MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA

Jos Ramn Verde Calvo

Elisa Vega vila

Javier Isidoro Lpez Cruz

Mara Elena Estrada Ziga

Frida Malpica Snchez Felipe Martnez Orta Clara Pelayo Zaldvar Mara del Carmen Prez Cesar Patricia Ruiz Snchez Gloria Maribel Trejo Aguilar

PREFACIO En el ao 2002 se actualizaron los contenidos temticos de las asignaturas que componen las licenciaturas de Ingeniera de los Alimentos e Ingeniera Bioqumica Industrial. Para llevar a cabo esta actualizacin se crearon academias de profesores al interior del Departamento de Biotecnologa y de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud, entre ellas la Academia de Qumica Analtica. Posteriormente, se inici la revisin de los planes de estudio de ambas licenciaturas y su adecuacin a un nuevo modelo educativo, con base en esta nueva concepcin y teniendo como marco de referencia las Polticas Operativas de Docencia de la Unidad Iztapalapa, se plantearon nuevos planes de estudio y elaboraron las cartas descriptivas de los cursos que los componen. Como resultado de este proceso, las asignaturas de Qumica Analtica I y Qumica Analtica II, que se imparten en los trimestres V y VII-VIII, quedaron fusionadas en una sola denominada Qumica Analtica, la cual se ubic en el trimestre II de los nuevos programas de licenciatura. Asimismo, se propuso como materia optativa Qumica Analtica Avanzada para ser cursada en uno de los trimestres VII al XI y que cubre en su totalidad procedimientos analticos instrumentales. El presente manual contiene las prcticas de laboratorio que acompaan al nuevo programa de Qumica Analtica y que fueron elaboradas por los profesores de la Academia de Qumica Analtica. Considerando la normatividad existente en cuanto al uso de los servicios e instalaciones de los laboratorios de docencia de nuestra unidad, el manual se inicia con un captulo que contiene las medidas de seguridad que se deben conocer y adoptar en los laboratorios de docencia, as como informacin relativa a grados o calidades de reactivos qumicos, el sistema internacional de unidades, las cifras significativas y los conceptos de exactitud y precisin. Las diez prcticas que integran el manual incluyen la preparacin de disoluciones y formas de expresar su concentracin, gravimetra, valoracin de disoluciones y uso de patrones primarios, disoluciones amortiguadoras, titulaciones cido base y por xido-reduccin, cromatografa en columna, capa fina y papel, y espectrofotometra en la regin del visible. Asimismo, el manual contiene algunos apndices con informacin relativa al uso apropiado de varios instrumentos y materiales de laboratorio, y guas para la operacin de algunos equipos. Considerando que el manual va dirigido a estudiantes de las licenciaturas de Ingeniera de los

Alimentos e Ingeniera Bioqumica industrial, cuando fue posible, se incorporaron como materiales de anlisis tanto alimentos como formulaciones farmacuticas. No se incluyeron prcticas de cromatografa de gases (CG) ni de cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) en este curso bsico, debido a que son temas que se cubren ampliamente en forma terica y prctica en el curso de Qumica Analtica Avanzada, en su lugar se elaboraron dos videos que ya se encuentran a disposicin de los estudiantes en la pgina de la Academia de Qumica Analtica (http:/docencia.izt.uam.mx). Cabe mencionar que este manual no sustituye a las publicaciones La Teora y la Prctica en el Laboratorio de Qumica General para Ciencias Biolgicas y de la Salud, La T eora y la Prctica en el Laboratorio de Qumica Analtica I y al Manual de Prcticas de Qumica Analtica II, que se encuentran en lnea a travs del Sistema Multimedia de Apoyo a la Docencia de nuestra unidad (http://www.uamenlinea.uam.mx) y que han sido y continuarn siendo materiales didcticos tiles para la enseanza de la qumica analtica. Finalmente, una breve mencin a la pgina de la Academia de Qumica Analtica. Esta pgina se elabor con el propsito de poner a la disposicin de los estudiantes materiales e informacin que faciliten y complementen su aprendizaje, y para establecer una comunicacin continua entre ellos y los profesores que impartimos estas asignaturas. Les invitamos cordialmente a que visiten esta pgina y a que den sus opiniones del material aqu presentado. Asimismo, todas las observaciones y comentarios acerca del contenido del presente manual son bienvenidos.

Los Autores

CONTENIDO

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA

LO QUE DEBES SABER ANTES DE INICIAR EL TRABAJO EN EL LABORATORIO. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN LABORATORIOS DE DOCENCIA PRCTICA 1. PREPARACIN DE DISOLUCIONES PRCTICA 2. DETERMINACIN GRAVIMTRICA DE CALCIO COMO OXALATO DE CALCIO MONOHIDRATADO PRCTICA 3. VALORACIN DE DISOLUCIONES CIDO BASE PRCTICA 4. DISOLUCIONES AMORTIGUADORAS PRCTICA 5. APLICACIONES DE LAS TITULACIONES DE NEUTRALIZACIN CIDO - BASE PRCTICA 6. DETERMINACIN DE HIERRO (II) EN VITAMINAS COMERCIALES POR XIDO-REDUCCIN PRCTICA 7. CROMATOGRAFA EN COLUMNA PRCTICA 8. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA PRCTICA 9. CROMATOGRAFA EN PAPEL. SEPARACIN DE MEZCLAS DE INDICADORES DE pH PRCTICA 10. CUANTIFICACIN DE HIERRO POR ESPECTROFOTOMETRA EN EL VISIBLE APNDICE 1. USO ADECUADO DE INSTRUMENTOS Y MATERIALES DE LABORATORIO APNDICE 2. INSTRUCCIONES DE OPERACIN DEL POTENCIMETRO CONDUCTRONIC pH 120

APNDICE 3. INSTRUCCIONES DE OPERACIN DEL ESPECTROFOTMETRO BIOMATE TM 3 THERMO SPECTRONIC

LO QUE DEBES SABER ANTES DE INICIAR EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN LABORATORIOS DE DOCENCIA

El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar, los accidentes pueden originarse por negligencia en la prevencin, descuidos, bromas o por circunstancias fuera de control. Para garantizar seguridad en el laboratorio se debern tener siempre presentes los posibles peligros asociados al trabajo con reactivos qumicos y conocer las medidas de seguridad que se aplican a estos lugares de trabajo. El objetivo del presente captulo es dar a conocer al alumno las medidas de seguridad existentes en un laboratorio qumico para que las aplique en su lugar de trabajo. Asimismo, se le proporciona informacin acerca de grados o calidades de reactivos qumicos, el sistema internacional de unidades, el redondeo de las cifras, las cifras significativas y los conceptos de precisin y exactitud.

Qu es la Seguridad?

Es un conjunto de medidas tcnicas, educacionales, mdicas y psicolgicas empleadas para prevenir accidentes, tendientes a eliminar las condiciones inseguras del ambiente y a instruir o convencer a las personas acerca de la necesidad de implementar prcticas preventivas.

El alumno estar obligado a utilizar el llamado Equipo de Proteccin Personal (EPP) y seguir al pie de la letra las indicaciones dadas por el profesor acerca de cmo preparar reactivos y como llevar a cabo la prctica. El EPP se refiere a los objetos diseados para proteger a los alumnos y al profesor durante su estancia en el laboratorio, stos son de uso personal y podrn variar segn lo requiera la prctica a realizar.

Descripcin y Uso del EPP

Los accesorios de uso comn en los laboratorios de qumica son bata, lentes de seguridad, guantes de diferentes materiales, mascarilla y zapatos apropiados. Las caractersticas de estos accesorios personales de seguridad se indican a continuacin.

Bata. Debe ser de algodn, de manga larga, 1 2 tallas ms grande de la talla habitual que usa el alumno y debe contar con todos los botones para mantenerla cerrada (Fig. 1).

Figura No. 1. La bata de laboratorio es obligatoria.

Lentes de seguridad. Tambin llamados gafas, goggles, o anteojos panormicos, deben proteger toda la superficie frontal y lateral de los ojos y ser de un material transparente que permita una completa visibilidad (Fig. 2).

Figura No. 2. Lentes de seguridad para el manejo de sustancias corrosivas como los cidos fuertes.

Mascarilla. Protege las vas respiratorias de polvos y/o vapores txicos o corrosivos. Las hay con diferentes filtros, para polvos finos, vapores orgnicos y cidos (Fig. 3).

Figura No. 3. Mascarilla protectora contra polvos y/o vapores txicos o corrosivos.

Guantes. Los hay de diferentes materiales, de ltex o neopreno para el trabajo habitual de laboratorio, de asbesto para sujetar objetos calientes y de neopreno para manejo de cidos (Fig. 4).

Para objetos calientes

Para manejo de cidos

Figura No. 4. Diferentes tipos de guantes para uso en el laboratorio.

Zapato. Se recomienda usar zapato cerrado, de suela antiderrapante. La zapatilla de tacn alto, las sandalias y en general los zapatos abiertos no se consideran adecuados para trabajo de laboratorio.

Otras recomendaciones. Traer el cabello recogido, evitar el uso de anillos, pulseras y gorras, y en el caso de las mujeres, las uas largas no son apropiadas para el trabajo de laboratorio y no se recomienda el uso de medias.

Normas de Laboratorio de Laboratorio Las buenas prcticas son un conjunto de reglas, recomendaciones y prohibiciones relacionadas con el manejo de materiales de laboratorio y sustancias qumicas. Su aplicacin requiere de conocimiento, sentido comn y apoyo en el ambiente de trabajo. Se les puede dividir en normas generales y particulares de trabajo.

Normas generales de trabajo El uso del EPP es obligatorio.

Nunca trabaje solo, procure realizar su actividad cuando al menos otra persona est trabajando en el laboratorio.

Queda estrictamente prohibido comer, beber, almacenar alimentos, correr, fumar, maquillarse o manipular lentes de contacto en el laboratorio, an cuando no se estn realizando prcticas. Mantenga su rea de trabajo limpia y ordenada. No deben colocarse libros, abrigos y mochilas sobre las mesas de trabajo. Se deber verificar que la mesa est limpia al comenzar y al terminar el trabajo realizado. Los alumnos y docentes deben estar familiarizados con los elementos de seguridad disponibles, salidas de emergencia, extintores, regaderas y ubicacin de botiquines. Toda herida o quemadura, an los pequeos cortes, que se produzcan durante una prctica deben ser informados obligatoriamente al docente y debern ser tratadas inmediatamente. En el caso de salpicaduras de cidos sobre la piel lavar inmediatamente con agua abundante, teniendo en cuenta que en el caso de cidos concentrados la reaccin con el agua puede producir calor. Es conveniente retirar la ropa de la zona afectada para evitar que el corrosivo quede atrapado entre sta y la piel.

Normas Particulares de Trabajo Las balanzas deben dejarse en ceros y perfectamente limpias despus de su uso. Cerca de las balanzas slo debern estar los estudiantes que en ese momento se encuentren pesando (uno por balanza). Queda estrictamente prohibido pipetear con la boca cualquier lquido, para ello use propipetas. Las pipetas con reactivo residual, se debern colocar con la punta hacia abajo sobre la tarja de cada mesa de trabajo y los alumnos no debern trasladarlas de un lado a otro para evitar riesgos de salpicaduras a sus compaeros. Siempre que trabaje con algn reactivo txico o corrosivo (como los cidos fuertes), deber realizar la operacin en la campana de extraccin, con la luz y el extractor encendidos, y el vidrio protector abajo dejando un espacio para poder manipular el reactivo. Siempre que diluya un cido fuerte con agua deber hacerlo de la siguiente manera. Coloque en el matraz volumtrico o recipiente de vidrio donde va a llevar a cabo la dilucin, la mitad del volumen total de agua indicado en la preparacin del reactivo, aada el cido manteniendo el recipiente receptor en un cierto ngulo que asegure que la boca del recipiente seale hacia el lado contrario de su cara o la de su compaero. Nunca aada agua al cido! Se deber etiquetar todo el material de vidrio con el nombre del reactivo, la concentracin a la que est preparado, fecha y nombre o nmero de equipo. Los frascos de los reactivos deben cerrarse inmediatamente despus de su uso, durante su utilizacin los tapones o las tapas deben colocarse siempre boca arriba sobre la mesa. No deben manipularse jams productos o disolventes inflamables en las proximidades de un mechero encendido o de la flama de un encendedor. Al agitar moderadamente un tubo de ensayo golpee con la punta del dedo la base del tubo. Cuando requiera una agitacin vigorosa por inversin del recipiente, tpelo con un tapn de rosca o con parafilm, nunca lo haga con la mano. Si algn reactivo se derrama, debe limpiarse inmediatamente dejando el lugar perfectamente ordenado. Las salpicaduras de sustancias bsicas deben neutralizarse con un cido dbil (por ejemplo con cido ctrico) y las de sustancias cidas con una base dbil (por ejemplo con bicarbonato sdico). No deben verterse residuos slidos en los fregaderos, para ello deben emplearse los recipientes para residuos que se encuentran en el laboratorio.

No calentar nunca enrgicamente una disolucin. La ebullicin debe ser siempre suave, si hay necesidad utilice perlas de vidrio para conseguir una ebullicin homognea y suave. El mechero debe cerrarse una vez utilizado, tanto de la llave del propio mechero como de la toma del gas de la mesa. Las disoluciones y recipientes calientes deben manipularse con cuidado. Para la introduccin y extraccin de recipientes de muflas, hornos y estufas deben utilizarse pinzas largas (como las que se usan para el manejo de crisoles en las muflas) y/o guantes para manejo de objetos calientes. No se deben oler directamente los vapores de sustancias voltiles, cuando se requiera dirija los vapores con las manos hacia la nariz para percibirlos. Nunca regrese reactivos (slidos o lquidos) al recipiente original, a menos que est seguro de su buen manejo y de que no estn contaminados.

GRADOS O CALIDADES DE REACTIVOS QUMICOS EN EL LABORATORIO

De acuerdo a su uso, pureza y residuos los reactivos se clasifican en varios grados.

Grado tcnico o comercial Su calidad no est garantizada y por ello no se utilizan para anlisis qumico, pueden usarse en experimentos cualitativos donde no se requiere cuantificar ni obtener resultados exactos.

Grado USP (United States Pharmacopeia) Cumplen con las especificaciones que exigen las norma de Estados Unidos en cuanto a contenidos mximos de contaminantes dainos a la salud. Pueden contener contaminantes no peligrosos, pero que interfieren en determinados procesos analticos por lo que su uso no es aconsejable para estos propsitos.

Grado reactivo Estas sustancias cumplen las especificaciones del Comit de Reactivos Qumicos de la Sociedad Qumica Americana (Reagent Chemical Committee of the American Chemical Society) y son los indicados para el trabajo analtico. Se identifican por las siglas en ingls ACS que aparecen en la etiqueta, la cual adems declara el porcentaje mximo de impurezas permitido por dicha entidad internacional, as como el porcentaje de las impurezas que contiene.

Grado estndar primario Son de alta pureza, se emplean como patrones primarios en la preparacin de soluciones estndares.

SIMBOLOGA PARA DENOTAR LOS RIESGOS DE LOS REACTIVOS QUMICOS

Existen diversos sistemas convencionales para dar a conocer mediante smbolos los riesgos de las sustancias qumicas, los ms usuales son:

Nmeros de riesgo de la Organizacin de Naciones Unidas (ONU)

Diamante de la National Fire Protection Association (NFPA).

Sistema del Departamento de Transporte de los Estados Unidos (DOT).

Cdigos de riesgo de empresas fabricantes de reactivos qumicos, como Merck y Baker.

De los sistemas anteriores el ms comn es el de NFPA cuyo smbolo es un rombo (Fig. 5) que representa visualmente la informacin sobre tres categoras de riesgo: salud, inflamabilidad y reactividad; identificadas y clasificadas en una escala del 0 al 4, dependiendo del grado de peligro que presenten. Adicionalmente, seala riesgos especficos como poder oxidante, corrosividad, si se trata de un compuesto radiactivo, su reactividad con el agua y si tiene carcter cido, bsico o neutro.

Nivel de riesgo
4 Mortal 3 Muy peligroso 2 Peligroso 1 Poco peligroso 0 Sin riesgo Inflamabilidad

Inflamabilidad
4 Debajo de 25C 3 Debajo de 37C

Inflamabilidad

2 Debajo de 93C 1 Sobre 93C

Salud

Reactividad0 No se inflama

Riesgo especifico

Figura 5. Smbolo en forma de rombo o diamante de la National Fire Protection Association (NFPA).

En cuanto a los smbolos de riesgo empleados por las empresas fabricantes de reactivos qumicos, algunos se encuentran ejemplificados en la Fig. 6. Finalmente, la Fig. 7 presenta algunos smbolos de riesgo empleados en laboratorios e industrias.

Figura 6. Algunos smbolos de riesgo empleados por las compaas fabricantes de reactivos qumicos.

Figura 7. Otros smbolos de riesgo empleados en laboratorios, plantas piloto e industrias.

CODIGO DE COLORES PARA TUBERIAS DE SERVICIOS DE LABORATORIOS

Tuberas de Agua Gas Aire Electricidad

color azul Amarillo verde rojo

Salud SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES Y FORMAS DE EXPRESAR CANTIDADES

Existe un Sistema Internacional de Unidades (SI) el cual rige como se deben expresar las unidades en el campo cientfico, es un sistema decimal en el que las magnitudes difieren de la cantidad fundamental en potencias de diez mediante el uso de prefijos, como mltiplos o como submltiplos, de la unidad bsica. Por ejemplo, el prefijo kilo significa mil veces (103) la unidad bsica y se simboliza por k.

Abreviaturas Ms Usuales en Qumica l mg ml litro miligramo mililitro por ciento de alcohol en volumen a 20C

% Alc. Vol. C

grados Celsius

K F N kg g g l m/v M m

grados Kelvin grado Fahrenheit normalidad kilogramo gramo microgramos microlitro masa sobre volumen molaridad molalidad

Qu son las Cifras Significativas? Los dgitos que no cambian al sumar y restarle la incertidumbre a la medida, contados de izquierda a derecha. El nmero de cifras significativas se obtiene contando los dgitos de los que estamos seguros porque no cambian con la incertidumbre. Para conocer este nmero necesitamos identificar en qu posicin decimal se ubica la incertidumbre y cmo afecta a los dgitos correspondientes de la medicin. En el ejemplo del Cuadro 1, la incertidumbre se localiza en la segunda posicin despus del punto y por lo tanto, el nmero de cifras significativas es 3. Cuadro 1. Ejemplo para ilustrar como obtener el nmero de cifras significativas.

Datos Obtenidos al Aplicar un Mtodo Experimental de Medicin Valor central 23.863 m Valor mximo 23.885 m Valor mnimo 23.841 m Cifras significativas 3

Redondeo de las Cifras Significativas

Un aspecto importante al reportar el resultado de operaciones matemticas con nmeros obtenidos de mediciones es el redondeo de cifras, el cual debe hacerse para expresar dicho resultado correctamente. Para ello deben tenerse en cuenta las siguientes normas:

Si la cifra siguiente a la que se ha de redondear es menor de 5, la cifra por redondear se deja como tal. Por ejemplo, al redondear a 3 cifras el nmero 0.438497, ste queda como 0.438. Si la cifra siguiente a la que se ha de redondear es mayor de 5, la cifra por redondear se aumenta en una unidad. As, el nmero 0.346013 redondeado a dos cifras significativas queda como 0.35. Si la cifra siguiente a la que se ha de redondear es exactamente 5, la cifra por redondear se aumenta en una unidad si es impar, o se deja como tal si es par. Por ejemplo, al redondear a 4 cifras significativas el nmero 7.01350 el resultado es 7.014, y al redondear a 2 cifras significativas el nmero 3.4500, el resultado es 3.4.

Asimismo, el nmero de cifras decimales en el resultado de operaciones de adicin o sustraccin est determinado por el sumando con el menor nmero de decimales. Por ejemplo, el resultado de la operacin:

0.43 g + 132.1 g 18.46 g + 0.0021 g 35.49 g = 78.5821 g

debe redondearse a 78.6 g ya que el sumando 132.1 g es el que posee el menor nmero de decimales (un solo decimal) y el resultado debe tener, por tanto, un solo decimal.

Conceptos de Precisin y Exactitud En ingeniera, ciencia, industria y estadstica los trminos exactitud y precisin no son sinnimos y por lo tanto, no son equivalentes. A continuacin se definen ambos trminos.
Precisin Se refiere a la dispersin del conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud. Cuanto menor es la dispersin mayor la precisin. Una medida comn de la dispersin o variabilidad de los datos es la desviacin estndar, la cual se utiliza para describir la reproducibilidad de los resultados

experimentales. Se puede definir como el nivel de similitud entre los valores numricos de varias medidas de la misma propiedad, realizadas bajo las mismas condiciones experimentales.

Exactitud Se refiere a que tan cerca del valor real se encuentra el valor medido. En trminos estadsticos, la exactitud est relacionada con el sesgo de una estimacin. Cuanto menor es el sesgo ms exacta es una estimacin. La Fig. 8 ilustra ambos conceptos.

Alta exactitud, pero baja precisin.

Alta precisin pero baja exactitud

Figura 8. Tiro al blanco para ilustrar la diferencia entre exactitud y precisin.

En la Fig. 8 aparece el resultado de varios tiros con arco hacia un objetivo. La exactitud describe la proximidad de las flechas al centro del objetivo, las flechas que llegaron ms cerca del centro se consideran ms exactas. Cuanto ms cerca estn las medidas a un valor real o aceptado, ms exacto es el sistema de medicin. La precisin, en este ejemplo, es la distancia entre los impactos de las flechas, es decir, que tan distantes quedaron unos de otros; cuanto ms cercanos entre s hayan quedado estos impactos, ms precisos fueron los lanzamientos. Similarmente, entre ms cercanos estn los resultados de varias mediciones efectuada, ms preciso ser el sistema de medicin. En s, se puede decir que la precisin es el grado de repetitividad del resultado. Hay que notar que el hecho de que las flechas estn muy cercanas entre s es independiente al hecho que estn cerca del centro del objetivo. Resumiendo, se puede decir que exactitud es el grado de veracidad, mientras que precisin es el grado de reproducibilidad.

Ejemplo. Un reloj analgico, de manecillas, desplaza su minutero "slo de minuto en minuto", si bien lo hace en absoluta sincrona con el horario oficial o "real" (el objetivo en el tiro al blanco). Un segundo reloj utiliza minutero, segundero e incluso est dotado de un sistema de medicin de dcimas de segundo, sin embargo observamos que su horario no coincide plenamente con el horario oficial o real (que sigue siendo el objetivo). Por lo tanto, concluiremos que el primer reloj es altamente exacto, aunque no sea preciso, mientras que el segundo, es altamente preciso, aunque no se muestra exacto.

La Media Aritmtica En una medicin experimental se obtiene un resultado, al realizar varias corridas cada una dar un valor distinto, Qu valor se reportar cmo resultado del ensayo? El resultado numrico representativo de una serie de pruebas es la media aritmtica de los resultados individuales, la cual se encuentra dividiendo la suma de los resultados entre el nmero de determinaciones en serie y se expresa matemticamente como sigue:

i Xi = X N

donde:

X representa la media aritmtica. Xi representa el resultado numrico de la i-sima corrida N es el nmero total de corridas.

El Error Experimental La exactitud de un resultado se expresa mediante el error experimental que es la diferencia entre el valor real o aceptado (medicin correcta) y el obtenido experimentalmente. El error puede expresarse en por ciento de la medicin correcta o tambin como un porcentaje de todo el rango de medicin del instrumento utilizado. E (%) = [dato obtenido dato verdadero o correcto / dato verdadero o correcto] x 100

Otra forma de expresar el error experimental es mediante el error absoluto que es la diferencia entre el valor experimental y el valor verdadero.

Ea = Valor verdadero o correcto Valor experimental

La Desviacin Estndar La precisin de un resultado se puede expresar mediante la desviacin estndar que es una medida de la dispersin de los resultados obtenidos experimentalmente.

Ejemplo Aqu se muestra como calcular la desviacin estndar de un conjunto de datos. Los datos representan la edad de los miembros de un grupo de nios. { 4, 1, 11, 13, 2, 7 }.

1. Calcular el promedio o media aritmtica

En este caso, N = 6 porque hay seis datos:

I = nmero de datos para calcular la desviacin estndar

Sustituyendo N por 6

Este es el promedio.

2. Calcular la desviacin estndar

Sustituyendo N - 1 por 5; ( 6 - 1 )

Sustituyendo

por 6,33

ste es el valor de la desviacin estndar

BIBLIOGRAFA

Direcciones Electrnicas El Circo de la Ciencia. http://ciencias.unizar.es/circo/images/chemistry.jpg Fundacin CIENTEC http://www.cientec.or.cr/exploraciones/ponenciaspdf/WagnerCastro.pdf Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales. Espaa. http://www.mtas.es/insht/ntp/ntp_459.htm

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http://www.texca.com/simbolos.htm TEXCA. Tecnologa de Equipos a Prueba de Explosin. Libros

Osorio Giarldo Rubn D., 2009. Manual de tcnicas de laboratorio qumico. Universidad de Anioquia.

Medellin, Colombia. Ed.

Rubinson, Judith, R., Rubinson Kenneth A. 2000 Qumica Analtica U.S.A. Primera edicin. Prentice hall Hispanoamericana, S.A.

Contempornea.

New

Jersey,

PRACTICA 1 PREPARACIN DE DISOLUCIONES

INTRODUCCIN En la naturaleza encontramos dos clases de substancias puras, los elementos y los compuestos, las dems son mezclas. Una mezcla o dispersin consiste en dos o ms substancias puras, separables por medios fsicos, cuyas propiedades dependen de su composicin y de las propiedades de las substancias que la componen. Las mezclas son de dos tipos: heterogneas y homogneas. Una mezcla heterognea no es completamente uniforme y sus componentes son distinguibles, en ocasiones, a simple vista (por ejemplo, una mezcla de azcar y arena). Una mezcla homognea por el contrario tiene apariencia uniforme, las disoluciones son ejemplos de mezclas homogneas. En una disolucin, las partculas dispersas son invisibles a simple vista, ya que son partculas de dimensiones atmicas con dimetro menor de 1 nm, no pueden detectarse por mtodos pticos y atraviesan las membranas permeables, tampoco pueden separarse por filtracin, ni ultracentrifugacin. Las disoluciones no presentan opalescencia porque las partculas disueltas no dispersan la luz pero s pueden absorberla y tener color. En el cuerpo humano por ejemplo, los nutrientes estn disueltos en la sangre, la cual los transporta a todas las clulas donde se incorporan a un sinfn de reacciones bioqumicas que en conjunto conocemos como metabolismo. Otros ejemplos de dispersiones homogneas son las disoluciones salinas fisiolgicas y las de glucosa, urea y aminocidos contenidos en la sangre. Al hablar de disoluciones es muy comn usar los trminos soluto y disolvente. El disolvente, tambin conocido como componente continuo o dispersor, es el que se encuentra en mayor cantidad y su estado fsico no cambia cuando se forma la disolucin. Todos los dems componentes que se disuelven en el disolvente se llaman solutos o bien componentes dispersos o discontinuos. Durante el proceso de disolucin de los solutos se debe suministrar energa para romper las fuerzas que mantienen unidas las partculas de soluto entre s y separarlas en iones o molculas individuales. En general, la energa que se requiere para romper los enlaces entre las partculas del soluto es aportada por la que se libera cuando interactan las molculas de soluto y disolvente.

Un aspecto importante de los solutos es su solubilidad, que es la capacidad que tienen para disolverse en otra sustancia y se mide como la cantidad mxima de soluto que se puede disolver en un volumen definido de disolvente, a una temperatura y presin determinadas. En el caso de las mezclas gas en gas, la solubilidad es ilimitada, mientras que en el resto de las disoluciones existe un lmite a la cantidad de soluto que se puede disolver en un volumen. La solubilidad se mide como el coeficiente de solubilidad o simplemente solubilidad. Para los lquidos y slidos, la solubilidad se reporta en g de soluto por 100 g de disolvente (Brady, 2003).

FACTORES QUE MODIFICAN LA SOLUBILIDAD DE LAS DISOLUCIONES Temperatura En el caso de lquidos y slidos, la solubilidad en agua aumenta al incrementar la temperatura, en cambio para los gases, la solubilidad disminuye cuando aumenta la temperatura. Un ejemplo del impacto ambiental de este factor es el caso de las industrias que vierten agua caliente al mar, ros o lagos, la cual se considera contaminante ya que disminuye la solubilidad del O2 y por lo tanto, la cantidad de O2 disuelto en el agua, como consecuencia los organismos aerbicos mueren o ven limitado su desarrollo. Presin La presin prcticamente no afecta la solubilidad de lquidos y slidos en agua, pero s aumenta la solubilidad de los gases. La solubilidad de un gas en un lquido es proporcional a su presin parcial; por ejemplo, la presin atmosfrica al nivel del mar es de 760 mm de Hg, la Ciudad de Mxico se encuentra a una altura promedio de 2260 m sobre el nivel del mar con una presin atmosfrica promedio de 585 mm de Hg, debido a ello la presin parcial de O2 en este lugar es menor que al nivel del mar y por lo tanto, tambin lo es su solubilidad en agua. Estructura qumica La capacidad de las sustancias para disolverse en lquidos, depende de que las interacciones soluto disolvente provean suficiente energa para dispersar el soluto. Si la estructura qumica del soluto y disolvente no son afines, entonces no podrn interactuar y el soluto ser insoluble en el disolvente, como sucede con el aceite y el agua (Ocampo, 2005).

DISOLUCIONES ACUOSAS Los disolventes polares como el agua, tienen dipolos cuyo extremo positivo atrae a los iones negativos del soluto y el extremo negativo a los iones positivos de soluto, estos enlaces llamados in-dipolo, individualmente son dbiles pero en grandes cantidades, como sucede en las disoluciones, aportan suficiente energa para vencer la atraccin electrosttica que mantiene unidos a los iones en el cristal slido. En la disolucin, cada in est rodeado por muchas molculas de disolvente por lo que se dice que est solvatado y si el disolvente es agua, entonces se dice que est hidratado. Por otro lado, para que un disolvente pueda disolver compuestos inicos debe tener tambin una constante dielctrica elevada, que le permita disminuir la atraccin entre iones de carga opuesta, una vez que se encuentran solvatados. El agua debe sus relevantes propiedades como disolvente de substancias inicas a su polaridad y su elevada constante dielctrica. Adems, el agua forma puentes de hidrgeno, lo que le permite disolver tambin compuestos polares, aunque no sean inicos. Cuando se quiere indicar la cantidad relativa de soluto y disolvente presentes en una disolucin, se usa el trmino de concentracin. Existen dos maneras de expresar la concentracin, en una se indica la cantidad de soluto en relacin con la cantidad de disolucin y en la otra, la cantidad de soluto con respecto a la cantidad de disolvente. Las formas ms comunes de expresar la concentracin corresponden al primer tipo y son: molaridad, normalidad, osmolaridad, fraccin molar y por ciento. Entre las formas ms tiles del segundo tipo estn la molalidad y la osmolalidad

Expresiones de Concentracin en Trminos de la Cantidad de Soluto por Cantidad de Disolucin Vale la pena recordar aqu que un mol es la cantidad de sustancia que contiene el nmero de Avogadro (NA) de partculas elementales, tomos, iones o molculas y que NA es igual a 6.022x1023. Un mol de cualquier sustancia es la cantidad en gramos igual a su peso o masa molecular (PM), as se tiene que un tomo-gramo de hidrgeno es 1 gramo de hidrgeno; un tomo-gramo de sodio son 23 gramos de sodio; un tomo-gramo de potasio son 39 gramos de potasio; y un tomo - gramo de cloro son 35.5 gramos de cloro. Ahora bien, los tomos se unen para formar molculas; por ejemplo, el carbono, el oxgeno y el

hidrgeno se unen para formar, entre otras sustancias, glucosa cuya frmula condensada es C6H12O6. La masa molecular de la glucosa es la suma de las masas de los tomos constituyentes, a saber: el carbono es 12x6, sumado al hidrgeno 1x12, ms el oxgeno 16x6 lo que resulta en una masa molecular total igual a 180 tomos-gramo o gramos por mol de glucosa; esta masa puede ser expresada en gramos y, si cuando se habla de tomos se le llamaba tomo-gramo, cuando se refiere a molculas, se le denomina molcula-gramo o mol. Molaridad. Se define como el nmero de moles de soluto en un litro de disolucin. Se representa con la letra M y sus unidades son molL-1. Es importante notar que esta forma de expresar la concentracin indica la cantidad de soluto por cantidad de disolucin total y no de disolvente, esto quiere decir que si se disuelve en agua 1 mol de glucosa (180 gramos por mol) y se aade agua suficiente ("se afora") hasta completar un litro, se obtiene una disolucin molar (1.0 M) de glucosa. La manera mas conveniente de calcular la molaridad de una disolucin es utilizando la siguiente ecuacin.

M
Donde: M = es la molaridad (molL-1)

g soluto PM V

g soluto = es la cantidad de soluto en la disolucin (g) PM = peso molecular del soluto (gmol-1) V = volumen de disolucin (L)

Normalidad. Es el nmero de equivalentes qumicos (# eq) de soluto, disueltos en un litro de disolucin. Se representa con la letra N y sus unidades son eqL-1. El equivalente qumico de una sustancia depende del tipo de reaccin en la que va a participar dicha sustancia. El peso equivalente qumico se calcula dividiendo el peso molecular entre la valencia del compuesto en la reaccin considerada, y el equivalente qumico ser la cantidad en gramos igual al peso equivalente de la sustancia. En reacciones cido - base la valencia ser igual al nmero de protones donados por el cido o aceptados por la base, en cambio, en reacciones de xido - reduccin ser el nmero de electrones que

gana o pierde un tomo o molcula. Un ejemplo es cuando el cido oxlico H2C2O4, se oxida para producir CO2 segn la reaccin:

H2C2O4

2CO2 + 2H+ + 2e-

En donde el nmero de equivalentes por mol de soluto (n) es igual al nmero de electrones ganados o perdidos, por lo tanto, el nmero de equivalentes qumicos para una disolucin de acido oxlico (con un peso molecular de 90 g/mol) es:

Peso Equivalent e

90 g mol 1 2 Eq mol -1 H 2 C 2 O4

45

g Eq

En disoluciones de cidos y bases, n es el nmero de H+ que proporciona una unidad frmula de cido o tambin el nmero de OH- que suministra una unidad frmula de la base. La forma matemtica para calcular la normalidad de una disolucin es:

N
Donde:

g soluto Peso equivalent e V

N = es la normalidad (eqL-1) g soluto = es la cantidad de soluto en la disolucin (g) #eq = equivalentes de soluto V = volumen de disolucin (L)

Las expresiones de molaridad y normalidad estn relacionadas a travs de la valencia y por ello se puede plantear la siguiente equivalencia:

N
Donde: N = normalidad (eqL-1) M = molaridad (molL-1)

n M

n = nmero de electrones transferidos por unidad de frmula. Osmolaridad. Se define como el nmero de osmoles de soluto por litro de disolucin, se representa son el smbolo Os y tiene unidades de osmolL-1. El osmol es la cantidad de soluto que ejerce una presin osmtica igual a la de un mol de partculas disueltas, que es de 22.4 atmsferas a 25 C; cuando los solutos no se disocian la osmolaridad (Os) y la molaridad (M) son iguales, pero en solutos disociables, la osmolaridad depende del grado de disociacin. Fraccin Molar. Es la fraccin del total de moles de una sustancia en disolucin, que representa el nmero de moles de un componente particular. Su smbolo es x y se calcula dividiendo el nmero de moles del isimo componente (ni) entre el nmero total de moles en la disolucin (nT):

xi
Donde:

ni nT

xi = fraccin mol del componente i o del soluto i en la disolucin ni = nmero de moles del componente i o del soluto i en la disolucin (mol) nT = suma total de moles de los i componentes en la disolucin (mol)

Como se puede ver en la ecuacin, la fraccin molar es un nmero adimensional y la suma de las fracciones molares de todos los componentes de la disolucin siempre es igual a uno.

Por ciento. Expresa la concentracin como partes de soluto por cada cien partes de disolucin. Para preparar una disolucin porcentual se considera que las substancias "qumicamente puras" estn formadas slo por soluto, es decir, estn al 100%. Segn las unidades en que se expresen las partes de soluto y disolvente la concentracin porcentual pueden tener mltiples formas, las ms comunes son: Por ciento peso en peso (% p/p). Tambin llamado peso porcentual, es el nmero de gramos de soluto en 100 g de disolucin y es la forma en que se expresa la pureza de los reactivos qumicos. Se representa como % p/p y la forma de calcularlo es:

%p

g soluto 100 g soluto g disolvente

%p

g soluto g disolucin

100

As pues en una disolucin de cloruro de sodio al 5.0% en peso, 5.0 gramos de NaCl se disuelven en 95.0 gramos de agua. Por ejemplo, los cidos clorhdrico, sulfrico, etc. son envasados de esta manera. As, para al cido clorhdrico (HCl) al 37% (p /p) en cada 100 gramos de disolucin, 37 gramos son de HCl puro. Por ciento volumen en volumen (% v/v). Es el nmero de mililitros de soluto en 100 mililitros de disolucin. Por ciento peso en volumen (% p/v). Es el nmero de gramos de soluto en 100 mililitros de disolucin y es la forma ms comn de las expresiones porcentuales. Moles por ciento (moles %). Es el nmero de moles de soluto disueltas en 100 mililitros de disolucin. Milimoles por ciento (mmoles %). Es el nmero de milimoles de soluto disueltas en 100 mililitros de disolucin. Un milimol es la milsima parte de un mol. Miliequivalentes porciento (meq %). Es el nmero de miliequivalentes qumicos de soluto en 100 mililitros de disolucin. Un miliequivalente qumico es la milsima parte del peso de un eq. Esta forma de expresar la concentracin es muy utilizada en qumica clnica.

Los por cientos en peso y peso/volumen se relacionan con la densidad ( ) de la siguiente manera:

p V

p p

( )

El % p/p puede tambin relacionarse con la molaridad (M) y normalidad (N) mediante las siguientes expresiones:

%p M

p PM

10 N

%p

(Peso equivalente) 10 PM

Expresiones de Concentracin en Trminos de la Cantidad de Soluto por Cantidad de Disolvente Molalidad. Es el nmero de moles de soluto disueltos en 1000 gramos de disolvente. Se representa con la letra m y sus unidades son molKg-1. La principal ventaja de esta forma de expresar la concentracin es que su valor no cambia con la temperatura, como sucede con la molaridad, pero como en el trabajo prctico es ms fcil medir volmenes que masas, slo se emplea la molalidad cuando se sabe que la temperatura va a cambiar durante el proceso a estudiar. Osmolalidad. Se define como el nmero de osmoles de soluto por kilogramo de disolvente. Como los procesos biolgicos se llevan a cabo siempre a temperatura prcticamente constante, esta forma de expresar la presin osmtica casi no se usa en bioqumica (Burns, 2003).

PROCESO DE DILUCIN DE LAS DISOLUCIONES Qu pasa cuando ya se tiene una disolucin de cierta concentracin (disolucin madre) y se desea obtener, a partir de sta, una nueva disolucin con una menor concentracin? A este proceso se le conoce como dilucin, y en su clculo se utiliza la siguiente ecuacin:

V1C1 V2C2
Donde:

V1 = Volumen de la disolucin madre que se deber tomar para obtener la nueva disolucin C1 = Concentracin de la disolucin madre V2 = Volumen que se desea obtener de la nueva disolucin C2 = Concentracin que tendr la disolucin nueva

Las concentraciones pueden estar expresadas en trminos de molaridad, normalidad, porcentuales, molales u otras.

DISOLUCIONES SOBRESATURADAS, SATURADAS, CONCENTRADAS, DILUIDAS Y MUY DILUIDAS Tomando como referencia la cantidad de soluto disuelto y su solubilidad las disoluciones pueden ser sobresaturadas, saturadas, concentradas, diluidas y muy diluidas. Una disolucin sobresaturada contiene una cantidad de soluto mayor de la que el disolvente puede disolver a la temperatura actual; por lo general, este tipo de disoluciones existe en equilibrio con un exceso de soluto, que est fuera de la disolucin en forma de precipitado y con el cual las molculas de soluto se intercambian constantemente. Una disolucin est saturada cuando contiene la mxima cantidad de soluto que la cantidad presente de disolvente puede disolver, en las condiciones de presin y temperatura existentes, y por lo tanto es inestable, cualquier disturbio la hace precipitar. Una disolucin concentrada contiene una cantidad menor de soluto que la necesaria para saturarla a la temperatura en que se encuentra, pero que se aproxima a ella; en forma prctica, las disoluciones mayores a 1M se consideran concentradas. Las disoluciones diluidas contienen una pequea fraccin del total de soluto que pueden disolver; en la prctica la concentracin de una disolucin diluida es menor de 1M pero mayor de 0.01 M. Finalmente, las disoluciones muy diluidas son aquellas cuya concentracin es menor a 0.01 M (Skoog et al, 2008, Whitten et al, 1992).

OBJETIVOS El alumno deber ser capaz de realizar los clculos de la concentracin de diversas disoluciones, llevar a cabo su preparacin y distinguir las diferencias entra las distintas formas de expresar su concentracin.

MATERIALES Y REACTIVOS Balanza analtica 1 esptula 4 vasos de precipitados de 100 mL 4 matraces volumtricos de 100 mL 3 pipetas graduadas de 10 mL 1 propipeta 1 agitador magntico 1 varilla de vidrio 1 piseta 1 probeta de 100 mL 1 pipeta Pasteur con bulbo Cloruro de sodio Sacarosa Etanol cido sulfrico cido clorhdrico Hidrxido de sodio Carbonato de sodio Agua destilada (disolvente)

PROCEDIMIENTO Preparacin de 100 mL de disolucin 0.10 M de carbonato de sodio Pese en un vaso se precipitados de 100 mL, 1.0600 g de carbonato de sodio (Na2CO3). Recuerde registrar el peso mostrado en la balanza. Aada una porcin de agua para disolver con agitacin completamente la sal. Transfiera la disolucin a un matraz volumtrico de 100 mL con la ayuda de una varilla de vidrio para no derramarla ni gotear. El vaso se lava dos veces con porciones de 2 mL de agua y dichas porciones se transfieren al matraz volumtrico. Contine lentamente la adicin de agua hasta llegar al aforo, tape el matraz y agtelo invirtindolo varias veces. Haga los clculos con el fin de rectificar la concentracin. Preparacin de 100 mL de una disolucin de cloruro de sodio Pese en una balanza un vaso de precipitados de 100 mL, tare el vaso y adicione con una esptula sal (NaCl) hasta completar 2.0 g. Recuerde registrar el peso mostrado en la balanza. Mida 90.0 mL de agua y adicinelos al vaso que contiene la sal y agite hasta completa disolucin del slido, transfiera la disolucin a un matraz volumtrico de 100 mL y llvelo a volumen con agua. Calcule la concentracin de NaCl en molaridad (M) y en % p/p. Preparacin de 100 mL de una disolucin de etanol Con una pipeta graduada mida 7.0 mL de etanol al 95% y depostelos en un matraz volumtrico de 100 mL. Adicione agua para mezclar y posteriormente afore con agua. Determine cual es la concentracin molar (M) y en % v/v. Preparacin de 100 mL de HCl 0.10 M, a partir de HCl concentrado (37% p/p y densidad de 1.18 g/mL) Coloque 50.0 mL de agua en un matraz volumtrico de 100 mL. Con ayuda de una propipeta y en una campana de extraccin de vapores, tome el volumen necesario de cido concentrado para preparar la disolucin requerida. Agregue el cido lentamente al matraz con agua, deslizndolo gota a gota por las paredes del recipiente. Agite ligeramente la disolucin y lleve hasta el aforo con agua. Tape el matraz y agtelo nuevamente. Preparacin de 100 mL de H2SO4 0.20 N, a partir de H2SO4 concentrado (98% p/p y densidad de 1.87 g/mL)

Coloque 50.0 mL de agua en un matraz volumtrico de 100 mL. Con ayuda de una propipeta y en una campana de extraccin de vapores, tome el volumen necesario de cido concentrado para preparar la disolucin requerida. Agregue el cido lentamente al matraz con agua, deslizndolo gota a gota por las paredes del recipiente, agite ligeramente la disolucin y lleve hasta el aforo con agua, tape el matraz y agite nuevamente.

Recuerde: nunca pipetee un cido, y ningn reactivo en general, con la boca y siempre adicione el cido al agua, nunca el agua al cido! Use su bata cerrada (completamente abotonada) y trabaje en la campana de extraccin cuando se trate de cidos fuertes.

Preparacin de 100 mL de una disolucin 1 N de KOH Empleando KOH puro, disee un mtodo para preparar 100 mL de disolucin 1 N. Escriba el procedimiento con los clculos a seguir, disctalos con el profesor y luego proceda a la preparacin de la disolucin.

REPORTE DE LA PRCTICA Al terminar el desarrollo experimental, deber entregar al profesor el registro de los pesos o volmenes medidos durante la sesin, ya que efectuar un anlisis del desempeo grupal a travs del clculo del promedio, desviacin estndar y coeficiente de variacin. En el reporte de resultados deber registrar los clculos efectuados para cada una de las disoluciones preparadas, as como expresar las concentraciones experimentales en las diferentes formas como son normalidad, molaridad, y porciento en peso y volumen, tomando como base el volumen adicionado con la pipeta y /o el peso registrado en la balanza.

CUESTIONARIO 1. Cmo preparara 200 mL de una disolucin 2 N de NaHCO3?

2. Qu le pasar a la concentracin de una disolucin 1 M de HCl si se deja largo tiempo en un recipiente destapado? 3. Qu entiende cuando le piden preparar un litro de una disolucin de NaCl a una concentracin de 20 partes por milln (ppm)? Qu clculos hara? 4. Qu peso de NaOH se necesita para preparar 500 mL de una disolucin 0.1 M? 5. El frasco de donde se obtuvo el H2SO4 tiene las siguientes especificaciones: peso molecular = 98.08 g/mol, densidad = 1.87 g/mL, % de pureza = 98.0. Reporte la concentracin de H2SO4 en: a. % Peso b. % Peso/volumen c. Molaridad d. Normalidad

BIBLIOGRAFA Brady James. E. 2003. Qumica Bsica. Principios y Estructura. 2 edicin, Editorial Limusa Mxico. Burns Ralph A. 2003. Fundamentos de Qumica. 4 edicin, Pearson Education, Mxico D. F. Skoog Douglas Arvid., West Donald M., Holler James F., Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin, Thomson Learning. Mxico. Whitten Kenneth. L. Gailey Kenneth. D., Davis Raymond. E. 1992. Qumica General. 3 edicin. Editorial Mc Graw Hill Interamericana de Mxico. Mxico, Wiley.

Ocampo Glafira Angeles. 1991 Fundamentos de Qumica III, Editorial Publicaciones Cultural D. F.

PRCTICA 2 DETERMINACIN GRAVIMTRICA DE CALCIO COMO OXALATO DE CALCIO MONOHIDRATADO

INTRODUCCIN En una determinacin gravimtrica se mide el peso de un compuesto para determinar la cantidad de analito presente en la muestra (Rubinson & Rubinson, 2000). Los anlisis gravimtricos pueden ser por desprendimiento, precipitacin y electrodeposicin (Flascka et al, 1984). Al primer tipo de anlisis tambin se le conoce como termografa (Rubinson & Rubinson, 2000; Skoog et al, 2005) y consiste en medir los cambios de masa de la muestra sujeta a un proceso de calentamiento; en este tipo de anlisis es importante realizar el calentamiento en una atmsfera y velocidad controladas. En la electrodeposicin (o electrogravimetra), se determinan los iones metlicos presentes en una disolucin depositndolos cuantitativamente en forma de un slido sobre la superficie de un electrodo (Harris, 2001; Flascka et al 1986; Rubinson & Rubinson, 2000). En esta prctica realizaremos una precipitacin cuantitativa al formar un compuesto de baja solubilidad (Kps de CaC2O4 = 1.3 x 10-8). El anin oxalato (C2O42-) es una base dbil por lo que el oxalato de calcio es soluble en cido y la precipitacin del Ca2+ deber hacerse en medio alcalino al elevar el pH lentamente por descomposicin trmica de la urea (Harris, 2001). A fin de que los cristales sean grandes y se puedan filtrar rpidamente se requiere mantener la velocidad de sobresaturacin baja, condicin que se obtiene al agregar el agente precipitante en forma de disolucin diluida y hacerlo lentamente. Tambin es importante evitar excesos locales del agente precipitante ya que stos conducen al fenmeno de nucleacin, en lugar del crecimiento cristalino (Vega et al, 2003, Skoog et al, 2005). La separacin de un precipitado de su lquido madre requiere de una serie de tcnicas entre las que se incluyen la decantacin y la filtracin. El precipitado debe separarse lo ms completamente posible de la disolucin madre y con un mnimo de contaminacin, o cuando

menos, que los contaminantes se puedan eliminar durante el lavado del precipitado o durante su calcinacin. El precipitado separado se calcina a una temperatura predeterminada con el objetivo de que se transforme en un compuesto de estequiometra conocida, de tal forma que el peso de este compuesto pueda relacionarse al de la sustancia que se determina, por medio de un factor qumico que en este caso se llama factor gravimtrico (Flascka et al, 1986, Skoog et al, 2005). El factor gravimtrico se determina con la ecuacin: FG = (masa molar de la sustancia buscada/masa molar de la sustancia pesada) (FE) En donde: FG = factor gravimtrico FE = factor estequiomtrico El factor estequiomtrico se obtiene calculando el cociente: FE = x moles de la sustancia buscada/ y moles de la sustancia pesada En donde x, y son nmeros enteros que se obtienen al balancear la reaccin que tiene lugar durante la formacin del precipitado.

OBJETIVO El alumno realizar una precipitacin cuantitativa del analito (Ca2+) y mediante la determinacin de la masa del compuesto formado (oxalato de calcio) obtendr el contenido del analito en la muestra problema.

MATERIALES Y REACTIVOS Balanza analtica Mufla Horno de Microondas (opcional)

2 matraces volumtrico de 1 L 1 matraz volumtrico de 500 mL 1 matraz volumtrico de 100 mL 3 vasos de precipitados de 250 mL 1 pipeta volumtrica de 20 mL 1 propipeta 1 pipeta Pasteur con bulbo 1 probeta de 100 mL 1 crisol de porcelana 1 pinzas para crisol 1 desecador 1 piseta con agua destilada 1 esptula 1 varilla de vidrio 1 vidrio de reloj 1 embudo 1 tripie 1 mechero 1 rejilla de asbesto 1 tringulo de porcelana Papel filtro Whatman # 42

Hielo Oxalato de amonio Acido clorhdrico concentrado Carbonato de calcio Rojo de metilo Urea

PROCEDIMIENTO Preparacin de Reactivos y Muestra Problema a) Disolucin de oxalato de amonio. Pese y coloque 40.0 gramos de oxalato de amonio en un matraz volumtrico de 1.0 L. En la campana de extraccin, adicione 25.00 mL de cido clorhdrico concentrado. Posteriormente, adicione agua destilada hasta la marca del aforo. b) cido clorhdrico 0.10 M. En la campana de extraccin, coloque en un matraz volumtrico de 500 mL, 300 mL de agua destilada y aada lentamente y resbalando por la pared, 4.2 mL de HCl concentrado. Mezcle y afore con agua destilada hasta la marca. c) Rojo de metilo al 0.02%. Pese 0.02 gramos de rojo de fenol y disulvalo en 60 mL de etanol. Despus aada 40 mL de agua destilada. d) Muestra problema. En la campana de extraccin, prepare un litro disolucin que contenga entre 15 a 18 gramos de CaCO3 y 38 mL de HCl concentrado. Puesta del Crisol a Peso Constante Lave y seque un crisol de porcelana de porosidad media a 105 C durante 1-2 h. Colquelo despus en el desecador durante 30 minutos y pselo. Repita este procedimiento hasta que las pesadas sucesivas concuerden dentro de 0.3 mg. Recuerde usar las pinzas para manejar los crisoles o bien una toalla de papel. Si en el laboratorio se dispone de un horno de microondas,

puede usarlo para secar los crisoles. Un horno domstico de 900 W seca el crisol a peso constante en periodos de calefaccin de 4 minutos y 2 minutos (dejando 15 minutos de enfriamiento despus de cada ciclo). Se requiere comprobar cmo funciona el horno que se utilice a fin de fijar los tiempos apropiados de calefaccin (Harris, 2001). Formacin del Precipitado Mida, empleando una pipeta y propipeta, 20.0 ml de la muestra problema en un vaso de precipitados de 250 mL y adicione 25.0 mL de HCl 0.10 M. Aada 5 gotas de rojo de metilo. Adicione lentamente y con agitacin constante cerca de 20 mL del agente precipitante (oxalato de amonio). Saque la varilla y lvela cuidando que el agua caiga dentro del vaso de precipitados. Aada aproximadamente 12 gramos de urea slida y cubra el vaso con el vidrio de reloj. Caliente suavemente durante 30 minutos hasta que el indicador vire de rojo a amarillo. Filtracin y Lavado del Precipitado Doble y coloque el papel filtro dentro del embudo. Emplee la varilla como gua a fin que el material caiga dentro del papel filtro. La filtracin de la disolucin debe hacerse en caliente. Aada al vaso, donde se realiz la precipitacin, cerca de 3 mL de agua enfriada con hielo y emplee la varilla como gua para pasar todo el slido al papel filtro. Repita este procedimiento hasta que se haya trasferido todo el precipitado. Finalmente, use dos porciones de 10 mL de agua fra para lavar el vaso cada vez y vierta los lavados sobre el precipitado. Secado del Precipitado Doble y saque el papel filtro teniendo cuidado de que el precipitado quede protegido y no se pierda, y colquelo en el crisol que ya est a peso constante y djelo en la estufa a 105C de 1 a 2 horas. Posteriormente, coloque el crisol en el desecador durante 30 minutos y pselo. Tambin se puede secar el precipitado en un horno de microondas una vez durante 4 minutos, seguido de varios periodos de 2 minutos, enfriando durante 15 minutos antes de pesar. El agua de cristalizacin no se pierde.

REPORTE DE LA PRCTICA

Datos Obtenidos Peso del crisol vaco Peso del crisol con el oxalato Peso del papel filtro Clculos Peso de CaC2O4.H2O Exprese el contenido de calcio en la disolucin problema en trminos de; a) % peso/volumen b) Molaridad

CUESTIONARIO 1. Cules son los tipos de precipitados y que caractersticas presentan? 2. Defina los siguientes conceptos en sus propias palabras: disolucin saturada, disolucin sobresaturada, nucleacin, crecimiento cristalino, digestin del precipitado y precipitacin. 3. Cuntos tipos de contaminacin existen y como pueden eliminarse? 4. Calcule la Kps para el AgCl sabiendo que la concentracin en el equilibrio para los iones es de 1.34x10-5 M. 5. Qu masa de yodato de plata se pude obtener a partir de 0.50 g de yodato de sodio? Suponga que la solubilidad del AgIO3 en agua es despreciable. 6. Una alcuota de 50.0 ml de una disolucin que contiene 0.500g de cloruro de bario se mezcla con 50.0 mL de una disolucin que contiene 0.600 g de yodato de sodio. Suponga que la solubilidad del yodato de bario en agua es despreciable, calcule: a) La masa que precipita como yodato de bario y b) la masa del compuesto que queda sin reaccionar.

BIBLIOGRAFA

Judith F. Rubinson & Kenneth, A. Rubinson., 2000. Qumica Analtica Contempornea. edicin. Prentice Hall, Mxico. Flascka, H.A., Barnard, Jr. A. J., Sturrock, P.E., 1986. Qumica Analtica Cuantitativa. Vol 6 edicin. C.E.C.S.A., Mxico.

II.

Harris Daniel C., 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico. Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R., 2005. Fundamentos de Qumica Analtica. 8a edicin. International Thomson Editores, Mxico. la

Vega Avila Elisa, Verde Calvo Ramn, Prez Cesar Mara del Carmen, 2003 La teora y prctica en el laboratorio de Qumica Analtica I. 1 edicin. Universidad Metropolitana, Mxico. Autnoma

PRCTICA 3 VALORACIN DE DISOLUCIONES CIDO-BASE

INTRODUCCIN Las valoraciones son ampliamente utilizadas en qumica analtica para la determinacin de la concentracin de cidos, bases, oxidantes, reductores, iones metlicos, protenas y muchas otras especies. Las valoraciones o titulaciones se basan en una reaccin entre un analito y un reactivo patrn, conocido como valorante. La reaccin tiene una estequiometra conocida y reproducible. En una valoracin, se determina el volumen (o masa) del valorante necesario para reaccionar de manera completa con el analito y se emplea dicho volumen para obtener la cantidad o concentracin del analito (Harris et al., 2001). La valoracin se realiza agregando lentamente la disolucin patrn desde una bureta a una disolucin del analito hasta que la reaccin entre los dos se completa. El punto de equivalencia de una valoracin es un punto terico que se alcanza cuando la cantidad de valorante aadido es qumicamente equivalente a la cantidad de analito en la muestra. Resulta imposible determinar experimentalmente el punto de equivalencia de una valoracin, en su lugar se determina un cambio fsico (visual) relacionado con la condicin de equivalencia y a este cambio se le llama punto final de la valoracin. Es muy comn agregar indicadores a la disolucin del analito para producir un cambio fsico observable (punto final) cerca del punto de equivalencia. Entre los cambios tpicos de los indicadores se tiene la aparicin o desaparicin de un color, un cambio de color, o bien la aparicin o desaparicin de turbidez (Skoog et al., 2008).

Tipos de valoraciones Existen distintos tipos de valoraciones, entre stas se encuentran las de neutralizacin, en las que el analito y el valorante experimentan reacciones cido base. Se tienen tambin las valoraciones que implican reacciones de formacin de complejos, estos mtodos son de particular importancia para la determinacin de diversos cationes. Igualmente, existen valoraciones en las que la reaccin qumica implica la transferencia de electrones, estos mtodos se denominan valoraciones rdox. En la presente prctica se abordan nicamente las valoraciones cido base.

Valoraciones con un patrn primario Un patrn primario es un reactivo de elevada pureza que sirve como material de referencia en valoraciones volumtricas. Dicho reactivo se emplea para la obtencin de disoluciones patrn de concentracin perfectamente conocida. La exactitud del mtodo de valoracin depende sobre todo de las propiedades de este compuesto. Dentro de los requisitos ms importantes de un patrn primario se encuentran los siguientes: a) Alto grado de pureza (99.9 %); b) Estabilidad a temperatura ambiente, sin cambiar su composicin con el secado o con el aumento de temperatura; c) Ausencia de agua de hidratacin, para que la composicin del slido no cambie con las variaciones de humedad; d) No absorber CO2 de la atmsfera; e) Masa molar razonablemente grande para minimizar el error relativo al pesar el patrn.

OBJETIVO El alumno emplear patrones primarios para la valoracin de disoluciones con propiedades cido base y aprender el uso adecuado de los correspondientes indicadores. MATERIALES Y REACTIVOS 1 balanza analtica 1 bureta de 50 mL 1 soporte universal 1 pinza para bureta 3 matraces Erlenmeyer de 250 mL 3 pipetas volumtricas de 10 mL 1 propipeta 1 piseta con agua destilada 2 vasos de precipitados de 250 mL 1 probeta de 100 mL 1 parrilla con agitacin magntica 4 matraces volumtricos de 100 mL 2 frascos con gotero 1 varilla de agitacin 1 barra magntica Anaranjado de metilo al 0.10 % Fenolftalena al 0.10 % HCl 0.1M NaOH 0.1 M 2.5 g de carbonato de sodio (Na2CO3) 5 g de ftalato cido de potasio (FAP, KHC8H4O4).

PROCEDIMIENTO Preparacin de Patrones Primarios Patrn primario de carbonato de sodio (Na2CO3) El carbonato de sodio (Na2CO3) grado analtico se seca previamente durante media hora dentro de una estufa a una temperatura entre 240 250 C y posteriormente se transfiere al desecador. Pese con precisin 0.5300 g de Na2CO3 y anote en su bitcora la masa, use 4 cifras significativas. Coloque 50 mL de agua en un matraz volumtrico de 100 mL y aada poco a poco el Na2CO3, despus de disolverlo agregue agua hervida desionizada hasta el aforo y mezcle la disolucin.

Patrn primario de ftalato cido de potasio El ftalato cido de potasio (FAP, KHC8H4O4) grado analtico se seca previamente en la estufa a 125 C durante media hora y posteriormente se introduce al desecador. Pese con precisin 2.0420 g de este reactivo y anote en la bitcora la masa, use 4 cifras significativas. Coloque en un matraz volumtrico de 100 mL, 50 mL de agua hervida, disuelva el FAP y afore con agua destilada previamente hervida.

Valoracin de Disoluciones Valoracin de la disolucin de cido clorhdrico Utilizando anaranjado de metilo como indicador Coloque en un matraz Erlenmeyer de 250 mL una alcuota de 10.0 mL de la disolucin de patrn primario de Na2CO3, 20 mL de agua destilada y 2 gotas de disolucin de anaranjado de metilo (pKind = 3.5). Llene la bureta con la disolucin de HCl 0.1 M y adicinela lentamente a la disolucin de carbonato agitando vigorosamente. La disolucin carbonato indicador presenta inicialmente una coloracin amarilla, al llegar al punto final de la titulacin cambia a un color naranja ligeramente rosado (canela). Se toma la lectura del consumo de HCl hasta que el color canela permanezca un minuto en la disolucin. Repita todo el procedimiento con dos alcuotas

ms de la disolucin de Na2CO3. Considere que la estequiometra para esta reaccin es la siguiente: Anaranjado de metilo
(ac)

+2

(ac)

(ac)

Utilizando fenolftalena como indicador Coloque en un matraz Erlenmeyer de 250 mL una alcuota de 10.0 mL de la disolucin de patrn primario de Na2CO3, 20 mL de agua destilada y 2 gotas de disolucin de fenolftalena (pKind = 9.3). Titule con la disolucin de HCl, agregue sta lentamente sobre la disolucin de carbonato y agtela vigorosamente despus de cada adicin. La disolucin carbonato fenolftalena es de color rosa y cuando llega al punto final de la titulacin vira a incolora. Cuando la disolucin permanece incolora al menos un minuto, se toma la lectura del consumo de HCl. Repita por triplicado esta titulacin. Para el clculo de la molaridad del HCl, considere la estequiometra de la reaccin. Fenolftalena
(ac)

(ac)

(ac)

Valoracin de la disolucin de hidrxido de sodio Coloque en un matraz Erlenmeyer de 250 mL una alcuota de 10.0 mL de la disolucin de patrn primario de FAP, 20 mL de agua destilada y 2 gotas de disolucin de fenolftalena (pKind = 9.3). Titule con la disolucin de NaOH que se desea valorar, siga el procedimiento de la valoracin anterior, hasta que aparezca en la disolucin un color rosa persistente con duracin de 1 minuto. La titulacin se hace por triplicado. Considere la reaccin: Fenolftalena
(ac)

(ac)

(ac)

REPORTE DE LA PRCTICA

Valoracin de la disolucin de cido clorhdrico Anote los siguientes datos obtenidos durante la prctica: Cantidad pesada de Na2CO3 Por ciento de pureza del Na2CO3 Volumen en el que se disolvi el Na2CO3(s) Volumen de la alcuota de Na2CO3 que se us para titular el HCl Consumo de HCl en mL cuando se utiliz el indicador anaranjado de metilo Cosumo de HCl en mL cuando utiliz el indicador de fenolftalena Con base en esta informacin calcule: 1. La masa del Na2CO3 en la alcuota 2. La molaridad del HCl cuando emplea como indicador anaranjado de metilo 3. La molaridad del HCl cuando emplea como indicador fenolftalena Valoracin de la disolucin de hidrxido de sodio Anote los siguientes datos obtenidos durante la prctica: Cantidad pesada de KHC8H4O4 (FAP) Por ciento de pureza del KHC8H4O4(s) Volumen en el que se disolvi el KHC8H4O4(s) Volumen de la alcuota de KHC8H4O4 que us para valorar la disolucin de NaOH(ac) Consumo de NaOH en mL Con base en esta informacin calcule: 1. La masa del KHC8H4O4 en la alcuota 2. La molaridad del NaOH CUESTIONARIO

1. Qu significa el trmino error de valoracin? 2. Cul es la diferencia entre el punto de equivalencia y el punto final de una valoracin? 3. Una muestra de 0.4512 g de patrn primario Na2CO3 requiri 36.44 mL de una disolucin de H2SO4 para alcanzar el punto final de la reaccin. Escriba la reaccin que se lleva a cabo y calcule la molaridad del H2SO4. 4. En la titulacin de carbonato de sodio con cido clorhdrico que diferencia tiene utilizar como indicadores anaranjado de metilo y fenolftalena. 5. Diga por qu se debe emplear fenolftalena y no anaranjado de metilo, en la titulacin del ftalato cido de potasio con hidrxido de sodio. BIBLIOGRAFA Harris D. C., 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico. Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico. Vega vila Elisa, Verde Calvo Jos Ramn, Prez Csar Ma. del Carmen. 2003. La teora y prctica en el laboratorio de Qumica Analtica I. 1 edicin. Universidad Metropolitana-Iztapalapa, Mxico. Autnoma la

PRCTICA 4 DISOLUCIONES AMORTIGUADORAS

INTRODUCCIN Las disoluciones amortiguadoras son frecuentes en la naturaleza, como es el caso del sistema H2CO3/NaHCO3 que predomina en el plasma y fluido intersticial (Vega & Konigsberg, 2001). Asimismo, los amortiguadores tienen diversas aplicaciones, como en los medios empleados en los cultivos bacterianos que requieren de cierto valor de pH para que las bacterias crezcan (Umland & Bellama, 1999). Una disolucin amortiguadora, llamada tambin disolucin reguladora, buffer o tampn (Harris, 2001), es aquella que tiene la capacidad de regular los cambios bruscos de pH debidos a la adicin de cidos o bases fuertes y de resistir los cambios de pH por efecto de diluciones (Skoog et al, 2001). Una disolucin amortiguadora est formada por un cido dbil y su base conjugada o bien por un base dbil y su cido conjugado; de manera tal que en la misma disolucin coexisten un componente que reacciona con los cidos (la base) y otro que reacciona con las bases (el cido) (Cuadro 1). Cuadro 1. Algunos ejemplos de disoluciones amortiguadoras. Amortiguador cido Base pKa [cido] [Base] pH M Acetatos Fosfatos Amoniacal Carbonatos CH3COOH NaH2PO4 NH4Cl NaHCO3 CH3COONa Na2HPO4 NH3 Na2CO3 4.74 7.2 9.24 10.33 1.0 0.5 0.15 .07 M 1.0 1.0 0.45 0.08 4.74 7.50 9.71 [Amorti] M 2.0 1.5 0.60

10.38 0.15

Amorti= amortiguador; M= molar Como podemos observar en el cuadro anterior, la concentracin molar del amortiguador se obtiene al sumar las concentraciones que tienen en la disolucin el cido y la base. Para obtener

el valor de pH de una disolucin amortiguadora se emplea la ecuacin de Henderson-Hasselbach (Rubinson & Rubinson, 2000): pH = pKa + log ([base] / [cido]) En donde: pKa = -logKa El valor de pKa es constante y como se observa en esta ecuacin, se requiere un cambio en la proporcin base/cido de 10 (log 10 = 1) para cambiar el pH en una unidad. Mientras ms grandes sean las concentraciones del par cido-base mayor ser la capacidad amortiguadora (Harris, 2001). Se define como capacidad amortiguadora el nmero de moles de H3O+ (o de OH) que se requieren para cambiar en una unidad el pH de un litro de disolucin reguladora (Vega & Konigsberg, 2001).

OBJETIVOS Que el alumno conozca los valores de pH que se obtienen al variar la relacin del cido y su base conjugada, as como al diluir o adicionar una base fuerte a un amortiguador en comparacin con una disolucin de una sal.

MATERIALES Y REACTIVOS 1 potencimetro 5 matraces Erlenmeyer de 125 mL 2 matraces volumtricos de 100 mL 2 pipetas volumtricas de 10 mL 1 bureta 1soporte universal

1 pinzas para bureta 1 propipeta 1 piseta con agua destilada 5 vasos de precipitados de 100 mL 1 parrilla de agitacin 1 barra magntica Disoluciones amortiguadoras de pH 7 y 10 100 ml de Na2CO3 1.0 M. 100 mL de NaHCO3 1.0 M. NaOH 0.10 M.

PROCEDIMIENTO Efecto de la relacin cido/base conjugada sobre el pH 1. Siguiendo las instrucciones del profesor, calibre el potencimetro con los amortiguadores de pH 7 y/o 10, segn el pH a trabajar. 2. Marque los matraces Erlenmeyer de 125 mL con nmeros progresivos del 1 al 5. 3. Adicione 20 mL de la disolucin de NaHCO3 1.0 M ms 30 mL de Na2CO3 1.0 M en el matraz No.1. 4. Adicione 30 mL de la disolucin de NaHCO3 1.0 M ms 20 mL de Na2CO3 1.0 M en el matraz No.2. 5. Coloque en un vaso de precipitados 25 mL de la disolucin contenida en el matraz No.1 y mida el pH. 6. Coloque en un vaso de precipitados 25 mL de la disolucin contenida en el matraz No.2 y mida el pH.

Efecto de la dilucin sobre el pH 1. Con Na2CO3 En un vaso de precipitados de 100 mL, coloque 25 mL de Na2CO3 1 M y mida el pH, transfiera al matraz No.3 y afore usando agua destilada. Nuevamente mida el pH de esta disolucin. 2. Con amortiguador En el matraz No. 4, coloque 25 mL del amortiguador contenido en el matraz 1 y agregue 25 mL de agua destilada. Mezcle y tome una alcuota de 25 mL y mida el pH de este amortiguador. Determinacin de la capacidad amortiguadora 1. En un vaso de precipitados de 100 mL, coloque una alcuota de la disolucin amortiguadora del matraz 2, coloque la barra magntica y ponga sobre la parrilla de agitacin el vaso conteniendo el amortiguador con la barra magntica y el electrodo del potencimetro (Fig. 1). En la bureta, coloque el NaOH 0.1 M y adicinelo gradualmente y con agitacin continua al vaso hasta que el pH de la disolucin amortiguadora cambie en una unidad. 2. Coloque en un vaso de precipitados de 100 mL una alcuota de 20 mL de Na2CO3 1 M. Mida el valor de pH y adicione NaOH 0.10 M hasta que el pH de la sal cambie en una unidad.

Figura 1. Acomodo de la bureta y del electrodo del potencimetro en el vaso de precipitados conteniendo la disolucin amortiguadora y la barra magntica.

REPORTE DE LA PRCTICA Anote los datos que se indican. Efecto de la relacin cido/base conjugada sobre el pH 1. pH del amortiguador contenido en el matraz No.1. 2. pH del amortiguador contenido en el matraz No.2. Efecto de la dilucin sobre el pH 1. pH de la disolucin de Na2CO3 1.0 M. 2. pH de la disolucin diluida de Na2CO3 (matraz No.3) 3. pH de la disolucin diluida del amortiguador (matraz No.4) Determinacin de la capacidad amortiguadora 1. El volumen de NaOH para cambiar en una unidad el pH de: La disolucin amortiguadora La disolucin de Na2CO3 Con base en los datos experimentales, calcule: 1. Cul de las disoluciones amortiguadoras tiene un pH menor que el pKa? 2. En cul de las dos disoluciones cambi el valor de pH por efecto de la dilucin? 3. Cuntos moles de NaOH se requieren para cambiar en una unidad el pH de un litro de la disolucin amortiguadora? 4. Cuntos moles de NaOH se requieren para cambiar en una unidad el pH de un litro de la disolucin de Na2CO3 ?

CUESTIONARIO 1. Cul es la concentracin, en trminos de molaridad, del amortiguador formado con 20 mL de la disolucin de NaHCO3 1.0 M y 30 mL de Na2CO3 1.0 M? Cul es la concentracin de este amortiguador, cuando se le adicionan 50 mL de agua destilada? 2. Cul es el pH terico que obtendra al mezclar 15.0 mL de Na2CO3 0.15 M con 75 mL de NaHCO3 0.30 M? 3. Qu efecto observara en el pH si la disolucin de NaHCO3 se hubiera diluido? 4. Calcule el pH que se obtiene al mezclar 50 mL de NaHCO3 0.10 M con 25 mL de NaOH 0.10 M? 5. Calcule el pH que obtiene al mezclar 50 mL de NaHCO3 0.10 M con 25 mL de HCl 0.10 M?

BIBLIOGRAFA Harris Daniel C. 2001. Anlisis qumico cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico. Rubinson J.F., Rubinson K.A. 2000. Qumica Analtica Contempornea. 1 ed. Prentice Hall, Mxico. Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico.

Umland J.B., Bellama J.M. Qumica General. 2000. 3a edicin. International Thomson Editores, S.A. de C.V. Vega Avila Elisa, Konigsberg Fainstein Mina. 2001. La importancia biolgica de los amortiguadores. Contactos 42: 23-27. Vega Avila Elisa, Konisberg Fainstein Mina. 2001. La teora y la prctica en el laboratorio de qumica general para Ciencias Biolgicas y de la Salud. Autnoma Metropolitana. Mxico. 1 ed. Universidad sistemas

PRCTICA 5 APLICACIONES DE LAS TITULACIONES DE NEUTRALIZACIN CIDO - BASE

INTRODUCCIN La valoracin o titulacin es un mtodo comn de anlisis qumico cuantitativo en el laboratorio, que se utiliza para determinar la concentracin desconocida de un analito en una disolucin. Se requiere de un reactivo llamado valorante, disolucin estndar o patrn de concentracin conocida, la cual se hace reaccionar con el analito de la disolucin cuya concentracin se desconoce (Harris, 2001). La reaccin que ocurre entre el valorante y el analito es una reaccin de neutralizacin cuando los compuestos qumicos involucrados son un cido y una base. Las titulaciones de neutralizacin se utilizan para determinar gran variedad de especies inorgnicas, orgnicas y biolgicas que posean propiedades cidas o bsicas. Igualmente importantes son las numerosas aplicaciones en las que un analito se transforma, con un tratamiento adecuado, en un cido o base, y posteriormente se titula con un patrn cido o base fuerte (Skoog y col. 2008). El objetivo de toda valoracin es el adicionar la sustancia patrn en una cantidad tal que sea qumicamente equivalente con la sustancia que reacciona, condicin que se consigue en el punto de equivalencia. El punto de equivalencia es un concepto terico, lo que en realidad se observa es el punto final de la titulacin el cual corresponde al volumen necesario de valorante para completar la neutralizacin. El punto final frecuentemente es detectado mediante el uso de un indicador de pH. En una titulacin o valoracin cido-base simple, puede usarse un indicador como la fenolftalena, que es incolora en medio cido y de color rosa cuando el pH es igual o mayor a 8.2. Otro ejemplo es el anaranjado de metilo, de color rojo en medio cido y amarillo en soluciones bsicas. Existen dos tipos principales de titulacin, la titulacin directa y la titulacin por retroceso. En la titulacin directa el valorante cido o bsico reacciona directamente con el analito (bsico o cido) mientras que en la titulacin por retroceso en vez de valorar el analito original se aade un exceso conocido de reactivo estndar a la disolucin, y luego se valora el exceso. Este mtodo es til si el punto final de la valoracin por retroceso es ms fcil de

identificar que el punto final de la valoracin normal (Harris, 2001). Se usa tambin si la reaccin entre el analito y la sustancia titulante es muy lenta. OBJETIVO El alumno aplicar los conocimientos tericos adquiridos acerca de la teora de neutralizacin cido-base a la determinacin de acidez en productos comerciales como vinagre y cido acetilsaliclico en tabletas de aspirina.

MATERIALES Y REACTIVOS Balanza analtica 6 matraces Erlenmeyer de 250 mL 1 matraz volumtrico de 500 mL 2 vasos de precipitados de 250 mL 1 esptula 1 bureta de 50 mL 1 pinza para bureta 1 pipeta volumtrica de 25 mL 1 pipeta Pasteur 1 embudo de vidrio 1 probeta de 100 mL 1 propipeta 1 varilla de agitacin 1 soporte universal 1 piseta con agua destilada 1 parrilla con agitacin magntica 1 barra magntica

1 pinzas de diseccin 1 mortero con pistilo 1 picnmetro de 50 mL Gasa Disolucin valorada de NaOH 0.1 M Disolucin valorada de HCl 0.1M Disolucin de fenolftalena al 0.1% Vinagre comercial (5% acido actico) Tabletas de aspirina

PROCEDIMIENTO Determinacin de acidez de vinagre comercial 1. Mida 50 mL de vinagre comercial, pselos, colquelos en un matraz volumtrico de 500 mL y dilyalos con agua destilada hasta la marca del aforo. Tape el matraz y agite cuidadosamente para homogeneizar la disolucin. 2. Mida una alcuota de 25 mL de la disolucin anterior con una pipeta volumtrica y depostela en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. 3. Aada 50 mL de agua destilada y 3 4 gotas de fenolftalena. 4. Llene la bureta con la disolucin valorada de NaOH 0.1 M, cuidando que no se formen burbujas de aire. 5. Titule la disolucin problema de vinagre, adicionando lentamente el hidrxido de sodio hasta que la disolucin vire de incoloro a rosa. Anote el volumen de NaOH gastado para alcanzar la neutralizacin. Repetir la titulacin por triplicado. 6. A partir del volumen anterior y del valor de la densidad del vinagre, calcule mediante la Ecuacin 1 el porcentaje de cido actico en el vinagre comercial, teniendo en cuenta que la reaccin que tiene lugar es la siguiente:

CH3 COOH + OH

CH3COO + H2O

(Ec.1)

Donde : AA= cido actico

C9H8O4 + 2 OH (necesario + exceso)

CH3 COO (ac) + C6H4 (OH) COO

+

OH (exceso) + H (ac)
Determinacin de la densidad del vinagre comercial

H2O

Proceda a determinar la densidad aparente de la disolucin de vinagre comercial como se indica en los siguientes pasos: 1. Pese el picnmetro vacio y seco (P1). 2. Llene el picnmetro con la disolucin de vinagre comercial (5%) hasta el aforo (50mL). 3. Pese nuevamente el picnmetro lleno con la disolucin de vinagre comercial. Anote el peso (P2).

4. Determine la densidad de la disolucin de vinagre empleando la siguiente Ecuacin 2.

Cuantificacin de cido acetilsaliclico en tabletas de aspirina

El cido acetilsaliclico (AAS) es un compuesto poco soluble en agua, razn por la cual se disuelve en una disolucin de NaOH de concentracin y volumen conocido. El exceso de NaOH que no reacciona con el cido acetilsaliclico se retrotitula con la disolucin de HCl 0.1 M.

1. Pese en una balanza analtica, de manera individual 4 tabletas de aspirina y anote la masa de cada pastilla. Determine el peso promedio de las tabletas Ptableta

%AA
(Ec.2)

2. Pulverice las pastillas en el mortero. Pese 0.3000g del polvo obtenido y colquelo en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. 3. Adicione 75.0 mL de disolucin valorada de NaOH 0.1 M (necesaria+exceso). 4. Caliente la disolucin en la parrilla y mantngala en ebullicin durante 10 minutos (tome las precauciones necesarias para evitar proyecciones de la disolucin en ebullicin). 5. Transcurrido el tiempo, enfre la disolucin. 6. Agregue 50.0 mL de agua destilada y 3 gotas de fenolftalena. 7. Retrotitule la muestra con disolucin valorada de HCl 0.1 M hasta el vire de color rosa a incoloro. Repetir por triplicado. 8. A partir del volumen anterior, utilice la Ecuacin 3 para calcular la concentracin de AAS expresada en mg AAS/tableta, teniendo en cuenta las siguientes reacciones:

(Ec.3)

REPORTE DE LA PRCTICA Acidez del vinagre comercial 1. Calcule la densidad aparente del vinagre comercial. 2. Calcule la concentracin en porcentaje peso/peso del cido actico en la muestra de vinagre. 3. Compare sus resultados con los reportados en la literatura. Contenido de cido acetilsaliclico en las tabletas de aspirina

1. Calcule la concentracin de cido acetilsaliclico en mg AAS/tableta.

2. Compare sus resultados con la informacin declarada en la etiqueta del frasco del medicamento.

CUESTIONARIO

mg

1.

Defina los siguientes trminos: neutralizacin, punto final, punto de equivalencia, titulacin directa y retrotitulacin.

2.

1.00 g de una disolucin que contiene HNO3 (PF = 63.0) y H2SO4 (PF = 98.0) se neutraliza con una disolucin de NaOH 0.10 M utilizando fenolftalena como indicador, gastndose 40.0 mL del valorante. Otra porcin de disolucin de igual peso se trata adecuadamente para reducir el HNO3 a NH3, se destila este ltimo y se recoge en 50 mL de HCl 0.10 M, cuyo exceso consume 45.0 mL de NaOH 0.1 M. Cul es el porcentaje de cada cido en la muestra?

3.

El contenido de formaldehdo de un preparado de plaguicida se determina pesando 0.3124 g de la muestra lquida en un matraz que contiene 50 mL de NaOH 0.0996 M y perxido de hidrgeno al 3 %. Al calentar, todo el formaldehdo se transforma en formiato sdico. Despus de enfriar, el exceso de NaOH se valora con 23.3 mL de H2SO4 0.0525 M. Calcule el porcentaje en peso de formaldehdo (HCHO PF = 30.0) en la muestra.

BIBLIOGRAFA Harris Daniel C. 2001. Mxico. Skoog Douglas A., West Donald M., Holler James F., Crouch S.R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A.

PRCTICA 6 DETERMINACIN DE HIERRO (II) EN VITAMINAS COMERCIALES POR XIDOREDUCCIN

INTRODUCCIN Dentro del grupo de los minerales, el hierro es un elemento imprescindible para el organismo humano. Sin el hierro necesario, nuestro cuerpo se vuelve lento debido a que una de sus funciones ms importantes es oxidar la glucosa para convertirla en energa; el hierro interviene, por lo tanto, en el buen funcionamiento de la respiracin. Adems se combina con protenas para formar la hemoglobina y as poder transportar el oxgeno a los tejidos; tambin sirve para activar el grupo de vitaminas B, y para estimular la inmunidad y la resistencia fsica. El hgado, el bazo y los huesos acumulan la mayor parte de este mineral. La deficiencia del hierro est muy difundida tanto en pases pobres como ricos debido a que slo una pequea parte del hierro ingerido pasa a la corriente sangunea. La carencia se manifiesta en la anemia cuyas caractersticas son la fatiga, palidez de la piel y mucosas, palpitaciones con taquicardia, piel seca y cabellos quebradizos, disminucin de las defensas y trastornos gastrointestinales. Tambin los estados de desnimo crnico estn relacionados muy a menudo con niveles bajos de hierro. Una de las formas de cuantificar el hierro, es por medios volumtricos, haciendo uso de agentes oxidantes fuertes como lo son el dicromato de potasio y el permanganato de potasio. En soluciones de cido sulfrico el producto de reduccin del permanganato es el in manganeso (II). MnO4- + 8 H+ + 5eMn2+ + 4H2O E= 1.507v

Las disoluciones acuosas de permanganato no son totalmente estables debido a que el in permanganato tiene tendencia a reaccionar con el agua:

4MnO4- + 16H+ + 12e6H2O 4MnO4- + 4H+

4MnO2 + 8H2O 3O2 + 12H+ + 12e4MnO2 + 2H2O + 3O2

E= 1.7V E = -1.23 V

Con base en los potenciales estndar de reduccin (E) de esta reaccin se puede ver que el equilibrio debe estar desplazado a la derecha, incluso en soluciones neutras; sin embargo, la pequea velocidad de reaccin de este sistema es la responsable de que las soluciones de permanganato tengan estabilidad suficiente para ser usadas con fines analticos (Skoog et al. 2008). Las disoluciones de hierro (II) pueden ser fcilmente cuantificadas por mtodos de xido reduccin, por ejemplo, es factible su titulacin con una disolucin estandarizada de permanganato de potasio en medio cido.

VOLUMETRA

Figura 1. Materiales y reactivos bsicos utilizados en las titulaciones volumtricas. 1. Soporte universal; 2. Pinzas para bureta; 3. Bureta con el reactivo titulante o valorante; 4. Matraz Erlenmeyer conteniendo al analito cuya concentracin se desea conocer.

La volumetra se utiliza para anlisis cuantitativos. La base del mtodo es determinar el volumen del reactivo titulante (3) que reacciona estequiomtricamente con una sustancia dada que contiene al analito (4). El tipo de reaccin entre el titulante y el analito determina el nombre de la valoracin, bien sea cido-base, de complejos, de precipitacin, o en este caso de xido reduccin. Un volumen conocido de uno de los reactivos (analito, 4) se deposita en un matraz Erlenmeyer y el otro en una bureta (valorante, 3) y se va adicionando el valorante al analito en el Erlenmeyer. Cuando se llega al punto en que se termina la reaccin, el valorante y el valorado (analito) han reaccionado estequiomtricamente, momento en que se alcanza el punto de equivalencia. Conociendo el volumen del valorante (3) y la estequiometria de la reaccin, se calcula la cantidad de sustancia que se ha valorado (analito, 4). Para poder determinar el punto de equivalencia se utiliza alguna propiedad del sistema que cambie drsticamente en las proximidades del punto de equivalencia (Harris, 2001) y como normalmente no suceden cambios visuales en la reaccin, se utiliza un indicador, sustancia que se aade en una concentracin muy pequea y experimenta cambios de color alrededor del punto de equivalencia. El punto de la valoracin en que se produce el cambio de color se llama punto final. Normalmente el punto de equivalencia y el final no son iguales y esta diferencia es precisamente el llamado error sistemtico de la valoracin. Tambin se puede utilizar un mtodo instrumental para determinar el punto de equivalencia. Las volumetras deben cumplir los siguientes requisitos: 1. La estequiometria de la reaccin entre el analito y el valorante debe ser fija y perfectamente conocida para, de esta manera realizar correctamente los clculos. 2. La reaccin debe ser rpida. 3. La reaccin debe ser cuantitativa y comprobarse que se completa en un 99.9 %. 4. Para determinar el punto de equivalencia se debe disponer de un mtodo adecuado pues el error sistemtico de la valoracin debe ser pequeo.

Valoracin del Permanganato de Potasio (KMnO4) con una Disolucin Estndar de Oxalato de Sodio (Na2C204) El KMn04 no es patrn primario (las caractersticas de los patrones primarios ya fueron mencionadas en la prctica No. 3) pues aunque puede obtenerse puro, sus disoluciones se

descomponen parcialmente dando Mn02 y debe ser valorado utilizando un patrn primario como el Na2C204. La reaccin que tiene lugar (sin balancear) es (Vega et al, 2003): 2MnO-4 + 5C2O-4 + 16H+ 2Mn2+ + 10CO2 + 4H2O

Como se mencion, el H2S04 proporciona el medio cido necesario para la reaccin. En esta valoracin no es necesario utilizar un indicador para detectar el punto final ya que el mismo KMn04 acta como tal pues en la forma oxidada es de color violeta rojizo e incoloro en la reducida. Las disoluciones de KMn04 se deben guardar en frascos de color mbar o topacio para evitar su descomposicin por la luz.

OBJETIVO El alumno aplicar sus conocimientos de xido reduccin en la determinacin de hierro (II) en una vitamina, complemento vitamnico comercial o en una muestra problema. MATERIALES Y REACTIVOS 1 vidrio de reloj 1 esptula 1 piseta con agua destilada 1 vaso de precipitados de 100 mL 1 vaso de precipitados de 250 mL 2 matraces volumtricos de 100 mL 1 agitador de vidrio 3 matraces Erlenmeyer de 250 mL 1 bureta de 25 50 mL 1 soporte universal 1 pinzas para bureta 1 probeta de 50 mL 1 pipeta volumtrica de 10 mL 1 pipeta graduada de 10 mL KMnO4

H2SO4 FeSO4 Na2C2O4 PROCEDIMIENTO 1. Realice los clculos y prepare 100 mL de disolucin 0.1 N de KMNO4 en cido sulfrico al 5% (p/v). 2. Realice los clculos y prepare 100 mL de disolucin 0.1 N de Na2C2O4 y utilcelo como estndar primario para conocer la concentracin de la disolucin de permanganato. 3. Efecte la titulacin de estandarizacin del permanganato de potasio. 4. Solicite al profesor una muestra problema de hierro (II) y titlela para conocer su concentracin. Preparacin de la Muestra Problema Se puede utilizar una solucin de sulfato ferroso o un complemento vitamnico comercial. Sulfato ferroso Utilice una solucin de sulfato ferroso 0.1 N. Para prepararla pese en balanza analtica 1.5184 g de FeSO4, disulvalos en 50 mL de cido sulfrico al 5% (p/v) y afrelos a 100 mL. Producto comercial Adquiera cualquier jarabe o pastilla que contenga el hierro en su estado de oxidacin (II), tome en cuenta que puede contener otros compuestos que reaccionen con la solucin de permanganato de potasio. Como ejemplo, se puede trabajar con el complemento vitamnico Vitavern flico, que contiene 497 mg de sulfato ferroso heptahidratado por cada 100 mL del jarabe (vase la formulacin ms adelante). Titule alcuotas de 10 mL de este jarabe con solucin 0.01 N de permanganato de potasio.

REPORTE DE LA PRCTICA 1. Con el volumen de KMnO4 gastado en la titulacin con el estndar de oxalato de sodio, calcule la verdadera concentracin de la disolucin de permanganato de potasio. 2. Con el volumen de KMnO4 gastado en la titulacin de la muestra problema de Fe (II), calcule la concentracin de la disolucin de permanganato en N, M y % p/p y p/v.

CUESTIONARIO 1. Qu es un patrn primario? Cules son sus caractersticas? 2. Por qu no se puede utilizar KMn04 como patrn primario? 3 Por qu se adiciona cido sulfrico al valorar con KMn04? Se debe utilizar preferentemente, por qu? 4.- Escriba las semirreacciones y balancee por el mtodo del in electrn la reaccin de la valoracin en medio cido del Fe2+ con MnO4-. 5.- Calcule el % p/v de hierro (II) en una muestra problema de 50 mL, la cual fue aforada a 100 mL en un matraz volumtrico, de esta disolucin se tomaron 25 mL y se titularon con una disolucin de permanganato de potasio 0.098 N, gastndose 34.5 mL.

BIBLIOGRAFA
Harris Daniel, 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Revert. Mxico. Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico. teora y Autnoma

Vega vila Elisa, Verde Calvo Jos Ramn, Prez Csar Mara del Carmen. 2003. La la prctica en el laboratorio de Qumica Analtica I. 1 edicin. Metropolitana-Iztapalapa, Mxico. Universidad

VITAVERN FLICO

Jarabe Polvo
CALCIO COBRE FLICO, CIDO HIERRO VITAMINA B, COMPLEJO DE VITAMINA B3 VITAMINA C

FORMA FARMACUTICA Y FORMULACIN

Cada 100 mL de JARABE contienen: Sulfato ferroso heptahidratado.......497.82 mg equivalente a............99.99 mg de hierro elemental Sulfato de cobre...............52.37 mg equivalente a............13.33 mg de cobre elemental Excipiente, c.b.p. 100 mL. Cada sobre con 2 g de POLVO (para disolver en el frasco contiene: cido flico................2.933 mg Niacinamida.............300 mg Pantotenato de calcio...............50 mg equivalente a.............4.205 mg de calcio Clorhidrato de tiamina (vitamina B1).............50 mg equivalente a.............39.480 mg de tiamina base Riboflavina (vitamina B2)...........20 mg Clorhidrato de piridoxina (vitamina B6)........25 mg equivalente a............20.560 mg de piridoxina Cianocobalamina (vitamina B12)........0.070 mg cido ascrbico (vitamina C)..........660 mg Excipiente, c.b.p. 2 g.

HORMONA, S.A. DE C.V., LABORATORIOS

PRCTICA 7 CROMATOGRAFA EN COLUMNA

INTRODUCCIN Las tcnicas cromatogrficas se emplean para separar los componentes individuales de una mezcla, adems pueden ser utilizadas para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatogrfico con el de sustancias conocidas (empleadas como patrn). Son tcnicas analticas y cuantitativas que han alcanzado un alto grado de desarrollo en los laboratorios de qumica y bioqumica. En sus diversas aplicaciones, la cromatografa sirve para separar compuestos qumicos diferentes a partir de mezclas multicomponentes, las cuales pueden contener varios centenares de sustancias diferentes; por ejemplo, es capaz de identificar y separar los 350 compuestos que dan su sabor y bouquet caractersticos al caf. La tcnica se basa en la interaccin de una determinada muestra (soluto) con dos fases, una de ellas, habitualmente llamada fase estacionaria, puede ser un lquido o un slido. La fase estacionaria puede retrasar la salida de las muestras, por las interacciones que pueden presentarse entre ambas. Por otra parte una fuerza contraria (de arrastre) es la determinada por la fase mvil. Cuando la fase mvil y la fase estacionaria son lquidas (cromatografa de reparto), la muestra puede encontrarse en equilibrio entre ambas fases, siendo la relacin del soluto en ambas fases constante, y se le denomina coeficiente de reparto. Si en una mezcla, cada componente tiene un coeficiente de reparto diferente, la separacin ser buena. Naturalmente, dicho coeficiente depende de la naturaleza de las fases, as como de las condiciones de la cromatografa. Una de las tcnicas cromatogrficas ms sencillas es la de adsorcin en columna. Una columna de cromatografa es un tubo de vidrio relleno con un slido poroso de propiedades adsorbentes constituido por pequeas partculas, siendo el gel de slice y la almina los slidos ms usados. Este relleno es lo que se conoce en cromatografa como la fase estacionaria. A travs de la columna se har pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes en diferentes proporciones denominada eluyente o fase mvil. La fase mvil emigra por la fase estacionaria debido, sobre todo, a la gravedad y en su movimiento, arrastra ms o menos a los componentes de una mezcla en funcin de sus cargas, adsorbiendo o no a las muestras para separarlas. El

disolvente tambin puede pasar a travs de la columna por aplicacin de presin. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequea cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por l. A continuacin se pasa un flujo de eluyente a travs de la columna y as los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, hacindoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografa; algunos compuestos se ven ms fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarn ms despacio, por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarn a mayor velocidad. En general se dice que la separacin en la cromatografa se basa en la afinidad diferencial de los distintos compuestos por la fase mvil y la fase estacionaria.

OBJETIVO Mediante la aplicacin de cromatografa en columna, el alumno conocer y analizar la

separacin de colorantes. Asimismo, el alumno podr saber como se controla y determina el proceso de separacin de mezclas de substancias.

MATERIALES Y REACTIVOS Espectrofotmetro Genesys o Biomate con dos celdas de medida para la regin del visible 1 columna cromatogrfica de 15 cm, con tubo de ltex y pinza de regulacin de goteo (el tubo ltex y las pinzas pueden obtenerse de los equipos de venoclisis para sueros). 10 tubos para centrfuga de 13 x 100 mm 3 vasos de precipitados de 100 mL 1 gradilla para tubos de ensayo 5 pipetas graduadas de 10 mL

Lana de vidrio o algodn Papel filtro de poro grueso Almina o slica para cromatografa en columna Mezcla de n- butanol, etanol y amoniaco 2N (60: 20: 20 por volumen) Mezcla de n- butanol, cido actico glacial y agua (60: 15: 25 por volumen), segunda opcin Disolucin de una mezcla de tinta negra, azul y marrn en etanol, conteniendo aproximadamente 0.05 g/l de cada tinta. No deber usarse la tinta en forma de gel. Pr ecau ci on es. La inhalacin de altas concentraciones de polvo de almina puede originar irritacin de los ojos y tracto respiratorio superior. Las mezclas indicadas de los disolventes irritan los ojos, la piel y el tracto respiratorio por lo que deben manejarse en la campana.

PROCEDIMIENTO Preparacin de la columna

Coloque en la base de la columna lana de vidrio o algodn, posteriormente corte con ayuda de unas tijeras un crculo de papel filtro del dimetro de la columna e introdzcalo despus de la fibra de vidrio o algodn (no toque el papel con sus manos). Adicione almina o slica poco a poco, con ligeros golpes a la columna, si fuese necesario coloque la columna en un vrtex para que con el movimiento la almina o la slica se empaquen adecuadamente, ste es un paso importante para una buena separacin. Cuando obtenga un depsito homogneo de fase estacionaria de una altura entre 10 y 12 cm, adicione 15 mL de etanol, manteniendo abierta la columna por su extremo inferior y evitando que el nivel de etanol descienda por debajo del nivel superior de la almina o la silica.

Separacin de los componentes de la muestra Abra la llave hasta que el nivel del etanol est aproximadamente a un mm de la superficie de la fase estacionaria. Adicione suavemente 0.2 mL de la muestra problema, evitando remover la fase estacionaria, abra la llave y deje gotear hasta que el nivel de la muestra llegue al adsorbente. A continuacin proceda a elur (separar) adicionando como fase mvil la mezcla de n- butanol,

etanol, amoniaco 2N (60: 20: 20 por volumen) a un flujo de 2 mL por minuto. Para ello, se deja que gotee la fase mvil por la parte inferior de la columna y se va recogiendo en tubos de centrfuga en fracciones de 1 mL, los que previamente se han marcado para saber hasta donde llega un mL (tome un tubo y adicinele 1 mL de agua y con un marcador seale el borde del menisco). Una vez eluda totalmente la tinta, mida la absorbancia de cada fraccin colectada en un intervalo de 450 a 665 nm, empleando la mezcla n-butanol, etanol y amoniaco 2N como blanco (opcional).

REPORTE DE LA PRCTICA 1. Fotografe o dibuje la columna cromatogrfica en uno de los momentos de la elucin de la tinta (emplear lpices de colores para indicar la posiciones de las dos bandas cromatogrficas). 2. Con los datos de absorbancia de cada fraccin colectada, complete el siguiente cuadro.

Cuadro 1. Absorbancia de las fracciones colectadas durante la separacin de una mezcla de tintas por cromatografa en columna.

Absorbancia
( = 450 a 665 nm)

Volumen de los eluatos o fracciones (mL)

3.

Represente grficamente, para la mezcla de tinta, la absorbancia (A) medida en funcin del nmero de mL(s) de eluyente.

4.

Incluya en el reporte sus observaciones.

CUESTIONARIO 1. Si una mezcla de antraceno y naftaleno se separa por cromatografa en columna sobre almina, cul de los dos hidrocarburos eluir primero y cul al ltimo? Cul sera el ms polar? 2. Se piensa que un colorante desconocido puede ser azul de metileno, cmo se podra comprobar esta suposicin usando un procedimiento basado en una tcnica cromatogrfica? 3. Qu debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para separar una mezcla por cromatografa en columna? 4.- La recuperacin cuantitativa del producto principal, sera ms completa si se recogieran fracciones mayores o menores de 10 mL? 5. Cul es la diferencia entre cromatografa en capa fina y la cromatografa en columna de adsorcin?

BIBLIOGRAFA Abbot David y Andrew Roberts S. 1973. Introduccin a la Cromatografa. 3a edicin. Coleccin Exedra. Editorial Alhambra, Madrid, Espaa.

Browning, D. R. 1971. Cromatografa-Toray-Masson. 1a edicin, Barcelona, Espaa.

Waksmundzka-Hajnos Monika, Joseph Sherma, Teresa Kowalska. 2008. Thin Layer Chromatography in Phytochemistry. Chromatographic Sciences Series. Jack Cazes (ed). Vol. 99. CRC Press, Boca Raton, Fla, USA.

Jork H, Wimmer H. 1986. TLC Report. A Collection of Quantitative Papers. GIT Verlag. Germany.

Skoog Douglas, West Donald, Holler James, Crouch Ray. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico.

Rubinson A. K., Rubinson F. J. 2001. Anlisis Instrumental. 1 edicin. Prentice- Hall, Espaa.

Harris Daniel C. 2003. Anlisis Qumico Cuantitativo. 3a edicin. Editorial Revert. Espaa.

PRCTICA 8 CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

INTRODUCCIN La Cromatografa en Capa Fina (CCF) es uno de los mtodos ms verstiles de anlisis cromatogrfico para la separacin e identificacin de sustancias qumicas, la cual se basa en el principio de reparto entre dos fases. En general, una cromatografa se realiza permitiendo que las molculas de la mezcla que se desea separar (muestra) interaccionen con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria; un segundo medio (fase mvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a travs de sta para separar o elur a las molculas de la muestra. Debido a que estas molculas presentan diferente coeficiente de reparto, la fase mvil separar los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que sean ms afines a la fase mvil sern eludos ms rpido que aquellos que sean preferentemente solubles en la fase estacionaria. En la cromatografa de capa fina un adsorbente se deposita en forma de una capa delgada sobre una placa de vidrio, aluminio u otros materiales por la que ascienden, arrastradas por un disolvente (eluyente), una o ms sustancias que se pretenden separar. El disolvente asciende entonces por capilaridad a lo largo de la placa arrastrando los compuestos a diferentes velocidades, segn el grado de adsorcin de stos a la fase estacionaria de la placa y su afinidad por el eluyente, producindose as su separacin en forma de manchas (Abbot y Andrews, 1970). Generalmente, la fase estacionaria es un componente polar y la fase mvil es menos polar, de manera que los componentes que se desplazan con mayor velocidad son los menos polares (Bauer et al., 1991). Dentro de los adsorbentes o fases estacionarias ms comunes para CCF se encuentran: el gel de slice, el cual se usa en el 80 % de las separaciones; el xido de aluminio o almina, disponible comercialmente en las formas cida, neutra o bsica; la celulosa, la hay nativa y microcristalina; y las poliamidas. Es importante tomar en cuenta algunas consideraciones para la seleccin de la fase estacionaria como su polaridad, el tamao de partcula, la homogeneidad y su pureza. Mientras que los eluyentes ms comunes para CCF son el acetato de etilo, cloroformo, hexano, acetona,

etanol, metanol e isopropanol, entre otros (vila, 2001). La seleccin adecuada de ambas fases permitir la separacin de aquellos compuestos presentes en la muestra. Los compuestos orgnicos pueden presentar la siguiente polaridad en orden creciente: hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehdo < ster < alcohol < cetonas < aminas < cidos < amidas. Cuando los compuestos que se separan en una CCF son manchas coloridas es fcil observar cunto se desplazaron durante su separacin, pero cuando son incoloras se debe hacer uso de reveladores como: luz UV cuando las substancias a separar o algn compuesto que se ha mezclado con la fase estacionaria absorben luz en el UV, generalmente se usan longitudes de onda entre 254 y 366 nm; vapores de yodo, el cual se combina reversiblemente con los compuestos orgnicos que entonces aparecen de color caf; reveladores ms especficos como la ninhidrina para los aminocidos, cuyas manchas pasan de incoloras a prpura; y como ltimo recurso una disolucin de agua-cido sulfrico 1:1, la cual se roca dentro de un compartimiento protegido, bajo la campana de extraccin de gases y despus se calienta intensamente en mechero o parrilla hasta carbonizar los compuestos que aparecen entonces como manchas de color negro. La manera como se identifican los componentes separados de la mezcla por cromatografa en capa fina es por su valor de Rf (referencia frontal) que se calcula con la siguiente expresin (Clement, 2002): Rf = Distancia (cm) que recorre cada compuesto separado desde el punto de aplicacin (a) Distancia (cm) que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente (b)

Frente del eluyente

Separado

(b) (a)
Punto aplicacin

Figura 1. Cromatografa en capa fina. Se muestran el sitio de aplicacin de la muestra y las distancias recorridas por un compuesto separado (a) y el eluyente (b).

El Rf es adimensional, siempre inferior a 1 y depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra, por ejemplo depende del tipo de adsorbente, del eluyente, de las caractersticas de la placa, temperatura, etc. (Abbot y Andrews, 1970; Skoog y col., 2008). La cromatografa en capa fina es un mtodo de separacin sencillo, rpido y efectivo para el anlisis tanto cualitativo como cuantitativo, que va de la mano con la cromatografa en columna y con el que se obtienen resultados reproducibles, caractersticas que lo convierten en un mtodo excelente para fines analticos.

OBJETIVO El alumno ser capaz de separar e identificar los compuestos presentes en una mezcla de analgsicos comerciales por cromatografa en capa fina. MATERIALES Y REACTIVOS Cmara de luz UV Cromatofolios 6 portaobjetos 3 capilares 1 varilla de vidrio 4 vasos de precipitado de 100 mL 1 caja Koplin 1 piseta con agua destilada 1 piseta con acetona 1 piseta con etanol 1 propipeta 1 frasco de boca ancha mbar 2 pipetas graduadas de 10 mL 2 pipetas graduadas de 5 mL Papel aluminio Gel de slice 60 HF254 para CCF Cafiaspirina

Aspirina Sacidol Cafena PARA MANEJAR EN CAMPANA DE EXTRACCIN: Acetato de etilo Hexano Cloroformo Yodo

PROCEDIMIENTO Preferentemente se trabajar con los cromatofolios que ya vienen preparados, si no se cuenta con ellos ser preciso preparar cromatoplacas. Para esto, en un recipiente mbar se prepara una suspensin de gel de slice al 35% en acetato de etilo, esta mezcla se agita vigorosamente; posteriormente, se introducen dos portaobjetos juntos (los cuales deben estar perfectamente limpios y secos), sujetndolos por un extremo, para que la gel de slice cubra toda la superficie libre, entonces se sacan, se dejan secar al aire, se separan con cuidado y se retira el exceso de gel de slice de los lados de los portaobjetos. En este momento puede activarse el agente adsorbente calentando las placas durante 30 min a 110 C para expulsar as el agua. Es conveniente dejar secar las placas inicialmente al aire para evitar los agrietamientos que se produciran por efecto del cambio de temperatura. Una vez preparadas las cromatoplacas se procede a la aplicacin de la(s) muestra(s). En este caso se utilizan capilares que previamente fueron estirados en la flama de un mechero o de un encendedor con el fin de conseguir dimetros menores que permitan la aplicacin de muestras pequeas, de lo contario si se aplican muestras grandes se producirn colas que evitarn una buena separacin. Con el capilar se toma un pequeo volumen de la muestra problema (1-5 L) y se aplica una gota sobre la cromatoplaca a 1 cm aproximadamente del borde inferior de la placa. Si trabaja con cromatofolios trace esta marca con un lpiz fino y aplique de la misma manera. Ser necesario tocar varias veces el punto de aplicacin, esperando el tiempo suficiente para que

seque despus de cada aplicacin. Se debe evitar rayar la capa adsorbente con el capilar porque puede haber prdida de resolucin o desplazamiento deficiente del disolvente. Experimento 1 Se desea conocer el tamao de las manchas que se separan cuando se aplican en la placa diferentes cantidades de un patrn de cido acetilsaliclico o cafena disuelto en hexano. Para ello se harn tres aplicaciones de la disolucin del patrn en una sola placa, aplicando primero una gota, en la segunda aplicacin dos gotas y por ltimo tres gotas. Introduzca la placa en una cmara de elucin (caja Koplin o vaso de precipitados) a la que previamente se le adicionaron 5 mL de acetato de etilo y tpela. Cuando el frente del eluyente est casi en el borde de la parte superior de la placa destape la cmara, retire con cuidado la placa y marque el frente del eluyente con un lpiz de punta fina. Deje la placa secar al aire libre. Para visualizar las manchas, primero revele con la lmpara de luz UV marcando el contorno de las manchas con el mismo lpiz y luego introduzca la placa en una cmara con cristales de yodo por 2 min aproximadamente en campana de extraccin.

Experimento 2 Se desea comparar el corrimiento de dos compuestos con diferente polaridad en diferentes eluyentes. Para esto se preparan tres cromatoplacas y se aplican en cada una de ellas las soluciones patrn de cido acetilsaliclico y cafena. Se eluye la primera con hexano, la segunda con acetato de etilo y la tercera con metanol. Para cada caso, se sigue el procedimiento de revelado indicado en el experimento anterior.

Experimento 3 Se desea identificar el principio activo de analgsicos comerciales como cafiaspirina y sacidol, comparndolos con las muestras patrn de cafena y cido acetilsaliclico. Las disoluciones de los analgsicos estarn marcadas como problema 1 y problema 2 sin que usted sepa cul corresponde

a qu analgsico. Prepare dos cromatoplacas (o cromatofolios) iguales, aplicando las muestras como se indica en la Fig. 2.

Muestra

Patrn ees

Problema 1

Problema 2

Figura 2. Aplicacin de las muestras para identificar los principios activos de dos analgsicos comerciales. Una vez aplicadas las muestras, eluya una cromatoplaca en metanol (en una caja Koplin o en un vaso de precipitados de 100 mL adicione aproximadamente 5 mL del eluyente, tape con papel aluminio hasta saturacin) y la otra en acetato de etilo y tape. Es importante que el nivel del disolvente quede ms abajo que las aplicaciones. Muy pronto ver que el frente del disolvente comienza a ascender por las placas, arrastrando las manchas consigo. Cuando el frente del disolvente llegue a 1 cm aproximadamente del lmite superior de las placas, squelas con mucho cuidado, marque el frente al que lleg el disolvente en un costado de cada placa y djelas al aire libre para que sequen. Una vez secas, las cromatoplacas se revelan con luz UV, marcando el contorno de cada mancha con un lpiz de punta fina, posteriormente introduzca las cromatoplacas en una cmara conteniendo cristales de yodo. Anote los resultados obtenidos en cada una de ellas.

REPORTE DE LA PRCTICA Experimento 1

1. Cul es la relacin entre el tamao de las manchas con la cantidad aplicada del patrn en cada caso? 2. Cul es el Rf en cada caso?

Experimento 2 1. Cul es el eluyente adecuado para cada uno de los patrones aplicados y por qu? 2. Cul de los dos compuestos es el ms polar y por qu? 3. Cul es el Rf en cada caso? Experimento 3 1. Cul eluyente permiti una mejor separacin? Con base en su respuesta conteste lo siguiente: 2. Cul es el Rf de la cafena y cul el del cido acetilsaliclico? 3. A qu analgsico corresponde el problema 1 y por qu? 4. A qu analgsico corresponde el problema 2 y por qu?

CUESTIONARIO 1. Qu factores influyen en una separacin por cromatografa en capa fina? 2. Cul es la finalidad de activar los agentes adsorbentes? 3. Menciona las caractersticas a tomar en cuenta del adsorbente, soluto y disolvente para una separacin por CCF. 4. En el experimento 3, cul de los dos eluyentes permiti mayor separacin de la mezcla?, a qu se debe esto?

BIBLIOGRAFA Abbott David y Andrews Robert. 1970. Introduccin a la Cromatografa. 3a edicin. Alhambra, Madrid, Espaa. Bauer Karin, Gros Leo y Sauer Werner. 1991. Thin Layer Chromatography: An Introduction. Hthig Verlag, Germany. vila Zrraga Jos Gustavo. 2001. Qumica Orgnica. Experimentos con un enfoque ecolgico. Direccin General de Publicaciones y Fomento Editorial. UNAM, Mxico. Clement Bernard. 2002. Organic Chemistry Laboratory Manual. Texas A&M University. USA. pp 143-146. Skoog Douglas, West Donald, Holler James, Crouch Ray. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico.

PRCTICA 9 CROMATOGRAFA EN PAPEL. SEPARACIN DE MEZCLAS DE INDICADORES DE pH

INTRODUCCIN La cromatografa agrupa a un conjunto de diversos mtodos de separacin, que permiten adems identificar y cuantificar compuestos afines en mezclas complejas. La caracterstica que comparten estos mtodos es que la muestra a separar se disuelve en una fase mvil (que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico) que pasa a travs de una fase estacionaria inmiscible, fija en una columna o una superficie slida. Ambas fases se eligen de manera tal que los componentes de la muestra se distribuyan de manera diferente entre las dos fases, por lo que los ms afines a la fase estacionaria se movern ms lentamente (Skoog et al, 2008). En la cromatografa en papel, la fase mvil se mueve sobre las tiras de papel filtro. Esta tcnica se puede realizar de manera ascendente o descendente, unidimensional o bidimensional. En caso de que los componentes de la mezcla no sean coloridos, se les puede hacer visibles mediante el empleo de luz ultravioleta o mediante el uso de reactivos cromognicos (Smith y Feinberg, 1979). El ltimo punto alcanzado por la fase mvil en su avance se denomina frente del disolvente y se puede usar como referencia para expresar la distancia relativa recorrida por cada sustancia en un cromatograma. El smbolo que se emplea para designar dicha distancia relativa es Rf (referencio frontal, factor de retardo) y se obtiene al dividir la distancia recorrida por el compuesto desde el origen entre la distancia que migr el disolvente.

OBJETIVOS El alumno separar los componentes de una mezcla, observar el corrimiento cromatogrfico de un compuesto puro y en mezcla, y reafirmar el concepto de migracin relativa de una sustancia.

MATERIALES Y REACTIVOS Papel para cromatografa Whatman No.1 1 frasco de boca ancha de 15 cm de alto y 7 cm de dimetro 1 cuter 1 regla 1 lpiz 1 probeta 1 vaso de precipitados Rojo congo Rojo fenol Azul de bromofenol n-butanol cido actico glacial Amoniaco Agua

PROCEDIMIENTO 1. Prepare las muestras de indicadores en una concentracin de 10.0 % p/v. Emplee como disolvente NaOH 0.010 M. 2. Prepare 10.0 mL de la fase mvil (6.0 mL de n-butanol:1.5 mL de cido actico glacial: 2.5 mL de agua). Coloque en el fondo del frasco 4.0 mL de la fase mvil. 3. Aplique calor en el centro de un capilar hasta que est al rojo vivo y estrelo. Corte el capilar as como las puntas para obtener dos pipetas pequeas con las que aplicar las muestras. 4. Corte una tira de papel filtro, de 5.0 cm de ancho y 10.0 cm de alto. Marque, con un lpiz, una lnea a 0.5 cm del inicio del papel y distribuya los cuatro puntos donde se aplicarn las muestras de forma equidistante (a 0.5 cm de separacin aproximadamente), de manera tal que se tendrn 4 orgenes. 5. Aplique en cada uno de los tres primeros orgenes, una gota pequea de diferente indicador. En el cuarto origen, coloque la mezcla de los tres indicadores.

6. Coloque la tira de papel, con los indicadores, en el frasco que contiene la fase mvil, cercirese de que la fase mvil no est por encima del sitio donde se encuentran las muestras.
5 cm

Tapa

10 cm

Cmara Cromatogrfica Fase Mvil

0.5 cm

0.5cm 0.5cm

Figura 1. Cromatografa en papel. Se muestra el procedimiento para realizar este tipo de cromatografa.

7. Cierre el frasco y deje que corra la muestra hasta que la fase mvil este a un cm de distancia de la parte final del papel. 8. Retire la tira de papel del frasco y seale con lpiz el frente del disolvente. 9. Mida la distancia entre el origen y el frente del disolvente. 10. Mida la distancia entre el origen y el centro de cada mancha coloreada.

REPORTE DE LA PRCTICA Con base a la informacin obtenida del cromatograma: 1. Calcule los valores de Rf para cada uno de los componentes. Exprese los resultados con dos cifras decimales y como tanto por ciento.

2. Compare los Rf de los tres indicadores obtenidos cuando corren individualmente con los determinados cuando estn en una mezcla. 3. Cul de los compuestos presentes fue ms afn con la fase mvil? 4. Cmo esperara los valores de Rf de los componentes si la fase mvil tuviera una mayor proporcin de acido actico?

CUESTIONARIO 1. Se desea separar una muestra que contiene varios aminocidos. Qu agente cromognico empleara para conocer la posicin de los componentes? 2. Qu sistema de disolvente empleara para separar por cromatografa en papel una muestra de esteroides? Cul sera la fase estacionaria adecuada? Cmo podra conocer el tipo de esteroides que tiene la muestra problema?

BIBLIOGRAFA Smith I., Feinberg, J.G. 1979. Cromatografa sobre papel y capa fina. Electroforesis. Exedra 128. Alhambra. Espaa. Skoog Douglas, West Donald, Holler James, Crouch Ray. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico.

PRCTICA 10 CUANTIFICACIN DE HIERRO POR ESPECTROFOTOMETRA EN EL VISIBLE

INTRODUCCIN Las tcnicas espectroscpicas o espectrofotomtricas se basan en la utilizacin de energa luminosa de cierta longitud de onda para identificar y cuantificar analitos de una muestra. Es comn clasificar estas tcnicas atendiendo a la regin del espectro electromagntico que utilizan, y as por ejemplo se tiene la espectroscopa de rayos X (usa longitudes de onda que van de 100 pm a 10 nm), la espectroscopa en el ultravioleta (de 180 a 380 nm), espectroscopa en el visible (de 380 a 780 nm) y espectroscopa de infrarrojo (de 0.78 a 50 m) (Harris, 2001). Las radiaciones ultravioleta y visible (UV-Visible) se usan ampliamente con fines analticos y ambas pueden ser medidas con los espectrofotmetros comunes. Cuando un analito en disolucin capaz de absorber luz se coloca en la celda de un espectrofotmetro y se le hace incidir luz de cierta longitud de onda (monocromtica o de un solo color), parte de la luz incidente es absorbida por el analito y otra parte atraviesa y llega al fototubo del equipo que la detecta y mide (Verde y col., 1999). Estas propiedades se conocen como absorbancia y transmitancia y se definen como se indica a continuacin.

REFLECCIN REFRACCIN L UZ INCIDENTE INCIDENTE L UZ EMERGENTE EMERGENTE

Po

P
L UZ DISPERSA

b
CELDA O DEPSITO TRANSPARENTE

Figura 1. Fenmenos de absorbancia y transmitancia. Parte de la luz monocromtica que incide en la celda es absorbida por el analito en disolucin y otra parte es transmitida. Si Po es la energa radiante incidente y P la energa radiante transmitida, la transmitancia, definida como la fraccin de la energa radiante que pasa a travs de la muestra (disolucin conteniendo al analito), se expresa como: T = P/Po, o bien T % = (P/Po)100 Mientras que la absorbancia, definida como la fraccin de la energa radiante que es absorbida por la muestra y que est relacionada logartmicamente con la transmitancia, se expresa como: A = -log T = log10 (Po/P) La ley de Beer, tambin conocida como ley de Beer-Lambert, indica cuantitativamente como la absorbancia depende de la concentracin de las molculas absorbentes y de la longitud del trayecto, paso ptico o recorrido de la luz en la celda. Cuanto mayor sea la concentracin de las molculas absorbentes mayor ser la absorbancia pues habr ms molculas por unidad de volumen absorbiendo, e igualmente entre mayor sea la longitud del paso ptico, mayor ser la absorbancia pues existirn ms molculas en el trayecto recorrido por la luz (Skoog y col., 2008). La ley de Beer dice por lo tanto, que la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de la especie absorbente (c) y a la longitud del paso ptico (b) y se expresa como: A = bc En donde: = constante de proporcionalidad llamada absortividad molar en M-1cm-1 b = longitud de paso ptico en cm c = concentracin de la especie absorbente en M Ntese que A es adimensional. La ley de Beer slo se cumple con radiacin monocromtica y en disoluciones diludas (10-2-10-6 M) debido a que en disoluciones concentradas las molculas de soluto interaccionan

entre s y cambian sus propiedades, entre ellas, la absortividad (Harris, 2001). Bajo estas condiciones, un gran nmero de compuestos siguen la ley de Beer, pero algunos no muestran una relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Para saber el intervalo de concentraciones en el que un compuesto sigue una relacin lineal con la absorbancia (ley de Beer), se elabora una curva de calibracin midiendo las absorbancias de disoluciones del analito de concentraciones conocidas. Las mediciones espectrofotomtricas son ms confiables con valores de absorbancia en el intervalo de 0.187 a 0.824, o bien, con valores de transmitancia entre 15 y 65%, debido a que si la absorbancia es muy grande y pasa muy poca luz a travs de la muestra es difcil medir esta energa radiante, y si por el contrario pasa demasiada luz (absorbancia muy pequea), es difcil apreciar la diferencia entre la muestra y el blanco o referencia (disolucin que lleva todos los reactivos menos el analito) (Harris, 2001). En el anlisis espectrofotomtrico, normalmente se escoge la longitud de onda de mxima absorbancia del analito (Max) debido, entre otras razones, a que la sensibilidad del anlisis es mxima a esta , es decir, se consigue la mxima respuesta para una concentracin dada de analito. La Max se obtiene mediante un espectro de absorcin que es una grfica que muestra como vara la absorbancia (A) o la absortividad molar () al variar la longitud de onda y se obtiene efectuando mediciones de absorbancia del analito en un intervalo amplio de longitudes de onda, por ejemplo de 380 a 780 nm en la regin del visible.

Figura 2. Espectros de absorcin (barrido) en la regin de 180 a 400 nm de un analito en disolucin a diferentes concentraciones, en donde 1 corresponde a la disolucin de menor y 7 a la de mayor concentracin. Note como la absorbancia es proporcional a la concentracin.

Las celdas o depsitos transparentes que contienen la muestra (analito en disolucin) o el blanco pueden ser de cuarzo, vidrio ptico o plstico y generalmente tienen 1 cm de longitud de paso ptico. Las de cuarzo se usan para medidas espectrofotomtricas en el UV-Visible, las de vidrio ptico, como absorben radiacin ultravioleta, slo son apropiadas para mediciones en la regin del visible, y las de plstico slo se utilizan para disoluciones acuosas y las hay para mediciones en el visible, y recientemente, en el ultravioleta.

OBJETIVO El alumno determinar el espectro de absorcin y elaborar la curva patrn de un analito y usar esta informacin para cuantificar una muestra problema del mismo analito.

MATERIALES Y REACTIVOS Balanza analtica Espectrofotmetro Genesys o Biomate 2 celdas de acrlico o de vidrio ptico Papel seda 1 matraz volumtrico de 1 L 2 matraces volumtricos de 500 mL 1 pipeta graduada de 1 mL 1 pipeta graduada de 5 mL

2 pipetas graduadas de 10 mL 12 tubos de ensayo con tapones de rosca 1 gradilla para tubos de ensayo 4 vasos de precipitados de 100 mL 1 esptula 1 propipeta 1 agitados de vidrio Disolucin de cido clorhdrico (HCl) 0.05 M Disolucin de cloruro frrico (FeCl3) 1 X 10-4 M Tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M Disolucin problema de cloruro frrico

PROCEDIMIENTO Preparacin de Disoluciones Prepare las disoluciones de cido clorhdrico (HCl) 0.05 M (en campana de extraccin), cloruro frrico (FeCl3) 1 X 10-4 M y tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M. Antes de proceder a su preparacin verifique con su profesor los clculos y forma de preparacin. Determinacin del Espectro de Absorcin del Complejo Tiocianato de Hierro (III) Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de la disolucin de cloruro frrico, 0.3 mL de la disolucin de tiocianato de amonio, 4.7 mL de agua destilada, tape y agite por inversin. Transfiera a una celda y lea la absorbancia en el modo barrido de 400 a 500 nm a intervalos de 10 nm. Ajuste la absorbancia con un blanco preparado con 0.3 mL de la disolucin de tiocianato de amonio y 9.7 mL de agua destilada.

Elaboracin de la Curva de Calibracin del Complejo Tiocianato de Hierro (III) Prepare la siguiente serie de tubos: Tubo Disolucin de FeCl3 1 X 10 M (mL)
-4

Disolucin de NH4SCN 0.5 M (mL)

Agua destilada (mL)

1 2 3 4 5 6 7

1 2 3 5 7 9 0

0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3

8.7 7.7 6.7 4.7 2.7 0.7 9.7

Mezcle por inversin y lea inmediatamente la absorbancia a la longitud de onda de mxima absorbancia (Max) encontrada en su espectro de absorcin. Ajuste la absorbancia con el blanco (tubo 7). Determinacin de la Concentracin de Fe3+ en la Disolucin Problema Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de la disolucin problema de cloruro frrico, 0.3 mL de la disolucin de tiocianato de amonio, 4.7 mL de agua destilada, tape y agite por inversin. Transfiera a una celda y lea la absorbancia a la longitud de onda de mxima absorbancia (Max) encontrada en su espectro de absorcin. Ajuste la absorbancia con el blanco preparado con 0.3 mL de la disolucin de tiocianato de amonio y 9.7 mL de agua destilada. Realice por triplicado esta determinacin.

REPORTE DE LA PRCTICA Determinacin del Espectro de Absorcin del Complejo Tiocianato de Fierro (III) Con los resultados construya una grfica de absorbancia contra longitud de onda y determine la longitud de onda de mxima absorbancia para el complejo rojo de tiocianato de fierro (III). Muestre a su profesor la longitud de onda seleccionada antes de continuar con la elaboracin de la curva de calibracin y la cuantificacin de hierro en su muestra problema. Elaboracin de la Curva de Calibracin del Complejo Tiocianato de Fierro (III) Construya una grfica de absorbancia contra concentracin molar de Fe 3+. Compruebe en que intervalo hay linearidad y por lo tanto, la ley de Beer se cumple. Obtenga la ecuacin de la recta y el coeficiente de correlacin (R2) para ver que tan bien se ajustan sus datos a la lnea recta. Determinacin de la concentracin de Fe3+ en la Disolucin Problema Obtenga la media de sus tres determinaciones de absorbancia y la desviacin estndar. Con la ecuacin de la recta obtenida en el punto anterior, encuentre la concentracin de FeCl3 de su muestra problema. Solicite a su profesor la concentracin real de su muestra problema y reporte la exactitud y la precisin de su determinacin.

CUESTIONARIO 1. El cloruro frrico no absorbe en la regin del visible, qu pasa cuando se le combina con el tiocianato de amonio? Por qu se desarroll un color rojo? Cmo se llama a los reactivos como el tiocianato de amonio que al combinarse con el analito generan un color que puede absorber en la regin del visible? 2. Qu factores se deben tomar en cuenta para la determinacin espectrofotomtrica de iones inorgnicos por formacin de complejos? 3. Cul es la diferencia entre absortividad (a) y absortividad molar ()? 4. Qu cuidados se deben tener con las celdas del espectrofotmetro?

5. Plantee tres problemas en donde se aplique la ley de Beer. Ponga atencin en proporcionar todos los datos requeridos para su resolucin.

BIBLIOGRAFA Harris Daniel C., 2001 Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin. Editorial Revert, S.A. Mxico. Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning, Mxico.

Verde Calvo Jos Ramn, Escamilla Hurtado Ma. de Lourdes, Reyes Dorantes Alberto y Malpica Snchez Frida. Manual de Prcticas de Qumica Analtica II. 1 edicin. Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa, Mxico.

APNDICE 1

USO ADECUADO DE INSTRUMENTOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

Para un uso adecuado de los diferentes instrumentos y materiales de trabajo con que cuenta un laboratorio de docencia, se debe saber en qu tipo de anlisis se les puede emplear, cules son sus limitaciones de medicin, sus condiciones ptimas de operacin y los cuidados que se les debe brindar.

Balanzas Su propsito es medir el peso de un material o pesar cierta cantidad de una sustancia, las hay de varios tipos pero dos son los ms comunes en el laboratorio de docencia.

Balanza granataria Tiene una sensibilidad de 0,1 g por lo que no tiene capacidad para medir miligramos, est diseada para pesar desde dcimas de gramo hasta algunos kilogramos. Cuidados: se le debe mantener limpia, no derramar slidos ni lquidos sobre el rea de pesado (plato) y dejarla en ceros despus de su uso.

Balanza analtica Este tipo de balanza cuenta con una sensibilidad de 0,01 g hasta 0,0001 g. Pasos a seguir para un manejo adecuado:

Antes de pesar, ajuste la burbuja (se puede encontrar en la parte trasera, lateral o frontal) haciendo girar los tornillos de las patas de soporte. Elimine con una brocha pequea todos los residuos slidos que se hayan acumulado debajo del plato.

No la mueva del lugar donde se encuentra pues la puede desequilibrar. Si as lo requiere, puede tarar el recipiente donde pesar el reactivo antes de tomar su peso definitivo. Mantenga las puertas laterales y la frontal de la balanza cerradas al tomar la ltima lectura, ya que el sistema de pesado es muy sensible a las corrientes de aire. No se recarga a los lados de la balanza pues es muy sensible al movimiento.

Balanza analtica

Balanza granataria

Figura 1. Tipos de balanzas. La analtica tiene mayor sensibilidad que la granataria.

Material de Vidrio El vidrio es un material durable, transparente y resistente, el que se emplea en la fabricacin de material de laboratorio es adems resistente a cidos y otras sustancias corrosivas, as como a cambios bruscos de temperatura. Las dos marcas que dominan el mercado son Pyrex y Kimax.

Volumtrico Se utiliza para medir volmenes exactos, es ms costoso porque est calibrado bajo cierta normatividad, se debe conocer la temperatura a la que fue calibrado.

Matraz volumtrico

Pipeta volumtrica

Figura 2. Material volumtrico de vidrio.

No volumtrico Estos materiales de vidrio no miden volmenes exactos por lo que se utilizan slo para contener lquidos. Una excepcin son las pipetas graduadas que poseen una buena exactitud para trabajo analtico cuantitativo.

Matraz Kitazato

Matraz Erlenmeyer

Figura 3. Material no volumtrico de vidrio.

Instrumentos de Medicin Dentro de esta categora se encuentran las pipetas graduadas y las probetas para la medicin de volmenes de lquidos, el picnmetro para medir la densidad de un slido o de un lquido y el termmetro para la medicin de temperaturas.

Pipeta graduada

Picnmetro

Probeta

Termmetro

Figura 4. Algunos instrumentos de medicin.

Desecador Los desecadores tienen paredes gruesas de vidrio, forma cilndrica y una tapa esmerilada que se ajusta hermticamente para evitar que penetre la humedad del medio ambiente. En su parte interior tienen una placa o plato con orificios que vara en nmero y tamao, estos platos pueden ser de diferentes materiales como porcelana o nucerite (combinacin de cermica y metal). Se utilizan para mantener temporalmente sustancias exentas de humedad.

Figura 5. Desecador para proteger reactivos qumicos de la humedad del medio ambiente.

Otros Materiales La Fig. 6 ilustra una campana de extraccin y diferentes materiales de uso comn en el laboratorio.

Tela de asbesto

Tripi

Soporte universal Pinzas para bureta

Pinzas para crisol

Embudo

Campana para manejo de sustancias txicas y corrosivas

de filtracin

Escobilln

Tubos de ensayo

Piseta

Parrilla

Mechero Bunsen

Mortero

Propipeta

Figura 6. Campana de extraccin y diferentes materiales de uso comn en los laboratorios de qumica analtica.

APNDICE 2 INSTRUCCIONES DE OPERACIN DEL POTENCIMETRO CONDUCTRONIC pH 120

Usos y Partes que lo Componen El potencimetro Conductronic Modelo pH 120 es un instrumento que se usa para efectuar mediciones de pH, determinaciones de iones especficos, titulaciones de xido reduccin, establece el punto final Kart Fischer y lleva a cabo otras titulaciones con electrodos polarizados. El equipo tiene un panel que proporciona lecturas de dos dgitos y la compensacin de temperatura es automtica de 0 a 100 C. Su alta impedancia de entrada (1012 ) permite su uso con todos los electrodos actualmente disponibles, incluyendo los diseados para iones especficos. La Fig. 1 muestra las partes que lo componen y en el apartado siguiente se indica la funcin de cada una.

Panel de lectura Calibrate Slope Panel de Control Electrodo

Figura 1. Partes del potencimetro Conductronic Modelo 120.

Controles e Indicadores 1. Panel de control. Estas teclas permiten la seleccin de las diferentes funciones como son pH, mV, mVrel. y C. Si se va a medir la temperatura se requiere el sensor de temperatura. 2. Control de pendiente (Slope). Compensa la desviacin del valor terico de la pendiente del electrodo. Funciona nicamente en el modo de pH. 3. Control de Calibracin (Calibrate). Permite calibrar el instrumento en las funciones de pH y mVrel. 4. Panel de Lectura. Indica el valor del pH medido por el electrodo, tambin proporciona datos de temperatura y mV.

Calibracin del Instrumento y Mediciones de pH (Este procedimiento tambin se puede emplear para los potencimetros Conductronic Modelos pH 10 y pH 20).

Calibracin a un punto (Cuando el valor de pH de la solucin problema est en el intervalo de de la solucin patrn) 1. Asegrese que el electrodo este bien conectado en la parte trasera del equipo y conecte el equipo a la corriente elctrica. 2. Seleccione la tecla pH en el panel de control. 3. Lave el electrodo con agua destilada y squelo con un papel absorbente suave tocando solamente el bulbo. 4. Fije la perilla Slope en 100% en la escala. 5. Introduzca el electrodo y el sensor de temperatura en la solucin patrn de pH 7.0 y permita que la lectura se estabilice (aproximadamente 30 seg). 6. Ajuste la perilla de calibracin Calibrate, hasta que el medidor indique el valor pH 7.0 de la solucin patrn. 7. Retire el electrodo y enjuguelo con agua destilada, pero no seque el electrodo. 8. Introduzca el electrodo en la solucin a medir y lea el valor de pH en el panel de lectura. Despus de cada medicin, retire el electrodo y enjuguelo con agua destilada. 3.0 unidades, respecto al pH 7.0

Calibracin a dos puntos (Cuando el valor de pH de la solucin problema no est en el intervalo de 7.0 de la solucin patrn). 1. Siga las indicaciones de calibracin a un punto hasta el paso nmero 6. 2. Retire el electrodo, enjuguelo con agua destilada. Sumerja el electrodo en la segunda solucin patrn de pH 4.0 pH 10.0 (utilice la primera si el pH de su muestra problema es cido o la segunda si es bsico). 3. Ajuste la perilla de control de pendiente Slope, hasta que el medidor indique el valor de pH de la segunda solucin patrn. 4. Retire el electrodo, enjuguelo con agua destilada y proceda a efectuar las mediciones de la solucin problema. No olvide limpiar el electrodo con agua despus de cada medicin. 3.0 unidades, respecto al pH

Limpieza y Cuidados del Electrodo de pH * El electrodo se debe humectar y almacenar con una disolucin de cloruro de potasio para evitar que se seque el diafragma. * La membrana y el diafragma del electrodo pueden contaminarse, produciendo errores en la medicin, para evitar este problema la membrana de vidrio debe limpiarse: - Con un papel hmedo. - En caso de contaminacin con productos orgnicos puede usarse un disolvente como la acetona; tambin se puede emplear una solucin de cido clorhdrico 1:1 y dejar electrodo por un da para evitar la formacin de precipitado y sales en su interior. - Para eliminar la presencia de protenas contaminantes se puede utilizar una solucin de pepsina o de cido sulfocrmico 0.1 N. - Cuando se mide el pH de muestras de grasas o aceites, los residuos se pueden lavando el electrodo con detergente y agua abundante. eliminar sumergido el

Problemas y Precauciones Si el instrumento no funciona, revise que el cable de corriente est bien conectado a la toma de corriente y que el cable del electrodo este firmemente conectado a la parte trasera del equipo. Verifique que las soluciones patrn estn completamente transparentes y que no contengan partculas extraas. La solucin patrn de pH 7.0 debe ser incolora, la de pH 4.0 roja y la de pH 10.0 azul. Cambie las soluciones patrn, en caso de que la perilla Calibrate o la perilla Slope, lleguen al tope midiendo estas soluciones. Las soluciones de baja conductividad, tales como el agua destilada y desionizada, responden ms lentamente, dando la apariencia de lecturas errticas. Si el instrumento no responde, verifique que el electrodo no est daado, de estarlo sustityalo por otro y hgalo saber al profesor y al laboratorista. Si el electrodo no est daado, sumrjalo en agua tibia por una hora para destapar la referencia y que los cristales de KCl fluyan adecuadamente. Si el instrumento sigue sin responder correctamente despus de haber verificado los puntos anteriores, informe a su profesor y a la Coordinacin de Laboratorios para su reparacin o sustitucin.

APNDICE 3 INSTRUCCIONES DE OPERACIN DEL ESPECTROFOTMETRO BIOMATE TM 3 THERMO SPECTRONIC

Usos y Partes que lo Componen El espectrofotmetro UV-Visible es un equipo de uso fcil y las determinaciones que en l se realizan son de tipo cuantitativo, con aplicaciones en diferentes campos como: o Industria de alimentos, qumica, farmacutica y en el tratamiento de aguas residuales, en donde se le utiliza en los anlisis rutinarios de control de calidad. o o Laboratorios de investigacin para el anlisis de diversos compuestos de inters. Enseanza, en el desarrollo de prcticas acadmicas en los laboratorios de docencia.

El espectrofotmetro Biomate tm 3 Thermo Spectronic (Fig. 1) ofrece: o o o Un sistema ptico nico que aumenta la precisin y exactitud. Calibracin automtica de la longitud de onda. Programacin para la determinacin de curvas estndar, cinticas qumicas y bioqumicas, anlisis a mltiples longitudes de onda y diversas formas de expresar los resultados (por ejemplo, diferencia de absorbancias).

Figura 1. Espectrofotmetro UV-visible BioMate 3. Controles e Indicadores Compuerta para el portaceldas

Panel de lectura. Muestra las lecturas de absorbancia, transmitancia y la concentracin de los compuestos en las soluciones contenidas en la celda. Asimismo, indica la programacin que se est haciendo del equipo. Panel de lectura Teclados. Ajusta y establece cambios en los parmetros de medicin, a travs de los teclados numrico, de programacin y de funciones (Fig. 2). El teclado numrico ajusta los cambios en la longitud de onda y tiempo de la determinacin, y los de programacin y funciones incluyen las teclas esc, clear, enter, y , test, Teclado del utility, print que permiten que el espectrofotmetro funcione como una espectrofotmetro microcomputadora.

Panel de lectura Teclas de funcin

Figura 2. Teclado y panel de lectura del espectrofotmetro.

Conexin y Calibracin Automtica del Equipo 1. Coloque el espectrofotmetro en la mesa de trabajo, en un lugar seguro donde no haya riesgos de derrame de reactivos y evite moverlo durante las determinaciones. 2. Conecte el cable que se le proporciona, primero al equipo por el panel trasero usando la entrada hembra (Fig. 3) y despus al tomacorriente. Efecte este proceso en la secuencia indicada, no invierta los pasos pues el equipo puede sufrir una descarga.

Entrada hembra para el cable de corriente

Botn de encendido

Figura 3. Vista trasera del equipo. Se observa el panel de conexin y el botn de encendido.

3. Abra la compuerta del portacelda (Fig. 4) y asegrese de que no existe ninguna muestra, cierre la compuerta y presione el botn de encendido. El equipo empezar por darle la bienvenida con el

Compuerta del portacelda

logotipo de la marca, despus calibrar los filtros y ajustar la lmpara automticamente (escuchar un sonido). Durante el proceso no abra la compuerta del portacelda y no presione ninguna tecla, slo espere. Figura 4. Vista superior del equipo con la compuerta abierta, se observa el portacelda.

Mdulo de Medicin Bsica de Absorbancia, Transmitancia y Concentracin 1. Una vez calibrado el equipo, el panel mostrar lo siguiente:

MENU

SMART START BIOMATE

FECHA Y HORA

Portacelda

PROGRAMAS

Lente receptor FECHAS DE (interior)

PROGRAMAS

Y RUTINAS
Anlisis Almacenados

RUTINAS

2. Presione la tecla ESC del panel de programacin una o dos veces hasta que escuche un sonido. El panel de lectura cambiar, mostrando lo siguiente:

MENU

SMART START BIOMATE

FECHA Y HORA

Ensayo cidos nucleicos Ensayo de Protena Crecimiento Celular Calcular oligos

Iniciar Smart

General Test

Anlisis Almacenados

3. En el panel de funciones pulse la tecla GENERAL TEST y posteriormente ATC bsica. El panel de lectura mostrar lo siguiente:

GENERAL-TEST

FECHA Y HORA

ABSORBANCIA

0.000 A
Medir Blanco Ajustar nm Cambiar modo

4. Ajuste la longitud de onda, presionando primero la tecla Ajustar nm y despus las teclas numricas necesarias y por ltimo oprima ENTER. 5. Con la tecla de cambiar modo, puede alternar la determinacin de absorbancia, transmitancia o concentracin. 6. Prepare la solucin blanco o de referencia, colquela en la celda y sta a su vez en el portaceldas (la celda se debe orientar con el lado transparente frente a la persona que opera el espectrofotmetro, el ancho de la celda es de 1 cm). Ajuste la absorbancia a cero oprimiendo la tecla medir blanco.

7. Retire la celda y cambie la solucin de referencia por la muestra problema. Tome la lectura de la absorbancia que se muestra en el panel. Es recomendable, ajustar nuevamente con el blanco antes de tomar la lectura de otra muestra. 8. Cuando termine de efectuar todas las determinaciones, no se olvide de retirar la celda. Presione la tecla ESC tres veces para terminar. 9. Para apagar el equipo, presione el botn de apagado (el mismo de encendido pero en la segunda posicin, Fig. 3) y desconecte el cable del tomacorriente y del equipo. Evite desconectar el cable antes de presionar el botn de apagado, ya que se puede daar la lmpara de Xenon y/o el fusible del aparato. No guarde el cable en el interior del equipo (en el portaceldas).

Mdulo de Mltiples Lecturas a Diferentes Longitudes de Onda Este mdulo permite obtener medidas de absorbancias a diferentes longitudes de onda. El equipo puede operar desde 190 hasta 1100 nm, con intervalos mnimos de 10 nm y mximos de 100 nm en cada determinacin. Cuando trabaje entre 800 y 1100 nm, encienda el equipo al menos media hora antes de iniciar las lecturas.

1. Siga los pasos indicados en la seccin Conexin y Calibracin Automtica del Equipo. 2. Una vez calibrado el equipo, el panel mostrar lo siguiente:

MENU

SMART START BIOMATE

FECHA Y HORA

PROGRAMAS

FECHAS DE

PROGRAMAS

Y RUTINAS
Anlisis Almacenados

RUTINAS 3. Presione la tecla ESC del panel de programacin una o dos veces hasta que escuche un sonido. El panel de lectura cambiar, mostrando lo siguiente:

MENU

SMART START BIOMATE

FECHA Y HORA

Ensayo cidos nucleicos Ensayo de Protena Crecimiento Celular Calcular oligos

Iniciar Smart

General Test

Anlisis Almacenados

4. En el panel de funciones pulse la tecla GENERAL TEST. El panel de lectura mostrar lo siguiente:

TIPOS DE ANALISIS

FECHA Y HORA

A-%T-C AVANZADA CURVA ESTNDAR RELACION DE ABSORBANCIAS DIFERENCIA DE ABSORBANCIAS CINTICA BARRIDO DE EXPLORACION ATC Iniciar NETA A 3 PUNTOS Smart Bsica MULTIPLES LONGITUDES DE ONDA

Analisis almacenados

Ensayos Biomate

5. Con la tecla

VALID. DE FUNCIONAMIENTO

del teclado de programacin, baje el cursor y seleccione la opcin Mltiples

longitudes de onda y oprimir la tecla ENTER. El panel cambiar y mostrar lo siguiente:

MULTIPLES LONGITUDES DE ONDA

FECHA Y HORA

NOMBRE DE ANALISIS MODO DE MEDICION # ID (0=OFF)

----------ABSORBANCIA 1

Ajuste nm

Almacenar analisis

Analisis almacenados

6. Presione la tecla Ajuste nm del panel de funciones. Oprima la opcin Agregar nm y combinando las teclas numricas y la tecla ENTER, ingrese las longitudes de onda deseadas, las que aparecern en la pantalla. Si requiere borrar alguna de estas longitudes, oprima Borrar nm.

MULTIPLES LONGITUDES DE ONDA

FECHA Y HORA

nm

ABS

1. 2. 3.

190 200 210

Agregar nm

Analisis almacenados

Correr muestra

7. Una vez ingresadas las longitudes de onda a las que efectuarn las determinaciones, elija la opcin Correr muestra, la pantalla cambiar y mostrar los siguiente:

MULTIPLES LONGITUDES DE ONDA

FECHA Y HORA

nm

ABS

Medir Blanco

Medir Muestra

8. Prepare la solucin blanco o de referencia, colquela en la celda e introduzca sta en el portaceldas (la celda se debe orientar con el lado transparente frente a la persona que opera el espectrofotmetro). Ajuste a cero la absorbancia para cada longitud de onda, oprimiendo la opcin medir blanco. Se activar despus de unos segundos la opcin medir muestra. Retire la celda y cambie la solucin de referencia por la muestra problema. Oprima el botn medir muestra y registre la lectura de la absorbancia que se muestre en el panel. 9. Anote las lecturas y cuando termine de efectuar todas las determinaciones, retire la celda. Presione la tecla ESC cuatro veces para terminar. 10. Para apagar el equipo, presione el botn de apagado (el mismo de encendido pero en la segunda posicin, Fig. 3) y desconecte el cable del tomacorriente y del equipo. Evite desconectar el cable antes de presionar el botn de apagado, ya que se puede daar la lmpara de Xenon y/o el fusible del aparato. No guarde el cable en el interior del equipo (en el portaceldas).