CITOLOGIE VEGETALA

Suport de curs anul I IDD Specializarea Biologie

Lector. Dr. Irina Neta Gostin

Disciplina face parte din cadrul catedrei de Biologie vegetala si are caracter obligatoriu. Cursul este proiectat conform cerinelor nvmntului deschis la Distanta si se adreseaz cursanilor care urmeaz aceasta forma de nvmnt. Coninutul tiinific se bazeaz pe introducerea si prezentarea de noiuni noi privind structura si organizarea celulei vegetale. Se prezint rolul componentelor celulare (pentru celula eucariota), in care se pune un accent deosebit pe: cunoaterea principalelor tipuri de organite celulare; cunoaterea structurii si funciilor plastidelor si mitocondriilor, cu rol cheie in viata celulei vegetale; identificarea particularitilor ultrastructurale ale celulei vegetale; cunoaterea structurii nucleului si a etapelor diviziunii celulare. Cursul este prezentat intr-o maniera accesibila si se axeaz pe necesitile concrete ale studenilor. Tematica urmrete dobndirea unor cunotine care pot oferi tuturor cursanilor anse egale in vederea formarii si perfecionrii profesionale. Tematica este structurata in 5 uniti de nvare pentru care timpul total de studiu individual necesar a fi alocat este de 28 de ore. Pe parcursul fiecrei uniti de nvare se afla inserate teste de autocontrol a cror rezolvare poate fi gsita la sfritul manualului. Testele prezentate sunt de tip complement simplu) cu un singur rspuns corect), complement multiplu (cu unul sau mai multe rspunsuri corecte) i ntrebri de tip eseu (pentru elaborarea crora nu trebuie sa se depeasc 2000 de cuvinte) In urma parcurgerii materialului de studiu precum si in urma efecturii lucrrilor practice studenii trebuie sa i nsueasc principalele metode de lucru utilizate in citologia vegetala, sa recunoasc principalele organite celulare la microscopul optic si la microscopul electronic.

PROGRAMA ANALITICA Denumirea disciplinei Citologie vegetala

Codul disciplinei

Semestrul

Numrul de credite

Facultatea

Biologie

Numrul orelor pe semestru/activitati Total SI TC AT AA

Profilul

Ecologie i protecia mediului ID

28 28 Biologie Categoria formativ a disciplinei DF-fundamental, DG-general, DS-de specialitate, DE-economic/managerial, DUumanist Categoria de opionalitate a disciplinei: DI-impus, DO-opional, DL-liber aleas (facultativ) Obligatorii Discipline Anterioare (condiionate) Recomandate Specializarea

28 DF

DI

Obiective

Coninut (descript ori)

- cunoasterea structurii celulei vegetale - cunoasterea tipurilor de organite celulare si a functiilor acestora - descrierea proceselor de diderentiere si dediferentiere celulara - evidentierea particularitatilor ultrastructurale ale celulei vegetale CURS 1. Metode, tehnici i instrumente de studiat celula (vie i fixat). Noiuni sumare referitoare la compoziia chimic a organismelor vegetale. 2. Alctuirea celulei vegetale i a celulei animale: 1. form i mrime; 2. pri componente; 3. trsturi proprii; 4. structura celulei procariote; 5. structura celulei eucariote (sistemul membranar, citoplasma). 3. Organitele citoplasmatice - reticul endoplasmic. 4. Ribozomi i aparatul Golgi. 5. Lizozomii, microcorpii, sferozomii, corpi paramuralii, citoscheletul. 6. Structuri pluritubulare (centru celular, cili, flageli); mitocondriile. 7. Plastide (proplastide, cloroplaste, amiloplaste, carotenoplaste). 8. Nucleul: 1. n cursul interfazei (morfologie i structur: anvelop, nucleol, cromatin, nucleoplasm); 2. n timpul mitozei (cromozomi, anvelop, nucleol). 9. Diviziunea celulei: Mitoza (cariocineza, citocineza). 10. Meioza (diviziunea heterotipic i homeotipic); diferenele fundamentale ntre mitoza i meioz, semnificaia meiozei. 11. Incluziunile celulare vegetale: 1. incluziuni lichide (vacuolele); 2. incluziuni inerte (granule de amidon i de aleuron, cristale). 12. Peretele celular: 1. origine; 2. constitueni de baz; 3. texturi helicoidale; 4. fluxul membranar i formarea peretelui; 5. creterea peretelui. 13. Modificrile secundare chimice ale peretelui (cutinizare, cerificare, suberificare, lignificare, mineralizare, gelificare, lichefiere). 14. Diferenierea i dediferenierea celular

LUCRARI PRACTICE 1. Metode i tehnici utilizate n citologia vegetal, la microscopul fotonic i la cel electronic, aparate, ustensile, reactivi, n vederea obinerii preparatelor temporare i permanente. 2. Forma i mrimea celulelor vegetale 3. Elementele constitutive de baz ale celulei vegetale: identificarea peretelui, nucleului, citoplasmei, vacuolei (Allium cepa): colorate cu soluie Lugol i folosind coloraia vital cu rou neutru. 4. Evidenierea plasmalemei i a tonoplastului (Ligustrum vulgare) prin fenomenele de turgescen i plasmoliz 5. Evidenierea micrilor intracelulare: cicloza de rotaie (Elodea canadensis) i de circulaie (Tradescantia discolor). 6. Organite citoplasmatice: plastide 7. Nucleul: la procariote i la eucariote: numr, forma, mrime, poziie, colorare 8. Incluziuni ergastice: lichide: inulin ; antociani ; picturi lipidice; solide: granule de aleuron 9. Granule de amidon - coloraie, observaie n lumin polarizat, cristale de oxalat de calciu 10. Peretele celular: natur chimic: reacii i coloraii diferite;punctuaii: simple i areolate; tipuri de ngrori: centrifugale i centripetale; plasmodesme 11. Modificri chimice secundare ale peretelui, evideniate prin diferite reacii de colorare: cutinizarea , cerificarea, suberificarea, lignificarea, mineralizarea, gelificarea 12. Diviziunea celular: mitoza 13. Meioza (n antera staminei de Lilium candidum). Colocviu Forma de evaluare (E-examen, C-colocviu/test final, LP-lucrari de control) E Stabilirea notei finale (procentaje) Bibliografia - rspunsurile la examen/colocviu/lucrari practice activitati aplicative atestate /laborator/lucrri practice/proiect etc - teste pe parcursul semestrului - teme de control 50% 50%

1. Bronchar R., 1990 - Guide des travaux pratiques de biologie de la cellule vgtale. Univ. Liege 2. Cruce M., 1999 Biologie celular i molecular, Ed. Univ. Crai ova 3. Moens P., Auquiere I.P., 1990 - Biologie gnrale et vgtale. I. Introduction biochimique. II. Cytologie. Imprimrie Drouaux, Liege 4. Strasburger E., 1999 - Lehrbuch der Botanik (ed. 34). Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 5. Toma C., Ni M., 2000 - Celula vegetal, Ed. Univ. "Al. I. Cuza" Iai preparate microscopice; plane, folii transparente, diapozitive, CD-ROM; preparate proaspete i conservate; microscoape; lupe; reactivi chimici;

Lista materialelor didactice necesare

Coordonator de Disciplin

Grad didactic, titlul, prenume, numele Coordonator de disciplin & tutore Lector dr. Irina Neta Gostin

Semntura

Legenda: SI-studiu individual, TC-teme de control, AT-activitati tutoriale, AA-activitati aplicative asistate

UNITATEA DE INVARE 1- INTRODUCERE IN CITOLOGIA VEGETAL

Celula este unitatea morfo-funcional elementar a tuturor organismelor procariote i eucariote. Ea reprezint un prim nivel de organizare a materiei vii, dotat cu capacitate de autoreglare, autoconservare i autoreproducere. Primele forme de via, deci primele celule, au aprut n urm cu 3,5 miliarde de ani. Timp de aproape 1 500 de milioane de ani Pmntul a fost populat aproape n exclusivitate de organisme procariote anaerobe. Cu circa 1 800 de mi lioane de ani n urm au aprut i primele eucariote. Aceste dou tipuri de organisme i de organizare celular au coevoluat i coexist i n biosfera actual a planetei noastre. Corpul tuturor plantelor este constituit din uniti structurale i funcion ale numite celule. Unele plante au corpul alctuit dintr -o singur celul i se numesc unicelulare (bacteriile, unele alge i ciuperci). Majoritatea plantelor au corpul format din numeroase celule i se numesc pluricelulare. Celulele unui organism plurice lular sunt difereniate i specializate pentru ndeplinirea anumitor funciuni. Cu ct o plant se afl pe o treapt mai ridicat n scara evolutiv cu att numrul tipurilor de celule difereniate este mai mare (angiospermele au pn la 76 de tipuri). Forma celulelor vegetale (fig. 1) este variat i determinat de rolul fiziologic ndeplinit, de origine, poziia ocupat n cadrul diverselor esuturi, condiiile de mediu. La plantele pluricelulare, celulele pot fi tabelare (n suber), poliedrice (n parenc himuri), stelate (n mduva tulpinii de Juncus), reniforme sau halteriforme (celulele stomatice), septate (celulele asimilatoare din frunza de la Pinus).

Celule poliedrice din parenchim

Celule tabulare din suber Celule stomatice halteriforme

Celule stelate din maduva Celule de forma neregulata - sclereida

Celule stomatice reniforme

Figura 1 Forme de celule vegetale

Aceste forme variate se pot grupa n dou tipuri fundamentale: celule parenchimatice, cand au un contur mai mult sau mai puin circular ori oval, axele aproape egale (celule izodiametrice, cu una din axe de cel mult 3 ori mai mare dect celelalte) i colurile mai mult sau mai puin rotunjit e; celule prozenchimatice, cnd lungimea este cu mult mai mare dect limea i grosimea. Diferena dintre cele dou tipuri fundamentale este vizibil numai n seciunile longitudinale efectuate prin diferite pri ale corpului plantelor.Mai putem meniona i o a treia categorie de celule numite idioblaste, care sunt adesea izolate, de form paticular, nglobate n esuturi cu celule uniforme (celule cu tanin sau cu cristale de oxalat de calciu din mezofilul multor rozacee i fabacee, celule de forma literei T din mezofilul frunzei de ceai). Mrimea celulelor vegetale (fig. 2 a,b) oscileaz n limite foarte mari, de la civa micrometri (i pentru observarea lor este necesar microscopul fotonic) pn la civa centimetri sau chiar metri. Prezentm doar cteva exemple : - celulele bacteriene au sub 1 micrometru; - celulele unor ciuperci inferioare (drojdia de bere) au circa 4-6 micrometri; - celulele meristematice de la plantele superioare au n medie 10-50 de micrometri; - celulele definitive ale dicotiledo natelor au ntre 30 i 50 de micrometri, iar cele de la monocotiledonate ntre 50 i 100 de micrometri; - celulele din endocarpul unor fructe de la citrice pot atinge 2-3 centimetri; - fibrele textile pot atinge 2-4 centimetri la cnep i chiar 50 de cent imeti la ramie; - cenoblastul de la alga verde unicelular Caulerpa prolifera poate atinge 1 metru; - traheile (vase lemnoase) de la unele liane pot atinge 5 metri.

Celule din apexul caulinar si radicular 10-50 m Celule de Saccharomyces 4-6 m

Celule (peri) de pe tegumentul semintei de bumbac 1- 4 cm

Fibre de in (celule mecanice) 1015 cm

Celule din mezocarpul de portocal 1- 2 cm

Figura 2a Dimensiunile celulelor vegetale

Talul de la Caulerpa sp. 1 m

Figura 2b Dimensiunile celulelor vegetale

UNITATEA DE INVARE 2 - PRILE COMPONENTE ALE CELULEI VEGETALE

Vzut la microscopul fotonic, celula apare format dintr-un coninut limitat de un perete celular (dermatoplaste) sau, uneori, acest perete lipsete la mixomicete, zoospori, spermatozoizi (gimnoplaste). O celul vegetal este alcatuit din mai multe componente, bine definite morfologic i cu activiti vitale precis determinate, numite organite. Unele organite sunt vii i totalitate a lor alcatuiete partea vie a celulei, numita protoplast, iar altele sunt lipsite de via, constituind paraplasma. n componena protoplastului intr: citoplasma, nucleul, plastidele, mitocondriile, ribozomii,reticulul endoplasmic, aparatul Golgi, sferozomii, lizozomii, microcorpii i corpii paramurali. Paraplasma se compune din: peretele celular, vacuomul celular, incluziunile ergastice solide. Vzut la microscopul electronic (fig. 3), celula vegetal dezvaluie o structur mult mai complex; astfel, la o celul definitiv eucariot ntlnim, de la exterior spre interior urmtoarele componente: peretele celular Celula eucariota (la dermatoplaste); plasmalema (membrana ectoplasmic); hialoplasma sau citosolul (masa fundamental a citoplasmei); un sistem membranar intern, foarte dezvoltat, asemntor din punct de vedere structural i chimic cu plasmalema, format din reticul endoplasmic i aparat Golgi; organite cu membran dubl (nucleul, plastidele, mitocondriile); mici granule lipsite de membran, libere n hialoplasm sau ataate de reticulul endoplasmic, numite ribozomi; numeroase structuri filamentoase, numite microtubuli; structuri veziculare cu membran simpl: lizozomi, corpi paramurali (lomazomi i plasmalemazomi), microcorpi (peroxizomi i glioxizomi), sferozomi; alte infrastructuri: centrul celular, flagelii i cilii, toate fr membran.

Celula procariota
Figura 3 Celula procariota si celula eucariota

2.2. Trsturi proprii celulei vegetale (figura 4)

1. Prezena peretelui celular, alctuit n principal din celuloz, hemiceluloze i substane pectice, la care se mai adaug uneori proteine, lipide, lignin, tanin, sruri minerale, este o consecin a competiiei pentru aer i lumin a grupelor de plante ce au populat mediul terestru. 2. Alte structuri caracteristice, strns legate de prezena peretelui celular, sunt punctuaiile i plasmodesmele, prin care se asigur unitatea structural -funcional dintre celulele unui esut. 3. n structura i compoziia chimic a plasmalemei predomin galactozildigliceridele; n celula animal predomin fosfatidilcolina i fosfatidiletanolamina. 4. Creterea n volum a celulelor vegetale se realizeaz prin creterea treptat a dimensiunilor aparatului vacuolar (n celula definitiv vacuola poate ocupa pn la 90% din volumul celular), n timp ce n celu la animal acest proces are loc prin sporirea cantitii de citoplasm. 5. Microcorpii sunt organite specifice celulei vegetale: peroxizomii intervin n procesele de fotorespiraie, iar glioxizomii n conversia lipidelor n glucide simple. 6. n celulele vegetale gsim o foarte mare diversitate de substane de rezerv (amidon, inulin, aleuron, uleiuri, laminarin), n timp ce n celula animal este specific glicogenul. 7. Celulele vegetale conin adesea cristale de sruri organice (oxalatul de calciu) i minerale (sulfatul de calciu), n timp ce prezena acestora n celulele animale reprezint cazuri patologice.

K I

Figura 4 Celula asimilatoare: A nucleolul; B nucleul; C citoplasma; D cloroplastul E membrana celulara; F peretele celular; G vacuola; H punctuatia; I reticulul endoplasmic; J amiloplast ; K mitocondria

2.1. Peretele celular Marea majoritate a celulelor vegetale sunt acoperite la exterior de un nveli solid numit perete celular, care separ celulele ntre ele, le protejeaz ntreg coninutul i le confer o anumit form stabil. Aceste celule sunt cunoscute i sub numele de dermatoplaste, prin contrast cu celulele animale, numite nude sau gimnoplaste. Se cunosc ns i unele excepii la ambele regnuri: l a plante, celulele mixomicetelor, zoosporii i gameii sunt gimoplaste, iar la animale, protozoarele foraminifere prezint un nveli calcaros. Peretele celular a fost prima component structural observat la microscopul fotonic de ctre Robert Hooke, n 1665.

- Spre deosebire de celulele animale care sunt, de regul, lipsite de perete (gimnoplaste)

- Majoritatea celulelor vegetale prezint un perete celulozo-pectic

Fibr de celuloz

Macrofi-brile de celuloz Molecu-l de glucoz

Figura 5 Peretele celular Peretele celular (figura 5) este un produs al protoplastului i rmne permanent n contact cu citoplasma, prin intermediul plasmalemei. Formarea sa ncepe la sfritul telofazei cnd se constituie un nou perete intercelular n fragmoplast (fragmoplastul este o mas dens, n principal proteic, situat ntre cele dou grupe de cromozomi i traversat de fibre fuzoriale). n zona ecuatorial a fragmoplastului apar numeroase formaiuni granulare mici, ce conin pectine i care nu sunt altceva dect vezicule ale aparatului Golgi. Numrul i mrimea acestora cresc treptat, se apropie i fuzioneaz ntr-o plac celular (viitoarea lamel median), care crete centrifugal. n cursul apropierii i fuzionrii veziculelor golgiene, membranele lor produc plasmalemele celor dou celule vecine. ntre vezicule se afl profile de RE, ce formeaz plasmodesmele, care trec prin punctuaiile ce rmn n lamela median. Ulterior se formeaz pereii primari ai celulelor vecine; unii autori consider drept perete primar complexul comun format din lamela median i din cei doi perei primari produi de citoplasmele celulelor noi, alturate. Noul perete se sudeaz cu pereii laterali ai celulei iniiale (cea care a intrat n diviziune) i separ astfel celula veche n dou celule noi. La unele alge verzi, peretele se formeaz centripetal, sub forma unui inel care se nchide ca o diafragm. Peretele celulelor meristematice i parenchimatice rmne primar, celulozo -pectic tot timpul vieii acestora. n schimb, peretele celulelor esuturilor mecanice, conductoare i

10

protectoare se ngroa prin depuneri de material nou peste peretele primar, alctuind peretele secundar. Spre deosebire de peretele primar, care crete mai mult n suprafa, peretele secundar crete numai n grosime . Compoziia chimic a peretelui celular este foarte variat, n funcie de grupa taxonomic. Astfel, la bacterii peretele celular este rigid datorit mureinei, componenta sa principal fiind o macromolecul care se caracterizeaz prin prezena a doi constitueni aminoglucidici: acidul muramic i N-acetil-glucozamina. Peretele celular de la algele brune este format din celuloz, dar mai ales din alginai de calciu i magneziu i fucoidin; acidul alginic este un polimer al acidului D-manuronic, iar fucoidina este constituit din resturi de L -fucoz esterificate cu acid sulfuric. Algele roii au peretele celular de natur celulozo -pectic, stratul intern format din celuloz, iar cel extern din pectine alctuite n principal din acid pectic asociat cu D-galactani i L-arabani. La majoritatea ciupercilor, peretele este format din chitin, polimer de N-acetil-Dglucozamin; fac excepie oomicetalele, la care peretele este celulozic, precum i drojdiile, la care ntlnim o combinaie de glucan fibrilar i manan amorf. Unele alge verzi din ordinul Siphonales conin n perete ca substan scheletic , tot chitin. La celelalte grupe taxonomice, pereii celulelor conin 4 grupe de substane: glucide, lipide, proteine i substane minerale. n pereii secundari pot aprea i alte grupe de substane ce nu aparin celor dinti. De regul, predomin glucidele, gsindu -se n special sub form de polizaharide, cea mai frecvent fiind celuloza. Alturi de celuloz, n mod constant se gsesc hemiceluloze (polizaharide necelulozice, cu caracter amorf, formate din pentozani, hexozani, acizi poligalacturonici i poliglucuronici) i substane pectice (polizaharide, polimeri ai acidului alfa -Dgalacturonic cu arabinoza i galactoza). Wardrop, 1963 mparte constituenii chimici ai peretelui celular, dup rolul lor structural, n trei grupe i anume: - substane scheletice, cristaloide, anizotrope: celuloza, glucanii i mananii; - substane ce formeaz matricea: hemicelulozele, substanele pectice, proteinele i lipidele; - substane ncrustante, caracteristice pereilor celulari care sufer modificri secundare: lignina, suberina, cutina, taninurile, mucilagiile, rinile, compuii anorganici. Substanele scheletice i cele ale matricei se formeaz simultan n timpul dezvoltrii celulare, pe cnd cele ncrustante numai dup ce peretele a atins un anumit grad de dezvoltare i nu la toate celulele. n mare, n structura peretelui celular se disting dou componente: substana fundamental (faza continu, paracristalin, sau matricea) format, n general, din hemiceluloze i substane pectice, i structurile fibrilare (faza discontinu, cristalin) formate din celuloz, nglobate n substana fundamental, cu rol de liant. Celuloza (fig. 6) este un polimer liniar, neramificat, alctuit din 5000 -35000 molecule de Dglucopiranoz, legate 1,4 - -glicozidic. Macromolecula de celuloz are o lungime de circa 15000 i o grosime de aproximativ 7 . Unitatea structural a celulozei este celobioza. Celuloza este insolubil n ap i solveni organici, solubil n reactivul Schweitzer (soluie amoniacal de hidroxid de cupru). Se coloreaz n albastru cu reactivul Schultze (cloroiodura de zinc) sau cu soluie bazic de albastru de toluidin i n rou cu reactivul Genevez (rou de Congo i crisoidin) i cu soltie acid de orcein. Spre deosebire de amidon, celuloza nu se coloreaz direct cu iodul, ci numai dup o prealabil hidroliz cu acid sulfuric (situaie n care coloraia final este albastr). Prin tehnica curent de dubl colorare a preparatelor microscopice (verde iod i carmin alaunat), coloraia roz a peretelui celular nu este specific numai celulozei, ci i hemicelulozei, calozei i substanelor pectice. Microscopia electronic a permis decelarea unitilor de constituie ale celulozei: formaiunea submicroscopic fundamental este fibrila elementar (micela), format din 100 de lanuri de -glucopiranoz, asociate n diverse moduri n cristalite. Se apreciaz c un lan de glucopiranoz are o suprafa de 3,3 nm, iar o fibril elementar de circa 300 nm; micelele sunt constituite din 70% celuloz cristalin i 30% celuloz amorf. Fibrilele elementare se asociaz n uniti superioare numite microfibrile. O microfibril rezult din asocierea a circa 20 de fibrile elementare; legtura dintre fibrilele elementare este realizat de celuloza amorf (paracristalin), care ocup spaiile intermicelare, estimate la circa 1

11

nm. Prin asocirea intim a circa 250 microfibrile rezult o fibria, iar prin unirea a 1 500 de fibrile rezult o fibr macroscopic (I.Anghel i colab., 1981).

Figura 6 Celuloza Biodegradarea celulozei se realizeaz prin hidroliz catalizat de celulaze, n urma creia se elibereaz oligomeri (glucanohidrolaze), celobioz (celobiohidrolaze) sau glucoz (glucohidrolaze). Relativ puine organisme sintetizeaz celulaz i, deci, pot utiliza direct aceast biomas disponibil. Plantele verzi, care produc cea mai mare cantitate de celuloz, nu au activitate celulolitic deosebit, fiind practic incapabile s catabolizeze acest compus. Dintre animale, rumegtoarele, realiznd o digestie simbiotic, reuesc s catabolizeze celuloza; activitatea de celuloliz este restrns practic la microorganisme: bacterii, protiste, ciuperc i. Pectinele constituie cea mai mare parte din lamela median, care menine mpreun celulele unui esut. Locul de sintez al pectinelor l reprezint aparatul Golgi. Se coloreaz specific n roz cu rou ruteniu. Plantele dispun de pectinaze care hidrolizeaz legturile dintre acizii galacturonici ai pectinelor. Remanierea acestor polizaharide reprezint un proces natural frecvent, fie n cursul creterii, fie la sfritul maturrii celulei. Hemicelulozele sunt macromolecule cu un grad mai sczut de polimerizare, comparativ cu celuloza. n structura lor intr pentoze (xiloza, arabinoza) i mai puin hexoze (manoza, galactoza), acid glucuronic i acid galacturonic. Spre deosebire de celuloz, hemiceluloza poate fi utilizat de plant ca substan de rezerv, deoarece conine o enzim, hemicelulaza, care o poate hidroliza pn la oze simple. Ultrastructura peretelui celular. Se apreciaz c primele straturi dinspre lamela median sunt mai bogate n substane pectice i hemicelulozice, cantitatea de celuloz crescnd treptat spre interior. Cercetrile de microscopie electronic au evideniat c textura fibrilar are o orientare determinat; fibrilele celulozice prezint o dispoziie paralel pe faa extern a peretelui i aproape perpendicular pe cea intern, n raport cu axul longitudinal al celulei. Orientarea fibrilelor n peretele primar anizotrop reprezint un rspuns al celulei n cretere fa de turgescena celular, iar textura acestuia este reticulat. Peretele secundar este, de asemenea, anizotrop, dar conine mai mult celuloz, iar n plus are i substane de ncrustaie: cutina, suberina, ceara, lignina, mucilagii, sruri, rini. Este heterogen, fiecare din cele trei straturi ale sale (S1, S2, S3) avnd structur proprie, situaie vizibil ndeosebi la vasele de lemn i fibrele de sclerenchim. Stratul S1 (extern) este gros de 0,12 0,35 micrometri (ocup 5-11% din perete); este format din 4-6 lamele de microfibrile celulozice, avnd structur aparent reticulat. Stratul S2 (mijlociu) ese cel mai gros (ocup 74-84% din perete); are 30-150 de lamele foarte apropiate, iar microfibrlele de celuloz au dispoziie helicoidal, deci textura este paralel, dar difer direcia de nfurare n diferite lamele. Stratul S3 (intern) este gros de 0,07-0,08 micrometri; are doar 2-3 lamele de microfibrile celulozice, iar direcia lor de nfurare n lamele alterneaz, deci textura este reticulat (fig. 7).

12

Figura 7 Peretele celular (schema)

Figura 8 Peretele celular (imagine la microscopul electronic cu transmisie TEM) Peretele primar este plastic, extensibil i, deci, permite alungirea organelor; peretele secundar este elastic, dar nu plastic (el se formeaz atunci cand celulele, deci i organ ele, au ncetat s mai creasc). Modificrile chimice secundare ale peretelui celular pot fi clasificate astfel: 1. apoziii lipidice: cutinizare, cerificare, suberificare; 2. ncrustaii cu polifenoli: lignificare; 3. ncrustaii cu sruri minerale: mineralizare (silicificare, calcificare); 4. modificri cu rol degenarativ: gelificare i lichefiere. Unii autori consider cutinizarea, cerificarea, suberificarea, lignificarea i mineralizarea ca modificri fizice ale peretelui celular, iar gelificarea i lichefierea drept modificri chimice. Cutinizarea i cerificarea constau n impregnarea i acoperirea pereilor externi ai celulelor epidermice cu substane de natur lipidic, numite cutina i ceara. n general, celulele situate la

13

suprafaa organelor aeriene au pereii acoperii de o cuticul (fig. 9), n care se disting ceruri (extractibile cu cloroform, benzen, hexan) i un polimer insolubil numit cutin.

cuticula epiderma
Seciune transversal prin tulpina de la Sambucus nigra

Seciune transversal prin frunza de la Pinus sylvestris

cuticula

stomate

Pinus sylvestris, frunze aiculare

Figura 9 - Cuticula Cuticula are un rol foarte important n echilibrul hidric al plantei, reducnd evaporarea apei n atmosfer; apariia sa n cursul evoluiei a fost esenial pentru dezvoltarea plantelor n mediul aerian. n caz de uscciune, stomatele se nchid i atunci transpiraia cuticular devine determinant pentru adaptarea la viaa n mediul uscat. Cuticula intervine, de asemenea, n reglarea umiditii de la suprafaa organelor, eliminarea substanelor volatile, aprarea mpotriva factorilor externi (vnt, poluani, parazii); de cuticul depinde puterea de ptrundere a erbicidelor n plante. Ceara i cutina constituie complexul cuticular. Cuticula se coloreaz cu diferii reactivi (rou Sudan III, tetraoxid de osmiu). Grosimea sa variaz n funcie de condiiile ecologice n care crete planta: astfel, plantele submerse au o cuticul foarte subire (uneori chiar poate lipsi), n timp ce xerofitele au cuticula foarte groas; la frunzele de mslin, laur, afin ea poate atinge 10 -20 de micrometri. Cerurile se afl incluse fie n ochiurile polimerului de cutin (ceruri intracuticulare), fie se prezint sub forma unor proiecii superficiale de forme variate plci, tubuli, bastonae, panglici reprezentnd aproximativ 90% din ceara total (ceruri epicuticulare). Formarea cerurilor este fotostimulat, cele epicuticulare fiind responsabile de reflexiile albstrui sau glauce ale epidermei. La trestia de zahar i la unii palmieri de cear (Copernicia cerifera, Klopstochia cerifera ), pe tulpin, ceara formeaz o pelicul ntrerupt numai la nivelul stomatelor; la un alt palmier de cear, Ceroxylon andicola, stratul de cear poate atinge 5 mm grosime, putnd fi colectat i valorificat. n ceea ce privete biodegradarea cutinei: n natur, aceasta este reciclat de microflora solului (bacterii, levuri); unele ciuperci saprofite pot fi cultivate pe substrat de cutin ca unic surs carbonat. Mamiferele posed lipaze care degadeaz acest polimer. La nivelul plantei au loc procese de cutinoliz variate: - mrirea suprafeei epidermice implic extinderea cuticulei, ce se realizeaz prin slbirea reelei moleculare i intususcepiunea

14

unor noi segmente hidrocarbonate; - epiderma ce protejeaz suprafaa receptoare a stigmatului are celule cu pereii externi cutinizai, motiv pentru care tubul polinic trebuie s elaboreze o cutinaz care s realizeze o digestie local n urma creia s poat ajunge la ovul; - multe ciuperci parazite ptrund n planta gazd elabornd o cutinaz fungic; unele specii de plante au dobndit capacitatea de a elabora inhibitori selectivi ai producerii sau ai activitii cu tinazelor.

Figura 10 Ceara epicuticulara a suprafata unei seminte de cactus, b suprafata unei petale de musetel, c intresuperea stratului de ceara pe samanta de cactus, d aspectul ondulat al cerii epicuticulare pe samanta de cactus Suberificarea const n impregnarea pereilor celulozici cu suberin (de natur lipidic). Procesul de suberificare privete organe relativ n vrst, adesea cu structur secundar; rareori,

cuticula

epiderma

suber

Figura 11 - Suberul

15

suberificarea reprezint un rspuns la rniri (cnd epiderma este distrus), rezultnd un suber de cicatrizare. n celulele de suber adcrustarea de lipide are loc centripetal afectnd toi pereii celulari, fcndu-i impermeabili pentru lichide i gaze, mpiedicnd schimburile dintre celule i mediul extern, conducnd la moartea acestora. De aceea funciile de izolare i proteci e caracteristice suberului se realizeaz numai ce ctre perei atunci cnd celulele mor. Suberificarea poate fi total la fag, salcie sau parial la plop, arar. Lignificarea const n impregnarea pereilor celulozici cu lignin, compus de natur polifenolic, care nconjoar microfibrilele de celuloz, umplnd spaiile dintre ele, mrind duritatea, rezistena mecanic i chimic a peretelui, micorndu -i flexibilitatea. Poate fi total (n sclerenchimul trziu) sau parial (n xilemul timpuriu). Este un proces ireversibil, propriu cormofitelor, ndeosebi vaselor de lemn i elementelor de sclerenchim, rareori celulelor epidermice (ca la poaceeee). Pereii lignificai au o organizare ternar, cuprinznd un schelet microfibrilar de celuloz foate bine organizat, o matrice amorf predominant glucidic i o reea de polifenoli ncrustai. ntre biopolimerii elaborai pe suprafaa globului, ligninele ocup locul al doilea dup celuloz, mpreun reprezentnd 60-80% din biomasa terestr. Din punct de vedere biochimic, ligninele rezult din copolimerizarea a trei polimeri: alcoolul cumarilic, alcoolul coniferilic i alcoolul sinapilic. n practica forestier i n industria lemnului se noteaz cu G lignina de conifere i cu S lignina de angiosperme, diferena datorndu-se procentajului cu care particip cei trei monomeri cu valoare chemotaxonomic. Figura 12 Sectiune prin tulpina de curpen de padure (Clematis vitalba) coloratie cu safranina (rosu structuri formate din celule cu pereti ingrosati si lignificati) si fast green (albastru structuri formate din celule cu pereti subtiri, celulozici) Celulele care-i lignific pereii celulari sunt decelabile la microscopul fotonic prin utilizarea unor colorani specifici; astfel, prin metoda dublei color ri cu verde iod-carmin alaunat sau albastru de metilen- rou ruteniu sau safranin-fast green se pot distinge structurile lignificate de cele nelignificate. Caracteristice pentru lignificare sunt reaciile cu sulfat de anilin i acid sulfuric, care confer ligninei o culoare galben aurie (deci nuaneaz culoarea natural a ligninei, care este cea galben), precum i cea cu fluoroglucin i acid clorhidric, care o coloreaz n rou.

16

Lignificarea pereilor are numeroase consecine agro -alimentare i industriale; ele merg de la reducerea digestibilitaii furajelor pn la necesitatea de a rafina pastele de hrtie. n cazul maturrii rachiului i a coniacului, calitile lor gustative vin n mare parte din ligninele care s -au dizolvat din butoaie de stejar, unde ele trebuie s stea mai muli ani. O fracie de polimeri fenolici este degradat i oxidat, trecnd n mediul hidroalcoolic; principalul produs aromatic de maturare este vanilina (aldehida cinamic). Lignina este foarte greu biodegradabil; numai anumite bacterii i cteva ciuperci (Polyporus) sunt capabile s produca peroxidaze i n prezena apei oxigenate s produc o lignoliz complet. Mineralizarea este procesul de impregnare a pereilor celulari cu diferite sruri minerale i organice, ceea ce le confer rigiditate, soliditate i rezisten. Substanele ncrustante sunt reprezentate mai cu seam de carbonat de calciu i dioxid de siliciu. Calcificarea poate conduce la algele roii din genul Corallina la formarea unui fel de carapace protectoare foarte dur, care le confer aspectul unor pietre. La plantele superioare, calcificarea pereilor este localizat: astfel, n pereii unor peri protectori numii peri cistolitici (de la cnep, hamei, mierea ursului) ntlnim concreiuni amorfe care le confer o anumit rigiditate; n frunza de la Ficus exist structuri numite cistolii, n care un repliu intern din perete funcioneaz ca loc de acumulare calcaroas pe un schelet celulozic. Dizolvarea carbonatului de calciu se poate realiza, pe o seciune transversal prin frunz, cu ajutorul unei picaturi de acid acetic glacial.

Figura 13 Imagini SEM ale unor diatomee - (A) Biddulphia reticulata. (B) Diploneis sp. (C) Eupodiscus radiatus. (D) Melosira varians.

Figura 14 Par tector si secretor de pe frunza de urzica Urtica dioica

Silicificarea poate fi ntlnit la algele unicelulare din grupa diatomeelor (fig. 13), peretele acestora fiind constituit din dou valve silicificate, inextensibile , foarte fin ornamentate. Tulpinile poaceelor i ciperaceelor au pereii celulelor epidermice mineralizai,cu o cantitate apreciabil de dioxid de siliciu (la poacee, din aceast cauz marginile frunzelor devin tioase), iar la speciile de ferigi din familia Equisetaceae exist mult acid silicic (motiv pentru care animalele care le consum pot manifesta fenomene de hematurie). n cazul perilor de la Urtica dioica (fig. 14), cea mai mare parte a peretelui este calcificat; doar vrful este silicificat, ceea ce determin ruperea lui n punctele diferit mineralizate i transformarea ntr-un minuscul vrf de ac de sering, care se adncete n piele, lsnd s difuzeze coninutul celular urticant. Gelificarea este procesul prin care compuii pectici se mbib cu ap, se hidrolizeaz, transformndu-se ntr-o masa gelatinoas. Lichefierea poate urma gelificrii i const n dizolvarea i dispariia peretelui celular. Ambele sunt procese de degradare controlat a peretelui celular (autoliz), frecvent ntlnite la celulele esuturilor definitive (de exemplu, liza pereilor comuni dintre

17

articulele vaselor de lemn numite trahei de la angiosperme; fuziunea de celule secretoare ce alctuiesc reeaua de laticifere). Mucilagiile care rezult n urma gelificrii pot fi pectice, calozice, celulozice i pectocelulozice. Depunerea mucilagiilor pe pereii celulari se ntlnete la numeroase semine, n celulele tegumentului seminal de la in, gutui, traista ciobanului. De asemenea, se mai pot ntlni mucilagii n endospermul seminelor de la unele fabacee, n celule izolate (idioblaste) din parenchimurile corticale i medulare ale tulpinilor unor malvacee, tiliacee, sterculiacee, ramnacee. Unii perei celulari dispar prin aceste transformri i se formeaz buzunare sau pungi c u mucilagii (la prun, migdal, cire, tei). La plantele acvatice, mucilagiile exud i formeaz n jurul plantei un strat protector. n tehnicile de laborator, mucilagiile se evideniaz cu soluii de eozin, hematoxilin i albastru de toluidin, cnd se coloreaz metacromatic n nuane de rou -violet . Abscizia. Cderea frunzelor, petalelor, fructelor nu se datorete numai unei simple rupturi a esuturilor senescente sub aciunea factorilor externi, ci este i rezultatul unui ansamblu de modificri biochimice i structurale ce afecteaz celulele situate la baza organului i care constituie zona de separaie. Aceast activitate celular conduce la dizolvarea lamelei mediane. Abscizia este indus de o modificare a balanei fitohormonale; auxina acioneaz ca retardant, iar etilena i acidul abscizic sunt accelerani. Punctuaiile. Se edific nc din telofaz, o dat cu formarea plcii celulare discontinue, traversat pe alocuri de profile de RE i de filamente ale fusului de diviziune, prefigurndu -se punctuaiile (prin care trec plasmodesmele (fig. 15): manoane cilindrice limitate de plasmalema celor dou celule alturate); la nivelul punctuaiilor nu se depun ulterior substane celulozo -pectice n pereii primar, i mai ales, secundar. Pot fi: simple canalicule simple sau ramificate (circulare sau eliptice n seciune transversal) la nivelul peretelui secundar, fiind formate din cavitate, deschidere, fundul punctuaiei; sunt prezente ntre celulele de parenchim, mecanice, protectoare; areolate: peretele secundar se deprteaz de cel primar n dreptul punctuaiei (format din cavitate, deschidere i fundul punctuaiei, cu torus la gimnosperme i fr torus la angiosperme); sunt prezente ntre vasele de lemn; semiareolate ntre un vas de lemn i o celul de parenchim.

Figura 15 - Plasmodesme

18

2.2. Plasmalema
Este o membran biologic simpl, elementar, unitar, trilamelar, de natur lipoproteic, cu grosimea medie de 7,5 nm. La celulele vegetale este acoperit de peretele celular , n timp ce la cele animale asigur contactul cu mediul extern. Funcii: barier semipermeabil ce permite selectarea schimburilor ntre celul i mediul extern, asigur recunoaterea moleculelor informaionale i transmiterea mesajelor n interiorul celulelor, are rol esenial n biogeneza peretelui celular. Pe baza datelor acumulate referitoare la compoziia chimic i proprietile fizice i fiziologice ale plasmalemei, au fost elaborate mai multe modele ipotetice privind ultrastructura i organizarea ei molecular. Primele modele au fost elaborate de Danielli i Harvey (1935), Davson i Danielli (1943): potrivit acestor modele, plasmalema const dintr-un strat bimolecular de fosfoaminolipide avnd grosimea de 2,5 nm, acoperit pe ambele fee de cte un strat subire de proteine, fiecare de cte 2,5nm. Fosfoaminolipidele sunt asociate prin grupri hidrofobe, nencrcate electric, orientate fa n fa, iar gruprile hidrofile, ncrcate electric, sunt orientate spre straturile proteice. Faptul c aceeai structur tripartit s-a dovedit a fi prezent i n cazul membranelor de la nivelul RE, a dictiozomilor, mitocondriilor, plastidelor, nucleului .a., l -a condus pe Robertson n 1959 la elaborarea conceptului de membran unitar. Singer si Nicolson, 1972 au elaborat un nou model de organizare molecular a membranei plasmatice, pe care l-au numit fluid mosaic model (fig. 16). Conform acestui model, plasmalema este constituit dintr-o ptur dubl, continu, de natur lipidic, n care sunt ngloba te, din loc in loc, macromolecule proteice, izolate. Proteinele membranare sunt numeroase i variate, dar mereu globulare; unele sunt proteine periferice (extrinseci), altele sunt proteine integrate (intrinseci).

proteine

lipide

Figura 16 Modelul mozaicului fluid Lipidele i proteinele se deplaseaz unele fa de altele n membran sub efectul agitaiei termice . Cercetrile electronomicroscopice, corelate cu cele biochimice, au reliefat asimetrie n privina compoziiei n lipide a membranei pe cele doua fee. Se apreciaz c, compoziia n lipide

19

variaz cu unitatea taxonomic de referin i cu tipul de membran. n privina cantitii se constat o scdere procentual a lipidelor n raport cu proteinele n membranele energizante al e plastidelor i mitocondriilor. ntre funciile principale ale plasmalemei (fig. 19) menionm pe cea de endocitoz, proces legat de absorbia pe suprafaa celulei a macromoleculelor dizolvate n ap n cazul pinocitozei (fig. 17), sau a anumitor particule n cazul fagocitozei (fig. 18); o poriune de plasmalem se invagineaz, se umple cu picturi de ap, se desprinde de suprafaa celulei, rezultnd o pinocit (endocit) ce se detaeaz i acum se numete fagocit (liber n hialoplasm). Tot n hialoplasm se afl, ntre altele, i lizozomi (rezultai din fragmentarea RE) ce conin hidrolaze; dac membrana lor se dizolv, hidrolazele vor trece n hialoplasm; dac ei fuzioneaz cu fagozomii, rezult citolizomi, n interiorul crora hidrolazele vor asigura degradarea compuilor venii din exterior i acumulai n fagozomi.

plasmalema

Vezicula de pinocitoza

Figura 17 - Pinocitoza

Figura 18 - Fagocitoza

20

Figura 19 Plasmalema (valuta la microscopul electronic cu transmisie) Evidenierea plasmalemei la microscopul fotonic se poate realiza prin pr ocesul de plasmoliz; n prezena unei soluii hipertonice, ca de exemplu soluia de NaCl, celula pierde apa, hialoplasma se contract, se deprteaz de perete, antrennd astfel dup ea plasmalema. Ea rmne, totui, aderent de perete n anumite puncte, de unde i prezena unor prelungiri sau tractusuri fine (numite i filamentele Hecht), constituite numai din plasmalem, care poart picturi foarte fine de citoplasm, separate de masa celular.

2.3. Hialopasma
Este substana fundamental a citoplasmei, numit i citosol, care cuprinde: - o parte structurat, alcatuit din numeroase tipuri de proteine fibrilare i globulare, unite prin microfilamente i microtubuli; - un lichid coninut n ochiurile reelei fibrilare proteice, care cuprinde 70% ap i 30% compui organici i minerali. n hialoplasm se afl i poliribozomi liberi particule ribonucleoproteice implicate n proteinosintez; proteinele rezultate alctuiesc matrixul citoplasmei, microtubulii, microfilamentele, membranele diferitelor organite. Hialoplasma este un sistem de substane macromoleculare n stare coloidal. Coloizii macromoleculari sunt de tip hidrofil: particulele dispersate au afinitate pentru ap i pot fi mai mult sau mai puin vscoase (datorit frecrii dintre ele sau datorit legturilor ce persist ntre ele). Aceti coloizi hidrofili, cu macromolecule proteice filamentoase, realizeaz un fel de reea tridimensional care include: apa liber (mediul dispersant) i macromolecule mici (mediu dispersat) ntre elementele citoscheletului (microtubuli, microfilamente), cum ar fi acizii aminici, nucleotide, glucoz, fosfolipide, ioni de K, Mg, Ca. n celula vegetal vie, coninutul de ap ajunge la 85 -90%. Exista 5 forme de ap celular: apa n exces, a crei pierdere nu produce perturbri n celul; apa metabolic, a crei eliminare nu provoac moartea celulei, dar perturb metabolismul; apa vital, a crei pierdere produce moartea celulei (n general, o pierdere de 25 -30% produce acest fenomen; unii muchi rezist la o deshidratare de pn la 95%); apa rezidual, care se poate nc extrage dup moartea celulei; apa legat (3 -4% din apa celular), care face parte din moleculele proteice i nu poate fi extras. ntre macromolecule persist fore de coeziune intermacromoleculare, ce creeaz o reea n ochiurile creia se afl ap liber, mici molecule organice solubile, ioni. Hialoplasma are o anumit rigiditate (mai ales la periferie), care variaz n cursul diviziunii celulare; sub influena diferiilor factori ea poate suferi transformri reversibile de la starea de sol (cu particule mici, puin mbibate n solvent i dispersate) la cea de gel (cu particule voluminoase, puternic mbibate cu solvent, aderente ntre ele), precum i de la starea de gel la cea de sol, fenomen numit tixotropie.

21

Figura 20 Cicloza de rotatie

Figura 21 Cicloza de circulatie Citoplasma vie se caracterizeaz prin mobilitate numit cicloz; aceasta este de dou tipuri: cicloza de rotaie (fig. 20), cnd celula are o vacuol mare, central, cito plasma fiind parietal; are loc totdeauna n acelai sens, antrennd n micare organitele din ea; la diferite celule, sensul ciclozei este diferit; cicloza de circulaie (fig. 21), cnd vacuola este traversat de cordoane citoplasmice; are loc n sensuri diferite de-a lungul trabeculelor. Viteza de deplasare a citoplasmei variaz foarte mult n aceeai celul (n medie 50 de micrometri / secund), fiind mai mare la celulele tinere. Cicloza este influenat de diveri factori (lumina, temperatura, variaiile osmotice), care pot fi suspendai temporar prin aciunea anestezicelor. Prin cicloz, deplasarea organitelor celulare favorizeaz schimburile de materie i energie n interiorul celulei, transporturile de metabolii sau de produi ai catabolismului, re nnoirea constituenilor celulari.

22

Compoziia chimic a hialoplasmei: ap 80%; compui organici glucide, lipide, proteine: 75% din materia organic a celulei i compui minerali, fie n stare de sruri disociate n ionii lor n apa hialoplasmei, fie legai chimic de molecule organice (ca de exemplu fosforul, n acidul fosforic al acizilor nucleici). Funciile hialoplasmei: sediul unui mare numr de reacii ce constituie metabolismul intermediar; sediul a mii de enzime ce catalizeaz reacii n urma cr ora au loc biosinteze de acizi grai, acizi aminici, nucleotide; suportul organitelor celulare, deplasarea acestora i fluxul membranar determinnd micarea de cicloz.

2.4. Reticulul endoplasmic (RE)

A fost descoperit de K. Porter n 1945 la microscopul electronic. Este un sistem complex de caviti (sacule, cisterne, vezicule) sau canalicule fin ramificate i anastomozate, aflate n citoplasm. Toate aceste formaiuni sunt delimitate de citosol prin membrane simple, lipoproteice cu grosime de 7,5 nm. Membranele RE au legturi cu diferite organite (fig. 22): nucleu, ribozomi, dictiozomi, dar i cu plasmalema, avnd rol n sinteza i conducerea substanelor proteice n compartimentele celulare. RE este mai dezvoltat n celulele difereniate dect n ce le meristematice. Sructura lamelar a RE granular (RE g) (fig. 23, 24). Elementele caracteristice acestui tip de RE sunt lamelele fine (cisterne, sacule sau caviti aplatizate) dispuse adesea ntr -un fel de foie paralele, ale cror membrane sunt tapisate cu ribozomi, granule sferice cu diametrul de 15 nm, lipsite de membran i care conin 60% ARN i 40% proteine; acetia se fixeaz de membran prin subunitatea lor mare.

Anvelopa nucleara Nucleu

Ribozomi

RE granular

RE neted
Figura 22 Reticulul endoplasmic si legaturile cu alte oragnite

23

Dispoziia i numrul lamelelor variaz n funcie de tipul celular i de impotana activitii sale. Cnd REg este foarte bine dezvoltat, dispoziia lamelelor este ordonat , paralel. In celulele mai puin active, lamelele sunt mai puine la numr i relativ dispersate n masa citoplasmei. La majoritatea celulelor, mici regiuni membranare ale REg sunt pe alocuri lipsite de ribozomi; ele stau la originea formrii de mici vezicule de tranziie, limitate de o membran neted. Acestea asigur transportul intracelular al constituenilor memrbranari sau ai proteinelor din coninutul saculelor spre alte destinaii (plasmalem, aparat Golgi, lizozomi). Asemenea regiuni netede ale REg i veziculele de tranziie constituie RE de tranziie. REg este prezent n toate celulele nucleate, fiind deosebit de abundent n celulele specializate n sinteza i secreia de proteine i glicoproteine. Structura tubular a RE neted (REn) (fig. 23). Acest tip de RE este format dintr-un labirint de tubuli sau canalicule fine, cu diametrul de 30-60 nm, ramificate i anastomozate, ce este infiltrat n toat citoplasma. Faa extern a membranelor sale este lipsit de ribozomi. REn are proprietatea de a stabili contacte strnse cu mitocondriile, peroxizomii i depozitele de glicogen (n celulele animale). (PLANA III C) Funciile RE: - intervine n formarea anvelopei nucleare (exist o legatur direct ntre spaiul perinuclear i cavitatea RE); - la nivelul REg se deruleaz principalele etape ale proteinosintezei; - REn asigur sinteza lipidelor; - RE are rol de colector, transportor i distribuitor de diferite substane (venite din mediul extra - i intracelular); - fiind n contact cu citoplasma vecin prin intermediul plasmodesmelor, RE intervine n transmiterea excita iilor; - RE, prin dilatrile sale locale, particip la formarea vacuolelor; de asemenea, el poate sta la originea altor organite: mitocondrii, dictiozomi, proplastide .

Reticulul endoplasmic granular

Reticulul endoplasmic neted

Figura 22 Reticulul endoplasmic granular si RE neted

24

Figura 23 Reticulul endoplasmic granular

2.5. Aparatul Golgi

Cuprinde dou tipuri de elemente: dictiozomii i veziculele golgiene. Dictiozomii rezult prin suprapunerea i dispunerea n teancuri a saculelor sau a cist ernelor aplatizate n numr de 4-6, uneori chiar pn la 40. Sunt uor curbai i umflai la capete, fr coninut, fiind limitai de o membran lipoproteic simpl, groas de 6 -7,5 nm. Membranele diverselor sacule poart echipamente enzimatice. Sacula este unitatea de baz a dictiozomilor. Veziculele golgiene sunt limitate, de asemenea, de o membran simpl, lipoproteic, de 7,5 nm. Sunt vezicule de secreie sau granule de secreie ce rezult prin nmugurirea lateral a saculelor ce formeaz dictiozomi, de care apoi se detaeaz. Aparatul Golgi (fig. 24, 25) reprezint o structur dinamic format plecnd de la REg; acesta din urm, dup ce s-a separat de ribozomii ce-i tapisau membrana, emite vezicule de tranziie ce se vor asambla pentru a forma prima sacul a dictiozomului (sacula de la faa cis). Ulterior se formeaz noi sacule ce mping progresiv pe primele formate spre cealalt extremitate a teancului, acolo unde se afla faa trans. Ultimele sacule de la aceast fa devin vezicule golgiene (de secreie). Funcii: - intervine n formarea fragmoplastului i a lamelei mediane a celulei n cursul citocinezei; - n celulele tinere, veziculele golgiene se grupeaz n lomazomi, localizai ntre plasmalem i perete (ulterior, poliholozidele lor se integreaz n peretele celular); - veziculele golgiene stau la originea lizozomilor primari; - membrana veziculelor golgiene intervine n rennoirea plasmalemei. In citodiereza acumuleaza unii compusi in vezicule in vederea excretiei. Compusii ce se acumuleaza in vezicule pot fi secretati de RE si numai transformati in aparatul Golgi sau pot fi secretati de aparatul Golgi; ex: la plantele parazite (Cuscuta) dictiozomii concentreaza enzimele ce intervin in distrugerea peretelui celular si a protoplasmei celulelor gazda Intervin in elaborarea peretelui scheletic la celulele vegetale. In procesul de gelificare a peretelui scheletic si in producerea de mucilagii la algele rosii si la Malvaceae, dictiozomii sint foarte abundenti si produc vezicule golgiene ce se indreapta spre

25

peretele scheletic, eliberand mucilagiile si gumele (poliholozide); aceste celule sfarsesc prin moarte ca urmare a izolarii lor prin mucilagiile abundente produse. In celulele animale intervin in procesele de secretie celulara si in transportul substantelor secretate, in procesele de detoxifiere.

Membrane nucleara Por RE granular

Plasmalema Proteine

Vezicula secretoare Ribozom

Vezicula transport RE neted

de Ap. Golgi

Figura 24 Structura si functionarea aparatului Golgi

Figura 25 Aparatul Golgi observat la microscopul electronic cu transmisie (TEM)

26

2.6 Lizizomii (fig. 26, 27)

Au fost descoperii i studiai din punct de vedere biochimic mai nti n celulele animale; ulterior au fost descrii i n celulele vegetale, unde au rspndire foarte limitat. Sunt vezicule mici, de circa 150-300 nm n diametru, limitate de o membran simpl, lipoproteic, de 7,5 nm, ce conin enzime digestive (hidrolaze acide), capabile s degradeze toate substanele biologice. Alterarea membranei lizozomale conduce la eliberarea acestor hidrolaze n citoplasm producnd moartea celulei. Funcii: - sunt responsabili de digestia substanelor de origine extracelular (heteroliz); - ei pot digera mici poriuni din celul, izolate n prealabil de restul citoplasmei printr -o membran simpl (autoliz).

Plasmalema Vacuola digestiva

Particular alimentara

Lizozom

Vezicula transport

de

Figura 26 Lizozomii: origine si functii

27

Figura 27 Lizozom (observat la microscopul electronic cu transmisie) 2.7. Ribozomii (granulele Palade) Sunt particule ribonucleoproteice cu diametrul de 20-30 nm, implicate n sinteza proteinelor, prezente n numr mare n citoplasma tuturor celulelor procariote i eucariote vegetale i animale. Sunt lipsii de membran. Ribozomii din celulele eucariote sunt localizai n citoplasm, nucleu, plastide i mitocondrii. Ribozomii citoplasmici pot fi liberi sau asociai cu membranele RE (fig. 28), crora le confer un aspect rugos (REg). n celulele meristematice, n care RE este slab dezvoltat, dominani sun ribozomii liberi, n timp ce n celulele difereniate, marea majoritate a ribozomilor sunt asociai cu RE. Fenomenul poate fi considerat reversibil, deoarece se constat desprinderea ribozomilor odat cu mbtrnirea celulelor. Frecvent, ribozomii se ordoneaz n grupe de cte 4 -5, care constituie adevratele uniti funcionale, cunoscute sub denumirea de polizomi (poliribozomi). Legtura dintre ribozomi n agregate este realizat de molecule de ARN m, purttorul informaiei genetice nscris n ADN (fig. 29). Polizomii liberi n citosol elaboreaz proteine destinate celulei, iar cei legai de me mbranele RE g sintetizeaz proteine ce vor fi excretate. Ribozomii sunt constituii din dou subuniti caracteristice, una mare i alta mic (fig. 30), care prezint un coeficient de sedimentare exprimat n uniti Svedberg (S). La procariote exist ribozomi de tip 70 S, subunitatea mare fiind de 50S, iar cea mic de 30 S. La eucariote exist ribozomi de tip 80 S, subunitatea mare fiind de 60 S, iar cea mic de 40 S. n cloroplaste i mitocondrii se afl ribozomi de tip 70 S.

Figura 28 Ribozomi stasati de reticulul endoplasmic (imagine TEM)

28

Figura 29 Sinteza proteinelor

Figura 30 Alcatuirea ribozomului

29

2. 8. Microcorpii. Sferozomii. Corpii paramurali

Microcorpii sunt organite veziculiforme limitate de o membran simpl, lipoproteic ce caracterizeaz numai celulele vegetale. Au coninut enzimatic i sunt de dou categorii: peroxizomi, ce conin enzime oxidative ce descompun apa oxigenat; - glioxizomi, ce conin enzime ce intervin n transformarea lipidelor n glucide; sunt caracteristici pentru seminele oleaginoase n timpul germinrii acestora. Sferozomii sunt organite sferice, cu membran simpl, lipoproteic i n care se sintetizeaz ulei vegetal. Reprezint dilataii termin ale sau periferice ale RE, fiind precursorii granulelor lipidice libere, lipsite de membran din citosol. Corpii paramurali sunt organite veziculiforme sau tubuliforme cu membran simpl, lipoproteic, prezente numai n celula vegetal. Dupa localizare po t fi: - lomazomi, localizai ntre plasmalem i peretele celular, avnd rol n sinteza i depunerea substanelor ce intr n structura peretelui celular i plasmalemazomi, localizai sub plasmalem, n ptura periferic a citosolului, cu rol n acumularea de polizaharide ce vor fi utilizate n formarea peretelui celular.

2.9. Mitocondriile (condriomul celular)

Sunt organite prezente n celulele plantelor i animalelor oxibionte, cu excepia procariotelor i a hematiilor adulte. La nivelul lor sunt loca lizate principalele procese respiratorii. La microscopul fotonic apar ca mici granule, bastonae de 0,5 micrometri n diametru i de 0,5-1,5 micrometri lungime, uneori filamente flexuoase lungi de 20-30 micrometri, provenite prin bipartiia sau nmugurirea mitocondriilor preexistente; se pot forma i din evaginri ale RE sau prin fragmentarea anvelopei nucleare. Numrul lor variaz de la cteva sute la cteva mii / celul.

matrix

criste

Spatiu intermembranar Mb. interna

Mb. externa

Figura 31- Alcatuirea mitocondriei

30

n citologia vegetal, pentru evidenierea mitocondriilor se utilizeaz reactivi speciali: verde Janus B, care le coloreaz n verde; hematoxilina feric, care le coloreaz n negru; fucsina, care le confer culoare rou-purpuriu (dup fixare cu aldehid formic, bicroma t de potasiu sau tetraoxid de osmiu). La microscopul electronic, mitocondriile, indiferent de form se prezint sub forma unor complexe structurale delimitate de o anvelop, ce nchide un spaiu numit strom (matrice, matrix). Anvelopa (membrana dubl), groas de 25 nm, este format din dou membrane simple de cte 7,5 nm, separate de un spaiu intermembranar, clar, de 10 nm (fig. 31, 32). Membrana extern este neted, permeabil pentru aproape toate moleculele mici i conine proteine, fosfolipide i fosfoaminolipide. Membrana intern se invagineaz n strom, formnd criste mitocondriale sau tubuli dispui mai mult sau mai puin perpendicular pe suprafaa organitului; numrul cristelor mitocondriale crete o dat cu vrsta i specializarea celulelor. Aceast membran conine 80% proteine i 20% lipide; ea este impermeabil pentru toate moleculele i necesit obligatoriu participarea transportorilor activi.

Figura 32 Mitocondrii dintr-o celula din fructul tanar de tomate Membranele mitocondriei sunt asimetrice, adic proteinele de pe cele dou fee sunt diferite ca structur i funcie. Feele interne ale cristelor mitocondriale sunt tapisate de sfere de 9 nm n diametru (susinute de cte un pedicel), numite oxizomi sau particule elementare. Fiecare particul elementar este format din ansamblul proteinelor responsabile de sinteza ATP; acest complex enzimatic este cunoscut i sub numele de ATP -az. Stroma sau matrixul este un gel care conine 50% proteine (mitoribozo mi, ADN mitocondrial liniar sau dublu helicoidal).

31

Analiza chimic global a mitocondriilor cuprinde: ap (66%), proteine (22%), lipide (11%), nucleotide (ADP i ATP), coenzime acceptoare de hidrogen, ioni minerali (potasiu, calciu, sodiu, mangan, fier), ADN, ARN. Funciile mitocondriilor sunt variate: - membrana extern are transportori de electroni; spaiul intermembranar are doar enzime care realizeaz reacia ATP +AMP 2 ADP; - membrana intern ndeplinete funcii legate de transportul de electroni ai lanului respirator, precum i la nivelul sferelor feei sale interne, n formarea de ADP; n plus, ea are numeroi transportori transmembranari ce controleaz foarte exact intrrile i ieirile compuilor stromei; - n strom se deruleaz lanurile reaciilor de dehidrogenare, productoare de energie (ciclul Krebs). La nivelul mitocondriilor sunt degradate substanele i rezult ATP; aceast sintez confer mitocondriei un rol de central energetic. Este motivul pentru care mitocondriile sunt localizate n apropierea structurilor celulare consumatoare de energie (de exemplu, n celulele anexe, responsabile de furnizarea energiei necesare circulaiei sevei elaborate n tuburile ciuruite ale plantei).

2. 10. Plastidele (plastidomul celular)

Sunt organite proprii celulei vegetale. Se disting: cloroplaste, care elaboreaz clorofil i amidon; amiloplaste sau leucoplaste, care elaboreaz amidon; cromoplaste sau carotenoidoplaste, care conin pigmeti carotenoidici; proteoplaste, care acumuleaz prote ine; oleoplaste, care conin lipide. Toate categoriile de plastide din celulele adulte provin din proplastide; acestea au form sferic, diametrul de 1 micrometru i sunt limitate de o anvelop (membran dubl) ce izoleaz de citosol un compartiment intern numit strom. Cloroplastele (fig. 33, 34) poart pigmentul verde numit clorofil, cu ajutorul cruia realizeaz fotosinteza, ceea ce confer plantelor rol de productori primari. Clorofila este concentrat n mici granule lenticulare numite grana, dispuse mai mult sau mai puin regulat i dnd cloroplastului o structur granular. Ansamblul regiunilor clare, nepigmentate, ce separ grana se numete strom (matrix).

cloroplast

ribozomi stroma ADN anvelopa

granum

Tilakoid granar

Figura 33 Alcatuirea cloroplastului

32

Figura 34 Cloroplast (imagine TEM) Morfologie. La alge (fig. 35), cloroplastele se numesc cromatofori; forma acestora variaz i este utilizat n taxonomie pentru a diferenia speciile, genurile i grupele ntre ele: la Chlamydomonas i Chlorella, alge unicelulare, are aspect de cup sau de clopot; la Ulothrix, alg pluricelular, are aspect de inel ecuatorial, cu marginile dantelate; la Cladophora, alg pluricelular ramificat, este reticulat; la Spirogyra, alg pluricelular filamentoas, are aspect de panglic spiralat. n ceea ce privete numrul de cromatofori / celul, acesta poate fi: ntre 1 -6 la Spirogyra, 2 n form de stea la Zygnema, mai multe zeci cu aspect lenticular la Bryopsis. Majoritatea cromatoforilor au una sau mai multe granule proteice numite pirenoizi n jurul crora sunt granule de amidon. Pirenoizii sunt corpusculi sferici, avnd 1 -10 micrometri n diametru. La algele verzi i la unele alge roii, pirenoizii sunt intraplastidiali, iar la algele brune, extraplastidiali, fixai n afara cromatoforului cu ajutorul unui pedicel. Corpul central al pirenoidului este de natur lipoproteic i se numete pirenozom. La unele alge verzi, pirenoizii mai conin ADN i clorofil . La plantele superioare, cloroplastele sunt lenticulare, mari, vizibile la microscopul fotonic. Dimensiunile lor variaz cu specia, organul analizat, tipul de esut vegetal (la frunze, cloroplastele din celulele esutului palisadic sunt de 2,5 ori mai mari dect cele din esutul lacunos). Ultrastructur. Cloroplastul este limitat de o anvelop (membran dubl), ce nchide o strom incolor. Fiecare din cele dou membrane simple are grosimea de 7,5 nm, ntre ele aflndu-se un spaiu clar de 10 nm. Membrana extern este neted. Membrana intern emite invaginaii, din care unele se prelungesc n lamele stromatice, dispuse paralel cu axa mare a organitului. ntre lamelele stromatice (stromatilacoizi) se formeaz, pe alocuri, un anumit numr de saci mici, aplatizai, numii saculi granari (granatilacoizi) dispui n teancuri (de la 2 pn la 60 ntr-un teanc); acetia

33

provin din dilatri ale lamelelor stromatice, care se etaleaz paralel cu aceste lamele i de care se detaseaz. Ansamblul format de saculele granare i poriunile de lamele stromatice care le mrginesc constituie aa-numitul granum.

Chlamydomonas
Figura 35 Cromatoforii la alge

Spirogyra

Tilacoizii cuprind: - uniti ptratice de 15 nm, care apar pe cele dou fee ale membranei (tetramere de complexe cromoproteice ale fotosistemului II , cu rol n captarea fotonilor) i care conin aproximativ 300 de molecule de clorofile i aproximativ 50 de molecule de pigmeni carotenoizi, toate nglobate prin polul lor hidrofob n ptura lipidic a membranei tilacoidale (fotosintetizant); aceste uniti ptratice au fost asimilate cu uniti funcionale numite cuantozomi; - uniti mai mici (8 nm), tot transmembranare, cu rol esenial n funcionarea fotosistemului I; uniti intermediare (9 nm) pedicelate, situate exclusiv pe faa stromatic a mem branei tilacoidale, ndeosebi la extremitile tilacoidelor (ele sunt factori de cuplaj clorofilieni, care servesc la sinteza de ATP, ca i n mitocondrie). Stroma este incolor, avnd o structur asemntoare cu cea a hialoplasmei. Este de natur proteic, coninnd picturi lipidice i cteva granule de amidon; acestea se formeaz la sfritul zilei, dar sunt hidrolizate n cursul nopii n glucoz, care migreaz n plant. n strom s au evideniat i plastoribozomi, ARN, ADN. Analiza chimic global a cloroplastului evideniaz: ap (50%), proteine (25%), lipide (15%), glucide, clorofil (3%), carotenoizi (2% - caroten, licopen, xantofil), ARN (2%), ADN (0,5%), elemente minerale ( Mg, Fe, Cu, Mn, Zn), nucleotide (ndeosebi ADP i ATP), enzime (dehidrogenaza, fosforilaza, amilaze, izomeraze, enzime ale ciclului Krebs), coenzime acceptoare de hidrogen. Cromoplastele (fig. 36) sunt plastide a cror strom lipoproteic incolor conine pigmeni carotenoizi solubili n lipide: xantofila (galben), carotenul (rouoranj) i licopenul (rou). Aceti pigmeni se prezint sub form de granule, picturi, tubuli sau cristale (ace, tablete).

34

Cromoplastele sunt responsabile de culoarea particular a unor flori, rdcini, fructe i a frunzelor de toamn. Indirect, ele asigur rspndirea unor fructe i semine, precum i polenizarea (atrgnd insectele sau psrile prin culorile pe care le dau). Prin hidroliz (care are loc n mod natural n ficatul rumegtoarelor), carotenul se transform n vitamina A.

Figura 36 Cromoplaste din mezocarpul fructului de tomate si de gogosar Amiloplastele (fig. 36, 37)provin din plastide incolore care elaboreaz amidon; sunt abundente n parenchimurile amilifere, unde amidonul constituie un produs de rezerv. Stroma amiloplastelor are un aspect fin-granular i se reduce teptat pe msura biosintezei i depunerii de amidon. Se formeaz una sau mai multe granule de amidon, punctul de plecare n constituirea granulului numindu-se hil. Originea plastidelor. Provin din proplastide sau prin bipartiia plastidelor preexistente. Zigotul are plastide provenite de la gametul femel, existnd o ereditate plastidial: uniparental (matern, rar patern, ca la conifere) i excepional biparental (ca la mucat).

Figura 36 Amiloplaste din celulele tuberculului de cartof

35

Figura 37 Amiloplast (imagine TEM)

Interconversiunile plastidiale (fig. 38). n zigot i n celulele meristematice ale cormofitelor sunt numai proplastide; acestea devin amiloplaste n rdcini i tulpini subterane (metamorfozate); devin cloroplaste n primordiile foliare; devin cromoplaste n petalele unor flori.

Cloroplast senescent Cloroplast matur

Proplastid

Cromoplast

Figura 38 Interconversiunile plastidiale

Amiloplast

36

Plastidele se pot transforma dintr-un tip n altul, dupa cum urmeaz: - n timpul maturrii fructelor sau n timpul nglbenirii frunzelor, cloroplastele se transform n cromoplaste. Dup unii autori, cromoplastele nu ar proveni din degenerarea cloroplastelor deoarece plastidele verzi senescente nu sunt altceva dect gerontoplaste. Cromoplaste adevrate sunt numai plastidele care conin carotenoide i nu conin clorofil; ele sunt plastide nefotosintetizante, dar capabile s biosintetiz eze carotenoide. De asemenea, nglbenirea frunzelor nu s -ar datora apariiei carotenoidelor, ci dezorganizrii tilacoidelor i apariiei unui numr mare de plastoglobuli; - nverzirea tuberculului de cartof expus la lumin este produs de transformarea amiloplastelor n cloroplaste; - nverzirea rdcinii tuberizate de morcov expus la lumin este determinat de transformarea carotenoplastelor n cloroplaste; - la ntuneric are loc un fenomen de etiolare a organelor verzi, datorit regresiei cloroplastelor i a amiloplastelor pn la stadiul de proplastide. 2. 11. Nucleul Este organitul descoperit pentru prima dat de R. Brown n 1831 (1835) n celulele petalelor de orhidee. Ulterior a fost semnalat i n celula animal. n 1838, M. Schleiden generalizeaz prezena nucleului n toate celulele vegetale. Rolul nucleului n procesele de nmulire, difereniere, cancerizare, sinteza proteinelor citoplasmice i-a determinat pe citologi i biochimiti s -i acorde o atenie prioritar n cercetrile lor.

Cloroplaste

Nucleu

Figura 39 Celula asimilatoare cu nucleu si cloroplaste Morfologia nucleului interfazic. Nucleul eucariotelor este o achiziie a evoluiei; la procariote (virusuri, bacterii, cianobacterii) ntlnim un nucleoid (substan nuclear, ndeosebi ARN i ADN, fr existena unei anvelope nucleare).

37

Numr: la eucariote, fiecare celul are n general un singur nucleu; filamentele dicariotice ale unor basidiomicete au cte doi nuclei; unele alge verzi ( Caulerpa, Cladophora) au mai muli nuclei. Deosebim astfel: plasmodii, n cazul cariocinezelor neurmate de citocineze i sinciii, ce rezult n urma lizei pereilor despritori. Exist i celule anucleate: articulele tuburilor ciuruite, la care nucleul, devenit inutil n cursul difereierii celulare, a disprut. n cazul elementelor moarte la maturitate (vasele de xilem, elementele de sclerenchim, celulele de suber) nucleul a degenerat i a disprut o dat cu tot ce era viu n celul.

Cromatina RE granular

Nucleol Por

Anvelopa nucleara
Figura 40 Structura nucleului Forma variaz n funcie de vrst, forma i funcia celulei. n celulele tinere este sferic, iar n cele difereniate este eliptic. Forme particulare: semilunar (celulele stomatice ale frunzei de Tradescantia); fusiform (parenchimul medular din tulpina de la Tilia); filamentoas (celulele epidermice ale frunzei de Aloe). Poziia n celul poate fi: central (n celulele meristematice); parietal (n celulele difereniate); parietal, dar numai lng peretele extern (celulele epidermice de la frunza de Aloe); subterminal (n perii absorbani radiculari). Mrimea variaz de la 0,5-3 micrometri la unele ciuperci i alge, pn la 1000 de micrometri n cazul zigotului de Cycas revoluta; n medie, dimensiunile sunt cuprinse ntre 5 i 15 micrometri. Ultrastructur. Nucleul prezint patru componente: - anvelopa (membrana dubl); - unul sau civa nucleoli sferici sau ovoizi; - nucleoplasma, substana fundamental optic omogen ; cromatina, substan cu aspect variabil, dispersat n nucleoplasm. Dup aspec tul cromatinei, nucleul interfazic poate fi: eureticulat, reticulat, semireticulat i areticulat. Structurile eureticulat i

38

reticulat caracterizeaz speciile cu cromozomi lungi, iar cele semireticulat i areticulata pe cele cu cromozomi scuri. Anvelopa nuclear cuprinde dou membrane simple (fiecare avnd grosimea de 7,5 nm), separate de un spaiu perinuclear clar, gros de 10 -100 nm. Anvelopa prezint pori nucleari, ce ocup pn la 25% din suprafaa ei, reprezentnd deschideri prin care se pun n cont act direct hialoplasma i nucleoplasma. Porii au n acelai timp o structur granular i fibrilar, prezentnd: - un inel cu 8 particule sau granule sferice (cu diametrul de 20 nm) dispuse pe fiecare fa a porului; - o granul central (gradientul porului) cu diametrul de 25 nm, situat n centrul porului, fiind de natur ribonucleoproteic; - o diafragm, substana amorf de jur mprejurul porului, nclinat spre centrul deschiderii; - un material fibrilar de cromatin, cu diametrul de 5 nm, care reunete granulele (externe, interne i centrale) ntre ele. Prin intermediul membranei externe, spaiul perinuclear este n contact direct cu cavitile RE (unii autori consider c membrana nuclear este o poriune specializat a RE). Membrana intern este dublat (n celula animal) pe faa intern de o ptur groas (60 nm) de proteine, numit lamin fibroas . Nucleolul. Dup specie, nucleul interfazic poate conine unul sau mai muli nucleoli; nucleolul dispare n cursul mitozei. La microscopul electronic se observ c nucleolul nu are membran proprie i cuprinde fibrile i granule de ARN ce alctuiesc nucleolonema. Zona fibrilar, central, reprezint partea activ a nucleolului, aici avnd loc transcripiile primare; cuprinde numeroase filamente de ADN i mii de fibrile de ARN aflate n curs de sintez. Zona granular, periferic, reprezint locul de stocare a preribozomilor. n timpul formrii unui nou nucleu (la sfritul mitozei), nucleolii apar ntotdeauna n locuri precise, n contact cu o constricie secundar a cromozomilor de tip special, numii cromozomi organizatori de nucleoli. Rolul nucleolului este de a sintetiza ribozomii. Cele dou subuniti ale ribozomului se formeaz n nucleol, migreaz separat prin porii anvelopei nucleare n citosol , unde apoi se recombin; sinteza de ARN r se face exclusiv la nivelul nucleolonemei. Cromatina este un complex biochimic format din 96% nucleoproteine cu ADN, la care se adaug holoproteine i fosfolipide. Nucleoproteina cu ADN se prezint sub forma unui colier de nucleozomi, formai fiecare din 4 histone (H2A, H2B, H3, H4) n cte dou exemplare, nirate pe o molecul de ADN. Cromatina este considerat a fi un stadiu de organizare mai ridicat al nucleoproteinei cu ADN. ntregul edificiu (colier) este stabilizat de histona H1 i ionii de calciu. n timpul diviziunii celulare, cromatina sufer condensri, spiralizri suplimentare, care conduc la forma complet pe care o prezint cromozomul. Cromatina apare sub form dispersat (eucromatina sau cromatina activ) sau sub form condensat (heterocromatina sau cromatina inactiv din punct de vedere genetic); aceasta din urma se aglomereaz sub form de mase, bulgri sau cromocentri lng anvelopa nuclear i lng nucleol. Nucleoplasma este substana fundamental, fluid i omoge, care umple restul cavitii nucleare. Ea conine mai ales proteine (inclusiv ntreg echipamentul enzimatic necesar sintezei de ADN i ARN, nucleotide libere i ATP), ap i fosfolipide. Cromozomii au fost observai de W. Hoffmeister (1840) n celulele de la Zebrina pendula, iar denumirea a fost dat de W. Waldeyer (1888), datorit proprietilor lor de a se colora intens cu coloranii bazici (hematoxilin, safranin, albastru de toluidin, reactiv Schiff). Investigaiile electronomicroscopice au artat urmtoarele aspecte: - cromozomii tuturor organismelor eucariote au aceeasi compoziie fizico -chimic; - cromozomii i conserv proprietile structurale i funcionale de-a lungul generaiilor celulare; - cromozomii sunt structuri genetice dinamice, caracterizate prin autoreplicare, transcrierea informaiei genetice; - cromozomii i pstreaz individualitatea i sunt carcteristici ca morfologie i numr pentru fiecare specie, fiind un criteriu de idenificare taxonomic. n timpul mitozei, cromatina devine mai colorabil i se organizeaza n cromozomi: granule, bastonae, filamente arcuate, cu o zon de trangulare necolorabil, numita centromer (constricie primar). Inserta centromerului poate fi: - terminal (cromozom acrocentric sau cefalobrahial, adesea cu satelit); - submedian (cromozom submetacentric sau heterobrahial); - median (cromozom metacentric sau izobrahial). Uneori cromozomul are i o constricie secundar, ce poart satelit.

39

ADN

nucleosom

Fibra de cromatina 30 nm Fibra de cromatina 300 nm

Fibra de cromatina 700 nm

Fibra de cromatina 1400 nm cromatida a unui cromosom metafazic

Figura 41 Organizarea cromatinei

40

Numrul cromozomilor este par i constant la toate celulele somatice, 2n (diploide); la celulele reproducatoare (spori, gamei) nucleul este n (haploid); rareori apar nuclei poliploizi (4n, 8n) ca urmare a neformrii fusului de diviziune i nedispariiei anvelopei nucleare. Din punct de vedere ultrastructural, cromozomul este un nucleofilment foarte lung de ADN; la nceputul profazei cromozomul are dou filamente mai mult sau mai puin spiralate, numite cromatide, pe care se disting granulaii de cromatin, foarte colorabile, numite cromomere. Fiecare cromatid are: - o ax proteic (30 de proteine acide, nehistonice); - nucleozomi (concentrri de cromatin) legate de ADN, deci, un nucleofilament este ca un colier de perle: pe o axa proteic se afla nucleozomi legai de ADN internucleozomic.

41

UNITATEA DE INVARE 3 - Diviziunea celulara

3. 1. Mitoza (diviziunea ecvaional)

Are loc la formarea celulelor somatice (diploide); plecnd de la o celul diploid (2n) se ajunge la dou celule-fiice, tot diploide. (fig. 42, 43) 1. Cariocineza (mitoza n sens restrns) cuprinde: interfaza, profaza, metafaza, anafaza, telofaza, toate alctuind ciclul celular, care dureaz 20-24 ore, uneori chiar cteva zile. Interfaza este etapa n care se dubleaz numrul constituenilor nucleari, mai ales ADN; cuprinde trei perioade : G1 (perioada presintetic, cuprinde 25 -50% din interfaz), cnd fiecare filament cromatic are o molecul de ADN combinat cu histone; are loc sinteza de ARNm; cromozomii sunt monocromatidici; S (perioada sintetic, cuprinde 35 -40% din interfaz), cnd continu sinteza de ARNm; se dubleaz cantitatea de ADN; cromozomii sunt bicromatidici; G2 (perioada postsintetic, cuprinde 10-40% din interfaz), cand continu sinteza de ARNm; are loc sinteza proteinelor cu rol contractil, necesare formrii viitorului fus de diviziune. Profaza: - se individualizeaz, prin spiralizare i prin scurtare, cromozomii clivai n cel e dou cromatide unite nc prin centromeri; - ncepe formarea fusului de diviziune (500-600 fibre proteice cu diametrul de 25 nm) pe seama citoplasmei perinucleare (nti sub forma unor calote polare, ce se alungesc n form de conuri; n metafaz ele ating polii celulei i cu bazele se unesc la mijloc); - dispare nucleolul; - membrana nuclear se fragmenteaz i dispare; - citoplasma i nucleoplasma se amestec, rezultnd mixoplasma, n care sunt dispersai cromozomii. Metafaza: - se ncheie formarea fusului acromatic de diviziune; - cromozomii bicromatidici clivai se dispun n planul ecuatorial al celulei, unde se inser prin centromer de filamentele fusului de diviziune (singurul nedivizat); - braele cromozomilor sunt orientate spre polii celulei; - se formeaz astfel placa celular. Anafaza: - are loc disocierea (separarea) cromatidelor, ncepnd de la centromer (care s-a divizat), astfel nct acum fiecare cromatid este autonom, individualizat, cu valoare de cromozom; - cromozomii fii (cromatidele) migreaz sincron spre polii fusului de diviziune, cu centromerul spre poli i braele spre vechea plac ecuatorial; - cromozomii ating polii fusului, formnd dou grupe simetrice compacte, cu braele tasate unele lng altele; - rol motor n migrarea cromozomilor l are centromerul, dar ei se mic datorit scurtrii filamentelor fusoriale cromozomice. Telofaza: - se formeaz cei doi nuclei fii, tot cu numr dublu de cromozomi, dar acetia din urm sunt monocromatidici; - cromozomii se despiralizeaz, rezultnd o nou reea cromatic; - ia natere nucleolul, lng o zon special heterocromatic, numit nucleolar, a unor cromozomi cu satelit, organizatori de nucleol; - se formez membrana nuclear, din fragmente ale membranei iniiale, care au fost antrenate spre cei doi poli ai fusului de diviziune i pe seama RE. 2. Citocineza ncepe la sfritul anafazei sau la nceputul telofazei. La cormofite, mici vezicule golgiene, bogate n glucide, protide i lipide, se dispun la ecuatorul fusului de diviziune, cres c, conflueaz (exceptnd locurile ce corespund punctuaiilor primare, pe unde trec plasmodesmele) i astfel se organizeaz fragmoplastul sau placa celular. Fragmoplastul se ntinde treptat centrifugal spre peretele celulei iniiale, intrat n diviziune, pentru a forma lamela median dintre cele dou celule fiice. n paralel, fusul de diviziune se dezorganizeaz, dup ce i filamentele sale participaser la formarea lamelei mediane. Fiecare din cele dou citoplasme sintetizeaz cte un perete primar i astfel sunt separate cele dou celule fiice, n care s-au repartizat mai mult sau ma i puin egal diversele organite .

42

c. m ncl

cr

fg

Fig. 42 Fazele mitozei: a d profaza, e g metafaza, h anafaza, i,j telofaza, k, l citocineza: c. f celule fiice, c. m celula mam, cr cromozomi, fg fragmoplast, n nucleu, ncl - nucleol

43

INTERFAZA

PROFAZA

METAFAZA

ANAFAZA

TELOFAZA

Figura 43 Fazele mitozei

3. 2. Meioza (diviziunea reducional)

Fecundaia i meioza apar ca dou mecanisme compensatoare: fecundaia dubleaz numrul de cromozomi, iar meioza i reduce la jumtate. La covritoarea majoritate a plantelor, meioza precede formarea sporilor. (fig. 44) Meioza cuprinde dou diviziuni succesive: mitoza reducional sau heterotipic (un nucleu 2n d doi nuclei n) i mitoza ecvaional sau homeotipic (cei doi nuclei n dau patru nuclei n). Aadar, meioza are loc la formarea celulelor de reproducere. Mitoza reducional Profaza I dureaz cteva zile i cuprinde mai multe subfaze: - leptoten: cromozomii sunt filamente lungi, foarte fine, sinuoase, cu cromomere vizibile; dei s-au format cele dou cromatide, nu este vizibil clivajul; - zigoten: cromozomii sunt tot filamente lungi, dar mperecheate; cromozomii omologi, paterni i materni, se apropie i se unesc doi cte doi, fenomen numit sinaps, ce

44

conduce la formarea de bivaleni; cromatidele sunt separate (n fiecare din cei doi cromozomi ai bivalentului) de o structur numit sinapton;

Figura 44 - Fazele meiozei:Profaza I: 1 leptoten, 2 zigoten, 3 pachiten, 4 diacineza, 5 Metafaza I, 6 Anafaza I, 7, 8 Telofaza I, 9 diad, 10 Metafaza II, 11 Telofaza II, 12, 13 tetrada

45

pachiten: cromozomii perechi sunt mai scuri i devin mai groi prin spiralizare unul n jurul altuia; clivajul apare vizibil la extremiti; - diploten: clivajul este vizibil, cromozomii din fiecare bivalent tind s se separe, dar cromatidele rmn ataate n mai multe poriuni numite chiasme; aadar, fiecare bivalent are patru cromatide, dar numai doi centromeri; - diacineza: se accentueaz spiralizarea, cromozomii devenind foarte scuri i groi; cromozomii omologi din fiecare bivalent se separ i la nivelul chiasmelor are loc fenomenul de crossing-over (schimb de gene); acum dispar nucleolul i membrana nuclear, ncepe s se formeze fusul de diviziune. Metafaza I: - se termin de format fusul de diviziune; - perechile de cromozomi (bivalenii clivai) se dispun n planul ecuatorial al celulei, cu centromerii de o parte i de alta a planului ecuatorial. Anafaza I: - disocierea anafazic separ cromozomi ntregi (clivai n cele dou cromatide) i nu cromatide ca n mitoza ecvaional; - rezult dou loturi de cromozomi bicromatid ici care migreaz spre poli. Telofaza I: - cromozomii bicromatidici s-au regrupat la cei doi poli ai fusului de diviziune; se formeaz nucleolul i anvelopa nuclear. Uneori se formeaz peretele dintre cele dou celule -fiice, deci are loc citocineza. Nu se mai observ interfaza, deci nu are loc replicarea ADN. Mitoza ecvaional Profaza II: - este scurt; - cromozomii nu mai sufer clivajul longitudinal. Metafaza II: cromozomii se inser cu centromerul la ecuatorul fusului de diviziune (cele dou fuse se dispun perpendicular pe fusul primei mitoze). Anafaza II: disocierea anafazic separ cromatide, care migreaz spre cei doi poli. Telofaza II: - are loc regruparea cromozomilor monocromatidici la polii fusului de diviziune; - se formeaz perei ntre celule, rezultnd o tetrad de spori, mai rar gamei; - mpreun, cele dou telofaze reconstiuie patru nuclei haploizi; - se formeaz nucleolul i anvelopa nulear; cantitatea total de ADN / nucleu este egal cu jumtate din cea a unui nucleu somatic la sfritul mitozei. La monocotiledonate, citocineza este succesiv, n sensul c dup fiecare telofaz se edific cte un perete ntre nucleii nou formti. La dicotiledonate, citocineza este simultan, n sensul c pereii se constituie abia dup telofaza II . -

UNITATEA DE INVARE 3 Incluziunile celulare

Vacuolele provin fie din dilatrile locale ale membranelor RE, fie din diviziunea celor preexistente. Sunt incluziuni inerte apoase, prezente n citoplasm; ele nu efectueaz transformri metabolice i sunt limitate de tonoplast. Pot fi colorate natural atunci cnd conin antociani sau flavone, ori artificial cu colorani selectivi de tipul roului neutru i albastrului de crezil. n celulele tinere (meristematice) din apexurile radicular i caulinar vacu olele sunt numeroase, dar foarte mici; pe msur ce procesul de difereniere avanseaz, vacuolele conflueaz, ajungnd ca n celula adult s existe o singur vacuol foarte mare, care ocup circa 90% din volumul celular (fig. 45). Coninutul vacuolar este o soluie de compoziie complex, a crei natur chimic i concentraie sunt foarte variabile n funcie de specie, tip celular i stare fiziologic. Compuii ncorporai n vacuole pot fi grupai n dou categorii: 1. compui intermediari ai metabolismu lui celular: acizii carboxilici (tartric, izocitric, malic, ascorbic, malonic, oxalic ultimii doi sunt foarte toxici i inhibitori de enzime, transferul lor n vacuol fiind un procedeu de eliminare i detoxificare) rspunztori de pH -ul coninutului vacuolar; glucide (zaharoz la trestia de zahar i sfecl; inulin i fructozane ndeosebi la asteracee, campanulacee, liliacee); acizi aminici i proteine (care sunt transferai n vacuole dupa sintez de ctre polizomii citoplasmici).

46

2. compui finali ai metabolismului celular: cumarina (compus fenolic volatil foarte rspndit la plante, foarte toxic, perturbnd diviziunea celular i creterea; la leguminoasele furajere, prin transformri bacteriene d dicumarolul, anticoagulant, responsabil de accidentele hemoragice ale vitelor); compui cianogenetici (acidul cianhidric, un inhibitor al respiraiei); pigmenii flavonoizi (exclusiv vegetali, semnale atractive eseniale pentru polenizatori); taninurile (inhibitori ai enzimelor; confer astringen fructelor; ofer protecie organelor vegetale contra agenilor patogeni); alcaloizii (cu proprieti farmacodinamice foarte variate).

Celul tnr
Figura 45 Evolutia aparatului vacuolar

Celul difereniat

Figura 46 Celula diferentiata cu vacuola mare, centrala

vacuola

47

Aparatul vacuolar al celulelor din embrion i acela din celulele albumenului are un comportament particular. n ovulele care se transform n semine, celulele au vacuole mari, hidratate; n cursul maturrii seminelor, vacuolele se deshidrateaz i se fragmenteaz, n acelai timp acumuldu-se o mare cantitate de proteine. La sfritul evoluiei lor, vacuolele vor conine proteina precipitat (ne referim la granulele de aleuroa , care pot fi simple sau compuse, n ultimul caz proteina fiind organizat sub forma unui cristaloid nsoit de o parte neproteic numit globoid). Funciile vacuolei: - constituie pentru celul principala sa rezerv de ap, compus indispensabil multiplelor reacii de biosintez: - acumuleaz substane de rezerv sau deeuri toxice; - contribuie la creterea celular; - exercit presiune asupra peretelui celular extensibil i elastic, care se ntinde (starea de turgescen celular, care implic i fenomene osmotice). Incluziuni inerte solide Granulele de amidon. n timpul transformrii unui leucoplast n amiloplast, amidon ul apare sub forma unei mici granule refringente n centrul plastidei, unde stroma s-a rarefiat. Granula de amidon crete prin pturi succesive dispuse n jurul unui punct central numit hil; acesta poate fi centric (la gru) sau excentric (la cartof), simplu (la cartof) sau ramificat (la fasole, porumb), n jurul lui distingndu-se striuri concentrice, alternnd unele clare (corespund zonelor puternic hidratate, bogate in amiloz, formate ziua) cu altele ntunecate (corespunznd pturilor mai dense, bogate n amilopectin, mai puin hidratate, depuse n timpul nopii). La cartof ntlnim granule de amidon simple, compuse i semicompuse; la fasole granulele sunt numai simple; la orez i ovz sunt semicompuse i compuse. Amidonul poate fi evideniat cu soluie Lugol (pe baz de iod), care coloreaa amiloza n albastru deschis i amilopectina n albastru deschis -violet.

Figura 47 Granula de amidon se observa striurile de crescere Granulele de aleuro. Anumite vacuole se deshidrateaz, n cursul maturrii seminelor, reducndu-se la o granul proteic solid. Granula de aleuron este format dintr -o mas proteic fundamental omogen, ce conine sulf i acid fosforic, n care se distinge uneori un cristaloid proteic (la in, ricin) i unul sau mai muli globoizi (formai din fitat de calciu i magneziu; la unele fabacee i ricin). Granulele pot fi simple (ca la fasole, numai cu protein amorf) i compuse (ca la ricin, cnd exist i cristaloid i globoid). Cristalele minerale provin din sruri ale acizilor minerali, depuse n vacuol: sulfatul de cupru (la alga Closterium), clorura de sodiu (la plantele de srtur), diferite ioduri (la algele brune marine Fucus, Laminaria). Cristalele organice sunt de oxalat de calciu: acidul oxalic, sintetizat n timpul fotosintezei, este toxic pentru plant i depozitat n vacuol; el devine inofensiv prin neutralizarea cu calciu; oxalatul de calciu poate fi sub form de nisip (ca la solanacee) sau agregat n cristale simple i macle (ca la usturoi, ceap , trifoi), cristale aciculare sau pachete de cristale aciculare numite rafide (ca la via -de-vie) sau ursini (ca la rosacee, betulacee, fagacee).

48

Figura 48 Granule de amidon de la cartof observatie in lumina polarizata Sferocristalele de inulin. Inulina este un polizaharid ce se afl n stare de soluie coloidal n vacuol. Este caracteristic ndeosebi organelor subterane cu parenchimuri de rezerv ale asteraceelor i campanulaceelor. Alcoolul etilic absolut, dar i glicerolul determin ieirea inulinei din vacuol i precipitarea acesteia sub form de sferocristale , care se dezvolt adesea n contact cu pereii, deoarece structura celulelor este atunci profund alterat.

49

CITOLOGIE VEGETALA Suport pentru Lucrari practice anul I IDD Specializarea Biologie

Lector. Dr. Irina Neta Gostin

50

CUPRINS
1. Tehnica microscopica 1.1.Microscopul fotonic binocular 1.2.Obinerea preparatelor microscopice Testul 1 1.3. Microscopul electronic Pregtirea probelor pentru observarea la micros copul electronic cu transmisie Testul 2 2. Constituenii protoplasmatici (partea vie a celulei) 2.1.Celula neclorofilian Testul 3 2.2. Celula clorofilian 2.3. Plastidomul celular Testul 4 Testul 5 Testul 6 2.4. Mitocondriile 2.5. Nucleul Testul 7 3. Constitueni neprotoplasmatici (nevii) ai celulei (I) 3.1. Vacuomul celular (incluziuni apoase) 3.2. Incluziuni solide (ergastice) Testul 8 3.3. Peretele celular Testul 9 3.4. Modificri secundare al peretelui celular 4. Diviziunea celular Mitoza Testul 11 4.2. Meioza Testul 12 Diferentierea si dediferentierea celulara Testul 13 Rezultatele testelor de autocontrol Bibliografie selectiva

51

1. Tehnica microscopica
1.1. Microscopul fotonic binocular Studiul structurii celulelor i organelor plantelor nu se poate efectua fr ajutorul unor aparate ce mresc de zeci, sute sau chiar mii de ori obiectul de analizat. Cel mai utilizat aparat de acest tip este microscopul fotonic care, folosind ca surs lumina poate mri de pn la maxim 2000 de ori. Puterea de mrire a microscopului este limitat de puterea de separare sau de rezoluie a acestuia. Datorit lungimii mari de und a fotonului distana minim dintre dou puncte care pot fi observate distinct la un microscop fotonic este de maxim 0,2 micrometri. Microscopul este alctuit din dou pri distincte: partea mecanic i partea optic (fig. 1). Partea mecanic este alctuit din picior (talp), coloan, dispozitivul de punere la punct a imaginii (format din viza macrometric i viza micrometric), tubul optic, msua (platina) microscopului i revolverul. Piciorul (talpa) este masiv i are rol n stabilitatea microscopului. n acesta este ncorporat i sursa de lumin. Coloana menine solidare diferitele pri ale microscopului i servete pentru transportul acestuia. Dispozitivul de punere la punct a imaginii este ncorporat n coloan i este format din dou uruburi ce permit micarea rapid (viza macrometric) sau foarte lent (viza micrometric) pe vertical a msuei (platinei). Tubul optic poart la extremitatea superioar ocularele i la cea inferioar revolverul cu obiective. Msua (platina) microscopului servete drept suport preparatului. n partea central prezint un orificiu eliptic prin care trece lumina spre lam. Pe msu se afl clemele cu care se fixeaz preparatul i un dispozitiv cu ajutorul cruia acesta poate fi deplasat dreapta-stnga i fa-spate. Revolverul port obiectiv este prevzut cu lcauri n care se fixeaz obiectivele cu putere de mrire diferite. Prin rotirea revolverului obiectivele sunt aduse, pe rnd, n cmpul vizual. Partea optic este format Fig. 1 Microscop fotonic (schem): cd condensator, fl din sursa de lumin, condensator, fascicul luminos, lo lentil ocular, m masa, ma macroviza, oglind, oculare i obiective. mi microviza, ob obiectiv, og oglinda, sl sursa de lumin, Sursa de lumin este localizat n st stativ, tb tubul microscopului talpa microscopului i este reprezentat de un bec de 6 V i 15 W. Alimentarea de la reeaua de curent electric se face prin intermediul unui transformator. Condensatorul este situat sub msua microscopului i este alctuit dintr -un sistem de lentile ce au rolul de a proiecta n preparat lumina provenit de la surs. Sub condensator de afl o diafragm, ce permite limitarea cmpului luminat; diafragma se nchide i se deschide cu ajutorul unei

52

manete situate n plan orizontal. Condensatorul s e poate apropia sau deprta de preparat datorit unui mecanism montat pe coloana microscopului. Oglinda este mobil, aezat sub condensator, avnd o fa concav convergent, iar alta plan. Ocularele sunt localizate la extremitatea superioar a tubului optic. Un ocular este alctuit din dou lentile: una superioar (ocular) i una inferioar (colectoare), prinse ntr -o montur metalic. Puterea de mrire a ocularelor este de 5x, 7x, 10x, 15x sau 20x. Uneori, unu l din oculare poate avea montat n interior un ac indicator, cu ajutorul cruia se poate marca un detaliu din preparat. Pe tubul ocular stng este prevzut inelul dioptriilor, ce are rolul de a corecta ametropia ochiului. Obiectivele sunt alctuite dintr-un sistem de lentile dispuse ntr-o montur metalic. Cea situat spre preparat se numete lentil frontal. Obiectivele, cu putere de mrire diferit (4x, 10x, 20x, 40x i 100x acesta din urm se folosete cu imersie), sunt montate pe revolver. Puterea de mrire a microscopului este dat de puterea de mrire a ocularelor nmulit cu puterea de mrire a obiectivului la care se fac observaiile. De exemplu, dac utilizm oculare de 10 x i obiectivul de 4x, imaginea va fi mrit de 40 de ori. Dac se folosesc oculare de 10x i obiectivul de 40x, ordinul de mrire va fi de 400 de ori. Microtomul rotativ n acest caz cuitul este fixat (imobil); portobiectul culiseaz pe vertical cu ajutorul unei roi cu manivel care se nvrtete. Piesa principal a microtomului este o roat dinat, n centrul creia este fixat un urub cu pas mic. Avansul roii dinate cu un dinte imprim urubului un avans de 1 micrometru. urubul mpinge, cu numrul de micrometri dorii (fixai n prealabil pe o rozet gradat), piesa n care este fixat portobiectul. Microtomul de mn Este cel mai simplu instrument de secionat uniform materialul vegetal. Pentru secionare se folosesc brice cu lama plan concav sau chiar lame de ras. Microtomul este alctuit dintr-un tub metalic prevzut la partea superioar cu o plac circular fix, pe care alunec briciul n plan orizontal. La partea inferioar se afl un urub care acioneaz o tij metalic n interiorul tubului. Materialul de secionat se include n mduv de soc i apo i n tubul metalic, unde trebuie s aib o poziie fix. Prin nvrtirea urubului, materialul este ridicat i se efectueaz seciunile care se colecteaz ntr -o sticl de ceas cu ap. Briciul botanic Este cel mai utilizat instrument pentru efectuarea seciunilor ntr-un laborator de anatomie vegetal. Lama briciului anatomic este plan pe ambele fee sau dreapt pe o fa i concav pe cealalt. n lipsa briciului se pot folosi lame de ras neutilizate. Lama portobiect - Este o plcu de sticl dreptunghiular, lung de 76 -80 mm, lat de 26 mm i groas de 1 mm. Este transparent, cu marginile lefuite i suprafee perfect plane i netede. Este folosit ca suport pentru seciunile care urmeaz a fi analizate la microscop. Lamela - Spre deosebire de lam, este mult mai mic i mai fin (0,13 0, 19 mm grosime), de dimensiuni diferite (15/15 mm, 18/18 mm, 22/22 mm, 24/24 mm, 25/50 mm). Lamele i lamelele utilizate trebuie s fie foarte curate, de aceea se degreseaz n prealabil cu alcool etilic i se terg cu un tifon curat. Pensele Au forme i mrimi diferite i se utilizeaz pentru manevrarea materialului vegetal. Cel mai des folosite sunt cele cu vrful ascuit i cu vrful curbat. Acele metalice Sub aceast denumire sunt cunoscute mai mu lte tipuri de ace, dintre care amintim: - acul spatulat, cu vrful lit, folosit pentru manevrarea seciunilor ; - acul simplu, cu vrf ascuit, folosit pentru etalarea seciunilor pe lam, perforarea materialelor vegetale etc. Obiecte de sticl folosite n laboratorul de anatomie vegetal - Sunt pipete, baghete, sticle de ceas, cristalizoare, pahare Borel, Vase Erlenmayer, Vase Berzelius, cutii Petri etc.

53

1.2. Obinerea preparatelor microscopice

Pentru observarea structurii anatomice a materialul vegetal, acesta trebuie prelucrat n vederea obinerii unor seciuni suficient de subiri pentru ca lumina s poat trece prin ele n vederea obinerii unei imagini clare. Vom prezenta pe scurt etapele realizrii preparatelor microscopice. 1. Fixarea are rolul de a omor aproape instantaneu celulele materialului de analizat, fr ca structura sa s fie afectat. Fixatorii i amestecurile fixatoare folosite n laboratorul de citologie i anatomie vegetal sunt foarte diveri. Cel mai frecvent este utilizat a lcoolul etilic 70%, care servete i drept conservant. Materialul vegetal fixat n alcool etilic se preteaz pentru secionarea manual, cu ajutorul briciului botanic. Pentru includerea n parafin de folosete drept fixator un amestec alctuit din alcool etilic 70%: formaldehid 40%: acid acetic glacial, n proporie de 90:5:5. 2. Conservarea se realizeaz n alcool etilic de 70% sau n amestec de alcool i formol. 3. Realizarea seciunilor se poate face fie cu ajutorul microtomului de mn i a briciului botanic, materialul fiind imobilizat n mduv de soc, fie cu ajutorul microtomului rotativ, dup ce materialul a fost impregnat n parafin, fie cu ajutorul criomicrotomului. a. secionarea manual - pentru obinerea de seciuni transversale, materialul vegetal se taie n fragmente de 1 cm lungime i 0,5 cm lime (dac este vorba de limbul foliar). Tulpinile i rdcinile groase se taie n jumti sau n sferturi. Din dou buci de mduv de soc (de 1 cm lungime) se potrivesc dou jumti care s ncap fix n orificiul microtomului. ntre acestea se fixeaz materialul vegetal n poziie perfect vertical i se introduc mpreun n microtom. Cu autorul urubului microtomului, proba este ridicat puin cte puin deasupra nivelului deschiderii acestuia, iar cu ajutorul briciului se efectueaz seciuni. Briciul trebuie s fie inut paralel cu materialul de secionat, iar micarea trebuie s fie continu i repetat. Seciunile se colecteaz ntr-o sticl de ceas n care s-a pus puin ap. Se ndeprteaz fragmentele de mduv de soc care plutesc, pstrndu se seciunile care cad la fundul vasului. - Pentru obinerea de seciuni longitudinale (tangeniale sau radiare proba se va orienta cu axul lung paralel cu direcia de tiere a briciului. b. Secionarea materialului inclus n parafin. Pentru aceasta proba de analizat (ale crei dimensiuni nu trebuie s depeasc 1 cm3) trebuie prelucrat n vederea eliminrii apei din celulele sale i nlocuirea acesteia cu parafin. Se parcurg urmtoarele etape: - deshidratarea se face n serii crescnde de alcool etilic de 70%, 80% 90% i alcool absolut (trei bi). Fiecare baie dureaz ntre 30 minute i 2 ore, n funcie de mrimea i consistena probelor; - clarificarea - se face cu xilen sau cloroform. Probele se introduc n bi succesive formate din amestecuri xilen: alcool etilic absolut n proporii de 1:3, 1:1, 3:1, pn ce cad la fundul vasului i apoi n xilen pur (dou bi), unde se pot lsa peste noapte; - impregnarea cu parafin - se realizeaz n termostat la 56 0 62 0C, funcie de punctul de topire a parafinei. Pentru obinerea unor seciuni foarte subiri se recomand folosirea unei parafine cu punct de topire mai ridicat, iar pentru materialele fragile se utilizeaz o parafin cu un punct de topire mai sczut. Cele mai bune rezultate se obin cu Paraplast, o parafin mbuntit cu monomeri, ce are avantajul de a asigura o infiltrare optim la un punct de topire sczut. Probele se infiltreaz mai nti ntr-un amestec de parafin curat i xilen 1:1, iar apoi n parafin pur. n cazul materialelor foarte fragile, timpul total de includere nu trebuie s depeasc 2 -3 ore, n timp ce probele mai rezistente pot fi inute n termostat pn la 12 20 de ore; - confecionarea blocurilor o tvi de porelan se unge cu glicerin anhidr, iar apoi se umple cu parafin curat. Probele se aranjeaz n poziia dorit, iar parafina se solidific la temperatura camerei. Din blocul astfel obinut se

54

fasoneaz mai multe blocuri mai mici, fiecare coninnd cte o prob de analizat; - secionarea i lipirea seciunilor pe lame secionarea se realizeaz cu ajutorul microtomului rotativ. Blocul de parafin se lipete de suportul port obiect cu puin parafin topit. Seciunile trebuie s aib grosimi cuprinse ntre 5 i 20 micrometri, funcie de structura analizat. Se obin astfel seciuni n serie. Panglicile de seciuni se pun pe lame curate, care au fost unse n prealabil cu albumin Mayer n puin ap. ntinderea se face nclzind uniform lama pe placa ofant, avnd grij ca parafina s nu se topeasc. Lamele se in la uscat cteva zile, ntr-un loc ferit de praf, la temperatura camerei. c. Secionarea cu ajutorul criomicrotomului proba de secionat se scoate din timp din alcoolul n care a fost conservat i se spal n mai multe bi de ap (minim 1 or) pentru hidratare, ce favorizeaz nghearea. Dac n prob rmn urme de alcool, acesta acioneaz ca un antigel, iar gheaa nu se formeaz n anumite zone. Proba trebuie s aib 5 7 mm lungime i pn la 10 mm2 suprafa de secionare. Se fixeaz temperatura ntre 28 i -32 0C, iar cnd se indic 00C proba se fixeaz de suport cu o pictur de ap. Cnd temperatura s -a stabilizat se mai ateapt 5 minute i se ncepe secionarea. Cuitele folosite sunt confecionate dintr -un oel special, fiind mai dure dect cele cu care se secioneaz blocurile de parafin. Seciunile, cu grosimi de 20 40 micrometri, se culeg cu un penson de la gura cuitului i se pun ntr -o sticl de ceas cu ap. Aceast metod este recomandabil pentru probele dure, ce conin mult esut lignificat. 4. Colorarea se realizeaz diferit, funcie de scopul urmrit i de modul n care s -a fcut secionarea. Cele mai frecvente tipuri de coloraie folosite n anatomia vegetal sunt: a. Coloraia dubl cu verde iod i rou carmin alaunat. Verdele iod coloreaz n verde albstrui lemnul, sclerenchimul, suberul (celule cu perei celulari modificai chimic secundar) i cuticula, iar roul carmin coloreaz n roz parenchimurile, liberul, colenchimul (celule cu pereii celulari celulozo-pectici). Acest tip de coloraie este folosit pentru seciunile obinute manual. b. Coloraia cu fast green i safranin. Fast green coloreaz n albastru celulele cu perei subiri, celulozici, iar safranina n rou celulele cu perei lignificai, suberificai sau cutinizai. Se recomand pentru obiectele mparafinate sau care au fost secionate la criomicrotom. c. Coloraii speciale (de identificare) cu rou Sudan III sau cu reactiv Chodat (pentru substanele grase), cu sulfat de anilin sau fluroglucin i acid clorhidric (pentru evidenierea ligninei), cu clorur feric (pentru identificarea taninului), cu hematoxilin (pentru evidenierea cromozomilor) .a. 5. Efectuarea preparatelor - n funcie de durabilitatea lor se mpart n: a. Preparate provizorii cnd seciunile se analizeaz pe loc, ntr-o pictur de ap. Ele dureaz cteva ore, apoi apa se evapor i seciunile se usuc. b. Preparate permanente pot fi pstrate civa ani sau cteva zeci de ani. Seciunile se includ n glicero-gelatin direct din ap (mediu hidrofil se recomand pentru seciunile efectuate manual), sau n balsam de Canada, dup o prealabil deshidratare i splare cu xilen (mediu hidrofob se recomand pentru seciunile obinute n urma mparafinrii sau la criomicrotom). Acestea din urm, dac deshidratarea se face complet, sunt practic indestructibile.

55

Test de autocontrol
TESTUL 1 1.Care este puterea maxima de mrire a unui microscop fotonic? a. 400 ori b. 1000 ori c. 2000 ori 2. In ce soluie se realizeaz cel mai frecvent fixarea materialului vegetal? a. in alcool etilic 70% b. in acid acetic glacial c. in formaldehida 3. Care sunt etapele principale ale includerii materialului vegetal in parafina? 4. Enumerai cele mai utilizate tehnici de colorare

1.3. Microscopul electronic

Invenia microscopului electronic a fost posibila in urma unor studii experime ntale si teoretice in fizica si inginerie. Principalul concept pe care microscopul electronic s-a format: electronii au unda asociata. Acesta a fost emis de catre fizicianul francez Luis Victor de Broglie in 1924. In 1927, ipoteza lui de Broglie a fost ver ificata experimental de ctre fizicienii americani Clinton J. Davisson si Lester H. Germer si independent de ctre fizicianul englez George Paget Thomson. In 1932 inginerii germani Max Knoll si Ernst Ruska construiesc primul microscop de transmisie electronica. In 1938 Ruska si inginerul german Bodo von Borries construiesc primul model al comercialului M.E.T. pentru Siemens-Halske Company din Berlin, Germania. Inginerul englez Charles Oatley a inventat M.E.S.-ul. Ernst Ruska a realizat primele experimente cu ajutorul microscopului electronic construit de el nsui, primul de acest fel din lume, n care rolul razelor de lumin era ndeplinit de un fascicul de electroni ce traversau mai multe lentile electronice. Primul microscop electronic putea mri imagine a obiectelor doar de 400 de ori. Se tie ca puterea separatoare a instrumentelor optice este invers proporionala cu lungimea de unda a radiaiei utilizate. Microscoapele optice nu vor putea da imagini clare ale unor obiecte cu dimensiuni mai mici de circa 0,15 m. Puterea separatoare a putut fi sensibil mrita cu ajutorul microscopului electronic, deoarece lungimea de unda a undei asociate electronului este mult mai mica dect a radiaiilor vizibile sau ultraviolete utilizate de microscopul optic. Microscoapele pot doar sa mreasc structuri care sunt mai mari dect lungimea undelor (unda luminoasa). Acestea pot obine mult mai multa putere de mrire dect microscoapele standard ce folosesc lumina solara pentru ca electronii au lungime de unda asociata mai mica dect cea a lungimea de unda a luminii. Cea mai mare mrire posibila este de 2 000 X dect cea iniiala. Microscoapele electronice moderne pot ajunge la mriri de aproximativ 1 000 000 X Din punct de vedere constructiv, microscopul electronic are o structura mult mai complexa dect microscopul optic. Totui, elementele componente principale ale microscopului electronic ndeplinesc aceleai funcii ca si lentilele microscopului optic. Ele sunt magnetice sau electrice, dup cum devierea fasciculului d e electroni are loc intr-un cmp magnetic sau intr-un cmp electric. In cazul microscopului electronic, electronii pe toata traiectoria lor de la sursa pana la imaginea finala - se deplaseaz in vid. Pentru ca imaginea electronica sa fie vizibila, este necesar ca aceasta sa fie transformata intr-una luminoasa. In acest scop, in planul imaginii finale se afla un ecran fluorescent. Microscopul electronic este folosit in diferite domenii de cercetare, dar una din utilizrile curente este in domeniul cercet rilor medicale si biologice. Materialele biologice, in general, nu pot fi studiate sub forma vie, deoarece la o tensiune curenta de 30-50 000 V, timpul de expunere a probelor biologice in vid este destul de lung, ceea ce conduce la distrugerea esuturilor vii. In 1962 a fost pus la punct un microscop electronic pentru cercetrile biologice pe material viu. La acest

56

microscop se folosete o tensiune de 2 000 000 V, ceea ce conduce la micorarea sensibila a timpului de expunere si deci si la o absorbie mult mai mica a fasciculului de electroni in proba biologica. Ulterior s-au construit si alte microscoape protonice si ionice care au condus la mriri de 10 -15 ori mai mari dect cele obinute cu microscopul electronic. Cu ajutorul microscopului ionic s -au obinut fotografii clare ale poziiilor atomilor in reeaua cristalina. Microscopul electronic folosete electronii in loc de lumina zilei pentru a produce imagini mrite ale unor obiectelor. Oamenii de tiina folosesc microscopul electronic in diferi te domenii de cercetare incluznd medicina, biologie, chimie, metalurgie, entomologie (studiul insectelor) si FIZICA. Inca din 1930 cnd a fost folosit pentru prima data microscopul electronic a revoluionat studiul structurilor microscopice si al suprafeelor. 1.4. Pregtirea probelor pentru observarea la microscopul electronic cu transmisie Fixarea dubl se realizeaz n glutaraldehid 4% (2 ore), splare cu tampon fosfat i postfixare cu tetraoxid de osmiu 2% (2 ore). Deshidratarea se face n bi succe sive de alcool etilic (350, 500, 700, 900, 950, cte 15 minute i alcool absolut de trei ori, cte 20 minute), urmat de trei bi de propilenoxid i impregnarea n rin sintetic de tip Epon 812 (2 zile). Polimerizarea blocurilor se face n termostat la 600, iar secionarea la ultramicrotom, folosind cuite de sticl. Seciunile semifine se preiau pe lame de sticl, colorate cu albastru de toluidin i analizate la microscopul fotonic, iar cele fine sunt depuse pe grile de 400 Mesh, contrastate cu citrat de plumb i acetat de uranil i analizate la microscopul electronic cu transmisie.

Test de autocontrol
TESTUL 2 1. De ce la microscopul electronic se pot vedea obiecte mult mai mici dect la microscopul fotonic? 2. Care este sursa pentru obtinerea imaginilor utilizata in microscopia electronica? 3. Cu ce se realizeaza fixarea probelor ce urmeaz a fi analizate la microscopul electronic cu transmisie? a. cu alcool etilic 70% b. cu glutaraldehida c. cu glutaraldehida si tetraoxid de osmiu

2. Constituenii protoplasmatici (partea vie a celulei)

Toate organismele vii sunt alctuite din celule. Acestea reprezint unitile de baz morfofuncionale ale lumii vii. Celula a fost descoperit de Robert Hook n 1665 care fcea studii pe tulpini de plut folosind microscopul. Acesta a observat c materialul dat a fost mprit n mai multe compartimente, egale ntre dnsele pe care le-a numit celule. Antonie van Leeuwenhoek a observat primul organismele unicelulare ntr-o pictur de ap, folosind microscopul. Teoria celular a fost enunat pentru prima dat de M. Schleiden i T. Schwann n 1839. n 1858, Rudolf Virchow emite teoria sa, Omnis cellula e cellula, potrivit creia celulele apar n urma diviziunii celulare. Celulele vegetale i celulele animale au un plan de organizare comun, ns prezint i unele organite proprii, care le individualizeaz i care le confer nsuiri fundamental diferite. Celulele vegetale au la periferie un perete scheletic, celulozo-pectic (se numesc dermatoplaste), spre deosebire de celulele animale i foarte puine celule vegetale, la care acesta lipsete (se

57

numesc gimnoplaste). Celulele vegetale prezint, de asemenea, vacuole i cloroplaste, care lipsesc la celulele animale. 2. 1. Celula neclorofilian epiderma superioar (intern) a frunzei (tecii) crnoase din bulbul de ceap - Allium cepa fam. Liliaceae. Bulbul de ceap este o tulpin subteran metamorfozat; pe discul tulpinal se prind numeroase teci crnoase ce se acoper complet unele pe altele i care reprezint bazele frunzelor verzi, fistuloase, comestibile de la ceap. Pentru observaii se utilizeaz fragmente din epiderma superioar (intern) a unei astfel de teci crnoase. Pentru a observa celula vie, materialul vegetal, proaspt detaat din bulb, se observ ntr -o pictur de soluie Ringer. La un obiectiv mic, epiderma apare format din celule APLICATIE poligonal - alungite, cu pereii laterali drepi. Fiecare celul PRACTICA prezint un nucleu situat central (de form circular) sau parietal (de form lenticular) (fig. 2). La un obiectiv mai puternic se observ peretele scheletic, celulozo-pectic, ce delimiteaz fiecare celul. ntre dou celule vecine este vizibil lamela median, mai nchis la culoare; ea ep
Fig. 2 Observarea celulei neclorofiliene n epiderma superioar (intern) a frunzei (tecii) crnoase din bulbul de ceap - Allium cepa fam. Liliaceae: A detaarea fragmentului de epiderm pentru observare; B epiderma vzut la un obiectiv mic; C cteva celule epidermice observate la un obiectiv mare: c.ep celul epidermic, ep epiderm, n nucleu, ncl nucleol, p.c perete celular, v vacuol

A.

c. ep

B.

p.c ncl v

reprezint cimentul de legtur dintre acestea. Citoplasma apare fin granulat, fiind mpins n poziie parietal de o vacuol mare ce ocup centrul celulei. Micrile citoplasmei se observ datorit organitelor din aceasta. Membrana ce delimiteaz vacuola de citoplasm se numete tonoplast. Plasmalema (membrana ce delimiteaz celula) nu poate fi observat deoarece este alipit de peretele celular. Ea va fi evideniat prin metode speciale (plasmoliza celulei).

C.

Test de autocontrol
TESTUL 3 1. Care sunt principalele particularitati in organizarea celulei vegetale? 2. Ce zona a celulei ocupa vacuola? a. zona centrala b. zona parietala c. zona terminala 3. Cum se numete membrana care delimiteaz vacuola?

58

2. 2. Celula clorofilian celule din frunza de ciuma apelor Elodea canadensis, fam.
Hydrocharitaceae (fig. 3). Planta este acvatic, submers, iar frunzele sale sunt subiri (formate doar din dou straturi de celule, exceptnd nervura median), de aceea pot fi observate APLICATIE la microscop prin transparen ntr-o pictur de ap. PRACTICA Celulele epidermice vzute de fa au form dreptunghiular, iar n citoplasma lor se observ numeroase cloroplaste mari, lenticulare. Dac preparatul se ine la microscop i se ilumineaz puternic 1-2 minute metabolismul se accelereaz, iar micrile citoplasmei devin vizibile prin micarea cloroplastelor n jurul vacuolei (cicloza de rotaie). Sensul micrii este diferit ntr -o celul fa de celulele nvecinate. Se recomand ca efectuarea observaiilor s se fac n celulele alungite; situate n apropierea nervurii mediane, aici micarea are loc cu vitez mai mare.

2. 3. Plastidomul celular
Cuprinde totalitatea plastidelor din celula vegetal. Dup tipul compuilor pe care acestea le conin se mpart n plastide colorate (cloroplaste, cromoplaste) i plastide incolore (amiloplaste, leucoplaste, oleoplaste). n funcie de gradul de dezvoltare, plastidele se mpart n proplastide (plastide tinere, nedifereniate), plastide n curs de difereniere i plastide mature (complet diferenate). Stadiul de dezvoltare a plastidelor este strns corelat cu stadiul de dezvoltare a celulei n care acestea se afl. Proplastidele se gsesc numai n celulele embrionare i meristematice, n timp ce p lastidele mature sunt prezente n celule complet difereniate. a. Cloroplasele (plastidele verzi, cu rol n fotosintez) Cloroplastele sun plastide verzi, ce conin un pigment numit clorofil, care ndeplinete un rol cheie n procesul de fotosintez. Utiliznd energia luminoas, n cloroplaste are loc reducerea dioxidului de carbon la compui organici (glucide). Acest proces asigur autotrofia plantelor. Pe de alt parte, ele au capacitatea de a sintetiza proteine n strom. Aceste dou procese nu se po t desfura dac nu exist un schimb de metabolii ntre cloroplast i citoplasma celular.

RETINETI!

Principalele elemente componente ale cloroplastului la plantele superioare

Stromatilacoid

Membrana interna Membrana externa

Grana

Granatilacoid Stroma

Cloroplastele talofitelor se mai numesc cromatofori, au de regul dimensiuni mari, o structur simplificat, ceea ce constituie un caracter de inferioritate. Cloroplastele cormofitelor sunt mult mai evoluate; forma lor este constant, lenticular discoidal, numrul lor ntr-o celul fiind mare, variabil ns n funcie de specie.

59

Cromatoforul din celulele algei verzi (mtasea broatei) Spirogyra sp. fam. Zygnemaceae (fig. 4) Talul algei este pluricelular, neramificat, uniseriat, format din celule alungite (prozenchimatice). n fiecare celul se afl unul sau doi cromatofori n form de panglic spiralat, cu marginile ondulate, pe care se afl numeroi corpi proteici (pirenoizi) sferici, nconjurai de granule de amidon. In centrul celulei se poate observa un nucleu sferic. Cloroplastele din celulele frunzei muchiului de ap Mnium undulatum Frunzele de la muchiul de ap sunt foarte subiri, iar celulele sale pot fi observate prin transparen; acestea sunt izodiametrice, cu perei celulozici, uor ngro at. n interiorul celulelor t frz fr. frz clp

p. c

A.

B.

Fig. 5 - Cloroplastele din celulele frunzei muchiului de ap Mnium undulatum: A desprinderea unui fragment de frunz, B celule epidermice cu cloroplaste: clp cloroplaste, frz frunz, fr. Frz fragment de frunz, p. c perete celular, t tulpin

se observ citoplasma fin granulat, nucleul sferic, uor refringent i numeroase cloroplaste lenticulare, de culoare verde; acestea realizeaz procesul de fotosintez i conin un pigment numit clorofil.

p. c
Fig. 4 Cromatoforul din celulele algei verzi (mtasea broatei) Spirogyra sp. fam. Zygnemaceae: cit citoplasma, crm cromatofor, n nucleu, p. c perete celular, pir pirenoid (orig.)

cit n crm pir

Cloroplastele din celulele frunzei de ciuma apelor Hydrocharitaceae (vezi fig. 3)

- Elodea canadensis fam.

60

Ciuma apelor este o plant acvatic superioar, submers. Frunzele sunt formate doar din dou epiderme (superioar i inferioar) i cloroplastele din ele se observ prin transparen. Celulele prezint o vacuol central mare, citoplasm parietal i numeroase cloroplaste mari, sferice sau ovale, antrenate n micarea de cicloz.

ep. s t. psd

t. lac

clp

ep. i
Fig. 6 Seciune transversal prin fr unza de stejar brumriu Quercus pedunculiflora, fam. Fagaceae: A ansamblu, B detaliu pentru observarea dispunerii cloroplastelor: clp cloroplaste, ep epiderm (i inferioar, s superioar, t esut (lac lacunos, psd palisadic

Cloroplastele din frunza de stejar brumriu Quercus pedunculiflora, fam. Fagaceae (fig. 6). Pe seciuni transversale prin frunze proaspete cloroplastele au form lenticular, culoare verde i sunt dispuse n poziie parietal, fiind mai numeroase n celulele esutului palisadic (situat sub epiderma superioar), dect n cele ale esutului lacunos (situat sub epiderma inferioar).

Test de autocontrol
TESTUL 4 3. 4. d. e. f. 5. a. b. c. Ce sunt proplastidele si unde se gsesc ele? Ce forma are cromatoforul de la Spirogyra? lenticulara de panglica stelata In care dintre esuturile urmtoare cloroplastele se gsesc in numr mai mare? tesutul asimilator palisadic tesutul asimilator lacunos tesutul aerifer

b. Cromoplastele (plastidele colorate, fr rol n fotosintez). Sunt plastide colorate ce conin n special pigmeni carotenoizi. Se gsesc n mezofilul unor petale, n epicarpul i mezocarpul unor fructe, n parenchimul de depozitare al unor rdcini, n tulpini i n unele semine. Pigmenii se afl fie n stare dizolvat, n substane de natur lipidic, formnd plastoglobuli, fie sub form de cristale (licopenul i carotenul). Cromoplastele provin din alte tipuri de plastide (din cloroplaste, leucoplaste sau proplastide).

61

Cromoplastele din petalele florii de condura Tropaeolum majus, fam. Tropaeolaceae (fig. 7 A). APLICATIE Pe seciuni transversale prin petal se observ cele PRACTICA dou epiderme (superioar i inferioar) formate din celule izodiametrice, cu peretele extern subire, ntre care se afl un mezofil omogen; n celulele acestuia se gsesc numeroase cromoplaste de culoare galben, de form diferit. Cromoplastele din celulele mezocarpului fructului de mce - Rosa canina, fam. Rosaceae (fig. 7 B). Cteva celule din mezocarpul fructului se etaleaz ntr -o pictur de ap; se pot observa cromoplastele de forma ovoidal, poligonal etc., de culoare galben -portocalie, datorit carotinelor i xantofilelor. Ele sunt aglomerate mai ales n jurul nucleului. Cromoplastele din celulele mezocarpului fructului de pducel - Crataegus monogyna, fam. Rosaceae (fig. 7 C). p. c cr n cit cr n

v v

A.
mt v cr

B.

C.

Fig. 7 Cromoplaste: A - din petalele florii de condura Tropaeolum majus, fam. Tropaeolaceae, B - din celulele mezocarpului fructului de mce - Rosa canina, fam. Rosaceae, C - din celulele mezocarpului fructului de pducel - Crataegus monogyna, fam. Rosaceae, D - din celulele mezocarpului fructului de tomate Lycopersicon esculentum, fam. Solanaceae: cit citoplasm, cr cromoplaste, mt mitocondrii, n nucleu, p. c perete celular, v vacuol

D.
Observaiile se realizeaz pe celule izolate din mezocarp. La un obiectiv mic, celulele apar delimitate de peretele celulozic; n citoplasma fin granulat se pot observa formaiuni sferice n care se afl pete roiatice. La un obiectiv mai mare se observ c acestea au form diferit bastonae, triunghiuri, ace; acestea sunt cristale de licopen, care la nceput au dimensiuni mici, iar apoi cresc i pot strpunge anvelopa plastidial. Cromoplastele din celulele mezocarpului fructului de tomate Lycopersicon esculentum, fam. Solanaceae (fig. 7 D). Cteva celule din mezocarp se etaleaz pe o lam ntr -o pictur de ap. Ele au form oval sau circular i prezint un nucleu nconjurat de numeroase cromoplaste sferice sau ovale, de culoare roie portocalie. Pe msura maturrii fructului, carotina trece n izomerul su numit licopen, care cristalizeaz sub form de cristale aciculare.

62

Test de autocontrol
TESTUL 5 1. Unde sunt localizate cromoplastele? a. mezofilul unor petale b. n epicarpul i mezocarpul unor fructe c. n parenchimul de depozitare al uno r rdcini d. in frunze 2. Ce forma au si unde se gsesc localizate cromoplastele din fructul de maces? 3. Ce pigment conin cromoplastele din fructul de la pducel si de la tomate? c. Plastide incolore (leucoplaste) Leucoplastele din celulele anexe ale stomatelor din APLICATIE epiderma frunzei de telegraf - Zebrina pendula, fam. PRACTICA Commelinaceae (fig. 8A). Un fragment din epiderma inferioar a frunzei se monteaz ntre lam i lamel ntr-o pictur de ap. La un obiectiv mic se observ celulele epidermice de form poliedric, celulele stomatice, reniforme dispuse fa n fa, fiecare stomat fiind nconjurat de cte patru celule anexe. n celulele anexe se observ numeroi corpusculi strlucitori aglomerai n jurul nucleului; acetia sunt leucoplaste, plastide incolore cu rol n acumularea i condensarea diferitor substane (glucide,lipide, proteine). Stroma lor nu conine pigmeni. Amiloplastele din celulele cotiledoanelor embrionului de stejar Quercus robur, fam. Fagaceae (fig. 8 B). Prin cotiledoanele seminei din ghinda de la stejar se fac seciuni ct mai subiri posibil, care se observ ntr-o pictur de ap, necolorate sau colorate cu o soluie foarte diluat de iod n iodur de potasiu (Lugol). Celulele din mezofilul cotiledonului sunt izodiametrice, rotunjite i conin numeroase amiloplaste de form ovoidal (ce pot ocupa pn la 75 80% din volumul celulei). Amiloplastul este alctuit dintr-o membran dubl (anvelop), strom plastidial i o granul de amidon mare, cu hilul central, alungit; de multe ori granula de amidon ocup ntreg volumul plastidei. Oleoplastele din seminele de bostan Cucurbita pepo, fam. Cucurbitaceae (fig. 8 C). Oleoplastele sunt plastide n stroma crora se acumuleaz o anumit cantitate de lipide. n oleoplastele tinere, lipidele apar sub forma unor plastoglobuli dispersai, iar la cele mature acestea fuzioneaz ntr-o pictur lipidic mare, ce mpinge stroma la periferie. Seciuni foarte fine prin endospermul seminei de bostan se observ la microscop ntr -o pictur de ap. n celulele izodiametrice, oleoplastele apar sub forma unor picturi refringente. Pentru identificarea lipidelor din componena oleoplastelor, seciunile se coloreaz cu o soluie de rou Sudan III (colorant specific pentru substanele grase). Pentru a accelera colorarea, lama se poate nclzi uor la flacr. Picturile lipidice se coloreaz n rou portocaliu.

63

c. a c. st ost

aml

lc

A.

B.

olp

Fig. 8 - Plastide incolore (leucoplaste): A Leucoplastele din celulele anexe ale stomatelor din epiderma frunzei de telegraf - Zebrina pendula, fam. Commelinaceae, B - Amiloplastele din celulele cotiledoanelor embrionului de stejar Quercus robur, fam. Fagaceae, C - Oleoplastele din seminele de bostan Cucurbita pepo, fam. Cucurbitaceae: aml amiloplaste, c. a celul anex, c.st celul stomatic, n nucleul, lc leucoplaste, ost ostiol, olp oleoplaste

C.

Test de autocontrol
TESTUL 6 1. Ce culoare au leucoplastele? a. verzi b. roii portocalii c. sunt incolore 2. Unde sunt localizate amiloplastele din ghinda de stejar? 3. Ce coloraie se utilizeaz pentru evidenierea oleoplastelor?

2. 4. Mitocondriile
Mitocondriile sunt organite complexe, prezente in celulele tuturor organismelor aerobe (oxibionte). Conin numeroase enzime capabile de a degrada unele substane organice pana la dioxid de carbon si apa si de a pune in libertate o mare cantitate de energie. De aici si numele lor, sugestiv, de uzinele energetice ale celulei. Mitocondriile au aspectul unor vezicule elongate, cu un contur neregulat, care se pot fragmenta sau , dimpotriv, pot fuziona. Diametrul redus face dificila observarea lor in vivo la microscop. Dup o colorare adecvata (ex. cu soluia Lugol sau verde de Janus) ele devin vizibile sub forma unor granule sau bastonae. Intr -o celula sunt numeroase mitocondrii;ansamblul lor formeaz condriomul celular.

64

 RETINETI! Cum este alctuita o mitocondrie!

2. 5. Nucleul
Este cel mai important organit al celulei eucariote, fiind considerat centrul coordonator al tuturor proceselor celulare vitale. La nivelul su este localizat cea mai mare parte a informaiei genetice i, ca urmare, are un rol esenial n stocarea i transmiterea informaiilor ereditare la descendeni, procese realizate prin intermediul cromozomilor. Forma i poziia nucleului Nucleul din celulele tecii crnoase a frunzelor din bulbul de ceap - Allium cepa, fam. Liliaceae (form lenticular i circular) (vezi fig. 2). Fragmente din epiderma superioar a tecii crnoase din bulbul de ceap se coloreaz cu verde de metil acetic. Nucleii devin albatri-verzui, iar restul constituenilor rmn incolori. Celulele prezint o vacuol central mare, ce mpinge citoplasma i constituenii acesteia, inclusiv nucleul, la periferie. n unele celule nucleul este situat central, avnd form circular (atunci cnd este localizat ntre tonoplast i peretele extern al celulei epidermice). n altele, nucleul are o poziie parietal i form lenticular (cnd este situat ntre tonoplast i unul din pereii late rali ai celulei). Se observ c forma nucleului variaz n funcie de poziia sa n celul i, deci, n funcie de unghiul din care este observat. Nucleul din celulele stomatice ale frunzei de telegraf - Zebrina pendula, fam. Commelinaceae (fig. 9 A). Fragmente din epiderma inferioar a frunzei se coloreaz cu nigrosin. n celulele stomatice se observ nuclei de form semilunar, de culoare gri nchis sau neagr. Seciunile transversale prin regiunea pilifer a rdcinii de gru se observ necolorate, n tr-o pictur de ap. n perii absorbani scuri (foarte tineri) nucleul sferic se observ la baza lor, iar n cei lungi (maturi) nucleul este situat n poziie subterminal, nconjurat de o mas dens de citoplasm. APLICATIE PRACTICA

65

c. a c. st ost n

c. t

A.

B.
Fig. 9 Forma i poziia nucleului: A Nucleul semilunar din celulele stomatice ale frunzei de telegraf - Zebrina pendula, fam. Commelinaceae., B Nucleul fusiform din celulele parenchimului medular al tulpinii de tei - Tilia tomentosa, fam. Tiliaceae, C - Nucleul n poziie subterminal din perii absorbani ai rdcinii de gru Triticum aestivum, fam. Poaceae: c. a celul anex, c. st celul stomatic, c. t celul cu tanin, cit citoplasm, n nucleu, ost ostiol, p. abs pr absorbant

p. abs

n cit

C.

RETINETI! Principalele componente ale nucleului!

Reticul endoplasmic

Membrana externa Membrana interna Cromatina

Nucleol

Por nuclear

Ribozomi

Test de autocontrol
TESTUL 7 1. Care sunt principalele componente ale nucleului? 2. Ce forma are nucleul in celulele tecii crnoase a bulbului de ceapa? a. circulara b. semilunara c. lenticulara 3. Unde este localizat nucleul in perii absorbani ai rdcinii?

66

3. Constitueni neprotoplasmatici (nevii) ai celulei

3. 1. Vacuomul celular (incluziuni apoase)
Vacuomul (sistemul vacuolar) este foarte bine dezvoltat n celulele vegetale. Fiecare vacuol este delimitat de o membran simpl numit tonoplast. n celulele meristematice vacuolele sunt mici, nefiind observabile la microscopul fotonic. Celulele asimilatoare, celulele parenchimatice, celulele epidermice .a. au o vacuol mare, central sau ma i multe vacuole mari ce ocup pn la 90% din volumul celular. Sucul vacuolar conine n principal ap i diferite substane n stare dizolvat. Rolul vacuolelor este de a interveni n schimburile de ap, ioni i substane organice dintre celul i mediul extern. Vacuola din celulele mezocarpului fructului de lemn cinesc - Lygustrum vulgare, fam. Oleaceae (fig. 10). Cteva celule din mezocarpul fructului se observ ntr-o pictur de ap. Dac fructul este bine copt, n APLICATIE unele dintre ele vacuola conine antociani (colorani PRACTICA naturali) ce confer vacuolei o culoare albastru deschis sau violet pal. n citoplasm se observ i cteva cloroplaste mici, de culoare verde, precum i nucleul, uor refringent. Coloraia vital a vacuolei Se folosesc fragmente din epiderma superioar a tecii crnoase din bulbul de ceap - Allium cepa, fam. Liliaceae, colorate cu rou neutru n concentraie de 0,001%. Roul neutru este un colorant vital (nu omoar celula) care se acumuleaz n sucul vacuolar fr a-i mri concentraia osmotic. Astfel, vacuola se coloreaz n roz, restul constituenilor rmnnd incolori. Se poate observa faptul c vacuola ocup cea mai mare parte din volumul celulei. Linia ce delimiteaz vacuola colorat de citoplasma necolorat este tonoplastul.

p. c v n
Fig. 10 - Vacuola din celulele mezocarpului fructului de lemn cinesc -Lygustrum vulgare, fam. Oleaceae: cit citoplasm, clp cloroplaste, n nucleu, p. c perete celular, v vacuol

clp

3. 2. Incluziuni solide (ergastice)

Sunt formaiuni citoplasmatice rezultate din activitatea vital a protoplastului. Diversitatea incluziunilor ergastice este d eterminat de specificitatea metabolic a fiecrui esut. Ele sunt reprezentate de produi secundari ai metabolismului ce au, de cele mai multe ori, rol de substane de rezerv i vor reintra parial n circuitul metabolic al celulei. Mai rar sunt substane de excreie ce nu mai pot fi refolosite de plant. a. Granulele de amidon - granule simple, n endospermul seminei de gru - Triticum aestivum i de porumb Zea mays, fam. Poaceae (fig. 11 A, B). n toate cazurile se ndeprteaz pericarpul cariopsei i se rzuie puin material amidonos din endospermul seminei. Acesta se observ ntr-o pictur de ap, ntre lam i lamel. La gru, granulele de amidon sunt sferice sau uor ovale, de mrime diferit, cu hil centric, punctiform i cu striuri de cretere puin vizibile la microscopul fotonic. La porumb, granulele de amidon sunt poliedrice, cu hilul centric, de form stelat, cu striuri de cretere foarte fine. - granule compuse, n endospermul seminei de orez Oryza sativa i de ovz Hordeum vulgare, fam. Poaceae (fig. 11 C). Sunt formate din granule simple, de form poliedric.

67

- granule simple, compuse i semicompuse, n celule din parenchimul de depozitare al tuberculului de cartof - Solanum tuberosum, fam. Solanaceae. Se taie o felie din tuberculul de cartof, iar suprafaa proaspt tiat se atinge uor de o lam curat. Se adaug o pictur de ap i se observ la microscop. Majoritatea granulelor de amidon sunt simple, cu hil excentric i cu striuri de cretere vizibile, mari sau mici. Prin tre acestea se observ i granule semicompuse; acestea sunt formate din dou (rar trei) granule simple ce prezint la periferie pturi comune de amidon (fig. 11 D). Preparatul se poate colora cu o soluie diluat de Lugol. Granulele se coloreaz n nuane de la albastru foarte nchis (spre negru) pn la violet pal; la acestea din urm, striurile de cretere devin foarte evidente.

A.

B.

C.

D.

Fig. 11 Granule simple i compuse de amidon: A granule simple, n endospermul seminei de gru Triticum aestivum, B - granule simple, n endospermul seminei de porumb Zea mays, fam. Poaceae., C - granule compuse, n endospermul seminei de ovz Hordeum vulgare, fam. Poaceae, D - granule simple, compuse i semicompuse, n celule din parenchimul de depozitare al tuberculului de cartof - Solanum tuberosum, fam. Solanaceae

b. Granulele de aleuron din celulele endospermului seminei de ricin Ricinus communis, fam. Euphorbiaceae (fig. 12 A). Aleurona este o substan de natur proteic, ce apare n celulele esuturilor de depozitare n urma deshidratrii vacuolelor. gl cr p. c

mb

sf. in

A.

B.

Fig. 12 A Granule compuse de aleuron din celulele endospermului seminei de ricin Ricinus communis, fam. Euphorbiaceae, B - Sferocristalele de inulin din rdcina tuberizat de dalie Dahlia variabilis, fam. Asteraceae: cr cristaloid, gl globoid, mb membran, p. c perete celular, sf. in sferocristale de inulin

Seciuni fine prin endospermul seminei se observ la microscop ntr -o pictur de ap. n interiorul celulelor poligonale se observ granule compuse de aleuron. Acestea prezint un globoid (alctuit din fitin inozitofosfat de calciu i magneziu) i un cristaloid (de natur proteic). Fiecare granul este delimitat de o membran (fostul tonoplast al vacuolei) de natur l ipo

68

proteic. Uneori, pe lng aceste componente se mai pot observa i cristale de oxalat de calciu sau picturi lipidice. c. Sferocristalele de inulin din rdcina tuberizat de dalie Dahlia variabilis, fam. Asteraceae (fig. 12 B). Inulina este un compus de natur glucidic (un polizaharid) ce se ntlnete mai ales n celulele din esutul de depozitare al rdcinilor tuberizate de la unele compozee. n mod normal inulina se gsete n vacuol, sub form de soluie coloidal, ns precipit uor n alcool etilic concentrat (80 90%) sau n glicerin anhidr. Seciunile efectuate prin rdcina tuberizat de dalie, care au fost inut n prealabil n alcool etilic concentrat cel puin o sptmn. Se observ ntr -o pictur de glicerin anhidr (dac seciunile se pun n ap, cristalele de inulin nu se mai observ, aceasta fiind solubil n ea). Datorit deshidratrii, coninutul celular nu se mai observ. Cristalele de inulin au forma unor evantaie cu marginea ondulat i sunt depuse pe lng pereii celular, la colurile acestora sau n dreptul unor punctuaii. n interiorul cristalelor se pot observa numeroase striuri dispuse radiar. d. Cristalele de oxalat de calciu Cristalele de oxalat de calciu sunt considerate drept un deeu rezultat n urma activitii celulelor. De fapt, n urma unor procese metabolice rezult acid oxalic care, n exces, este toxic pentru celula vie. Pentru a-l neutraliza, acesta este transformat n oxalat de calciu (o sare a acidului oxalic), netoxic, care se depune n celule sub form de cristale simple sau compuse. - ursini (druze) din peiolul frunzei de begonie Begonia semperflorens, fam. Begoniaceae (fig. 13 A). Seciunile prin peiolul frunzei de begonie se observ ntr -o pictur de ap. n celulele parenchimului fundamental, ct i n cele ale colenchimului tangenial subepidermic, se pot observa cte unul sau cte doi ursini (druze). Acetia reprezint cea mai rspndit form de cristale de oxalat de calciu; au o form globular -epoas datorit concreterii unui numr mare de cristale simple, cu vrful ascuit orientat spre exteriorul formaiunii. - ursini (druze) n tulpina de tei Tilia tomentosa, fam. Tiliaceae (fig 13 B). Preparate permanente cu seciuni transversale prin tulpina de tei cu structur secundar se analizeaz la microscop. Ursinii de oxalat de calciu se pot observa n celulele parenchimului cortical i n cele ale parenchimului medular. - cristale simple (izolate sau compuse macle) n catafilele bulbului de ceap - Allium cepa, fam. Liliaceae (fig. 13 C). Catafilele bulbului de ceap (cele periferice, uscate, maronii) se fierb n ap cteva minute, dup care se taie n buci mici ce se observ ntr -o pictur de glicerin. n celulele de form poligonal se observ cristale simple de form prismatic sau asociate cte 2 -4, constituind macle. - rafide n frunza de vi-de-vie Vitis vinifera, fam. Vitaceae. Se efectueaz preparate permanente cu seciuni transversale prin limbul frunzei de vi -devie. Mezofilul este difereniat n esut palisadic i esut lacunos. n grosimea mezofilului se observ nite celule mari, orientate diferit, n care sunt vizibile pachete de cristale aciculare de oxalat de calciu, numite rafide (fig. 13 D). - nisip oxalifer (oxalat de calciu fin cristalizat) poate fi observat n celulele periferice ale tuberculului de cartof Solanum tuberosum, fam. Solanaceae, n celulele parenchimului cortical ale tulpinii de soc Sambucus nigra, fam. Caprifoliaceae sau n cele ale tulpinii de mtrgun Atropa belladonna, fam. Solanaceae.

69

ep t. psd us rf

t. lac

A.

C.

us

cr. s mcl

B.

D.

Fig. 13 Cristale de oxalat de calciu: A ursini din peiolul frunzei de begonie Begonia semperflorens, fam. Begoniaceae, B - ursini n tulpina de tei Tilia tomentosa, fam. Tiliaceae, C - cristale simple n catafilele bulbului de ceap - Allium cepa, fam. Liliaceae, D - rafide n frunza de vi-de-vie Vitis vinifera, fam. Vitaceae: c. col celul de colenchim, cr. s cristale simple, ep epiderm, mcl macle,t. psd esut palisadic, t. lac esut lacumos, rf rafide, us ursin

Fig. 14 Celul cu nisip oxalifer din parenchimul tuberculului de cartof, Solanum tuberosum, fam. Solanaceae

70

Test de autocontrol
TESTUL 8 1. Cum sunt vacuolele in celulele tinere, meristematice? a. mari, dezvoltate b. mici, in curs de formare c. lipsesc 2. La care dintre urmtoarele specii se ntlnesc granule de amidon semicompuse? a. Oryza sativa b. Hordeum c. Solanum tuberosum 3. Cate tipuri de cristale de oxalat de calciu cunoatei?

3.3. Peretele celular

Spre deosebire de celulele animale, care sunt delimitate doar de membrana celular (plasmalem), celulele vegetale prezint la periferie i un perete celular scheletic, ce are rolul de al le conserva o form specific i de a le proteja fa de mediul nconjurtor. Celulele animale, lipsite de perete, se numesc gimnoplaste, iar cele vegetale, la care peretele este prezent, se mai numesc i dermatoplaste. Peretele celular este, deci, un component specific al celulei vegetale, fiind elaborat de protoplast, pe care l nvelete, delimitnd celulele ca uniti structural -funcionale i totodat le leag, constituind edificiile tisulare. Celulele tinere, n curs de cretere, sunt protejate de un perete primar subire, extensibil, care permite modificarea formei i dimensiunilor acestora. Dup ce celula i -a terminat diferenierea, ea poate rmne protejat doar de peretele primar (aa cum este cazul unor celule parenchimatice) sau, peste peretele primar, spre interiorul celulei se depune un perete secundar, de grosime variabil (ca la fibrele de sclerenchim, vasele de lemn). De cele mai multe ori acest perete secundar sufer diverse modificri chimice. Compoziia chimic a peretelui celular este foarte variat la diferite grupe taxonomice. Ansamblul substanelor ce intr n constituia lamelei mediane, a peretelui primar i a celui secundar au fost mprite de ctre Wardop (1963) n trei grupe: - substane scheletice, cristaloide celuloza, glucanul, mananul, xilanul; - substane ce formeaz matrixul, au caracter amorf i rol de liant - poliuronide, hemiceluloze, unele proteine i lipide; - substane ncrustante, caracteristice pereilor ce sufer modificri chimice secundare lignina, suberina, cutina, ceara, taninuri, rini, sruri minerale i organice, oxizi. a. peretele celular i punctuaiile simple din celulele mduvei de soc - Sambucus nigra, fam. Caprifoliaceae (fig. 15 A). Punctuaiile reprezint poriuni mai puin ngroate din peretele celular ce conin plasmodesme, prin intermediul crora se realizeaz comunicarea dintre dou celule vecine. Un fragment de mduv de soc se secioneaz transversal ct mai fin cu ajutor ul briciului botanic i se observ la microscop necolorat sau colorat cu rou rutheniu. Celulele sunt rotunjite, cu spaii aerifere ntre ele, protejate doar de peretele primar, celulozic. n pereii dintre dou celule se observ punctuaii simple, canaliculare. Dac seciunea este mai groas, n pereii transversali se pot observa punctuaiile de fa, cnd apar ca nite mici orificii circulare.

71

p. c

p. c l. m

A.
pct
Fig. 15 A - peretele celular i punctuaiile simple din celulele mduvei de soc - Sambucus nigra, fam. Caprifoliaceae, B peretele celular i punctuaiile simple din celulele mduvei tulpinii de la curpenul de pdure Clematis vitalba, fam. Ranunculaceae: l. m lamela median, m meat, p. c perete celular, pct punctuaie

B.

b. peretele celular i punctuaiile simple din celulele mduvei tulpinii de la curpenul de pdure Clematis vitalba, fam. Ranunculaceae (fig. 15 B). Mduva este format din celule cu pereii ngroai i lignificai. Punctuaiile simple sunt uor vizibile la nivelul pereilor laterali, deoarece ele strbat att peretele primar ct i pe cel secundar. La o punctuaie simpl se disting: - o cavitate, de forma unui canal simplu sau ramificat, la nivelul peretelui secundar; - o deschidere circular sau oval spre lumenul celular; p. p l. m p. s t m

A.

d. pct

Fig. 16 Punctuaii areolate cu torus din pereii traheidelor din lemnul de pin Pinus sylvestris, fam. Pinaceae: A vzute n seciune transversal, B vzute n seciune longitudinal, C vzute de fa: d. pct deschiderea punctuaiei, l. m lamela median, m margo, p. p perete primar, p. s perete secundar, t torus

B. C.

o membran obturant reprezentat de pereii primari ai celor dou celule vecine, mai subiri dect n rest i de lamela median dintre acestea. c. punctuaii areolate din pereii traheidelor din lemnul de pin Pinus sylvestris, fam. Pinaceae (fig. 16). Se efectueaz seciuni transversale i longitudinale prin lemnu l secundar de pin, cu ajutorul xilotomului sau al criomicrotomului i se coloreaz cu verde iod i rou carmin alaunat, sau cu fast -

72

 green i safranin. Se observ punctuaiile areolate din pereii traheidelor (elementele conductoare lemnoase), mai ales n lemnul timpuriu. n pereii secundari ngroai ai traheidelor, straturile succesive de celuloz se dispun arcuat peste marginea punctuaiei, ca dou sticle de ceas aezate fa n fa. Vzute pe seciuni transversale, punctuaiile prezint o cavitate eliptic delimitat de aceste rsfrngeri ale pereilor secundari; cavitatea comunic cu cele dou celule prin deschiderile punctuaiei, mici, de form circular. n mijlocul cavitii se afl membrana obturant, format de pereii primari ai celor dou celule i de lamela median. Pe aceast membran este vizibil o ngroare fuziform, lignificat, impermeabil pentru ap, numit torus. Poriunea rmas din membrana obturant care nu este acoperit de torus se numete margo i este permeabil pentru seva brut. Rolul torusului este foarte important, avnd n vedere c el se gsete la gimnosperme, care triesc n regiuni cu clim temperat, avnd frunze verzi i pe timpul iernii. Traheidele, n pereii crora sunt prezente aceste punctuaii, sunt vase i mperfecte, nchise la capete, astfel nct circulaia sevei brute de la o traheid la alta se face doar prin intermediul punctuaiilor. n timpul anotimpului cald torusul are o poziie central, seva circulnd de la o celul la alta doar prin intermediul zonei permeabile a membranei obturante margo. n timpul iernii torusul se deplaseaz la dreapta sau la stnga, nchiznd punctuaia i mpiedicnd circulaia sevei brute. Acest proces este important, deoarece ntr-o zi nsorit de iarn circulaia sevei s -ar putea accelera, iar peste noapte, datorit temperaturilor foarte sczute, apa ar nghea n vase i, mrindu-i volumul, ar distruge esutul conductor. Vzut de fa (pe seciuni longitudinale), punctuaia areolat cu torus apare format din trei cercuri concentrice: cel extern delimiteaz cavitatea punctuaiei, cel mijlociu, care se observ mai greu, micnd urubul micrometric, reprezint torusul, iar cel mic, central, este deschiderea punctuaiei.

Test de autocontrol
TESTUL 9 1. Ce este peretele celular? 2. Care este structura unei punctuatii simple? 3. Care este rolul torusului la gimnosperme?

3.4. Modificri chimice secundare ale peretelui celular n cursul procesului de citodifereniere au loc modificri gradate n structura, biochimia i fiziologia celulei, ce se concretizeaz n specializarea acesteia pentru ndeplinirea unei anumite funcii n viaa plantei. Modificrile apar inclusiv la nivelul pereilor celulari i constau n depunerea de noi substane printre cele preexistente, care confer noi proprieti acestora. Aceste metamorfoze chimice, fizice i fiziologice suferite de pereii celulari n cursul diferenierii poart denumirea de modificri secundare.

73

a. ncrustarea cu polifenoli lignificarea Lignificarea este un proces caracteristic cormofitelor, cu o larg rspndire n natur, ce confer celulelor o rezisten mecanic sporit . Lignificarea pereilor celulari ncepe de la lamela median, continu n peretele primar i apoi n cel secundar, de la periferie spre centru. Uneori, partea intern a peretelui secundar poate rmne nelignificat. Lignificarea n elementele esutului conductor lemnos din tulpina lbr de soc Sambucus nigra, fam. Caprifoliaceae. Seciuni transversale prin tulpina cu structur secundar se coloreaz diferit pentru punerea n eviden a ligninei n pereii vaselor i a fibrelor lemnoase din par. lemnul secundar. lm Lignina are n mod natural culoarea galben, care poate fi intensificat prin colorarea cu sulfat de anilin. Seciunile se in 3 -5 minute n colorant, apoi se trec n acid sulfuric diluat i se observ ntr-o pictur de ap. Pereii lignificai ai vaselor de lemn, fibrelor lemnoase, precum i ai fibrelor de vs. lm sclerenchim perifloemic se coloreaz galben intens. Culoarea scade ca intensitate n timp, dac seciunile se monteaz n glicero-gelatin, pentru Fig. 17 Seciune transversal prin lemnul obinerea de preparate permanente. secundar al tulpinii de soc - Sambucus nigra, O alt coloraie de identificare a fam. Caprifoliaceae: lbr fibriform, par. lm ligninei este cea cu fluoroglucin i acid parenchim lemnos, vs. lm vase de lemn clorhidric. Seciunile cele mai subiri se in n colorant cteva secunde, apoi se adaug o pictur de acid clorhidric concentrat. Pereii celulari lignificai se coloreaz n vii niu. n afar de coloraiile specifice, de identificare a ligninei, celulele cu perei lignificai se coloreaz n verde cu verde iod i n rou cu safranin. b. apoziii lipidice Reprezint impregnarea sau depunerea peste peretele celular a unor substane de natur lipidic. Pereii astfel modificai chimic devin impermeabili pentru ap sau alte substane. - cutinizarea i cuticularizarea Cutinizarea reprezint impregnarea peretelui extern al celulelor epidermice cu o substan gras numit cutin. Uneori impregnarea intereseaz i pereii laterali i chiar pe cei interni ai celulelor epidermice sau pereii celulelor ce delimiteaz camera substomatic, camerele i canalele aerifere din corpul unor plante. Cutina lichid secretat n exces se depoziteaz la suprafaa epidermei unde prin oxidare n contact cu aerul se transform ntr -o ptur continu ce acoper celulele epidermice i pe cele stomatice, fiind ntrerupt doar n dreptul ostiolelor. Aceast ptur se numete cuticul i este prezent pe suprafaa epidermei la toate organele aeriene ale plantei, iar procesul se numete cuticularizare. Cuticula are grosime diferit funcie de mediul n care crete planta: este foarte groas la speciile ce triesc n deert (xerofite), subire la cele ce triesc n condiii de umiditate normal (mezofite) i lipsete la plantele acvatice (hidrofite) submerse. Cutinizarea i cuticularizarea n pereii celulelor epidermice ale frunzei de ieder Hedera helix, fam. Araliaceae (fig. 18).

74

Seciunile transversale prin frunz se coloreaz cu rou Sudan III i cu reactivul Chodat (genovez). Celulele epidermice sunt izodiametrice, cu peretele extern ngroatz i acoperit de o cuticul. Cu rou Sudan III, cuticula se coloreaz n rou i peretele extern al celulelor epidermice n roz; cu reactivul Chodat, cuticula se coloreaz n galben i peretele celular n roz. Impregnarea cu cutin a peretelui extern nu este total, ea afectnd mai ales poriunile superioare ale acestora. Cutinizarea i cuticularizarea n pereii celulelor epidermice ale frunzei de ficus - Ficus elastica, fam. Moraceae Preparatele se obin i se coloreaz la fel ca n cazul APLICATIE anterior (fig. 19). PRACTICA - ceara i cerificarea - reprezint o alt modificare secundar pe care o sufer peretele extern al celulelor epidermice i const n impregnarea cu cear a cuticulei i a peretelui cuticularizat sau depunerea cerii peste acestea. ct p. c c. ep

A.

t. psd

B.

Fig. 18 Seciune transversal prin frunza de ieder Hedera helix, fam. Araliaceae: A ansamblu, B detaliu: c. ep celul epidermic, ct cuticula, n nucleu, p. c perete celular, t. psd esut palisadic (orig.)

Ceara amestecat cu cutina apare sub forma unor plachete sau granule, iar ceara depus peste cuticul (numit i epicuticular) formeaz un strat subire, ornat cu granule sferice sau neregulate, structuri baciliforme, filiforme, drepte sau curbate, inelare, spiralate .a. Impregnarea i acoperirea pereilor celulari cu cear reduce mult permeabilitatea acestora, limitnd schimburile (n special pierderile de ap prin transpiraie) dintre plant i mediu, sporindu -i rezistena la secet i la atacurile unor parazii. ct
Fig. 19 Seciune transversal prin frunza de ficus Ficus elastica, fam. Moraceae: se observ epiderma tristratificat, stratul extern de celule fiind acoperit de o cuticul (ct) groas

75

ct

b. c

c. ep d. c

B.

C.

A.

Fig. 20 Ceara i cerificarea: A - observarea macroscopic a depunerilor de cear frunzele de brad - Abies alba, fam. Pinaceae, B seciune transversal prin frunza de varz - Brassica oleracea, fam. Brassicaceae, C seciune transversal prin frunza de salcie Salix alba, fam. Salicaceae: b. c bastonae de cear, c. ep celule epidermice, ct cuticul, d. c dungi de cear

- observarea macroscopic a depunerilor de cear frunzele de brad - Abies alba, fam. Pinaceae (fig. 20 A). Frunzele de brad sunt aciculare, cu vrful emarginat (tirbit). Pe faa inferioar a frunzei se observ dou dungi de culoare alb, care reprezint depuneri de cear, de o parte i de alta a nervurii mediane. - ceara i cerificarea n peretele extern al celulelor epidermei frunzei de varz Brassica oleracea, fam. Brassicaceae (fig. 20 B). Seciunile transversale prin frunza de varz se observ la microscop. Pes te celulele epidermice se observ un strat de cear de grosime medie. - ceara i cerificarea n peretele extern al celulelor epidermei frunzei de salcie Salix alba, fam. Salicaceae (fig. 20 C). Pe suprafaa celulelor epidermei inferioare se observ cear epicuticular, depus sub form de bastonae drepte sau curbate. - suberificarea Const n impregnarea pereilor celulari (ndeosebi a celui secundar) cu o substan lipidic numit suberin. ep Depunerea acesteia se face prin apoziie sb. m sb. t (lamele subiri de suberin alterneaz cu straturile de flg celuloz din peretele secundar; ultimul A. B. strat depus spre interiorul celulei Fig. 21 Suberificarea: A Seciune transversal prin tuberculul de cartof Solanum fiind de celuloz tuberosum, fam. Solanaceae, B Seciune transversal prin tulpina de soc Sambucus pur). Suberina, nigra, fam. Caprifoliaceae: ep epiderma, flg felogen, sb suber (m moale, t tare) fiind impermeabil pentru ap i gaze, izoleaz protoplastul de mediul nconjurtor i astfel celula moare. Dei formate din celule moarte, esuturile suberificate au un rol important n viaa plantei, reducnd transpiraia, constituind un izolator termic i aprnd esuturile vii ale scoarei i cilindrului central de atacurile unor parazii. - suberul moale la tuberculul de cartof Solanum tuberosum, fam. Solanaceae (fig. 21 A). Prin zona extern a tuberculului de cartof se fac seciuni transversale, care se observ la microscop necolorate, ntr-o pictur de ap, sau colorate cu rou Sudan III ori fucsin bazic.

76

Suberul este format din celule tabulare, strns legate ntre ele, fr spaii aerifere i cu pereii subiri. Culoarea natural a suberului este maro, iar prin colorare cu reactivii menionai se coloreaz n rou. - suberul tare la tulpina de soc Sambucus nigra, fam. Caprifoliaceae (fig. 21 B) Seciunile transversale prin tulpina de 2 ani, cu structur secundar, se observ la microscop necolorate sau colorate cu verde iod. La periferia tulpinii se observ epiderma nc persistent. Sub aceasta sunt vizibile 3 -4 straturi de celule ale suberului; acestea sunt dreptunghiulare, cu pereii ngroai i uor ondulai. n unele celule se observ tanin. Sub suber se observ felogenul (esutul meristematic din activitatea cruia ia natere spre exterior suberul i spre interior felodermul). Pe seciunile necolorate suberul are culoare maro, iar pe cele colorate, culoare verde. c. mineralizarea Reprezint impregnarea pereilor celulari cu o gam variat de substane minerale i organice. Prin mineralizare, peretele celular devine mai dur, mai rezistent la presiune, torsiune, la aciunea unor ageni chimici i la atacul unor parazii.

ct

c. ep

ep cst t. psd

c. st c.a

A.

B.

Fig. 22 A Seciune transversal prin frunza de ficus Ficus elastica, fam. Moraceae, B Spodograma la porumb Zea mays fam. Poaceae: c. a celul anex, c. ep celul epidermic, c. st celul stomatic, cst cistolit, ct cuticula, ep epiderm, t. psd esut palisadic

- cistolitul din celulele epidermice ale frunzei de ficus Ficus elastica, fam. Moraceae (fig. 22 A). APLICATIE Pe seciuni transversale prin frunza de ficus se PRACTICA observ epiderma superioar tristratificat, stratul extern fiind alctuit din celule mici, acoperite de cuticul, iar straturile interne din celule mult mai mari. Unele celule din straturile interne ale epidermei sunt foarte mari i prezint nite concreiuni formate din carbonat de calciu n form de ciorchine, numite cistolii. Depunerea carbonatului de calciu se face pe o invaginaie a peretelui extern al celulei, care are form se evantai. Scheletul celulozic al cistolitului poate fi evideniat prin introducerea sub lamel a unei picturi de acid clorhidric. n contact cu cistolitul, acesta se dizolv cu efervescen, rmnnd vizibil doar scheletul celulozic acestuia. - silicificarea reprezint impregnarea pereilor celulari cu dioxid de siliciu. Acest fenomen se poate evidenia prin nlturarea prin ardere i splare cu acizi a substanei organic e din celulele epidermice i observarea scheletului silicificat la microscop. Astfel de imagini microscopice ale scheletului silicificat, obinute prin microincinerarea unor fragmente de esut vegetal, se numesc spodograme. Silicificarea la celulele epidermice ale frunzei de porumb Zea mays fam. Poaceae (fig. 22 B) i la celulele epidermice ale tulpinii de coada calului Equisetum arvense fam. Equisetaceae

77

Fragmente de epiderm se depun pe o plcu metalic prevzut cu un mner de lemn i se nclzesc pn la ardere, 5 minute la becul de gaz. Seciunile se spal cu acid sulfuric concentrat i cu acid clorhidric concentrat, iar apoi cu ap distilat. Seciunile se monteaz n glicero-gelatin i se observ la microscop.

Test de autocontrol
TESTUL 10 1. De unde ncepe lignificarea pereilor celulari? a. de la peretele primar b. de la peretele secundar c. de la lamela mediana 2. Care sunt coloraiile de identificare a ligninei ? 5. Ce este suberificarea ? RETINETI! Principalele componente ale celulei vegetale! A nucleolul B nucleul C citoplasma D cloroplastul E membrana celulara F peretele celular G vacuola H punctiuatia I reticulul endoplasmic J amilpolastul K - mitocondria

78

4. Diviziunea celular
4. 1. Mitoza diviziunea ecvaional, tipic, somatic (fig. 23)
Mitoza (diviziunea ecvaional, somatic, indirect, tipic) are loc n celulele somatice ale plantei, localizate la nivelul meristemelor primare (apexul cau linar i apexul radicular) ct i la nivelul celor secundare (cambiul i felogenul). n urma diviziunilor mitotice repetate crete numrul celulelor din corpul plantei (de la una celula ou, la zeci i sute de milioane n organismul vegetal adult). Mitoza cuprinde dou etape: cariocineza diviziunea nucleului n cei doi nucleu fii i citocineza diviziunea celulei-mam n dou celule fiice. n cazul mitozei se pleac de la o celul diploid (2n) i se ajunge la dou celule tot diploide. Materialul vegetal care se utilizeaz pentru observarea fazelor diviziunii mitotice este reprezentat de vrful rdcinilor adventive de la zambil Hyacinthus orientalis, fam. Liliaceae. Probele (fragmente de rdcin) se mparafineaz, se secioneaz la microtomul rotativ i se coloreaz cu hemeatoxilin feric i fast green; cromozomii i nucleii se coloreaz n albastru nchis pn la negru, iar citoplasma i pereii celulari n verde. n regiunea subapical (zona de proliferare foarte activ) se observ fazele diviziunii mitotice. Ciclul celular cuprinde dou etape: interfaza i diviziunea propriu -zis. n cadrul ciclului celular, celula se afl cea mai mare parte din timp n interfaz. n timpul acestei etape are loc un proces foarte important dublarea cantitii de ADN, ceea ce permite, n final, ca dintr -o celul diploid s rezulte dou celule tot diploide. Fiecare cromozom, iniial monocromatidic, devine astfel bicromatidic. Cromatida preexistent i sintetizeaz cromatida sor dup modelul semiconservativ. Profaza n aceast faz, n interiorul nucleului devin vizibili cromozomii n urma unor cicluri succesive de condensare a cromatinei. La sfritul profazei anvelopa nuclear se dezorganizeaz. Nucleoplasma se amestec cu citoplasma, rezultnd mix oplasma, n care se vor observa urmtoarele faze ale mitozei. Metafaza ncepe cu formarea fusului de diviziune. Cromozomii bicromatidici se dispun cu centromerul n placa ecuatorial i cu braele spre polii celulei. Anafaza la nceputul anafazei cro mozomii bicromatidici se cliveaz la nivelul centromerului, rezultnd doi cromozomi monocronatidici ce vor migra, tractai de fibrele fusului de diviziune, spre cei doi poli ai celulei. n aceast faz cromozomii sunt orientai cu centromerii spre poli i cu braele spre fosta plac ecuatorial. Telofaza cele dou grupe de cromozomi ajung la polii celulei. Iniial braele cromozomilor sunt ndreptate spre centrul celulei, pentru ca apoi s se strng spre interior, prin aa -numitul fenomen de tasare polar. Nucleii fii se organizeaz prin refacerea anvelopelor nucleare. n mijlocul celulei, pe locul fostei plci metafazice, apare o formaiune numit fragmoplast. Aceasta este format din vezicule golgiene i profile de reticul endoplasmic, dispuse ntre fibrele fusului de diviziune. Aici se va forma lamela median i apoi cei doi perei primari ce vor despri celulele fiice nou formate. Citocineza reprezint mprirea citoplasmei i a organitelor din ea n dou jumti aproximativ egale, care se distribuie n cele dou celule fiice.

79

c. m ncl

cr c. f

fg

Fig. 23 Fazele mitozei: a d profaza, e g metafaza, h anafaza, i,j telofaza, k, l citocineza: c. f celule fiice, c. m celula mam, cr cromozomi, fg fragmoplast, n nucleu, ncl - nucleol

80

Test de autocontrol
TESTUL 11 1. Care sunt etapele diviziunii mitotice? 2. Care sunt evenimentele celulare ce au loc in profaza?

4. 2. Meioza diviziunea reducional, atipic (fig. 24)

n celulele esutului sporogen al anterei staminale de crin Lilium candidum, fam. Liliaceae Meioza (diviziunea reducional, de maturaie, de reducere cromatic) are loc n esutul sporogen la formarea celulelor de reproducere (spori, foarte rar gamei la alga brun Fucus). Ea cuprinde dou etape: o diviziune reducional (heterotipc), n cursul creia numrul de cromozomi se reduce la jumtate i o diviziune ecvaional sau homeotipic ce conserv numrul haploid de cromozomi (n). n urma meiozei rezult tetrade de micro - sau de macrospori. Materialul vegetal utilizat pentru observarea meiozei este reprezentat de antere de crin Lilium candidum, fam. Liliaceae. Pregtirea se face n acelai fel ca i n cazul celui folosit pentru observarea mitozei. n sacii polinici ai anterei staminale se observ formarea granulelor de polen (microsporilor). I. Mitoza reducional (heterotipic) a. Profaza I cuprinde cinci stadii, mai dificil de distins. n primele stadii: leptoten i zigoten, cromozomii omologi subiri se mperecheaz cte doi, formnd bivalenii. n urmtorul stadiu pachiten cromozomii se scurteaz i se ngroa, iar apoi devin vizibile cele dou cromatide (diploten); n acest stadiu are loc fenomenul de crossing over (schimbul de segmente cromatidice dintre cromozomii omologi). n diacinez cromozomii ating maximul de spiralizare; anvelopa nuclear se dezorganizeaz i apare fusul de diviziune. b. Metafaza I bivalenii (cromozomii omologi) se dispun n zona ecuatorial formnd placa meafazic. c. Anafaza I cromozomi omologi din bivalent se despart i migreaz spre cei doi poli, fiind ataai de fibrele fusului de diviziune. Spre deosebire de anafaza mitozei somatice, cromozomii care migreaz spre poli sunt bicromatidici. d. Telofaza I cromozomii bicromatidici ajung la cei doi poli ai celulei, se reconstituie nucleii fii, fr ca s aib loc despiralizarea cromozomilor. e. Citocineza I se formeaz cele dou celule fiice, n nucleul fiecrei celule aflndu -se o cantitate dubl de ADN i un numr de cromozomi redus la jumtate. Uneori nu are loc citocineza la finele mitozei reducionale. II. Mitoza ecvaional (homeotipic) a. Profaza II nu este precedat de o interfaz, ca n cazul mitozei somatice. Cromozomii sunt bicromatidici. La sfritul profazei II anvelopa nuclear se dezorganizeaz i ncepe formarea fusului de diviziune. Uneori nu are loc profaza II, ci se trece direct la metafaz. b. Metafaza II cromozomii bicromatidici se dispun cu centromerii n placa ecuatorial a celulelor fiice. c. Anafaza II cromozomii bicromatidici se cliveaz la nivelul centromerului, rezultnd cromozomi monocromatidici care migreaz spre polii celulelor fiice. d. Telofaza II se formeaz patru nuclei fii, ce conin fiecare un numr de cromozomi redus la jumtate comparativ cu celula mam.

81

e. Citocineza II are loc formarea noului perete despritor, rezultnd astfel pat ru celule haploide care, din punct de vedere genetic, nu sunt identice ntre ele i nici cu celula mam din care provin.

Fig. 24 Fazele meiozei:Profaza I: 1 leptoten, 2 zigoten, 3 pachiten, 4 diacineza, 5 Metafaza I, 6 Anafaza I, 7, 8 Telofaza I, 9 diad, 10 Metafaza II, 11 Telofaza II, 12, 13 tetrada

Test de autocontrol
TESTUL 12 1. Care sunt etapele diviziunii meiotice? 2. Care sunt evenimentele celulare ce au loc in profaza I?

82

4.3. Diferentierea si dediferentierea celulara

Citodiferenierea este un proces complex, care se realizeaz treptat n cursul dezvoltrii ontogenetice, conform unui program genetic, a crui consecin este diversificarea morfologic i fiziologic a celulelor cu origine comun. Celulele avnd o origine comun au i un fond genetic comun; ca urmare, diversificarea nu este consecina modificrii fondului genetic, ci a modului difereniat de exprimare a genelor. Corpul plantelor superioare, constituit din zeci de tipuri de celule 76 la angiosperme, 52 la gimnosperme, 27 la ferigi i 20 la muchi), grupate n esuturi, rezult dintr-o singur celul zigotul sau celula-ou; acesta stocheaz ntreaga informaie genetic a generaiilor parentale. n aceste condiii, diferenierea celular, histogeneza i organogeneza trebuie privite ca rezultat al manifestrii difereniate a genomului unic n cadrul variatelor linii celulare. Celulele meristematice, divizndu-se continuu, dau natere la noi i noi celule care cresc i sufer o specializare morfo - fiziologic. Deci, n cazul plantelor pluricelulare, la marea majoritat e a celulelor, diviziunea nu este succedat de o nou nmulire a acestora, ci de o perfecionare structural i funcional a celulelor rezultate n urma multiplicrilor repetate. n procesul de difereniere se pierd progresiv caracterele citologice i fi ziologice ale celulelor derivate din meristeme (caractere specifice celulelor de tip embrionar), ele dobndind caliti proprii celulelor adulte, legate de specializarea funcional a acestora. Diferenierea se realizeaz dup un program prestabilit genetic; o intervenie din afar poate produce o perturbare a dezvoltrii individului, luat n ansamblul sau. n primele faze de difereniere se remarc o modificare ultrastructural i funcional a celulelor, fenomen denumit citodifereniere. Pe plan ultrastructural, diferenierea celulelor parcurge etape variate n strns dependen cu profilul funcional al celulelor integrate n esuturi i organe; pe msura diferenierii, n general, volumul celular crete, scade raportul nucleo -plasmatic, citoplasma devine parietal, se extinde vacuomul (n final ajunge s fie reprezentat de o singur vacuol), care mpinge citoplasma i nucleul la periferia celulei. Plastidomul este alctuit din cloroplaste, cromoplaste sau amiloplaste n funcie de rolul ndeplinit n celule (parenchim asimilator, de rezerv etc.). Pe msura avansrii proceselor de difereniere, peretele celular poate suferi modificri secundare (depuneri de celuloz, lignificare, mineralizare, gelificare sau chiar lichefiere), care conduc treptat la o ngreunare a comunicrii celulelor respective cu celulele nvecinate, intervenind astfel un declin fiziologic i chiar moartea acestora (de exemplu la sclerenchim, suber). Celulele, o dat difereniate, nu se mai divid. Cele care compun un esut sau un organ nu posed acelai ritm de cretere i se afl sub un permanent endocontrol fitohormonal. Dediferenierea reprezint procesul prin care o celul definitiv pierde trsturile pe care le dobndete n procesul de difereniere i le regsete pe cele pe car e le pierduse cnd s-a difereniat. Dediferenierea se manifest mai ales n anumite condiii, cum ar fi formarea peridermei, apariia organelor adventive sau a unor aparate reproductoare (sporangii de la Filicine); se observ, de asemenea, n cursul cicatrizrii sau n cazul multiplicrii vegetative. Caracterele procesului de dedifereniere constau n: - pierderea funciilor fiziologice specifice i, concomitent, pierderea caracterelor structurale corespunztoare; - scderea raportului paraplasm/protoplasm ; - reducerea activitii mitotice; - reapariia de potenialiti histogenetice largi Fazele dediferenierii celulare ar putea fi caracterizate sumar astfel (n cazul meristemelor secundare) : a) Faza preliminar - ce const n eliminarea produilor de rezerv i diminuarea raportului paraplasm/protoplasm; nceputul regresiei condriomului; b) Faza primar (I) - corespunde relurii mitozelor, regresiei plastidelor (ce poate fi nsoit de diviziunea lor), fragmentarii condriomului. O dat cu aceste transformri a re loc revenirea celulelor la starea meristematic (de data aceasta secundar). Celulele se dispun n zone generatoare, urmnd diferenierea (rediferenierea) i formarea de esuturi secundare definitive, c) Faza secundar (II) - presupune creterea cantitii de citoplasm; nucleul redevine sferic i central, mbogindu-se n cromatin. Vacuola unic se fragmenteaz, continu

83

fragmentarea plastidelor i mitocondriilor. Celulele ajung la starea structural a celulelor meristematice primare, se dispun n meristeme apicale (caulinar i radicular); urmeaz diferenierea i formarea de muguri (laterali i adventivi) precum i de rdcini (laterale i adventive).

Test de autocontrol TESTUL 13 1. Care sunt modificarile ultrastructurale ale unei celule in procesul de diferentiere? 2. Care sunt caracteristicile procesului de defiferentiere?

84

REZULTATELE TESTELOR DE AUTOCONTROL TESTUL 1 1. C 2. A 3. Pentru impregnarea in parafina se parcurg urmtoarele etape: - deshidratarea se face n serii crescnde de alcool etilic de 70%, 80% 90% i alcool absolut (trei bi). - clarificarea - se face cu xilen sau cloroform. Probele se introduc n bi succesive formate din amestecuri xilen: alcool etilic absolut pn ce cad la fundul vasului i apoi n xilen pur (dou bi); -impregnarea cu parafin - se realizeaz n termostat la 56 0 62 0C, funcie de punctul de topire a parafinei. Probele se infiltreaz mai nti ntr-un amestec de parafin curat i xilen 1:1, iar apoi n parafin pur. n cazul materialelor foarte fragile, timpul total de includere nu trebuie s depeasc 2-3 ore, n timp ce probele mai rezistente pot fi inute n termostat pn la 12 20 de ore. 4. Cele mai frecvente tipuri de coloraie folosite n anatomia vegetal sunt: - Coloraia dubl cu verde iod i rou carmin alaunat. Verdele iod coloreaz n verde albstrui lemnul, sclerenchimul, suberul (celule cu perei celulari modificai chimic secundar) i cuticula, iar roul carmin coloreaz n roz parenchimul, liberul, colenchimul (celule cu pereii celulari celulozo pectici). - Coloraia cu fast green i safranin. Fast green coloreaz n albastru celulele cu perei subiri, celulozici, iar safranina n rou celulele cu perei lignificai, suberificai sau cutinizai. TESTUL 2 1. Se tie ca puterea separatoare a instrumentelor optice este invers proporionala cu lungimea de unda a radiaiei utilizate. Microscoapele optice nu vor putea da imagini clare ale unor obiecte cu dimensiuni mai mici de circa 0,15 m. Puterea separatoare a putut fi sensibil mrita cu ajutorul microscopului electronic, deoarece lungimea de unda a undei asociate electronului este mult mai mica dect a radiaiilor vizibile sau ultraviolete utilizate de microscopul optic. 2. Microscopul electronic folosete electronii in loc de lumina zilei pentru a produce imagini mrite ale unor obiectelor. 3. C TESTUL 3 1. Celulele vegetale au la periferie un perete scheletic, celulozo-pectic (se numesc dermatoplaste), spre deosebire de celulele animale i foarte puine celule vegetale, la care acesta lipsete (se numesc gimnoplaste). Celulele vegetale prezint, de asemenea, vacuole i cloroplaste, care lipsesc la celulele animale. 2. A 3. Membrana care delimiteaza vacuola se numeste tonoplast. TESTUL 4 1. Proplastidele sunt plastide n curs de difereniere i se gsesc numai n celulele embrionare i meristematice, n timp ce plastidele mature sunt prezente n celule complet difereniate. 2. B 3. A TESTUL 5 1.A, B, C 2. La mce cromoplastele sunt localizate in mezocarpul fructului si au forma ovoidal, poligonal etc., de culoare galben-portocalie, datorit carotinelor i xantofilelor. Ele sunt aglomerate mai ales n jurul nucleului. 3. Cromoplastele de la paducel si de la tomate contin carotina care trece ulterior n izomerul su numit licopen.

85

TESTUL 6 1. C 2. La stejar amiloplastele sunt localizate in celulele din mezofilul cotiledonului. Acestea sunt izodiametrice, rotunjite i conin numeroase amiloplaste de form ovoidal (ce pot ocupa pn la 75 80% din volumul celulei). 3. Coloraia specifica pentru oleoplaste este cu rou Sudan III (colorant specific pentru substanele grase). TESTUL 7 1. Nucleul are o membrana dubla strbtuta de numeroi pori prin care se realizeaz schimbul de substana dintre nucleu si citoplasma. In interiorul nucleului se gsete citoplasma sau nucleoplasma (carioplasma). In afara de aceasta se gsesc 1 -2 nucleoli care sunt sferici. In nucleoplasma se afla filamente de ADN care au rol in transmiterea informaiei genetice. ADN -este un asociat cu proteine si formeaz structuri permanente ce sunt vizibile doar in timpul diviziunii celulare care se numesc Cromozomi. ADN reprezint cromatina. Nucleul conine peste 90% din cantitatea de acid nucleic. 2. A, C 3. n perii absorbani scuri (foarte tineri) nucleul sferic se observ la baza lor, iar n cei lungi (maturi) nucleul este situat n poziie subterminal, nconjurat de o mas dens de citoplasm. TESTUL 8 1.B 2.C 3. Cristalele de oxalat de calciu pot fi simple sau compuse (ursini sau druze, rafide si macle). In unele celule (parenchimul cortical al tulpinii de soc) se poate ntlni oxalat de calciu fin cristalizat sub forma de nisip oxalifer. TESTUL 9 1. Peretele celular este un component specific al celulei vegetale, fiind elaborat de protoplast, pe care l nvelete, delimitnd celulele ca uniti structural -funcionale i totodat le leag, constituind edificiile tisulare. Celulele animale, lipsite de perete, se numesc gimnoplaste, iar cele vegetale, la care peretele este prezent, se mai numesc i dermatoplaste. 2. La o punctuaie simpl se disting: - o cavitate, de forma unui canal simplu sau ramificat, la nivelul peretelui secundar; - o deschidere circular sau oval spre lumenul celular; - o membran obturant reprezentat de pereii primari ai celor dou celule vecine, mai subiri dect n rest i de lamela median dintre acestea. 2.Rolul torusului este foarte important, av nd n vedere c el se gsete la gimnosperme, care triesc n regiuni cu clim temperat, avnd frunze verzi i pe timpul iernii. Traheidele, n pereii crora sunt prezente aceste punctuaii, sunt vase imperfecte, nchise la capete, astfel nct circulaia sevei brute de la o traheid la alta se face doar prin intermediul punctuaiilor. n timpul anotimpului cald torusul are o poziie central, seva circulnd de la o celul la alta doar prin intermediul zonei permeabile a membranei obturante margo. n timpul iernii torusul se deplaseaz la dreapta sau la stnga, nchiznd punctuaia i mpiedicnd circulaia sevei brute. Acest proces este important, deoarece ntr-o zi nsorit de iarn circulaia sevei s -ar putea accelera, iar peste noapte, datorit temperaturilor foarte sczute, apa ar nghea n vase i, mrindu-i volumul, ar distruge esutul conductor. TESTUL 10 1. A 2. Lignina are n mod natural culoarea galben, care poate fi intensificat prin colorarea cu sulfat de anilin. Seciunile se in 3-5 minute n colorant, apoi se trec n acid sulfuric diluat i se observ ntr-o pictur de ap. Pereii lignificai ai vaselor de lemn, fibrelor lemnoase, precum i ai fibrelor de sclerenchim perifloemic se coloreaz galben intens. Culoarea scade ca intensitate n timp, dac seciunile se monteaz n glicero -gelatin, pentru obinerea de preparate permanente.

86

O alt coloraie de identificare a ligninei este cea cu fluoroglucin i acid clorhidric. Seciunile cele mai subiri se in n colorant cteva secunde, apoi se adaug o pictur de acid clorhidric concentrat. Pereii celulari lignificai se coloreaz n viiniu. 3. C 4. Const n impregnarea pereilor celulari (ndeosebi a celui secundar) cu o substan lipidic numit suberin. Depunerea acesteia se face prin apoziie (lamele subiri de suberin alterneaz cu straturile de celuloz din peretele secundar; ultimul strat depus spre interiorul celulei fiind de celuloz pur). Suberina, fiind impermeabil pentru ap i gaze, izoleaz protoplastul de mediul nconjurtor i astfel celula moare. Dei formate din celule moarte, esuturile suberificate au un rol important n viaa plantei, reducnd transpiraia, constituind un izolator termic i aprnd esuturile vii ale scoarei i cilindrului central de atacurile unor parazii. TESTUL 11 1. Mitoza cuprinde dou etape: cariocineza diviziunea nucleului n cei doi nucleu fii i citocineza diviziunea celulei-mam n dou celule fiice. n cazul mitozei se pleac de la o celul diploid (2n) i se ajunge la dou celule tot diploide. 2. In profaza n interiorul nucleului devin vizibili cromozomii n urma unor cicluri succesive de condensare a cromatinei. La sfritul profazei anvelopa nuclear se dezorganizeaz. Nucleoplasma se amestec cu citoplasma, rezultnd mixoplasma, n care se vor observa urmtoarele faze ale mitozei. TESTUL 12 1.Meioza cuprinde dou etape: o diviziune reducional (heterotipc), n cursul creia numrul de cromozomi se reduce la jumtate i o diviziune ecvaional sau homeotipic ce conserv numrul haploid de cromozomi (n). n urma meiozei rezult tetrade de micro - sau de macrospori. 2. Profaza I cuprinde cinci stadii, mai dificil de distins. n primele stadii: leptoten i zigoten, cromozomii omologi subiri se mperecheaz cte doi, formnd bivalenii. n urmtorul stadiu pachiten cromozomii se scurteaz i se ngroa, iar apoi devin vizibile cele dou cromatide (diploten); n acest stadiu are loc fenomenul de crossing over (schimbul de segmente cromatidice dintre cromozomii omologi). n diacinez cromozomii ating maximul de spiralizare; anvelopa nuclear se dezorganizeaz i apare fusul de diviziune. TESTUL 13 1. Pe plan ultrastructural, diferenierea celulelor parcurge etape variate n strns dependen cu profilul funcional al celulelor integrate n esuturi i organe; pe msura diferenierii, n general, volumul celular crete, scade raportul nucleo -plasmatic, citoplasma devine parietal, se extinde vacuomul (n final ajunge s fie reprezentat de o singur vacuol), care mpinge citoplasma i nucleul la periferia celulei. Plastidomul este alctuit din cloroplaste, cromoplaste sau amiloplaste n funcie de rolul ndeplinit n celule (parenchim asimilator, de rezerv etc.). Pe msura avansrii proceselor de difereniere, peretele celular poate suferi modificri secundare (depuneri de celuloz, lignificare, mineralizare, gelificare sau chiar lichefiere), care conduc treptat la o ngreunare a comunicrii celulelor respective cu celulele nvecinate, intervenind astfel un declin fiziologic i chiar moartea acestora (de exemplu la sclerenchim, suber). 2. Caracterele procesului de dedifereniere constau n: - pierderea funciilor fiziologice specifice i, concomitent, pierderea caracterelor structurale corespunztoare; - scderea raportului paraplasm/protoplasm; - reducerea activitii mitotice; - reapariia de potenialiti histogenetice largi

87

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA 1. ACATRINEI GH., 1975 Biologia celulei vegetale, Ed. t. i encicloped., Bucureti 2. BOUDET A. M., 2000 Lignins and lignification: selected issues, Plant Physiol. and Biochem., 38: 81-96 3. BOUREAU ED., 1954, 1956, 1957 - Anatomie vgtale (L'appareil vgtatif des Phanrogames). Ed. Presses Universitaires de France, Paris 4. BRONCHAR R., 1990 - Guide des travaux pratiques de biologie de la cellule vgtale. Univ. Liege 5. CATESSON A.M., 1980 - Les tissus vgtaux. Ultrastructure, biogense. In: B. Monties Les polymres vgtaux. Ed. Gauthier-Villar, Paris 6. CRUCE M., 1999 Biologie celular i molecular, Ed. Univ. Craiova 7. MOENS P., AUQUIERE I.P., 1990 - Biologie gnrale et vgtale. I. Introduction biochimique. II. Cytologie. Imprimrie Drouaux, Liege 8. SCHNEPF E., 1974 - Gland cells, In Dynamic aspects of plant ultrastructure, (ed. Robards A.W.), McGraw-Hill, London: 331 357 9. STRASBURGER E., 1999 - Lehrbuch der Botanik (ed. 34). Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 10. TOMA C., NI M., 2000 - Celula vegetal, Ed. Univ. "Al. I. Cuza" Iai

88