Tema: Metode spectrofotometrice de analiza a produselor alimentare

Principii de analiza spectroscopie 1.1 Notiuni spectroscopie.. 1.2 Metode optice de analiza. 1.3 Spectroscopie de absorbtie molecular.. 1.4 Analiza spectrofotometrica calitativa si cantitativa.............................................

Tehnica, instalatie de laborator 2.1 Schema de principiu a unui fotometru................................................................... 2.2 Surse de lumina...................................................................................................... 2.3 Tipuri de fotometrie............................................................................................... 2.4 Metode,indici tehnici de exploatare......................................................................

Metode de analiza 3.1 Metoda de determinare a zaharului cu acid picric................................................. 3.2 Metoda de determinare a ferului in albus de ou.................................................... 3.3 Metoda de determinare a fosfstilor in albus de ou................................................

Proiect de an
Mod. Coala A efectuat A verificat Consultant Contr.norm. Aprobat N.Document Semnat Data

Rata Ion Mija Nina.

Metode spectrofotometrice de analiza a produselor alimentare

Litera

Coala

Coli

UTM FTMIA Gr. TAP-063

Principii de analiza spectroscopie 1.1 Notiuni spectroscopie Spectroscopia este o denumire generica data unei clase de procedee si tehnici experimentale prin care urmareste si se cuantifica efectul absorbtiei sau emisiei de energie de catre o proba supusa analizei chimice calitative si/sau cantitative. La folosirea spectroscopiei in analiza chimica calitativa. Scopul spectroscopiei este acela ca dintr-un spectru sa se obtina informatii despre proba analizata precum: structura interna, compozitie, dinamica. Spectrofotometria este o ramura a spectroscopiei molecular ce se ocupa cu analiza calitativa si cantitativa a spectrelor de absorbtie in domeniul UV-VIS a substantelor organice sau anorganice in stare lichida.din cauza ca in domeniul UV-VIS nu toate substantele sau elementele chimice au spectre de absorbtie cu maxime clare analiza calitativa nu este atit de reprezentativa ca cea cantitativa. Un spectrofotometru sau un colorimetru utilizeaza transmiterea luminii printr-o solutie pentru determinarea concentratiei unui solut in solutia respectiva. Radiatia ectromagnetica emisa intr-un spectru electromagnetic este desfacuta prin refractie pe o prisma sau pe o retea de difractie Tn scopul evidentierii precise a lungimilor de unda specifice diferitelor elemente, ioni, radicali sau molecule. La folosirea spectroscopiei in analiza chimica calitativa se realizeaza corelarea lungimilor de unda a spectrelor obtinute cu spectre etalon. La analiza chimica cantitativa se foloseste dependenta dintre intensitatea emisiilor spectrale specifice si concentratia elementelor sau substantelor din compusi sau amestecuri de compusi. Clasificarea metodelor spectroscopice: 1. Spectroscopie atomic Spectroscopie atomic de absorbie (AAS/OAS) Spectroscopie de atomic de emisie (AES/OES) Spectroscopie de atomic de fluorescent (AFS) Spectroscopie electronic Spectroscopie Rontgen (XRS)

2. Spectroscopie molecular Spectroscopie n e mas (MS) 4. Spectroultraviolet-vizibil (UV/Vis) 3. Spectroscopie dscopie de timp ultrascurt 5. Spectroscopie Laser 6. Spectroelectrochimie 7. Astrospectroscopie

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

1.2 Metode optice de analiza Lumina reprezint partea vizibil a spectrului de radiaie electromagnetic. La iradierea unui corp soluie sau gaz cu radiaie luminoas aceasta sufer o serie de fenomene specifice de reflexie, absorbie, difuzie, refracie, etc., Intensitile radiaiilor ce rezult ca urmare a acestor fenomene snt legate prin relaia: Lo=Lr+Labs+L+Ld unde: Io- radiaia inciden labs-radiaia absorbit Ir- radiaia reflectat Ld- radiaia difuzat l-radiaia transmis. Radiaia transmis include i radiaia refractat , radiaie care are un unghi mai mare dect unghiul dintre radiaia inciden i radiaia transmis nerefractat dar mai mic dect unghiul dintre radiaia inciden i radiaia difuzat. Reflexia poate fi total , parial sau inexistent. Un corp care reflect total lumina alb apare opac i de culoare alb. Dac un corp reflect parial lumina alb acesta apare colorat n culoarea complementar culorii absorbite. Dac un corp nu reflect lumina (aceasta este total absorbit) corpul apare de culoare neagr i este opac. O soluie are o anumit culoare pentru c las s treac (transmite) aceast culoare i absoarbe n schimb culoarea complementar . De exemplu percepem o soluie de culoare roie deoarece soluia absoarbe culoarea verde i transmite culoarea complementar (cea roie) . Pentru a msura absorbia unei soluii roii n vederea determinrii concentraiei , cuva cu soluie trebuie iradiat cu culoare verde cu lungimea de und de 490 i 580 nm. n tabelul de mai jos snt prezentate culorile spectrale ale luminii albe i culorile complementare corespunztoare.

Tabel .1. Culori spectrale corespunzatoare lungimilor de unda

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Tabel.2. clasificarea metode de analiza optica

1.3 Spectroscopia de absorbtie moleculara Spectrometria de absorbie moleculara are aplicaii atit n analiza calitativa i n cea cantitativa. Se iradiaz proba de analizat cu radiaii de lungimi de unda dorite de exemplu n domenul UVVIS) i se nregistreaz spectrul de absorbie ( intensitatea radiaiei n funcie de lungimea de unda , (n infrarou n funcie de numrul de und sau frecven ). Cu spectrul nregistrat i cu ajutorul unor atlase spectrale se identific specile moleculare care se regsesc n dreptul unei anumte lungimi de und specifice. La aparatele moderne echipate cu tehnic de calcul i soft specific identificarea se face automat. Spectrometria n infrarosu folosete la ora actual pe larg identficarea automat a specilor chimice. La analiza cantitatv se determin concentraia unei anumite specii chimice pe baza corespondenei acesteia cu intensitatea radiatei absorbite din radiaia incident cu lungimea de und specific acelei specii moleculare. Spectrometria molecular se poate aplica speciilor chimice n stare de agregare lichid gazoas sau solida. La analiza n stare lichid pe fotodetector cade o cantitate de radiaie monocromatice specific ce reprezint diferena dintre cantitatea iniial a radiaiei i cantitatea radiaiei absorbite de prob, cea din urm fiind proporional cu concentraia. Analiza gazelor presupune nchidere unui volum constant de gaz ntr-o celul special i fotometrarea acesteia. Spre deosebire de lichide concentratia stabilit la analiza cantitativ a gazelor este puternic dependenta de presiune i de temperatur , de asemenea dat fiind distanta mare intre molecule pentru ca metoda s prezinte sensibilitate suficient de buna, cuvele au lungimi mari care pot ajunge la valori de ordinul zecilor de centimetrii. Din motivele enumerate mai sus analiza spectrofotometric a gazelor se efectueaz de regul numai sub forma analizei calitative. Atunci cnd i analiza cantitativ este totusi strict necesara se poate alege soluia barbotrii gazelor printr-un mediu chimic lichid a crui compoziie este astfel stiblit nct specie sale chmice s dea reacii de culoare cu gazele barbotate. La spectrofotometria solidelor este analizat cantitatea de radiaie reflectat de proba solid supus

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

analizei din cantitatea radiaiei policromatice incidente va lipsi o cantitatea proporional cu concentratiile speciilor chimice prezente n materialu solid , iar in cazul iradierii acestuia cu radiaie monocrom at c va lipsi din cantitatea iniial a radiaiei o cantitate proporional cu concentraia speciei ohm te creia i este specific radiaia. La spectrometria de absorbie molecular a corpurilor soide trebuie avut n vedere c dat find abaterea macro i microgeometric a suprafeei examinate de la o suprafaa perfect plan reflexia se realizeaz i pe alte direcii dect directa radiaiei incidente ca urmare cantitatea de radiaie ce cade pe detector nu reflect numai radiaia absorbit de prob ci si cantitatea reflectat pe alte direcii afectnd sensibilitatea si precizia determinrii. in principiu, reflexia poate fi totala . parial sau inexistenta. Un corp care reflect total lumina alb apare opac i de culoare alb. dac un corp nu reflect lumina (aceasta este total absorbita) corpul apare de culoare neagr i este opac. dar dac un corp reflect parial lumina alb (aceasta este partal absorbit] acesta apare colorat n culoarea complementar culorii absorbite. In cazul soluiilor acestea au o anumit culoare pentru c las s treac (transmit) aceast culoare j absorbe n schimb culoarea complementar . De exemplu o soluie este perceput de culoare roie deoarece soluia absoarbe culoarea verde i trnsmf e culoarea complementar (cea roie). tot n acest sens pentru a msur absorbia fotometric a unei soluii roii cuva cu soluie trebuie iradiat cu culoare verde cu lungimea de und de 490 i 580 nm.

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

1.4 Analiza spectrofotometrica calitativa si cantitativa Spectrometria de absorbie molecular are aplicaii att n analiza cantitativ ct i n cea calitativ. Spectrometria de absorbie molecular efectuate n cele trei domenii spectrale UV-VISIR nu d aceleai rezultate n ce privete analiza calitativ i cantitativ. Astfel datorit unor maxime de absorie limitate n domeniul UV-VIS acest domeniu este folosit preponderent n analiza cantitativ. Datorit .........domeniul IR este folosit preponderent n domeniul analizei calitative.

Tab.3. Lungimi de unda si pozitii ale benzii de absorbtie specifice de absorbtie pentru legaturi cromofore si grupari functionale in domeniul spectral ultraviolet si infrarosu

In tabelul 3 snt date lungimi de und specifice pentru maxime de absorbie a unor grupri cromofore i grupri funcionale pentru domeniul ultraviolet i infrarou. Prezena unor absorbii la aceste lungimi de und reprezint indiciul prezenei respectivelor grupri n substana de analizat Analiza spectrofotometric cantitativ . Intensitatea unui fascicul de radiaii luminoase ce cade de o substan lichid gazoas sau solid sufer absorbii, reflecii, refracii sau provoac fluorescent figura 7. n fotometria molecular cantitativ se determin cantitatea de radiaie :

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

- absorbit de prob la traversarea acesteiea de o radiaie electromagnetic , Fig.4.Fenomene optice ce au loc la trecerea unui fascicule de radiatie printr-un mediu transparent lichid

- absorbit de prob la reflexia radiaiei de pe prob. fig. 7b, (fotometrie la corpuri solide netransparente) - emis de prob pe o lungime de und superioar lungimii de und a radiaiei incidente , fig. 7c. (fotometrie de fluorescent i fosforescen) - cantitatea de radiaie absorbit de prob dintr-o emisie pe aceeai lungime de und ca cea specific specieiei chimice analizate . fig. 7d, (spectrofotometrie de absorbie atomic ).

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Tehnica, instalatie de laborator

2.1 Schema de principiu a unui fotometru Un spectrofotometru este format principial dintr-o surs de lumin (1), un sistem optic pentru producerea luminii monocromatice, compus din lentile (2), un sistem de fante (3). un sistem

Fig.5. Schema de principiu a unui fotometru. 1- sursa de lumina\ 2- lentile colmatoare, 3-sistem de fante, 4- sistem monocromator cu prisma 5-spatiu pentru cuvele cu solu(ie de analizat 6detector de radiafie luminoasa, 7- amplificator 8- sistem de afisare

monocromator (4) cu reea de difracie sau cu prism, spaiu pentru cuve cu soluie de referin i cuve pentru soluie de analizat (5), un detector de radiaie luminoas (6). un amplificator (7) i un sistem de afiare (8).

Fig. 6. Schema de principiu a unei masurari spectro fotometrice efectuate cu sonda de masurare conectata prin fibra optica la un spectroscop clasic folosind celula echivalenta. 1.2prisme de sticla optica, 3,4 - ogliizi cu reflexie totala, 7,8- fibre optice, 9- sonda de inersie, 10 oglinda cu reflexie totala, 11- solutie de analizat, 12- sursa de radiatie, 13-grup de leniile colinatoare, 14-diatragma, 15-locasul spectrofotometrului pentru fixarea cuvei clasice, 16retea de difractie fixa, 17-detector Diode- Array, 18-amplificator electronic , 19- sistem de achizitie ti prelucrare date

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Modul de lucru este urmtorul : se fixeaz celula spectrofotometnca echivalenta in locaul paralele piped ic (15) destinat in mod obinuit cuvei clasice din sticl ce conine soluia de analizat. Radiaia luminoas emis de sursa (12) este reflectat de oginda (3) a celulei echivalente , trece prin prisma (1). fibra optica (7) spre sond speciala (9), traverseaz fereastra (f) inundat cu soluia de analizat se reflect pe oginda (10) traverseaz din nou fereastra (f) i ajunge prin fibra optic (8) prisma (2) pe oginda (4) de unde este reflectat pe reeaua de difracie (16) care o descompune dispersiv dup lungimea de unda i o reflect n continuare spre detectorul CCD (17) semalele electrice al acestuia fiind amplificate n amplificatorul (18) i preluate de sistemul de achiziie prelucrare i afiare a datelor (19). La determinri cantitative de concentraie trebuie avut n vedere faptul c n sonda special (9) radiaia luminoas trece de dou on prin fereastra (f) cu soluie de analizat ca atare valoarea grosimii b) (egala cu deschiderea ferestrei f ) a stratului) din legea Lambert-Beer este dubl. Pentru a corespunde criteriului de liniaritate a legii Lambert - Beer care limiteaz utilizarea msurtorile fotometrice la concentarii relativ mici situate la max 0,05M i pentru a putea fotometra cu erori mici si soluii mai concentrate sondele fotometrice de de msurare se execut de regul din dou pri prima parte conine fibra optic cu sistemul de prindere prin filet i partea a doua conine capul de lucru detaabil cu o fereastra de o anumit dimensiune prin care intr soluia de analizat, fiecare cap de lucru reprezint echivalentul unei cuve clasice din cuar de o anumut grosime. Pentru fiecare lungime de und individual dorit exist ca detector al intensitii luminoase absorbite o fotodiod individual. A doua constatare este faptul c intregul spectru dat de reeua de difracie (5) cade n acelai timp pe detectorul ir de fotodiode (6). Numrul de fotodiode/detector este la ora actual de 512, 1024, 2048 dup tipul constructiv al acestuia, cu rezoluii ale lungimii

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

de und mult sub un nanometru. Asemenea rezoluii snt practic de neatins cu monocromatoare de scanare n timp. Detectorul ir de fotodiode a deschis calea i spre sondele

Fig.7. Schema optica a unui spectrofotometru UV-VIS cu detectorsir de fotodiode. a)- schema optica 1- sursa de radiatie policromatica, 2,4,-grupuri de lentile, 3- cuva cu solutie de analizat, 5 - retea de difractie, 6- detector sir de fotodiode. b)-detector Diode Array

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

2.2 Surse de lumina Surse de lumin. La fotometre se folosesc fie surse de radiaie cu spectru |arg ( metale nroite) fie surse de radiaie cu band spectral ngust. Sursele de radiaie cu spectru larg emit n mod continuu lumin ntr-un domeniu ntins de lungimi de und. astfel: - Lampa cu filament de Wolfram ( engl. Tungsten) emite lumin n domeniul lungimilor de und cuprinse ntre 300 - 1000 nm. Lampa radiaz cu intensitate crescnd ncepnd cu 300 nm. Intensitatea de radiaie crete progresiv, figura . Randamentul acestei lmpi este slab n domeniul ultraviolet. La lmpile obinuite de wolfram la temperaturile filamentului de cea 3000 K se evapor atomi de wolfram i se condenseaz pe sticla lmpii. Aceste precipitate nu duc numai la modificarea intensitii luminoase ci i la modificarea spectrului. Din acest motiv aceste lmpi se schimb la intervale de timp bine determinate fr a se atepta arderea filamentului. La lmpile mai moderne cu filament de wolfram i mediu gazos halogen . cel din urm absoarbe n prima faz aceti atomi , la rcirea lmpii atomii se condenseaz din nou pe filament n felul acesta ese evitat formarea unui depozit metalic pe partea interioar a sticlei lmpii. Lampa cu halogen ( lampa din sticl de cuar i vapori de iod) emite n domeniul 300 - 1000 nm. Aceast lamp prezint o intensitate de radiaie mai mare dect lampa cu filament de wolfram. - Lampa cu deuteriu emite n ulrtraviolet n domeniul lungimilor de und 180 - 360 nm - Lampa cu xenon emite fulgere de lumin de mare intensitate n domeniul lungimilor de und 200 - 1000 nm Surse de radiaie cu band spectral ngust. Lmpile din aceast categorie emit lumina pe un domeniu ngust de lungimi de unda . Dac se nclzete mercur sau cadmiu pan la evaporare ele emit un spectru de linii pe lungimi de und bine definite. Lampa cu vapori de mercur emite pe lungimile de und : 254, 265, 280, 302, 313, 334, 365, 405, 436, 492, 546, 578, 623, 691. figura. Sursele de radiaie cu band spectral ngust prezint, fa de sursele cu band larg, avantajul unei inintensiti mai ridicate precum i avantajul unui domeniu spectral ngust din care se poate izola ftr eforturi mari un domeniu spectral i mkai ngust. Dezavantajul principal este acela c domeniul spectral ngust emis de aceste surse nu se suprapune totdeauna cu absorbia optim a substanei analizate

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Fig. 8. Distributia spectrala a unei lampi cu incadescenta (a) a unei lampi de fluorescenta (b) si distributia grafica a spectrului pentru cele doua lampi (c)

Obinerea radiaiei monocromatice. Pentru asigurarea lungimilor de und specifice absorbiei maxime ( absorbia optim) este necesar separarea ei din spectrul larg al aluminii vizibile . Aceast separare se poate face cu filtre de absorbie, filtre de interferen prisme sau reele de difracie, vezi i cap. Deoarece la ora actual snt construite aproape n exclusivitate spectrofotometre i mai puin fotometre filtrele snt tot mai puin folosite, locul lor fiind luate de monocromatoare. Date fiind posibilitile tehnice a obinerii unor reele de difracie performante la preuri mici acestea iau ncet locul prismelor n monocromatoare. n figura este prezentat schema de principiu a obinerii luminii monocromatice pentru un spectrofotometru cu monocromator cu reea de difracie

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Fig.9. Schema de principiu a monocromatografului cu retea de difractie folosit in fotometrie

Limea benzii spectrale. Segmentul de spectru ( puritatea spectral) care este trimis prin cuv cu substana de analizat depinde n parte de gradul de dispersie al luminii (calitatea monocromatorului} i in parte de dechiderea fantei din obturatorul de lumin, figura.

Fig. 10.Influenta micsorarii fantei (A,B) si a rezolutiei retelei de difractie (B;C) asupra puritatii speclrale a luminii ce trece prin proba de analizat

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Cuve pentru soluie. Exist urmtoarele tipuri de cuve pentru soluia de analzat cuv normal Cuv cu absorbe umplere ca la cuva normal, gol re prin absorbie cu o pomp i o caplar Cuva cu circularea n flux continuu a soluiei de analizat Prin diverse norme s-a ajuns la cu vele uzuale de form parareteppedic cu grosimea stratului analizat de 1 cm. dar snt folosite i cuve cu grosimea stratului de 0.5 i 0.6 cm (pentru determinarea soluiilor de concentraii mari) precum i cuve cu grosmi ale stratului de 2 cm (pentru determinarea soluiilor de concentrai mici). Volumul de umplere pentru cuve normale este situat n urmtoarele limite: cuve macro :> 1000 ml > cuve mii: > 500 ni cuve micro: 50 -200 ml Materiale uzuale pentru cuv pot fi sticl de cuar natural, stel optic normali. polimetracrilat de meri . poistren. La lungimi de und mai mici de 310 nm se folosec n exclusivitate cuve de cuart. O atente deosebit trebuie acordat cuvelor sintetice. Materialele acestora find foarte bune izolatoare termice, prenclzirea trebuie realizat la un timp cel puin dublu fa de cuvele din sticl. Pereii cuvei de soluie produc o mprtiere total de cea 4% din radiaia luminoas incidena. Extincia unei cuve goale are o valoare a extinciei de cea. 0,080, dac cuva este umplut cu ap distilat pierderile prin reflecie se reduc la extincii situate n jurul valorii de 0.040.

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

2.3 Tipuri de fotometre Fotometre cu un singur fascicul . Aceste fotometre au un singur fascicul luminos care trece pe rnd prin cuva cu soluia de referin i prin cuva cu soluia de analizat, figura . Din punct de vedere constructiv aceste fotometre pot avea unul dou sau mai multe locae pentru prob. La aparatele cu un singur loca dup fotometrarea soluiei de rerferin se scoate cuva din loca i se introduce cuva cu soluia de analizat n locul ei. La aparatele cu mai multe locae primul loca este ocupat de cuva cu soluia de rerferin iar urmtoarele locauri cu cuvele soluiilor de analizat. Aducerea probelor pe rnd n dreptul fascicului luminos se relizeaz cu ajutorul unui ghidaj paralel pe care este prins sistemul de sprijin al cuvelor n felul acesta crete productivitatea la determinare. Avantajul acestui tip de fotometru const n simpliatatea constructiv, preul de cost sczut i fiabilitatea ridicat- Avnd n vedere c msurarea se realizeaz decalat n timp se reclam o mare stabilitate a sursei de lumin. De asemenea modul de lucru cu mai multe locae presupune cuve cu proprieti optice asolut identice pentru pereii transpareni prin care trece radiaia.

Fig.11.Schema de principiu a unui Fotometru cu un singur fascicul

Fotometrul cu dou fascicule. La acest tip de aparate cuva cu soluia de referin i cuva cu soluia de analizat snt iradiate paralel.n acest scop fasciculul iniial de lumin este divizat de un sistem de oglinzi n dou fascicule paralele care iradiaz n acelai timp sau alternativ la intervale de timpi foarte mici cuva cu soluia de referin i cuva cu soluia de analizat. Soluia aceasta este evident mai scump dect cea folosit la fotometrele cu unsingur fascicul uminos prezint n schimb avatajul c fluctuaii ale sursei de lumin pot fi compensate i eliminate uor. Din punct de vedere constructiv exist fotometre cu dou fascicule decalate spaial, figura l fotometre cu dou fascicule decalate n timp, figura .La fotometrul cu dou fascicule decalate spaial lumina provenit de la surs este este divizat de o oglind semitransparent n dou fascicule identice ce traverseaz cuva cu soluia de referin i cuva cu soluia etalon n acelai timp. Intensitatea luminoas absorbit este msurat de dou detectoare identice separate ntre ele.

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Fig.12. Schema de principiu a fotometrului cu doua fascicule decalate spatial

Fig.13. Schema de principiu a fotometrului cu doua fascicule decalate In timp

Cu dou fascicule este mai ales atunci cnd se nregistreaz spectre fiind posibuil corecia continu a msurtorii prin intermediul soluiei de referin. Spectrofotometrul cu ir de fotodiode. Una din realizrile cele mai important n domeniul spectrofotometriei o reprezint folosirea detectoarelor ir de fotodiode n locul detectoarelor clasice . Acest tip de detector permite preluarea spectrului UV-VIS-NIR n acelai timp nefiind necesar scanarea secvenial n timp a tuturor lungimilor de und. Avantajele snt legate de citirea i transmiterea n timp real a datelor Ia sisteme de urmrire i reglare automat a concentraiilor i parametrilor cu aplicaii deosebit n procese alimentare. Cea mai important aplicaie n chimia analitic alimentar o reprezint folosirea spectroscopului UV-VIS-NIR cu detector ir de fotodiode ca analizor n cromatografia HPLC. La concentraii mici din domeniul urmelor, adesea componenta urmrit iese din coloana capilar ntr-un interval de timp n care scanarea ciclic a spectrului n cazul spectroscoapelor clasice se gsete ntr-un domeniu de lungimi de und n care

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

specia respectiv nu prezint absorbie. n aceast situaie, analizorul spectroscopie nu sesizeaz prezena speciei respective n amestec. De asemenea, exist i probabilitatea ca specia respectiv s fie surprins la nceputul sau la sfritul ieirii din coloana cromatografic de ctre lungimile de und unde specia prezint absorbie maxim. n acest caz indicaia concentraiei este mai mic dect cea real. Trebuie artat c una din aplicaiile de baz pentru acest tip de analizor spectrofotometric l reprezint analiza micotoxinelor din materii prime i produse alimentare. In figura este prezentat schema optic a unui spectrofotometru UV-VIS cu ir de fotodiode. Se remarc n principal faptul c acest spectroscop nu are nici un element mecanic sau electromecanic n micare aa cum au spectroscoapele clasice cu scanare . La acest tip de fotometru lumina se desparte mn lungimile de und individuale abia dup ce trece prin cuv .

2.4 Metode, indici tehnici de exploatare

Tab.14 Tipuri spectrofotometre caracteristici tehnice

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Parametri tehnici

Spectrofotometru UV,VIS. AquaMate

Spectrofotometru UV,VIS. S22 198-1000nm +/-2nm

Spectrofotometru 23RS

Lungime de unda Precizie lungimii de unda Rezolutie Largimea benzii Monocromator Absorbanta Zgomot fotometric Interfata Alimentare Banda spectrala

190-1100 nm +/- 1nm

320-1100nm +/-nm

1nm 2nm 1200 linii/nm 0,005A 0.0001A

2nm 6nm 1900linii/nm 0,300-1.999 A 0.1

1nm 6nm 1500linii/nm 0.5-0.004A 0.005

RS232C 220/50 Hz 6nm

printer si calculator 220/50 Hz 2nm

printer si calculator 220/50 Hz 6nm

Spectrofotometru UV,VIS. AquaMate

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Spectrofotometru UV,VIS. S22

Spectrofotometru 23RS

Metode de analiza

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

3.1 Determinarea zaharurilor simple cu acid picric n scopul studierii produsului care absoarbe lumina restabilit de acidul picric a fost pregtit un amestec-model din zaharuri, care imit coninutul de zaharuri n fructe. A fost pregtit o soluie din zaharuri simple cu concentraia de 10 %, unde zaharoza, fructoza i glucoza se afl n proporia de 1:1:1. Soluia a fost expus metodei de determinare a zaharurilor cu acid picric. Complexul de culoare portocalie obinut a fost calorimetrat n diapazonul lungimii de und 315980 nm. Tabelul .15.Valoarea densitii optice a soluiei din zaharuri cu concentraia de 10 % n reacia cu acid picric Lungimea de und , nm 315 340 400 440 490 540 590 670 750 870 980 Densitatea optic D 0 0 0,01 0,053 0,185 0,492 0,048 0 0 0 0

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Densitatea optic D

0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 315 340 400 440 490 540 590 670 750 870 980
Figura.16 Diapazonul valorilor densitii optice a soluiei-model n reacia cu acid picric Din figura dat se vede clar vrful absorbiei de lumin de ctre amestec la lungimea de ubd de 540 nm. Pentru diferite diluri ale soluiei-model, atunci cnd concentraia zaharurilor simple variaz ntre 0,27-6,4 g/100 ml soluie au fost determinate valorile densitii optice (D) i a coeficientului de trecere (T). Tabelul .17. Valorile densitii optice i a coeficientului de trecere a soluiei-model la diferite concentraii de zaharuri Concetraia zaharurilor n prob, g/100 ml soluie 0,277 0,138 0,093 1,6 1,6 2,24 6,4 Lungimea de und, =540 nm T 56,26 75,34 87,3 0,854 0,424 4,572 1,298 D 2,5 0,124 0,059 2,076 2,407 1,34 1,892
Lungimea de und, nm

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

n urma calculelor a fost construit graficul de calibrare pentru determinarea zaharidelor n reacia cu acid picric.
3

2.5
Densitatea optic D

1.5

0.5

0 0 1 2 3 4 5 6 Concentraia de zaharide n prob, g/100 ml soluie 7

Figura .18. Graficul de calibrare pentru determinarea zaharidelor n reacia cu acid picric Datele obinute: Tabelul .19. Datele experimentale obinute pentru 5 zile de determinri Densitatea optic D, =540 nm Ziua 1 Prune+ap Proba I Proba II Prune+alcool 0,48 0,504 0,816 Ziua 2 0,58 0,52 0,717 Ziua 3 0,68 0,736 0,75 Ziua 4 0,48 0,424 0,671 Ziua 5 0,69 0,648 0,782

Proba

n probele de prune extrase cu alcool etilic densitatea optic are valori mai mari dect n cele extrase cu ap, ceea ce denot c extracia zaharidelor cu alcool este mai complet.

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Tabelul .20. Prelucrarea datelor experimentale (model) Concentraia de zaharuri, g/100 ml soluie Prune +ap Proba I Proba II 0,48 0,504 0,816 0,97 0,94 1,27 1,164 1,128 1,524 1,164 1,128 1,524 11,64 11,28 15,24 9,5

Proba

Densitatea optic, =540 nm

Pierdereri la filtrare (0,8)

Cantitatea de zaharuri 10 g 100 g

Date de referin din literatur [26]

Prune+alcool

Concluzie. n urma efecturii experimentului am avut ca scop determinarea coninutului de zaharuri simple n prune. Soluia de cercetat a fost studiat la cromotgraf la dou lungimi de und: =490 nm; =540 nm. n rezultatul efecturii calculelor s-a calculat valoarea densitii optice ( =540 nm) pentru 5 zile de msurri.

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data

Introducere Spectrofotometria este o ramura a spectroscopiei molecular ce se ocupa cu analiza calitativa si cantitativa a spectrelor de absorbtie in domeniul UV-VIS a substantelor organice sau anorganice in stare lichida.din cauza ca in domeniul UV-VIS nu toate substantele sau elementele chimice au spectre de absorbtie cu maxime clare analiza calitativa nu este atit de reprezentativa ca cea cantitativa. Un spectrofotometru sau un colorimetru utilizeaza transmiterea luminii printr-o solutie pentru determinarea concentratiei unui solut in solutia respectiva. Spectrofotometrul difera de colorimetru prin modul in care lumina este separata in lungimile de unda componente. Spectrofotometrul utilizeaza o prisma pentru separarea luminii, iar colorimetrul utilizeaza filtre. Ambele se bazeaza pe un model simplu de trecere a luminii de lungime de unda cunoscuta printr-o proba si masurarea cantitatii de energie luminoasa care este transmisa. Aceasta se realizeaza prin plasarea unei fotocelule in partea opusa a probei respective. O raza de lumina este formata din fotoni; cand un foton intalneste o molecula de analit, exista sanse ca analitul sa absoarba fotonul. Aceasta absorbtie reduce numarul de fotoni din raza de lumina, astfel reducand intensitatea luminoasa.Toate moleculele absorb energie radianta la anumite lungimi de unda. Cele care absorb energie in spectrul vizibil sunt cunoscute ca pigmenti. Proteinele si acizii nucleici absorb lumina in domeniul ultraviolet. Un spectrofotometru implica o sursa de lumina, o prisma, un suport pentru probe si o fotocelula. Acestea sunt conectate la un sistem electric sau mecanic care controleaza intensitatea luminii, lungimea de unda si conversia energiei primite la nivelul fotocelulei in fluctuatii voltmetrice. Fluctuatiile voltmetrice sunt apoi proiectate pe o scala metrica/digitala si valorile sunt inregistrate intr-un computer. Intensitatea culorii dintr-o proba depinde de cantitatea de solut din proba respectiva. Transmisia luminii nu este o functie liniara, ci mai degraba exponentiala. Transmitanta este procentul relativ de lumina care a trecut prin proba. Transmitanta procentuala este transformata intr-o functie logaritmica inversa cunoscuta ca absorbanta (sau densitate optica).

Pag.

Proiect de an
Mod Coala N. Document Semnat Data