Presencia de Lactato Deshidrogenasa. Citocromo Oxidasa y Succínico Deshidrogenasa

PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA.
CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO DESHIDROGENASA

Semestre: 2013-1
2013
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Decana de amrica
Q. UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Escuela de Farmacia y Bioqumica F. Mg. Yadira Fernndez Jer
Integrantes: Alderete Espejo, Hattie. Moleros Coral, Diego Alejandro. Porras Cochachi, Katia Rub. Quiones Huayaney, Mara Eugenia. Docente: Tolentino Chvez, Jorge Luis Q.F. Mg. Yadira Frnandez Jer
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA. CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO DESHIDROGENASA
ASIGNATURA: Bioqumica I
PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA, CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO DESHIDROGENASA

OBJETIVOS
Identificar la presencia de citocromo y el efecto de inhibidores sobre la cadena transportadora de electrones. Evaluar la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa en tejidos de res. Determinar la actividad de la succinato deshidrogenasa en la fraccin mitocondrial de hgado de res en presencia y en ausencia de un inhibidor competitivo de la enzima.
INTRODUCCIN
En esta prctica se evaluaron las enzimas lactato deshidrogenasa(LDH), que a su vez se libera al plasma como consecuencia de la destruccin celular (fisiolgica o patolgica) y es un marcador de destruccin celular sensible aunque poco especfico. Por otro lado la succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa del cido succnico, es una oxidorreductasa que cataliza la oxidacin del succinato para formar fumarato siendo la coenzima el FAD. Para ello se hizo la extraccin y preparacin de las enzimas y coenzimas, provenientes del corazn y del hgado de res, eliminando completamente la grasa y el tejido conectivo, para el lavado se utiliz KCl 0.154M, para hacer luego un homogenizado. Posteriormente se hizo un seguimiento de la reaccin catalizada por el lactato deshidrogenasa, en donde el sustrato fue lactato de sodio 0.1M, azul de metileno como indicador y el aceite mineral para proteger la oxidacin del azul de metileno. Por otro lado se identific al malonato de sodio 0.1M como inhibidor especfico, puesto que slo acta a nivel de la
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ASIGNATURA: Bioqumica I succinato deshidrogenasa, mientras que el cianuro de sodio 0.1M es un inhibidor del citocromo oxidasa, el buffer fosfato 0.1M dio el medio adecuado. Es posible distinguir 5 isoenzimas de la LDH, que permiten diferenciar hasta cierto punto el rgano u rganos de procedencia. As, la LDH-1 procede en el 60% del msculo cardaco, mientras que la LDH-5 procede mayoritariamente del hgado y la piel.
MARCO TERICO
LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)
Es una enzima que cataliza una parte del metabolismo anaerbico de la glucosa y de la sntesis de la glucosa, los humanos disponemos de dos cadenas polipeptdicas isoenzimticas para esta enzima: el isoenzima H que se expresa abundantemente en el msculo cardiaco y el isoenzima M que lo hace en el msculo esqueltico1. Hay cinco forma isoenzimticas distintas codificadas por genes distintos. Su funcin es la de reducir reversiblemente el piruvato a lactato. La lactato deshidrogenasa (LDH) aparece en altas concentraciones en muchos rganos, a diferencia de otras enzimas. Se encuentra gran cantidad de deshidrogenasa lctica especialmente en el hgado, los msculos, los glbulos rojos (eritrocitos) y los riones. Las concentraciones elevadas de lactato deshidrogenasa son clnicamente importantes y pueden encontrarse en estados patolgicos que causan dao celular. Los infartos del miocardio, enfermedades hepticas y renales, anemias megaloblsticas, distrofia muscular progresiva y algunas neoplasias producen altos valores de lactato deshidrogenasa en el suero2. PRINCIPIO: El lactato deshidrogenasa convierte el L-lactato y NAD en piruvato y NADH. El ndice de incremento en absorbancia de la mezcla de reaccin a 340 nm, debido a la formacin del NADH, es proporcional a la actividad de la LDH.
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SUCCNICO DESHIDROGENASA (SDH)
La enzima succinato deshidrogenasa (SDH, E.C. 1.3.99.1) es una flavoprotena que participa en el ciclo de Krebs y al estar asociada a la membrana interna mitocondrial, tambin forma parte la cadena de transporte electrnico mitocondrial. La SDH cataliza estereoespecficamente la deshidrogenacin en trans del cido succnico hasta cido fumrico. Esta enzima se inhibe por malonato y maleato, que son anlogos estructurales del succinato3.
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El dficit de
succnico semialdehdo deshidrogenasa (SSADH) es una enfermedad de expresin clnica variable e inespecfica, pudiendo presentar en sus inicios moderado a severo retardo del desarrollo motor con hipotona global y reflejos conservados (hipo o hiperrreflexia), y posterior retraso en la manipulacin de objetos, con movimientos coreoatetsicos y ataxia truncal. Si bien el retraso del desarrollo, la hipotona y el retardo mental constituyen las caractersticas clnicas ms constantes del dficit de SSADH (74 a 78%) aproximadamente el 50% de los pacientes presentan trastornos de conducta, ataxia y convulsiones; pudiendo ser stas tnico-clnicas, mioclnicas o crisis de ausencias.
CITOCROMO OXIDASA
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ASIGNATURA: Bioqumica I La citocromo C-oxidasa es un enzima que cataliza la transferencia de electrones al oxgeno para dar agua, constituye lo que se conoce como complejo 4 de la cadena de transporte electrnico y est presente en todos los organismos aerobios (es decir que utilizan el oxgeno como aceptor de electrones). Los citocromos son protenas que contienen porfirinas que tienen ligado un tomo de hierro. Existen citocromos que son hidrosolubles, otros que son liposolubles. Otra peculiaridad es que existen citocromos mviles como por ejemplo el citocromo c. Aunque la gran mayora funcionan asociadas a macromolculas como pueden ser los complejos III y IV. Los citocromos son enzimas transportadoras de electrones que tienen ferroporfirina como grupo prosttico. Los citocromos fueron descubiertos y designados originalmente como histohematinas por C. MacMunn en 1866, su significado en las funciones biolgicas fue descrito por D. Keilin en este siglo, quien los nombr como citocromos. La determinacin de sus propiedades espectroscpicas lo realiz en un espectroscopio manual, utilizando msculos de insecto; observ cmo aparecan y desaparecan bandas de absorcin con la actividad muscular. Finalmente los agrup en tres clases diferentes: a, b y c, segn las bandas caractersticas de cada uno.Cada tipo de citocromo en estado reducido exhibe tres bandas de absorcin caractersticas en el espectro de luz visible, a, b, y g o Soret. La mayora de los citocromos son muy difciles de purificar pues estn embebidos en las membranas, excepto el citc que puede ser aislado mediante disoluciones salinas; el hemo de este citocromo, est unido a la protena por puentes tioster entre el anillo de porfirina y dos residuos de Cys, es el nico en donde hay un enlace covalente4.
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CICLO DE KREBS
El ciclo de Krebs (de los cidos tricarboxlicos o del cido ctrico) es una va metablica presente en todas las clulas aerobias, es decir, las que utilizan oxgeno como aceptor final de electrones en la respiracin celular. En los organismos aerobios las rutas metablicas responsables de la degradacin de los glcidos, cidos grasos y aminocidos convergen en el ciclo de Krebs, que a su vez aporta poder reductor a la cadena respiratoria y libera CO25 Reacciones del Ciclo de Krebs: 1. La acetil-CoA (2C) se une al cido oxalactico (4C) y forma cido ctrico (6C). La CoA se libera as y puede volver a reaccionar con ms cido pirvico. 2. Isomerizacin del cido ctrico, que pasa a Isocitrato 3. Oxidacin del Isocitrato por el NAD+ producindose cido cetoglutrico (5C), NADH y una molcula de CO2 4. Descarboxilacin oxidativa del -cetoglutrico, debida al NAD+ que vuelve a dar NADH y una molcula de CO2. El resto acilo (4C) se une al CoA, y forma succinil-CoA. 5. Hidrlisis del succinil-CoA para liberar la energa del enlace, que se transfiere al GTP, un nucletido de alta energa, mediante fosforilacin a nivel de sustrato. As se forman succinato y CoA. 6. Transformacin del succinato en malato, gracias al FAD, que es usado como coenzima por una deshidrogenasa y se transforma en FADH2
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ANARANJADO DE METILO
Naranja de metilo es un colorante azoderivado, con cambio de color de rojo a naranja-amarillo entre pH 3,1 y 4,4. El nombre del compuesto qumico del indicador es sal sdica de cido sulfnico de 4-Dimetilaminoazobenceno. La frmula molecular de esta sal sdica es C 14H14N3NaO3S y su peso molecular es de 327,34 g/mol
MATERIALES:
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10 tubos de ensayo. 2 Matraces Erlenmeyer de 150 mL. Beaker de 500 mL. Homogenizador. 4 pipetas 5 mL. 5 pipetas 2 mL. 2 tubos de centrifuga. 1 Gradilla. Un pipeteador.
REACTIVOS:
KCl 0,154 M. Lactato de Sodio 0.1M. Sol. De Azul de Metileno 0,01%. Buffer fosfato 0,1M ypH 7,4. Solucin malonato de sodio 1%. Solucin de cianuro de potasio 0,05M. Solucin de p-fenilendiamina al 1%. Solucin de succinato de sodio al 1%. Aceite mineral. Agua destilada. Bao de hielo. Tejido heptico fresco. Tejido cardiaco fresco.
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ASIGNATURA: Bioqumica I El mtodo de ensayo de la actividad SDH se basa en la utilizacin de un aceptor artificial de electrones
PARTE EXPERIMENTAL
1. Seguimiento de la reaccin catalizada por lactato deshidrogenasa
Actividad sobre el Piruvato. Lactato deshidrogenasa. Estructura tridimensional.
2.
Seguimiento de la reaccin por la citocromo oxidasa.
Reactivo Lactato de Sodio 0.1M Sol. De Azul de Metileno. Cianuro de Sodio Malonato de Sodio Homogenizado de corazn. Sol. de pfenilendiamina
Funcin. Sustrato Indicador de reaccin. Inhibidor del sistema citocromo. Inhibidor Fuente de Lacto Deshidrogenasa. Sustrato.
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3. Seguimiento de la reaccin catalizada por la Succnico deshidrogenasa.
Reactivo Sol. De Azul de Metileno. Succinato de Sodio 0.1M Malonato de Sodio Cianuro de Sodio Ferricianuro de Sodio Homogenizado de Hgado.
Funcin. Indicador de reaccin. Sustrato Inhibidor Inhibidor Inhibidor Fuente de Lacto Deshidrogenasa.
A todos los tubos inmediatamente despus de agregarles los reactivos se les agrego 1 mL de aceite mineral para evitar la interferencia del oxgeno en la reaccin.
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RESULTADOS
Ensayo 1
SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA LACTATO DESHIDROGENASA COMPONENTES Lactato de sodio 0.1M Sol. De azul de metileno Homogenizado de hgado Homogenizado de corazn OBSERVACIONES TUBO1 1.0 1.0 0.5 Solucin azul turquesa TUBO2 0.0 1.0 0.5 Solucin azul turquesa oscuro TUBO3 1.0 1.0 0.5 Solucin azulada TUBO4 0.0 1.0 0.5 Solucin azulada oscura
RESULTADOS
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Reaccin6:
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ASIGNATURA: Bioqumica I Ensayo 2 SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA CITOCROMO OXIDASA

COMPONENTE S Homogenizad o de corazn Cianuro de sodio 0.1M Malonato de sodio 0.1M Sol.PFenilendiamin a Buffer fosfato 0.1M ,pH 7,4 OBSERVACIO NES TUBO1 0 0.0 0.0 1.0 TUBO2 1.0 0.0 0.0 1.0 TUBO3 1.0 0.5 0.0 1.0 TUBO4 1.0 0.0 0.5 1.0
1.5 Solucin incolora
0.5 Solucin marrn rojiza
0.0 Solucin anaranjada
0.0 Solucin marrn rojiza
RESULTADOS
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Reaccin7: 2 Citocromo c reducido + 2H+ + O2 oxidado +H2O 2Citocromo c
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ASIGNATURA: Bioqumica I 2Citocromo c oxidado + P-Fenilendiamina coloreado (marrn rojizo) Compuesto
ENSAYO 3 SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA SUCCNICO DESHIDROGENASA

REACTIVOS Azul de metileno (0.02%) Buffer fosfato 0.1M pH 7,4 Succinato de sodio 0.1M Agua bi-destilada Malonato de sodio Cianuro de sodio 0.1M Ferricianuro de potasio 0.1M Homogenizado de hgado TUBO1 0.5 0.5 0.2 0.5 TUBO2 0.5 0.5 0.2 0.3 0.5 TUBO3 0.5 0.5 0.2 0.3 0.5 TUBO4 0.5 0.5 0.2 0.3 0.5 TUBO5 0.5 0.5 0.2 0.3 0.5 TUBO6 0.5 0.5 0.2 0.3 0.5 TUBO7 0.5 0.5 0.2 0.3 0.5
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OBSERVACIONES Soluci n incolora Soluci n verde incolora Soluci n azulada Soluci n verde incolor a Soluci n azulada Soluci n verdos a Soluci n Verdos a
RESULTADOS
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Reaccin8:
DISCUSIONES:
1. EXTRACCIN YPREPARACIN DE LAS ENZIMAS Y COENZIMAS
Los resultados obtenidos en todas las mesas de trabajo no fueron muy eficientes debido a que la extraccin y preparacin de la muestra se realiz con muchos das de anticipacin a la prctica. Por ello se debe tener en cuenta el rendimiento y la pureza de cada fraccin celular a usar
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ASIGNATURA: Bioqumica I o cada homogenizado. Adems la lactato deshidrogenasa solo tiene una vida media de 113 horas aproximadamente (9). La conservacin parcial del homogenizado se obtuvo gracias a los lavados con KCl, pues esta sal detiene la actividad enzimtica. El mecanismo de accin de esta sal es someter a las clulas a un medio hipertnico, obligando as a la salida del agua junto a otros componentes responsables de la degradacin celular. (10) Adems esta conservacin enzimtica parcial tambin fue posible gracias al hielo. Esto se debe a que las bajas temperaturas inactivan a las enzimas y permiten conservar los tejidos.
2. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA LACTATO
DESHIDROGENASA
La LDH es una enzima citoplasmtica. Su centro activo se encuentra en el interior de cada subunidad, siendo especfico para el lactato, y utiliza nicamente NAD+ como coenzima. Pero, a pesar que en la reaccin no agregamos el NAD+ la reaccin si se realiz, esto es debido a que se utiliz un homogenizado en el cual ya se contaba con esa coenzima (11). El azul de metileno funciona como un indicador de tipo REDOX, se utiliza como aceptor de hidrogeno (tiene carga positiva y se une a compuestos cargados negativamente), pues posee la propiedad muy til de cambiar de color al pasar de oxidado a reducido. Es azul de metileno cuando esta oxidado y blanco (incoloro) de metileno cuando esta reducido. El azul de metileno al ser un indicador de REDOX y no de viraje de pH, podramos utilizar en su lugar un indicador con la misma propiedad como la sal frrica de la ortofenantrolina, que cambia de azul plido(forma oxidada) a rojo(forma reducida) o el cido difenilaminosulfnico, que cambia de incoloro(forma oxidada) a violeta(forma reducida). La reaccin con el homogenizado de hgado present mayor decoloracin que el homogenizado de corazn, lo que puede significar que en el primero hay mayor presencia de enzimas. Sin embargo, es necesario recalcar que La isoenzima M4 (presente en el hgado) tiene mayor afinidad por piruvato y la H4
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ASIGNATURA: Bioqumica I (presente en el corazn) por lactato. Es decir, la concentracin de enzimas en el hgado influenci ms que la afinidad de la enzima por el lactato (12). En los tubos 2 y 4 la decoloracin por la reduccin del azul de metileno fue casi imperceptible debido a que La LDH es una enzima cuyo sustrato especfico es el lactato. Al no encontrarse dicho sustrato en la solucin no pudo haber transferencia de electrones y por ende no se realiz la reaccin REDOX (13).
3. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA CITOCROMO
OXIDASA El ensayo en la prueba inhibidora del Malonato nos dio una coloracin rojiza marrn, lo que indicaba que la reaccin se desarroll normalmente, sin embrago segn referencias el Malonato es un inhibidor, entonces la reaccin se dio porque el Malonato acta sobre el succinato, pero no acta o inhibe al citocromo oxidasa. La coloracin marrn rojiza es ocasionada porque la fenilendiamina se oxida. El cianuro de sodio presento una coloracin anaranjada, se debe a una reaccin del homogeneizado con el sustrato fenilendiamina, en donde el cianuro es un inhibidor que inhibe al citocromo c impidiendo el flujo normal de electrones para que se oxide el sustrato. Las reacciones que se hicieron fueron hechas con homogeneizados, lo cual nos puede indicar que en este homogeneizado no solo se encuentra la enzima que deseamos sino su cofactor, parte de su sustrato y entre otros
4. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA SUCCINICO
DESHIDROGENASA En el tubo N1 se obtuvo una decoloracin mucho mayor que en los dems tubos, eso se debe a la presencia del sustrato (succinato de sodio), el medio ptimo de pH (7,4) y al compuesto azul de metileno (indicador tipo REDOX). Cabe recordar que para que la enzima succinato deshidrogenasa acte, necesita una protena (FAD) el cual funciona como aceptor de hidrgeno oxidando as al succinato a fumarato y reduciendo el azul de metileno a blanco
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ASIGNATURA: Bioqumica I de metileno (incoloro). El FAD no fue agregado porque el homogenizado, al ser parte de un organismo vivo, cuenta ya con esa flavoprotena (14). En todos los tubos solo se trabaj con el homogenizado de hgado debido a q el succinato deshidrogenasa es la nica enzima que no se encuentra en la matriz, en cambio est ligado a la membrana mitocondrial de hgado de ratas hembras y macho. Por ello resulta ms eficiente trabajar solo con el homogenizado de hgado (15). En los tubos 2 y 3, no se aprecia una decoloracin de la solucin, esto se debe a que la Succinato Deshidrogenasa es inhibida por el Malonato, con estructura semejante al Succinato, que nicamente tiene un metilo (-CH2-) y no se puede oxidar por deshidrogenacin. Otro compuesto que tambin la inhibe es el Oxalacetato, que tampoco se puede deshidrogenar (16). El cianuro es un inhibidor enzimtico no especfico, se conoce que el cianuro se une e inactiva aproximadamente 40 enzimas, entre las cuales se encuentra la succnica deshidrogenasa. Es por ello que los tubos 4 y 5 que fueron sometidos a esta solucin de cianuro, permanecieron casi azul. Sin embargo, se pudo presenciar una ligera decoloracin, la cual se debe a que el cianuro bloquea principalmente la citocromo oxidasa y con menos intensidad el succinato deshidrogenasa (17). La presencia del substrato (succinato), en los tubos 6 y 7, permite que dicho succinato se oxide, proceso que implica un transporte de electrones, los cuales son captados por el ferrocianuro, el cual se va decolorando a medida que ello ocurre, pero luego son liberados algunos electrones y son captados por el azul de metileno. Es por ello que la solucin tom un color verde plido, de la mezcla del azul de metileno y el ligero color amarillo del ferricianuro (oxidado) (18).
CONCLUSIONES:
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Se determin la actividad de las enzimas, citocromo oxidasa, cuya importancia en la actividad reside en el metabolismo oxido-reduccin. Los inhibidores actan especficamente en un lugar de la cadena de transporte de electrones. El cianuro de hidrogeno inhibe la citocromo c oxidasa, Malonato de sodio inhibe en la parte que los electrones llegan al succinato deshidrogenasa.
El tejido de res presenta lactato deshidrogenasa, que segn los experimentos podemos deducir que el homogeneizado de hgado posee ms enzima lactato deshidrogenasa que el homogeneizado de corazn. Esto fue comprobado por una diferencia de coloracin con la reduccin del azul de metileno. Se determin la actividad enzimtica de la enzima succinato deshidrogenasa del tejido de la res, usando como indicador la reduccin del azul de metileno. EL uso de un buffer era indispensable para los estudios debido a que la enzima requiere de estos medios. El Malonato es un inhibidor, el cianuro de hidrogeno es un inhibir que acepta los electrones y el azul de metileno no se reduce, el ferricianuro de potasio acepta los electrones, este se reduce y se aprecia el color verde.
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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
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7. Pruebas Bioqumicas.Disponible en: http://books.google.com.pe/books?

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8. Reacciones y enzimas del ciclo de Krebs .Disponible en:

http://www.bioquimicaqui11601.ucv.cl/unidades/krebs/metcdek3fid.html
9. Enzimas sricas. Recuperado de: http://www.fmvuba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico 10. ECURED. Cloruro de potasio. Recuperado de: http://www.ecured.cu/index.php/Cloruro_de_Potasio 11. Lactato deshidrogenasa (LDH). Recuperado de:
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ASIGNATURA: Bioqumica I http://medicina-1105.wikispaces.com/Lactato+Deshidrogenasa 12. Actividad y regulacin de las acciones enzimticas. Recuperado de: http://www.oocities.org/pelabzen/regenz.html 13. Actividad lactato deshidrogenasa en hgado de rata. Recuperado de: http://campus.usal.es/~delefn/java/alumnos/oregano/hues5.htm 14. Virginia Melo,Virginia Melo Ruiz,Oscar Cuamatzi. Bioqumica de los procesos metablicos.Barcelona: Revert; 2007. 15. Ruelos Torreblanca, Consuelo Betzabe. Actividad de succinato deshidrogenasa mitocondrial (C.E.1.3.99, 1) en hgado de ratas sometidos a la accin de hormonas sexuales. Recuperado de: http://bases.bireme.br/cgi-bin/wxislind.exe/iah/online 16. Miguel ngel Ordorica Vargas & Mara de la Luz Velzquez Monroy. Ciclo del cido ctrico. Recuperado de: http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/archivos/Unidad62.pdf 17. Quiroga, Patricia N. *; Olmos, Valentina. Revisin de la toxicocintica y la toxicodinamia del cido cianhdrico y los cianuros. Argentina; Ciudad Autnoma de Buenos Aires, v.17 n.1; 2009. 18. Oxidacin mitocondrial del succinato. Recuperado de : http://practicasdebioqumica.blogspot.com/
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CUESTIONARIO: 1. Cul es la importancia del sistema redox en el metabolismo energtico? REACCIN REDOX En los sistemas vivos, las reacciones que capturan energa (fotosntesis) y las reacciones que liberan energa (gluclisis y respiracin), son reacciones de oxidacinreduccin. La oxidacin completa de un mol de glucosa libera 686 kilocaloras de energa libre; de modo inverso, la reduccin del dixido de carbono para formar un mol de glucosa almacena 686 kilocaloras de energa libre en los enlaces qumicos de la glucosa. Si esta energa fuera liberada de una sola vez, la mayor parte se disipara como calor. Esto no solamente no sera til para la clula, sino que la alta temperatura resultante sera letal. Sin embargo, la vida ha evolucionado adquiriendo mecanismos que regulan la marcha de estas reacciones qumicas y una multitud de otras, de modo tal que la energa se almacena en enlaces qumicos particulares de los que puede ser liberada en pequeas cantidades cuando la clula lo necesite. Estos mecanismos, con la aparicin de nuevos tipos de molculas, permiten un aprovechamiento eficaz de la energa sin alterar el delicado equilibrio que caracteriza a los sistemas biolgicos. Implican generalmente secuencias de reacciones, algunas de las cuales son reacciones de oxidacin-reduccin. Aunque cada reaccin en la secuencia representa solamente un pequeo cambio en la energa libre, el cambio global de energa libre para la secuencia puede ser considerable.
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2. Usos clnicos de la evaluacin de las enzimas estudiadas. LACTATO DESHIDROGENASA LDH: El examen de sangre mide la cantidad de deshidrogenasa lctica (DHL). Razones por las que se realiza el examen La deshidrogenasa lctica (DHL) se mide con mayor frecuencia para verificar dao tisular. La enzima de deshidrogenasa lctica se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, especialmente el corazn, el hgado, el rin, el msculo esqueltico, las clulas sanguneas del cerebro y los pulmones. La deshidrogenasa lctica (DHL) afecta la reaccin qumica para la conversin del piruvato y el lactato. Los msculos en ejercicio convierten la glucosa en lactato (y los glbulos rojos la metabolizan). El lactato luego es liberado en la sangre y finalmente absorbido por el hgado, el cual lo convierte de nuevo en glucosa y libera dicha glucosa en la sangre. Los msculos en reposo, los glbulos rojos y otros tejidos absorben luego esta glucosa. Valores normales Los valores normales pueden variar ligeramente de un laboratorio a otro. Un rango tpico es de 105 a 333 UI/L (unidades internacionales por litro). Significado de los resultados anormales Los niveles superiores a los normales pueden ser indicio de: Accidente cerebrovascular (ACV, apopleja) Ataque cardaco Anemia hemoltica Presin arterial baja Mononucleosis infecciosa Deficiencia de sangre (Isquemia intestinal ) Enfermedad heptica (por ejemplo, hepatitis) Lesin muscular Distrofia muscular Estados (neoplsicos) de formacin anormal de nuevos tejidos Pancreatitis Muerte de tejido (infarto pulmonar) Si se eleva el nivel de DHL, el mdico puede ordenar una medicin de las isoenzimas de deshidrogenasa lctica. Otras afecciones bajo las cuales se puede realizar el examen son: Anemia por deficiencia de B12 Anemia megaloblstica Anemia perniciosa
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CITOCROMO OXIDASA: La enzima citocromo oxidasa cede electrones de un sustrato de oxgeno, en el tren de transportes de electrones. Se usa para diferenciar pseudomonas, oxidasa + enterobacterias, oxidasa -, neisserias. Todas las especies de pseudomonas y neisseria producen la oxidasa que, cuando se encuentra en presencia del oxgeno atmosfrico, citocromo C y reactivo oxidasa, oxidan al reactivo para formar un compuesto coloreado. Existen comercializacin de discos o tiras de papel ya listo para la determinacin. La aparicin de una coloracin purpura sobre la zona de inoculacin se considerara reaccin +. Datos clnicos y anlisis clnicos recientes: Nio de 11 aos de edad que consulta por torpeza motriz, dificultad en la coordinacin de los movimientos y lentitud en su ejecucin, retraso escolar y pie cavo derecho. Presenta tics de cierre palpebral de un mes de evolucin. Los problemas que tena el nio se vieron afectadas por dficit de citocromo C oxidada (1). SUCCINATO DESHIDROGENASA El papel fundamental de succinato-coenzima Q reductasa en la cadena de transferencia de electrones de las mitocondrias hace que sea vital en la mayora de los organismos multicelulares, la eliminacin de esta enzima a partir del genoma tambin se ha demostrado ser letal en la fase embrionaria en ratones. SDHA mutaciones pueden llevar al sndrome de Leigh, encefalopata mitocondrial, y atrofia ptica. Mutaciones SDHB pueden conducir a la tumorognesis de clulas cromafines, causando paraganglioma hereditario y feocromocitoma hereditario. Los tumores tienden a ser maligno. Tambin puede conducir a la disminucin de la vida til y el aumento de la produccin de iones superxido. SDHC mutaciones pueden llevar a una disminucin de la vida til, el aumento de la produccin de iones superxido, paraganglioma hereditario y feocromocitoma hereditario. Los tumores tienden a ser benignos. Estas mutaciones son poco frecuentes. SDHD mutaciones pueden llevar a paraganglioma hereditario y feocromocitoma hereditario. Los tumores tienden a ser benigna, y se producen a menudo en las regiones de cabeza y cuello. Estas mutaciones tambin pueden disminuir la vida til y aumentar la produccin de iones superxido.(5) 3. Mencione 5 inhibidores respiratorios y precise en qu lugar de la cadena respiratoria ejercen su accin.
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Cianuro y monxido de carbono: Inhiben la cadena de transporte de electrones unindose ms fuertemente que el oxgeno a los centros Fe-Cu en la citocromo c oxidasa, evitando la reduccin del oxgeno. Oligomicina inhibe la ATP sintasa, los protones no pueden ser devueltos a la mitocondria. Como resultado, las bombas de protones son incapaces de operar, y el gradiente se torna demasiado fuerte como para ser superado. NADH deja de ser oxidado y el ciclo del cido ctrico deja de operar porque la concentracin de NAD+ cae por debajo de la concentracin que estas enzimas pueden utilizar. AntimicinaA, Acta bloqueando la transferencia de electrones entre el citocromo b y el citocromo c1. En presencia de esta substancia, el citocromo bH puede ser reducido pero no oxidado, y consecuentemente, el citocromo c permanece oxidado, al igual que los citocromos a y a3 del Complejo IV. Malonato y oxaloacetato: Inhibidores competitivos de la succinato dehidrogenasa (complejo II).(3) Barbit ricos,
Piericidina A, Rotenona: Sobre la NADH-deshidrogenasa, bloqueando la transferencia de electrones entre la flavina y la ubiquinona. (Inhibidores del complejo I). 4. Mencione 5 aceptores electrnicos artificiales. 1) 2) 3) 4) 5) Ferricianuro: Azul de metileno 2,6 diclorofenolindofenol Menadiona Metasulfato de fenacina
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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: I. II. III. Aznar Soria. SINDROME DE LEIGH POR DEFICIT DE CITOCROMO C OXIDASA: CASO CLINICO. Pediatr 1996; 45:286-288.
Garcia Jose, Sava. Del Carmen. MANUAL TECNICO SUPERIOR DE LABORATORIO DE ANALISIS CLICNOS. Ed MAD; 2004:345-3450.
Melo Virginia. BIOQUIMICA DE LOS PROCESOS METABOLICOS. Ed Revert. Barcelona; 2007: 205-2010.
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Presencia de Lactato Deshidrogenasa. Citocromo Oxidasa y Succínico Deshidrogenasa

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PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA.

CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO DESHIDROGENASA

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PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA, CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO DESHIDROGENASA

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SUCCNICO DESHIDROGENASA (SDH)

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Actividad sobre el Piruvato. Lactato deshidrogenasa. Estructura tridimensional.

Seguimiento de la reaccin por la citocromo oxidasa.

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3. Seguimiento de la reaccin catalizada por la Succnico deshidrogenasa.

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ASIGNATURA: Bioqumica I Ensayo 2 SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA CITOCROMO OXIDASA

1.5 Solucin incolora

0.5 Solucin marrn rojiza

0.0 Solucin anaranjada

0.0 Solucin marrn rojiza

Reaccin7: 2 Citocromo c reducido + 2H+ + O2 oxidado +H2O 2Citocromo c

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ASIGNATURA: Bioqumica I 2Citocromo c oxidado + P-Fenilendiamina coloreado (marrn rojizo) Compuesto

ENSAYO 3 SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA SUCCNICO DESHIDROGENASA

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2. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA LACTATO

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4. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA SUCCINICO

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7. Pruebas Bioqumicas.Disponible en: http://books.google.com.pe/books?

8. Reacciones y enzimas del ciclo de Krebs .Disponible en:

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