UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II EXTRACCION DE COLORANTE (Bixina) A PARTIR DE SEMILLAS DE ACHIOTE (Bixa orellana L.

) INTRODUCCION Los colorantes naturales se dividen en tintes y pigmentos. Los tintes se definen como compuestos que interaccionan qumicamente con el sustrato coloreado (p. e. textiles) por otro lado, los pigmentos, muy usados en la industria farmacutica, no forman enlaces qumicos con el sustrato, y para que pueda adherirse a la superficie del sustrato se tiene que mesclar con un adhesivo. El cultivo de achiote ha adquirido importancia, principalmente, por la presencia de colorante en la semilla. Este colorante natural, como otros, est desplazando a los colorantes sintticos por los efectos que stos ocasionaran al utilizarse en la dieta humana. Adems, la Organizacin Mundial de la Salud, considera al colorante obtenido del achiote como uno de los pocos permitidos, por no ser txico y no alterar el sabor de los alimentos (Hernndez, 1988). Estos aspectos han incrementado su exportacin. Este colorante se usa en la industria alimentaria para la coloracin de mantequillas, margarinas, quesos, yogurts, aceites, nctares, productos de panadera y confitera (SGS, 1991). El annato puede obtenerse mediante extraccin acuosa, alcalina o con otros solventes como aceites, propilen-glicol, alcohol etlico y tricloro-etano. El mtodo ms utilizado es el de extraccin alcalina. Sin embargo, los principales mercados de exportacin (Estados Unidos, Europa y Japn) desean que se eliminen los mtodos de extraccin que utilizan productos qumicos (Liceras, 1988). El uso de enzimas (pectinasas, celulasas, hemicelulasas) que degradan la pared celular, facilitara la extraccin acuosa del colorante (Godfrey, 1983). Estas enzimas que actan sobre componentes insolubles tales como celulosa, hemicelulasas y pectina permitiran obtener un colorante (annato) de mayor pureza y calidad. Asimismo, permitira dejar de lado las sustancias qumicas utilizadas actualmente en los mtodos de extraccin industriales. El presente trabajo tuvo como objetivo obtener esta extraccin acuosa, alcalina-acida en la extraccin de colorante a partir de semillas de achiote (Bixa orellana L.).

OBJETIVOS: Determinar el fundamento de extraccin de colorantes naturales. Extraer el colorante crudo de achiote (bixina) Realizar la extraccin dela Bixina mediante el mtodo alcalino condiciones para la obtencin de un buen rendimiento con mejores

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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II JUSTIFICACION. Hoy en da el uso de los colorantes es vital en los productos puestos en los mercados, esto debido a que en algunos se usa los colorantes para mejorar su apariencia y color, esto significa el rechazo o la aceptacin de estos de parte del consumidor, esta situacin no solo es comn, si no que se a convertido en una necesidad. Despus de la segunda querr mundial el descubrimiento de los colorantes sintticos (derivados de petrleo, aluminio y del carbn) sustituyo el uso de los naturales. La importancia de los colorantes naturales como sustitutos de los artificiales (Food and Drug Administration FDA, 2002) Los colorantes sintticos certificables son, aprobados para su uso por la FDA, existen 8 colores certificados que son Amarillo #6, Amarillo #5 Azul #1 Azul #2 Naranja B, Rojo Citrus, Rojo #40, Verde #3. Los aditivos colorantes exentos de certificacin incluyen los pigmentos derivados de fuentes naturales, o animales entre ellos se se incluyen los colorantes obtenidos de las semillas (la pepa) del aguacate y del achiote asi como extractos vegetales (FDA 2002/ OMS, 2006) Los industriales han vuelto los ojos nuevamente hacia los colorantes naturales dentro de los cuales la Bixina, extrada del Achiote, tiene un gran potencial. Es una sustancia con alta resistencia a ls agentes qumicos por lo que resulta muy apropiada para colorear todo tipo de alimentos y bebidas (Smith y Col, 1992) El achiote tiene una gran importancia econmica y cultural en muchos pases. Muchas son las estrategias que se han buscado para cambiar las formas de produccin. Por su naturaleza qumica, los colorantes pueden ser Inorgnicos y orgnicos. El cultivo de achiote no requiere de muchos cuidados, en la actualidad no existen muchas empresas que se dediquen a la extraccin de los colorantes. Se sabe hasta el momento que el mejor rendimiento de la semilla de achiote se obtiene por medios alcalinos USOS En la industria: . En Centroamrica se usa como colorante y condimento diario en las comidas Tales como el arroz preparado de varias formas, en caldos, consoms o sopas, recaudos y en la preparacin de carnes y embutidos. La mayor utilizacin de los extractos del achiote es en la fabricacin de quesos; tambin se usa como colorante de la mantequilla, principalmente por su contenido de pro vitamina A. La materia colorante se emplea en la tintorera para dar colorido y fuerza a otras sustancias colorantes que adquieren as notable brillantez para teir telas de lana, seda y algodn. Se emplea tambin para colorear alfombras. En confitera se usa en la fabricacin de dulces y caramelos.
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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II En la industria de helados, sorbetes y paletas. Colorantes: De la porcin carnosa (arilo rojo naranja) que envuelve la semilla se extrae un colorante apreciado industrialmente para dar color a productos alimenticios tales como el queso, la mantequilla y los aceites; Tambin las ceras, barnices, pinturas, cosmticos y fibras textiles de seda y algodn. El aceite extrado de las semillas es la principal fuente de los pigmentos Bixina y Norbixina u orellina, clasificados como carotenoides. La semilla del achiote contiene 40 a 45% de celulosa; 3.5 a 5.5% de sucrose; 0.3 a 0.9% de aceite esencial; 3% de aceite fijo; 4.5 a 5.5% de pigmentos, 13 a 16% de protenas, tan bien conocida como alfa y beta carotenoides y otros constituyentes. Extractos de alcohol etlico de el fruto seco y las hojas muestran que tiene una actividad in vitro contra Escherichia coli y Staphylococcus aureus; Un extracto en agua de la raz tiene actividad hipertensivo en ratas y una suave actividad relajante en cerdos de guinea y un extracto de cloroformo de semillas secas muestran que tiene actividad hipo glicmica en perros.

MARCO TEORICO. ASPECTOS GENERALES DEL ACHIOTE Nombre comn: Achiote Otros Nombres Comunes: Colombia y Per: Achote, achiote, onoto, bijo, bija, urucu., pumacoa. Ingles: Annato-tree. Alemn: Orleans Baum. Nombre cientfico comn: Bixa orellana Taxonoma Familia: Bixaceae. Gnero: Bixa. Especie: orellana Fruto: Es una cpsula dehiscente de forma hemisfrica, ovoide, elipsoidal o cnica carnosa, de 3 a 5 cm. de largo recubierto por espinas rgidas o flexibles de tamao variable que puede llegar a 6 mm, ocasionalmente ausentes; presenta 2 valvas recubiertas internamente por una membrana placentaria a la cual estn adheridas las semillas, aproximadamente 50 de color rojo vivo hasta amarillo dependiendo del cultivar.

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Semillas: Pueden ser de forma cnica o triangular, de 3 a 4 mm de base y 3 a 4 mm de altura, las cuales estn cubiertas por una membrana fina y blanquecina, debajo de esta se encuentra una capa roja y carnosa en donde se encuentran los pigmentos colorantes o tinte. Conforme madura el fruto aparecen en la superficie de las semillas en papilas rojas que llegan a cubrirlas por completo. El pigmento que se encuentra en las semillas constituye alrededor del 4-5% del peso total de las mismas.

ZONAS DE PRODUCCION: El Per ofrece condiciones ecolgicas ptimas para su cultivo en la costa, valles interandinos y en la selva. En la costa: en huertos familiares desde Tumbes hasta Moquegua. En la Ceja de Selva: Tingo Mara, Satipo, Apurimac, Cusco y Cajamarca, tambin en huertos pequeos incluso en Selva Baja. A nivel mundial se cultiva en Kenia, India, Ecuador, Brasil, Repblica Dominicana, Colombia, Bolivia, Blice, Costa de Marfil, Costa Rica, Guatemala, Guyana, Hait, Jamaica, Mxico, Sri Lanka, Surinam, Angola, Nigeria, Tanzania, Filipinas, Hawai

FUNDAMETO SOBRE LA EXTRACCION DEL COLORANTE Los colorantes son sustancias de color intenso que puede usarse para producir un alto grado de coloracin cuando se dispersan en otros materiales o se hacen reaccionar con los mismos mediante un proceso que, cuando menos temporalmente, destruye la estructura cristalina de la sustancia. Este ltimo punto es la caracterstica que distingue a los colorantes de los pigmentos, que casi siempre se aplican en forma de agregados a cristales insolubles. La mayora de los colorantes naturales son de origen vegetal; pueden ser compuestos puros o productos de extraccin. Estos ltimos son obtenidos de materia primas alimentarias y pueden ser asociadas en otras molculas. Entre los ms importantes encontramos a los carotenoides, que son un grupo de compuestos solubles en lpidos, ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Tienen dos funciones, principales en las plantas durante la fotosntesis y como materia colorante en flores y frutos, aparecen como flores amarillas, mientras que en los frutos son tambin de color rojo o naranja. La bixina es el principal pigmento de achiote, es un carotenoide natural soluble en aceite que se forma naturalmente en la superficie de la semilla de Bixa orellana L.
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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II Este pigmento natural se puede obtener mediante separacin por mtodos de cromatografa. Su punto de ebullicin es de 198 C. Es soluble en acetona, cloroformo y soluciones acuosas alcalinas, es soluble en agua, ligeramente soluble en alcohol etlico propilenglicol, etc. La bixina es muy estable entre 60-80 C e inestable por encima de 80 C el colorante crudo es de color rojo anaranjado y posee un color amargo. Existen preparaciones de Bixina, los extractos solubles en agua, la norbixina es muy soluble en agua, la elaboracin de soluciones (0.5 4% de norbixina) por hidrolisis alcalina es una prctica comercial usual y es frecuente mente llamado annato de simple poder. El mtodo de extraccin del pigmento denominado solucin de Hidrxido de Sodio, se realiza a travs de una reaccin qumica, donde un tomo de hidrogeno del grupo carboxilo del compuesto de bixina es remplazado por un tomo de sodio de Hidrxido de Sodio formndose una sal llamada bixinato de sodio, luego se acidifica la solucin de bixina de sodio con cido clorhdrico al 1.5N para poder lograr precipitar un colorante constituido por bixina. La norbixina es un pigmento carotenoide soluble en agua (Hidrosoluble) formado de Bixina mediante hidrolisis alcalina COLORANTES (Bixina y Norbixina). Hay dos productos principales de achiote, la Bixina y la Norbixina, el pigmento se encuentra en la superficie de la porcin carnosa (arilo Rojo- Naranja) que envuelve a la semilla de achiote. Son compuestos algo diferente qumicamente entre ellos, siendo la Bixina soluble en las grasa e insoluble en el agua, y Norbixina en la inversa, el aceite extrado de semilla es la principal fuente de los pigmentos Bixina y Norbixina, clasificados como carotenoides. Como el resto de los carotenoides, los extractos de achiote son susceptibles a la degradacin oxidativa. La prdida del color tambin ocurre por la exposicin prolongada a la luz, temperatura elevada y la presencia de dixido de sulfuro (Preston y Richard, 1980); desde que se conoce la Bixina en la naturaleza, su estereoqumica a sido objeto de investigacin. La Bixina es insoluble en agua ligeramente soluble en etanol y fcilmente soluble en ter y en los aceites. Su espectrometra mxima en Cloroformo es de 502 Nm, y de la Norbixina en solucin diluida de KOH es de 482 Nm (Norma oficial Mexicana NOM 119-ssa1 1994)

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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II Bixina

Formula qumica y estructura: cis- Bixina C24H30O4 Norbixina

Formula qumica y estructura: cis- Norbixina C24H28O4

MATERIALES Y METODOS. 50 g. de semilla de achiote Balanza analtica Estufa Centrifuga Cocina Olla NaOH al 1% (100mL) HCl 1.5 N (20mL) Agua destilada

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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA EXTRACCION DE LA BIXINA (Mtodo de solucin alcalina)
SEMILLAS DE ACHIOTE

SELECCION

NaOH 1% 20mL

EXTRACCION 1

EXTRACTO 1

NaOH 1% 20mL

EXTRACCION 2

EXTRACTO 2

NaOH 1% 20mL

EXTRACCION 3

EXTRACTO 3

HCl 1.5N 9mL

PRECIPITACION CIDA

SEPARACION

LAVADO

CENTRIFUGACION

SECADO Y MOLIENDA

NORBIXINA CURSO: TECNOLOGIA DE PROCESOS AGROINDUSTRIALES CICLO: IX SEMESTRE: 2012 II ALUMNO: RUIZ YOPLAC LORD KELVIN

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Descripcin de diagrama de flujo para la extraccin de la Bixina. Seleccin.- se eliminaron las semillas negras hmedas y fermentadas y con rasgos de enfermedad Extraccin 1: Se realiza la primera extraccin del pigmento utilizando 40mL y 1mL de NaOH al 1% para solubilizar fcilmente el principio colorante del achiote, agitar constantemente a temperatura ambiente durante 10 min. Hasta agotar la semilla. Extraccin 2: A los slidos insolubles (semillas desgastadas) se le realiza la segunda extraccin del pigmento utilizando 30mL de agua y 20mL de NaOH para solubilizar la otra parte de colorante del achiote. Agitando constantemente a temperatura ambiente durante 10min hasta agotar la semilla. Extraccin 3 A los slidos insolubles (semillas desgastadas) se le realiza la tercera extraccin del pigmento utilizando 30mL y 20mL de NaOH para ultima extracciones colorante, agitando constante mente a temperatura ambiente durante 15 min. Separacin: luego se procede a separar la solucin del extracto llamado solucin de Bixinato de Sodio de las semillas agotadas y se lav con 50mL de agua destilada (4 veces), con la finalidad de arrastrar los restos de colorante adheridos a la semilla. Filtrado: Se filtr al vaco, se lav con agua destilada y se clarifico para eliminar los restos de sales que contuvo la Bixina por el NaOH. Centrifugacin. Se procedi a centrifugar despus de haber agregado el HCl y reducido el PH hasta 2.9 la cual es su punto isoelctrico, con la finalidad de poder precipitar la Bixina durante la centrifugacin a 4000Rpm durante 15min. Secado: Se sec el slido precipitado a temperatura de 70C por 30 min. Molido: luego de todas estas operaciones se procede a moler la Bixina con la finalidad de obtener una granulometra ms fina y de fcil solubilizaran como colorante. RESULTADOS: PESO COLOR PH INICIAL PH FINAL GASTO RENDIMIENTO

Rojo - Anaranjado 8.7 2.9 9mL 4.4%

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Resultados de las muestras colocadas a la estufa a 70C x 30 min Placa Peso Placa + Muestra Peso Placa Peso Muestra Placa N1 Placa N 2 Placa N 3 Placa N 4 DISCUSIONES.

Rendimiento

Se pudo determinar que es un carotenoide acido, y que su punto isoelctrico es de 2.9 pH, que permite su extraccin (A cubero, 2002) el cual tambin puede ser afectado por los excesos de calor y luz. En el presente trabajo se realiz la extraccin del colorante de achiote (Bixina y Norbixina) mediante el mtodo de Solucin Alcalina, Sin embargo, los principales mercados de exportacin (Estados Unidos, Europa y Japn) desean que se eliminen los mtodos de extraccin que utilizan productos qumicos (Liceras, 1988). Se estn optando por el uso de enzimas (pectinasas, celulasas, hemicelulasas) que degradan la pared celular, facilitara la extraccin acuosa del colorante (Godfrey, 1983). Estas enzimas que actan sobre componentes insolubles tales como celulosa, hemicelulasas y pectina permitiran obtener un colorante (annato) de mayor pureza y calidad. Asimismo, permitira dejar de lado las sustancias qumicas utilizadas actualmente en los mtodos de extraccin industriales. Segn otras investigaciones lic. Olga Murillo. El procedimiento de extraccin normalmente utilizada por los productores rurales consta de las siguientes etapas: Extraccin: las semillas se cocinan en agua caliente por un periodo hasta de 24 horas Filtracin: los tejidos vegetales se separan de la solucin acuosa coloreada mediante filtracin mecnica. Los residuos se lavan con abundante agua, para separar la mayor cantidad posible de colorante de las semillas. Concentracin: se lleva a cabo con la finalidad de reducir el contenido de humedad y concentrar el del colorante. Considerando los procedimientos realizados en este trabajo, podemos apreciar, que nuestro procedimiento es ms complejo que el mtodo emprico encontrado, es por ello que la obtencin de Norbixina de manera emprica no es tan recomendable, porque los rendimientos de extraccin son bajos, ya que se utiliza el agua como disolvente en el cual la Norbixina es poco soluble, esta a su vez se degrada por efectos de las altas temperaturas aplicadas durante la extraccin, lo que no sucede con nuestro mtodo al mantener controlada la temperatura. La calidad del colorante se encuentra estandarizada.
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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II Observamos que luego de haberle secado tiene un alto poder colorante del mismo modo una buena estabilidad, propiedades de alta resonancia que se deben al grupo carbonilo y sus dobles enlaces conjugados (Guy Linden y Denis Lorient). Caractersticas fisicoqumicas de la semilla de achiote. La composicin tanto qumica como nutricional de la semilla de achiote es muy variada, como puede observarse en la siguiente tabla Tabla 1 Composicin qumica, nutricional de la semilla y del colorante de achiote Composicin qumica (%) Composicin (mg/100g) composicin 8.0 13.0 7 12.3 13.2 Humedad Calcio Protenas 13 -14.24 10 0.23 Protena Fosforo Pectina 13.8 1.4 Celulosa Hierro Carbohidratos 39.91 47.9 18.48 5.44 6.92 Fibra Cruda Vitamina A 45 mg Cenizas 11.45 0.33 0.91 Almidones Riboflavina 0.2 Taninos 12.5 11.35 14.97 Carbohidratos 39.91 cido Pentosanos totales Ascrbico 54 0.39 1.21 2.30 Energa (kcal) Tiamina Carotenoides 4.50 7.97 Niacina 1.46 Ceniza Beta-Caroteno 6.811.30 mg Fuente Jaramillo.M C. A. y Muoz. M. O. A. (1992) Medellin. Universidad. Facultad Nacional de Minas. Mediante este cuadro se puede ver todo el valor nutricional que pose esta semilla del cual no solo se puede extraer colorantes si no que tambin se puede aprovechar en la extraccin de otro de sus componentes, ejemplo en su concentracin de protenas, etc.

CONCLUSIONES. Se pudo lograr la extraccin del colorante de achiote denominada Bixina mediante el mtodo de solucin alcalina. De las semillas de achiote (Bixa Orellana) se obtuvo un compuesto qumico llamado Nor-Bixina la cual es materia prima de colorantes ampliamente utilizados en la industria alimenticia. Se pudo lograr extraer cantidades de 0.8g, 0.3g, 0.5g, y 0.6g de Bixina en cuatro muestras respectivamente obteniendo un rendimiento total de 4.4 respecto a la materia prima inicial de 50g. El color rojo del achiote o annatto se debe a varios compuestos carotenoides, principalmente apocrtenos, que se encuentran en la semilla. La Bixina es el ms cotizado e importante de stos. La Bixina es una sustancia cristalina de color rojo oscuro, soluble en alcohol, aceites y grasas
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UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRIGUEZ DE MENDOZA 2012-II e insoluble en agua. Tambin se encuentran pequeas cantidades de isobixina y norbixina; esta ltima, de color amarillo y soluble en agua e insoluble en grasas, tambin es un colorante con valor comercial. Es posible aumentar la pureza del annato obtenido por extraccin alcalina, realizando una hidrlisis previa del extracto.

BIBLIOGRAFIA Cubero, A; Monferrer, A y Villalta, J. 2002 aditivos alimentarios .Tecnologa de Alimentos. Espaa, Editorial Mundi Prensa. Madrid. Lic. Olga Marta Murillo G. Tecnologa de Alimentos Direccin de Mercadeo. Agroindustria rea de Desarrollo de Producto. Disponible en la web: http://www.mercanet.cnp.go.cr/Desarrollo_Agroid/documentospdf/Achiote_FTP.pdf Guy Linden y Denis Lorient, BIOQUIMICA AGROINDUSTRIAL, Acriba S:A ZARAGOZA Hernndez, G. Tirado, G. Juan, M. y otros (2002) Obtencin del colorante de la semilla de achiote (Bixa Orellana) utilizando microorganismos celulticos. Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro. Universidad Autnoma de Coahuila

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ANEXOS PROCEDIMIENTO
PESADO DE LA MATERIA PRIMA BATIDO CON AGUA CON NaOH X 10MIN

MEDIANTE EL BATIDO SE LOGR EL DESPRENDIMIENTO DEL COLORANTE (BIXINA)

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EQUIPO DE FILTRACION AL VACIO Y EXTRACTO OBTENIDO

GRANOS DE ACHIOTE DESPUES DE LAS 3 EXTRACCIONES CON NaOH GRANOS

SOLUCIONES DE BIXINATO DE SODIO DE LAS TRES EXTRACCIONES

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PREPARANDO LAS MUESTRAS PARA LA CENTRIFUGACION

MUESTRAS CENTRIFUGADAS A 4000 RPM X 15 MIN

MUESTRAS PUESTAS A SECAR EN LA ESTUFA

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