1.

INTRODUO

A rea sob um pico cromatogrfico, originado a partir da passagem de uma determinada substncia pelo detector, proporcional quantidade presente na amostra dessa mesma substncia. Logo, a determinao dessa rea servir para quantificar o constituinte da amostra. O clculo da rea pode ser feito por algumas tcnicas de integrao. Mas, para que esse valor de rea possa realmente expressar uma concentrao, so necessrias algumas condies: 1. A existncia de padres com pureza confivel que possam ser utilizados nos clculos. 2. Os compostos de interesse no podem sofrer decomposio trmica ou decomposio cataltica no sistema cromatogrfico e nem ficarem retidos permanentemente. 3. O pico de interesse deve corresponder somente a uma substncia, ou seja, no tenha ocorrido coeluio. 4. A quantidade de massa analisada esteja na faixa linear de resposta do detector, do amplificador e do sistema de integrao. 5. Dependendo do mtodo de clculo, o operador deve ter conhecimento da existncia ou no de substncias no detectveis e/ou no eludas. 6. Repetibilidade na operao do cromatgrafo, isto , as temperaturas e vazes utilizadas, etc, para que se possa reproduzir corretamente os dados de reteno e resoluo. 7. Amostragem correta do sistema a ser analisado. 8. Preciso e exatido altura das exigncias do mtodo analtico na determinao das reas dos picos. 9. Anlise das fontes de erro ao longo de todo processo para que o resultado final seja expressado com a preciso correta.

2. DETERMINAO DAS REAS DOS PICOS

A escolha do mtodo a ser utilizado na determinao das reas depender da preciso e exatido desejadas, do tempo e recursos humanos, tcnicos e financeiros disponveis. Como exemplo, a tabela 4 mostra os resultados da determinao das reas do cromatograma de uma mesma amostra feitos por diferentes tcnicas de integrao.

Tabela 1 - Comparao das tcnicas de integrao de reas planmetro triangulao HL (1/2 H) cortar e disco de digital pesar bola rea D.R. rea D.R. rea D.R. rea D.R. rea D.R. rea D.R. mdia mdia mdia mdia mdia mdi a Propano 0,04 20 0,05 14 0,04 12 0,01 14 0,04 18 0,03 10 Isobutano 4,8 1,7 4,8 8,7 4,5 3,8 5,0 2,0 4,6 0,4 4,6 0,9 n-Butano 14,0 5,6 13.7 4,5 13,6 1,6 15,0 2,8 14,1 1,0 14,1 0,4 1-Buteno 18,5 3,3 18,5 4,8 18,6 3,1 18,4 1,2 18,7 2,5 18,7 0,3 trans-2-Buteno 20,2 6,5 20,3 3,3 20,1 2,0 20,1 1,4 20,2 1,1 20,2 0,2 cis-2-Buteno 16,1 3,7 15,8 1,6 16,4 3,7 15,9 1,5 16,1 0,7 16,0 0,4 Butadieno 18,2 2,0 18,3 1,8 18,2 1,7 17,6 1,2 18,3 0,7 18,3 0,5 Isobuteno 8,1 5,7 8,6 3,7 8,6 2,2 8,0 2,1 8,1 2,6 8,2 0,5 Tempo de 45/60 45/60 50/60 100/120 15/30 5/10 clculo (min) D.R.R. 4,1 4,1 2,6 1,7 1,3 0,4 D.R.= desvio relativo D.R.R.= desvio relativo ao valor real A escolha do mtodo de anlise quantitativa depende da preciso desejada, do tempo necessrio, do custo e do equipamento disponvel no laboratrio para efetuar as medies e, tambm, do aspecto dos picos. A combinao de todos esses fatores que vai definir o mtodo a ser adotado.

3. CLCULOS QUANTITATIVOS

Quatro mtodos so geralmente utilizados na determinao quantitativa dos componentes da amostra3: normalizao interna, normalizao de reas, padronizao externa e padronizao interna. 3.1. NORMALIZAO INTERNA A rea de um sinal cromatogrfico dada pela equao a seguir e proporcional concentrao da substncia que passa pelo detector:

S=

k x C x Vinj At

Onde S a rea do pico, determinada no cromatograma, k a cte. de proporcionalidade que depende da interao da substncia com o sistema de deteco, C a concentrao da substncia eluda, Vinj o volume injetado e At a atenuao. Se o valor de k o mesmo para todos os componentes da amostra e se tambm todos eles estiverem devidamente registrados no cromatograma, pode-se considerar que o percentual de rea corresponde ao percentual de massa. Como exemplo, observe o cromatograma de uma amostra que contm somente as substncias A, B e C (figura 1).

A tcnica de adio-padro no ser discutida neste texto. 2

Fig. 1- Cromatograma das substncias A, B e C.

A determinao quantitativa da substncia "B" no cromatograma acima seria simplesmente a porcentagem de sua rea em relao rea total, isto :

% B =

SB (1 0 0 ) Si
Limitaes: essa tcnica no serve para amostras mais complexas. exige o registro de todos os componentes da amostra. no adequada para a anlise de traos. normalmente a exatido baixa.

Vantagens: simples e prtica, sendo ideal para anlises de rotina em que a exatido no um fator importante. independe do volume injetado. independe da estabilidade do aparelho. no necessria a utilizao de padres. EXERCCIOS

1)Uma amostra de trs substncias A, B e C foi analisada cromatograficamente e foram obtidos 3 picos distintos. O papel que registrou estes picos foi recortado no formato de cada um deles, de modo que cada pico foi pesado numa balana analtica e obteve-se 0,5710 g, 0,2230 g e 0,1240 g para A, B e C, respectivamente. Supondo que o papel tenha peso uniforme, calcule a % de B na amostra, levando em conta que o fator de resposta do detector igual para as trs substncias. 2)H possibilidade de se fazer uma anlise por cromatografia gasosa se a constante k for diferente para cada componente da amostra? Justifique, descrevendo o procedimento a ser efetuado.

3.2. NORMALIZAO DE REAS Na normalizao interna levou-se em considerao que a resposta do detector sempre a mesma para qualquer substncia, ou seja, k o mesmo para todos os componentes da amostra. Se isso fosse verdade, a substncia B teria a mesma rea das substncias A e C se essas trs substncias estivessem na mesma concentrao. Isso representaria que o detector teria a mesma sensibilidade para todos os componentes dessa amostra. O que normalmente acontece que o detector pode responder de maneira diferente para cada substncia e, para uma mesma quantidade em massa de substncias diferentes, fornecer, como resultado, reas completamente dspares. Quando isso ocorre, o que a maioria dos casos, a rea obtida precisa ser corrigida. Essa correo feita pela determinao do valor da constante de proporcionalidade k para cada um dos componentes da amostra, que conhecida como fator de correo ou fator de resposta (f), a partir do cromatograma obtido de padres das substncias que compem a amostra. O procedimento adotado para determinar os fatores de resposta :

Preparar uma soluo padro contendo todos os componentes da amostra, de preferncia, na mesma concentrao. Injetar essa soluo e determinar as reas dos picos. Considerar uma das substncias como referncia no cromatograma.

Determinar os demais fatores a partir da relao entre as reas da substncia desejada e da substncia escolhida como referncia no cromatograma do padro.

Por exemplo, para calcular os fatores de resposta das substncias A, B e C de uma amostra contendo somente essas trs substncias pode-se, a partir das reas dos picos no cromatograma da soluo padro, empregar as seguintes expresses: SA = kA x CA x Vinj /At SB = kB x CB x Vinj /At SC = kC x CC x Vinj /At

Onde segue-se a mesma notao do tem anterior. Nesse caso, se a substncia B for escolhida como referncia o seu fator ( fB = KB/KB) ser 1 j que:

S A k A C AVinj / At = SB k B C BVinj / At

S B k B C BVinj / At = S B k B C BVinj / At

S C k C CCVinj / At = S B k B C BVinj / At
fC = SC / SB

E tem-se, ento: fA = SA / SB ; admitindo que, no padro, CA = CB = CC.

fB = SB / SB = 1 ;

Depois de determinar os fatores de resposta das substncias a partir dos padres, deve-se corrigir cada rea no cromatograma da amostra, e o clculo da concentrao similar ao clculo percentual da normalizao interna, s que neste caso utiliza-se as reas corrigidas4. Assim, o clculo percentual de uma amostra contendo as substncias A, B e C fica:
SA fA
A

%A =

( f

SA

SB fB

SC fC

100

%B =

SB fB SA fA

SB fB

SC fC

100

%C =

SA fA

SC fC S + fB B

SC fC

100

As vantagens e limitaes da tcnica de normalizao de reas so, praticamente, as mesmas da normalizao interna exceto que o resultado obtido mais exato devido correo das reas (dependendo fundamentalmente da pureza dos padres). uma tcnica um pouco mais laboriosa e necessita da utilizao de vrios padres, por isso, normalmente s utilizada para amostras com poucos componentes.

EXERCCIOS 1)O cromatograma A corresponde a uma alquota de 1,5 L de uma amostra contendo somente as substncias A, B, C, D e E, e o cromatograma B a uma alquota de 1,0 L de uma mistura padro (em %p/p) de A (32%), B (38%) e C (30%). Considerando que B tem o mesmo fator de resposta que E e que C tem o mesmo que D, determine os valores de rea por triangulao e o teor de A na amostra. REAS

rea corrigida = rea calculada / fator de resposta relativo. 4

2)Uma amostra de 3 substncias A, B e C foi analisada cromatograficamente, obtendo-se trs picos distintos. Estes picos apresentaram reas iguais a 57,10 mm2, 22,30 mm2 e 12,40 mm2 respectivamente. Calcule a porcentagem de B na amostra, levando em conta que A, B e C tm fatores de resposta iguais a 1,0; 1,5 e 2,0 respectivamente. 3.3. PADRONIZAO EXTERNA5 Como foi visto anteriormente, ambas as tcnicas de normalizao no servem para amostras mais complexas. Observe a figura 2: Cromatograma 1 Cromatograma 2

tR (min)
Fig. 2 - Cromatograma 1 - injeo de amostra, Cromatograma 2 - injeo de padro

tR (min)

No cromatograma 1, relativo uma amostra complexa, so registrados doze sinais. O cromatograma 2 corresponde a uma soluo padro da substncia que gerou o pico no 11. Supondo que o problema em questo fosse quantificar nessa amostra, um determinado componente X que gerou o pico no 11, voc seria capaz de listar os motivos pelos quais no possvel lanar mo da tcnica de normalizao nesse caso? Uma soluo plausvel para casos como esse a tcnica da padronizao externa, onde preparada uma soluo padro contendo somente a(s) substncia(s) de interesse na amostra. A comparao com um padro externo possvel, baseando-se no pressuposto de que uma substncia X ter o mesmo fator de resposta quando presente na amostra ou em uma soluo padro. Pode-se considerar as relaes matemticas a seguir:

Sx = fxCx

V in j At

no cromatograma 1

' x

= fxC

' x

V i n' j At'

no cromatograma 2

Onde Sx e Sx so, respectivamente, as reas que a substncia X gerou nos cromatogramas da amostra e do padro; Cx e Cx se referem, respectivamente, s concentraes de X nas solues amostra e padro, f x o fator de resposta da substncia X frente ao detector utilizado, Vinj e V'inj os volumes injetados de amostra e de padro e At e At so as atenuaes de trabalho em cada cromatograma. fX e C'x so as incgnitas que podem ser determinadas pelas duas equaes.

Tambm conhecida como calibrao absoluta. Obviamente, alguns outros parmetros que podem alterar a rea ou a sensibilidade analtica como a temperatura do forno do detector, corrente de alimentao para o DCT, vazo do gs de arraste, etc. devero ser constantes. A atenuao de trabalho e o volume injetado fazem parte da constante no grfico.
5

Para melhorar a preciso do mtodo e tambm verificar a faixa de linearidade pode-se construir uma curva de calibrao (rea concentrao). Os volumes injetados e a atenuao a diferentes concentraes dos padres da substncia de interesse devero ser os mesmos6. O procedimento adotado para fazer a curva de calibrao simples: a) Prepara-se padres da substncia a ser analisada. b) Injeta-se os padres, um a um, e determina-se as reas pertinentes substncia de interesse. Observando-se o exemplo da figura 3 e considerando C1< C2< C3< C4< Cn , tem-se que:

Curva de calibrao - Padronizao Externa

rea

Concentrao

Fig. 3 - Curva de calibrao na padronizao externa.

Como outros mtodos analticos, a determinao da concentrao desconhecida na soluo injetada, a partir da curva de calibrao, feita por interpolao grfica da rea no cromatograma da amostra ou pela equao da reta determinada por regresso linear. Como sempre, h incerteza quanto ao volume injetado, principalmente, quando so utilizadas microsseringas7.

Vantagens : Limitaes : basta determinar a(s) rea(s) do(s) pico(s) depende do volume injetado. de interesse. depende da estabilidade do cromatgrafo e independe da deteco de todos os picos. do detector. serve para amostras mais complexas. possvel usar essa tcnica quantitativa na anlise de traos. pode-se trabalhar com curva de calibrao.

EXERCCIO 1)1,0 L de uma mistura de 0,537 g de n-butanol e 0,497 g de dioxano foi injetada em uma coluna carbowax em um cromatgrafo gs com atenuao na posio (50), obtendo-se reas de 104 mm2 para o n-butanol e 127 mm2 para o dioxano. 1,0 L de uma mistura desconhecida das mesmas substncias forneceu em atenuao (10) as reas de 400 mm2 e 228 mm2, respectivamente. Determine a concentrao % v/v de cada solvente na mistura desconhecida.
7

A utilizao de vlvulas de injeo com volumes fixos acarreta menor erro de injeo. 6

Dados de densidade (g/mL) : n-butanol= 0,810;

dioxano= 1,034.

3.4. PADRONIZAO INTERNA Como visto anteriormente, na tcnica de padronizao externa corre-se o risco de no se analisar a amostra exatamente nas mesmas condies dos padres. Isso pode acarretar erros nos clculos das concentraes, principalmente com os erros do volume injetado. Por outro lado, isso no problema na normalizao, j que os clculos (percentual em rea e fator de resposta relativo) so feitos a partir da relao entre as reas de dois picos num mesmo cromatograma. Assim, alteraes que ocorram na sensibilidade do detector e, principalmente, no volume injetado, afetaro os dois picos de modo igual, no interferindo dessa forma no clculo quantitativo final. A padronizao interna uma tcnica na qual um padro injetado concomitantemente amostra desconhecida, isto , ele dissolvido na prpria amostra e servir de base para os clculos quantitativos da substncia a ser analisada a partir de uma relao de reas. A tcnica similar padronizao externa, porm, como veremos adiante, o volume injetado agora um parmetro que pouco afeta a anlise. O grande problema escolher um padro interno8 adequado para a amostra a ser analisada pois este deve atender aos seguintes requisitos: No pode estar presente na amostra. Deve ter comportamento cromatogrfico similar ao da substncia a ser analisada. Estar numa concentrao conhecida. Ser estvel termicamente. No ficar adsorvido permanentemente na fase estacionria. Observando-se o exemplo a seguir:

Essa tcnica restrita a solues lquidas, dada a dificuldade em adicionar, com preciso, padres internos gasosos em amostras gasosas. 7

Fig. 4 - Cromatograma 1 - Amostra complexa contendo o componente de interesse X, com concentrao desconhecida.

- Cromatograma 2 - Soluo padro do componente X. - Cromatograma 3 - Soluo padro de uma substncia PI. - Cromatograma 4 - Amostra complexa + PI. - Cromatograma 5 - Soluo padro de X + PI. bvio, observando os cromatogramas da figura 4, que a substncia escolhida como padro um bom padro interno (PI) para essa amostra, pois no est presente originalmente no cromatograma 1 (no h nenhum pico proveniente da amostra com o mesmo tempo de reteno do PI), alm disso, o PI tem um comportamento cromatogrfico similar ao do componente X. Fazendo a relao da rea do componente X (SX) com a rea do padro interno (SPI), pode-se calcular a concentrao do componente X na amostra, utilizando a equao final do desenvolvimento a seguir:

Sx K C x VinjAt = x SPI K PI C PI VinjAt

Como:

Kx = fX/PI K PI

A equao fica:

C x VinjAt Sx = fX/PI C PI VinjAt SPI

Como o volume injetado e a atenuao so iguais para o X e para o PI para um mesmo cromatograma, tem-se a equao simplificada, que vlida tanto para o cromatograma dos padres de X mais PI quanto para o cromatograma da amostra mais o PI :

Sx = SPI

fX/PI

Cx C PI

No cromatograma do padro (cromatograma 5), pode-se determinar o fator de resposta relativo de X em funo de PI ( fX/PI ) j que ambos tm concentraes e reas conhecidas. Como o fator de resposta relativo ( fX/PI ) o mesmo para os cromatogramas da amostra (+ PI) e dos padres (X + PI), utiliza-se a mesma equao, relacionando as reas da amostra mais PI

(crom. 4) e, como se conhece a concentrao do padro, calcula-se a concentrao de X na amostra. Assim como na padronizao externa, essa anlise pode ser realizada mediante a construo de uma curva de calibrao. Essa curva de calibrao feita da seguinte forma: Preparam-se vrios padres com vrias concentraes conhecidas da substncia a ser analisada. Em cada um desses padres adicionada uma quantidade tal de padro interno, de modo que a rea de X no fique muito maior do que a rea do PI ou vice-versa9. Cada um desses padres injetado em condies semelhantes e so medidas as reas da substncia que se quer analisar e do padro interno. Constri-se um grfico em que a abcissa (x) a razo da concentrao (ou massa) da substncia em anlise pela concentrao (ou massa) do padro interno e a ordenada (y) a relao entre as reas da substncia X e do padro interno. Para a anlise da amostra desconhecida introduz-se, de preferncia, a mesma quantidade de padro interno utilizada no preparo dos padres. Injeta-se a mistura, calculam-se as reas da substncia X e do PI e as relaes entre elas e interpola-se no grfico obtido anteriormente, de modo a se obter a relao de concentrao. E, a partir do resultado obtido, calcula-se a concentrao de X na amostra desconhecida. Pode-se expressar o eixo X somente como Cx , se a concentrao do PI for mantida constante para todos os padres e amostra.
Curva de calibrao Padronizao Interna
Sx/Spi 40 30 20 10 0 0 0,1 0,2 0,3 Cx/Cpi 0,4

Vantagens : So as mesmas da padronizao externa, acrescentando-se o fato de que o volume injetado e a estabilidade do cromatgrafo deixam de ser um fator limitante. No so necessrios vrios padres, como acontece na normalizao de reas. Limitaes : Dificuldade na escolha de um padro interno que atenda a todos os requisitos necessrios.

Se possvel, interessante manter a concentrao do padro interno fixa enquanto a de X varia. 9

4. EXERCCIOS

1)Deseja-se quantificar, por CG, uma determinada amostra, para tanto pesou-se 4,28 g da amostra e diluiu-se com solvente adequado a 250,00 mL. Injetou-se 1,5 L e obteve-se reas de 23678 para A, 18245 para B e 3228 para C. Sabendo-se que os fatores de resposta, determinados a partir do cromatograma de uma soluo com pesos conhecidos de A, B e C, so fA=1,60; fB=1,00 e fC=1,23, responda os tens abaixo, considerando que a amostra contem somente A, B e C. a) O teor de A na amostra ____________%. b) A massa de B presente na amostra __________g. c) Em uma soluo padro com concentraes iguais de A, B e C, a rea maior dever ser a da substncia _________. 2)Para analisar uma mistura de benzeno e acetona, misturaram-se massas iguais de cada substncia e 1,50 L desse padro foram injetados num cromatgrafo a gs, obtendo-se dois picos distintos nas condies utilizadas. Em seguida foram injetados 3,00 L da amostra a ser analisada. As reas obtidas foram: amostra (cm2) benzeno 20,32 acetona 35,62 a) Qual a concentrao em % p/p de acetona na amostra? padro (cm2) 12,50 15,00

b) Refaa os clculos usando a padronizao externa, ou seja, considerando apenas os dados pertinentes acetona. c) Por que nesse caso, a tcnica de normalizao de reas melhor do que a padronizao externa ?

3)Um frasco de metanol foi contaminado com gua. A fim de utilizar esta mistura para fins analticos, um qumico decidiu analisar por cromatografia gasosa o teor de gua no MeOH. Para tanto, realizou 2 injees com o cromatgrafo nas mesmas condies. O cromatograma (A) foi a amostra e o cromatograma (B) foi uma mistura padro de 5,00 g de gua destilada com 5,00 g de metanol PA, contendo 1,50% de gua. Considerando a coluna polar, pede-se: a) A identificao dos picos da amostra. Justifique. b) Qual o teor de gua no metanol ?

Cromatograma A

Cromatograma B

10

4)Numa anlise cromatogrfica, foram obtidos os seguintes resultados em percentual em rea a partir do integrador eletrnico:
% em rea A B C Padro 1:1:1 em massa 32 40 28 Amostra 36 40 24 Sabendo-se que o volume injetado em ambos os casos foi de 1,0 L e a amostra composta

somente por A, B e C, a concentrao percentual corrigida de C na amostra _______________%. Se o volume injetado fosse 2,0 L para a amostra e 3,0 L para o padro, a concentrao percentual de A seria __________________ %. 5)Deseja-se determinar o teor de cnfora e de carvona, monoterpenos encontrados em leos essenciais. Para tal, 2,90 g do leo contendo cnfora e carvona foram dissolvidos e diludos em 100,00 mL de clorofrmio PA (sol. A). Uma alquota de 5,00 mL da sol. A foi transferida para um balo volumtrico de 100,00 mL e diluda com clorofrmio PA at o trao de aferio (sol. B). 2,00 L da sol. B foram injetados em um cromatgrafo com DIC e a rea obtida no integrador pertinente cnfora foi de 55420 e de 18020 relativa carvona. Uma soluo padro de cnfora e de carvona contendo 3,58 g e 4,05 g de cada substncia, foi preparada diluindo-as em b.v. de 100,00 mL em clorofrmio PA (sol. C). Em seguida, uma alquota de 10,00 mL da sol. C foi transferida para um b.v. de 100,00 mL e avolumada em clorofrmio PA (sol. D). Depois misturou-se 20,00 mL da sol. D e 50,00 mL de clorofrmio PA (sol. E). Injetou-se 1,00 L da soluo E e as reas de cnfora e de carvona foram 40877 e 43001. Determine o teor de cnfora e de carvona no leo essencial.

11

6)A fim de analisar o teor de acetaldedo em vinho, um analista fez 2 injees em um cromatgrafo a gs operando com DCT. A primeira era constituda de uma mistura de 16,00 g de vinho com 0,0200 g de propanol (substncia que o vinho no contm). A segunda injeo era constituda de uma soluo aquosa de n-propanol a 0,058% e acetaldedo a 0,062%. As condies foram: Picos: 1- ar Programa de temperatura : 2- gua 3- acetaldedo Coluna : Atenuao : Volume de amostra : Velocidade do papel : porapak Q x 50 1,0 L 0,25 pol./min 4- etanol 5- n-propanol 6- provavelmente, um lcool superior

Os cromatogramas obtidos foram:

Baseado nestes dados, calcule o teor de acetaldedo em vinho. Para melhorar esta anlise poderia mudar-se o tipo de detector utilizado. Explique. 7)Determinou-se o teor de benzeno em tolueno comercial (toluol) por cromatografia gasosa a partir do seguinte procedimento: 1. Injetou-se uma alquota de 2,00 L da amostra em um cromatgrafo com DIC e atenuao ( 30) e obteve-se o cromatograma abaixo, donde verificou-se que o sinal no 2 corresponde ao benzeno. 2. Preparou-se seis padres em bales volumtricos de 25,00 mL, a partir de uma soluo estoque de benzeno em tolueno a 0,100 g/L feita recentemente a partir dos solventes cromatograficamente puros, conforme a tabela abaixo. 3. Injetou-se, com auxlio de uma vlvula de injeo, 2,00 L de cada padro no mesmo cromatgrafo, com atenuao (50). 4. Calculou-se a rea correspondente ao benzeno em cada cromatograma por triangulao.

12

Os volumes de alquotas da soluo estoque usada para preparar os padres, medidos em bureta, e as reas encontradas para o benzeno encontram-se na tabela abaixo: rea (cm2) 0,51 0,41 0,32 0,21 0,13 0,055 Volume de alquota da soluo estoque (mL) 15,00 12,00 10,00 6,00 4,00 1,50

Curva de calibrao do benzeno

Padronizao externa
rea 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00 0 y = 8,4x + 0,0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 Conc. (g/L)

a) Faa uma tabela de valores para a curva de calibrao e determine a rea do benzeno na amostra por triangulao. b) Por interpolao grfica, determine a concentrao em ppm de benzeno no toluol. c) Por que, neste caso, a metodologia de normalizao de reas no adequada para determinar a concentrao de benzeno no toluol? Cite pelo menos trs motivos e justifique. 8)Um analista deseja determinar a concentrao de gua residual em THF (tetraidrofurano) comercial por cromatografia gasosa. O cromatograma A relativo amostra de THF comercial, onde est assinalado o pico correspondente gua. A fim de escolher um padro interno adequado, foram coinjetadas vrias substncias com a amostra e obtiveram-se os cromatogramas B (coinjeo de metanol), C (coinjeo de acetona), D (coinjeo de glicerol) e E (coinjeo de etanol). Aps optar pelo EtOH como padro interno, o analista preparou vrios padres contendo EtOH e H2O diludos em THF anidro e obteve os cromatogramas F, G, H , I e J. a) A partir dos dados contidos na tabela abaixo e da curva de calibrao, determine a concentrao de gua no THF comercial em ppm. b) Justifique a escolha do EtOH como padro interno.

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soluo analisada amostra padro 1 padro 2 padro 3 padro 4 padro 5

rea dos picos (mm2) EtOH H2O 22,9 23,2 23,0 23,0 22,5 22,7 23,4 3,0 8,2 20,3 28,7 41,5

C (ppm) EtOH 25 25 25 25 25 25

C (ppm) H2O ? 5,0 10 25 35 50

vol. inj. (L) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

cromatograma
E F G H I J

Curva de calibrao de gua em THF

Padronizao interna
2,00 S gua / S etanol 1,50 1,00 0,50 0,00 0 10 20 30 40 50 Conc. de gua (ppm)

9)Desejando determinar o teor de cido lurico (C12H24O2) em leo de milho, um analista optou pela tcnica de cromatografia gasosa. Procedeu ao tratamento da amostra, pesando 1,250 g do leo de milho e dissolvendo-o em CHCl3, completando o volume a 100,00 mL em balo volumtrico (sol. A). Em seguida, uma alquota de 2,00 mL foi tratada com excesso de diazometano9, misturada com 2,00 mL de uma soluo a 0,0500 g/L de amilato de metila (substncia que o leo de milho no contm) e diluda em balo volumtrico at 100,00 mL com CHCl3 (sol. B). Injetou-se 1,5 L da soluo B no cromatgrafo, obtendo um cromatograma complexo, onde a rea correspondente ao laurato de metila foi 15900 e ao amilato de metila foi 15850. Injetou-se, tambm, 1,0 L de uma soluo padro contendo 2,30 ppm de laurato de metila e 1,00 ppm de amilato de metila, obtendo-se reas de 10950 e 11720, respectivamente.
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Diazometano (CH2N2) um reagente que transforma, quantitativamente, cidos carboxlicos nos respectivos steres metlicos derivados. A reao : R-COOH + CH2 N2 RCOOCH3 + N2 14

Determine o teor de cido lurico no leo de milho.

10)Um alcolatra teve morte sbita provocada aps a injesto de whisky falsificado. O laudo mdico deu como causa da morte intoxicao por metanol. O qumico do laboratrio tinha, portanto, que dosar o metanol na bebida para servir de prova no processo de falsificao. Fez-se uma soluo contendo 50,0 mg/mL de MeOH em EtOH puro ( sol. A) e outra contendo 40,0 mg/mL de benzeno em EtOH puro (sol. B). A partir dessas solues foram preparados padres em balo volumtrico de 100,00 mL (ver os volumes de alquota correspondentes na tabela abaixo). Pesou, ento, 10,3520 g do whisky, adicionou 20,00 mL da soluo B e avolumou a 100,00 mL com etanol puro (sol. H). Injetou-se 1,0 L dos padres C, D, E , F e G e da soluo H, obtendo-se as seguintes reas pelo integrador eletrnico:
Soluo C D E F G H Soluo A (mL) 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 Soluo B (mL) 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 rea de MeOH 4050 6120 8200 10010 12120 7200 rea de benzeno 8114 8120 8105 8100 8090 8050

a)Determine graficamente o teor de metanol no whisky. b)Por que as reas pertinentes ao benzeno em todas as solues analisadas no so exatamente as mesmas, apesar das concentraes serem iguais ? Explique, tambm, porque isso no afeta o clculo quantitativo.

5. BIBLIOGRAFIA 1 - Carol, H. C., Braga, G. L.; Bonato, P. S.; Introduo a Mtodos Cromatogrficos, Ed. UNICAMP, Campinas, 4a Ed., 1990 2 - Ciola, R.; Introduo Cromatografia em Fase Gasosa, Ed. Edgard Blucher, So Paulo, 1973 3 - Kennedy, J. H.; Analytical Chemistry - Principles, Harcourt Brace Jovanovich, Flrida, 1984 4 - Willard, H.; Merritt, Jr. L.; Dean, J.; Anlise Instrumental, Fundao Calouste Gulbenkiam, Lisboa, 2a Edio, 1979 5 - Ohlweiler, O. A.; Fundamentos da Anlise Instrumental, L.T.C., Rio de Janeiro, 2a Edio, 1976 6 - Ewing, G. W.; Mtodos Instrumentais de Anlise Qumica, Vol. I e II, Ed. Edgard Blucher, So Paulo, 1972. 7 - Skoog, Douglas A., Principles of instrumental Analysis, 3a. ed., Philadelphia: Saunders College Publishing, 1985.

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