Protocolo Transfeccin DNA viral HBV 1.

El da previo a la transfeccin, sembrar 4,5x105 de clulas Huh7 en placas de 60 mm en un volumen final de medio de cultivo de 5 mL. 2. Da de la transfeccin (para una placa): a. En un tubo eppendorf, agregar 4 ug de DNA en 250 uL de medio Optimem y en otro tubo, agregar 10 uL de Lipofectamina 2000 (Invitrogen) en 250 uL de medio Optimem. Incubar durante 5 minutos. b. Mezclar el contenido de ambos tubos (DNA + Lipofectamina) e incubar durante 20 minutos. c. Durante los 20 minutos de incubacin DNA/Lipofectamina, retirar el medio de cultivo de la placa y lavar con PBS 1X. Luego, agregar 4,5 mL de medio Optimem. d. Pasados los 20 minutos de incubacin, agregar los 500 uL de la mezcla DNA/Lipofectamina a la placa. Mover la placa suavemente para homogenizar. e. Incubar a 37C y 5%CO2 durante 4-6 horas. f. Retirar medio Optimem, lavar clulas con PBS 1X y agregar 5 mL de medio de culitvo completo (DMEM suplementado con 10% FBS, 1% penicilina-estreptavidina, 1% glutamina 200 mM).

Nota: Realizar este protocolo para cada DNA viral (4.5 y RT). Para las placas control, slo agregar Lipofectamina 2000.