La reaccin en cadena de la polimerasa,

(Polymerase Chain Reaction),

Desarrollada en 1983 por Kary Mullis

obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de ese fragmento original, o molde.

la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente

Mezcla compleja obtenida de ADN de tejidos

Region especifica que queremos amplificar

Con el PCR podemos hacer millones de copias de la region target

Se baja la temperatura a para que se unan los prymers especificos

Los prymer sirven de molde para que la taq polimeraza sintetize ADN hacia el extremo 3` con una temperatura 72, usando nucleotidos libres solo esta region sera amplificada ya que solo puede sintetizar ADN apartir de prymers especificos

En algunas cadenas no se detendra hasta que se descarrilen

Al final de ciclo 1 se han formado 2 cadenas de doble helice

De modo tal que la polimeraza sentetiza en direccion 5 3 obteniendo 4 cadenas con el extremo 3 mas largo

Al final del ciclo 3 obtendremos 2 moleculas target doble con extremos 3 mas largos

El numero de moleculas target ( especificas) ah cresido exponencialmente obteniendoce 1,073,741,766 y solo 60 moleculas largas permanecen en la reaccion .

Hoy, todo el proceso de la PCR est automatizado mediante un aparato llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reaccin para controlar la temperatura necesaria para cada etapa de la reaccin.

Los resultados de la PCR se analizan habitualmente mediante la tcnica de electroforesis en gel de agarosa.

Mtodo que se emplea para separar macromolculas en funcin del tamao. la carga elctrica y otras propiedades fsicas
electroforesis describe la migracin de las partculas cargadas bajo la influencia de un campo elctrico La electroforesis en gel de agarosa es un mtodo normalizado que se utiliza para separar, identificar y purificar fragmentos de ADN.

Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo elctrico, estas experimentan una fuerza de atraccin hacia el polo que posee carga opuesta.

La agarosa es un polisacrido (originalmente obtenido de algas, como el agar-agar, pero de composicin homognea poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C y formar un gel, semislido al enfriarse.

Pesar agarosa suficiente para un volumen de 150 mL y una concentracin de 0,8 %. (unos 1,2 g). Colocar la agarosa en un matraz de 250 mL, agregar los 150 mL de buffer de corrida, marcar hasta donde llega el buffer.

Llevar al microondas y fundir la agarosa. Controlar el nivel de lquido, si est por debajo de la marca realizada, completar hasta all con H2O

Peines que haran los posillos para sembrar Adn.

La agarosa al enfriarse, se gelifica y solidifica y cambia de color de tranparente a ligeramente blanco.

Debemos sumergirlo en un colorante especifico de ADN en este caso bromuro de etidio que se intercala entre las bases de ADN, y se ve con rayos UV.

Bromuro de etidio: agente intercalante usado comnmente como marcador de cidos nucleicos en laboratorios de biologa molecular para procesos como la electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone esta sustancia a luz ultravioleta, emite una luz roja-anaranjada, que se intensifica unas 20 veces despus de haberse unido a una cadena de ADN. esta sustancia tiene un poderoso efecto mutgeno y, posiblemente puede ser cancergeno o teratgeno.

Fuente de poder que emitira voltage al gel sumergido en buffer conductor

El ADN tiene carga negativa , es decir migrara al polo positivo.

El cual ayuda a sembrar, y nos permitira ver aproximadamente a donde correra el ADN.

El PCR amplifica selectivamente una cantidad de moleculas especificas de ADN dentro de una mezcla de ADN genomico , y con la electroforesis capilar en gel nos permite separar, identificar y purificar fragmentos de ADN. Son dos procesos que van de la mano.