad3related), Chk1 y Chk2) para estimular los genes p21 y p27 que son capaces de detener el ciclo celular.

NOTA: Si la mutacin se encuentra presente en el ADN, se puede transmitir a clulas hijas, excepto en el caso de que ocurra exclusivamente en clulas somticas de un determinado rgano.

GENES SUPRESORES O REGULADORES DE TUMORES Son genes que regulan negativamente el ciclo celular; inhiben el proceso de proliferacin celular, mientras se produzca la reparacin de ADN daado, y/o promueven la muerte celular programada en el caso de situaciones en que no existan las herramientas para la reparacin. Son genes blanco de ser mutados para poder provocar la transformacin celular. Mutacin recesiva En las genes supresores de tumores ocurren mutaciones recesivas en que las dos copias del gen son mutadas, por lo que se produce la prdida de funcin. Existen dos tipos: - Caretakers: Genes asociados al mecanismo de reparacin de bases mal apareadas. La mutacin se relaciona indirectamente con los genes supresores de tumores ya que ocurre sobre los genes reguladores de la reparacin del ADN, provocando un descontrol de la mutacin. - Gatekeeper: Se encuentran directamente relacionados con los genes supresores de tumores, ya que bloquean el ciclo celular en la etapa en que alteracin es reparada o en que se induce la muerte celular programada de la clula portadora de la mutacin, generando la mutacin. Gen supresor de tumores p53 Corresponde a un gen de transcripcin guardin del genoma ya que advierte a partir de los genes que censan el estado del ADN (ATM (ataxia

En la imagen se observan los sitios en que p53 acta para provocar la expresin de un gen. Al estar mutado p53 las clulas se transforman en clulas cancergenas ya que no son capaces de detenerse en G1 ni en G2.

Gen supresor de tumores Rb Gen capaz de secuestrar al factor de transcripcin E2F y por fosforilacin de ciclinas y cdks lo libera permitiendo pasar al siguiente ciclo. En su ausencia no es posible capturar E2F y estara siempre disponible, por lo que el ciclo celular se llevara a cabo constantemente.

En condiciones normales las clulas poseen un par de alelos para Rb, existiendo la posibilidad de que uno sea mutado sin que se genere un tumor.

Si se hereda un gen mutado y posteriormente ocurre la mutacin somtica del alelo normal, provocando una libre proliferacin de las clulas y, en este caso, la generacin de la enfermedad retinoblastoma (cerca de la retina) y el desarrollo de un tumor.

Puede ocurrir, adems que el tumor se genere por la mutacin somtica de los dos alelos.

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PROTO-ONCOGENES Los oncogenes provienen de proto-oncogenes. Los proto-oncogenes son genes relacionados con procesos de proliferacin celular, diferenciacin celular y apoptosis. Es un gen normal que se puede convertir en oncogen tras adquirir una serie de mutaciones dominantes que implican una alteracin en sus niveles de expresin o en su funcin, provocando una situacin oncolgicas.

Genes supresores y tumores asociados

En la imagen se observa un factor de crecimiento (Sis), protenas de membrana receptoras de factores de crecimiento (ErbB, Fms, Kit, Ros Sea, Eyk, Mpl; la mayoria son de tipo Tirosina-kinasa), protenas asociadas a membrana que forman parte del sistema de transduccin de seal (Src, Abl, Yes; tipo tirosina-kinasa), adaptadores de enlaces (Crk), GTPasas (RAS), protenas tipos serin-treonina-Kinasa (Mos, Raf) que participan en la cascada de seal, protena tirosina-kinasa (Fps), factores de transcripcin de los que algunos regulan el ciclo celular y otros el ingreso a apoptosis (Myc, Myb, Rel, Jun, Fos, Skl, Ets, Maf, Qin) y el receptor (ErbA) a una hormona liposoluble que activa expresin de genes a nivel nuclear.

Ejemplos de proto-oncogenes

NOTAS: Recordar que dentro de las protenas GTPasas, existe un grupo que participa en las vas de transmisin de seal, RAS por ejemplo. El Schwannoma es un tumor relacionado con las clulas se Schwan. El cncer de mamas no es exclusivo de mujeres. La especificidad de algunos tumores respecto a los tejidos en que aparecen se debe a que se generan por diferenciacin celular y que los genes supresores afectados se encuentran en tejidos especficos.

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NOTA: Todas estas protenas en el ciclo celular sufren un momento de alta expresin y luego por protelisis (degradacin mediante el sistema de proteosomas) desaparecen del ciclo celular; aparecen slo en determinados momentos del ciclo celular. Si se logra que una de estas protenas sea resistente a la degradacin, la activacin ser permanente y se desregular el ciclo celular.

TRANSLOCACIONES CROMOSMICAS Corresponde a otra forma de activacin de protooncogenes. La translocacin consiste en la transferencia del trozo de un cromosoma a otro. Translocacin del cromosoma Filadelfia

Proto-oncogenes (izquierda) y tipo de protena que codifican (derecha). Existen proto-oncogenes a nivel de transmembrana, asociados a membrana, en el citoplasma y en el ncleo. Algunos corresponden a protenas secretadas. Un proto-oncogen puede sufrir varios fenmenos, de los cuales no todos lo conducen a su conversin en oncogen. (1) La ocurrencia de la translocacin o transposicin genera la formacin de un nuevo promotor y una estimulacin en exceso

El cromosoma Filadelfia fue descubierto en Filadelfia. En este caso se observ un acortamiento de un cromosoma y el crecimiento de otro, producto de la translocacin entre los cromosomas 22 y 9. Los genes alterados son bcr y c-abl, generando el hbrido bcr-abl, provocando la Leucemina mieloide crnica (cncer).

de la protena (crecimiento normal), pero esto no conllevar a su transformacin en oncogen. (2) En el caso de una duplicacin celular provocada por una amplificacin del gen a causa de una recombinacin desigual, el aumento del nmero de copias del gen no va a provocar la conversin. Los sucesos que provocan su conversin en oncogen corresponden a (1) Mutaciones sobre las zonas reguladoras del gen en que la protena es producida en un nmero mucho ms exagerado de lo que se requiere normalmente. (2) Mutaciones puntuales en la zona codificante del gen, que provocan hiperactividad en la protena o resistencia a degradacin.

En este caso c-myc, factor de transcripcin encargado del paso a apoptosis, sufre una translocacin en su cromosoma 8 con el cromosoma 14 de los linfocitos B y T, utilizando el sitio de la hemoglobina H en el caso de los linfocitos B y TCR en el caso de los linfocitos B. Por ende, c-myc cambia sus niveles de expresin.

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Mutacin del proto-oncogen cRas: cRas es un proto-oncogen que tiene la funcin de fosforilar protenas a travs de la hidrlisis de GTP GDP (es una GTPasa). Este proto-oncogen puede mutar pasando de cRas (en estado normal) a Ras (cuando esta mutado). La nica diferencia que posee Ras respecto de cRas es que es incapaz de hacer hidrlisis de GTP; al no producirse hidrlisis queda constituvamente activo (ya que el GTP no sale del sitio activo). Esto genera la activacin de otras seronina-treonina-quinasas, las cuales son sus blancos, y stas a su vez fosforilan a otras protenas. Cuando cRas se transforma en Ras la fosforilacin de protenas es permanente por lo que tambin lo es la cascada de transduccin de seal en la que se encuentra involucrado. Estructuralemente cRas difiere de Ras en un solo aminocido. A nivel del ADN se produce una mutacin puntual de transversin en la cual se cambia una G por una T en el triplete que da origen al aminocido nmero 12 de la protena cambiando una glicina (en cRas) por una valna (en Ras). Este proto-oncogen fue el primero descubierto en lo que respecta a la transformacin de clulas en clulas tumorales.

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La protena Ras puede generar mltiples tumores, en colon pncreas y pulmones.

El cuadro menciona los efectos de diversas protenas que fueron sintetizadas a partir de un oncogn (proto-oncogen mutado).

VIRUS Y CLULAS TRANSFORMADAS Los virus tambin son capaces de dar origen a clulas transformadas. En condiciones in-vitro se puede analizar lo que le sucede a las clulas cuando por influencia de los virus pasan a ser clulas transformadas. Caractersticas de clulas transformadas por virus: Inmortalidad. ADN viral integrado en el genoma o un ADN episomtico (capaz de integrarse al genoma y luego salir de l). Alteraciones en el crecimiento entre las que contamos: Prdida de inhibicin por contacto, capacidad de dividirse indefinidamente, alta eficiencia de clonado etc. Alteraciones de la morfologa celular. Alteraciones del metabolismo. Anormalidades cromosmicas. Sntesis de nuevos antgenos (virales y celulares). Capacidad de generar tumores. Existe una variedad de virus capaces de transformar proto-oncogenes en oncogenes

Para determinar qu segmento del ADN haba mutado haciendo que cRas se transformara en Ras, se hibrid alternadamente el gen Mutado (Ras) y el gen que me daba origen a la protena normal (cRas) La hibridacin se acot hasta dar con la secuencia nucleotdica que daba origen a Ras, tal como se muestra en la imagen.

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generando la inactivacin, por parte de estos ltimos, de los supresores de tumores. En la transformacin celular llevada a cabo mediante virus, son los mismos objetivos los que se inactivan (los genes supresores de tumores). Sin embargo, esta vez ser el virus el que traiga desde fuera de la clula un oncogen que generar tal efecto. Ejemplo: El provirus; su genoma, una vez que ingresa a la clula, se inserta en el genoma celular cerca de un proto-oncogen. La secuencia genmica viral posee extremos LTR, en el caso de que esta secuencia LTR se vea interrumpida (por una deleccin, por ejemplo). Al transcribirse ese segmento de ADN no slo se transcribir el ADN viral sino que adems el proto-oncogen que est al lado de ste. El proto-oncogen ahora formar parte de la partcula viral.
TIP Transduccin viral: proceso a travs del cual un virus trae un fragmento gnico desde un genoma a otro genoma.

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Hay que tener en cuenta que esto no siempre sucede, ya que el virus tiene un lmite para llevar dentro de s material gentico. Cuando este lmite se sobrepasa (por ejemplo si el fragmento del protooncogen es muy grande) la partcula viral no se forma. Por lo tanto, no necesariamente todo el proto-oncogen est siempre dentro del virus, puede haber solo un fragmento dentro de l. Ejemplo: Receptor del factor de crecimiento epidrmico; cuando un virus lleva la secuencia nucleotdica que da origen a este receptor, pero no la lleva completa (porque posee un lmite de material gentico que puede transportar), ocurrir que al traducir el ADN viral en la clula infectada por el virus, sta dar origen a un receptor defectuoso con ausencia de varios dominios externos e internos del receptor, por lo cual el receptor no requerir de su ligando para funcionar y permanecer siempre activo. De esta forma la cascada de seales a las que da origen el factor de crecimiento epidrmico, siempre estar funcionando, sin que el factor de crecimiento epidrmico la promueva. Es lo que se describe en la imagen siguiente:

Cuando los virus que llevan consigo el ADN del proto-oncogen invadan a otras clulas, el protooncogen se expresar anormalmente y dar origen a un oncogen (ya que sus niveles de expresin sern muy desregulados).

Lo mismo sucede con algunos fragmentos de ADN llevados por virus desde una clula a otra que llevan codificada la expresin de receptores tirosinakinasa. Estos en su forma normal requieren de la dimerizacin para activarse, sin embargo (en algunos casos), cuando el gen es transportado por un virus, se expresa de forma defectuosa y permanece siempre activo ya que no requiriere de la dimerizacin y por lo tanto mantiene tambin

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siempre activa la cascada a la que dan origen, desregulndola. Los virus no slo son capaces de llevar fragmentos de ADN que posean un oncogen, sino que adems, cuando su ADN se inserta en el genoma celular, desregula a los proto-oncogenes que se ubican cerca de l, provocando efectos nocivos para la clula. Curiosamente los genomas de los retrovirus se ubican preferentemente cerca de estos protooncogenes. Algunos oncogenes transportados por virus son capaces de cambiar las condiciones de normalidad de la clula. Ejemplo: El factor de transcripcin NF-Xb tiene por funcin inhibir la transcripcin. Este factor generalmente se encuentra secuestrado por su inhibidor I-Xb. Este ltimo requiere fosforilarse para dejar libre al factor de transcripcin NF-Xb para que se pueda unir al ADN. Cuando un virus lleva consigo el segmento de ADN en forma de oncogen (mutado) que codifica para el factor de transcripcin NF-Xb, ste pasa a denominarse v-Rel. Este factor de transcripcin no se expresa con un dominio citoplasmtico capaz de unirse a su inhibidor (I-Xb), por lo que se adhiere al ADN permanentemente inhibiendo as la transcripcin de un segmento del ADN tambin de forma permanente.

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Algo parecido sucede con el factor de transcripcin Erba. ste factor requiere de un ligando para unirse al ADN y promover la transcripcin. Este ligando suele ser una hormona. Cuando el segmento del ADN que codifica para el factor es llevado por un virus a otra clula, este se expresa de tal forma que no se hace necesario el ligando para que el factor se una al ADN, por lo que siempre est el factor promoviendo la transcripcin de un gen.

Estas son diferentes formas de cmo se pueden transformar clulas normales en clulas tumorales a partir de la intervencin en el ADN de un virus.

Jun y Fos son factores de transcripcin fundamentales para que la clula entre en apoptosis. Estos factores deben ser dimerizados y formar el complejo AP1. ste, a su vez, requiere de una fosforilacin para que se pueda unir al ADN y promover la apoptosis. Los virus tambin poseen los factores Jun y Fos (se denominan vJun y vFos). Este tipo de factores no poseen el dominio que les permite unirse entre s y formar el complejo AP1, pero mantienen sus dominios de adhesin al ADN, por lo que se adhieren a este independientemente de si se forma el complejo AP1 o no. Esto promueve la transcripcin de un conjunto de genes que no deberan transcribirse.