En la Histotecnologa se denomina impregnacin a toda coloracin especial en la que se utiliza sales metlicas (cloruro de oro, nitrato de plata sales

de cromo, etc.). Para originar precipitados metlicos en las estructuras que van hacer teidas.

 El objetivo de impregnacin argntica es precipitar plata metlica a partir de sus sales para conseguir que se deposite sobre los tejidos. La sal argntica ms utilizada es el nitrato de plata que tiene la propiedad de ser muy soluble en el agua.

Corteza cerebral (sustancia gris; neuronas piramidales, granulosas, estrelladas)

1.-Impregnacin argntica por mecanismos predominante fsico y fsico qumico. En ellas se produce fenmenos de tipo fsico y fsico qumico y no reacciones qumicas concretas entre los tejidos y la sal de plata utilizada. COLORACION DE LAS ESTRUCTURAS HISTOLOGICAS POR UN MECANISMO PURO DE IMPREGNACION.

1.-Impregnacin argntica por mecanismos predominante fsico y fsico qumico. DETERMINADAS ESTRUCTURAS HISTOLOGICAS ELECTRONEGATIAS ATRAEN, POR UN MECANISMO ELECTROSTATICO, A IONES DE PLATA CARGADOS POSITIVAMENTE Ag + QUE EXISTE EN LA SOLUCION DE IMPREGNACION.

1.-Impregnacin argntica por mecanismos predominante fsico y fsico qumico. POSTERIORMENTE ESTOS IONES SE HACEN PRECIPITAR COMO PLATA METALICA SOBRE LAS ESTRUCTURAS HISTICAS MEDIANTE REDUCCION EXTERNA. LA PLATA METALICA EN FORMA DE FINOS PRECIPITADOS TIENE ESPECIAL APETENCIA POR DEPOSITARSE SOBRE ESTRUCTURAS FIBRILARES FINAS Y POR SUPERFICIES CELUALRES DOTADAS DE DELGADAS PROLONGACIONES TALES COMO CELULAS GLIA, NEURONAS, FIBRAS RETICULARES DEL TEJIDO CONJUNTIVO.

1.-Impregnacin argntica por mecanismos predominante fsico y fsico qumico. ARGIROFILIA: PROPIEDAD QUE POSEE DETERMINADAS ESTRUCTURAS TISULARES EN UNIRSE A LOS IONES DE PLATA DERIVADOS DEL NITRATO DE PLATA O PLATA AMONIACAL. FIBRAS DE RETICULINA GRANULACIONES INTRACITOPLASMATICA (GRIMELIUS)

 El tejido no interviene activamente en el mecanismo de liberacin de plata metlica a partir de su sal soluble. No todos los tejidos tienen idntica apetencia por la plata; como en todo impregnacin, tanto la carga elctrica como la textura de las clulas para teir (rugosidad superficial, presencia de prolongaciones o vellosidades etc.). Intervienen de manera decisiva.

2.- impregnacin argntica por mecanismos histoqumicos.

Se basa en la actuacin de un componente de tejido sobre el nitrato o sus derivados a raz de la cual ocurre una precipitacin de plata metlica a partir de sus correspondientes iones. Por tanto el tejido interviene activamente en el deposito de plata a travs de una reaccin qumica de reduccin.

2.- impregnacin argntica por mecanismos histoqumicos.

ARGENTAFINIDAD: ES LA PROPIEDAD QUE TIENEN ALGUNOS TEJIDOS DE REDUCIR EL NITRATO DE PLATA AMONIACAL A PLATA METALICA SIN INTERVENCION DE AGENTES REDUCTORES EXTERNOS.

2.- impregnacin argntica por mecanismos histoqumicos.

ARGENTAFINIDAD: PROPIEDAD CARACTERISTICO PARA DETERMINAR GRANULACIONES CITOPLASMATICOS PRESENTES EN LAS CELULAS CUTANEAS COMO LOS MELANOCITOS, QUE SECRETAN MELANINA, Y EN CIERTAS SECRECIONES ENDOCRINAS PRESENTES EN EL TUBO DIGESTIVO

2.- impregnacin argntica por mecanismos histoqumicos.

ARGENTAFINIDAD: EN CIERTAS SECRECIONES ENDOCRINAS PRESENTES EN EL TUBO DIGESTIVO Y QUE RECIBEN EL NOMBRE DE ARGENTALINES, ENTERO CROMAFINES O CELULAS KULTSHITZKY. ESTAS CELULAS SE ENCUENTRAN SOBRE TODO EN LAS GLANDULAS PILORICAS DEL ESTOMAGO, CRIPTAS LIEBERKUN Y MUCOSA DEL APENDICE.
MASSON FONTANA

3.- impregnacin argntica no histoquimica o por mtodos predominantemente fisicos fsico qumicos. Los aspectos esenciales en este tipo de impregnacin son las siguientes: 1.-La fijacin se hace fundamentalmente con formol como tambin se puede utilizar Bouin que acta como mordiente. 2.- La impregnacin argntica se divide en: a).- Impregnacin argntica en un tiempo. b).- Impregnacin argntica en dos tiempos

 En ella se suele a partir de nitrato de plata (AgNo3). Esta impregnacin se fundamenta en el uso de un reductor severa directa de la sal de plata a plata metlica a travs de un agente reductor potente como pirogalol hidroquinona.

AgNo3 + agente reductor= Ag + prod. oxidacin

 Impregnar el tejido con nitrato de plata Reducir con un reductor fuerte como el pirogalol o la hidroquinona EJ: Tcnica de Bodian para neurofibrillas. Ej: Tcnica de Grimelius para argirofilia Ej: Tcnica de Wartin Starry H. pylori.(argentafinidad)

 Utiliza procedimientos qumicos para obtener plata metlica a partir del Nitrato de plata mediante varias reacciones sucesivas. En una primera fase es necesario tratar en Nitrato de plata con bases fuertes como en hidrxido de sdico, hidrxido potsico, hidrxido amnico etc. Con la cual se obtiene oxido de plata que precipita en granulaciones parduzcas.

 Mediante la adicin el amoniaco con la solucin anterior se obtiene un complejo inico de plata y amonio el denominado xido de diamino-argntico o plata amoniacal soluble en agua aunque muy inestable. Ag2O +

NH3= [(AgNH3 ) 2 ] 2O

 El xido de diamino-argntico o plata amoniacal se reduce al aadirse formol 10% el cual tiene capacidad de captar oxigeno hasta precipitar la plata dando como producto plata metlica, cido frmico y amonaco. [(AgNH3 ) 2 ]2O+CHOOH= Ag+ NH3+HCOOH Esta plata metlica es la que se deposita sobre el tejido en forma molecular muy estable. Las tcnicas de coloracin para fibras de reticulina son el ejemplo ms caractersticos de esta forma de impregnacin

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 Matriz extracelular o MEC. La MEC est constituida por la sustancia fundamental por fibras (colgenas, reticulares y elsticas) III: Se conocen tambin como fibras reticulares porque se crea que difera de la colgena. En la actualidad se sabe que la fibra reticular es un tipo de colgena que se glucosilla en grado elevado y forma fibras delgadas o redes.

 Se encuentran como un reticulado fino muy. Rodean a los adipocitos, a las clulas del msculo liso, se encuentran por debajo del endotelio de los capilares a los que dan cierta rigidez. Forman el retculo del tejido linfoide y de la mdula sea y rodean a las clulas parenquimatosas de las glndulas. A causa del gran contenido de grupos carbohidratos las fibras de colgena tipo III se tien de manera preferencial con sales argnticas o por medio de la reaccin del cido perydico de Schiff (PAS).

Fibras reticulares negro. Fibras colgenas amarillento Fibras reticulares del bazo p = reticulina del parnquima sv = reticulina de los senos venosos

Fibras reticulares de hgado EP = espacios porta V = vena terminal del lobulillo

 Un tiempo Demuestran granulaciones intracitoplasmaticas Clulas argirfilas : negro

Demostracin de oncocitos en una metstasis heptica Oncocitos tienen su origen en clulas endocrinas del sistema digestivo (intestino delgado).

 Un tiempo Clulas argirfilas : negro

demostracin de clulas neuroendocrinas y de los tumores derivados se ellas.

 Impregnacin argntica en dos tiempos Se impregna con plata amonialcal La segunda reduccin la realiza el tejido Demuestra granulaciones de melanocitos, clulas argentafines intestinales.

Helicobacter pylori colonizado en la superficie del epitelio regenerativo, teidas con el mtodo de WarthinStarry

 En contraste con la escasez de fibras de reticulina en la piel normal vemos abundancia en condiciones patolgicas en las cuales la actividad fibroblstica forma nuevo colgeno. As vemos numerosas fibras de reticulina en granulomas tales como Lepra, Tuberculosis, Sarcoidosis, tumores fibroblsticos como dermatofibroma, fibrosarcomas y queloides. Ayudan a reconocer ciertas patologas renales tales como glomeruloesclerosis, glomerulonefritis lobular crnica.

 Retculo es una funcin de apoyo del cuerpo y es abundante en hgado, el bazo y el rin. En un hgado normal de las fibras se va a definir lneas, pero el hgado necrtico y cirrticos muestran patrones discontinuos. Retculo tambin forma patrones caractersticos en relacin con ciertas las clulas tumorales.

En estas tcnicas la sal de plata ms empleada es el nitrato de plata, de all que esta operacin se denomina tambin nitratacin. Con esta tcnica se impregnan dos tipos de elementos: Las fibras reticulares de la MEC que rodean clulas y vasos para poner en evidencia los lmites de los elementos celulares obtenindose una imagen negativa de estos ltimos. Los elementos citolgicos (ncleo, aparato de Golgi) y elementos nerviosos los cuales dan una imagen positiva

 Las tcnicas para fibras reticulares esencialmente son de dos tipos: 1) En cortes congelados, los cuales derivan del mtodo tanno-argntico de Achucarro (1911) y 2) Las derivadas de la tcnica de Bielchowsky (1904) para cortes congelados o en parafina. El nmero de variantes derivadas de las tcnicas madres son numerosas

 Los mtodos modernos de impregnacin argntica, pueden ser clasificados en dos grandes grupos, partiendo del tipo de solucin al que se exponen los tejidos para lograr la impregnacin. De esta manera, tenemos mtodos de plata amoniacal y de metenamina plata.

 1) Mtodos de Plata Amoniacal: Todos los mtodos de plata amoniacal, tienen los siguientes pasos principales: Oxidacin, sensibilizacin, exposicin a la solucin de plata, reduccin, tonificacin, remocin de la plata que no ha reaccionado y la coloracin de contraste. Muchos de los mtodos de plata amoniacal tienen mecanismos similares. Todos utilizan como base la solucin de Bielchowsky que se prepara precipitando 5cc de nitrato de plata al 5% con gotas de amoniaco para el equilibrio ionico luego de agrega 5 cc de hidrxido de sodio al 3%. Luego se redisuelve el precipitado resultante aadiendo gota a gota amonaco y se completa con agua destilada hasta obtener un volumen total de 40cc.

 La Oxidacin de los tejidos sirve para amplificar la subsecuente tincin de las fibras reticulares. Los oxidantes pueden variar de acuerdo a las tcnicas. Los lavados, luego de la oxidacin sirven para remover el exceso de reactivo.

Oxidacin: Permanganato de potasio, KMnO4. Se trata de sustancias de un intenso color violeta y alto poder oxidante que contienen el anin. Las manchas generadas por el permanganato suelen ser debidas a la formacin de xidos de manganeso y se eliminan fcilmente con disoluciones ligeramente aciduladas de sulfito o tiosulfato. Sin embargo estas sustancias pueden generar en los tejidos, tras la exposicin al sol, manchas amarillas, por lo que se prefiere usar cido oxlico.

Oxidacin: El cido oxlico es un reductor del permanganato y neutralizante de los xidos de manganeso que generan manchas. es un cido carboxlico H2C2O4. cido orgnico relativamente fuerte. es tanto un agente reductor como un elemento de conexin en la qumica. Reacciona con permanganato (MnO4-) reducindolo a manganeso y oxidndose a carbonato o CO2:

 El paso de sensibilizacin es bsicamente una impregnacin con una sal metlica que forma compuestos orgnico-metlicos con el tejido y luego este metal sensibilizado es reemplazado por la plata de la solucin de nitrato de plata.

 Posteriormente, los tejidos son tratados con la solucin de plata amoniacal. Usualmente, no hay cambios de color hasta que las secciones realmente se hayan reducido. Este proceso de reduccin es comnmente denominado revelado, y las tcnicas de plata-diamina requieren concentraciones variables de formalina (formaldehido HCHO) como agente reductor.

 La plata metlica visible que resulta del proceso de reduccin puede ser marrn o negra, dependiendo de la cantidad de plata y del tamao de las partculas. Estos depsitos pueden ser tonalizados convirtindolos en depsitos de oro metlico que son prpura negros, al tratarlos con cloruro de oro (AuCl3). El oro metlico es mucho ms estable que la plata metlica, y los cortes tratados con esta solucin muestran un mejor contraste y claridad que los que no han sido tratados con la solucin.

 Reforzamiento. Con cloruro de oro amarillo es un paso de gran utilidad el reforzamiento consiste en eliminar esta plata y substituirla por cloruro de oro.

 El tratamiento final de la seccin para su contraste es la inmersin de las lminas en una solucin de tiosulfato de sodio que forma complejos solubles con la plata inica que no ha reaccionado con el tejido. Esta remocin de la plata no reactiva previene una tarda reduccin no especfica de la plata con la luz, al igual que remueve el exceso de cloruro de oro que pueda estar presente en el tejido.

GRIDLEY Oxidacin

WILDER

SNOOK Permanganato de Potasio 0,25% cido Oxlico al 5%

GOMORI cido Peridico 0,5%

cido Perydico cido 0,5% Fosfomolbdico 10%

Sensibilizacin Nitrato de Plata Nitrato de al 2% Uranio al 1% Exposicin a Solucin de plata Nitrato de plata al 5% =20ml + Nitrato de plata al 10,2% =5ml +

Nitrato de Uranio al 1% Nitrato de plata al 5% =20ml

Solucin metenaminanitrato de plata

Hidrxido de Sodio 10%

= 20 gotas.

Hidrxido de amonio

Hidrxido de Sodio +
10%=20 gotas Hidrxido de amonio

Metenamine al 3%=
Nitrato de Plata al 5% = Borax al 1%

GRIDLEY Reduccin Formalina al 30%

WILDER

SNOOK

GOMORI

Formalina al Formalina al 1% 40%= 0,5ml Nitrato de Uranio 1%=1,5ml Agua destilada=50ml

Tonificacin

Cloruro de Oro 1%

Cloruro de Oro 1% Tiosulfato de Sodio al 1% Kernechtrot

Cloruro de Oro al Cloruro de Oro 1% al 1% Tiosulfato de sodio al 1% Kernechtrot Tiosulfato de sodio al 1% Kernechtrot

Remocin de la Tiosulfato de plata no Sodio al 1% reactiva Contraste Kernechtrot

 2) Mtodos de metenamina de plata: Los mtodos de metenamina de plata de Jones y Gomori, estn basados en la produccin de grupos aldehidos a partir de los grupos aglicol de los carbohidratos presentes en las fibras reticulares y en las membranas basales luego de la exposicin de los tejidos a una solucin de cido perydico. Estos aldehidos se reducen con los complejos de metenamina de plata dando como resultado plata metlica visible. El cloruro de oro y el tiosulfato de sodio, son usados en estos mtodos y cumplen las mismas funciones que en las impregnaciones de plata amoniacal

Mtodos de metenamina de plata GROCOTT : Ampliamente utilizada para revelar microorganismo fngicos. Tincin de JONES: Tincin Metenamina de plata y Acido peridico de Shiff.

PARED CELULAR Esta formada por capas de polisacridos Glucanos (polmeros -1,6, ramificados de glucosa) Mananos (polmeros 1,6, ramificados de manosa)- Polmeros de glucosamina Protenas Lpidos (ergosterol) Quitina (polmero -1,4 de N-acetilglucosamina)

 2) Mtodos de metenamina de plata: ACIDO CROMICO 5 % (1 hora) OXIDACION: Los aldehdos se oxidan con relativa facilidad para dar cidos carboxlicos, y es suficiente el empleo de agentes oxidantes suaves. BISULFITO SODIO 1% (1 minuto) Remueve todos los residuos de la solucin de cido crmico retira las estructuras que no han sido

 2) Mtodos de metenamina de plata: SOLUCION MATRIZ DE NITRATO DE PLATA Y METENAMINA Solucin nitrato de plata al 5% 5 cc Solucin metenamina al 3% 100 cc SOLUCION DIARIA DE NITRATO DE PLATA Y METENAMINA Solucin matriz 25cc Agua destilada 25cc Borax 5% 2cc

 2) Mtodos de metenamina de plata: CLORURO DE ORO

TISULFATO (HIPO) DE SODIO AL 5%

SOLUCION VERDE CLARO 0.2%

Biopsia de pulmn 40X. Tincin de plata-metenamina de Gomori. Se observan vesculas, hifas septadas con ramificacin dicotmica en ngulo de 45, compatible con Aspergillus sp.