1.

La espectrofotometra se refiere a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. 2. Se conocen como mtodos espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como espectrofotometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja.

1. Desde 1852 la ley de Bourguer Lambert - Beer ha sido usada como la base cuantitativa de la espectroscopia de absorcin. 2. Bourguer en 1729 estableci empricamente una correlacin entre la longitud de la trayectoria de la luz y la absorcin de esta. 3. Esta correlacin fue formulada matemticamente por Lambert en 1760 y Beer descubri la dependencia de la absorcin de luz con la concentracin en 1852. 4. Actualmente esta ley es aplicable a la absorcin de luz en cualquier zona del espectro.

Permite conocer la concentracin de una muestra

A = .b.c
Donde : A = Absorbancia = Absortividad Molar

b= distancia en cm
c= Concentracin

La Transmitancia (T) es la relacin entre la intensidad de radiacin transmitida por una muestra (P) y la intensidad de radiacin que incide sobre la muestra (P0 ), medidos ambos en la misma posicin del espectro y con la misma rendija, T = P/PI0 Se supone que el haz es de radiacin paralela y que incide sobre las superficies planas y paralelas de la muestra, formando ngulos rectos.

La Absorbancia (A) es el logaritmo en base diez del recproco de la transmitancia (T), en el que el disolvente puro es el material de referencia; esto es, A = log10 1/T = - log10 T

La atenuacin de una radiacin es cuantitativamente proporcional a la concentracin de la especie absorbente La proporcionalidad directa entre absorbancia y concentracin cuando b es cte presenta desviaciones: A) Limitaciones reales de la ley B) Limitaciones Qumicas

C) Limitaciones Instrumentales

a) Concentracin: (generalmente>0.01M),

A la

concentraciones distancia media entre

altas las

molculas responsables de la absorcin disminuye hasta el punto en que cada molcula altera la distribucin de carga de las molculas vecinas.

b) Desviaciones qumicas: Cuando un analito se disocia, se

asocia o reacciona con un disolvente para dar lugar a un producto con un espectro de absorcin diferente al del

c) Desviaciones

Instrumentales

originadas

por la

luz

policromtica: Consideramos un haz formado slo por dos

longitudes de onda L' y L''. Asumiendo que la ley de Beer se

aplica estrictamente para cada una de estas longitudes de onda.

d) Desviaciones

originadas por radiacin parsita: La

radiacin que emerge del monocromador suele estar

contaminada

con

pequeas

cantidades

de

radiacin

dispersada o parsita, la cual alcanza la rendija de salida como resultado de dispersiones y reflexiones en varias superficies internas.

A) Limitaciones reales de la ley -Disoluciones de concentracin elevada (c > 0.01 M) dan malos resultados. -La absortividad a y la absortividad molar dependen del ndice de refraccin de la muestra. B) Limitaciones Qumicas

Se produce cuando el analito se disocia, asocia o reacciona con el disolvente para dar productos que presentan propiedades de absorcin diferentes de las del analito. HIn Color 1 H+ + InColor 2

Desviacin positiva a 430 y negativa a 570 nm.

C) Limitaciones Instrumentales El cumplimiento estricto de la Ley de Beer slo se observa para radiaciones monocromticas (radiacin formada por una sola longitud de onda) y stas en la prctica no se consiguen, ya que con los dispositivos disponibles (filtros, monocromadores) se obtienen una banda de longitudes de onda ms o menos simtrica entorno a la deseada.

Otra desviacin: Presencia de radiacin parsita o dispersa.

FOTMETROS * Instrumento sencillo utilizado para medir la absorbancia y que emplea filtros de absorcin o interferencia para seleccionar la longitud de onda. * Suelen usarse prcticamente en la regin del Visible.

* Ventajas: Son sencillos, bastante econmicos, robustos y facilidad en cuanto a mantenimiento. Pueden transportarse, lo que lo convierte en un aparato til para realizar anlisis espectroscpicos de campo.
* Inconvenientes: No puede utilizarse para obtener espectros de absorcin.

ESPECTROFOTMETROS * Instrumento empleado para medir la absorbancia que utiliza un selector monocromtico para seleccionar la longitud de onda. * Puede usarse en la regin UV, Vis e IR. * Pueden ser de un solo haz o de doble haz. Diseos instrumentales para fotmetros y espectrofotmetros

CARACTERSTICAS DE LOS MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS - Amplia aplicabilidad. - Elevada sensibilidad: los lmites deteccin 10-4 a 10-5 M.

- Selectividad de moderada a alta.

- Buena exactitud: errores de concentracin 1-5% o incluso menores. - Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotomtricas.

- Se prestan a una fcil automatizacin.

CAMPO DE APLICACIN - Especies absorbentes: compuestos orgnicos que contengan grupos cromforos y especies inorgnicas como son los metales de transicin. - Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo para producir un compuesto absorbente.

Anlisis cuantitativo: Por la ley de Lambert - Beer

podemos medir la concentracin de la sustancia que absorbe al medir la cantidad de radiacin absorbida, independiente de la radiacin incidente: A = Lb c = - log T = log(I0/I)

La ley de Lambert-Beer puede tambin aplicarse al anlisis cuantitativo de mezclas de dos o ms sustancias, siempre que sus respectivos espectros de absorcin sean lo suficientemente distintos. El procedimiento se basa en que la absorbancia es una propiedad aditiva, de tal forma que la absorbancia total de una mezcla es la suma de cada uno de los componentes. As, para una mezcla de dos componentes, 1 y 2, que absorben radiacin de una misma longitud de onda, se cumplir que:

1. Que el mtodo sea selectivo al analito que se desea analizar. 2. Que est libre de interferencias que afecten el resultado analtico que las interferencias se puedan controlar. 3. Que tenga alta precisin y exactitud. 4. Que tenga una alta sensibilidad y 5. Que el lmite de deteccin corresponda a una concentracin baja.

 Longitud de onda analtica:

 Intervalo ptimo de concentraciones : Se construye la curva de Ringbom, que consiste en construir una grfica de absorbancia (100- %T) vs lg Concentracin.

 Curva de Calibracin :

 Curva de Crawford: Con todos los datos obtenidos para la curva de Ringbom, se calcula el error analtico por unidad de error fotomtrico, y se construye la curva del error para el sistema de inters, previa determinacin experimental del error fotomtrico o instrumental. Si no se conoce D T, entonces solo se puede obtener (D C/C)/D T.

 Sensibilidad del mtodo analtico:

Se calcula la sensibilidad del mtodo de la pendiente de la curva de calibracin

Lmite de deteccin: Precisin del mtodo. Carta de dispersin: Exactitud del mtodo

 Lmites de deteccin y cuantificacin Determinan la capacidad de anlisis de un mtodo analtico en unas condiciones de mayor sensibilidad que permite el sistema informtico.

 El lmite de deteccin (LOD) es la mnima concentracin de analito en una muestra que se puede detectar en un proceso de anlisis con un nivel aceptable de confianza, pero no necesariamente cuantificada. Es la concentracin de analito que proporciona una seal en el instrumento (YLOD) significativamente diferente de la seal del blanco o rudo de fondo. Se puede definir como la concentracin de analito que proporciona una seal igual a la seal del blanco, YB, ms tres veces la desviacin estndar del blanco, SB.

 El lmite de cuantificacin es la concentracin mnima de analito que puede determinarse con un nivel aceptable de exactitud y precisin. Es el lmite inferior para medidas cuantitativas precisas, como opuesto a la deteccin cualitativa. Se puede definir como la concentracin de analito que proporcion una seal (YLOQ) igual a la seal del blanco, YB, ms diez veces la desviacin estndar del blanco, SB.

 La exactitud de un mtodo analtico: Indica que tan alejado se encuentra el valor medido del valor verdadero o valor real, se mide mediante: El error absoluto: (Valor medido - Valor esperado) x 100, en valor absoluto; o El error relativo: [(Valor medido - Valor esperado) / Valor esperado] x 100, en valor absoluto.

Una alcuota de 2,50 mL de una disolucin que contiene 3,8 ppm de Fe(III) se trata con exceso de KSCN y se diluye hasta 50 mL. Cul es la absorbancia de la disolucin resultante a 580 nm si se mide en una cubeta de 2,5 cm? (Absortividad molar de 7,00 x 103 L cm-1 mol 1)

Se determinaron las absortividades molares a 430 y 570 nm del cido dbil HIn (Ka=1,42x10-5) y de su base conjugada In- mediante medidas de disoluciones del indicador en medios fuertemente cidos y fuertemente bsicos. Bajo estas condiciones, prcticamente todo el indicador se encontrar como HIn e In- respectivamente. Los resultados fueron:
430 HIn In6,30 x 102 2,06 x 104 570 7,12 x 103 9,61 x 102

Calcular los datos de absorbancia para una disolucin no tamponada cuya concentracin total es 2,00 x 10-5 M

El complejo FeSCN+2 cuya longitud de onda de mxima absorcin es 580 nm, tiene una absortividad molar de 7,00 x 103 L cm-1 mol -1 . Calcular: a) La absorbancia a 580 nm de una disolucin del complejo 2,50 x 10-5 M, si se mide en una cubeta de 1 cm. b) La absorbancia de una disolucin del complejo cuya concentracin es el doble de la del apartado a) c) La transmitancia de las disoluciones anteriores.

VALORACIONES FOTOMTRICAS Y ESPECTROFOTOMTRICAS

Las medidas espectrofotomtricas son tiles para localizar puntos de equivalencia en valoraciones siempre que uno o ms de los reactivos o productos absorban la radiacin. Curva fotomtrica: representacin de la absorbancia (corregida por la variacin de volumen) en funcin del volumen de valorante.

Determinacin de la constante de equilibrio de un complejo por el mtodo de las variaciones continuas. Se mide la concentracin de las especies implicadas en el equilibrio. El mtodo de las variaciones continuas, nos permite determinar la frmula del complejo formado y su constante de estabilidad, midiendo la absorbancia del complejo formado para diferentes valores relativos de concentracin de ligando a metal. Las medidas deben llevarse a cabo a una longitud de onda donde el complejo sea la nica especie responsable de la absorcin. Tanto en este mtodo como el de la razn molar (la concentracin de metal se mantiene constante) son aplicables

 La formacin del complejo puede escribirse:

M + n
M es un in metlico y X es el ligando. El mtodo permite determinar la frmula del complejo (el valor de n) y su constante de estabilidad. El procedimiento general comprende la preparacin de una serie de soluciones en las que la concentracin total del ligando ms el metal se mantiene constante (CT = CX + CM = constante), pero se vara la relacin de uno respecto del otro. Seguidamente, se procede a la medida de la absorbancia de cada una de estas soluciones y se grafica dicho valor en funcin de la fraccin molar del metal .

Absorbancia en funcin de la fraccin molar del metal. La forma de la curva obtenida es caracterstica de los complejos de estequiometria 1:1. La representacin indicada por la lnea continua corresponde al comportamiento que se obtendra en ausencia de disociacin.