Universidad de Guanajuato

Divisin de Ciencias Naturales y Exactas

Laboratorio de Estructura de Biomoleculas y cinetica enzimtica

Lpidos

Abraham Kalid Padrn Martnez Sabino Fernando Zamora Lpez

19 de marzo de 2012.

Prctica 2 Lpidos Resumen: Los lpidos, constituyen una parte esencial para el funcionamiento de la clula, ya que forman parte de la membrana celular. Para esta prctica se realiz una extraccin de un lpido (trimiristina), nuestro rendimiento fue bajo (6.28%). Tambin se hizo una identificacin de lpidos mediante las pruebas de Salkowsky y Lieberman-Burchard. Introduccin: Los lpidos, son un grupo de compuestos qumicamente diversos, solubles en solventes orgnicos (como cloroformo, metanol o benceno), y casi insolubles en agua. La mayora de los organismos, los utilizan como reservorios de molculas fcilmente utilizables para producir energa (aceites y grasas). Los mamferos, los acumulamos como grasas, y los peces como ceras; en las plantas se almacenan en forma de aceites protectores con aromas y sabores caractersticos. Los fosfolpidos y esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las membranas biolgicas. Entre los lpidos tambin se encuentran cofactores de enzimas, acarreadores de electrones, pigmentos que absorben luz, agentes emulsificantes, algunas vitaminas y hormonas, mensajeros intracelulares y todos los componentes no protecos de las membranas celulares. Los lpidos, pueden ser separados fcilmente de otras biomolculas por extraccin con solventes orgnicos y pueden ser separados por tcnicas experimentales como la cromatografa de adsorcin, cromatografa de placa fina y cromatografa de fase reversa. La funcin biolgica ms importante de los lpidos es la de formar a las membranas celulares, que en mayor o menor grado, contienen lpidos en su estructura. En ciertas membranas, la presencia de lpidos especficos

permiten realizar funciones especializadas, como en las clulas nerviosas de los mamferos. La mayora de las funciones de los lpidos, se deben a sus propiedades de autoagregacin, que permite tambin su interaccin con otras biomolculas. De hecho, los lpidos casi nunca se encuentran en estado libre, generalmente estn unidos a otros compuestos como carbohidratos (formando glucolpidos) o a protenas (formando lipoprotenas). Estas importantes biomolculas se clasifican generalmente en: Lpidos saponificables: Simples. Lpidos que slo contienen carbono, hidrgeno y oxgeno. Acilglicridos. Son steres de cidos grasos con glicerol. Cuando son slidos se les llama grasas y cuando son lquidos a temperatura ambiente se llaman aceites. Cridos (ceras) Complejos. Son los lpidos que adems de contener en su molcula carbono, hidrgeno y oxgeno, tambin contienen otros elementos como nitrgeno, fsforo, azufre u otra biomolcula como un glcido. A los lpidos complejos tambin se les llama lpidos de membrana pues son las principales molculas que forman las membranas celulares. Fosfolpidos Fosfoglicridos Fosfoesfingolpidos Glucolpidos Cerebrsidos Ganglisidos Lpidos insaponificables: Terpenoides Esteroides Eicosanoides Hay diferentes mtodos para extraer lpidos: Mtodo de Soxhlet El mtodo consiste en una extraccin de lpidos semi-continua con el solvente o mezcla de solventes orgnicos adecuado segn el tipo de grasa a extraer. Mtodo de Schmid-Bondzynski-Ratzlaff

Es un mtodo muy empleado para determinar los lpidos en queso y en leche en polvo. Mtodo de Gerber Materia grasa en leche fluida Mtodo de Rose Gottlieb Cromatografa de lquidos de alta resolucin As como pruebas para identificar grasas: Prueba de Salkowski. Al entrar en contacto con la grasa, los componentes del reactivo se separan en dos capas la de cloroformo color rojo y la del cido sulfrico que emite fluorescencia color verde. Prueba de Lieberman-Burchard. La reaccin se objetiva por la aparicin de una coloracin verdosa oscura, que previamente paso por diferentes colores, rosa, rojo, azul y violeta.

Metodologa:

Identificacin de grasas Prueba o reaccin de Salkowski. Si se colocan soluciones clorofrmicas de colesterol, sobre volmenes iguales de cido sulfrico concentrado y se mezclan suavemente, aparece un color caracterstico. Los componentes del reactivo se separan en dos capas, la de cloroformo de color rojo y la del cido sulfrico que emite una fluorescencia verdosa. Prueba de Lieberman-Burchard. El anhdrido actico se condensa con el grupo OH en posicin C-3 del colesterol, y de otros esteroides con l relacionados, para dar el correspondiente ster. Si el colesterol posee tambin un doble enlace tiene lugar una posterior epimerizacin y deshidratacin a la forma C-3, dando un color caracterstico. De ah que la reaccin se considere prueba especfica de los 3-hidroxiesteroides con doble enlace. La reaccin se objetiva por la aparicin de una coloracin oscura verdosa que previamente pas por diferentes colores, rosa, rojo, azul y violeta.

Prueba de acrolena La positividad de esta reaccin indica la presencia de glicerina y se manifiesta por el desprendimiento de vapores blancos irritantes de olor desagradable. Observaciones/Resultados: Identificacin de grasas Prueba de Salkowski Grasas Cloroformo Colesterol Observaciones Es incoloro, se observ la formacin de dos capas. Al adicionar el cido sulfrico se torn color amarillo, despus se formo una capa roja arriba y en la parte de abajo es color anaranjado. Al adicionar el cido sulfrico se torn color amarillo, despus se formo una capa roja arriba y en la parte de abajo es color amarillo.

Manteca

Prueba de Lieberman-Burchard 10 minutos despus -------Se separaron en dos fases, la del fondo es incolora, la parte de arriba es color rojo oscuro Se observaron tres fases: la parte inferior es incolora, la del medio presentaba un color 30 minutos despus -----------La fase que era incolora, se redujo en gran cantidad, quedando en mayor cantidad la fase oscura La fase caf se dispers un poco quedando en mayor volumen

Cloroformo Colesterol

Aceite

Manteca

caf-rojizo oscuro, sobre la superficie de esa capa se observo una pequea fase de color verde y la fase de arriba es incolora Se dividi en 2 fases la parte de abajo tiene color amarillo claro, la parte de arriba es oscura

Aumento el volumen de la fase oscura

Al instante de adicionar los cidos

10 minutos despus

20 minutos despus

Identificacin de glicerol Muestra cido mirstico

Observaciones Se formaron 3 fases: La de arriba es incolora La del medio es blanca La del fondo es turbia

Agua Glicerol Trimiristrina

No se observo nada La fase de abajo es turbia Se formaron 2 fases La parte baja es ms turbia y aceitosa

Despus de agregar el -naftol al 5% y el cido sulfrico

Prueba de acrolena Al poner en ebullicin, pudimos notar el desprendimiento de un vapor, no duro mucho y no captamos el olor de este; pero el aparecimiento del vapor, nos indica la presencia de glicerina. Saponificacin La saponificacin consiste en una hidrlisis alcalina de la preparacin lipdica (con KOH o NaOH). Los lpidos derivados de cidos grasos (cidos monocarboxlicos de cadena larga) dan lugar a sales alcalinas (jabones) y alcohol, que son fcilmente extrables en medio acuoso. No todos los lpidos presentes en una muestra biolgica dan lugar a este tipo de reaccin. Se distinguen por tanto dos tipos de lpidos: Lpidos saponificables Lpidos no saponificables

En esta parte de la prctica saponificamos 1g de aceite vegetal con 0.g de NaOH y obtuvimos aproximadamente 0.4g de producto (jabn) de un color amarillo claro. La identificacin de cidos grasos tambin nos dio positiva.

Discusin de Resultados: La extraccin hecha fue con ter debido a que los lpidos son solubles en ter, pero tambin arrastra aceites, esencias, etc. Se disuelve en etanol posteriormente y se purifica totalmente, al enfriar la solubilidad en etanol baja por lo tanto se solidifica parcialmente, y por el cambio de temperatura se empiezan a formar cristales. Se obtuvo un muy bajo porcentaje de recuperacin de trimiristina;, esto puede deberse a prdidas durante la cristalizacin. Las pruebas de Salkowiski y de Liebernman dieron positivas ya que si se lograron observar las coloraciones que se describen en la metodologa. En la identificacin del glicerol, la prueba no resulto, ya que no se observ el color verde se describa en el procedimiento, podra deberse a que la solucin de naftol no era adecuada o a una contaminacin del cido sulfrico que se encontraba en la campana.

Bibliografa: [1] http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/tipos%20lipidos.html Fecha de consulta (18 marzo de 2012) [3] http://books.google.com.mx http://www.ehu.es/biomoleculas/lipidos/lipid3.htm Fecha de consulta (18 de marzo de 2012)