Prcticas de laboratorio 1 BACH. Biologa y Geologa. I.E.S.

Infanta Elena Departamento de Ciencias Naturales

N 1: Extraccin de ADN

INTRODUCCIN El ADN se encuentra presente en todos los seres vivos. Un alfabeto de 4 letras, puede codificar todas las protenas que regulan la vida sobre la Tierra. Actualmente la extraccin y manipulacin del ADN, se ha convertido en un proceso rutinario en los laboratorios de microbiologa, bioqumica y biologa celular. En la presente prctica demostraremos lo sencillo que resulta la extraccin de esta macromolcula. Es de destacar la gran abundancia en la que se encuentra en todas las clulas y organismos. De esta forma intentaremos la extraccin desde organismos representantes de los reinos animal, vegetal y fungi. PROTOCOLOS Extraccin desde clulas animales: Realizaremos la extraccin desde clulas de hgado de pollo. Es de destacar la necesidad de separar al ADN del resto de elementos celulares. Para ello es necesaria la rotura de tejidos y estallido celular y nuclear, as como de la separacin de las protenas asociadas al ADN (histonas). Materiales: Hgado Varilla Probeta Mortero Pipeta Etanol Vaso de precipitados Solucin de cloruro sodio al 10% Arena Gasa Hielo Agua destilada de

Procedimiento: 1. Enfriar el etanol (50 cm3) con el hielo (sin mezclar) 2. Preparar la solucin de cloruro de sodio 3. Colocar el hgado troceado en un mortero con un poco de arena para favorecer el machacado y rotura de membranas 4. Aadir 50 cm3 de agua destilada al mortero para formar una especie de papilla.

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5. Realizar un filtrado de la preparacin mediante gasas (realizar varias veces) 6. Medir el volumen resultante con una probeta. 7. Aadir el mismo volumen de cloruro de sodio al 10% m/V, para generar el estallido de los ncleos y la exposicin de la cromatina 8. Aadir una cucharadita de detergente o champ. Esto producir la liberacin de las protenas, al unirse a ellas, dejando libre el ADN. Mezclar suavemente sin formar espuma. 9. Aadir suavemente y deslizando por las paredes del vaso el etanol muy fro. Se formar un sistema bifsico con el etanol encima y el filtrado abajo. En la interfase podremos observar como precipita el ADN. Se observar como una serie de fibras blancas. Extraccin desde clulas vegetales

Materiales: Vaso de precipitados Licuadora Embudo y gasa 20 ml de agua destilada Champ o detergente de color claro 1 banana Sal de mesa 1 tubo de ensayo Etanol Hielo 1 varilla de vidrio

Procedimiento 1. Licuar una banana con una taza de agua destilada. 2. Mezclar cuidadosamente en un vaso de precipitados 20 cm3 de agua destilada, una cucharadita de jabn y 2 pizcas de sal. Evitar la formacin de espuma. 3. Aadir a esta preparacin 3 cucharadas de pulpa de banana y mezclar cuidadosamente durante 5. 4. Filtrar con embudo y gasa. 5. Tomar 5 cm3 del filtrado y agregar a ste el etanol helado de la misma forma que con el hgado. 6. Observar la precipitacin del ADN en la interfase. Extraccin desde clulas de levadura: elabora un protocolo para su extraccin.