Equipement Du Laboratoire

Manuel dentretien et de
MAINTENA N C E
des appareils de laboratoire

2 e dition
Catalogage la source: Bibliothque de lOMS Manuel dentretien et de maintenance des appareils de laboratoire. 2e d. 1.Laboratoire. 2.Maintenance. 3.Manuel. I.Organisation mondiale de la Sant. II.Organisation Panamericaine de la Sant. ISBN 978 92 4 259635 9 (Classication NLM: WX 147)
Organisation mondiale de la Sant 2008 Tous droits rservs. Il est possible de se procurer les publications de lOrganisation mondiale de la Sant auprs des Editions de lOMS, Organisation mondiale de la Sant, 20 avenue Appia, 1211 Genve 27 (Suisse) (tlphone : +41 22 791 3264 ; tlcopie : +41 22 791 4857 ; adresse lectronique : bookorders@who.int). Les demandes relatives la permission de reproduire ou de traduire des publications de lOMS que ce soit pour la vente ou une diffusion non commerciale doivent tre envoyes aux Editions de lOMS, ladresse ci dessus (tlcopie : +41 22 791 4806 ; adresse lectronique : permissions@who.int). Les appellations employes dans la prsente publication et la prsentation des donnes qui y gurent nimpliquent de la part de lOrganisation mondiale de la Sant aucune prise de position quant au statut juridique des pays, territoires, villes ou zones, ou de leurs autorits, ni quant au trac de leurs frontires ou limites. Les lignes en pointill sur les cartes reprsentent des frontires approximatives dont le trac peut ne pas avoir fait lobjet dun accord dnitif. La mention de rmes et de produits commerciaux ne signie pas que ces rmes et ces produits commerciaux sont agrs ou recommands par lOrganisation mondiale de la Sant, de prfrence dautres de nature analogue. Sauf erreur ou omission, une majuscule initiale indique quil sagit dun nom dpos. LOrganisation mondiale de la Sant a pris toutes les prcautions raisonnables pour vrier les informations contenues dans la prsente publication. Toutefois, le matriel publi est diffus sans aucune garantie, expresse ou implicite. La responsabilit de linterprtation et de lutilisation dudit matriel incombe au lecteur. En aucun cas, lOrganisation mondiale de la Sant ne saurait tre tenue responsable des prjudices subis du fait de son utilisation.
Composition et mise en page : LIV Com Srl, Morges Switzerland Imprim en Espagne Contact lOMS : Dr G. Vercauteren, Coordinateur, Diagnostic et technologie de laboratoire, Dpartement technologies essentielles de la Sant, Organisation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve 27, Suisse.
Ce document est disponible ladresse suivant : www.who.int/diagnostics_laboratory
M A N U E L D E N T R E T I E N E T D E M A I N T E N A N C E D E S A P PA R E I L S D E L A B O R ATO I R E
Table des matires

TABLE DES FIGURES REMERCIEMENTS INTRODUCTION
CHAPITRE 1 LECTEUR viii
xi
DE MICROPLAQUES
1
1 1 1 3 3 4 5
Photographie dun lecteur de microplaques A quoi sert un lecteur de microplaques Principes de fonctionnement Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
CHAPITRE 2 LAVEUR
DE MICROPLAQUES
7
7 7 7 9 9 11 12
Photographie dun laveur de microplaques A quoi sert un laveur de microplaques Principes de fonctionnement Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
CHAPITRE 3 pH-MTRE
A quoi sert un pH-mtre Photographie et lments dun pH-mtre Principes de fonctionnement Elments du pH-mtre Circuit lectrique type Conditions requises pour linstallation Procdure gnrale dtalonnage Entretien gnral du pH-mtre Entretien courant de llectrode Guide de dpannage Dfinitions Annexe : Thorie du pH
13
13 13 13 14 15 16 16 17 18 18 19 20
iii
TA B L E D E S M AT I R E S
CHAPITRE 4 BALANCES
Photographies de balances A quoi sert une balance Principes de fonctionnement Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
21
21 22 22 26 27 28 29
CHAPITRE 5 BAINS-MARIE
Schma dun bain-marie Principes de fonctionnement Commandes du bain-marie Fonctionnement du bain-marie Guide de dpannage Dfinitions
31
31 31 32 32 34 34
CHAPITRE 6 ENCEINTE
DE SCURIT BIOLOGIQUE
35
35 35 35 39 39 39 40 41 42 43 44
Illustration dune enceinte de scurit biologique A quoi sert une enceinte de scurit biologique Principes de fonctionnement Scurit biologique Conditions requises pour linstallation Utilisation de lenceinte de scurit biologique Entretien de routine Evaluation fonctionnelle (autre option) Tableau dvaluation fonctionnelle des enceintes de scurit biologique Guide de dpannage Dfinitions
CHAPITRE 7 CENTRIFUGEUSES
Photographies de centrifugeuses A quoi sert une centrifugeuse Principes de fonctionnement Elments de la centrifugeuse Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Recommandations pour une utilisation et un stockage appropris Guide de dpannage Dfinitions
45
45 45 45 46 48 48 48 50 52
CHAPITRE 8 DISTILLATEUR
Schma dun distillateur A quoi sert un distillateur Principes de fonctionnement Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
53
53 53 54 54 55 56 57
CHAPITRE 9 DILUTEUR
Schma dun diluteur A quoi sert un diluteur Principes de fonctionnement
59
59 59 60
iv
Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
61 61 63 64
CHAPITRE 10 DISTRIBUTEUR
Schma et photographie dun distributeur A quoi sert un distributeur Principes de fonctionnement Conditions requises pour le fonctionnement de lappareil Guide de dpannage Dfinitions
65
65 65 67 67 68 68
CHAPITRE 11 SPECTROPHOTOMTRE
Photographies de spectrophotomtres A quoi sert un spectrophotomtre Principes de fonctionnement Elments du spectrophotomtre Conditions requises pour linstallation Entretien du spectrophotomtre Bonnes pratiques dutilisation du spectrophotomtre Guide de dpannage Dfinitions
69
69 69 69 72 73 73 75 77 79
CHAPITRE 12 AUTOCLAVE
Photographie dun autoclave A quoi sert un autoclave Principes de fonctionnement Utilisation de lautoclave Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Maintenance des lments spcialiss Guide de dpannage Dfinitions
81
81 81 82 84 87 88 90 91 92
CHAPITRE 13 ETUVE
Photographies dtuves A quoi sert une tuve Principes de fonctionnement Conditions requises pour linstallation Utilisation de ltuve Commandes de ltuve Contrle de qualit Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
93
93 93 93 94 94 95 96 96 97 98
CHAPITRE 14 INCUBATEURS
Photographies dincubateurs Principes de fonctionnement Commandes de lincubateur Conditions requises pour linstallation Entretien de routine et utilisation de lincubateur Guide de dpannage Dfinitions
99
99 99 101 101 101 103 104
TA B L E D E S M AT I R E S
CHAPITRE 15 MICROSCOPE
Photographies de microscopes A quoi sert un microscope Principes de fonctionnement Schma dun microscope Conditions requises pour linstallation Les problmes qui peuvent se poser avec les microscopes Entretien gnral du microscope Guide de dpannage Dfinitions
105
105 106 106 108 109 111 113 115 116
CHAPITRE 16 PIPETTES
Photographies et schma de pipettes A quoi sert une pipette Principes de fonctionnement Conditions requises pour lutilisation Utilisation de la pipette Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
119
119 120 120 120 121 122 125 126
CHAPITRE 17 AGITATEUR
CHAUFFANT
127
127 127 127 128 128 128 129 129
Photographie dun agitateur chauffant Principes de fonctionnement Commandes de lagitateur chauffant Conditions requises pour linstallation Utilisation de lagitateur chauffant Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
CHAPITRE 18 RFRIGRATEURS
ET CONGLATEURS
131
131 131 132 132 133 134 134 135 137 138 138 140 141
Rfrigrateurs et conglateurs Photographie dune enceinte rfrigre A quoi sert une enceinte rfrigre Principes de fonctionnement Conditions requises pour linstallation Circuit de contrle du rfrigrateur Utilisation du rfrigrateur Entretien de routine des rfrigrateurs Guide de dpannage Utilisation des conglateurs ultra-basse temprature Entretien de routine des conglateurs ultra-basse temprature Guide de dpannage Dfinitions
CHAPITRE 19 ANALYSEURS
DE CHIMIE CLINIQUE
143
143 144 144 144 145
Photographies danalyseurs de chimie A quoi servent les analyseurs de chimie Principes de fonctionnement Elments des analyseurs Conditions requises pour linstallation
vi
Utilisation de lanalyseur en chimie sche Utilisation de lanalyseur en chimie liquide Entretien courant des analyseurs de chimie Interventions hors routine et conduite tenir en cas de panne Guide de dpannage Dfinitions
145 146 146 147 148 148
CHAPITRE 20 COLORIMTRES
Photographies de colorimtres A quoi sert un colorimtre Principes de fonctionnement Elments du colorimtre Conditions requises pour linstallation Utilisation du colorimtre Utilisation de lhmoglobinomtre Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions
149
149 149 149 150 150 150 151 151 154 155
BIBLIOGRAPHIE
157
vii
TA B L E D E S F I G U RE S
Table des gures

Figure 1 Figure 2 Figure 3 Figure 4 Figure 5 Figure 6 Figure 7 Figure 8 Figure 9 Figure 10 Figure 11 Figure 12 Figure 13 Figure 14 Figure 15 Figure 16 Figure 17 Figure 18 Figure 19 Figure 20 Figure 21 Figure 22 Figure 23 Figure 24 Figure 25 Figure 26 Figure 27 Figure 28 Figure 29 Figure 30 Figure 31 Figure 32 Figure 33 Figure 34 Figure 35 Figure 36 Figure 37 Figure 38 Figure 39 Matriel utilis pour les tests ELISA Laveur ELISA Profils de puits Schma dun pH-mtre Types dlectrodes Circuit lectrique type pour le pH-mtre Balance ressort Balance curseur Balance danalyse Balance plateau suprieur Balance substitution Elments des balances lectroniques Principe de la force de compensation Classification des balances selon lexactitude Panneau de contrle dune balance danalyse Bain-marie Rsistances immersion et externes Commandes du bain-marie Enceinte de scurit biologique Le concept de force centrifuge Distillateur Schma dun diluteur Commandes du diluteur Seringue et doseur Distributeur Distributeur et accessoires Interaction de la lumire avec la matire Phnomne dabsorbance Elments du spectrophotomtre Rfraction de la lumire Grille de diffraction Circuit de vapeur dun autoclave Espace ncessaire autour de lautoclave Alimentation en air comprim Alimentation en vapeur Gnrateur de vapeur Tableau de commande lectronique de ltuve Circuit lectrique de ltuve Systmes de transfert de la chaleur utiliss dans les incubateurs 2 8 8 14 15 15 22 22 22 23 23 24 24 25 26 31 31 32 35 46 53 59 60 61 65 66 70 71 72 79 80 83 87 87 88 89 95 95 100
viii
Figure 40 Figure 41 Figure 42 Figure 43 Figure 44 Figure 45 Figure 46 Figure 47 Figure 48 Figure 49 Figure 50 Figure 51 Figure 52 Figure 53 Figure 54 Figure 55 Figure 56 Figure 57 Figure 58 Figure 59 Figure 60 Figure 61 Figure 62 Figure 63
Commandes de lincubateur Lentille convexe (convergente) Optique de la lentille convergente Schma dun microscope Coupe transversale dun microscope Tte binoculaire Systme dclairage Platine porte-objet (platine mcanique) Revolver porte-objectifs Corps du microscope Schma dune pipette Types de pipettes Etapes de lutilisation dune pipette Dmontage dune pipette Panneau de contrle dun agitateur chauffant Moteur bagues de dphasage Circuit de rfrigration Circuit de contrle du rfrigrateur Panneau de contrle dun rfrigrateur pour banque de sang Panneau de contrle dun conglateur ultra-basse temprature Diagramme simplifi de la photomtrie par rflectance sur bandelette ractive Photographie dune sphre dUlbricht et diagramme en coupe transversale Elments de base dun photomtre Commandes dun colorimtre portable
101 106 106 107 108 109 109 110 110 111 119 120 121 123 127 129 132 134 135 138 144 145 145 150
ix
REMERCIEMENTS
Remerciements
Le prsent manuel est une traduction franaise de la version rvise du Manual de mantenimiento para equipo de laboratorio (Organisation panamricaine de la Sant, 2005), traduit de lespagnol en anglais. Lors de la rvision, de nouveaux chapitres portant sur des appareils couramment utiliss dans certains laboratoires ont t ajouts et des mises jour ont t effectues pour permettre une utilisation de ce manuel lchelle mondiale. La traduction franaise a t ralise par Mme Annie Bertouille et rvise par Mme Mercedes Prez Gonzlez, sous la direction du Dr Gaby Vercauteren, Organisation mondiale de la Sant, Genve, Suisse. LOMS exprime sa gratitude aux personnes qui ont particip tous les niveaux llaboration du prsent manuel. Elle souhaite en particulier remercier de leur contribution le Dr Jorge Enrique Villamil, qui a rdig la premire dition du Manuel en 2005 (Manual de mantenimiento para equipo de laboratorio, ISBN 92 75 32590 1), ainsi que le Dr Jean-Marc Gabastou et M. Antonio Hernndez, rviseurs au dpartement Mdicaments essentiels, vaccins et technologies sanitaires de lOPS. LOMS souhaite galement remercier les fabricants qui ont autoris lutilisation de leurs images pour la prsente publication.
NOTE: Au moment de la publication du prsent manuel, la traduction officielle de la terminologie lie au systme de nomenclature GMDN (Global Medical Device Nomenclature) ntait pas disponible. Le projet de traduction men par la Commission Europenne est nanmoins en cours. La terminologie utilise dans ce manuel est base sur une traduction technique et peut donc diffrer de la traduction officielle. Cette dernire sera disponible sur le site www.who.int/diagnostics_laboratory ds quelle sera acheve.
Introduction
Le prsent manuel a t labor pour aider le personnel des laboratoires de sant. Il vise faire mieux connatre les exigences techniques concernant linstallation, lutilisation et lentretien des divers quipements qui jouent un rle majeur dans lexcution des tests de diagnostic. Il sadresse galement au personnel responsable de la direction technique, de lorganisation de la gestion de la qualit et de la maintenance technique. Etant donn la diversit des appareils en ce qui concerne lorigine, la marque et le modle, ce manuel prsente des recommandations dordre gnral. Les caractristiques spcifiques des divers appareils sont expliques en dtail dans les manuels dentretien et dinstallation fournis par les fabricants. Ces manuels seront rclams ou commands par les organismes et personnes chargs des achats de matriel technique suivant les procdures habituelles dacquisition, ou en sadressant directement aux fabricants. Le prsent manuel a t lorigine labor par lOrganisation Panamricaine de la Sant (OPS) afin dappuyer les programmes dassurance de la qualit que lOPS soutient dans les laboratoires rgionaux. Les versions anglaise et franaise sont des ditions rvises qui comprennent 20 groupes dappareils choisis de faon couvrir lventail des matriels les plus couramment utiliss lchelle mondiale dans les laboratoires de niveau technique simple intermdiaire. Du fait des diffrences de niveau de complexit technique, de marques et de modles, chaque chapitre a t labor en partant de lquipement de base et en y ajoutant des lments technologiques nouveaux le cas chant. On trouvera dans chaque chapitre les informations suivantes : Catgories dappareils, selon leur dnomination gnrique. Les autres appellations sont galement indiques. Photographies ou schmas explicatifs, ou les deux, pour identifier le type dappareil dont il sagit. Une brve explication des principales utilisations ou applications de lappareil au laboratoire. Une description succincte des principes de fonctionnement de lappareil, avec un dveloppement sur les principes ou les lois physico-chimiques, que le lecteur intress pourra (et devrait) tudier en dtail. Les conditions requises pour linstallation, surtout en ce qui concerne les raccordements lectriques et la ncessit dune installation et dun fonctionnement sans danger, avec mention des normes lectriques internationales. Les procdures dentretien de routine, classes selon leur frquence (entretien quotidien, hebdomadaire, mensuel, trimestriel, annuel ou occasionnel). Les procdures sont numrotes et prsentes selon leur squence dexcution (on trouvera les procdures spcifiques pour les divers appareils dans les manuels dutilisation fournis par les fabricants). Un guide de dpannage, avec les problmes les plus frquemment rencontrs selon le type dappareil, leur cause probable et les moyens dy remdier. Une liste de dfinitions simples de certains termes spcialiss utiliss dans le texte. Pour certains appareils, des dveloppements supplmentaires sur ltalonnage, le contrle de qualit et les diffrents modles avec leurs fonctions Toutes ces informations, jointes un usage correct et soigneux, aideront maintenir lquipement de laboratoire dans son tat optimal.
xi
Chapitre 1
Lecteur de microplaques
GMDN Code ECRI Code Dnomination 37036 16-979 Lecteur photomtrique pour microplaques
Le lecteur de microplaques, aussi appel lecteur photomtrique pour microplaques ou lecteur ELISA est un spectrophotomtre spcialis dans la lecture des rsultats des tests ELISA, une technique utilise pour dtecter la prsence danticorps ou dantignes spcifiques dans des chantillons. La technique repose sur la dtection dun antigne ou dun anticorps capturs sur une surface solide au moyen danticorps directs ou secondaires marqus, ce qui donne une raction dont le produit peut tre lu avec un spectrophotomtre. Le mot ELISA est lacronyme de EnzymeLinked Immunosorbent Assay , et dsigne un test bas sur une raction immunoenzymatique. Le prsent chapitre porte sur lutilisation des lecteurs de microplaques pour les tests ELISA. Pour des renseignements complmentaires sur les principes de fonctionnement et dentretien de ces appareils, voir le chapitre 11 sur le spectrophotomtre.
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT
Le lecteur de microplaques est un spectrophotomtre spcialis. Contrairement au spectrophotomtre classique qui permet la lecture sur un large ventail de longueurs donde, le lecteur de microplaques possde des filtres ou des grilles de diffraction qui limitent la gamme de longueurs donde celles utilises dans les tests ELISA, en gnral entre 400 et 750 nm (nanomtres). Certains lecteurs travaillent dans lultraviolet et effectuent des analyses entre 340 et 700 nm. Le systme optique adopt par de nombreux fabricants utilise des fibres optiques qui conduisent la lumire dans les puits des microplaques contenant les chantillons. Le faisceau lumineux qui traverse lchantillon a un diamtre de 1 3 mm. Un systme de dtection capte la lumire venant de lchantillon, amplifie le signal et dtermine labsorbance (ou densit optique) de lchantillon. Un systme de lecture convertit cette valeur en donnes permettant dinterprter les rsultats du test. Certains lecteurs de microplaques utilisent un systme lumineux double faisceau. Les chantillons tester sont dposs dans des plaques spcialement conues qui possdent un certain nombre de puits o la raction a lieu. Les plaques couramment utilises ont 8 colonnes et 12 ranges, soit un total de 96 puits. Il existe aussi des plaques ayant un plus grand nombre de puits. Pour certaines applications, la tendance consiste actuellement augmenter le nombre de puits (plaques 384 puits) pour rduire les quantits de ractifs et dchantillons utilises et augmenter la cadence de travail. Lemplacement des capteurs optiques du lecteur varie selon les fabricants : ils peuvent se trouver au-dessus de la plaque contenant les chantillons ou directement au-dessous des puits. Actuellement, les lecteurs de microplaques possdent des commandes rgules par microprocesseurs, des interfaces de connexion avec les systmes dinformation et des programmes de contrle des processus et de contrle de la qualit qui, avec laide dun ordinateur, permettent une automatisation complte des tests.
PHOTOGRAPHIE DUN LECTEUR DE MICROPLAQUES
A QUOI SERT UN LECTEUR DE MICROPLAQUES

Le lecteur de microplaques est utilis pour lire les rsultats des tests ELISA. Cette technique a des applications directes en immunologie et en srologie. Parmi ses autres applications figurent la confirmation de la prsence danticorps ou dantignes spcifiques dun agent infectieux, danticorps prsents la suite dune vaccination ou dauto-anticorps, par exemple dans la polyarthrite rhumatode.
Photo avec laimable autorisation de BioRad Laboratories
CHAPITRE 1 LECTEUR DE MICROPLAQUES
Matriel ncessaire pour les tests ELISA

Pour lexcution de la technique ELISA, il faut : 1. Un lecteur de microplaques. 2. Un laveur de microplaques (chapitre 2). 3. Un systme de distribution de liquides (on peut utiliser des pipettes multicanaux). 4. Un incubateur pour incuber les plaques.
Etapes biochimiques de la technique ELISA1

Les tapes de la technique ELISA du point de vue biochimique sont les suivantes : 1. Les puits de la microplaque sont recouverts dune couche danticorps ou dantignes. 2. Les chantillons, les tmoins (ou contrles) et les talons sont ajouts dans les puits et incubs des tempratures allant de la temprature ambiante 37 C pendant une dure dtermine, selon les caractristiques du test. Pendant lincubation, lantigne prsent dans lchantillon se lie lanticorps dpos sur la plaque, ou lanticorps prsent dans lchantillon se lie lantigne dpos sur la plaque, selon ce qui se trouve dans lchantillon et en quelle quantit. 3. Aprs lincubation, les antignes ou les anticorps non lis sont lavs et limins de la plaque au moyen du laveur de microplaques et dun tampon de lavage appropri. 4. On ajoute ensuite un anticorps secondaire, appel le conjugu. Cet anticorps porte une enzyme qui ragira avec un substrat pour donner un changement de coloration lors dune tape ultrieure. 5. Alors commence une deuxime tape dincubation pendant laquelle le conjugu se lie au complexe antigneanticorps dans les puits. 6. Aprs lincubation, on effectue un nouveau cycle de lavage pour liminer le conjugu non li. 7. On ajoute alors un substrat. Lenzyme ragit avec le substrat et provoque un changement de coloration de la solution. Ce changement indiquera quelle quantit de complexe antigne-anticorps est prsente la fin du test. 8. A la fin de la priode dincubation, on ajoute un ractif pour stopper la raction enzyme-substrat et le changement de coloration. Ce ractif est en gnral un acide dilu. 9. Enfin, on lit la plaque laide du lecteur de microplaques. Les valeurs obtenues sont utilises pour dterminer la quantit exacte ou la prsence dantignes ou danticorps dans lchantillon.
La figure 1 montre comment ces lments sont relis entre eux.
Etapes mcaniques de la technique ELISA Utilisation du matriel

Lorsquon ralise un test ELISA, on procde en gnral comme suit : 1. Un premier lavage de la plaque peut tre ralis au moyen du laveur de microplaques. 2. A laide dun distributeur ou de pipettes multicanaux, on remplit les puits avec la solution prpare pour le test. 3. On dpose la plaque dans lincubateur o, temprature contrle, une srie de ractions se produit. Les tapes 1, 2 et 3 peuvent tre rptes plusieurs fois selon le test, jusqu ce que les ractifs ajouts aient fini dagir. Enfin, quand toutes les tapes dincubation sont acheves, on transfre la plaque dans le lecteur de microplaques. La plaque est lue et on peut en dduire un diagnostic.
Figure 1. Matriel utilis pour les tests ELISA
Laveur de plaque ELISA
Note : Certains des puits sont utiliss pour les talons et les tmoins. Les talons permettent de dfinir les valeurs seuils. Les talons et les tmoins contiennent des quantits connues et t sont utiliss pour mesurer la bonne excution du test en valuant les donnes obtenues par rapport aux concentrations connues prsentes dans chaque tmoin. La procdure dcrite cidessus est valable en gnral, mais il existe de nombreux tests ELISA prsentant des variantes spcifiques.
Systme de distribution
Incubateur
Lecteur ELISA
Ordinateur
Pour des explications plus dtailles, se reporter la littrature spcialise.
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION

Pour que le lecteur de microplaques fonctionne correctement, il faut respecter les points suivants : 1. Un environnement propre, sans poussire. 2. Une table de travail stable, lcart des appareils qui produisent des vibrations (centrifugeuses, agitateurs). Elle doit tre de taille suffisante pour quil reste de la place ct du lecteur de microplaques. Le matriel complmentaire ncessaire pour excuter le test comme dcrit cidessus comprend : laveur de microplaques, incubateur, distributeur, et ordinateur avec ses priphriques. 3. Une alimentation lectrique rpondant aux normes nationales. Par exemple, dans les pays dAmrique, le rseau est en gnral aliment en 110 V/60 Hz alors quailleurs dans le monde il est aliment en 220-240 V/5060 Hz.
5. Vrifier que le lecteur est talonn en procdant colonne par colonne. Prendre une plaque propre et vide et faire une lecture. Sil ny a pas de diffrence entre les lectures moyennes de la premire la dernire colonne, on peut considrer lappareil comme talonn.
ENTRETIEN DE ROUTINE
Les procdures dentretien dcrites ci-aprs concernent uniquement le lecteur de microplaques. Lentretien du laveur de microplaques est dcrit au chapitre 2.
Entretien courant Frquence : une fois par jour

1. Vrifier que les capteurs optiques de tous les canaux sont propres. Sils sont sales, nettoyer la fentre des metteurs de lumire et des capteurs avec une petite brosse. 2. Sassurer encore une fois que le systme metteur de lumire est propre. 3. Vrifier que ltalonnage du lecteur est correct. Au dbut de la journe de travail, laisser le lecteur chauffer pendant 30 minutes. Ensuite, faire une lecture blanc puis lire une plaque entire de substrat. Les valeurs obtenues doivent tre identiques. Si non, faire pivoter la plaque et rpter la lecture pour dterminer si la diffrence vient de la plaque ou du lecteur. 4. Examiner le systme de dplacement automatique du tiroir porte-plaque. Le dplacement doit tre constant et sans -coups.
Etalonnage du lecteur de microplaques

Ltalonnage dun lecteur de microplaques est une opration spcialise qui doit tre ralise par un technicien ou un ingnieur qualifis en suivant les instructions donnes par le fabricant. Pour procder ltalonnage, il est ncessaire de disposer dune srie de filtres gris monts sur une plaque de mmes dimensions que les plaques utilises pour les analyses. Les fabricants fournissent ces plaques dtalonnage pour toutes les longueurs donde utilises par le lecteur. Les plaques dtalonnage sont livres avec au moins trois valeurs prtablies de la densit optique correspondant lintervalle de mesure courant : une valeur faible, une valeur moyenne et une valeur leve. Pour raliser ltalonnage, procder comme suit : 1. Mettre la plaque dtalonnage dans lappareil. 2. Effectuer une lecture complte avec la plaque dtalonnage. Vrifier sil y a des diffrences de lecture dun puits lautre. Si cest le cas, faire pivoter la plaque de 180 et refaire la lecture pour voir si les diffrences sont dues la plaque elle-mme. En gnral, on admet que lappareil na pas besoin dun talonnage plus pouss si les rsultats correspondent aux valeurs attendues pour deux longueurs donde. 3. Vrifier si le lecteur ncessite un talonnage. Si oui, leffectuer en suivant la procdure indique par le fabricant, en vrifiant que la linarit des lectures se maintient aussi rigoureusement que possible. 4. Si lappareil nest pas livr avec une plaque dtalonnage, le contrler en dposant une solution colore dans les puits dune plaque et en effectuant immdiatement une lecture complte. Puis faire pivoter la plaque de 180 et refaire la lecture. Si les deux sries de lectures donnent des rsultats moyens identiques pour chaque range, le lecteur est talonn.
Entretien prventif Frquence : une fois par trimestre

1. Vrifier la stabilit de la lampe. Utiliser la plaque dtalonnage, et faire des lectures avec la mme plaque intervalles de 30 minutes. Comparer les rsultats. Ils ne doivent pas prsenter de diffrences. 2. Nettoyer le systme optique du dtecteur et le systme metteur de lumire. 3. Nettoyer le tiroir porte-plaque. 4. Vrifier lalignement de chaque puits avec les systmes metteurs et dtecteurs de lumire.
CHAPITRE 1 LECTEUR DE MICROPLAQUES
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME
Le lecteur donne une valeur qui na pas de sens. Le lecteur donne des valeurs diffrentes dune range lautre.
CAUSE PROBABLE
SOLUTION
La lampe du systme metteur de lumire est hors service. Remplacer la lampe par une autre ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine. Les capteurs optiques sont sales. Les lentilles ou dautres parties du systme metteur de lumire sont sales. Un ou plusieurs canaux ne sont pas talonns. Ractifs prims et/ou prpars de faon incorrecte. Contamination par dautres chantillons. Filtre de longueur donde inadapt. Lavage insuffisant ou inefficace. Incubation trs longue ou temprature trop leve. Dilution incorrecte de lchantillon. Un ractif a t omis. Nettoyer les capteurs. Nettoyer les lentilles du systme metteur de lumire. Vrifier ltalonnage de chaque canal. Vrifier si la TMB est incolore et si la prparation est correcte. Rpter le test en vrifiant les tiquettes, le laveur de plaque et la faon dont la pipette a t utilise. Vrifier la longueur donde recommande pour le test. Corriger si elle est incorrecte. Vrifier la mthode de lavage. Utiliser un test appropri de contrle de la qualit. Vrifier la dure et la temprature dincubation. Vrifier la procdure de dilution de lchantillon. Vrifier que le test a t ralis suivant la procdure tablie. Vrifier la dure et la temprature dincubation. Laisser la temprature des ractifs squilibrer avec la temprature ambiante. Ajuster la procdure de lavage en se conformant aux instructions du fabricant. Vrifier la longueur donde slectionne. Utiliser la longueur donde recommande pour le test. Vrifier les ractifs utiliss. Tester les dilutions. Vrifier que le test a t ralis suivant la procdure tablie. Prparer une nouvelle plaque et refaire le test. Vrifier le type de plaque utilis. Prparer une nouvelle plaque et refaire le test. Changer la faon de laver la plaque. Vrifier le positionnement de la plaque. Refaire la lecture. Vrifier que le dessous de la plaque est propre sous les puits. Vrifier que le tampon de lavage est compltement limin. Vrifier que les comprims se dissolvent correctement. Contrler lintgrit et la manipulation des comprims de substrat. Vrifier que la rpartition des puits est correcte.
Le lecteur donne des valeurs de labsorbance trop leves.
Le lecteur donne des valeurs de labsorbance trop faibles.
Incubation trs courte ou temprature trop basse. Les ractifs ntaient pas temprature ambiante. Lavage excessif de la plaque. Filtre de longueur donde inadapt. Ractifs prims ou prpars de faon incorrecte. Un ractif a t omis. La plaque prsente des rayures au fond des puits. Plaque mal choisie ou sale. Les puits de la plaque ont sch. La plaque est mal installe dans le lecteur. Humidit ou traces de doigts sur le dessous de la plaque. Il reste du tampon de lavage dans les puits avant dajouter le substrat. Les comprims de substrat ne se dissolvent pas compltement. Le comprim de substrat a t contamin par de lhumidit, des pinces mtalliques ou nest pas entier. La position du puits de mesure blanc a pu changer et une quantit incorrecte a alors t soustraite de chaque lecture.
Le lecteur prsente une variation imprvue des lectures de densit optique. Le lecteur donne des valeurs augmentant ou diminuant progressivement dune colonne lautre. Les lectures de la densit optique sont trs basses par rapport aux critres dvaluation optique de loprateur.
La lampe du lecteur est instable. Etalonnage incorrect du moteur dentranement de la plaque. La lecture a t faite une longueur donde diffrente de celle qui est prvue pour le test.
Remplacer la lampe par une autre ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine. Etalonner lentranement de la plaque de faon qu chaque arrt les puits restent exactement aligns avec le systme metteur de lumire. Vrifier la longueur donde utilise pour effectuer la lecture. Si cest l le problme, rgler la longueur donde et refaire la lecture. Vrifier que le filtre de longueur donde choisi est bien celui qui est recommand.
Faible reproductibilit.
Homognit de lchantillon. Pipetage incorrect. Lecteur non talonn. Lecture effectue sans attendre un prchauffage suffisant de lappareil.
Mlanger les ractifs avant emploi. Laisser leur temprature squilibrer avec la temprature ambiante. Vrifier que les embouts des pipettes sont changs entre les chantillons et que tout liquide restant est limin. Contrler ltalonnage. Utiliser une srie approprie pour le contrle de qualit. Attendre que le lecteur ait atteint sa temprature de fonctionnement. Vrifier que la TMB est incolore et que sa prparation est correcte. Bien vider le tampon de lavage. Vrifier que le remplissage des puits et laspiration sont uniformes pendant le lavage. Vrifier les codes slectionns. Confirmer les taux de transfert slectionns. Vrifier la configuration de linterface. La configuration doit respecter les paramtres dfinis par le fabricant. Appeler le service technique.
Valeur lev de labsorbance obtenue avec le blanc.
Substrat contamin. Lavage insuffisant ou inefficace.
Les donnes ne sont pas transmises du lecteur au microprocesseur.
Le lecteur et le microprocesseur ont des codes diffrents. Taux de transfert de linformation (en bauds) diffrents. Configuration incorrecte de linterface de communication (rception/transmission).
Faisceau lumineux mal align.
Le lecteur a t dplac sans que les prcautions ncessaires aient t prises.
La source lumineuse (lampe) a t change et linstallation Vrifier linstallation et lalignement de la lampe. ou lalignement de la nouvelle lampe nont pas t faits correctement. Identification incorrecte de lchantillon. La plaque na pas t charge correctement. Identification incorrecte de lchantillon enregistr dans le lecteur. Lordinateur nindique pas les codes derreur. Le programme qui contrle lactivation des alarmes et des avertissements a un dfaut ou nest pas valid par le fabricant. Divers composants du systme ne fonctionnent pas, par exemple le systme de dtection du niveau de liquide. Vrifier la procdure didentification des chantillons. Refaire la lecture en tenant compte des corrections. Vrifier la procdure didentification des chantillons. Refaire la lecture en tenant compte des corrections. Appeler le service technique.
Le lecteur ne dtecte pas les erreurs.
Appeler le service technique.
DFINITIONS
Chemiluminescence. Emission de lumire ou dune luminescence rsultant directement dune raction chimique temprature ambiante. ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Technique biochimique principalement utilise en immunologie pour dtecter la prsence dun anticorps ou dun antigne dans un chantillon. Enzyme. Protine qui acclre (catalyse) les ractions chimiques. Fluorophore. Molcule qui absorbe la lumire une longueur donde dtermine et qui la rmet une longueur donde plus leve. Laveur de microplaques. Appareil utilis pour laver les plaques divers stades des tests ELISA afin dliminer les rsidus de composants non lis aprs une raction. Les laveurs de microplaques utilisent des tampons de lavage spciaux. Lecteur de microplaques. Nom donn aux spectrophotomtres capables de lire des microplaques. Microplaque ELISA. Consommable standardis pour lexcution des tests ELISA. Les plaques comportent en gnral 96 puits classiquement disposs en 8 ranges et 12 colonnes. Il existe aussi des microplaques ELISA 384 puits et jusqu 1536 puits pour les tests spcialiss raliser cadence leve dans les centres ayant une forte demande TMB. Ttramthylbenzidine, substrat pour la peroxydase de raifort (enzyme).
Chapitre 2
Laveur de microplaques
GMDN Code ECRI Code Dnomination 17489 17-489 Laveur de microplaques
Le laveur de microplaques, aussi appel laveur de microplaques ELISA ou laveur ELISA , est conu pour effectuer les oprations de lavage requises par la technique ELISA. Il effectue le lavage des puits des microplaques ELISA divers stades du test.
Le laveur de microplaques est conu pour effectuer les oprations de lavage lors des tests ELISA. Il possde au minimum les sous-systmes suivants, qui peuvent diffrer selon les fabricants. Sous-systme de contrle. En gnral, le laveur ELISA est contrl par des microprocesseurs qui permettent de programmer et de contrler les oprations, par exemple le nombre de cycles de lavage2 (15), les dures prvues, la pression de distribution et daspiration, le format des plaques (96384 puits), le rglage de la fonction daspiration selon le type de puits3 ( fond plat, fond en V ou fond en U), ou encore des bandelettes, les volumes distribus et aspirs, les cycles de trempage et dagitation, etc. Sous-systme de distribution. En gnral, il comporte un rservoir pour la solution de lavage, une ou plusieurs pompes, habituellement une seringue dplacement positif et une tte de distribution qui rpartit la solution de lavage dans les diffrents puits au moyen daiguilles. La tte de distribution est en gnral livre avec huit paires daiguilles pour raliser les oprations de lavage et dextraction dans tous les puits dune mme range simultanment (les sous-systmes de distribution et dextraction se rejoignent au niveau de la tte du laveur). Il existe des modles douze paires daiguilles et dautres qui effectuent le lavage dans tous les puits simultanment. Certains laveurs offrent la possibilit de travailler avec diffrents types de solutions de lavage, en changeant de solution selon le programme enregistr par loprateur.
PHOTOGRAPHIE DUN LAVEUR DE MICROPLAQUES
A QUOI SERT UN LAVEUR DE MICROPLAQUES

Le laveur de microplaques est conu pour distribuer de faon contrle les tampons de lavage ncessaires lexcution des tests ELISA. De mme, lappareil enlve dans chaque puits les substances restant en excs aprs la raction. Selon le test ralis, le laveur peut intervenir de une quatre fois, avec distribution du tampon de lavage, agitation et aspiration des ractifs non lis1 aprs la dure programme, jusqu lachvement des cycles de lavage. Lappareil possde deux rservoirs, lun pour le tampon de lavage et lautre pour les dchets gnrs pendant le processus de lavage.
Photo avec laimable autorisation de BioRad Laboratories
Voir une explication succincte de la technique ELISA dans le chapitre 1, Lecteur de microplaques. Le nombre exact de lavages ncessaires dpend du test utilis. Ce nombre est spcifi sur le mode demploi fourni par le fabricant du test. Si le puits est fond plat, laiguille daspiration est place trs prs dun des bords du puits ; sil sagit dun puits fond en U ou en V, laiguille est centre.
C H A P I T R E 2 L AV E U R D E M I C R O P L AQ U E S
Sous-systme dextraction ou daspiration. Ce soussystme ncessite un dispositif pour faire le vide et un systme de stockage des liquides et des dchets extraits des puits. Le vide peut tre ralis au moyen de pompes externes et internes. Lextraction se fait laide dune srie daiguilles montes sur la tte du laveur. Le nombre daiguilles varie de un trois selon le modle utilis. Si le laveur na quune aiguille, le lavage et lextraction sont raliss avec cette mme aiguille. Sil y a deux aiguilles, lune est utilise pour dlivrer la solution de lavage et lautre pour lextraire. Les modles trois aiguilles utilisent la premire pour dlivrer la solution de lavage, la deuxime pour lextraire et la troisime pour contrler et enlever tout excs de liquide restant dans le puits. En gnral, laiguille dextraction est plus longue que laiguille de distribution, ce qui lui permet davancer verticalement jusqu une distance de 0,3 0,5 mm du fond du puits. Sous-systme de dplacement. Il se compose dun mcanisme qui dplace horizontalement la tte de distribution et dextraction de faon quelle atteigne tous les puits de la microplaque ELISA. Aprs chaque dplacement horizontal jusqu la range de puits suivante, la tte effectue un dplacement vertical pour distribuer ou extraire la solution de lavage. Il existe des laveurs qui excutent ces oprations simultanment.
Les sous-systmes dcrits ci-dessus sont reprsents sur la figure 2. La figure 3 montre les diffrents types de puits les plus couramment trouvs sur les microplaques. Chaque type de puits convient pour un type particulier de test.
Procdure de lavage
Le lavage de la microplaque constitue lune des tapes de la technique ELISA. On utilise pour cela des solutions spciales. Parmi les solutions les plus couramment employes figure la solution tamponne au phosphate ou PBS. Elle est stable pendant 2 mois si on la conserve 4 C. On estime quil faut 1 3 litres de solution pour laver une microplaque, raison de 300 l par puits et par cycle de lavage. Le lavage peut tre fait manuellement, mais il est prfrable dutiliser un laveur automatis pour obtenir un meilleur rendement et pour rduire au minimum la manipulation de produits potentiellement contamins. Il existe diverses procdures de lavage selon les modles de laveurs : Aspiration du haut vers le bas. Lorsque la phase daspiration commence, les aiguilles se dplacent verticalement et laspiration commence ds quelles entrent en contact avec le liquide. Laspiration se poursuit jusqu ce que les aiguilles atteignent leur position la plus basse, prs du fond des puits. Elles sont alors stoppes pour viter daspirer lair qui se dplace le long des parois internes des puits. Ce type daspiration empche le courant dair de desscher les protines lies la surface des puits.
Figure 2. Laveur ELISA

Pompe dextraction
Tte de distribution et dextraction Rservoir dchets Dplacement horizontal et vertical Pompes dalimentation Solution de lavage Plaque ELISA Puits
Pompes dplacement positif
Figure 3. Profils de puits
Fond plat
Fond en U
Fond en V
Lavage facile
Distribution et aspiration simultanes. Dans certains

types de laveurs, les systmes de lavage et daspiration fonctionnent simultanment ; il se produit une turbulence contrle lintrieur du puits qui limine les substances qui ne se sont pas lies pendant les phases dincubation. Aspiration depuis le fond des puits. Dans ce systme, le cycle daspiration du liquide contenu dans les puits, en gnral de dure contrle, commence aprs positionnement de laiguille prs du fond des puits. Ce systme peut aspirer de lair en cas de diffrence de niveau de remplissage des rservoirs.
Vrication de la procdure de lavage

Pour vrifier que la procdure de lavage est excute conformment aux spcifications des techniques ELISA, les fabricants de tests ELISA ont labor des contrles effectuer rgulirement. Lun de ces contrles1 est bas sur lutilisation de la peroxydase, ractif distribu laide dune pipette dans les puits dune microplaque pour lecture 405, 450 et 492 nm. Les puits sont immdiatement lavs et on ajoute un substrat incolore (TMB/H2O2 ttramthylbenzidine/peroxyde dhydrogne). Tout conjugu restant hydrolysera lenzyme et le chromogne virera au bleu. Aprs larrt de la raction par addition dun acide, la TMB virera nouveau au jaune. Lintensit de la coloration rsultante est directement lie lefficacit du processus de lavage.
Etalonnage du laveur
Le laveur de microplaques joue un rle dterminant dans la bonne excution des tests ELISA. On trouvera ci-dessous une description des rglages ncessaires pour un fonctionnement efficace de lappareil :

Pour que le laveur de microplaques fonctionne correctement, il faut respecter les points suivants : 1. Un environnement propre, sans poussire. 2. Une table de travail stable, lcart des appareils qui produisent des vibrations (centrifugeuses, agitateurs). Elle doit tre de taille suffisante pour quil reste de la place ct du laveur de microplaques pour le matriel complmentaire : lecteur, incubateur, distributeur, et ordinateur avec ses priphriques. 3. Une prise de courant en bon tat avec raccordement la terre, et une alimentation lectrique rpondant aux normes nationales ou celles du laboratoire. Par exemple, dans les pays dAmrique, le rseau est en gnral aliment en 110 V/60 Hz alors quailleurs dans le monde il est aliment en 220-240 V/50-60 Hz.
Positionnement des aiguilles (tte de distribution et daspiration. Le positionnement horizontal et vertical des
aiguilles par rapport aux puits doit tre vrifi avec soin. Si la plaque a des puits fond plat, il faut vrifier que laiguille de distribution se place tout prs des bords du puits. Avec des puits fond en U ou en V, laiguille doit tre place au centre du puits ; lors du dplacement vertical, il faut maintenir une distance habituellement comprise entre 0,3 et 0,5 mm entre la pointe de laiguille et le fond. Il ne faut jamais laisser les aiguilles toucher le fond des puits, afin dviter des interfrences mcaniques avec la pointe de laiguille pendant laspiration. Dure de laspiration. Il faut rgler la dure de laspiration de faon ce que le film de solution qui adhre aux parois du puits puisse scouler vers le fond. Eviter des temps dattente trop longs afin que le revtement des puits ne sche pas. Vrifier que les aiguilles du systme daspiration sont propres (que rien ne les obstrue). Volume dlivr. Vrifier que le volume dlivr est le plus proche possible de la capacit maximale des puits ; vrifier que tous les puits sont remplis uniformment (au mme niveau). Vrifier que les aiguilles de distribution sont propres (que rien ne les obstrue). Vide. Le systme daspiration doit tre correctement rgl. Un vide trop pouss peut fausser le test. En effet, les puits pourraient scher, ce qui affaiblirait considrablement lactivit enzymatique et fausserait compltement le rsultat du test. La plupart des laveurs fonctionnent avec un vide compris entre 60 et 70 % de la pression atmosphrique. Sur certains modles, le vide est produit par une pompe externe livre comme accessoire. Son fonctionnement est contrl par le laveur, ce qui fait quelle ne fonctionne que lorsque cest ncessaire.
Les procdures dentretien dcrites ci-aprs concernent uniquement le laveur de microplaques. Lentretien du lecteur de microplaques est dcrit au chapitre 1.
Entretien courant Frquence : une fois par jour

1. 2. 3. 4. Vrifier le volume dlivr. Tester luniformit du remplissage. Vrifier lefficacit du sous-systme daspiration. Vrifier la propret des aiguilles de distribution et dextraction. 5. Nettoyer le laveur leau distille aprs emploi, pour liminer les restes de sels dans les canaux des soussystmes de distribution et dextraction. Les aiguilles doivent tre entirement immerges dans leau distille. 6. Vrifier que le corps du laveur a t nettoy. Si ncessaire, nettoyer les parties externes avec un chiffon imbib de dtergent doux.
Procdure labore par PANBIO, ELISA Check Plus, Cat. N E-ECP01T.
C H A P I T R E 2 L AV E U R D E M I C R O P L A Q U E S
Entretien prventif Frquence : une fois par trimestre

1. Dmonter et nettoyer les canaux et les raccords. Vrifier quils sont en bon tat. Sils prsentent des fuites ou des traces de corrosion, les rparer ou les remplacer. 2. Vrifier lintgrit des lments mcaniques. Les lubrifier selon les instructions du fabricant. 3. Contrler le rglage de chacun des sous-systmes. Les talonner selon les recommandations du fabricant. 4. Vrifier lintgrit des cbles et raccords lectriques. 5. Nettoyer le laveur leau distille aprs emploi pour liminer les restes de sels dans les canaux des sous-systmes de distribution et dextraction. 6. Vrifier que le fusible est en bon tat et que ses contacts sont propres. Note : Lentretien du systme de contrle doit tre effectu par un technicien qualifi. Si ncessaire, appeler le fabricant ou son reprsentant.
10
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME A la fin du lavage, il reste de la solution dans les puits. CAUSE PROBABLE Le systme dextraction est dfectueux. Les tuyaux du systme de vide sont dun diamtre diffrent de celui qui est recommand. Le tuyau daspiration est obstru. Le rservoir dchets est plein. Le filtre du systme daspiration est humide ou bouch. Les pointes des aiguilles ne sont pas places correctement et natteignent pas le fond des puits. SOLUTION Vrifier si le systme de vide fonctionne la pression approprie. Vrifier que le diamtre des canaux correspond aux recommandations du fabricant. Vrifier que les tuyaux daspiration sont propres. Vrifier le niveau de remplissage du rservoir dchets. Vrifier ltat du filtre du systme daspiration. Examiner le positionnement des pointes daiguilles.
Une microplaque dun type diffrent est utilise pour Vrifier le type de plaque utiliser pour le test. le test. Le laveur na pas t suffisamment purg. Vrifier la procdure de purge. Loprateur na pas suivi correctement les instructions Examiner la procdure recommande par le du fabricant. fabricant. Faire les ajustements ncessaires. La plaque mise dans le laveur nest pas correctement aligne. Le cycle de lavage ne seffectue pas correctement. Le rservoir de solution de lavage est vide. Le laveur na pas t suffisamment purg au dbut du cycle de travail. Le volume de solution de lavage dlivrer a t incorrectement programm. La plaque a t mise de faon incorrecte dans le laveur. Le programme de lavage a t incorrectement slectionn. Les plaques utilises sont diffrentes de celles qui sont recommandes par le fabricant. Le niveau de liquide dans les puits est insuffisant. Le tuyau dalimentation en solution de lavage na pas Vrifier les spcifications du fabricant. Faire les le diamtre ou lpaisseur spcifis par le fabricant. modifications ncessaires. La pression est insuffisante pour dlivrer la quantit correcte de solution de lavage. Des moisissures et des bactries se dveloppent dans Le systme nest pas souvent utilis. le rservoir de solution de lavage. La procdure adquate (dsinfection) nest pas applique. Les tuyaux et raccords ne sont pas changs la frquence requise. La solution de lavage a t contamine. Vrifier que le systme de distribution et les canaux dalimentation ne sont pas obstrus. Vrifier les procdures appliquer pour prvenir le dveloppement de moisissures et de bactries. Vrifier les procdures appliquer pour prvenir le dveloppement de moisissures et de bactries. Vrifier la frquence de remplacement indique par le fabricant et/ou le service technique. Vrifier les procdures appliques pour prparer et utiliser la solution de lavage afin de dterminer la cause de la contamination et de lliminer. Vrifier les dates prvues pour effectuer lentretien. Informer les responsables. Vrifier le positionnement de la plaque dans le laveur. Examiner le rservoir de solution de lavage. Complter le niveau. Le nettoyer correctement pour uniformiser lhumidit dans chaque partie et liminer les bulles dair. Vrifier le volume requis pour chaque type de test et chaque plaque. Vrifier linstallation correcte de la plaque dans le laveur. Vrifier le programme de lavage recommand pour chaque type de plaque. Vrifier que les plaques utilises sont entirement compatibles avec le laveur.
Lentretien na pas t fait selon le plan.
11
C H A P I T R E 2 L AV E U R D E M I C R O P L A Q U E S
DFINITIONS
PBS. Lune des solutions utilises pour effectuer les oprations de lavage dans les tests ELISA. PBS est labrviation de Phosphate Buffer Solution (solution tamponne au phosphate). Elle se compose de : NaCl, KCl, NaHPO4.2H2O et KH2SO4. Les fabricants fournissent des fiches techniques qui donnent les proportions et les instructions pour prparer le PBS. En gnral, on mlange une partie de PBS concentr et 19 parties deau dsionise. Plate (ELISA). Consommable de dimensions standard, destin contenir les chantillons et les ractifs utiliss dans la technique ELISA. Les plaques ont en gnral 96, 384 ou 1536 puits et sont ralises en matire plastique, comme le polystyrne et le polypropylne. Il existe des plaques spcialement traites pour faciliter lexcution des tests. Pompe dplacement positif. Pompe rgule par un piston se dplaant dans un cylindre. Son mcanisme est similaire celui dune seringue. Elle est quipe dune srie de valves pour contrler le dbit entrant et sortant. Tampon. Solution contenant soit un acide faible et son sel, soit une base faible et son sel, ce qui la rend rsistante aux variations du pH une temprature donne. TMB/H2O2. (Ttramthylbenzidine/peroxyde dhydrogne). Ractif utilis pour vrifier la qualit du lavage des puits dans les tests ELISA.
12
Chapitre 3
pH mtre
Code GMDN Code ECRI Dnomination 15164 15-164 pH mtre
Le pH-mtre est un appareil qui dtermine la concentration dions hydrogne (H+) dans une solution. Sil est soigneusement utilis et talonn, il permet de mesurer lacidit dune solution aqueuse. Certains pH-mtres sont aussi appels testeurs de pH.
PHOTOGRAPHIE ET LMENTS DUN PH-MTRE
A QUOI SERT UN PH-MTRE

Le pH-mtre sutilise couramment dans tous les domaines de la science o interviennent des solutions aqueuses. On lutilise ainsi en agriculture, dans le traitement et la purification des eaux, dans des processus industriels comme la ptrochimie, la fabrication du papier, lindustrie alimentaire, lindustrie pharmaceutique, dans la recherche et le dveloppement, la mtallurgie, etc. Au laboratoire de sant, on lutilise pour le contrle des milieux de culture et la mesure de lacidit ou de lalcalinit des bouillons nutritifs et des tampons. Dans les laboratoires spcialiss, on utilise des appareils de diagnostic quips de micro-lectrodes pour mesurer le pH des constituants liquides du sang. La mesure du pH plasmatique permet dvaluer ltat de sant du patient. Sa valeur est normalement comprise entre 7,35 et 7,45. Elle reflte le mtabolisme, qui comporte une multitude de ractions dans lesquelles acides et bases se trouvent normalement lquilibre. Les acides librent en permanence des ions hydrogne (H+) et lorganisme neutralise ou quilibre cette acidit en librant des ions bicarbonate (HCO3-). Lquilibre acido-basique est assur par les reins (organes dans lesquels toute substance prsente en excs est limine). Le pH plasmatique est lun des paramtres qui se modifient sous leffet de facteurs tels que lge ou ltat de sant du patient. Le tableau 1 prsente les valeurs caractristiques du pH de certains liquides biologiques.
3
1 Bras porte-lectrode et lectrode 2. Panneau de contrle avec touches de rglage de la temprature, de slection du mode de fonctionnement (veille/mV/pH) et dtalonnage 3. Ecran affichage numrique
Le pH-mtre mesure la concentration dions hydrogne (H+) au moyen dune lectrode sensible aux ions. En thorie, cette lectrode devrait rpondre uniquement en prsence dun certain type dion. Mais dans la pratique, il existe toujours des interactions ou des interfrences avec les autres types dions prsents dans la solution. Llectrode de mesure du pH (lectrode pH) est en gnral une lectrode combine, dans laquelle une lectrode de rfrence et une lectrode interne en verre sont intgres dans une mme sonde. La partie infrieure de la sonde se compose dune ampoule de verre mince contenant la pointe de llectrode interne. Le corps de la sonde contient une solution sature de chlorure de potassium (KCl) et une solution 0,1 M dacide chlorhydrique (HCl). Lextrmit correspondant
Valeur du pH de certains liquides biologiques

Liquide Bile Salive Urine Suc gastrique Sang Valeur du pH 7,8 8,6 6,4 6,8 5,5 7,0 1,5 1,8 7,35 7,45
13
Photo avec laimable autorisation de Consort
CHAPITRE 3 PH-MTRE
la cathode de llectrode de rfrence se trouve dans le corps de la sonde. Lanode se trouve lextrieur de la partie infrieure du tube interne. Llectrode de rfrence est en gnral ralise dans le mme type de matriau que llectrode interne. Les deux tubes, interne et externe, contiennent une solution de rfrence. Seul le tube externe est en contact avec la solution dont on mesure le pH par une membrane poreuse agissant comme pont salin. Ce dispositif se comporte comme une cellule galvanise. Llectrode de rfrence est le tube interne de la sonde du pH-mtre, qui ne peut pas perdre dions par interaction avec le milieu environnant. Elle reste donc stable (et invariable) pendant la mesure. Le tube externe de la sonde contient le milieu qui peut se mlanger au liquide environnant. Ce tube doit par consquent tre rempli intervalles rguliers avec une solution de chlorure de potassium (KCl) afin de restaurer la capacit de llectrode qui sans cela serait inhibe par la perte dions et lvaporation. Lampoule de verre la partie infrieure de llectrode du pH-mtre agit comme lment de mesure et est recouverte dun gel hydrat sur ses deux faces, interne et externe. Des cations sodium (Na+) sont diffuss dans la couche externe de gel hydrat et dans la solution, tandis que les ions hydrogne (H+) sont diffuss dans le gel. Ce dernier assure la slectivit ionique de llectrode de mesure : les ions hydrogne (H+) ne peuvent pas traverser la membrane en verre de llectrode ; les ions sodium (Na+) la traversent et provoquent une modification du niveau dnergie (diffrence de potentiel), que mesure le pH-mtre. On trouvera une explication succincte de la thorie du fonctionnement des lectrodes dans lappendice situ en fin de chapitre.
LMENTS DU pH-MTRE
Un pH-mtre se compose en gnral des lments suivants. 1. Llment principal (corps) de lappareil contenant
les circuits, les commandes, les raccords, les crans dafchage et les chelles de lecture (cadrans).Parmi
les lments les plus importants figurent : a) Interrupteur marche/arrt (ON/OFF). Tous les pH-mtres ne sont pas quips dun interrupteur marche/arrt. Certains ont simplement un cordon avec une fiche qui permet de les brancher sur une prise de courant approprie. b) Commande de rglage de la temprature. Cette commande permet deffectuer un rglage selon la temprature de la solution dont on mesure le pH. c) Commandes dtalonnage. Selon le modle, le pH-mtre possde un ou deux boutons ou touches dtalonnage, normalement identifis par Cal 1 et Cal 2. Si le pH-mtre est talonn avec une seule solution, on utilise le bouton Cal 1, le bouton Cal 2 tant rgl sur 100 %. Si lappareil permet un talonnage en deux points, on utilise deux solutions de pH connu couvrant lintervalle des valeurs mesurer. Dans ce cas, on utilise les deux boutons (Cal 1 et Cal 2). Dans certains cas spciaux, il faut procder un talonnage en trois points (avec trois solutions de pH connu). d) Slecteur de mode de fonctionnement. Cette commande donne en gnral accs aux fonctions suivantes : I. Mode veille (Stand-by) (0). Dans cette position, les lectrodes sont protges contre les courants lectriques. On utilise cette position lorsque lappareil est rang. II. Mode pH. Dans cette position, lappareil peut effectuer des mesures de pH lorsque les procdures dtalonnage requises ont t effectues.
Figure 4. Schma dun pH-mtre

Voltmtre haute impdance
Electrode Ag/AgCl Rgulateur de temprature Ple de llectrode de rfrence Ple de llectrode de mesure
KCI
KCI Verre spcial permable aux ions
Pont salin (membrane poreuse)
Solution analyser
14 4
III. Mode millivolt (mV). Dans cette position, lappareil peut afficher les lectures en millivolts. IV. Mode ATC (compensation automatique de la temprature). Ce mode est utilis lorsquon mesure le pH de solutions dont la temprature varie. Cette fonction ncessite lemploi dune sonde spciale. Tous les pH-mtres nen sont pas quips. 2. Une lectrode combine. Ce dispositif doit tre maintenu dans de leau distille et rester connect lappareil de mesure. Une lectrode combine se compose dune
lectrode de rfrence (lectrode au calomel) et dune lectrode interne, intgres dans un mme corps (ou sonde). Il en existe divers modles selon le fabricant.
CIRCUIT LECTRIQUE TYPE

La figure 6 prsente un circuit lectrique type adapt au systme de commande du pH-mtre. Chaque fabricant possde ses propres circuits et variantes.
Figure 5. Types dlectrodes

Electrode combine Electrode de rfrence (au calomel)
Fil de platine (Pt)
Fil dargent (Ag)
Mercure (Hg)
Electrode de rfrence Membrane semi-permable Solution tampon
Chlorure mercureux (HgCl ou calomel)
Chlorure de potassium (KCl)
Membrane poreuse
Figure 6. Circuit lectrique type pour le pH-mtre

1N 4002 7812 110 VAC 3,300 fd 0.1 fd 560K 10K Rsistance variable
9,09 K
Transformateur 110 V / 12 V DC 0.1 fd 3,300 fd 7912
pH 30K
mV
1,00 K
12V Lampe
TL081
5 4
6 1
Sortie
10K Zro Entre 10K Rfrence mV pH
15
CHAPITRE 3 PH-MTRE
Description des lments du circuit lectrique type

Systme Alimentation et redressement Elment Transformateur 110V/12V AC* Diode de redressement (1N4002) Description Dispositif qui transforme le courant 110 V du secteur en courant alternatif 12 V. Diode qui sert obtenir une onde de sens positif.
Condensateurs lectrolytiques 3300 microfarads (fd) (2) Condensateurs qui lissent la tension la sortie des diodes. Rgulateurs de tension (7812, 7912) Condensateurs lectrolytiques 0,1 microfarad (fd) (2) Lampe tmoin 12 V DC Mesure en pH et en mV Amplificateur oprationnel (TL081) (R1) rsistance 9,09 K (ohm) (R2) rsistance 1 K (ohm) (R3) rsistance 560 K (ohm) (R4) rsistance variable 10 K (ohm). (R5) rsistance 30 K (ohm) Rsistance de mise la terre. Le gain du circuit est rgi par lquation : Gain = 1+ (R3+PxR4)/R5+ (1P) xR4. Sortie Voltmtre DC bon march Effectue les lectures en millivolts. La tension lue est 10 fois celle donne par la cellule, ce qui permet une rsolution de 0,1 millivolt. La lecture se fait au moyen dlectrodes carbone/ quinhydrone.
* Des spcifications de voltage diffrentes peuvent sappliquer dans certaines parties du monde. AC = courant alternatif ; DC = courant continu.
Dispositifs qui rgulent la tension aprs linteraction entre les diodes et les condensateurs. Dispositifs utiliss pour assurer la stabilit haute frquence. Lampe indiquant que lappareil est en marche (ON). Circuits mV
Circuits pH.

Le pH-mtre travaille sous une alimentation lectrique prsentant les caractristiques suivantes. Courant monophas 110 V ou 220-230 V, frquence 50-60 Hz, selon la rgion gographique. Il existe aussi des pH-mtres portables aliments par piles.
Description de la procdure dtalonnage Frquence : une fois par jour 1. Etalonner le pH-mtre avec une solution de pH connu (talonnage en un point).
1.1 Brancher lappareil sur une prise de courant de voltage appropri. 1.2 Rgler le slecteur de temprature sur la temprature ambiante. 1.3 Rgler lchelle de lecture. 1.4 Sortir les lectrodes de leur tui de rangement. Les lectrodes doivent toujours tre stockes dans une solution approprie. Certaines peuvent tre maintenues dans de leau distille et dautres doivent tre maintenues dans une solution spcifie par le fabricant.1 Si pour une raison quelconque llectrode a sch, il est ncessaire de limmerger pendant au moins 24 heures avant emploi. 1.5 Rincer llectrode leau distille dans un bcher vide. 1.6 Essuyer lextrieur de llectrode avec un matriau absorbant en faisant attention de ne pas le faire pntrer dans la sonde. Pour viter une ventuelle contamination, il faut rincer les lectrodes chaque fois quon change de solution.
1
PROCDURE GNRALE DTALONNAGE

Les pH-mtres doivent tre talonns avant emploi pour garantir la qualit et la justesse des mesures. La procdure est la suivante : 1. Etalonnage en un point. Ce type dtalonnage est ralis pour des conditions de travail normales et un usage normal. Il utilise une solution de rfrence de pH connu. 2. Etalonnage en deux points. Cet talonnage est ralis avant deffectuer des mesures trs prcises. Il utilise deux solutions de rfrence de pH connu. Il est galement ralis si linstrument nest utilis que de temps autre et si son entretien est peu frquent.
Vrifier le type de solution tampon recommand par le fabricant de llectrode.
16
2. Plonger les lectrodes dans la solution
dtalonnage.
2.1 Immerger llectrode dans la solution dtalonnage en veillant ce que son extrmit infrieure ne touche pas le fond du bcher. On limite ainsi le risque de casser llectrode. Si le test exige que la solution soit maintenue en agitation laide dun agitateur magntique, il faut faire attention que le barreau de lagitateur ne touche pas llectrode, ce qui pourrait la casser. On utilise une solution tampon comme solution dtalonnage car son pH est connu et restera stable mme en prsence dune contamination lgre. En gnral, une solution de pH 7 est utilise1. 3. Mettre le slecteur sur la position pH. 3.1 Lorsquon fait passer le slecteur de la position veille (Stand-by) la position pH, on connecte llectrode lchelle de lecture du pH de lappareil. 3.2 A laide du bouton Cal 1, rgler lchelle de lecture de faon lire le pH de la solution dtalonnage. Cela permet lappareil de lire exactement le pH de la solution dtalonnage. Exemple : pour une solution dont le pH est gal 7, laiguille peut osciller lgrement par units de 0,1 pH ; en moyenne, la lecture doit tre de 7. La lecture du pH sur lchelle de lecture doit se faire perpendiculairement pour viter ou liminer les erreurs de parallaxe (erreurs dues lombre de laiguille de lappareil, visible sur le miroir de lchelle de lecture). Le pH-mtre est alors talonn, cest-dire prt effectuer des lectures correctes du pH. 3.3 Remettre le slecteur de fonctions en position Standby. 4. Mesurer le pH dune solution. 4.1 Sortir llectrode de la solution dtalonnage. 4.2 Rincer llectrode leau distille et la scher. 4.3 Plonger llectrode dans la solution de pH inconnu. 4.4 Faire passer le slecteur de fonctions de la position Stand-by la position pH. 4.5 Lire le pH de la solution sur lchelle de lecture (cadran) ou lcran du pH-mtre. Inscrire la valeur lue sur la feuille de contrle. 4.6 Remettre le slecteur de fonctions en position Standby. Sil est ncessaire de mesurer le pH de plus dune solution, rpter la procdure en rinant la sonde leau distille et en la schant avec un papier propre et non pelucheux entre les lectures. Lorsquon doit mesurer le pH de nombreuses solutions, le pH-mtre doit tre frquemment rtalonn en suivant les tapes dcrites plus haut.
5. Eteindre le pH-mtre. 5.1 Sortir llectrode de la dernire solution analyse. 5.2 Rincer llectrode leau distille et la scher avec un chiffon ou un papier dessuyage en faisant attention de ne pas le faire pntrer dans la sonde. 5.3 Placer llectrode dans son rcipient de stockage. 5.4 Vrifier que le slecteur de fonctions est en position Stand-by. 5.5 Eteindre le pH-mtre (interrupteur sur OFF) ou dbrancher le cble dalimentation si lappareil ne possde pas dinterrupteur marche/arrt. 5.6 Nettoyer le plan de travail.
ENTRETIEN GNRAL DU PH-MTRE

Lentretien des pH-mtres comporte deux procdures, lune pour llment principal et lautre pour la sonde de dtection contenant les lectrodes.
Procdure gnrale dentretien pour llment principal du pH-mtre Frquence : tous les six mois
1. Examiner lextrieur de lappareil et valuer son tat gnral. Vrifier la propret des botiers et leur ajustement. 2. Contrler le cble dalimentation et ses fiches. Vrifier quils sont propres et en bon tat. 3. Examiner les commandes de lappareil. Vrifier quelles sont en bon tat et sactionnent sans difficult. 4. Vrifier que le dispositif de lecture de lappareil est en bon tat. Pour cela, il faut dbrancher lappareil. Rgler laiguille de lindicateur sur zro (0) au moyen de la vis de rglage qui se trouve en gnral sous laxe de laiguille. Si lappareil possde un cran daffichage, vrifier que celui-ci fonctionne normalement. 5. Vrifier que le tmoin de marche (ON) (ampoule ou diode) fonctionne normalement. 6. Vrifier ltat du bras porte-lectrode. Vrifier la fixation et le mcanisme dassemblage de llectrode pour viter que celle-ci ne bouge. Vrifier que le dispositif de rglage en hauteur fonctionne correctement. 7. Contrler ltat des piles (pour les appareils qui fonctionnent sur piles) ; les remplacer si ncessaire. 8. Tester le fonctionnement de lappareil en mesurant le pH dune solution connue. 9. Contrler la connexion la terre et tester le courant de fuite.
Vrifier le type de solution dtalonnage recommand par le fabricant de llectrode.
17
CHAPITRE 3 PH-MTRE
ENTRETIEN COURANT DE LLECTRODE Frquence : tous les quatre mois

Llectrode de mesure du pH (lectrode pH) ncessite un remplacement priodique de la solution conductrice afin dobtenir une lecture prcise. Les tapes suivantes sont recommandes pour le remplacement de la solution dlectrolyte : 1. Sortir llectrode pH de la solution tampon de stockage. 2. Rincer abondamment llectrode leau distille. 3. Enlever le capuchon de llectrode. 4. Remplir le conduit entourant llectrode interne avec une solution sature de chlorure de potassium (KCl). Utiliser une seringue ou le compte-gouttes fourni avec la solution de KCl. Vrifier que la pointe de la seringue ne touche pas lintrieur de llectrode. 5. Remettre le capuchon de llectrode. Rincer llectrode leau distille. 6. Lorsque llectrode nest pas utilise, la conserver dans la solution tampon de stockage.
2. Elimination des dpts et des bactries. Faire tremper llectrode pH dans une solution dilue deau de Javel (par exemple 1 %) pendant 10 minutes. Rincer abondamment avec de leau. 3. Elimination des traces dhuile et de graisse. Rincer llectrode pH avec un dtergent doux ou de lalcool mthylique. Rincer avec de leau. 4. Elimination des dpts de protines. Faire tremper llectrode pH dans une solution de pepsine 1 % et de HCl 0,1 M pendant 5 minutes. Rincer avec de leau. Aprs chaque opration de nettoyage, rincer avec de leau dsionise et remplir llectrode de rfrence avant emploi.
Autres prcautions
1. Ne pas faire subir de chocs llectrode. Comme elle est en gnral ralise en verre et est trs fragile, il est ncessaire de la manipuler avec beaucoup de prcaution, en vitant les chocs. 2. Ne pas oublier que llectrode a une dure de vie limite. 3. Lorsquelle nest pas utilise, conserver llectrode dans la solution tampon de stockage.
Nettoyage de llectrode
Le type de nettoyage ncessit par llectrode dpend de la nature de la contamination laquelle elle est soumise. Les procdures les plus courantes sont rsumes ci-dessous : 1. Nettoyage gnral. Faire tremper llectrode pH dans une solution 0,1 M de HCl ou une solution 0,1 M de HNO3 pendant 20 minutes. Rincer avec de leau.
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Le pH-mtre donne des valeurs instables. CAUSE PROBABLE Il y a des bulles dair dans llectrode. Llectrode est sale. Llectrode nest pas immerge. Llectrode est casse. La rponse de llectrode est lente. Lcran affiche un message derreur. Lcran affiche un message dtalonnage ou derreur. Llectrode est sale ou grasse. Slection incorrecte du mode de fonctionnement. Il y a une erreur dtalonnage. Ltalonnage de la valeur tampon est erron. Llectrode est sale. Le pH-mtre est allum (sur ON) mais il ny a pas de signal sur lcran.* Le tmoin de niveau de charge des piles clignote.*
* Uniquement pour les appareils fonctionnant sur piles.
SOLUTION Faire tremper llectrode pour liminer les bulles. Nettoyer llectrode et la rtalonner. Vrifier que lchantillon recouvre entirement la pointe de llectrode. Remplacer llectrode. Nettoyer llectrode et la rtalonner. Vrifier le mode de fonctionnement slectionn. Slectionner une opration valide. Rtalonner le pH-mtre. Vrifier les valeurs tampons utilises. Nettoyer et talonner llectrode. Vrifier la polarit des piles. Remplacer les piles. Remplacer les piles.
Les piles sont mal installes. Les piles sont uses. Les piles sont uses.
18
DFINITIONS
Dissociation. Phnomne conduisant la rupture dune molcule. Cette rupture entrane la libration de particules portant une charge lectrique (ions). Electrode au calomel. Electrode de rfrence utilise avec llectrode de mesure pour dterminer le pH dune solution. Elle comprend une base de mercure (Hg), un revtement de chlorure mercureux (Hg2Cl2) et une solution 0,1 M de chlorure de potassium (KCl). Elle est reprsente par la formule Cl2(Hg2Cl2, KCl)Hg. Electrode sensible aux ions. Dispositif qui produit une diffrence de potentiel proportionnelle la concentration de la substance analyser. Electrolyte. Solut donnant une solution conductrice, par exemple NaCl (chlorure de sodium) et NH4OH. Gel. Substance semi-solide compose dun collode (solide) dispers dans un milieu liquide. Ion. Atome qui a gagn ou perdu un lectron. Lorsque latome perd un lectron, il devient un ion charg positivement, appel cation. Si latome gagne ou capture un lectron, il devient un ion charg ngativement, ou anion. Molarit. Nombre de moles (M) dune substance dans un litre de solution. (Nombre de moles de solut dans un litre (l) de solution). Un symbole ionique mis entre crochets signifie quil sagit dune concentration molaire. Mole (abrviation de molcule). Quantit de toute substance dont la masse exprime en grammes est numriquement gale sa masse atomique. Mole (unit). Quantit dune substance qui contient autant datomes, de molcules, dions ou dautres entits lmentaires quil y a datomes dans 0,012 kilogramme de carbone 12. Ce nombre est le nombre dAvogadro, gal 6,0225 1023. Correspond lancienne appellation molcule-gramme. Symbole : mol. La masse en grammes de cette quantit de substance, numriquement gale la masse molculaire de la substance, est appele masse molaire.. pH. Mesure de la concentration dions hydrogne H+ en moles par litre (M) dans une solution. La notion de pH a t propose par Srensen et Lindstrm-Lang en 1909 pour faciliter lexpression des trs faibles concentrations ioniques. Le pH est dfini par la formule : pH = log [H+] or [H+] = 10-pH Il mesure lacidit dune solution. Exemple : dans leau, la concentration de lion H+ est de 1,0 x 10-7 M, ce qui donne un pH de 7. Cela permet dexprimer la gamme de concentrations allant de 1 10-14 M par des valeurs du pH allant de zro (0) 14. Il existe divers systmes de mesure de lacidit dune solution. Une substance acide dissoute dans leau est capable de produire des ions H+. Une substance basique dissoute dans leau est capable de produire des ions hydroxyle OH. Une substance acide contient une plus grande quantit dions H+ que leau pure ; une substance basique contient une plus grande quantit dions OH que leau pure. Les concentrations de substances sont exprimes en moles par litre (M). Dans leau pure, les concentrations ioniques [H+] et [OH] sont gales 1,0 107 M. Leau pure est donc considre comme une substance neutre. En ralit, cest un lectrolyte faible qui se dissocie selon la formule suivante : H2O ' [H+][OH] Dans toute solution aqueuse il existe un quilibre exprim par la relation : [H+][OH] =K H2O Si la solution est dilue, la concentration de leau non dissocie peut tre considre comme constante :tant: [H+][OH] = [H2O]K = Ka La nouvelle constante Ka est appele constante de dissociation ou produit ionique de leau et est gale 1,0 1014 25 C. [H+][OH] = 1,0 1014 X X = 1,0 1014 X2 = 1,0 1014 X = 1,0 107 Dans leau pure, la concentration de H+ et la concentration de OH sont de 1,0 107 M, ce qui est une concentration trs faible tant donn que la concentration molaire de leau est de 55,4 mol/litre. Solution. Mlange liquide homogne (de proprits uniformes) de deux ou plusieurs substances. Ce mlange est caractris par labsence de ractions chimiques entre ses constituants. Le constituant prsent dans la proportion la plus grande, gnralement ltat liquide, est appel solvant et celui ou ceux qui sont prsents en plus petites quantits sont appels soluts. Tampon. Solution contenant soit un acide faible et son sel, soit une base faible et son sel, ce qui la rend rsistante aux variations du pH une temprature donne.
19
CHAPITRE 3 PH-MTRE
Annexe Thorie du pH
Les lectrodes pH se conduisent en thorie comme une cellule lectrochimique et ragissent la concentration dions H+. Une force lectromotrice (FEM) est produite, que lon peut calculer daprs lquation de Nernst :
RT E =EF+ ln a H + nF
sachant que:
pH = ln a H +
a tant la concentration ionique effective (activit)
Si n = 1, lquation devient :
R'T E =EF pH F
E est une constante qui dpend de la temprature. Si on remplace E par ET, ltalonnage sera plus sensible. Dans la ralit, les lectrodes ne se comportent pas toujours selon lquation de Nernst. Si on introduit la notion de sensibilit (s), lquation | devient :
E = E 'T s
R'T pH F
Les valeurs de E et de s sobtiennent par la mesure de la FEM dans deux solutions de pH connu ; s est la pente de E en fonction du pH, et E se trouve lintersection avec laxe des ordonnes (y). Quand E et s sont connus, on peut reprendre lquation et calculer le pH comme suit :
pH =
E 'T E R'T s T
20
Chapitre 4
Balances
Code GMDN Code ECRI Dnomination 10261 10-261 Balances
10263 10-263
Balances lectroniques
45513 18-449 Balances lectroniques danalyse
46548 18-451 Micro-balances lectroniques pour micro-analyse
La balance est un instrument qui mesure la masse dun corps ou dune substance en utilisant la force dattraction qui sexerce sur ce corps ou cette substance. Le terme balance vient des mots latins bis, qui signifie deux, et lanx, qui signifie plateau. Il existe de trs nombreux types de balances et autant de dnominations. Il faut noter que le poids est la force quexerce lattraction terrestre sur la masse dun corps ; cette force
est gale au produit de la masse par la valeur locale de lacclration de la pesanteur [F = m g]. Il faut insister sur la notion de valeur locale car la pesanteur dpend de facteurs tels que la latitude et laltitude du lieu o la mesure est effectue ainsi que la densit du globe terrestre cet endroit. Cette force est mesure en Newtons.
PHOTOGRAPHIES DE BALANCES Balance mcanique

Corporation Photo avec laimable autorisation de Ohaus Corporatio
Balance lectronique
Photo avec laimable autorisation de Acculab Corporation
21
CHAPITRE 4 BALANCES
A QUOI SERT UNE BALANCE

On utilise une balance pour mesurer la masse dun corps ou dune substance, ou son poids. Au laboratoire, la balance sert effectuer des peses dans le cadre des activits de contrle de la qualit (sur des dispositifs tels que des pipettes), dans la prparation de mlanges en proportions prdfinies et pour dterminer des densits ou des masses volumiques.
Figure 7. Balance ressort
Ressort avec charge Ressort sans charge
La conception de linstrument, les principes et les critres mtrologiques diffrent selon le type de balance. Actuellement, les balances se divisent en deux grands groupes : les balances mcaniques et les balances lectroniques.
F=-kx
X
Dplacement
m
F = F1 -kx = mg
Echelle de mesure Masse
Balances mcaniques
Les modles les plus courants sont : 1. Balance ressort. Son fonctionnement repose sur une proprit mcanique des ressorts, selon laquelle la force exerce sur un ressort est proportionnelle la constante dlasticit du ressort (k) multiplie par son longation (x) [F = kx]. Plus la masse (m) pose sur le plateau de la balance est grande, plus le ressort sallonge, puisque llongation est proportionnelle la masse et la constante du ressort. Ltalonnage dune balance ressort dpend de la pesanteur qui sexerce sur lobjet peser. On utilise ce type de balance lorsquon na pas besoin dune grande prcision. 2. Balance curseur. Ce type de balance (balance de type pse-bb ou balance de mnage) est quip de deux poids connus (curseurs) qui peuvent tre dplacs le long de deux chelles, une macro-chelle et une micro-chelle. Lorsquon place une substance de masse inconnue sur le plateau, on dtermine son poids en dplaant les curseurs le long des chelles jusqu ce que lquilibre soit atteint. On obtient alors le poids en additionnant les deux quantits indiques par la position des curseurs. 3. Balance danalyse. Cette balance fonctionne par comparaison de masses de poids connu avec la masse dune substance de poids inconnu. Son lment de base est constitu par un flau bras symtriques reposant sur une arte centrale appele couteau. Aux extrmits des bras du flau se trouvent des triers reposant eux aussi sur des couteaux, ce qui leur permet dosciller librement, et auxquels sont suspendus deux plateaux. Des masses certifies sont dposes sur lun des plateaux et le corps de masse inconnue sur lautre. La balance possde un systme de blocage qui permet dimmobiliser le flau lorsque la balance nest pas utilise ou lorsquil faut modifier les contrepoids. La balance se trouve lintrieur dune bote (ou chambre) qui la protge des interfrences telles que celles provoques par les courants dair. Les balances danalyse peuvent mesurer des poids dun dix-millime de gramme (0,0001 g) ou dun cent-millime de gramme (0,00001 g). Ce type de balance a en gnral une capacit maximale (ou porte) de 200 grammes.
F=mg
Figure 8. Balance curseur
Plateau Macro-chelle Curseur de micro-chelle Curseur de macro-chelle Micro-chelle
Figure 9. Balance danalyse

Bras ou au Couteau central Etriers Colonne centrale Chambre
Plateau Echelle de lecture Levier de blocage
22
Il est ncessaire de disposer dune srie de masses certifies. La srie se compose gnralement comme suit :
Figure 10. Balance plateau suprieur

Masse
Type de masse Masses unitaires Lamelles
Masse nominale 1, 2, 5, 10, 20, and 50 g 100, 200 and 500 g 2, 5, 10, 20 and 50 mg 100, 200 and 500 mg
F
Plateau Raccords souples Colonne
4. Balance plateau suprieur (balance guides parallles. Ce type de balance possde un plateau de chargement situ sa partie suprieure, support par une colonne maintenue en position verticale par deux paires de guides avec raccords souples. Leffet de la force produite par la masse se transmet partir dun point de la colonne verticale la cellule de charge, directement ou au moyen dun systme mcanique. Avec ce type de conception, le paralllisme des guides doit tre maintenu avec une exactitude de 1 m. Les carts de paralllisme provoquent une erreur connue sous le nom derreur de charge excentre (lorsque la masse peser donne une lecture diffrente selon quelle est place au centre du plateau ou sur un de ses bords). Le schma ci-dessous explique ce principe de fonctionnement, que certains fabricants ont introduit dans les balances lectroniques. 5. Balance substitution (balance au asymtrique ou bras ingaux). Cette balance ne possde quun seul plateau. Une masse inconnue est dpose sur le plateau de pese. La pese se fait en enlevant des masses connues du contrepoids laide dun systme mcanique de cames jusqu ce que lquilibre soit atteint. Le couteau est en gnral dcentr par rapport au flau et est situ vers lavant de la balance. Lorsquon dpose une masse sur le plateau de pese et quon libre le mcanisme de blocage, le mouvement du flau est projet par lintermdiaire dun systme optique sur un cran situ lavant de linstrument.
Figure 11. Balance substitution

Echelle de lecture Rglage de sensibilit
Masse connue
Mcanisme de rglage du zro Couteau
Masse inconnue
Vrication du fonctionnement
La procdure utilise pour vrifier le fonctionnement dune balance mcanique est dcrite ci-dessous. La procdure dcrite est celle qui sapplique la balance substitution. 1. Vrifier que la balance est de niveau. Lhorizontalit est ralise au moyen dune vis de calage situe sur le socle de la balance ou au moyen dun niveau bulle et dun bouton de rglage sur une chelle dispose sur le devant du socle. 2. Tester le mcanisme de zro. Rgler la balance sur zro et la dbloquer. Si la valeur indique ne reste pas sur zro, faire le rglage du zro au moyen de la vis situe en position horizontale prs du couteau. Pour cela, il faut bloquer la balance, tourner un peu la vis de rglage, dbloquer la balance, et continuer ainsi jusqu ce que le zro se positionne correctement sur lchelle de lecture.
3. Vrifier et rgler la sensibilit. Il faut toujours le faire chaque fois quun rglage interne est effectu. Appliquer la procdure standard comme suit : a. Bloquer la balance. b. Placer un poids standard (quivalent ltendue de lchelle de lecture optique) sur le plateau. c. Positionner le rglage micromtrique sur 1 (un). d. Dbloquer la balance. e. Rgler sur zro. f. Positionner le rglage micromtrique sur 0 (zro). La balance doit indiquer 100. Si lchelle indique plus ou moins que 100, il faut rgler la sensibilit. Pour cela, il faut bloquer la balance, ouvrir le capot suprieur et tourner la vis de rglage de la sensibilit. Si lchelle indique plus que 100, tourner la vis dans le sens des aiguilles dune montre (visser), et si lchelle indique moins que 100, tourner la vis dans le sens contraire des aiguilles dune montre (dvisser). Rpter lopration jusqu ce que la balance soit rgle (zro et sensibilit).
23
CHAPITRE 4 BALANCES
4. Vrifier la bute du plateau. Elle est monte sur une tige filete qui vient au contact du plateau afin de lempcher dosciller lorsque la balance est bloque. En cas de dsquilibre, il faut tourner lgrement cet axe jusqu ce que la distance entre la bute et le plateau soit gale zro lorsque la balance est bloque.
Entretien de la balance mcanique

Lentretien des balances mcaniques se limite aux oprations suivantes :
Frquence : une fois par jour

1. 2. 3. 4. Vrifier le niveau. Vrifier le zro. Vrifier le rglage de sensibilit. Nettoyer le plateau de pese.
Lors de toute modification de la charge (poids/masse), le systme mcanique mobile rpond par un dplacement vertical sur une certaine distance. Ce dplacement est dtect par une cellule photolectrique (e) qui envoie un signal lectrique au servo-amplificateur (f ). Ce signal modifie le flux de courant lectrique traversant la bobine de llectroaimant (c) de telle faon que le systme mobile revient sa position dquilibre sous leffet de lajustement du champ magntique dans llectroaimant. Par consquent, le poids de la masse (G) peut tre mesur indirectement au dbut du passage du courant lectrique, qui traverse le circuit mesurant la tension (V) au moyen dune rsistance de prcision (R), soit [V = I R]. Actuellement, de nombreux systmes de pese utilisent un systme lectronique pour effectuer des mesures trs exactes de la masse et du poids. Le schma ci-dessous explique le fonctionnement des balances lectroniques.
Frquence : une fois par an

1. Etalonner la balance et enregistrer la procdure par crit. 2. Dmonter et nettoyer les composants internes. Suivre la procdure indique par le fabricant ou sadresser une entreprise spcialise.
Figure 12. Elments des balances lectroniques
P
Balances lectroniques
Les balances lectroniques possdent trois lments de base : 1. Un plateau de pese. Lobjet peser qui est dpos sur le plateau exerce une pression rpartie de faon alatoire sur toute la surface de ce plateau. Par un mcanisme de transfert (leviers, supports, guides), la charge se trouve concentre en une force unique F qui peut tre mesure [F = Pa]. Lintgrale de la valeur de la pression sur laire du plateau permet de calculer la force. 2. Un dispositif de mesure appel cellule de charge qui produit un signal de sortie correspondant la force de la charge sous forme de variations de la tension ou de la frquence. 3. Un circuit lectronique analogique/digital qui donne le rsultat final de la pese sous forme numrique. Les balances de laboratoire fonctionnent sur le principe de la compensation de la force lectromagntique applicable des dplacements ou des torsions. La combinaison des lments mcaniques et des systmes de lecture automatiques fournit une mesure du poids avec un degr de justesse qui dpend du modle.
Mcanisme de transfert
Cellule de charge
Ecran et processeur de signal
Figure 13. Principe de la force de compensation
G
Principe. Les parties mobiles (plateau de pese, colonne (a),
bobine, indicateur de position et charge (G) (lobjet peser)) sont maintenus en quilibre par une force de compensation (F) gale au poids de lobjet. La force de compensation est produite par le passage dun courant lectrique dans une bobine situe dans lentrefer dun lectroaimant cylindrique. La force F se calcule par la formule [F = I L B], dans laquelle I = intensit lectrique, L = longueur totale du fil de la bobine et B = intensit du champ magntique dans lentrefer de llectroaimant.
b a
e I f c d
V=I*R
24
Systme de traitement du signal

Le systme de traitement du signal se compose du circuit qui transforme le signal lectrique mis par le transducteur en donnes numriques pouvant tre lues sur un cran. Le traitement du signal comprend les lments suivants : 1. Rglage de la tare. Ce rglage est utilis pour ajuster la valeur de lecture zro avec toute charge se situant dans la plage de mesure de la balance. Le rglage se fait au moyen dun bouton gnralement situ sur la partie avant de la balance. On utilise couramment cette fonction pour le tarage du rcipient contenant lobjet peser. 2. Rglage du temps dintgration. Pendant une lecture, les valeurs sont moyennes sur une priode prdfinie. Cette fonction est trs utile lorsque les peses doivent tre effectues dans des conditions instables, par exemple en prsence de courants dair ou de vibrations. Ce rglage dfinit le temps quon laisse un rsultat pour quil se situe entre des valeurs limites fixes lavance et qui permettent de le considrer comme stable. Cet intervalle de temps peut tre modifi selon les applications recherches. 3. Arrondissage. En gnral, les balances lectroniques traitent les donnes avec une plus grande rsolution que celle qui est affiche. La valeur affiche sur lcran est la valeur interne nette arrondie. 4. Dtecteur de stabilit. Ce tmoin lumineux steint lorsque le rsultat de la pese sest stabilis et est prt tre lu. Sur certains modles de balances, le rsultat ne saffiche lcran que lorsque la mesure sest stabilise. 5. Processeur de signal lectronique. Il permet le traitement et laffichage des rsultats de la pese. Il permet aussi dautres fonctions comme la numration dobjets, le calcul du poids en pourcentage, la pese dynamique de poids instables (par exemple des animaux) et la pese de mlanges, entre autres. Le microprocesseur effectue les calculs selon les instructions saisies par loprateur sur le clavier de la balance.
Figure 14. Classification des balances selon lexactitude
Le nombre de divisions de lchelle se calcule par la formule :
n=
Max dd
LOIML accepte les valeurs suivantes, par convention, pour les balances de laboratoire : 1. Ultramicroanalyse dd = 0.1 g 2. Microanalyse dd = 1 g 3. Semi-microanalyse dd = 0.01 mg 4. Macroanalyse dd = 0.1 mg 5. Prcision dd 1 mg
Classication des balances

LOrganisation internationale de mtrologie lgale (OIML) classe les balances en quatre groupes : Groupe I : exactitude spciale Groupe II : haute exactitude Groupe III : exactitude moyenne Groupe IV : exactitude ordinaire La figure 14 prsente cette classification sous forme graphique. Dans la classification mtrologique des balances lectroniques, seuls deux paramtres ont une importance : 1. La charge maximale (Max) 2. La valeur de la division numrique (d)1
Kupper, W., Balances and Weighing, Mettler Instrument Corp., PrincetonHightstown, NJ.
25
CHAPITRE 4 BALANCES
Commandes des balances lectroniques

La figure 15 montre les commandes couramment rencontres sur une balance lectronique moderne. Il faut souligner les points suivants : 1. De nombreuses fonctions sont intgres dans lappareil. 2. Diverses units de mesure peuvent tre slectionnes. 3. Il est possible de connatre la date et lheure de la mesure. 4. Les procdures peuvent tre documentes et imprimes. 5. Il est possible de choisir la langue.
Utilisation de la balance lectronique

Le mode demploi dune balance lectronique moderne est expliqu en dtail dans le manuel dutilisation fourni par le fabricant. En gnral, il faut respecter la procdure suivante : 1. Laisser la balance squilibrer avec lenvironnement dans lequel elle est installe. 2. Laisser la balance chauffer avant de commencer les peses. Normalement, il suffit de la laisser raccorde au systme dalimentation lectrique. Certains fabricants conseillent dattendre au moins 20 minutes aprs le raccordement de la balance au secteur. Pour les balances danalyse de classe 1, il faut attendre au moins 2 heures avant de commencer les peses. Vrifier que la balance est talonne. Les balances lectroniques ont en gnral un talonnage dusine stock en mmoire, que lon peut utiliser si on ne dispose pas de masses dtalonnage. Si un talonnage est ncessaire, utiliser des masses dtalonnage selon les instructions du fabricant. Les masses dtalonnage doivent au minimum rpondre aux tolrances fixes par l American Society for Testing and Materials (ASTM). Pour information, le tableau ci-dessous indique les tolrances acceptes pour les masses ASTM de classe 11.

Pour une installation et une utilisation correctes de la balance, les conditions suivantes doivent tre remplies : 1. Un environnement sans courants dair ni changements brusques de temprature, et sans poussire. 2. Une table ou une paillasse parfaitement horizontale. Une plate-forme possdant une grande inertie et isole des structures avoisinantes est idale pour rduire leffet des vibrations produites par certains appareils tels que centrifugeuses et rfrigrateurs. Lemplacement doit tre de taille suffisante pour recevoir la balance et tous les accessoires ncessaires pendant les peses. De mme, la place ncessaire pour les cbles tels que raccords, cbles dalimentation lectrique et connexions limprimante doit tre prvue lavance. 3. Eviter dinstaller des appareils qui produisent des champs magntiques intenses ou des vibrations comme les centrifugeuses, moteurs lectriques, compresseurs et gnrateurs proximit de lemplacement de la balance. 4. Eviter de placer la balance proximit du systme de climatisation (courants dair) ou dans un endroit expos la lumire solaire directe. 5. Une prise de courant satisfaisant aux normes lectriques en vigueur dans le pays ou le laboratoire. Elle doit tre en bon tat, relie la terre et munie dun interrupteur.
Poids (grammes) 100 200 300 500 1 000 2 000 3 000 5 000
Limite suprieure (g) Limite infrieure (g) 100,0003 200,0005 300,0008 500,0013 1000,0025 2000,0050 3000,0075 5000,0125 99,9998 199,9995 299,9993 499,9988 999,9975 1999,9950 2999,9925 4999,9875
3. Suivre les instructions figurant dans le manuel dutilisation fourni par le fabricant.
Figure 15. Panneau de contrle dune balance danalyse
Etalonnage des balances

Ltalonnage des balances doit tre ralis par un personnel spcialement form cette activit. Il faut souligner le fait que ltalonnage doit tre bas sur les normes de lOIML ou dun organisme quivalent, tel que l ASTM, qui ont tabli des mthodologies de classification des poids standard. On trouvera ci-aprs la classification des poids de rfrence utilise par lOIML.
Marche/arrt (ON/OFF) Touche Menu Touche Impression Touche Slection/ Mode

Date Heure Etalonnage
Unit
Slecteurs Menu
Tare
Ecran Niveau
1
Field Services Handbook for High Precision Scales, IES Corporation, Portland, Oregon, 2004.
26
Tableau de classification des poids de rfrence selon lOIML1

Classe E1 E2 F1 F2 M1 M2 Description Poids en acier inoxydable sans marques ni cavit de rglage. Poids en acier inoxydable sans marques ni cavit de rglage. Poids en acier inoxydable avec bouton viss pour protger la cavit de rglage. Poids plaqus bronze. Poids en bronze (ne rouillent pas, ne se corrodent pas) ou poids en fonte avec finition peinture de haute qualit. Poids en bronze ou en fonte (poids commerciaux). Tolrance 0,5 ppm sur 1 kg 1,5 ppm sur 1 kg 5 ppm sur 1 kg 15 ppm sur 1 kg 50 ppm sur 1 kg 200 ppm sur 1 kg Incertitude admise 1/3 de la tolrance 1/3 de la tolrance 1/5 de la tolrance 1/5 de la tolrance 1/5 de la tolrance 1/5 de la tolrance Frquence de rtalonnage 2 ans 2 ans 1 an 1 an 1 an 1 an
Tableau dutilisation des poids standard en fonction de la capacit de la balance

Rsolution Capacit
100 g 10 g 1g 100 mg 10 mg 1 mg 0,1 mg 0,01 mg
Jusqu 200 g 200 g 1 kg 1 30 kg 30 100 kg Plus de 100 kg
M2 M2 M2
M2 M1 M1/F2
M1 M1 F2 F1
M1 M1 F2 F1 E2
M1 F2 E2 E2
F2 F1/E2 E2
F1 E2 E2
F2 E2
Toute procdure dtalonnage doit tre ralise avec des poids standard. Les rsultats obtenus doivent tre analyss afin de dterminer sils se situent dans les tolrances admises. Les poids standard doivent tre choisis en fonction de la capacit de la balance. Le tableau ci-dessus complte le prcdent. Il aide dterminer quels sont les poids standard utiliser pour ltalonnage dune balance en fonction de sa capacit.
4. Toujours utiliser un rcipient propre, pralablement tar, pour la pese (rcipient en verre ou papier pour pese si possible). Noter que le plastique peut se charger dlectricit statique et est dconseill pour peser des substances en poudre ou en granuls. 5. Toute projection doit tre immdiatement nettoye pour viter une corrosion ou une contamination. Utiliser de lthanol 70 % pour dsinfecter le plateau de la balance. Trs important : Ne jamais lubrifier une balance sauf indication expresse du fabricant. Toute substance interfrant avec le mcanisme de la balance retarde sa rponse ou fausse dfinitivement les mesures. Note : En gnral, le fabricant ou linstallateur effectue lentretien rgulier des balances (maintenance) selon des procdures qui varient selon le type et le modle.
La balance est un instrument qui se caractrise par sa haute prcision. Cest pourquoi loprateur nest charg que de lentretien minimal, qui comprend les activits suivantes :
A faire chaque jour

1. Nettoyer le plateau de pese pour enlever la poussire. Le nettoyage se fait avec un chiffon de tissu propre qui peut tre humidifi avec de leau distille. Sil y a des taches, les enlever avec un dtergent doux. On peut aussi utiliser un pinceau poils souples pour enlever les particules ou la poussire dposes sur le plateau de pese. 2. Nettoyer lintrieur et lextrieur de la chambre de la balance. Vrifier labsence de poussire sur les vitres. 3. Vrifier que le mcanisme de rglage sur la porte avant de la chambre de la balance fonctionne correctement.
Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate by LGC (Teddington) Ltd., December 2000.
27
CHAPITRE 4 BALANCES
GUIDE DE DPANNAGE Balance lectronique

PROBLME La balance ne sallume pas. CAUSE PROBABLE Le cble de raccordement est dbranch ou la fiche est mal connecte la balance. La prise de courant nest pas alimente. La lecture du poids est incorrecte. La balance na pas t mise zro avant la lecture. La balance est incorrectement talonne. La balance nest pas horizontale. La balance nindique pas les units de mesures souhaites sur lcran. Les units sont incorrectement slectionnes. Lunit souhaite nest pas disponible ou nest pas active. La configuration de la balance ne peut tre modifie partir du menu. La balance ne garde pas les slections ni les modifications effectues. Le lecteur de la balance est instable. Le menu est peut-tre verrouill. La touche End na pas t presse pour finaliser le processus. La surface de la table ou de la paillasse vibre. La porte avant de la balance est ouverte. Linterface RS232 ne fonctionne pas. Lcran donne une lecture incomplte ou est bloqu. Le cble de raccordement est mal connect. Le microprocesseur est bloqu. SOLUTION Vrifier le branchement. Remettre correctement le cble de raccordement si ncessaire. Vrifier lalimentation lectrique. Mettre la balance sur zro ; refaire la mesure. Etalonner selon la procdure recommande par le fabricant. Mettre la balance de niveau. Vrifier la procdure dfinie par le fabricant pour slectionner lunit de mesure souhaite. Activer lunit de mesure selon la procdure dfinie par le fabricant. Vrifier si la touche de verrouillage du menu est active. Si oui, la dsactiver. Vrifier que les modifications et les slections sont effectues conformment aux instructions du fabricant. Refaire la slection ou la modification. Eteindre la balance, attendre un moment et rallumer la balance. Placer la balance sur une surface stable. Fermer la porte avant pour effectuer la mesure. Vrifier que le cble est bien connect. Eteindre la balance, attendre un moment et la rallumer. Si le problme persiste, appeler le service technique. Vrifier les codes derreur dans le manuel dutilisation de la balance.
Lcran affiche un code derreur.
Diverses causes.
ERREUR DE FONCTIONNEMENT Lectures non reproductibles (hystrsis). Lectures non linaires. Le rsultat affich narrte pas de monter ou de descendre. Le rsultat affich narrte pas de monter et descendre.
CAUSE PROBABLE La cellule de mesure est sale. Le montage de la cellule de mesure est dfectueux. Systme lectronique dfectueux. Systme mcanique en mauvais tat. Systme lectronique dfectueux. Changement de temprature dans la pice. La cellule de mesure est sale. Systme lectronique dfectueux. Problmes lis lenvironnement tels que courants dair, lectricit statique ou vibrations.
Lcran est vide ou affiche des signes qui ne veulent rien dire.
Systme lectronique dfectueux.
Lcran indique une surcharge ou une valeur ngative La cellule de mesure a t endommage par une en labsence de charge. surcharge. Le montage de la cellule de mesure est dfectueux. La balance ne peut tre talonne. Pile dtalonnage dfectueuse. Systme lectronique dfectueux. Le montage de la cellule de mesure est dfectueux.
28
DFINITIONS
ASTM. American Society of Testing and Materials. Charge excentre. Aptitude de la balance lire rgulirement la valeur des masses, quelle que soit leur place sur le plateau de linstrument.. Ecart de linarit. Diffrence de lecture observe lorsque la balance est charge successivement avec des poids rgulirement croissants jusqu sa capacit maximale puis, selon le mme processus, avec des poids rgulirement dcroissants. La diffrence entre les lectures obtenues et les valeurs arithmtiques correspondant aux poids utiliss traduit une non-linarit. Erreur de charge excentre. Dviation des rsultats lorsque lobjet peser est plac en diffrents endroits du plateau de pese, par exemple au centre du plateau ou sur un de ses bords. Erreur de sensibilit. Ecart constant sur toute ltendue de pese ou la capacit dune balance. Etalonnage. Dtermination de la valeur correcte de la lecture donne par un instrument, par mesure ou comparaison par rapport un talon ou une norme. Les balances sont talonnes au moyen de poids standard. On dit aussi calibration ou calibrage. Exactitude. Somme de toutes les erreurs de la balance. Cest ce quon appelle marge derreur totale. Hystrsis. Diffrence entre les rsultats lorsque la charge de la balance est augmente ou diminue. Linarit. Dsigne laptitude dune balance effectuer des lectures justes du poids sur toute ltendue de pese. Lexpression graphique du poids par rapport son indication sur une balance parfaitement linaire donnerait une ligne droite. Pour dterminer lerreur linaire dune balance, il faut utiliser des masses certifies. Cette procdure permet de calculer les diffrences linaires en faisant une lecture avec les masses certifies avec ou sans charge pralable. La diffrence entre les lectures permet de calculer lcart de linarit. Masse. Proprit physique dun corps lie la quantit de matire, exprime en kilogrammes (kg) quil contient. En physique, il existe deux quantits auxquelles le nom de masse est appliqu : la masse gravitationnelle, qui est une mesure de la faon dont le corps interagit avec le champ de gravitation (si sa masse est faible, le corps subit une force de gravitation plus faible que si sa masse tait plus grande) et la masse inertielle, qui est une mesure quantitative ou numrique de linertie dun corps, cest--dire de sa rsistance lacclration. Lunit qui exprime la masse est le kilogramme (kg). Masses certifies. Masses conformes la tolrance dfinie par les organismes de certification. Les talons correspondant aux classes 1 4 de lASTM sont les plus largement utiliss et doivent ltre (comme rfrence obligatoire) pour raliser les talonnages de routine. OIML. Organisation internationale de mtrologie lgale. Sensibilit. La plus petite masse dtecte par la balance ou la plus petite masse que la balance peut mesurer correctement. Traabilit. Capacit relier les mesures donnes par un instrument une norme dfinie.
29
Chapitre 5
Bains-marie
Code GMDN Code ECRI Dnomination 36754 15-108 Bain-marie
16772 16-772
Bain-marie agitateur
Le bain-marie est un appareil utilis au laboratoire lors de lexcution de tests dagglutination et dinactivation, de tests srologiques, biomdicaux et pharmaceutiques et mme pour des procdures dincubation en milieu industriel. Ils utilisent en gnral de leau, mais certains fonctionnent avec de lhuile. La gamme de tempratures de fonctionnement se situe en gnral entre la temprature ambiante et 60 C. On peut slectionner une temprature de 100 C en utilisant un couvercle spcial. La capacit dune cuve de bain-marie va de 2 30 litres.
A immersion. Aussi appeles thermoplongeurs thermoplongeurs. Ces

rsistances sont installes lintrieur dun tube scell et places la partie infrieure de la cuve, en contact direct avec le milieu chauffer. Externes. Ces rsistances sont situes la partie infrieure de lappareil mais lextrieur de la cuve. Elles sont protges par un matriau isolant qui vite la dperdition de chaleur. Ce type de rsistance transmet la chaleur au fond de la cuve par conduction thermique.
SCHMA DUN BAIN-MARIE

Le schma ci-dessous montre les lments constitutifs du bain-marie. On peut voir le panneau de contrle lectronique, lcran daffichage, le couvercle (facultatif ) et la cuve. Dautres lments peuvent tre installs, par exemple un thermomtre et un agitateur permettant dobtenir une temprature uniforme (non indiqus sur la figure).
Figure 16. Bain-marie
Ecran Couvercle Panneau de contrle Cuve
Touche de slection Interrupteur
Grille diusante
Les bains-marie sont raliss en acier et sont en gnral recouverts dune peinture lectrostatique offrant une bonne adhrence et une forte rsistance aux conditions environnementales du laboratoire. Les bainsmarie ont un panneau de contrle extrieur sur lequel se trouvent les commandes. Ils possdent galement une cuve en matriau inoxydable et dont le fond est garni de rsistances lectriques. Ces rsistances servent transmettre la chaleur au milieu liquide (eau ou huile) jusqu ce quil ait atteint la temprature slectionne au moyen dun dispositif de contrle (thermostat ou dispositif similaire). Les rsistances peuvent tre de deux types :
Robinet de vidange
Figure 17. Rsistances immersion et externes
Rsistance immersion
Rsistance externe
31
Certains types de bain-marie possdent une srie daccessoires tels que systmes dagitation ou circulateurs produisant un mouvement soigneusement contrl au sein du milieu de chauffage pour maintenir luniformit de la temprature. Le tableau ci-dessous dcrit les principaux types de bain-marie.
FONCTIONNEMENT DU BAIN-MARIE Installation

1. Installer le bain-marie proximit dune prise de courant. Celle-ci doit tre relie la terre pour garantir la protection et la scurit de loprateur et de lappareil. Les bains-marie fonctionnent en gnral sous 120 V/60 Hz ou 230 V/60 Hz. Leur installation et leur utilisation sont facilites par la prsence dun vier proximit pour les remplir deau et les vider. 2. Vrifier que lemplacement choisi est horizontal et suffisamment solide pour supporter le poids du bain-marie lorsque celui-ci est rempli de liquide. 3. Vrifier que lemplacement choisi laisse assez de place pour dposer les chantillons et les accessoires ncessaires pour lutilisation normale du bain-marie. 4. Eviter de placer le bain-marie dans les courants dair, par exemple devant un climatiseur ou une fentre, car cela pourrait interfrer avec son fonctionnement normal.
Classe Basse temprature Haute temprature
Gamme de temprature De la temprature ambiante 60 C De la temprature ambiante 100 C De la temprature ambiante 275 C. Lorsque des tempratures suprieures 100 C sont ncessaires, il faut utiliser un liquide autre que de leau car leau bout 100 C dans les conditions normales. Ce type de bain-marie utilise en gnral des huiles, dont le point dbullition est beaucoup plus lev.
Isol
De la temprature ambiante 100 C avec accessoires et/ou agitation (bains-marie eau).
COMMANDES DU BAIN-MARIE
Les bains-marie ont en gnral des commandes trs simples. Certains fabricants utilisent des commandes avec microprocesseurs, variables selon le type dappareil. La figure ci-dessous montre le panneau de contrle dun bain-marie standard.
Scurit
1. Eviter dutiliser le bain-marie dans un environnement o se trouvent des matriaux inflammables et combustibles. Lappareil possde des lments (rsistances produisant de hautes tempratures) qui pourraient provoquer un incendie ou une explosion accidentels. 2. Toujours raccorder lappareil une prise de courant relie la terre, afin de protger lutilisateur et lappareil contre les chocs lectriques. Le raccordement lectrique doit satisfaire aux normes en vigueur dans le pays et dans le laboratoire. 3. Utiliser exclusivement le bain-marie avec des liquides non corrosifs et non inflammables. 4. Utiliser un quipement de protection personnelle lors du travail avec un bain-marie. Lappareil possde des rsistances qui peuvent provoquer des brlures si on les touche par inadvertance, mme longtemps aprs que lappareil a t teint. 5. Lors du travail avec des substances qui dgagent des vapeurs, placer le bain-marie sous une hotte de chimie ou dans un endroit bien ar. 6. Ne pas oublier que les liquides mis incuber au bainmarie peuvent provoquer des brlures en cas de contact accidentel avec les mains. 7. Bien noter que le bain-marie est destin tre utilis avec du liquide dans la cuve. Si la cuve est vide, sa temprature peut devenir trs leve. Utiliser le plateau diffuseur pour dposer les rcipients incuber dans la cuve pleine du bain-marie. Ce plateau est conu de faon uniformiser la temprature du liquide. 8. Eviter dutiliser le bain-marie si lune ou lautre de ses commandes ne fonctionne pas, par exemple les rglages de temprature de fonctionnement ou de temprature maximale.
Figure 18. Commandes du bain-marie

4. Ecran 5. Tmoin 1. Interrupteur de marche (ON) marche/arrt (ON/OFF)
2. Touche Menu 6. Tmoins dchelle de temprature (C/F) 3. Touches de rglage des paramtres
Le panneau de contrle comporte les lments suivants : 1. Linterrupteur marche/arrt (ON/OFF) 2. Une touche Menu pour slectionner les paramtres de fonctionnement : temprature de fonctionnement, temprature dalarme, chelle de temprature (C/F) 3. Deux touches pour le rglage des paramtres 4. Un cran 5. Une lampe tmoin de fonctionnement 6. Deux lampes tmoins pour identifier lchelle de temprature (C/F).
32
Utilisation du bain-marie
Avant dutiliser le bain-marie, vrifier quil est propre et que les accessoires ncessaires sont installs. Le bain-marie sutilise normalement comme suit : 1. Remplir le bain-marie avec du liquide afin de maintenir une temprature constante (eau ou huile). Vrifier quune fois que les rcipients chauffer sont en place, le niveau du liquide se situe entre 4 et 5 cm du haut de la cuve. 2. Installer les instruments de contrle ncessaires, par exemple thermomtre et circulateur. Utiliser les accessoires prvus. Vrifier la position de lampoule du thermomtre ou de la sonde de temprature pour assurer une lecture correcte. 3. Si on utilise de leau comme liquide chauffant, vrifier quelle est propre. Certains fabricants recommandent dajouter des produits empchant le dveloppement de moisissures et dalgues. 4. Placer linterrupteur principal (N 1) sur ON (les numros indiqus ici correspondent ceux qui figurent sur le schma de la figure 18). Certains fabricants utilisent des commandes avec microprocesseurs qui lancent une procdure de vrification automatique ds que linterrupteur est plac en position ON. 5. Slectionner la temprature de fonctionnement au moyen de la touche Menu (N 2) et des touches de rglage des paramtres. 6. Slectionner la temprature maximale (pour les bainsmarie quips de cette option). Il sagit dune scurit qui coupe lalimentation lectrique si la temprature dpasse la limite slectionne. Utiliser la touche Menu et les touches de rglage des paramtres. 7. Eviter dutiliser le bain-marie avec les substances suivantes : a) Eau de Javel. b) Liquides teneur leve en chlore. c) Solutions salines faibles comme le chlorure de sodium, le chlorure de calcium ou les composs contenant du chrome. d) Fortes concentrations dacide quel quil soit. e) Fortes concentrations de sel quel quil soit. f ) Faibles concentrations des acides chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique ou chromique. g) Eau dsionise, car elle provoque une corrosion et une perforation de lacier inoxydable.
Nettoyage Frquence : une fois par mois

1. Eteindre et dbrancher lappareil. Attendre quil refroidisse afin dviter le risque de brlures et daccidents. 2. Vider le liquide utilis pour le chauffage. Si cest de leau, elle peut tre vide dans lvier. Si cest de lhuile, la recueillir dans un rcipient de contenance adapte. 3. Enlever la grille de diffusion thermique qui se trouve au fond de la cuve. 4. Dmonter le circulateur et le nettoyer pour liminer les dpts calcaires et les algues qui pourraient sy trouver. 5. Nettoyer lintrieur de la cuve avec un dtergent doux. Sil y a des traces de corrosion, utiliser des produits de nettoyage pour acier inoxydable. Frotter doucement avec une ponge en matire synthtique ou quivalent. Eviter dutiliser des tampons en laine dacier pour enlever les taches de rouille car ils pourraient laisser des particules dacier susceptibles dacclrer la corrosion. 6. Eviter dincliner ou de heurter le capillaire du dispositif de contrle de la temprature qui se trouve en gnral au fond de la cuve. 7. Rincer lextrieur et lintrieur du bain-marie leau claire.
Lubrication Frquence : une fois par jour

Pour les bains-marie quips dun agitateur ou dun circulateur : Lubrifier laxe du moteur lectrique du circulateur. Dposer une goutte dhuile minrale sur laxe pour maintenir une bonne lubrification entre les paliers du moteur et son axe.
Inspection priodique Frquence : une fois par trimestre

Contrler le thermomtre ou les dispositifs de contrle de la temprature tous les trois mois au moyen dtalons connus. Si on ne dispose pas dtalons de rfrence, utiliser un mlange glace/eau et/ou de leau bouillante. Noter que le thermomtre ou le dispositif de contrle de la temprature du bain-marie doivent galement tre contrls lors de la premire installation de lappareil aprs son achat.
Entretien
Avertissement : Avant tout entretien de lappareil, le dconnecter de la prise de courant. Les bains-marie sont des appareils dentretien simple. Les procdures recommandes en routine concernent essentiellement le nettoyage des parties extrieures. Les oprations les plus courantes sont :
33
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Lappareil ne sallume pas. CAUSE PROBABLE Le bain-marie est dbranch. Linterrupteur est dfectueux Le fusible est dfectueux. Le bain-marie ne chauffe pas. La temprature nest pas slectionne. Les rsistances sont dfectueuses. La temprature limite nest pas fixe. La temprature est plus leve que la valeur slectionne. Les chantillons chauffent lentement. La temprature augmente trs lentement. Le dispositif de contrle de la temprature est dfectueux. Vrifier la slection des paramtres. La cuve est vide ou contient trs peu de liquide. Les rsistances sont dfectueuses. Le dispositif de contrle de la temprature est dfectueux. Remplir la cuve jusquau niveau recommand. Remplacer la ou les rsistances. Remplacer le dispositif de contrle de la temprature. SOLUTION Brancher le bain-marie. Remplacer linterrupteur. Remplacer le fusible. Slectionner la temprature. Remplacer la ou les rsistances. Slectionner la temprature limite. Remplacer le dispositif de contrle de la temprature si ncessaire.
DFINITIONS
Circulateur. Appareil qui agite ou mlange un liquide pour assurer lhomognit de ses proprits (temprature, couleur, densit). Egalement appel agitateur. Fusible. Dispositif de scurit qui protge les circuits lectriques dune intensit excessive. Les fusibles sont raliss en matriaux dont les proprits et les dimensions sont adaptes pour quils fonctionnent dans des conditions prdfinies. Si pour une raison quelconque les paramtres prdfinis sont dpasss, le matriau brle ou fond, ce qui interrompt le passage du courant lectrique. Peinture lectrostatique. Procd de peinture qui utilise le pouvoir dattraction exerc sur les particules par une charge lectrostatique. Une diffrence de potentiel de 80150 kV est applique sur un grillage mtallique travers lequel on projette la peinture afin den charger chaque particule. Les objets mtalliques peindre sont relis au ple oppos du circuit haute tension de faon attirer les particules de peinture. Lobjet recouvert de particules de peinture est ensuite plac dans un four lectrique dont la chaleur fait fondre les particules, qui adhrent alors fortement lobjet. Plateau diffuseur. Aussi appel grille de diffusion thermique. Dispositif plac au fond du bain-marie comme support des rcipients dposs dans la cuve. Il permet galement aux courants de convection thermique produits dans le liquide de la cuve de circuler de haut en bas et de bas en haut, ce qui maintient une temprature homogne la valeur slectionne par loprateur. En gnral, le plateau diffuseur est en acier inoxydable. Rsistance. Opposition quexerce un matriau ou un circuit lectrique au passage du courant lectrique. Cest la proprit dun circuit qui transforme lnergie lectrique en chaleur en sopposant au passage du courant. La rsistance (R) dun corps de section uniforme, par exemple un fil mtallique, est directement proportionnelle sa longueur (l) et inversement proportionnelle sa section (a). La rsistance se calcule au moyen de la formule :
R =k
l a
dans laquelle : k = constante qui dpend des units employes l = longueur du conducteur a = aire de la section du conducteur Lohm () est lunit classique de rsistance lectrique ; 1 ohm est gal 1 volt par ampre. Rsistance immersion. Aussi appele thermoplongeur. Rsistance lectrique (voir dfinition ci-dessus) place lintrieur dun tube scell. On les utilise en gnral pour chauffer des liquides tels que leau ou lhuile.
34
Chapitre 6
Enceinte de scurit biologique
Code GMDN Code ECRI Dnomination 15698 15-698 Enceintes de scurit biologique
20652 20-652
Enceintes de scurit biologique, classe I
20653 20-653 Enceintes de scurit biologique, classe II
20654 20-654 Enceintes de scurit biologique, classe III
Ce dispositif est conu pour contrler les arosols et microparticules associs la manipulation de matriels biologiques potentiellement toxiques ou infectieux lors dactivits telles quagitation, centrifugation, utilisation de pipettes et ouverture de rcipients sous pression. Les enceintes de scurit biologique aussi appeles postes de scurit microbiologique ou enceintes flux laminaire sont destines protger lutilisateur, lenvironnement et lchantillon grce des conditions de ventilation appropries.
A QUOI SERT UNE ENCEINTE DE SCURIT BIOLOGIQUE

Lenceinte de scurit biologique est utilise pour : 1. Protger loprateur contre les risques associs la manipulation de matriels biologiques potentiellement infectieux. 2. Protger lchantillon analyser contre la contamination. 3. Protger lenvironnement. Les enceintes sont utilises pour les travaux de routine en relation avec des agents pathognes (parasites, bactries, virus, champignons), pour les cultures cellulaires et, dans des conditions trs prcises, pour la manipulation dagents toxiques.
ILLUSTRATION DUNE ENCEINTE DE SCURIT BIOLOGIQUE
Figure 19. Enceinte de scurit biologique
Lenceinte de scurit biologique est en gnral construite en acier. Elle est quipe dune vitre frontale de hauteur rglable, dun systme de ventilation avec moteur lectrique, dun ventilateur et dune srie de conduites qui, lorsque lenceinte est en marche, produisent une dpression (pression ngative) lintrieur. Ce dispositif force lair entrant par louverture frontale circuler vers lintrieur de lenceinte en formant un rideau dair qui protge loprateur. A lintrieur de lenceinte, lair est conduit travers une srie de grilles et de conduites et passe finalement sur des filtres HEPA.1 Selon le modle denceinte, lair est recycl lintrieur du laboratoire ou vacu et renouvel en proportions variables. Le flux dair, qui dans les enceintes de classe II se dplace du filtre vers la surface de travail, est laminaire. On trouvera ci-dessous une rcapitulation des types denceintes existants et de leurs principales caractristiques.
HEPA: High Efficiency Particulate Air.
35
C H A P I T R E 6 E N C E I N T E D E S C U R I T B I O LO G I Q U E
Types denceintes de scurit biologique

Type denceinte, avec illustration CLASSE I TYPE A 1. Protection : de loprateur et de lenvironnement. 2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 38 cm/s.
Vers la conduite dvacuation Filtre HEPA Air contamin Zone de travail Air entrant
Caractristiques
3. Convient pour le travail avec des agents correspondant aux niveaux de scurit biologique1 1, 2 ou 3. 4. Systme de filtration : filtre HEPA situ dans le systme dvacuation qui peut ou non tre reli lextrieur. 5. Inconvnient : Ne protge pas lchantillon qui y est manipul.
COUPE LATRALE
CLASSE II TYPE A 1. Protection : de loprateur, du produit et de lenvironnement. 2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 38 cm/s. Air ltr par ltre HEPA Vitre frontale Filtre HEPA dvacuation Filtre HEPA dvacuation Flux laminaire vertical Plnum postrieur Ouverture frontale Entre dair Grille avant Air potentiellement contamin Zone de travail Grille arrire Moteur du ventilateur Bouche daspiration du ventilateur 4. Systme de filtration : deux filtres HEPA, lun situ sur la surface de travail et lautre sur le systme dvacuation, qui peut tre ou non reli lextrieur. Si le systme dvacuation est reli lextrieur, la connexion se fait par un manchon de raccordement. 5. Recycle environ 70 % du volume dair et en renouvelle 30 %. 3. Convient pour le travail avec des agents correspondant aux niveaux de scurit biologique 1, 2 ou 3.
Voir la classification des agents en niveaux de scurit biologique dans la section Scurit biologique
36
Type denceinte, avec illustration CLASSE II TYPE B1
Caractristiques
1. Protection : de loprateur, du produit et de lenvironnement. Conduite dvacuation 2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 50,8 cm/s. 3. Convient pour le travail avec les agents correspondant aux niveaux de scurit biologique 1, 2 ou 3. 4. Systme de filtration : deux filtres HEPA. Lair potentiellement contamin est vacu (70 %) et recycl lintrieur de lenceinte aprs filtration en passant par la grille avant (30 %). 5. Toutes les conduites biologiquement contamines sont sous pression ngative. 6. Permet de travailller sur de petites quantits de produits chimiques toxiques ou radioactifs.
Filtres HEPA Flux laminaire Surface de travail
Systme de plnums
V=100 PLm [50.8cm/s]
CLASSE II TYPE B2 1. Protection : de loprateur, du produit et de lenvironnement. 2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 50,8 cm/s. Conduite dvacuation Prltre Filtre HEPA dvacuation 3. Convient pour le travail avec des agents correspondant aux niveaux de scurit biologique 1, 2 ou 3. 4. Systme de filtration : deux filtres HEPA. Ce type denceinte est une enceinte vacuation totale. Elle ne possde pas de systme de recyclage. 5. Toutes les conduites biologiquement contamines sont sous pression ngative. 6. Lenceinte possde un systme dvacuation qui permet de travailler sur de produits chimiques toxiques ou radioactifs.
Filtre HEPA dalimentation
V vert = 55 PLm - (28cm/s)
Conduite postrieure sous pression ngative
Grille arrire
V = 100 PLm - (50.8cm/s)
Grille avant Vue latrale
37
Type denceinte, avec illustration CLASSE II TYPE B3 OU A/B3
Caractristiques
1. Protection : de loprateur, du produit et de lenvironnement. 2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 50,8 cm/s. Filtre HEPA dvacuation Filtre HEPA dalimentation
V vert = 55 PLm (28cm/s) Conduite postrieure sous pression ngative
3. Convient pour le travail avec des agents correspondant aux niveaux de scurit biologique 1, 2 ou 3. 4. Systme de filtration : deux filtres HEPA. 5. Toutes les conduites biologiquement contamines sont sous pression ngative. 6. Enceinte combine. Elle peut tre connecte au moyen dune conduite. Cest une enceinte de type B3. Sil ny a pas de conduite de raccordement, lenceinte est de type A. Elle recycle 70 % du volume dair lintrieur de lenceinte.
Grille arrire V = 100 PLm - (50.8cm/s) Grille avant VUE LATRALE
CLASSE III 1. Protection : de loprateur, du produit et de lenvironnement. Conduite dadmission dair Conduite dvacuation Double ltre HEPA dvacuation Fentre avant Gants 2. Systme de filtration : deux filtres HEPA monts en srie dans le systme dvacuation ; un filtre HEPA dans le systme dadmission. 3. Convient pour le travail avec des agents correspondant au niveau de scurit biologique 4. 4. Enceinte totalement tanche. Les lments dadmission et dvacuation de lair sont commands par un sas double porte. La manipulation se fait laide de gants fixs de faon tanche sur le devant de lenceinte.
VUE LATRALE
38
SCURIT BIOLOGIQUE1
Les micro-organismes se rpartissent en quatre groupes en fonction de facteurs tels que la pathognicit, la dose infectante, le mode de transmission, la gamme dhtes, lexistence de mesures prventives et lefficacit du traitement de la maladie quils provoquent. 1. Le groupe de risque 1 se compose dagents biologiques dont il est trs peu probable quil provoquent une maladie chez lhomme ou lanimal en bonne sant. (Risque nul pour les individus ou la communaut). 2. Le groupe de risque 2 se compose dagents pathognes qui provoquent une maladie chez lhomme ou lanimal mais dont il est peu probable quils prsentent un danger pour le personnel de laboratoire, la communaut, les animaux domestiques ou lenvironnement dans des circonstances normales. Les personnes exposes lors du travail au laboratoire sont rarement atteintes dune maladie grave. Il existe des mesures prventives et un traitement efficace et le risque de dissmination est limit. (Risque modr pour les individus, risque limit pour la communaut). 3. Le groupe de risque 3 se compose dagents pathognes qui provoquent habituellement une maladie grave chez lhomme et lanimal et ont un impact conomique important. Cependant, la transmission de linfection par simple contact dun individu lautre nest pas frquente. Les maladies que provoquent ces agents peuvent tre traites par des anti-infectieux ou des antiparasitaires. (Risque lev pour les individus, risque faible pour la communaut). 4. Le groupe de risque 4 se compose dagents pathognes qui provoquent habituellement une maladie trs grave chez lhomme ou lanimal, contre laquelle il nexiste souvent aucun traitement. Ces agents se transmettent facilement dun individu lautre, de lanimal lhomme ou inversement, directement ou indirectement, ou par simple contact. (Risque lev pour les individus, risque lev pour la communaut).
4. Le plancher de la pice doit tre plan et horizontal. 5. Lespace libre autour de lenceinte recommand par le fabricant doit tre respect. De mme, la hauteur de la pice doit tre vrifie (la hauteur sous plafond doit tre suffisante pour que le fonctionnement de lenceinte ne soit pas entrav). 6. Les enceintes de type B doivent possder une conduite dvacuation quipe de vannes de rgulation qui permettent disoler et de rguler le flux dair. 7. Les raccords pour larrive de gaz doivent tre situs proximit immdiate de lenceinte afin de faciliter le branchement sur les robinets de service. 8. Lenceinte doit faire lobjet dune certification annuelle pour vrifier quelle satisfait la norme NSF 49.
UTILISATION DE LENCEINTE DE SCURIT BIOLOGIQUE

Lutilisation correcte de lenceinte de scurit biologique implique le respect des instructions suivantes : 1. Planifier lavance le travail qui sera effectu dans lenceinte de scurit biologique. Dterminer quelles procdures et quel matriel seront utiliss. Coordonner lhoraire dutilisation de lenceinte avec les autres membres du personnel de laboratoire afin dviter les interruptions ou les alles et venues pendant que lenceinte est en service. 2. Allumer lenceinte. Si la lampe UV est allume, lteindre. Allumer le tube fluorescent et le ventilateur de lenceinte. Vrifier que les grilles avant et arrire ne sont pas obstrues. Prparer la zone de travail. Laisser lenceinte fonctionner pendant au moins 15 minutes. 3. Se laver les mains et les avant-bras avec un savon germicide. Mettre lquipement protecteur : blouse ou combinaison manches longues et poignets rglables, lunettes de protection et masque si le travail effectuer lexige. Prparer les surfaces internes de lenceinte en appliquant de lthanol 70 % ou un dsinfectant appropri, puis faire circuler lair. 4. Nintroduire et installer que les lments (matriels biologiques et appareillage) ncessaires pour le test ou la manipulation. Faire une distinction entre zones propres et zones sales. Disposer les lments de faon que les lments propres ne se mlangent pas ou ne se croisent pas avec les lments utiliss ou sales et nentravent pas la circulation de lair entre la grille avant et la grille arrire de lenceinte. Disposer un sac de scurit pour les dchets biologiques, un rcipient contenant du dsinfectant pour les pipettes et un conteneur pour les objets piquants ou tranchants. Eviter de placer des objets de grande taille ct les uns des autres. Aprs avoir dispos tout le ncessaire, il faut laisser le flux dair circuler dans lenceinte pendant environ 3 5 minutes pour liminer toutes les particules produites ou libres pendant lintroduction du matriel. 5. Commencer le travail. Introduire lentement les mains dans la zone de travail. Effectuer les manipulations en procdant de faon soigneuse et mthodique (des zones propres vers les zones potentiellement contamines). Tenir

Les conditions suivantes doivent tre remplies pour quune enceinte de scurit biologique fonctionne correctement : 1. Une zone de travail protge des courants dair provenant des fentres ou du systme de climatisation. Lenceinte doit galement tre situe lcart des zones de passage pour viter les courants dair qui pourraient nuire lintgrit du rideau dair lintrieur du dispositif. Il faut aussi vrifier que lenceinte nest pas installe ct dautres types de dispositifs tels que des hottes de chimie. 2. Une alimentation lectrique munie des quipements de contrle et de scurit ; la prise de courant doit tre relie la terre. 3. Une table solide et de niveau conue pour supporter le poids de lenceinte et permettant loprateur de travailler confortablement. Il doit y avoir un espace libre pour les pieds et la hauteur du plan de travail doit tre suffisante.
1
The Laboratory Biosafety Guidelines, 3rd. Edition-Draft, Health Canada, 2001.
39
6.
7.
8.
9.
les matriels au moins 10 cm de la grille avant. Essayer deffectuer les oprations les plus contaminantes et celles qui prsentent le plus de risques vers le fond de la zone de travail. Eviter dutiliser une flamme nue ou un briquet car cela perturberait la structure laminaire du flux dair et risquerait de brler le filtre. Eviter de retirer les mains de la zone de travail avant que toutes les oprations soient accomplies et que les matriels potentiellement dangereux soient limins dans le sac pour dchets biologiques ou dans les rcipients pour pipettes et pour objets piquants ou tranchants. Aprs avoir termin toutes les manipulations, nettoyer lenceinte en laissant lair circuler librement pendant 3 5 minutes. Dcontaminer toutes les surfaces, appareillage compris, ayant t en contact avec le matriel biologiquement contamin. Appliquer de lthanol 70 % ou un dsinfectant appropri et laisser scher. Soulever les objets et dsinfecter dessous. Couvrir les rcipients ouverts avant de les sortir de la zone de travail. Remettre le matriel et les appareils leur place (incubateur, autoclave, etc.). Jeter les gants et enlever lquipement protecteur. Evacuer les vtements et accessoires de protection selon la procdure en vigueur au laboratoire. Se laver les mains leau courante et au savon. Eteindre le ventilateur, le tube fluorescent, fermer louverture frontale et rallumer la lampe UV.
Avertissement : Lentretien des lments internes ne doit tre effectu que par un personnel qualifi ayant reu la formation requise (technicien de maintenance). Pour effectuer cet entretien, une dcontamination pralable est ncessaire et un quipement de protection personnelle doit tre port. Lentretien gnral dune enceinte de scurit biologique est dans lensemble simple raliser. Les procdures de routine et leur frquence sont dcrites ci-dessous :
Frquence : une fois par semaine

1. Dcontaminer la surface de travail et les surfaces internes de lenceinte avec de lthanol 70 %. 2. Nettoyer la fentre frontale en verre et la lampe UV laide dune solution de nettoyage domestique. 3. Vrifier la prcision de la lecture du manomtre qui indique toute baisse de pression du flux dair traversant le filtre HEPA. Inscrire la date et le rsultat dans le livre de bord de lenceinte.
Frquence : une fois par mois

1. Nettoyer les surfaces extrieures, surtout le devant et le dessus, avec un chiffon humide pour enlever la poussire. 2. Dsinfecter la surface de la partie basse avec de lthanol 70 % ou une solution dsinfectante approprie. 3. Vrifier ltat des robinets de service. 4. Effectuer les tches hebdomadaires selon le calendrier.
Note : En cas de fuite ou de projections lintrieur de lenceinte pendant le travail, il faut laisser celle-ci en marche et procder une dcontamination de la surface de tout le matriel souill. On vitera ainsi que des contaminants ne soient rejets par lenceinte.

1. Effectuer la procdure de certification conformment aux indications de la norme NSF 49. 2. Vrifier lintensit de la lampe UV1 avec un radiomtre. La remplacer si ncessaire. 3. Vrifier ltat du tube fluorescent. Le remplacer si ncessaire. 4. Effectuer les tches mensuelles selon le calendrier.
Dcontamination de lenceinte
La dcontamination de lenceinte de scurit biologique est une opration qui doit tre effectue avant tout travail dentretien ou de maintenance ncessitant louverture de ses surfaces ou composants internes. Chaque fois quune des procdures indiques ci-dessous doit tre ralise, lenceinte doit tre pralablement dcontamine. 1. Changement des filtres. 2. Excution de tests ncessitant un accs aux surfaces internes ou une ouverture de lenceinte. 3. Excution de tests de certification lorsque lenceinte a t utilise avec des agents biologiques classs dans les groupes de risque 2 ou 3. 4. Dplacement de lenceinte. 5. Projections de matriel biologique contenant des agents haut risque. La procdure de dcontamination la plus approprie doit tre dfinie par le responsable de la scurit industrielle et des risques professionnels. Dans lannexe G de la norme NSF 49 est dcrite la procdure de dcontamination par le paraformaldhyde dpolymris. Seuls des professionnels ayant reu la formation approprie doivent raliser de telles procdures.
Dmontage du plan de travail

Pour le dmontage du plan de travail, procder comme suit : 1. Dcontaminer le plan de travail avant de le dmonter. 2. Dvisser et enlever les vis de fixation situes sur la partie avant. 3. Dvisser, mais ne pas enlever, les vis de fixation situes sur la partie arrire. 4. Soulever la partie avant du plan de travail et enlever celui-ci en le tirant vers lavant de lenceinte. 5. Dcontaminer la partie intrieure du plan de travail. 6. Pour le remettre, suivre dans lordre inverse les tapes 2, 3 et 4.
Les lampes UV ont une capacit de rayonnement denviron 7500 heures. Certains fabricants conseillent de les remplacer une fois par an.
40
Remplacement de la lampe ultraviolets

Pour remplacer la lampe UV, suivre les instructions du fabricant. En gnral, la procdure est la suivante : 1. Allumer lenceinte et la laisser fonctionner pendant 5 minutes. 2. Relever la vitre avant en position maximum. 3. Dcontaminer les surfaces intrieures et la lampe UV. 4. Dbrancher lalimentation lectrique de lenceinte. 5. Dconnecter la lampe UV en la faisant pivoter de 90 degrs. Installer une lampe de rechange ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine. Sur certains modles, les lampes sont installes sur une plaque fixe sur la partie avant de lenceinte, et il faut dvisser et soulever cette plaque pour dgager le support de la lampe. Une fois cela fait, remplacer la lampe comme indiqu ci-dessus.
Maintenance spcialise
Au bout dun certain temps, lenceinte devra tre soumise une maintenance spcialise. On trouvera ci-dessous quelquesunes des procdures faire excuter selon le manuel technique du fabricant par une entreprise spcialise. 1. Certification annuelle conformment aux dispositions de la norme NSF 49. 2. Remplacement du moteur. En gnral, il comporte des roulements scells sans entretien et fonctionne par induction sous contrle de frquence (moteur asynchrone). Ce moteur na pas de charbons. (*)1 3. Remplacement des ventilateurs. (*) 4. Remplacement du filtre HEPA (*). La frquence de remplacement dpend de lutilisation de lenceinte et du systme de contrle de lenvironnement install dans le laboratoire. Sil y a un bon contrle des poussires, le filtre peut durer de nombreuses annes. 5. Rparation du systme de contrle lectronique : alarme de contrle du flux dair, position de la vitre frontale, contrles de la vitesse de lair. 6. Rparation ou nettoyage des vannes de rgulation du flux dair et des manchons de raccordement.
3. Test daugmentation de la temprature. Dtermine laugmentation maximale de temprature dans lenceinte lorsque le ventilateur et lclairage sont en marche. 4. Test de niveau sonore. Dtermine le niveau sonore de lenceinte pendant son fonctionnement. 5. Test dintensit lumineuse. Dtermine lintensit lumineuse au niveau du plan de travail de lenceinte. 6. Test de vibration. Dtermine le niveau de vibration lintrieur de lenceinte pendant son fonctionnement. 7. Test de protection du personnel, du produit et tests biologiques de contamination croise. Ce test dtermine si des arosols sont prsents dans lenceinte, si des contaminants extrieurs atteignent le plan de travail et si lenceinte rduit le taux darosols. 8. Test de stabilit. Dtermine si la structure de lenceinte est stable. Analyse la rsistance aux chocs latraux, la distorsion sous leffet dune force, au gauchissement et linclinaison du plan de travail sous leffet dune charge. 9. Test de vitesse du ux vertical. Dtermine la vitesse de lair qui se dplace verticalement vers le plan de travail. 10. Test de vitesse du ux entrant. Dtermine la vitesse laquelle lair entre dans lenceinte par louverture frontale et le volume dvacuation de lenceinte. 11. Test avec fumigne. Dtermine si le flux dair le long du primtre de louverture frontale se dirige vers lenceinte, et si le flux vertical descendant ne montre pas de lacunes ou de reflux vers le plan de travail. 12. Test de drainage. Dfinit la capacit du bac de rtention des claboussures situ sous le plan de travail. 13. Test de fonctionnement du systme moteur/ ventilateur. Dtermine si le systme fournit la pression statique ncessaire. 14. Test du systme lectrique. Dtermine sil existe un risque potentiel de dcharge lectrique. Mesure le courant de fuite, la polarit, le fonctionnement du disjoncteur courant de dfaut et la rsistance du circuit de mise la terre.
Certication de lenceinte
La procdure de certification des enceintes de scurit biologique est rgie par la norme NSF 49, qui sapplique toutes les enceintes de classe II. Cette norme dfinit les matriaux, les critres de conception, la construction, les paramtres de fonctionnement et les tests qui permettent de garantir la scurit et la capacit de lenceinte pour lusage prvu. On trouvera ci-dessous une liste de tests avec mention des normes requises. Pour tous dtails, il faudra se reporter aux normes. La procdure de certification comprend les tests suivants : 1. Test dtanchit lair. Seffectue sur les surfaces extrieures. Dtermine si tous les raccords, joints et soudures sont exempts de fuites. 2. Test de fuites des ltres HEPA. Dtermine lintgrit des filtres HEPA dentre et dvacuation, leur logement et leur cadre de montage.
EVALUATION FONCTIONNELLE (AUTRE OPTION)

Sil existe des enceintes de scurit biologique dans le laboratoire mais quaucun service autoris de certification nest disponible, le personnel charg de la maintenance a la possibilit deffectuer les procdures de rvision annuelle en se basant sur la norme NSF 49. Cette rvision, dment documente, doit attester avec un faible niveau dincertitude le bon tat et le fonctionnement normal de lenceinte.2 On trouvera ci-dessous les grandes lignes des contrles effectuer. 1. Evaluation de linstallation. Vrifier que les conditions dinstallation de lenceinte sont conformes aux recommandations du fabricant.
1 2
(*) Ces oprations ncessitent une dcontamination spcialise pralable. Lvaluation fonctionnelle repose essentiellement sur la prsence (dans ltablissement ou au niveau local) de techniciens et dingnieurs qualifis et expriments.
41
2. Evaluation oprationnelle. Vrifier si lenceinte fonctionne conformment ses caractristiques de conception et de fabrication. 3. Evaluation de performance. Vrifier la capacit de lenceinte offrir un espace de travail suffisant dans les conditions de travail normales et critiques.
On trouvera dans le tableau ci-dessous les paramtres prendre en compte lors de lvaluation fonctionnelle. Ils figurent en gnral dans les formulaires dinspection1 prpars cette fin.
Chaque tablissement a ses propres formulaires pour les registres de maintenance administratifs et techniques.
Tableau dvaluation fonctionnelle des enceintes de scurit biologique

Paramtres Identification de lenceinte par ltablissement ELECTRIQUES Voltage Amprage Moteur/ventilateur Eclairage Fluorescent Eclairage Ultraviolet Prise lectrique Interrupteurs Intgrit des cbles et raccords Alarmes PHYSIQUES Finition interne/externe Etat des filtres et prfiltres Joints/raccords Fentre coulissante OPRATIONNELS Vitesse du flux dair Niveau sonore Diffrentiel de pression dans le filtre HEPA PERFORMANCE Numration des particules Mthode dfinie dans la norme Federal Standard 209D. Ncessite un gnrateur de tension, un photomtre et un compteur de particules. Contrle de la vitesse selon la classe et le type denceinte. Ncessite un anmomtre. Ncessite un audiomtre. Mesurer la pression dans lenceinte avec un manomtre. Vrification visuelle. Vrification visuelle. Il ne doit pas y avoir de fuites, ni dans le matriau filtrant ni au niveau des joints. Vrification visuelle. Il ne doit pas y avoir de fuites. Vrification visuelle. Doit coulisser librement et conserver la position voulue. Mesure de la tension. Ncessite un voltmtre. Mesure de lamprage. Ncessite un voltmtre ou une pince ampremtrique. Vrification de la temprature de fonctionnement. Vrifier le niveau sonore et les vibrations. Confirmer que la lampe fonctionne. Confirmer lhoraire de fonctionnement des lampes et leur intensit lumineuse. Ncessite un radiomtre. Vrifier lintgrit, la qualit des contacts et les voltages disponibles. Contrler ltat et lintgrit. Vrification visuelle. Vrifier ltat et ltalonnage. Observation Marque, modle, type, srie, emplacement, code inventaire, date.
CONDITIONS DANS LE SECTEUR DINSTALLATION Temprature Humidit Propret Courants dair Ncessite un thermomtre : environ 20-22 C. Ncessite un hygromtre : environ 45-55 %. Doit tre satisfaisante. Il ne doit pas y avoir de courants dair susceptibles de nuire au fonctionnement de lenceinte.
42
GUIDE DE DPANNAGE1
PROBLME CAUSE PROBABLE SOLUTION Vrifier que lenceinte est raccorde une prise de courant et que le cble est correctement reli au botier lectrique de lenceinte. Vrifier que la prise de courant est alimente et que le coupe-circuit nest pas dsactiv (protection thermomagntique). Remettre les interrupteurs en marche. Remplacer la lampe. Utiliser une lampe ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine. Vrifier la connexion de la lampe. Remettre la lampe en position correcte. Contrler le fil conducteur de la lampe. Remplacer le ballast. Ouvrir la fentre en position de travail. Remplacer le bloc moteur du ventilateur. Contrler les connexions du moteur. Processus normal pendant la vie active du filtre. Vrifier que les grilles ne sont pas obstrues par du matriel. Vrifier quil ny a pas de blocage ou dobstruction dans la conduite dvacuation. Vrifier que le tuyau situ sous le plan de travail nest pas obstru. Vrifier que lenceinte est utilise conformment au mode demploi et aux bonnes pratiques. Tester le systme dvacuation et de reprise pour vrifier labsence dobstruction. Vrifier le secteur dinstallation de lenceinte et les procdures qui y sont effectues. Remplacer le filtre HEPA est procder la certification de lenceinte. Ni lclairage ni le systme de ventilation de Lenceinte est dbranche. lenceinte ne fonctionnent. La prise de courant nest pas alimente.
Le ventilateur fonctionne mais pas lclairage.
La lampe est dfectueuse. La lampe est mal connecte.
La protection thermomagntique du coupe-circuit est active. Reconnecter le coupe-circuit. Le fil conducteur de la lampe est dconnect. Le ballast de la lampe est dfectueux. Le ventilateur ne souffle pas mais la lampe fonctionne. La fentre frontale est ferme. Le moteur du ventilateur est dfectueux. Le moteur du ventilateur est dconnect. Le manomtre indique une augmentation de la dpression au niveau du filtre. La rtention de particules dans le filtre HEPA a augment. Il y a un blocage au niveau des grilles ou des fentes de reprise. La conduite dvacuation est obstrue. Il y a un blocage ou une obstruction sous le plan de travail. Il y a une contamination des chantillons manipuls dans lenceinte. Les modes opratoires sont incorrects. Obstruction au niveau des fentes de reprise ou blocage de la conduite dvacuation. Des facteurs extrieurs lenceinte affectent la circulation de lair lintrieur et provoquent une contamination. Le filtre HEPA est dfectueux.
Purifier Delta Series, Biological Safety Cabinets, Users Manual, Kansas City, Labconco Corporation, Part N 36960-20, Rev. A ECO B296.
43
DFINITIONS
Arosol. Suspension de fines particules solides ou liquides dans lair. Le diamtre moyen des particules se situe entre 104 et 107 cm. Certification. Procdure tablissant que le fonctionnement de lenceinte de scurit biologique satisfait aux normes et critres minimaux assurant une utilisation sans danger. La norme NSF 49 sapplique aux enceintes de classe II, types A, B1, B2 et B3. Dcontamination. Elimination ou destruction des agents infectieux ; limination ou neutralisation des agents toxiques. Enceinte de scurit biologique. Dispositif assurant des conditions de ventilation qui protgent lutilisateur, lenvironnement et lchantillon contre les arosols et microparticules associs la manipulation de matriels biologiques potentiellement infectieux dans le laboratoire et librs lors doprations telles quagitation, centrifugation, utilisation de pipettes et ouverture de rcipients sous pression. Aussi appele poste de scurit microbiologique. Entre dair. Air qui pntre dans lenceinte par louverture frontale et qui remplace lair vacu.. Filtre HEPA (filtre particules de haute efficacit). Filtre capable dliminer des particules de diamtre moyen 0,3 m avec une efficacit de 99,97 %. Ces filtres sont raliss en fibres de borosilicate agglomres au moyen dun adhsif rsistant leau. Le matriau filtrant est repli sur lui-mme lintrieur dun cadre afin daugmenter laire de filtration. Flux laminaire. Ecoulement non turbulent dun fluide visqueux (par exemple lair) en couches parallles. Le flux laminaire est ralis lorsque le nombre de Reynolds (Re) est infrieur 3000. Lumire ultraviolette (UV). Rayonnement lectromagntique dont la longueur donde se situe entre 200 et 390 nm. Elle est utilise dans les enceintes de scurit biologique pour ses proprits germicides. NSF. Sigle correspondant National Sanitation Foundation, organisation but non lucratif ddie la recherche, lducation et aux services, qui uvre la rsolution de problmes concernant ltre humain, la promotion de la sant et lenrichissement de la qualit de vie par la conservation et lamlioration de lenvironnement. Les normes NSF tablissent les critres de base pour la promotion de la salubrit de lenvironnement et la protection de la sant publique.. Plan de travail. Surface utilise pour excuter des travaux, manipulations ou autres activits lintrieur de lenceinte de scurit biologique. Toxique. Substance ayant des effets physiologiques indsirables sur les systmes biologiques.
44
Chapitre 7
Centrifugeuses
Code GMDN Code ECRI Dnomination 15115 15-115 Centrifugeuses sur pied, basse vitesse, non rfrigres, pour banque de sang
10778 15-117
Centrifugeuse sur pied, rfrigre
10778 15-116 Centrifugeuse sur pied
Le terme centrifugeuse vient des mots latins centrum qui signifie centre et fugere qui signifie fuir. La centrifugeuse utilise la force centrifuge produite par un mouvement rotatif pour sparer les constituants dun mlange. Il existe une vaste gamme de centrifugeuses adaptes aux besoins de lindustrie et de la recherche. Le prsent chapitre traite des centrifugeuses normalement utilises dans les laboratoires de sant publique et danalyses mdicales.
A QUOI SERT UNE CENTRIFUGEUSE

La centrifugeuse utilise la force centrifuge (force gnre lors de la rotation dun objet autour dun point fixe) pour sparer des solides en suspension dans un liquide par sdimentation, ou pour sparer des liquides de diffrentes densits. Les mouvements de rotation permettent de gnrer des forces beaucoup plus importantes que la pesanteur pendant des dures contrles. Au laboratoire, les centrifugeuses sont en gnral utilises pour des processus tels que la sparation, par sdimentation, dlments solides prsents dans des liquides biologiques, et en particulier des lments figurs du sang (globules rouges, globules blancs et plaquettes entre autres), et pour raliser de nombreux tests et traitements. Il existe plusieurs sortes de centrifugeuses. Les plus utilises en sant publique, pour la surveillance et dans les laboratoires danalyses mdicales sont la centrifugeuse de paillasse, lultracentrifugeuse, la centrifugeuse hmatocrite et la centrifugeuse sur pied ( poser sur le sol).
PHOTOGRAPHIE DUNE CENTRIFUGEUSE
Photo avec laimable autorisation de Beckman Coulter
Les centrifugeuses reprsentent une application pratique de la loi de Newton. Lorsquun corps de masse m tourne autour dun point central O, il est soumis une force centripte N dirige vers laxe de rotation avec une intensit rpondant la formule N = m2R, dans laquelle m est la masse du corps, R le rayon et la vitesse angulaire. Les centrifugeuses possdent un axe de rotation sur lequel est mont un rotor muni de compartiments destins recevoir les chantillons. La vitesse tangentielle est dfinie par la relation : VT=R.
45
Lorsque le systme tourne une vitesse de radians par seconde, les chantillons sont soumis la force centrifuge Fp de mme intensit que N mais de direction oppose. La figure ci-dessous1 prsente sous une forme schmatique cette notion, ses applications et le rsultat obtenu. La force Fp sexerce sur les particules prsentes dans la substance centrifuge, et les spare en fonction de leur diffrence de densit. Les particules les plus denses se dposeront au fond du tube dans un temps assez bref, tandis que les particules plus lgres ncessitent un temps plus long et se dposent au-dessus des particules denses. La relation entre lacclration de la force centrifuge 2r pour un rayon donn r et lacclration de la pesanteur g est connue sous le nom de force centrifuge relative ou FCR2.
2. Systme de rfrigration (sur les centrifugeuses rfrigres). 3. Systme de vide (sur les ultracentrifugeuses, non indiqu sur la figure). 4. Base. 5. Couvercle. 6. Botier. 7. Moteur lectrique. 8. Rotor. Il existe diffrents types de rotors. Les plus courants sont les rotors angle fixe, godets oscillants, tubes verticaux et tubes quasi-verticaux, qui seront dcrits ciaprs
r 2 RCF = g
La force centrifuge relative est loutil qui permet de comparer des rotors de diffrentes spcifications lorsquon recherche des effets de centrifugation quivalents.
Coupe transversale dune centrifugeuse (les numros correspondent aux lments dcrits ci-dessus)
5 1
ELMENTS DE LA CENTRIFUGEUSE
Les lments les plus importants dune centrifugeuse sont 3: Panneau de contrle, qui se compose en gnral des lments suivants : 1. Panneau de contrle, qui se compose en gnral des lments suivants : Interrupteur marche/arrt, rglage du temps de fonctionnement (minuteur), rglage de la vitesse de rotation (sur certaines centrifugeuses), rglage de la temprature (sur les centrifugeuses rfrigres), contrle des vibrations (mcanisme de scurit) et systme de freinage.
8 6 2
Figure 20. Le concept de force centrifuge

Force Centrifuge Fp Fp Vt m m m Vt Rotor Echantillon
N O
Fp N Vt m APPLICATION
N m
Fp
Densit
CONCEPT
RSULTAT
Les lois de Newton ainsi que lexplication du systme de coordonnes inertielles peuvent tre consultes dans les manuels de physique, chapitres sur le mouvement circulaire uniforme 2 FCR. Force Centrifuge Relative 3 Les numros identifiant chaque lment correspondent ceux qui figurent sur la coupe transversale de la centrifugeuse.
46
Types de rotors
Les centrifugeuses utilisent de nombreux types de rotors. Les plus couramment utiliss sont dcrits ci-dessous.
Type de rotor Rotors angle fixe.
Caractristiques Aussi appels rotors angulaires. Ce sont les rotors dusage courant. Les tubes sont maintenus un angle fixe spcifi, selon le modle, entre 20 et 45 degrs. On les utilise pour sdimenter des particules infracellulaires. Langle raccourcit la trajectoire des particules et le temps de sdimentation par rapport aux rotors godets oscillants.
Coupe transversale
Rotors godets oscillants.
Aussi appels rotors libres. On les utilise pour effectuer des tudes isopycniques (sparation par densit) et des tudes de sparation zonale (sparation par taille), lorsquune rsolution maximale des zones est requise pour un chantillon.
Position en rotation
Position au repos
Rotors tubes verticaux.
Aussi appels rotors verticaux. Avec ce type de rotors, les tubes restent parallles laxe de rotation. Il se forme donc des bandes parallles laxe des tubes et non sur leur longueur. On utilise ces rotors pour les tudes isopycniques et, dans certains cas, pour des sparations zonales, lorsquil est important davoir un temps de centrifugation court. Ces rotors utilisent des tubes spcialement conus.
Rotors tubes quasi-verticaux.
Ce type de rotor est destin la centrifugation en gradient de densit lorsque certains lments de lchantillon ne participent pas au gradient. La faible inclinaison de ces rotors rduit le temps de centrifugation par rapport aux rotors angle fixe.
47
Normalement, les fabricants spcifient les rotors utiliser dans les centrifugeuses en publiant des tableaux spcialiss qui contiennent les informations suivantes : 1. Type de rotor. Spcifie le type de rotor pour lequel linformation technique est fournie. 2. Capacit nominale du rotor. Dfinit la capacit en litres ou sous-multiples du litre. Par exemple : 6 litres ; 250 ml, etc. 3. Vitesse maximale. Indique la vitesse maximale laquelle ce rotor doit fonctionner, en tours par minute (RPM). 4. Force centrifuge relative maximale. (FCR) obtenue par ce type de rotor. 5. Facteur k, le coefficient de sdimentation, dfini par la formule :
2. Un environnement propre et sans poussire, avec un plancher ferme et horizontal. 3. Si la centrifugeuse est rfrigre, il faut laisser un espace libre sur le ct du condenseur pour que le transfert de chaleur puisse seffectuer correctement. 4. Une armoire de rangement pour les accessoires de la centrifugeuse, notamment les diffrents rotors.
Lentretien de routine dune centrifugeuse dpend de nombreux facteurs comme la technologie intgre, la frquence dutilisation, la formation des utilisateurs, la qualit de lalimentation lectrique et les conditions ambiantes. Les recommandations gnrales qui suivent concernent lutilisation correcte et lentretien courant ncessaires pour garantir un fonctionnement optimal. Les oprations effectuer en routine et les rparations spcialises dpendront des recommandations du fabricant pour chaque marque et modle. Il faut toujours dsinfecter la cuve du rotor, la tte de la centrifugeuse, les godets et les joints des tourillons avant toute intervention sur des centrifugeuses utilises pour prparer des chantillons biologiques ou infectieux. Recommandation prioritaire : Sassurer que seul un personnel qualifi, dment form et connaissant bien le mode demploi et les utilisations des centrifugeuses ainsi que les prcautions observer et les risques est affect leur emploi. Il incombe au directeur du laboratoire de superviser les oprations et de prendre les prcautions requises pour que le personnel manipulant les centrifugeuses soit parfaitement au courant de tout ce quimplique lutilisation de ces appareils.
k=
ln( rmax rmin ) 1013 2 3600
dans laquelle: = vitesse angulaire en radians par seconde rmax = rayon maximal en mm, mesur dans le tube de centrifugation rmin = rayon minimal en mm, mesur dans le tube de centrifugation Le temps ncessaire pour la sdimentation peut tre calcul en heures laide de ce facteur. 6. Informations sur la compatibilit du rotor avec dautres modles de centrifugeuses du mme fabricant. Les centrifugeuses de fabrication rcente ont reu des amliorations au niveau de la scurit et de la dure de vie oprationnelle. Il sagit entre autres de fonctions contrles par des microprocesseurs. Grce des logiciels pilots depuis un clavier, ces centrifugeuses possdent plusieurs programmes en mmoire. Selon le type de rotor utilis et la procdure choisie, ces programmes contrlent la dure de centrifugation, la temprature requise, la vitesse de rotation, lacclration et la dclration, et les alarmes destines avertir lutilisateur de toute anomalie de fonctionnement. Les fabricants ont galement intgr des moteurs induction (sans charbons) dans les centrifugeuses. Ceux-ci ont lavantage dassurer un contrle lectronique des courants et champs magntiques rgulant la vitesse de rotation, ce qui rduit la frquence dentretien. Pour le fonctionnement et lentretien de ces appareils, il est ncessaire de se conformer aux recommandations du fabricant.
RECOMMANDATIONS POUR UNE UTILISATION ET UN STOCKAGE APPROPRIS1 Rotors

1. Enregistrer la date dachat de chacun des rotors, avec les informations sur le modle et le numro de srie. 2. Lire et assimiler le manuel dutilisation du rotor, de lappareillage et des tubes avant dutiliser la centrifugeuse. Se conformer aux indications du fabricant en ce qui concerne lutilisation et lentretien de lappareil. 3. Nutiliser les rotors quavec les centrifugeuses pour lesquelles ils sont conus. Ne pas changer de rotors sans avoir vrifi leur compatibilit avec la centrifugeuse. 4. Enregistrer les paramtres de fonctionnement de chaque rotor dans un cahier de bord de faon dterminer sa dure de vie restante et pouvoir se procurer un rotor de rechange lorsque cela sera ncessaire. 5. Suivre les recommandations du fabricant concernant la vitesse maximale et la densit des chantillons. Chaque rotor est conu pour supporter un effort maximum, et les spcifications du fabricant doivent tre rigoureusement respectes.

Pour un fonctionnement normal des centrifugeuses, les conditions suivantes doivent tre remplies : 1. Une source dalimentation lectrique de capacit adapte lappareil, en courant monophas ou triphas stable (selon le modle et les spcifications du fabricant). En gnral, les centrifugeuses fonctionnent sous 110 V ou 220 V/60 Hz.
http://www.sunysb.edu/facilities/ehs/lab/cs.shtml
48
6. Suivre les recommandations concernant la rduction de la vitesse de rotation lorsquon travaille avec des solutions de densit leve dans des tubes en acier inoxydable ou des adaptateurs en plastique. Les fabricants fournissent les informations ncessaires. 7. En cas de travail frquent avec des solutions salines, utiliser des rotors en titane. 8. Protger le revtement du rotor pour viter de dtriorer la base mtallique. Ne pas utiliser de dtergents alcalins ou des solutions de nettoyage qui pourraient endommager le film protecteur. Les rotors, qui sont gnralement en aluminium, sont recouverts dune couche daluminium anodis qui protge leur structure mtallique. 9. Utiliser des brosses en plastique pour nettoyer les rotors. Les brosses mtalliques rayent le revtement protecteur, ce qui cre des points de corrosion. Celle-ci est acclre dans les conditions de fonctionnement et abrge la dure de vie oprationnelle du rotor. 10. En cas de projections de substances corrosives, laver immdiatement le rotor. 11. Scher le rotor lair aprs lavoir nettoy et rinc leau. 12. Stocker les rotors tubes verticaux et quasi-verticaux tte en bas et sans couvercle. 13. Stocker les rotors dans un lieu sec. Eviter de les laisser dans la centrifugeuse. 14. Stocker les rotors godets oscillants sans les couvercles. 15. Lubrifier les joints hlicodaux et les joints toriques selon les recommandations du fabricant. 16. Respecter les recommandations relatives la priode de garantie et la dure de vie de chaque type de rotor. 17. Eviter dutiliser des rotors dont la dure de vie est dpasse. 18. Utiliser un cran de protection lors de la manipulation de matriaux radioactifs. 19. Charger et dcharger les rotors dans une enceinte de scurit biologique en cas de travail avec des matriels correspondant au groupe de risque 2 ou plus. 20. Ne jamais essayer douvrir le couvercle dune centrifugeuse en marche et ne jamais essayer de freiner le rotor la main.
4. Vrifier si les tubes sont rutilisables ou non. Sils sont usage unique, ne les utiliser quune seule fois. 5. Pour la strilisation, il est ncessaire de vrifier dans quel matriau sont faits les tubes car tous ne supportent pas la strilisation par la chaleur. Les tubes de verre sont normalement striliss la vapeur 121 C pendant 30 minutes. 6. Stocker les tubes et flacons dans un endroit frais, sec, labri de la lumire et lcart de toutes vapeurs chimiques et sources de rayonnement ultraviolet. 7. Vrifier le niveau maximum de remplissage et la fermeture des tubes en verre mince pour viter quils ne se brisent dans le rotor sous leffet de la force centrifuge. Se conformer aux recommandations du fabricant.
Maintenance prventive
Avertissement : Ne jamais procder une intervention technique sur une centrifugeuse qui naurait pas t dcontamine au pralable. Les procdures de maintenance de routine les plus importantes effectuer sur une centrifugeuse sont les suivantes :

1. Vrifier que les lments externes de la centrifugeuse sont exempts de poussire et de taches. Eviter dclabousser le rotor. Nettoyer le compartiment du rotor avec un dtergent doux. 2. Vrifier que les mcanismes de connexion et dajustement du rotor sont en bon tat. Lubrifier les points recommands par le fabricant. 3. Vrifier le mcanisme de verrouillage et de scurit du couvercle de la centrifugeuse. Ce point est fondamental pour assurer la scurit de loprateur car ce mcanisme maintient le couvercle ferm pendant le fonctionnement du rotor. 4. Vrifier ltat de lubrification des lments tels que les joints toriques selon les recommandations du fabricant (frquence et type de lubrifiant). Les centrifugeuses de fabrication rcente sont quipes de roulements bille qui nont pas besoin dtre lubrifis. 5. Vrifier ltat des joints dtanchit.
Tubes
Les prcautions observer lors de la manipulation des tubes portent sur le remplissage, le choix de la temprature approprie, les limites de vitesse de centrifugation, le lavage et la strilisation. Les principales recommandations sont les suivantes : 1. Laver les tubes, adaptateurs et autres accessoires la main avec une solution 1:10 de dtergent doux dans leau et une brosse douce en plastique (pas de brosse mtallique). Eviter dutiliser un lave-vaisselle automatique. 2. Eviter dutiliser de lalcool et de lactone car ces produits altrent la structure des tubes. Le fabricants recommandent le solvant utiliser pour chaque type de tube de centrifugation. 3. Eviter de scher les tubes dans une tuve. Toujours les scher dans un courant dair chaud.

1. Vrifier que les cartes lectroniques sont propres et bien connectes. 2. Tester les commandes servant slectionner les diffrents paramtres de la centrifugeuse : vitesse, dure, temprature, les alarmes et les instruments analogiques et numriques. 3. Vrifier la conformit aux normes lectriques. Utiliser un testeur de scurit lectrique : rsistance de terre, courant de fuite. 4. Si la centrifugeuse est rfrigre, tester la temprature avec un thermomtre lectronique. La temprature ne doit pas varier de plus de 3 C. 5. Contrler lexactitude des commandes de temps de centrifugation. Utiliser un minuteur. Le temps mesur ne doit pas varier de plus de 10 % par rapport au temps programm.
49
6. Vrifier la vitesse relle de rotation par rapport la vitesse slectionne, en utilisant une charge normale. Le test seffectue laide dun tachymtre ou dun phototachymtre. Si le hublot nest pas transparent, suivre la procdure indique par le fabricant. 7. Vrifier le fonctionnement du systme de freinage. 8. Vrifier le fonctionnement du systme de rfrigration sur les centrifugeuses rfrigres. Les contrles les plus importants sont : a) Contrle des tempratures slectionnes. Elles ne doivent pas varier de plus de 3 C par rapport aux tempratures mesures avec un thermomtre lectronique. b) Vrifier ltat du filtre dentre dair. Sil est obstru, le nettoyer ou le remplacer par un filtre quivalent. c) Nettoyer soigneusement les ailettes du condenseur pour liminer la poussire et les impurets qui sy sont dposes. Cela permet de maintenir le taux de transfert de la chaleur conformment aux spcifications de lappareil. Si une anomalie est dtecte, appeler un technicien spcialis. Note : Eviter les projections de liquides sur les touches de commande. Presser les touches avec le bout des doigts. Eviter de presser les touches avec les ongles, ce qui risquerait de perforer la membrane de protection.
Tous les six mois :

Vrifier ltat des charbons du moteur, si la centrifugeuse est quipe dun moteur avec charbons. Remplacer les charbons si ncessaire par de nouveaux ayant les mmes caractristiques que les charbons dorigine. Rpter ce contrle tous les six mois.
Outils et instruments ncessaires

Pour procder aux inspections techniques normalement requises pour une centrifugeuse, les outils et instruments suivants sont ncessaires : 1. Une cl pour serrer et desserrer les boulons du rotor. 2. Un testeur de scurit lectrique ou un appareil de mesure du courant de fuite. 3. Un minuteur. 4. Un thermomtre lectronique avec une exactitude de 0,5 C pour les centrifugeuses rfrigres. 5. Un tachymtre ou un phototachymtre.
GUIDE DE DPANNAGE Rotors1

PROBLME Fortes vibrations. CAUSE PROBABLE Le rotor nest pas quilibr. SOLUTION Equilibrer la charge du rotor. Remplir tous les tubes opposs avec le mme niveau de liquide de mme densit. Rpartir symtriquement le poids des tubes opposs. Charger symtriquement les rotors angulaires ou verticaux. La vitesse choisie est proche de la plage de rsonance Choisir une vitesse de rotation en dehors de la plage du rotor. de rsonance. Le montage du rotor est incorrect. Les supports du rotor ne sont pas correctement lubrifis. Les couvercles du rotor, des cartouches ou de la cuve sont difficiles ouvrir aprs centrifugation. Il se produit un vide pendant la centrifugation. Les joints sont encrasss par de la poussire, des restes de lubrifiant sch ou des particules mtalliques.
1
Vrifier le montage du rotor. Vrifier quil est bien ajust. Lubrifier laxe de rotation selon les recommandations du fabricant, par exemple toutes les 250 centrifugations. Ouvrir la prise dair sur le dessus du rotor ou de la cuve pour casser le vide. Effectuer le nettoyage de routine des joints et les lubrifier. Utiliser les produits recommands par le fabricant.
Rotors and Tubes for Beckman Coulter J2, J6 and Avanti J series centrifuges, Users Manual, Palo Alto, California, The Spinco Business Center of Beckman Coulter, 2001.
50
Tubes
PROBLME Les tubes fuient. CAUSE PROBABLE Les couvercles sont mal fixs. Les tubes sont trop pleins. Le niveau maximal recommand est dpass dans les tubes ouverts. Un scellement est peut-tre dfectueux dans les tubes scellement rapide. Les tubes sont fissurs ou casss. Les tubes peuvent se casser ou tre fragiliss sils sont utiliss au-dessous des tempratures recommandes. Les tubes deviennent fragiles avec lge et lutilisation. SOLUTION Ajuster les couvercles. Le mnisque doit se situer plus bas pour viter les fuites. Vrifier le volume et la vitesse recommands pour la centrifugation. Appuyer lgrement aprs scellement chaud (seulement si le contenu nest pas affect). Si des fuites sont visibles, sceller nouveau. Si lchantillon est congel, le rchauffer 2 C avant de centrifuger. Tester le comportement des tubes basse temprature avant de centrifuger. Jeter les tubes prims et en utiliser de nouveaux.
Systmes divers
PROBLME Linterrupteur principal est sur ON mais la centrifugeuse ne fonctionne pas. CAUSE PROBABLE Lappareil nest pas aliment. SOLUTION Vrifier lalimentation lectrique. Mettre la centrifugeuse sur ON. Appuyer sur la poigne et ouvrir le couvercle. Equilibrer la charge. Mettre la centrifugeuse de niveau. Ajuster correctement le systme de fixation du rotor Vrifier lquilibrage de la charge centrifuger. Choisir une vitesse plus leve ou utiliser un autre type de rotor. Eteindre la centrifugeuse. Vrifier la tension et ltat des courroies. Les courroies doivent tre bien tendues. Eteindre la centrifugeuse. Vrifier ltat des charbons. Si cest la cause du problme, remplacer les charbons par de nouveaux ayant les mmes caractristiques que les charbons dorigine. Etalonner le rglage de la vitesse. Vrifier la slection de la temprature. Eteindre la centrifugeuse. Vrifier ltat des charbons. Remplacer les charbons par de nouveaux ayant les mmes caractristiques.
Le couvercle de la centrifugeuse ne souvre pas. La centrifugeuse est sur OFF. Le tmoin de dsquilibre est activ. Il y a des vibrations faible vitesse. La charge centrifuger nest pas quilibre. La centrifugeuse nest pas de niveau. Le mcanisme dajustement du rotor a du jeu. La charge nest pas quilibre. La vitesse choisie est proche de la frquence de rsonance du rotor. La vitesse de rotation est variable. Les courroies de transmission sont en mauvais tat (*).
La vitesse de rotation natteint pas la valeur slectionne.
Les charbons sont dfectueux.
Le rglage de la vitesse est mal talonn. La cuve est froide mais le rotor est chaud. Lindicateur dtat des charbons est allum. La temprature nest pas correctement slectionne. Les charbons sont en mauvais tat.
(*) Procdure valable pour les centrifugeuses quipes dun systme de transmission par courroies.
51
DFINITIONS
Charbon. Dispositif qui transmet lnergie lectrique entre lalimentation lectrique externe (cbles ltat statique) et les composants internes (en rotation) dun moteur. En gnral, les charbons sont raliss en graphite de structure trs souple et, dans les moteurs, doivent tre changs rgulirement (tous les six mois). Aussi appel balai. Densit. Voir Masse volumique. Force centrifuge. Force apparente gale et oppose la force centripte, tendant loigner un corps en rotation du centre de rotation et rsultant de linertie du corps. Cest lune des composantes du vecteur dinertie, qui est gal lensemble des forces agissant sur le corps. Son intensit est toujours gale [m x an] et sa direction est radiale, du centre vers lextrieur. Force centrifuge relative (FCR). Relation entre lacclration de la force centrifuge pour une vitesse et un rayon donns (r2) et lacclration normale de la pesanteur g. Elle se calcule par la formule : FCR = r2/g dans laquelle r = rayon en mm = vitesse angulaire en radians par seconde = (2 rpm)/60 g = acclration normale de la pesanteur = 9807 mm/s2 Masse volumique. Masse dun corps par unit de volume, gnralement exprime en grammes par cm3. Lorsque la masse volumique dun corps est rapporte celle de leau, on obtient la densit, exprime en valeur absolue.
D= m V
Radian. Unit de mesure angulaire gale langle qui sous-tend un arc de cercle de longueur gale au rayon du cercle. Il est exprim par le quotient de la longueur de larc que sous-tend un angle ayant sa pointe au centre du cercle par le rayon de ce cercle. Revtement anodis. Couche mince et dure doxyde daluminium, dpose sur la surface du rotor par un procd lectrochimique afin dempcher la corrosion. Le revtement reoit souvent une finition en diverses couleurs. Rsonance. Situation dans laquelle un systme mcanique vibre en rponse une force applique la frquence naturelle du systme. Sdimentation. Phnomne par lequel les particules dune suspension tombent au fond du milieu sous leffet de la pesanteur. Pendant la centrifugation, ce processus est acclr et les particules se dplacent en sloignant de laxe de rotation. Sparation isopycnique. Mthode de sparation des particules base sur leur densit de flottation. Il sagit dune sdimentation lquilibre. La vitesse dune particule due une diffrence de densit est donne par la formule
d 2 p c g v= 18
dans laquelle: v = vitesse de sdimentation (dr/dt) d = diamtre de la particule p = masse volumique de la particule c = masse volumique de la solution = viscosit du milieu liquide g = acclration de la pesanteur Vitesse angulaire. Vitesse de rotation dun corps mesure en radians par seconde. Elle se calcule par la formule : = (2 rpm)/60 rpm = tours par minute = constante valant 3,1416
52
Chapitre 8
Distillateur
Code GMDN Code ECRI Dnomination 40478 15-136 Units de distillation
Le mot distillateur vient du latin distillare, qui signifie vaporiser des liquides sous leffet de la chaleur. Le distillateur utilis au laboratoire, aussi appel appareil de production deau distille, purifie leau courante par un processus de vaporisation et de refroidissement contrls. Il transforme leau liquide en vapeur en lui appliquant de lnergie thermique par chauffage. Lors de la vaporisation, les molcules deau se sparent des autres molcules dilues ou mlanges dans la phase liquide. La vapeur deau est recueillie et passe dans un condenseur, o elle est refroidie et retourne ltat liquide. Leau condense est ensuite recueillie et stocke dans un rservoir spar. Leau distille prsente des caractristiques de puret suprieures celles de leau courante ; elle est pratiquement exempte de substances contaminantes.
A QUOI SERT UN DISTILLATEUR

Le distillateur facilite lobtention deau trs pure partir de leau potable normalement fournie par les services de distribution deau des centres urbains. Leau distille se caractrise par labsence de solides en suspension. Elle a de nombreuses applications dans les centres de sant, en particulier dans les laboratoires, les units de lavage et de strilisation, et dans les services de dittique. Plus les techniques de laboratoire utilises sont spcialises, plus le degr de puret exig est grand. Par exemple, la prparation de ractifs ou de produits biologiques exige une eau de la plus haute qualit. La distillation est lun des procds de base pour y parvenir (bien que dautres procds puissent tre galement exigs). Leau utilise dans les laboratoires doit tre exempte de pyrognes, avoir une teneur en solides totaux ne dpassant pas 1 ppm, un pH compris entre 5,4 et 7,2 et une rsistivit au moins gale 3 105 ohm/cm 25 C 1.
SCHMA DUN DISTILLATEUR
Warming cabinets, sterilizers, and associated equipment, Division 11 Equipment, USACE/NAVFAC/ AFCESA, UFGS-11710, July 2003.
Figure 21. Distillateur
1. Gnrateur de vapeur 2. Jauge de niveau deau 3. Vanne de rgulation 4. Raccordement au rseau de distribution 5. Eau en phase liquide 6. Rsistance immersion
7. Sortie de leau de refroidissement 8. Condenseur/colonne de distillation 9. Filtre au charbon actif 10. Eau distille
11. Arrive deau froide
53
C H A P I T R E 8 D I S T I L L AT E U R
Le fonctionnement du distillateur est bas sur un phnomne observ dans la nature et qui est le cycle de leau. Lnergie provenant du soleil chauffe leau des mers et ocans et en transforme une partie en vapeur deau. Cette vapeur se rassemble sous forme de nuages. Dans des conditions atmosphriques appropries, les nuages se refroidissent, et leau se condense et retourne la surface de la Terre sous forme de pluie.
Fonctionnement du distillateur
Le distillateur reproduit le phnomne naturel dcrit ci-dessus. La configuration et le modle de lappareil varient selon le volume deau distille que lon dsire obtenir. On trouvera ci-dessous une prsentation gnrale des lments dun distillateur et une explication de leur fonctionnement. 1. Gnrateur de vapeur. Aussi appel bouilleur, cet lment est le rcipient qui contient leau distiller. En gnral, il est branch sur une arrive deau qui permet de remplacer leau vapore et distille. Il est en gnral en verre dans les petits distillateurs, et en acier inoxydable avec revtement de cuivre, dtain ou de titane pour les units de grande capacit. Il peut tre quip de tmoins de niveau, de dbit et de qualit de leau dalimentation, qui protgent le distillateur en cas dirrgularits de lapprovisionnement. Comme source dnergie, il utilise la vapeur deau provenant dune chaudire ou dun gnrateur de vapeur, ou lnergie thermique de rsistances immersion qui se transmet leau par conduction directe. Ces processus font monter la temprature de leau jusqu ce que, dans les conditions normales (pression atmosphrique gale une atmosphre et acclration de la pesanteur gale 9,80665 m/s2), elle se transforme en vapeur 100 C. 2. Jauge de niveau deau. Dispositif qui permet de rguler la quantit deau dans le gnrateur de vapeur. Il est directement reli larrive deau qui alimente le distillateur. Lorsque la quantit deau en phase liquide contenue dans le bouilleur baisse, le dispositif permet de remplacer la quantit de liquide vapore. 3. Vanne de rgulation. Dispositif mcanique ou lectromcanique qui permet de rguler le dbit de leau entrant dans le gnrateur de vapeur. 4. Raccordement au rseau de distribution. Apporte leau en phase liquide au rservoir du gnrateur de vapeur. 5. Eau en phase liquide. Eau qui se trouve lintrieur du rservoir du gnrateur de vapeur. Elle reoit lnergie thermique des rsistances immersion et se transforme en vapeur lorsque les conditions de temprature et de pression requises sont remplies. 6. R s i s t a n c e s i m m e r s i o n . Aussi appeles thermoplongeurs. Dispositifs produisant de la chaleur lorsquils sont parcourus par un courant lectrique. Les rsistances sont isoles par une gaine en cramique et protges de lenvironnement externe par un cran mtallique. 7. Arrive deau froide. Tuyau damene de leau utilise pour condenser la vapeur deau en lui retirant de lnergie thermique (refroidissement).
8. Condenseur. Dispositif dans lequel la vapeur perd de lnergie thermique, se refroidit et retourne ltat liquide. Pour acclrer ce processus, on produit une convection force par une circulation de fluide basse temprature (air ou eau) autour de la tubulure (serpentin) o passe la vapeur deau. 9. Filtre. Les distillateurs possdent des filtres au charbon actif situs la sortie du condenseur ou du collecteur. Ces filtres liminent les odeurs ou les particules qui pourraient se trouver dans le condensat. 10. Rcipient eau distille. Dispositif dans lequel le liquide ayant achev le processus de distillation (distillat) est recueilli. Leau distille doit tre stocke dans des rcipients spciaux en matire plastique pour viter une contamination par des ions. On utilise gnralement des rcipients en polythylne, polypropylne ou polyttrafluorthylne.

Selon le modle, la capacit et le type de distillateur, les conditions dinstallation peuvent varier. Le plus souvent, il faut : 1. Un environnement bien ventil dans lequel lappareil puisse tre install. En effet, le distillateur transfre de la chaleur dans tout fluide et lve la temprature de la zone o il est install. Il est ncessaire de laisser un espace libre autour de lappareil pour permettre lair de circuler. Certains distillateurs sont monts dans un chssis mtallique et doivent tre installs sur un support permettant lair de circuler dessous. 2. Un raccordement au rseau deau potable. En gnral, le tuyau de raccordement a un diamtre denviron 1,25 cm. Pour assurer un bon fonctionnement, il faut vrifier la qualit de leau alimentant le distillateur afin de dterminer sil est ncessaire dinstaller un systme de traitement1 pour viter les dpts et le tartre dans le rservoir du gnrateur de vapeur et sur les rsistances immersion. On utilise leau potable pour alimenter le gnrateur de vapeur et pour rfrigrer le condenseur2. 3. Un systme de distribution de leau distille. Leau distille produite est dabord recueillie dans un rcipient de stockage. Dans les appareils de grande capacit, elle est distribue partir de ce rservoir vers les postes dutilisation au moyen dun rseau. Dans les appareils de taille rduite ou moyenne, elle est transvase dans dautres rcipients partir desquels elle est prleve par les utilisateurs. 4. Un tuyau de vidange. On lutilise pour vider dans un vier situ proximit de lappareil les impurets qui peuvent saccumuler dans le rservoir du gnrateur de vapeur.
Le traitement de leau vise liminer les substances normalement prsentes dans leau du fait de son pouvoir de dissolution lev. En gnral, il sagit dions inorganiques (anions et cations) tels que bicarbonates, sulfites, chlorures, calcium, magnsium, sodium, potassium, fer, nitrates et de traces de nombreux autres ions. 2 Certrains fabricants refroidissent le condenseur au moyen de ventilateurs qui font circuler lair sur les ailettes du condenseur, ce qui produit un transfert de chaleur par convection force entre la surface diffusante et lenvironnement.
54
5. Un raccordement lectrique quip des dispositifs de contrle et de scurit requis, rpondant aux normes lectriques nationales et internationales en vigueur dans le laboratoire, et adapt la capacit des lments rsistifs du distillateur. En gnral, le circuit est aliment en 220-240 V, 50/60 Hz. Note : Toujours vrifier les recommandations du fabricant concernant linstallation du distillateur afin dassurer que celuici fonctionne conformment aux spcifications.
10. Ajouter de leau propre, laver et vidanger jusqu ce que le produit chimique et les rsidus de tartre soient entirement limins. 11. Remettre le couvercle en place. 12. Remettre le panneau avant ou refermer la porte de lappareil. 13. Faire fonctionner lappareil normalement
Avertissement : La solution utilise pour liminer le tartre ne doit en aucun cas tre distille.
Lentretien de lappareil dpend du modle et de sa capacit. Les procdures dentretien et de maintenance dcrites cidessous sappliquent un distillateur quip dun gnrateur de vapeur en acier inoxydable avec rsistances immersion et dun condenseur rfrigr par un ventilateur soufflant de lair sur les ailettes ou dans lespace entre les ailettes. Avertissement : Avant deffectuer une inspection ou un entretien de routine, vrifier que le distillateur est teint (interrupteur sur OFF) et dbranch.
Remplacement du ltre au charbon actif Frquence : tous les trois mois

Normalement, le filtre au charbon actif est immerg au-dessous du systme de distribution qui se trouve en aval du rcipient de stockage de leau distille. Il est mont sur un logement install dans la conduite de distribution deau distille. En gnral, il sagit dun dispositif facile remplacer. La procdure est habituellement la suivante : 1. Dvisser le dessus du filtre. 2. Enlever llment filtrant usag. 3. Monter un nouvel lment filtrant ayant les mmes caractristiques que llment dorigine. 4. Remettre en place le dessus du filtre. Avertissement : Le filtre est ajust dans son logement au moyen de joints toriques ou de joints dtanchit qui doivent tre soigneusement remis en place dans leur rainure pour viter les fuites deau distille.
Inspection et nettoyage du rservoir du gnrateur de vapeur Frquence : une fois par mois
1. Enlever le panneau de protection ou ouvrir la porte permettant laccs au bouilleur (gnrateur de vapeur). 2. Enlever le couvercle du bouilleur. 3. Vrifier par examen visuel si les parois internes du rservoir ou les rsistances sont entartres ou sil y a des dpts de matires solides. La quantit de tartre dpend de la qualit de leau dalimentation du distillateur. Sil y a une accumulation de tartre, il faut lenlever pour viter dendommager les rsistances1. 4. Enlever les dpts de tartre. En gnral, il faut pour cela utiliser un produit chimique spcialement conu pour le dtartrage. Ce produit doit tre slectionn en fonction des caractristiques de leau utilise, qui seront dtermines par une analyse chimique. 5. Vidanger leau du rservoir du gnrateur jusqu ce que son niveau se trouve environ 10 cm au-dessus de la hauteur de la jauge de niveau deau ou des rsistances (vrifier que le niveau deau se situe au-dessus de la base du rservoir pour assurer que tous les lments restent immergs). 6. Ajouter le produit chimique recommand pour la qualit deau utilise. 7. Bien mlanger. 8. Laisser le produit chimique agir jusquau lendemain ou selon les instructions du fabricant. 9. Le lendemain matin, vidanger le contenu du rservoir.
1
Nettoyage du condenseur Frquence : une fois par an

1. Pour nettoyer le condenseur, il est ncessaire denlever les panneaux de protection ou douvrir la porte de lappareil pour avoir accs au condenseur. 2. Vrifier que le distillateur est dbranch. 3. Enlever le condenseur. Dconnecter le systme de raccordement lentre de vapeur et le raccord entre le condenseur et le rcipient de stockage de leau distille. 4. Dfaire les vis de fixation du ventilateur au condenseur. Dconnecter le ventilateur. 5. Retirer le ventilateur et enlever la poussire accumule sur les pales. Lubrifier laxe de rotation avec de lhuile minrale (deux gouttes). 6. Retirer le condenseur. Aspirer la poussire et les impurets accumules sur les ailettes. On peut aussi utiliser de lair comprim ou une brosse trempe dans de leau savonneuse. 7. Rincer les diffrentes parties. 8. Scher. 9. Rassembler en suivant lordre inverse des oprations.
Les sels minraux dposs sur la gaine des rsistances sont particulirement mauvais conducteurs de la chaleur et empchent le transfert efficace de la chaleur entre la rsistance et leau lors du processus de distillation. Cela provoque une augmentation de la temprature de la rsistance au-dessus de sa temprature normale de fonctionnement, ce qui risque de lendommager.
55
C H A P I T R E 8 D I S T I L L AT E U R
Strilisation du rcipient de stockage de leau distille
Frquence : de temps autre

Avant dutiliser un nouveau distillateur deau, il est recommand de sassurer que le rcipient de stockage de leau distille est strile et propre. Pour effectuer la strilisation, utiliser une mthode chimique, par exemple avec de leau de Javel ou autre solution chlore. Procder comme suit : 1. Vrifier que linterrupteur principal est sur OFF. 2. Ouvrir le panneau avant pour accder au rcipient de stockage de leau distille. 3. Retirer le filtre au charbon actif de son logement. 4. Prparer une solution deau de Javel la concentration de 200 ppm et lajouter dans le rcipient de stockage. 5. Laisser la solution agir pendant au moins trois heures. 6. Vider le rcipient de stockage par le tuyau de vidange. 7. Allumer le distillateur et le faire fonctionner jusqu ce que le rcipient de stockage deau distille soit plein. 8. Vider de nouveau le rcipient de stockage. 9. Remettre le filtre au charbon actif sa place. 10. Faire fonctionner le distillateur pour remplir le rcipient deau distille. Le filtre au charbon actif liminera tous les rsidus de chlore qui pourraient se trouver dans leau distille.
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Le distillateur ne produit pas deau distille. CAUSE PROBABLE Il ny a pas dalimentation lectrique. SOLUTION Vrifier que le cble dalimentation lectrique est correctement branch. Vrifier quil y a du courant dans le circuit lectrique qui alimente le distillateur. Vrifier que linterrupteur principal est sur ON. Contrler quil y a de leau dans le gnrateur de vapeur ou le bouilleur. La rsistance immersion est hors service. Vrifier lintgrit de la rsistance immersion. Mesurer le passage du courant lectrique ou la rsistance en ohms. Remplacer la rsistance par une autre ayant les mmes caractristiques. Contrler le filtre pour vrifier quil est bien install et que leau passe au travers. Vrifier que le rcipient de stockage du distillat est bien positionn. Vrifier que le dispositif de vidange ne fuit pas. Il y a de la vapeur autour du distillateur. La ventilation du distillateur est insuffisante. Vrifier quil y a un espace libre autour du distillateur et derrire. Vrifier quaucun objet ne gne la circulation de lair autour du distillateur. Enlever tout objet gnant la circulation de lair. La ventilation du systme de rfrigration ne fonctionne pas. Leau distille a une odeur. Le filtre charbon est us. Vrifier ltat du ventilateur. Sil est sur ON et ne fonctionne pas, le remplacer par un autre ayant les mmes caractristiques. Remplacer le filtre charbon actif.
Il y a de leau autour du distillateur.
Le montage du distillateur ou de certains de ses lments est dfectueux.
56
DFINITIONS
Distillation. Processus au cours duquel un fluide en phase liquide est chauff jusqu ce quil soit transform en vapeur puis refroidi et condens pour retourner ltat liquide. La distillation sutilise pour sparer des substances en mlange en exploitant leur diffrence de volatilit. Pour obtenir des substances trs pures, des cycles conscutifs de distillation sont effectus afin dliminer progressivement les autres substances prsentes dans le mlange. Duret de leau.Caractristique chimique de leau dtermine par sa teneur en carbonate, bicarbonate, chlore, sulfate et parfois nitrate de calcium et magnsium. Une eau dure ne convient pas pour certains processus. Il existe deux types de duret de leau. Duret temporaire. Elle est dtermine par la teneur en carbonate et en bicarbonate de calcium et de magnsium. On peut lliminer en faisant bouillir leau et en filtrant le prcipit. On lappelle aussi duret carbonate. Duret permanente. Elle est dtermine par lensemble des sels de calcium et de magnsium lexception des carbonates et bicarbonates. On ne peut pas lliminer en faisant bouillir leau. On lappelle aussi duret non carbonate. Interprtation de la duret : Teneur en CaCO3 en mg/l 0-75 eau douce 75-150 eau mi-dure 150-300 eau dure >300 eau trs dure Dans leau potable, la limite maximale autorise est de 300 mg/l. Dans leau destine aux appareils de chauffage, la limite est de 0 mg/l. Duret calcium . Quantit de calcium prsente dans leau. Duret magnsium . Quantit de magnsium prsente dans leau. Duret totale ou titre hydrotimtrique (TH). Quantit de cations calcium (Ca) et magnsium (Mg) en solution, quelle que soit la nature des anions prsents dans leau. Elle est exprime en ppm (parties par million) de carbonate de calcium (CaCO3). Solution. Mlange liquide homogne de deux ou plusieurs substances, caractris par labsence de ractions chimiques entre ses constituants. On appelle solvant le constituant prsent dans la proportion la plus grande et solut celui qui est prsent en plus petite quantit. Tartre. Nom donn aux solides en suspension qui se dposent en couches la surface des rcipients de stockage de leau. Aussi appel dpt de calcaire
57
Chapitre 9
Diluteur
Code GMDN Code ECRI Dnomination 15133 15-133 Diluteurs
Le diluteur est utilis pour diluer des substances. Le mot diluteur vient du latin diluere qui signifie ajouter du liquide une solution. Les solutions sont dfinies comme des mlanges homognes de deux ou plusieurs constituants qui peuvent tre gazeux, liquides ou solides. Diluer correspond rduire la concentration dun liquide dans un solvant, en gnral dans leau. Le diluteur facilite la prparation des mlanges liquides, jusqu ce quils atteignent une proportion (concentration) adapte lutilisation dans diffrentes techniques de diagnostic. Ce type dappareil est dsign sous le nom de diluteur, un anglicisme pour dilueur dont lusage sest gnralis au laboratoire.
A QUOI SERT UN DILUTEUR

Un diluteur sert prparer des mlanges de substances de faon atteindre des concentrations dtermines, de la mme faon quavec une pipette, mais avec lavantage de bnficier dun processus automatis ou programm. Il existe des diluteurs de capacit et de complexit variable. Leur capacit dpend du modle et du fabricant. Ils peuvent contrler des volumes connus compris entre 25 l (microlitres) et 25 ml (millilitres).
SCHMA DUN DILUTEUR
Figure 22. Schma dun diluteur
Panneau de contrle Propulseur Distributeur
59
C H A P I T R E 9 D I LU T E U R
Le diluteur se compose de divers lments qui interagissent de manire coordonne pour manipuler des liquides et mlanger des volumes avec une grande prcision, ce qui permet de prparer des solutions connues en quantits allant de 1 l 25 ml. Le diluteur se compose en gnral des lments suivants : 1. Un systme de propulsion 2. Un systme de contrle 3. Un systme de distribution Le contrle du dplacement des pistons facilite le contrle des volumes manipuls. Le systme de dplacement est activ par un moteur lectrique qui met en mouvement un systme mcanique trs prcis pour modifier la position du piston. Une srie de valves contrlant le processus daspiration et de distribution complte les seringues et leur systme de dplacement. La configuration du diluteur dpend du modle et du fabricant.
Systme de contrle Systme de propulsion

Il est gnralement constitu dun systme dplacement positif comme on en trouve dans les seringues. Le diluteur utilise une ou plusieurs seringues interchangeables (de capacit variable) pour contrler le volume mlanger ou diluer. Le piston des seringues est dplac par un mcanisme qui contrle sa position. Les volumes aspirs ou dlivrs se calculent par la formule : V = AI dans laquelle: V = 0 fraction du volume dlivr par la seringue lorsque le dplacement du piston est gal I A = aire du piston. Le volume total aspir ou dlivr est donn par lintgrale correspondante : Les diluteurs modernes ont un systme de contrle automatique ou command par microprocesseur. Le microprocesseur permet de slectionner et de contrler les paramtres suivants : 1. Processus de mlange et/ou de dissolution de substances (programmable) 2. Distribution de volumes prdfinis 3. Vitesse de distribution ou daspiration 4. Nombre de cycles requis 5. Calibre ou capacit (volume) des seringues 6. Temps 7. Cycles damorage et de nettoyage 8. Procdures de contrle de la qualit Pour donner une ide plus claire de la complexit technique de ce dispositif, la figure ci-dessous montre un schma du systme de contrle command par microprocesseur avec laffichage de certaines des fonctions du diluteur. Les commandes de ce type de dispositif sont en gnral symtriques sil y a deux systmes dinjection.
V = A l lF
l1
dans laquelle lo et l1 correspondent aux positions qui dfinissent le dplacement du piston.
Figure 23. Commandes du diluteur
Ecran de linjecteur gauche
Ecran de linjecteur droit
Calibre de la seringue droite
Rglage du calibre de la seringue droite
Rglage du volume
Rglage de la vitesse de linjecteur droit Touches de rglage des paramtres (augmenter, diminuer) Slecteur de mode de fonctionnement
Interrupteur principal
60
Systme de distribution
Le systme de distribution se compose dune srie de seringues de haute prcision et de dispositifs appels doseurs au moyen desquels les liquides sont dlivrs selon le volume et la vitesse choisis. Les seringues sont choisies et montes sur le diluteur en fonction de la densit, de la viscosit et du volume des liquides manipuler. Les liquides circulent dans des tuyaux flexibles dont le diamtre, la longueur et la compatibilit chimique sont dfinis au cours du processus de fabrication pour tre adapts lactivit prvue. Ces tuyaux sont connects au moyen de raccords ajustables manuellement. Normalement, les seringues sont classes en fonction de leur utilisation (par exemple, seringues pour ractifs, pour diluants, pour chantillons) et des volumes manipuler. Le tableau ci-dessous montre un exemple de la faon dont elles sont classes en fonction de leur calibre et des volumes manipuls. Le schma montre les lments du systme de distribution (seringue et doseur).
Figure 24. Seringue et doseur

Seringue
Doseur
Lentretien de routine consiste essentiellement liminer les contaminants qui pourraient saccumuler dans le mcanisme et/ou les tuyaux en contact avec les liquides manipuls. Les tches les plus courantes sont :

Le diluteur doit tre install sur une paillasse ou un plan de travail propre, sec et parfaitement horizontal, loin de toute source de vapeurs pouvant nuire son fonctionnement. Il faut prvoir un espace libre autour de lappareil pour faciliter la ventilation et le passage des cbles, raccords et tuyaux reliant le diluteur aux rservoirs de solvants, aux ordinateurs et aux systmes de distribution. Lespace libre autour du diluteur doit tre denviron 10 cm. Il doit y avoir une prise de courant 220-240 V/50-60 Hz en bon tat et relie la terre, ou 115 V/60 Hz, selon les spcifications du fabricant et/ou les normes lectriques en vigueur dans le pays.
Nettoyage des surfaces extrieures Frquence : une fois par jour

Avertissement : Dbrancher le diluteur de la prise de courant avant de commencer le nettoyage extrieur. 1. Nettoyer les surfaces extrieures avec un chiffon propre imbib dun dtergent doux mlang de leau. 2. Frotter doucement les surfaces du diluteur et de ses accessoires. 3. Scher les surfaces traites. Avertissement : Eviter que lhumidit ne pntre dans le compartiment des composants lectriques et lectroniques.
Tableau des calibres et volumes des seringues

N darticle (selon le fabricant) selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr.
1
Modle (selon le fabricant) selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr. selon fabr.
Volume de la seringue 25 l 50 l 100 l 250 l 500 l 1 ml 2,5 ml 5 ml 10 ml 25 ml
Intervalle utile (volume manipul) 2,525 l 550 l 10100 l 25250 l 50500 l 1001 000 l 2502 500 l 5005 000 l 1 00010 000 l 2 50025 000 l
Calibre1
Solution aqueuse Liquides visqueux
18 18 18 18 18 18 18 12 12 12
18 18 18 18 18 18 12 12 12 12
Table 2.4, Microlab 501A, 503A, 504A, Users Manual, Hamilton Company.
61
Nettoyage des seringues et tuyaux

Avertissement : Si le diluteur a t en contact avec des substances dangereuses, respecter les procdures de scurit et de prvention en vigueur dans le laboratoire.

1. Alimenter le systme avec une solution de nettoyage. Sadresser au fabricant pour savoir quelle solution utiliser. Vrifier que tous les lments du systme sont en contact avec la solution et que les bulles dair ont t limines. Ce processus est appel amorage. Pour alimenter le systme, on relie le diluteur un rcipient contenant la solution de nettoyage. Une fois lamorage termin, on vide la solution dans un autre rcipient en attendant de lliminer. 2. Nettoyer le systme. Pour effectuer le nettoyage, on fait circuler un liquide qui complte la solution de nettoyage (suivre les recommandations du fabricant). On utilise couramment de leau dsionise comme liquide de nettoyage. Selon les substances traites dans le diluteur, dautres agents de nettoyage peuvent tre utiliss, par exemple lthanol, lure ou une solution deau de Javel 10 % dans leau dsionise.
3. Effectuer un cycle de remplissage ou damorage jusqu ce que les tuyaux soient propres. 4. Retirer le tuyau de remplissage de la solution de nettoyage et le plonger dans un rcipient contenant de leau dsionise. Refaire un cycle de remplissage ou damorage jusqu ce que le trajet du liquide ne contienne plus de solution de nettoyage. Jeter le liquide et rincer le rservoir de vidange. 5. Arrter le cycle de remplissage. 6. Mettre le systme de propulsion en position de repos. 7. Utiliser le systme maintenant propre et prt lemploi.
Procdure pour le stockage du diluteur Frquence : chaque fois que le diluteur doit tre stock pendant une dure prolonge
1. Purger et amorcer le systme avec du mthanol (facilite le schage). 2. Enlever les tuyaux et les seringues. 3. Stocker les seringues dans leur tui de protection dorigine. 4. Couvrir le corps du diluteur pour le protger de la poussire. 5. Ranger lappareil.
Nettoyage du systme hydraulique Frquence : avant la premire mise en service

1. Prparer un rcipient de solution de nettoyage et y plonger le tuyau de remplissage (les fabricants recommandent dutiliser des agents de nettoyage compatibles avec le diluteur). 2. Plonger le tuyau de vidange dans le rservoir de vidange.
Contrle de qualit
Le contrle de qualit applicable aux diluteurs est le mme que pour les pipettes. En cas de doute, se reporter aux explications concernant ltalonnage dans le chapitre 16 sur les pipettes
62
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Le diluteur ne sallume pas. CAUSE PROBABLE Il y a un dfaut dans lalimentation lectrique. Lalimentation est dconnecte. Le fusible a saut. Le diluteur fonctionne bien, mais aucun message ni indication ne saffiche sur lcran. Les touches de commande ne fonctionnent pas. Le diluteur est obstru. Lcran LCD est peut-tre endommag, ou les diodes de lclairage DEL sont dfectueuses. Le diluteur est en mode Pause. Il y a une erreur interne. SOLUTION Vrifier le raccordement lectrique. Brancher le cble dalimentation lectrique. Vrifier le fusible. Sil a saut, le remplacer par un fusible quivalent. Vrifier que le panneau de contrle est bien connect au systme de propulsion. Appeler le service technique du fabricant. Appuyer sur la touche dmarrage/fin (START/END) pour achever le dplacement du piston. Appuyer sur la touche dmarrage/fin (START/ END) pour achever le dplacement du piston et redmarrer le cycle. Appeler le service technique du fabricant si le dfaut persiste. Le diluteur naspire pas et ne dlivre pas de liquide. Les tuyaux du systme hydraulique sont dfectueux ou bouchs. Le raccordement des tuyaux et des seringues est incorrect. Le systme de propulsion est dfectueux. Les valves sont dfectueuses. Vrifier que les tuyaux, seringues et raccords ne sont pas bouchs. Les nettoyer ou les remplacer. Vrifier que les tuyaux, joints, raccords et seringues sont bien ajusts. Appeler le service technique du fabricant. Enlever les valves. Vrifier que leurs joints sont propres et les remettre en place. Si ncessaire, remplacer par une valve quivalente. Vrifier que les tuyaux dalimentation sont compltement immergs dans les rcipients qui contiennent les ractifs. Vrifier que les diffrents raccords sont bien ajusts. Vrifier que les seringues sont correctement installes et quil ny a pas de fuites. Tester le circuit pour vrifier quil ny a pas de fuites au niveau des tuyaux et des valves. Rduire la vitesse de fonctionnement de la seringue pour liminer les problmes de cavitation. Le tuyau de distribution nest pas correctement choisi Vrifier le calibre recommand pour le tuyau et ses par rapport au volume de la seringue. raccords. Pour les petits volumes, se conformer aux dimensions recommandes par le fabricant. Une bulle dair apparat sur la pointe de la sonde aprs la dernire aspiration. Il y a de lair en permanence ou des fuites en permanence sur le circuit de liquide. Le tuyau daspiration est sale. Le mode daspiration est incorrect. Il y a des cavitations dans le systme. La vitesse daspiration est trs leve. Les raccords sont mal ajusts, uss ou dfectueux. Remplacer ou nettoyer le tuyau daspiration. Rduire la vitesse daspiration. Rduire la vitesse du systme de propulsion. Se souvenir que plus les liquides sont visqueux, plus la vitesse de propulsion doit tre faible. Ajuster les raccords la main. Remplacer les tuyaux par de nouveaux ayant des dimensions correspondant aux liquides manipuls. Remplacer le piston ou la seringue. Remplacer la valve. Contrler la ventilation. Vrifier la climatisation de la pice. Utiliser le diluteur de faon moins intensive.
Le diluteur ne donne pas de rsultats prcis.
Il y a de lair dans le circuit de liquide.
Le piston est dfectueux ou la seringue est endommage. Une des valves est dfectueuse. Le diluteur chauffe. La ventilation est insuffisante. La temprature de la pice est trop leve. Le cycle de travail est trs intense.
63
DFINITIONS
Cavitations. Phnomne qui se produit dans un liquide lorsquil se forme un vide pendant lvacuation dun rcipient. La pression diminue jusqu atteindre la tension de vapeur du liquide. Cela entrane divers phnomnes comme la vaporisation de gaz dissous dans le liquide ou, dans le cas de leau, la formation de bulles de vapeur qui clatent en un temps infinitsimal, causant des perforations dans leur voisinage immdiat la surface des tuyaux. Ce phnomne se produit dans les diluteurs lorsquon utilise des seringues de grand volume avec une vitesse de propulsion leve. Concentration. Mesure de la quantit dune substance chimique prsente dans une solution. Cette notion est exprime par la quantit dune substance dissoute dans un solvant. La concentration sexprime de diverses faons, les plus courantes tant la molarit (M), la molalit (m), la normalit (N), et le taux de solut en pourcentage. Dilution. Rduction de la concentration dune solution par laddition dautres liquides. Le liquide ajout est appel le diluant. Addition de molcules dune substance liquide aux molcules dune autre substance liquide. Pour dterminer le volume V1 de liquide ncessaire pour obtenir le volume V2 la concentration C2 partir dune solution de concentration C1, on applique la formule :
V 2C 2 C1 Dissolution. Processus par lequel un produit chimique sous forme solide est dissous dans un solvant (par exemple de leau ou un autre liquide). Le produit chimique mis en solution est appel le solut. V1 =
Distributeur. Dispositif utilis pour distribuer des liquides. Dosage. Distribution dun liquide en volume constant ou sous forme dune progression. Equivalent en poids (EP) (dune substance). Rsultat de la division du poids molculaire (PM) par la valence. EP=PM(g)/valence Equivalent-gramme (Eq). Masse en grammes du solut divise par son quivalent en poids (EP) : Eq= masse(g)/EP(g) Molalit (m). Nombre de moles dune substance donne pour 1000 g de solvant. Une solution de molalit m sobtient en ajoutant m moles de la substance 1000 g deau. Molarit (M) (dun composant dune solution). Nombre de moles de solut par litre de solution finie. Une solution de molarit n dun sel sobtient en ajoutant n moles de ce sel de leau jusqu obtenir un (1) litre de solution. Normalement, la formule employe est la suivante :
M=
moles Vol ( L ) Mole. Poids molculaire (PM) du solut exprim en grammes.

Moles=masse(g)/EP Normalit (N) (dun solut). Nombre de moles de solut par litre de solution finie.
N=
Eq Vol ( L ) Poids/volume. Relation utilise en chimie clinique, exprimant la masse de la solution en grammes ou ses sous-multiples par unit de volume en litres ou ses sous-multiples. Par exemple : g/l, mg/ml.
Solution. Mlange liquide homogne de deux ou plusieurs substances. Le ou les produits chimiques appels soluts dterminent en gnral le nom de la solution. La substance dans laquelle le solut est dissous est appele le solvant. Il y a en gnral une plus grande quantit de solvant que de solut(s) dans une solution. Note : Un autre type de notation, en parties par unit est utilis pour la mesure des concentrations extrmement faibles. Par exemple : une partie par million (ppm) signifie quil y a une particule dune substance donne pour 999 999 particules dautres substances.
64
Chapitre 10
Distributeur
Code GMDN Code ECRI Dnomination 41663, 35734 16-274 Distributeur de liquides pour laboratoire
Le distributeur est un dispositif de la famille des pipettes et diluteurs. Son nom anglais dispenser vient du prfixe dis qui dnote une privation et du mot latin pensum qui signifie tche. Il existe diffrents types de distributeurs, par exemple des modles rpondant aux normes applicables aux travaux de chimie et dautres utiliss en microbiologie, bactriologie, immunologie et pharmacologie. Des distributeurs automatiques contrls par un programme informatique sont utiliss dans les tablissements o il existe une forte demande de tests et qui ont besoin de processus automatiss. Ce chapitre prsente les distributeurs manuels, aussi appels distributeurs rptitifs, car ce sont les plus couramment employs.
A QUOI SERT UN DISTRIBUTEUR

Le distributeur est un appareil multi-usages qui peut tre utilis au laboratoire pour les activits suivantes : 1. Aspirer et distribuer des volumes de liquides ou de solutions lorsquune grande exactitude nest pas indispensable. 2. Distribuer un volume dun liquide ou dune solution stocke dans un rcipient en fractions prdfinies (distribution rptitive avec un volume final constant). 3. Mlanger une solution par aspirations et distributions successives, au moyen dun dispositif daspiration et de distribution. 4. Titrer une solution ou une suspension stock de virus en distribuant le matriel titrer par dilution en srie dans un diluant donn jusqu atteindre le point final.
SCHMA ET PHOTOGRAPHIE DUN DISTRIBUTEUR Distributeur
Figure 25. Distributeur

1. Slecteur de volume 2. Ecran digital 3. Levier de dosage 4. Levier de remplissage 5. Bouton djection 6. Raccord du distributeur
Photo avec laimable autorisation de Gilson S.A.S.
Tte de distribution
7. Echelle de dosage 8. Rservoir 9. Embout de distribution Adaptateur avec piston intgr
65
C H A P I T R E 10 D I S T R I B U T E U R
5. Diluer une solution en mlangeant des volumes dfinis de cette solution avec un diluant. 6. Utiliser de la mme faon quune pipette (aspiration dun volume puis distribution de ce mme volume). 7. Distribuer des milieux de culture dans des botes de Ptri. On utilise souvent des distributeurs automatiques quips daccessoires pour dplacer les botes de Ptri et les stocker une fois que le milieu de culture y a t introduit. Pour des applications ponctuelles ( petite chelle), la distribution des milieux de culture se fait au moyen de seringues en plastique usage unique avec aiguilles N 161. Le distributeur peut normalement tre programm pour toutes ces activits selon les instructions fournies par le fabricant.
En gnral, les distributeurs modernes sont contrls par des microprocesseurs et se composent des lments suivants (la numrotation ci-dessous correspond celle de la figure 25). 1. Slecteur de volume. Ce bouton molet est utilis pour rgler le volume dlivrer : le volume slectionn saffiche sur lcran du distributeur. 2. Ecran digital. Il affiche les donnes correspondant la fonction slectionne, comme le volume dlivrer, le type dembout fix sur la tte de distribution et des informations comme les alarmes et les messages derreur qui peuvent tre dclenchs pendant le fonctionnement de lappareil, par exemple une alarme de batterie faible ou de slection incorrecte de lembout pour le volume choisi. 3. Levier de dosage. Ce levier actionne le piston mont sur un adaptateur dplacement positif de type seringue, dans lequel il se dplace le long dun cylindre pour dlivrer le volume de liquide slectionn.
4. Levier de remplissage. Levier mcanique actionn la main pour aspirer le liquide dans le rservoir de ladaptateur. 5. Bouton djection. Mcanisme qui libre llment doseur (adaptateur) de la tte du distributeur. 6. Raccord du distributeur. Dispositif permettant de raccorder llment doseur la tte du distributeur. Il se compose dun systme de joints et de coulisses pour assurer un ajustement parfait. 7. Echelle de dosage. Elle indique le volume maximal qui peut tre dlivr avec ladaptateur slectionn. Dans certains cas, elle indique galement le volume restant. 8. Adaptateur du distributeur (rservoir). Rcipient qui reoit la solution aspire ou dlivre lors des cycles de distribution. Il en existe de nombreuses variantes, selon le modle de distributeur. Ladaptateur peut tre unique ou combin, avec des embouts appropris. 9. Embout de distribution. Facilite la distribution ou laspiration de solutions. Lembout est situ lextrmit de ladaptateur du distributeur. Sans embout, il est impossible dutiliser le distributeur. 10. Interrupteur marche/arrt (ON/OFF). (Non reprsent sur la figure). 11. Un compartiment pour piles. (Non reprsent sur la figure).
Accessoires
Pour effectuer certaines tches avec le distributeur, des accessoires appropris sont ncessaires. La figure ci-dessous montre des exemples dadaptateurs.
Product Information Sheet. 3cc Syringes. For dispensing and plating Methocult. http://www.stemcell.com/technical/28230_28240-PIS.pdf
Figure 26. Distributeur et accessoires

Tte Adaptateurs et embouts
Distributeur simple
Distributeur multi-tape Rservoir auxiliaire
Adaptateur multicanaux avec embouts de dosage
66
Volume distribu Les distributeurs sont conus pour travailler sur des intervalles de volumes prdfinis. Avant lemploi, il faudra examiner le type de solution qui sera utilis et les volumes distribuer. Les fabricants proposent divers modles dadaptateurs. Le tableau ci-dessous montre les intervalles de travail les plus courants.
Lentretien du distributeur est simple. Les activits de routine les plus importantes sont dcrites ci-dessous.

1. Nettoyer le distributeur avec un chiffon humide et un dtergent doux. 2. Dsinfecter le distributeur avec de lisopropanol 60 %. 3. Eviter que lhumidit ne pntre lintrieur des commandes lectroniques et/ou mcaniques
Capacit de ladaptateur 0,1 ml 0,2 ml 1 ml 5 ml 10 ml 25 ml
Volumes distribus 120 l 240 l 10100 l 50500 l 100 l to 2 ml 250 l to 5 ml
Remplacement de la pile (si ncessaire)

1. Ouvrir le compartiment des piles. En gnral, il suffit pour cela de faire glisser le couvercle de la position Ferm la position Ouvert . 2. Enlever la pile use. Lliminer conformment aux recommandations. 3. Installer une pile ayant les mmes caractristiques que la pile dorigine. Vrifier la polarit lectrique pour que la pile soit correctement installe. Avant de mettre la pile en place, nettoyer les contacts avec un chiffon propre. 4. Fermer et ajuster le couvercle.
CONDITIONS REQUIS POUR LE FONCTIONNEMENT DE LAPPAREIL

Selon le type de distributeur, des conditions minimales sont requises pour le fonctionnement, entre autres : 1. Vrifier que le distributeur est conu pour les solutions qui seront utilises. Vrifier la compatibilit des matriaux dans le manuel dutilisation fourni par le fabricant. 2. Un environnement propre, quip de postes de travail de taille suffisante, bien ventil et clair. 3. Vrifier que la temprature de la pice est stable, avec un intervalle de variation de 0,5 C entre 0 et 40 C et une temprature optimale de 20 C. 4. Utiliser un quipement de protection individuelle appropri lors du travail avec des substances toxiques ou comportant un risque microbiologique. 5. Utiliser les embouts spcialement conus par le fabricant pour chaque application particulire.
67
C H A P I T R E 10 D I S T R I B U T E U R
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Il nest pas possible de monter ladaptateur sur la tte du distributeur. CAUSE PROBABLE Llment est dfectueux. Llment doseur est sale. SOLUTION Appeler le service technique. Examiner llment pour rechercher une obstruction. Le nettoyer si ncessaire. Appeler le service technique. Rinitialiser lappareil. (Eteindre et rallumer linterrupteur). Slectionner loption dextraction manuelle. Vrifier si le piston se dplace davant en arrire et inversement. Retirer le cylindre au-dessus dun bac dchets. Remplacer le dispositif de dosage. Enlever lembout doseur du raccord conique. Le remettre en place correctement. Vrifier le type dembout recommand par le fabricant. Remplacer le piston et les joints. Utiliser les pices de rechange fournies par le fabricant. Remplacer la pile. Remplacer la pile. Appeler le service technique. Appeler le service technique. Vrifier que le volume disponible pour la distribution est suffisant. Si non, charger ou aspirer un volume suffisant pour la quantit distribuer.
Ladaptateur ne peut tre retir de la tte du distributeur.
Il y a un dfaut dans le systme lectronique.
Il y a un dfaut dans le mcanisme dajustement.
Lembout du systme de dosage (adaptateur) goutte. Lembout est dfectueux. Le systme de dosage de type pipette goutte. Lembout doseur nest pas bien ajust. Lembout doseur a t incorrectement slectionn. Le piston ou le joint du piston sont endommags. Lcran affiche une alarme de batterie faible. Lcran naffiche aucun signal. Lcran affiche des messages derreur. Lcran indique une erreur de remplissage. La pile est use. La pile est use. Le systme lectronique est dfectueux. Diverses causes. La quantit de liquide est insuffisante pour le distributeur.
Lcran affiche une erreur de volume total. Lcran affiche une erreur de slection de lembout.
Lappareil a aspir plus de liquide que ladaptateur ou Ejecter tout le liquide. Vrifier le fonctionnement lors lembout doseur ne peut recevoir. dun nouvel essai. Lembout install ne convient pas pour lopration prvue. Lembout est dfectueux. Vrifier quel type dembout convient pour lopration prvue. Remplacer lembout. Mettre un nouvel embout ayant les mmes spcifications que lembout dorigine.
DFINITIONS
Bote de Ptri. Bote peu profonde en verre ou en matire plastique utilise pour les cultures de micro-organismes au laboratoire. Elment doseur (adaptateur). Dispositif aussi appel Combitip, reli la tte de distribution pour distribuer une solution. Il existe diffrentes tailles et formes dadaptateurs en fonction des volumes distribuer et des caractristiques de la solution utilise. Mlange. Addition de substances qui ne produisent pas de raction chimique. Dans un mlange homogne, la composition et laspect doivent tre uniformes. Milieu de culture. Solide ou liquide dvelopp des fins mdicales pour cultiver et identifier des micro-organismes capables de provoquer des maladies (agents pathognes) et pour diverses autres applications.
68
Chapitre 11
Spectrophotomtre
Code GMDN Code ECRI Dnomination 36411 15-082 Spectrophotomtre, ultraviolet
36411 15-083
Spectrophotomtre, ultraviolet, visible
36411 15-084 Spectrophotomtre, visible
Le mot spectrophotomtre est driv du latin spectrum, qui signifie image, et du grec phos ou photos, qui signifie lumire. Le spectrophotomtre est lun des principaux appareils conus des fins de diagnostic et de recherche. Il utilise les proprits de la lumire et son interaction avec les substances. En gnral, la lumire mise par une lampe prsentant certaines caractristiques est guide au travers dun dispositif qui slectionne et spare une longueur donde dtermine, et lui fait traverser un chantillon. Lintensit lumineuse sortant de lchantillon est capture et compare avec celle qui a travers
lchantillon. A partir du rapport entre ces deux intensits, on calcule la transmittance, dont la valeur dpend de facteurs tels que la concentration de la substance.
A QUOI SERT UN SPECTROPHOTOMTRE

Le spectrophotomtre est utilis au laboratoire pour dterminer la prsence ou la concentration dune substance dans une solution, ce qui permet une analyse qualitative ou quantitative de lchantillon.
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT PHOTOGRAPHIE DUNE SPECTROPHOTOMTRE Spectrophotomtre classique

Comme principe de base, on considre que la lumire est une forme dnergie lectromagntique. Dans lespace, elle a une vitesse constante et universelle (C) denviron 3 108 m/s. Dans tout autre milieu (transparent) quelle traverse, la lumire a une vitesse lgrement plus faible, qui peut se calculer par la formule :
v0 =
Photo avec laimable autorisation de Beckman Coulter
C n
dans laquelle : v0= vitesse laquelle la lumire traverse le milieu n = indice de rfraction du milieu : cette valeur se situe en gnral entre 1,0 et 2,5.
69
C H A P I T R E 11 S P E C T R O P H OTO M T R E
Lnergie lectromagntique possde une gamme de longueurs donde trs tendue. Le tableau ci-dessous en montre quelques exemples :
En ce qui concerne linteraction de la lumire avec la matire, la figure 27 illustre la complexit des phnomnes qui se produisent. Le diagramme de la figure 27 montre que le rayonnement incident (Io) peut subir une srie de transformations. Il peut tre rflchi (Ir), transmis (It), diffus (Id), absorb et directement rmis sous forme de fluorescence (If ). Les phnomnes sur lesquels se base la spectrophotomtrie sont principalement labsorption et la transmission. Pour comprendre de quelle manire, il est ncessaire de mentionner la loi de BeerLambert. Loi de Beer-Lambert. Aussi appele loi de Beer ou loi de BeerLambert-Bouguer, elle dcrit la relation entre la concentration dun chantillon et lintensit de la lumire transmise par cet chantillon. La loi de Beer-Lambert utilise deux concepts : la transmittance (T) et labsorbance (A). La transmittance (T) est la fraction du rayonnement incident de longueur donde dtermine qui traverse lchantillon.
Type dnergie lectromagntique Ondes radio Ondes radar Rayonnement infrarouge Lumire visible Rayons X Rayons gamma
Gamme de longueurs donde De quelques mtres quelques kilomtres De 1 10 cm De 1 10 microns (10-6 m) De 300 700 nm (nanomtres) De 0,1 0,5 (Angstrm) Environ 0,0012 (Angstrm)
Lors de la traverse ou de linteraction avec divers milieux, la lumire subit une srie de phnomnes. Parmi ceux-ci figurent la rflexion, la rfraction, la diffraction, labsorption, la diffusion, la polarisation et dautres phnomnes mesurs par divers instruments et dispositifs. Le tableau ci-dessous montre les gammes de longueurs donde utilises pour effectuer des tests en spectrophotomtrie.
T=
Partie du spectre lumineux Ultraviolet Proche ultraviolet Lumire visible Proche infrarouge Infrarouge moyen Infrarouge lointain Gamme de longueurs donde 10-200 nm (nanomtres) 200-280 nm 380-780 nm 780-3000 nm 3000-20 000 nm 30 000-300 000 nm
It Io
avec : It = intensit du rayonnement transmis Io = intensit du rayonnement incident
Figure 27. Interaction de la lumire avec la matire
Rayonnement absorb
Rayonnement transmis (It) Rayonnement dius (Id)
Rayonnement incident (Io))
Fluorescence (If ) Rayonnement rchi (Ir))
70
Le pourcentage de transmittance (%T) peut sexprimer par la formule :
%T =
It 100 Io
Les graphes ci-dessous montrent comment labsorbance (A) et la transmittance (T) varient en fonction de la concentration (c) selon la loi de Beer-Lambert.
Reprsentation graphique de la transmittance

La concentration de molcules absorbant la lumire dans un chantillon est proportionnelle labsorbance (A) de cet chantillon. Elle sexprime mathmatiquement par la formule :
A =l c
dans laquelle : A = absorbance mesure = coefficient dabsorbance de la molcule (litres/ moles/cm) l = longueur du trajet parcouru par la lumire dans lchantillon (trajet optique) c = concentration de lchantillon (moles/litre) Labsorbance (A) est lie la transmittance (T) par la formule :
Transmittance
Concentration A = Log 1 T
Reprsentation graphique de labsorbance
A = log10
1 I = log10 o = log10 10 c l = c l T It
Absorbance
Le diagramme ci-dessous explique le phnomne dabsorbance :
Figure 28. Phnomne dabsorbance

Concentration
Lumire incidente Io Lumire transmise lt = lo x 10 -a(Q)*c*l
A = cxx l x c
Solution absorbante de concentration (c) moles/litre
Trajet optique: espace parcouru par la lumire dans la solution
On peut conclure que si la concentration dune substance augmente, la transmittance diminue, et si la concentration dune substance augmente, labsorbance augmente. La linarit de la relation de Beer-Lambert est affecte par les conditions suivantes : 1. Dplacement de lquilibre chimique de lchantillon en fonction de la concentration. 2. Dviation des coefficients dabsorbance, concentrations suprieures 0,01 M dues linteraction lectrostatique entre molcules voisines. 3. Modification de lindice de rfraction aux concentrations leves de la substance analyser. 4. Diffusion de la lumire due la prsence de particules dans lchantillon. 5. Fluorescence ou phosphorescence de lchantillon. 6. Radiation non monochromatique.
71
ELMENTS DU SPECTROPHOTOMTRE
Le schma de la figure 29 dcrit la relation entre les diffrents lments dun spectrophotomtre. Les lments les plus importants sont : 1. La source lumineuse 2. Le monochromateur 3. Le porte-chantillons 4. Le systme dtecteur 5. Le systme de lecture Ces lments sont les lments de base des spectrophotomtres et ne comprennent pas les innovations techniques introduites par les fabricants dans les modles rcents. La figure 29 montre de faon succincte la fonction de chacun de ces lments.
donde (ce peut tre un prisme ou une grille de diffraction), et une fente de sortie pour slectionner la longueur donde qui illuminera lchantillon. Les grilles de diffraction ont lavantage dliminer la dispersion non linaire et dtre insensibles aux changements de temprature.
Porte-chantillons
Ce dispositif sert de support aux chantillons analyser. Il en existe divers types adapts aux diffrents modles de spectrophotomtres et au volume des chantillons : cuves, microcellules, microplaques, tubes essais, cellules flux continu, etc. Dans les spectrophotomtres classiques, le portechantillons est une cellule ou une cuve de forme rectangulaire. Les cuves sont ralises en verre pour les lectures entre 340 et 1000 nm, et en silice pour les lectures dans le visible entre 220 et 340 nm. Il existe aussi des cuves et autres types de portechantillons (par exemple des microplaques) usage unique en plastique, comme le styrne ou le polystyrne.
Source lumineuse
Selon le type de spectrophotomtre, la source lumineuse peut tre une lampe au tungstne mettant dans le visible ou une lampe arc au deutrium mettant dans lultraviolet. Certains fabricants quipent les spectrophotomtres avec des lampes au xnon de longue dure qui mettent une lumire pulse dans le visible et lultraviolet. Les lampes sont livres prassembles sur une base qui leur assure un positionnement fixe, afin de maintenir lajustement optique et la focalisation pendant le fonctionnement de lappareil et lors du remplacement de lampoule. Lnergie du rayonnement mis par une lampe au tungstne se situe classiquement entre 2600 et 3000 K (degrs Kelvin).
Systme dtecteur
Le systme de dtection peut se composer de cellules photolectriques, tubes photolectriques, photodiodes ou photomultiplicateurs, selon la gamme de longueurs donde et la sensibilit et la vitesse de rponse requises. Le systme de dtection reoit la lumire de lchantillon et la convertit en un signal lectrique dintensit proportionnelle lnergie reue. Ce signal lectrique peut tre trait et amplifi pour tre interprt par le systme de lecture. Le tableau ci-dessous prsente les avantages et les inconvnients des divers dispositifs normalement utiliss dans les systmes de dtection.
Monochromateur
Le monochromateur est un ensemble dlments qui sert disperser la lumire blanche en radiations de diffrentes longueurs donde, dont lune est utilise pour lire le rsultat de lanalyse. En gnral, il a une fente dentre qui limite le rayonnement lumineux produit par la source et le confine dans une zone dtermine, un jeu de miroirs pour transmettre la lumire au travers du systme optique, un lment qui permet de sparer les radiations en diffrentes longueurs
Systme de lecture
Le signal qui quitte le dtecteur subit diverses transformations. Il est amplifi et transform pour que son intensit devienne un pourcentage proportionnel de la transmittance ou de labsorbance. Il existe des systmes de lecture analogiques (qui prsentent les rsultats sur une chelle de lecture) ou numriques (qui affichent les rsultats sur un cran).
Figure 29. Elments du spectrophotomtre

Source lumineuse Miroir Echantillons Fente dentre Systme dtecteur Systme de lecture
Monochromateur Fente de sortie Prisme
72
Avantages et inconvnients des systmes de dtection courants

Dispositif Cellules photolectriques Economiques. Peu encombrantes. Robustes. Ne ncessitent pas de sources dnergie ni damplificateurs de signal. Tubes photolectriques Fonctionnent entre 190 et 650 nm. Egalement entre 600 et 1000 nm. Pas de parties mcaniques mobiles. Acquisition simultane des donnes spectrales. Large gamme dynamique. Excellente reproductibilit des longueurs donde. Photomultiplicateurs Plus sensibles que les cellules et tubes photolectriques. Gamme de longueurs donde plus tendue. Rpondent rapidement aux changements dintensit lumineuse. Ne susent pas comme les cellules photolectriques. Peuvent tre raliss avec une sensibilit dans ltendue complte du visible et de lultraviolet (de 190 900 nm). Peuvent brler sils reoivent la lumire du jour pendant le fonctionnement. Prix trs lev. Ncessitent une source de courant haute tension. Utiliss seulement sur les spectrophotomtres spcialiss. Avantages Faible sensibilit. Rpondent lentement aux changements dintensit lumineuse. Susent. Le signal dpend de la temprature. Ncessitent des talonnages en fonction de la temprature de lenvironnement dans lequel ils sont installs. Susent aux fortes intensits lumineuses. Photodiodes Inconvnients Gamme de longueurs donde limite : entre 400 et 750 nm.
Les indicateurs analogiques affichent traditionnellement les rsultats sur une chelle de lecture ou un cadran. Leur exactitude dpend entre autres de la longueur et du nombre de divisions de lchelle (plus il y a de divisions, plus la lecture est exacte). Leur principal inconvnient est que la lecture peut tre incorrecte du fait de la fatigue de loprateur ou de la confusion entre plusieurs cadrans. Les indicateurs numriques (aussi appels affichage digital) affichent les rsultats sous forme de chiffres lumineux sur un cran. De ce fait, les erreurs de lecture sont plus rares.
ENTRETIEN DU SPECTROPHOTOMTRE
Les spectrophotomtres sont des appareils trs spcialiss et trs coteux. Leur intgrit dpend en grande partie de la faon dont ils sont installs et utiliss. Leur environnement direct et la qualit de lalimentation lectrique sont des facteurs de premire importance pour que ces appareils fonctionnent conformment aux spcifications. Lentretien de routine se compose de tches de complexit variable, allant du nettoyage soigneux des lments aux oprations de maintenance spcialises effectues par un technicien ou un ingnieur qualifi ayant reu une formation technique sur les diffrents modles existants. Une utilisation soigneuse, en se conformant aux instructions du fabricant, garantit un fonctionnement de longue dure. Sur les modles rcents, les fabricants ont introduit des procdures automatises dtalonnage et de vrification. On trouvera ici des recommandations gnrales sur lentretien et la maintenance, applicables une vaste gamme de spectrophotomtres. Il faut noter que les oprations de routine spcialises ne peuvent tre effectues quen se conformant strictement aux recommandations du fabricant pour le modle considr. On trouvera ci-dessous les procdures dentretien de routine dun spectrophotomtre en bon tat et la frquence conseille pour les contrles.

Pour que le spectrophotomtre fonctionne correctement, les conditions suivantes doivent tre remplies : 1. Une alimentation lectrique rpondant aux normes nationales. Par exemple, dans les pays dAmrique le rseau est en gnral aliment en 110 V/60 Hz, alors quailleurs dans le monde il est aliment en 220-230 V/50-60 Hz. 2. Un environnement propre, sans poussire. 3. Une table de travail stable, lcart des appareils qui produisent des vibrations (centrifugeuses, agitateurs).
73
Inspection de lenvironnement de lappareil Frquence : une fois par an

Le secteur dans lequel le spectrophotomtre est install doit faire lobjet dune inspection visuelle et de tests lectriques pour garantir la scurit de loprateur. Linspection porte sur linstallation lectrique et lensemble de lenvironnement physique du spectrophotomtre.
Installation lectrique
Elle doit tre vrifie et teste pour assurer que les conditions suivantes sont remplies : 1. Il y a une prise de courant relie la terre. 2. La prise est en bon tat et ne se trouve pas plus de 1,5 m du spectrophotomtre. 3. Le voltage est appropri et ne scarte pas de plus de 5 % du voltage spcifi sur la plaque de lappareil. 4. La polarit de la prise est correcte. Ces tests doivent tre effectus par un lectricien qualifi (technicien ou ingnieur) et les rsultats doivent tre enregistrs pour permettre un suivi ultrieur.
3. Vrifier que les accessoires sont propres, non fissurs et que leur tat de fonctionnement est optimal. 4. Vrifier que les lments mcaniques dassemblage (boulons, vis, crous, etc.) sont bien ajusts et en bon tat. 5. Vrifier que les cbles lectriques ne sont pas fissurs ni rompus, et quils sont correctement relis au secteur. 6. Vrifier que les cbles lectriques ne prsentent pas de rparations de fortune, ne sont pas uss et que leur gaine isolante est intacte. 7. Vrifier que les cbles de raccordement et leurs bornes sont exempts de poussire et de corrosion et ne sont pas encrasss. Ils ne doivent pas non plus tre uss ou prsenter des signes de dtrioration. 8. Vrifier que le systme de mise la terre (interne et externe) est standardis, dun type approuv, fonctionnel et correctement install. 9. Assurer que les interrupteurs et coupe-circuits, la bote fusibles et les indicateurs ne sont pas poussireux, encrasss ou corrods. 10. Vrifier que les lments lectriques externes ne prsentent pas de signes de surchauffe.
Secteur dinstallation
1. Vrifier quil y a un espace libre autour du spectrophotomtre, pour deux raisons. Dabord pour que les cbles de raccordement puissent passer librement et pour pouvoir installer dautres lments ou appareils annexes (par exemple un stabilisateur de tension). Ensuite, pour que la ventilation puisse fonctionner efficacement lorsque lappareil est en marche. 2. Vrifier que la paillasse est en bon tat et propre. 3. Vrifier quaucun appareil capable de transmettre des vibrations (par exemple une centrifugeuse) nest install proximit. 4. Vrifier que le secteur nest pas expos des conditions dhumidit, de temprature ou de poussire excessives. La temprature ambiante approprie pour le fonctionnement du spectrophotomtre se situe entre 10 et 40 C. 5. Eviter dinstaller lappareil dans un endroit expos la lumire solaire directe. 6. Ne pas installer lappareil dans un secteur o il existe des champs magntiques ou des rayonnements lectromagntiques intenses. 7. Assurer que le secteur dinstallation nest pas expos des gaz ou des substances corrosives.
Entretien gnral Nettoyage des claboussures

En cas de fuite du porte-chantillons, les claboussures doivent tre nettoyes comme suit : 1. Eteindre le spectrophotomtre et dbrancher la prise secteur. 2. Utiliser une seringue pour nettoyer le porte-chantillon. Aspirer le plus possible de liquide. 3. Essuyer le porte-chantillons avec un tampon de coton hydrophile. 4. Utiliser du papier optique ou un chiffon doux et propre pour nettoyer la fentre de la cellule photolectrique. 5. Nettoyer lextrieur de lappareil, y compris lcran, le panneau de contrle et le clavier, avec un chiffon humect avec de leau distille.
Nettoyage des cuves en quartz

Il est recommand de procder comme suit pour maintenir les cuves en quartz en bon tat : 1. Laver les cuves avec une solution alcaline dilue comme NaOH 0,1 M et un acide dilu comme HCl 0,1 M. 2. Rincer les cuves plusieurs fois leau distille. Toujours utiliser des cuves propres pour effectuer les mesures dabsorbance. 3. Nettoyer avec un soin particulier les cuves ayant contenu des chantillons qui risquent de dposer un film. Certains fabricants recommandent dutiliser des dtergents spciaux pour le lavage des cuves de spectrophotomtres.
Inspection visuelle de lappareil Frquence : tous les six mois

Le spectrophotomtre doit faire lobjet dune inspection visuelle destine vrifier que ltat et lintgrit de ses lments restent conformes aux spcifications du fabricant. Les points les plus importants sont : 1. Vrifier que le pitement de la table qui supporte le spectrophotomtre est en bon tat. 2. Vrifier ltat extrieur gnral du spectrophotomtre. Vrifier que les boutons et interrupteurs ainsi que les fermetures mcaniques sont monts correctement et quils sont clairement identifis.
Remplacement des piles

Divers modles de spectrophotomtres utilisent des piles pour garder en mmoire les donnes associes lanalyse, comme la date et lheure. La procdure de remplacement des piles est la mme que pour les autres appareils. La procdure recommande est la suivante :
74
1. Vrifier que lindicateur de batterie faible apparat sur lcran de lappareil. 2. Eteindre le spectrophotomtre. 3. Dbrancher le cble dalimentation lectrique. 4. Ouvrir le logement des piles et enlever les piles uses. 5. Nettoyer les contacts lectriques. 6. Mettre en place de nouvelles piles ayant les mmes caractristiques que les piles dorigine. 7. Refermer le logement des piles. 8. Rebrancher lappareil. 9. Rgler la date et lheure.
Remplacement de lampoule/de la lampe

Lampoule est un consommable dont la dure de vie est limite. Il faut prvoir qu un certain moment, il sera ncessaire de la remplacer. Soit elle grillera, soit elle prsentera une vaporation et une mtallisation internes et la lumire mise ne rpondra plus aux spcifications de fonctionnement du spectrophotomtre. La procdure de remplacement de la lampe varie dun modle lautre et il faut toujours se conformer aux instructions du fabricant. Les tapes classiques sont les suivantes : 1. Vrifier que lampoule ne fonctionne pas ou quil existe des signes de dysfonctionnement. Sur les appareils rcents, un signal ou un code derreur saffiche sur lcran. Avec les appareils plus anciens, la lampe ne fonctionne simplement plus. 2. Eteindre le spectrophotomtre. 3. Dbrancher le cble dalimentation lectrique. 4. Dfaire les vis de fixation du couvercle du compartiment de la lampe. 5. Dfaire les vis de fixation du support de la lampe. 6. Dfaire les vis de fixation des fils de raccordement lectrique de la lampe (sur certains modles, cette tape nest pas ncessaire car la lampe est monte sur une base qui possde un mcanisme de raccordement direct aux bornes de la lampe). 7. Installer une nouvelle lampe ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine. Porter des gants pour viter de laisser des traces de doigts sur la lampe. 8. Remettre les vis de fixation des fils de raccordement lectrique de la lampe. 9. Remettre les vis de fixation du support de la lampe. 10. Remettre les vis de fixation du couvercle du compartiment de la lampe. 11. Rebrancher le spectrophotomtre. 12. Rallumer le spectrophotomtre (interrupteur sur ON) et procder au rtalonnage selon les instructions du fabricant.
1. Nettoyer lextrieur du spectrophotomtre, y compris les boutons de commande et les crans ou cadrans. On peut utiliser un chiffon en tissu fin (comme du tissu mouchoirs) humect avec de leau distille. 2. Inspecter et nettoyer le cble dalimentation lectrique. 3. Vrifier que la lampe est propre et en bon tat. Si elle ne fonctionne pas, la remplacer par une nouvelle lampe ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine. Avec les spectrophotomtres modernes, ltat de la lampe est dtect automatiquement par un logiciel de contrle de ltat et du fonctionnement des divers lments de lappareil, ce qui permet de savoir quand il est ncessaire de la changer. Remplacer la lampe et faire les rglages comme aprs tout remplacement selon les recommandations du fabricant. 4. Vrifier ltat du fusible de protection. Avant douvrir le compartiment du fusible, vrifier que le spectrophotomtre est teint puis vrifier que ses contacts sont propres et en bon tat. Si ncessaire, remplacer le fusible par un nouveau ayant les mmes caractristiques que le fusible dorigine en suivant les recommandations du fabricant. 5. Mettre lappareil en configuration de fonctionnement. 6. Mettre linterrupteur marche/arrt sur ON et laisser chauffer lappareil pendant cinq (5) minutes. Vrifier que : a. Les tmoins ou voyants lumineux fonctionnent. b. Les indicateurs de lecture restent sur zro (0). c. La source lumineuse fonctionne. 7. Effectuer un test de courant de fuite en position ON et OFF. a. Vrifier le ple de mise la terre et vrifier que la polarit est correcte. b. Vrifier que la polarit est correcte sans mise la terre. c. Vrifier la polarit inverse sans mise la terre. 8. Etalonner le panneau de contrle du spectrophotomtre selon les instructions du fabricant. 9. Mesurer la sensibilit de lappareil. 10. Faire un test suivant la loi de Beer. 11. Remettre le spectrophotomtre dans sa configuration initiale si ltalonnage a t ralis avec succs.
BONNES PRATIQUES DUTILISATION DU SPECTROPHOTOMTRE

1. Etalonner le spectrophotomtre chaque fois quune nouvelle srie dchantillons doit tre analyse. 2. Tenir ferm le couvercle du porte-chantillons et de son logement pendant la mesure pour assurer une lecture correcte. 3. Eviter de rutiliser les cuves usage unique. 4. Utiliser uniquement des cuves en quartz pour effectuer les analyses au-dessous de 310 nm. 5. Eviter dutiliser des cuves en plastique si on travaille avec des solvants organiques. 6. Utiliser de la verrerie en verre borosilicat de qualit suprieure pour prparer les talons. Eviter si possible le verre au sodium (oxyde de sodium) car le contact prolong avec les talons pourrait le rendre permable et fausser les rsultats.
Entretien prventif
Lentretien prventif (maintenance) du spectrophotomtre doit correspondre aux oprations de routine et aux frquences recommandes par le fabricant. Les procdures de base qui peuvent tre effectues en routine au laboratoire sont les suivantes :
75
7. Nettoyer soigneusement les cuves en verre aprs usage. Jeter celles qui sont rayes sur la face transparente. 8. Utiliser des ractifs de qualit suprieure. Les ractifs de basse qualit peuvent provoquer une contamination mme trs faible concentration. Les diluants utiliss (eau et solvants) ne doivent pas contenir dimpurets. 9. Vrifier que les chantillons ou les talons ne dgazent pas lintrieur des cuves. Ce phnomne produit des bulles la surface interne des cuves et entrane des erreurs de lecture. 10. Tenir compte du fait que toutes les substances nobissent pas la loi de Beer. Effectuer des tests de linarit sur lintervalle de concentrations qui sera utilis. Il est recommand de prparer une srie de solutions talons
connues de forte concentration et de vrifier les rsultats. Les phnomnes qui influent sur la loi de Beer sont les suivants : a) Concentration leve par association molculaire despces ioniques. b. Variation du degr dhydratation aux faibles concentrations, modifiant la nature des ions complexes. c. Pour les absorptions qui ne rpondent pas la loi de Beer, il faut tablir une reprsentation graphique des rsultats obtenus avec des talons connus. On aura ainsi une indication de la lecture en fonction de la concentration, ce qui permettra de relier le rsultat obtenu pour un chantillon de concentration inconnue aux concentrations portes sur le graphe.
76
GUIDE DE DPANNAGE Spectrophotomtre automatique

PROBLME Le spectrophotomtre nest pas aliment en courant lectrique
1
CAUSE PROBABLE Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. La prise de courant nest pas alimente en courant lectrique. Le cble dalimentation lectrique nest pas branch correctement.
SOLUTION Mettre linterrupteur sur ON. Vrifier lalimentation gnrale en lectricit. Vrifier quun dispositif de scurit lectrique na pas saut. Brancher correctement le cble dalimentation lectrique. Eteindre lappareil puis le rallumer.
Les touches du panneau de contrle ne rpondent pas.
Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t incomplte. Une commande incorrecte a t active pendant le dmarrage.
Le port en srie RS 232 ne rpond pas.
Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t incomplte. Le cble de raccordement est mal connect. Le contraste est mal rgl. Le systme dclairage de fond a grill. Il y a un bourrage de papier dans limprimante.
Eteindre lappareil puis le rallumer. Vrifier la connexion. Rgler le contraste. Appeler le reprsentant. Enlever lexcdent de papier avec des pinces fines. Eteindre limprimante, enlever le papier et rallumer limprimante.
Lcran LCD est difficile lire. Limprimante est bloque.
Lalimentation en papier de limprimante ne fonctionne pas ou le papier navance pas automatiquement.
Le papier nest pas install correctement. Lavant du papier nest pas align ou est froiss.
Eteindre limprimante, remettre le rouleau de papier en place. Eteindre limprimante. Remettre le rouleau de papier en place. Couper lavant du papier et raligner le papier dans le systme dalimentation. Appeler le reprsentant. Utiliser la taille de cuve spcifie par le fabricant. Corriger la position du mcanisme dajustement. Vrifier que la cuve nest pas raye. Vrifier quil ny a pas de particules flottant dans la cuve. Frotter les parois optiques de la cuve avec un chiffon propre. Vrifier que lintervalle de travail slectionn convient pour lchantillon analyser.
La commande dalimentation en papier ne rpond pas. La cuve ne rentre pas dans le compartiment portechantillon. La lecture est fluctuante. La cuve nest pas de la bonne taille. Le mcanisme dajustement de la cuve est mal positionn. Il y a des interfrences sur le trajet de la lumire.
La lecture indique des valeurs ngatives. Il ny a pas de lecture de labsorbance.
Il ny a pas dchantillon. La cuve est mal positionne. La longueur donde slectionne est incorrecte. Lappareil a t talonn par erreur avec un chantillon la place du blanc.
Mettre un chantillon dans la solution. Vrifier lorientation de la fentre de la cuve. Rgler la longueur donde sur un intervalle compatible avec lanalyse. Etalonner avec une solution blanc ou de leau distille.
Instruction Manual, Spectrophotometer, SmartSpecTM 3000, BIO-RAD Laboratories.
77
Spectrophotomtre non automatique1

PROBLME La source lumineuse ne sallume pas. CAUSE PROBABLE Le filament est cass. Le fusible a saut. Le filament de la lampe prsente une rsistance. La tension est errone. Le cadran ou le galvanomtre indiquent une valeur trop basse. La source lumineuse est dfectueuse. La cellule photolectrique est sale ou dfectueuse. Le circuit damplification est dfectueux. La tension aux bornes de la source lumineuse est trop faible. Le cadran donne des valeurs instables.
1
SOLUTION Remplacer la lampe. Remplacer la lampe. Remplacer la lampe. Vrifier le voltage. Contrler la source dalimentation lectrique. Remplacer la lampe. Nettoyer ou remplacer la cellule photolectrique. Remplacer ou rparer le circuit damplification. Rgler le voltage. Remplacer la diode Zener.
Le stabilisateur de la diode Zener est dfectueux.
Sminaire-atelier sur le fonctionnement et la maintenance des spectrophotomtres, Projet sous-rgional sur la maintenance, Accord RE-HS-02, OPS/OMS.
78
DFINITIONS
Absorption. Phnomne physique qui se produit lorsque les atomes ou les molcules dune substance absorbent de la lumire (photons). Lnergie du photon est absorbe par une autre entit, par exemple un atome dont les lectrons de valence passent dun niveau dnergie un autre en dtruisant le photon. Lnergie absorbe est restitue sous forme de chaleur ou de rayonnement. Labsorbance est une mesure mathmatique de labsorption, exprime en units de densit optique (DO). Angstrm. Unit de longueur gale 10-10 m. Son symbole est . Il est utilis pour mesurer les longueurs donde des rayons X ou des rayons gamma. Diffraction. Phnomne provoqu par un changement de direction et dintensit subi par un groupe dondes rencontrant un obstacle ou passant par une ouverture troite dont la taille est proche de leur longueur donde. Extinction molaire ou coefficient dabsorptivit []. Mesure de lintensit de labsorption de la lumire par une entit chimique une longueur donde dtermine. Si la solution contient plus dune entit chimique, labsorbance est la somme des absorbances de chaque entit. Labsorbance, une longueur donde dtermine, dun mlange dentits X, Y ... est donne par la formule.
A=
[C
x + C y y + ...]
dans laquelle A est labsorbance du mlange. Grille de diffraction. Elment du monochromateur. Elle diffracte la lumire et se compose dune srie de rainures parallles graves sur une surface rflchissante au moyen de machines protges contre les vibrations et les variations de temprature. Les grilles utilises dans les spectrophotomtres sont des copies dune grille talon qui possde habituellement plus de 1200 rainures par millimtre. La figure 31 illustre le phnomne de diffraction. Si langle de rflexion est connu ainsi que la largeur d des rainures, la longueur donde peut tre dtermine laide de la formule :
n d Intensit (IV). Quantit de lumire mise par une source dans une direction donne par unit de temps. Plus gnralement, mesure du flux moyen dnergie par unit de temps. Pour obtenir lintensit, on multiplie lnergie par unit de volume par la vitesse laquelle lnergie se dplace. Le vecteur rsultant est lnergie par unit de surface et par unit de temps. sin =
Largeur de bande (ou bande passante). Intervalle de longueurs donde quun monochromateur est capable de transmettre. Longueur donde. Distance entre les crtes dune onde. Elle dtermine la nature des diffrentes formes dnergie de rayonnement dans le spectre lectromagntique. Pour les ondes lectromagntiques, la longueur donde en mtres se calcule en divisant la vitesse de la lumire par la frquence (nombre de pics passant en un point dtermin par unit de temps). Nanomtre. Unit de longueur correspondant 10-9 m (un millime de millionnime de mtre). Il est reprsent par le symbole nm. On lutilise pour mesurer les longueurs donde de la lumire dans le visible et lultraviolet.. Rfraction. Changement de direction qui se produit quand un rayon lumineux atteint linterface entre deux milieux. La lumire frappe linterface sous un angle a et se rfracte sous un angle b lors du changement de milieu de propagation.
Figure 30. Rfraction de la lumire
54o
a n= sin a sin b N o1 No 2 Lumire rfracte N 22o B = Indice de rfraction
Lumire incidente
Milieu O Milieu b
79
Spectrophotomtrie. Mthode danalyse chimique base sur labsorption ou lattnuation par la matire de la lumire dune longueur donde ou dune frquence dtermine. La lumire interagit avec certaines caractristiques de lespce molculaire analyse : la quantit de lumire absorbe dpend de la longueur donde, de la concentration de la molcule et du trajet du rayon lumineux. On peut ainsi en dduire des proprits telles que la concentration de substances, ce qui dans le domaine de la sant sert raliser une grande varit danalyses qui permettront de dterminer ltat de sant dun patient. Trajet optique. Distance parcourue par la lumire visible ou ultraviolette au travers dun chantillon dans une cellule danalyse (cuve ou puits).
Figure 31. Grille de diffraction
J J
6
5 4 3 2
SinJ = n Q d
= diffrence de longueur donde entre deux rainures adjacentes
80
Chapitre 12
Autoclaves
Code GMDN Code ECRI Dnomination 35366 13-746 Unit de strilisation, vapeur
35366 16-141
Unit de strilisation, sur pied
35366 16-142 Unit de strilisation, de paillasse
Lautoclave est un appareil utilis pour striliser. Le mot striliser dsigne la destruction ou llimination de toute forme de vie (microbiologique, y compris sous forme de spores) prsente dans des objets inanims, par des procds physiques, chimiques ou gazeux. Le mot striliser vient du latin sterilis (qui ne porte pas de fruits). Ce chapitre traite exclusivement des autoclaves car ceux-ci sont largement utiliss dans les tablissements de sant publique, les laboratoires danalyses mdicales et les laboratoires de recherche. Les autoclaves sont galement appels strilisateurs la vapeur deau. La strilisation doit tre considre comme un ensemble cohrent de processus dimportance majeure pour que les services de sant publique puissent seffectuer dans des conditions dasepsie rigoureuses (strilisation de matriels, de milieux de culture, dinstruments). Les processus permettant dassurer la strilit dun objet inanim sont les suivants :
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Nettoyage Dcontamination Inspection Prparation et emballage Strilisation Stockage Distribution
QUOI SERT UN AUTOCLAVE

Lautoclave est un appareil destin liminer de faon fiable1 les micro-organismes qui seraient sans cela prsents sur des objets utiliss des fins de diagnostic, de traitement ou de surveillance dans les tablissements de sant (hpitaux, laboratoires). Il est de mme largement utilis dans lindustrie alimentaire et dans lindustrie pharmaceutique. Au laboratoire, le matriel et autres objets sont striliss pour : 1. Prparer le matriel ncessaire aux cultures bactriologiques (tubes essais, pipettes, botes de Ptri, etc.) afin dviter quil ne soit contamin. 2. Prparer les instruments utiliss pour prlever les chantillons. (Tous doivent tre striles : aiguilles, tubes, rcipients). 3. Striliser le matriel contamin. Il existe des autoclaves de diffrentes tailles. Les plus petits sont de type pour paillasse et les plus grands sont des appareils complexes qui ncessitent une prinstallation soigneuse. Le volume de la cuve de strilisation est pris comme rfrence et est mesur en dcimtres cubes (dm3) ou en litres (l). Cest ce volume qui dtermine la taille de lautoclave. Selon le mode de contrle du fonctionnement des autoclaves, ceux-ci peuvent se classer en modles manuels, semi-automatiques ou entirement automatiques.
1
PHOTOGRAPHIE DUN AUTOCLAVE
Photo avec laimable autorisation de Systec GmbH
La Food and Drug Administration (FDA) classe la strilit dun article en se basant sur des tudes statistiques. Un article est considr comme strile si la probabilit de le rencontrer sous forme non strile dans une srie darticles soumis au mme processus de strilisation est infrieure un sur un million. Cet indice est appel Sterility Assurance Level (SAL) et dcrit le potentiel thorique dinactivation microbienne au cours dun processus de strilisation.
81
C H A P I T R E 12 AU TO C L AV E S
Les autoclaves utilisent les proprits thermodynamiques de leau, qui peut tre considre comme une substance pure. Dans les conditions normales (au niveau de la mer et sous une pression de 1 atmosphre), leau (en phase liquide) bout et se transforme en vapeur (phase gazeuse) 100 C. Si la pression diminue, leau bout une temprature plus basse. Si la pression augmente, elle bout une temprature plus leve. En contrlant la pression de la vapeur deau, lautoclave peut, dans sa cuve hermtique, atteindre des tempratures dpassant 100 C ; inversement, en contrlant la temprature, il peut atteindre des pressions suprieures la pression atmosphrique. Les graphiques ci-dessous montrent le comportement de leau dans diverses conditions de temprature et de pression. Les autoclaves utilisent la vapeur sature sous pression (avec un titre en vapeur suprieur 98 %) pour transmettre de lnergie thermique aux lments striliser. Cette mthode est gnralement appele strilisation par la vapeur ou strilisation par la chaleur humide. Cette mthode est principalement utilise pour son efficacit, sa rapidit et son faible cot. Cependant, tout ne peut pas tre strilis par la chaleur humide. Pour les lments craignant la chaleur et lhumidit, dautres mthodes de strilisation ont t labores. Au laboratoire, on utilise les autoclaves vapeur et les tuves fonctionnant la chaleur sche (en labsence dhumidit). Voir le chapitre 13 : Etuve.
Courbe temprature/volume
Point critique P3 Temprature P2 Courbe de vapeur sature B P1 Courbe de liquide satur A Volume C D
Pressure H Phase solide G E
Courbe pression/temprature
Courbe de fusion Phase liquide H
Point critique
Courbe de vaporisation G Phase vapeur E Courbe de sublimation Temprature
1. Ce graphique montre deux courbes dfinies : la courbe de liquide satur (courbe de gauche) et la courbe de vapeur sature (courbe de droite).
1. Ce graphique montre le comportement de leau et les relations entre les phases solide, liquide et gazeuse selon les conditions de temprature et de pression.
2. Lorsque la pression augmente, la temprature augmente aussi. (Voir les lignes 2. La courbe de sublimation montre que dans des conditions dtermines, P1, P2, P3, avec P3 > P2 > P1. si de la chaleur est transfre la phase solide, celle-ci peut se transformer directement en phase vapeur (segment E-E) sans passer par la phase liquide. 3. A gauche de la courbe de liquide satur, leau se trouve ltat liquide (segment A-B). Lorsquil y a transfert de chaleur, la temprature du liquide augmente, passant de la temprature A la temprature B. 3. La courbe de fusion montre que dans des conditions dtermines, lorsquil y a transfert de chaleur vers leau, la phase solide se transforme en phase liquide et, si le transfert de chaleur se poursuit, en phase vapeur (segment H-H).
4. Entre la courbe de liquide satur et la courbe de vapeur sature (segment B-C), 4. La courbe de vaporisation montre dans quelles conditions de temprature leau passe de la phase liquide la phase vapeur. il y a un mlange de phase liquide et de phase vapeur, et la temprature reste constante. Plus on se rapproche du point C, plus le titre en vapeur est lev1. 5. A droite de la courbe de vapeur sature, toute leau se trouve en phase vapeur (segment C-D).
1
5. Le point dintersection des trois courbes est appel point triple. Dans ces conditions, les trois phases coexistent en quilibre.
Titre en vapeur [X]. Relation entre la masse de vapeur et la masse totale (masse de liquide plus masse de vapeur). Quand le titre en vapeur est gal 1, cela signifie que la vapeur est sature et que toute augmentation de temprature la surchauffera.
82
Coupe transversale dun autoclave vapeur

La figure 32 montre les principaux lments du systme de vapeur dun autoclave. Pour une meilleure lisibilit, les parties normalement situes autour de lautoclave (leur emplacement exact dpend du fabricant) ont t reprsentes au-dessus et au-dessous du corps de lautoclave.
Description des lments gurant sur le schma

On trouvera ci-dessous une description succincte des lments les plus courants du circuit de vapeur dun autoclave. Les numros de la liste ci-dessous correspondent ceux de la figure 32. Il est noter que la configuration de ces lments varie selon le modle et le fabricant. 1. Soupape de scurit. Dispositif qui empche la pression de vapeur de dpasser une valeur dtermine. Les fabricants installent une soupape de scurit dans la cuve de strilisation et dans la double enveloppe. 2. Manomtre de la cuve. Dispositif mcanique qui indique la pression de vapeur lintrieur de la cuve de strilisation. 3. Manomtre de la double enveloppe (jauge de pression. Dispositif mcanique qui indique la pression de vapeur lintrieur de la double enveloppe de lautoclave. 4. Porte de lautoclave. Dispositif qui permet la cuve de strilisation dtre isole de lenvironnement extrieur. Elle possde normalement des dispositifs de scurit qui empchent de louvrir lorsque la cuve est sous pression. Elle est galement munie de joints qui empchent la vapeur de sortir de lappareil pendant le fonctionnement. Les portes de lautoclave peuvent tre actionnes manuellement ou par un systme lectromcanique.
5. Poigne de la porte. Dispositif qui, sur certains appareils, permet loprateur douvrir et de fermer la porte. En gnral, les autoclaves de grand volume ont une porte actionne par un dispositif motoris. 6. Cuve de strilisation. Aussi appele chambre de strilisation. Espace o les objets ou matriels striliser sont dposs. Lorsque la porte est ferme, la cuve est isole de lextrieur. Lorsque le processus de strilisation est en cours, lespace est occup par de la vapeur sous pression. 7. Tuyau dvacuation du liquide de condensation de la cuve. Conduite qui permet de recueillir le liquide de condensation qui se forme dans la cuve de strilisation par suite du transfert de chaleur entre la vapeur et les objets striliser. 8. Thermomtre. Instrument qui indique la temprature laquelle le processus de strilisation seffectue lintrieur de la cuve de lautoclave. 9. Tuyau dvacuation du liquide de condensation de la double enveloppe. Conduite permettant dvacuer le liquide de condensation qui se forme lintrieur de la double enveloppe par suite du transfert de chaleur entre la vapeur et les parois de la double enveloppe. 10. Soupape dvacuation de la vapeur en n de cycle. Lorsquun cycle de strilisation est achev, la vapeur est vacue de lautoclave selon des procdures contrles. 11. Rducteur du tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de strilisation de liquides. Dispositif mcanique qui limite le passage de la vapeur pendant un cycle de strilisation de produits liquides pour permettre la temprature de baisser de faon contrle et dempcher les liquides striliss de bouillir.
Figure 32. Circuit de vapeur dun autoclave
1. Soupape de scurit
10. Soupape dvacuation de la vapeur en n de cycle
1
2. Manomtre de la cuve 3. Manomtre de la double enveloppe 11. Rducteur du tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de strilisation de liquides
2 4
12. Tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de strilisation de liquides 13. Tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de strilisation rapide 14. Conduite dalimentation de la cuve en vapeur 15. Robinet dadmission dair avec ltre 16. Double enveloppe
4. Porte de lautoclave 5. Poigne de la porte 6. Cuve de strilisation 7. Tuyau dvacuation du liquide de condensation de la cuve 8. Thermomtre 9. Tuyau dvacuation du liquide de condensation de la double enveloppe
17. Vanne de rgulation de ladmission de vapeur 18. Conduite dalimentation en vapeur 19. Pige vapeur 20. Tuyau de vidange
# Electrovannes
83
12. Tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de strilisation de liquides. Trajet suivi par la vapeur lors dun cycle de strilisation de produits liquides, en passant par le rducteur dcrit ci-dessus. 13. Tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de strilisation rapide. Trajet suivi par la vapeur lors dun cycle de strilisation rapide. 14. Conduite dalimentation de la cuve en vapeur. Conduite qui alimente lautoclave en vapeur. Cette conduite possde des commandes et des accessoires qui permettent la vapeur datteindre lautoclave dans les conditions stipules pour le cycle de strilisation. 15. Robinet dadmission dair avec filtre. Dispositif permettant lentre dair filtr la fin du cycle de strilisation. Il sert quilibrer la pression de la cuve de strilisation avec celle de latmosphre. 16. Double enveloppe. Espace entourant la cuve de strilisation et dans lequel circule de la vapeur. Ce systme sert transfrer la chaleur la cuve et rduire la condensation. La double enveloppe est relie la cuve et au tuyau de vidange par des conduites contrles par des lectrovannes. Tous les autoclaves ne possdent pas une double enveloppe. Certains fabricants la remplacent par des rsistances disposes autour de la cuve de strilisation. 17. Vanne de rgulation de ladmission de vapeur. Dispositif mcanique qui contrle la pression laquelle la vapeur pntre dans lautoclave. Selon le cycle choisi, la pression et la temprature seront diffrentes. Plus la pression sera forte, plus la temprature sera leve. Moins la pression sera forte, moins la temprature sera leve. 18. Conduite dalimentation en vapeur. Conduite qui transporte la vapeur de la chaudire ou du gnrateur de vapeur lautoclave. 19. Pige vapeur. Dispositif destin exploiter au maximum lnergie thermique de la vapeur. Il a pour fonction dempcher la vapeur de schapper du systme. Le pige permet uniquement la sortie du liquide de condensation form dans la cuve, la double enveloppe et les tuyaux de lautoclave. 20. Tuyau de vidange. Tuyau de collecte et dvacuation du liquide de condensation produit dans lautoclave. Actuellement, les autoclaves utilisent des systmes contrls par microprocesseurs et tous les accessoires, vannes et soupapes sont actionns selon un programme prtabli enregistr en mmoire. Un systme denregistrement garde en mmoire toutes les oprations, ce qui permet de contrler les diffrentes tapes de la strilisation. Tous les fabricants intgrent dans leurs autoclaves un systme denregistrement, lment indispensable pour le contrle de la qualit. Production de vapeur. La vapeur utilise par les autoclaves est produite dans des dispositifs qui transfrent de lnergie thermique leau grce lnergie lectrique ou lnergie produite par les combustibles fossiles. Ce sont les chaudires ou gnrateurs de vapeur et ils constituent un lment fondamental de lautoclave. Selon leur capacit et leur frquence dutilisation, les autoclaves ont des systmes
dalimentation en vapeur relis une chaudire centrale ou leur propre gnrateur de vapeur. Ces derniers fonctionnent en gnral avec des rsistances lectriques et sont dj intgrs lappareil ou fournis comme accessoires par le fabricant.
UTILISATION DE LAUTOCLAVE
On trouvera ci-dessous le mode demploi gnral des autoclaves. Certaines procdures pourront varier selon le degr dautomatisation de lappareil. 1. Vrifier que le systme denregistrement est muni des formulaires et/ou du papier ncessaires pour documenter le droulement du cycle de strilisation. Renouveler tout lment manquant (encre, formulaires, etc.). 2. Mettre lautoclave sur ON. 3. Ouvrir la porte de lautoclave. Dans les autoclaves de grand volume, cette opration se fait par un processus lectromcanique. Elle est souvent manuelle dans les autoclaves de moyen et faible volume. 4. Mettre dans la cuve les paniers ou les rcipients de strilisation contenant le matriel prpar au pralable (nettoy, lav, sch, class et emball), selon les recommandations du fabricant concernant la rpartition des objets striliser. 5. Fermer la porte de lautoclave1. 6. Slectionner le cycle de strilisation requis en fonction du type dobjets ou de matriels striliser2. En gnral, on appuie sur un bouton correspondant au cycle voulu et celui-ci dmarre automatiquement. A partir de ce moment, le processus se droule comme suit3.: a) La phase de prtraitement commence. Au cours de cette phase, des cycles courts dvacuation et dinjection de vapeur dans la cuve de strilisation se succdent de faon extraire lair et striliser lemballage protecteur des objets. b) Lorsque lair a t limin, le remplissage et la pressurisation de la cuve commencent. A ce moment, la vapeur entre en contact avec les objets striliser et un processus de transfert de la chaleur se met en place entre la vapeur haute temprature et les articles striliser. Lors du transfert dnergie thermique, une partie de la vapeur se condense et se transforme en eau liquide dans les couches extrieures du matriau demballage, en perdant une partie importante de son volume. On peut alors faire entrer davantage de vapeur dans la cuve de strilisation, o elle pntrera encore plus dans les emballages des articles. A la fin, la vapeur environne compltement les articles striliser, et la pression et la temprature de fonctionnement stablissent. c) Une fois ces conditions obtenues, le temps effectif de strilisation (en fonction du type dobjets ou de
Avant de charger lautoclave, on met la double enveloppe sous pression pour que lintrieur de la cuve soit chaud, afin de rduire la formation de liquide de condensation au dbut du cycle de strilisation. 2 Voir plus loin les informations sur les cycles de strilisation. 3 La procdure dcrite concerne un cycle typique de strilisation dans un autoclave quip dun systme dvacuation actionn par une pompe lectro-hydraulique.
84
7. 8. 9.
10.
matriel striliser) commence. Plus la temprature et la pression sont leves, plus le temps ncessaire la strilisation est court. d) Une fois que la dure de strilisation programme est atteinte, un processus de post-traitement se met en route. Il comporte dabord une dpressurisation de la cuve, normalement ralise avec laide du systme dvacuation et de schage qui utilise la chaleur transfre de la double enveloppe la cuve de strilisation. En faisant baisser la pression, on atteint la temprature laquelle svaporera tout rsidu du liquide qui aurait pu se former sur les objets pendant la dpressurisation. On descend jusqu un vide gal 10 % de la pression atmosphrique, que lon maintient pendant un certain temps. Lorsquon strilise des liquides, on ne fait pas le vide, mais on vacue la vapeur de faon contrle au moyen dun rducteur pour viter quune bullition se produise dans les rcipients autoclavs. e) Enfin, on laisse entrer lair par des robinets munis de filtres haute efficacit jusqu ce que la pression dans la cuve de strilisation sgalise avec la pression atmosphrique. Le cycle de strilisation est alors achev. Ouvrir la porte de lautoclave. Sortir le matriel strilis. Refermer la porte de lautoclave une fois le matriel enlev, pour conserver la chaleur lintrieur de la cuve et faciliter le cycle de strilisation suivant. Ranger de faon approprie le matriel strilis.
Contrle de qualit
Pour quun produit soit considr comme strilis, il faut vrifier que toutes les tapes du processus de strilisation ont t effectues correctement. Pour ce faire, des tests ont t dvelopps pour valuer les caractristiques du processus et son influence sur lactivit des micro-organismes. Des valuations de la temprature, de la pression, du temps, de lhumidit et du comportement gnral de lappareil sont ralises pour certifier quil fonctionne conformment aux procdures qui ont dmontr sa validit et sa fiabilit. Il existe aussi des tests ou des indicateurs qui permettent de certifier que tous les micro-organismes sont dtruits afin de garantir la qualit du processus de strilisation. Diffrentes catgories de tests ont t labores, dont les suivantes : 1. Indicateurs de processus de strilisation. Ils servent surveiller le fonctionnement des autoclaves. Des instruments contrlent des paramtres comme la temprature, le temps et la pression (thermomtres, manomtres, chronomtres) et enregistrent le droulement du processus. Les systmes denregistrement des autoclaves modernes (microprocesseurs) enregistrent tous les paramtres du cycle de strilisation et stoppent le cycle si une anomalie est dtecte. Le test de Bowie-Dick entre galement dans cette catgorie : il value lefficacit de la pompe dextraction au moyen dune feuille de test qui change de couleur uniformment si le processus a t effectu de faon satisfaisante. Si ce nest pas le cas, la couleur est irrgulire. 2. Indicateurs chimiques. Ce sont des tests chimiques classiques avec changement de couleur ou dtat lorsque les ractifs sont exposs aux diffrentes tapes du processus de strilisation. Les indicateurs chimiques permettent de distinguer des articles soumis ou exposs un processus de strilisation russi des articles pour lesquels la strilisation na pas abouti. Parmi les plus connus figurent les rubans adhsifs ou les bandelettes que lon dpose dans un produit ou sur un emballage. La norme ISO N 11140-1 dcrit les catgories dindicateurs chimiques. Il ne faut pas oublier que les indicateurs chimiques par eux-mmes ne garantissent pas que le processus de strilisation rpond toutes les spcifications : le personnel qui les utilise doit recevoir une formation dtaille pour tre capable de dterminer si le rsultat obtenu est cohrent avec le droulement de lensemble du processus de strilisation. 3. Indicateurs biologiques. On considre quil sagit de la meilleure mthode pour contrler la qualit du processus de strilisation. Ces indicateurs se composent de micro-organismes vivants qui ont une rsistance leve un processus de strilisation dtermin, ou de ractifs chimiques qui ragissent en prsence de protines spcifiques de ce type de micro-organisme. Pour contrler le processus de strilisation par la vapeur sature, le peroxyde dhydrogne ou le formaldhyde, on utilise gnralement des spores de Bacillus stearothermophilus. Pour contrler la strilisation par la chaleur sche (processus qui seffectue dans une tuve) et par loxyde dthylne, on utilise des spores de la varit Niger de Bacillus subtilis. Les spores indicatrices sont places sur lobjet striliser. Aprs le
Note : Les cycles de strilisation doivent tre surveills et soumis des tests de contrle de la qualit au moyen dindicateurs physiques, chimiques et biologiques afin dassurer quils sont efficaces. Avertissement : Tous les objets ne peuvent pas tre striliss par la chaleur humide. Certains ncessitent des procdures de strilisation basse temprature. Vrifier quelle est la procdure adopter selon le type de matriel striliser.
Cycles de strilisation
Le processus de strilisation se droule selon des cycles prdfinis correspondant au type darticles striliser. Il existe des cycles diffrents pour les matriaux poreux, les instruments chirurgicaux, les liquides, et les matriels sensibles la chaleur. Les principaux, qui sont des cycles de strilisation des fins cliniques, seffectuent dans les conditions suivantes : 121 C/1,1 kg/cm2 ou 134 C/2,2 kg/cm2. Le tableau de la page suivante indique leurs principales caractristiques. Note : La dure des cycles de strilisation est ajuste en fonction de laltitude du lieu o lautoclave est install. Les fabricants fournissent des tableaux de la compensation effectuer. En rgle gnrale, plus laltitude du lieu est leve, plus la dure de strilisation doit tre longue.
85
Cycle N 1
Matriel striliser Charges poreuses Textiles Instruments emballs Tubes
Temprature (C) 135
Pression (kg/ cm2) 2,2

(+)
Pression/temprature
Courbe type1
135o C, 7 min C
Pression atmosphrique
1 2 3 A
5 D < 50 mb, 5 min
Temps
(-)
Pression/temprature
Instruments non emballs Ustensiles Verrerie Rcipients ouverts
135
2,2
(+) 135o C, 4 min C 4 1 2 A (-) 3 5 D
< 50 mb, 2 min
Pression/temprature
Produits thermosensibles Caoutchouc Plastique
121
1,1
(+)
121o C, 20 min 4
Temps 1 2 3 A (-) 5 D
< 50 mb, 5 min
Pression/temprature
Liquides dans des rcipients ouverts ou semi-ferms .(*)
121
1.1
121o C, 20 minTemps
(+)
Temps (-)
Convention
A : Prtraitement. Alternance de cycles de vide et dinjection de vapeur. (Processus 1, 2, 3). Process 4 : Strilisation. C : Post-traitement (Processus 5 : vide et schage). D : Pressions interne et externe totalement quilibres. Note : Le processus pour les produits liquides ne comporte pas de phase de vide aprs la strilisation. Le refroidissement est naturel.
Les courbes prsentes ici correspondent un autoclave avec pompe de vidange, de marque Getinge GE-660. (*) Le temps de strilisation dpend du volume de la charge. Il ny a pas de vide pendant le refroidissement.
86
processus de strilisation, elles sont incubes et analyses et on dtermine si le cycle a satisfait aux spcifications. En gnral, on observe un changement de couleur. Ces tests sont standardiss et les fabricants indiquent comment les utiliser et en interprter les rsultats. Les indicateurs biologiques par eux-mmes ne garantissent pas que le processus de strilisation rpond toutes les spcifications. Pour sen assurer, il faut contrler tous les paramtres du cycle de strilisation.
2.
Frquence des procdures de contrle de la qualit

Le tableau ci-dessous rcapitule les frquences recommandes en ce qui concerne lutilisation des indicateurs de contrle de la qualit des processus de strilisation.
Type dindicateur De processus Chimique Biologique
Frquence dutilisation Lors de chaque cycle de strilisation. Dans chaque emballage. Une fois par semaine, sur tout le matriel de strilisation ; dans les emballages qui contiennent des implants.
3.

Pour que lautoclave fonctionne correctement, les conditions suivantes doivent tre remplies : 1. Un espace bien ventil permettant dvacuer la chaleur et lhumidit gnres pendant le fonctionnement de lappareil. Il faut galement un espace libre larrire et sur les cts de lappareil pour la maintenance technique. Cet espace doit tre dau minimum 0,80 m . Selon le
4.
5.
modle dautoclave, il faudra prvoir un amnagement complmentaire pour assurer son bon fonctionnement. Le schma de la figure 33 montre lespace ncessaire autour de lautoclave. A proximit immdiate de lappareil en fonctionnement, la temprature peut dpasser 70 C. Le plancher doit tre bien horizontal et ralis en matriaux rsistants la chaleur et lhumidit. Une prise de courant capable de supporter la consommation lectrique de lappareil. Si lautoclave est autonome, cest-dire sil possde son propre gnrateur de vapeur, le branchement lectrique doit tre tudi en dtail car la puissance ncessaire pourrait tre nettement augmente. La puissance ncessaire pour que le gnrateur de vapeur fonctionne est en gnral de 21, 38 ou 48 kW et mme plus. La prise doit tre quipe des lments de scurit et de protection requis. Les autoclaves ncessitent en gnral une alimentation en 220 V/60 Hz ou en courant triphas 380 V/60 Hz. Une prise deau capable de supporter la consommation de lappareil en volume et en pression : plus la capacit de lautoclave est grande, plus la consommation deau sera importante. Leau alimentant lautoclave devra tre traite pour liminer les solides en suspension, qui pourraient nuire au fonctionnement des lectrovannes et des dispositifs lectro-hydrauliques. Certains strilisateurs ncessitent une alimentation en air comprim car leurs commandes sont rgies par la pression. En gnral, la pression ncessaire varie entre 5 105 et 9,9 105 Pa. Le schma ci-dessous montre linstallation minimum (vanne darrt, filtre et manomtre). Un systme de vidange conu pour recueillir leau chaude.
Figure 33. Espace ncessaire autour de lautoclave
Espace libre 0,80 m
Figure 34. Alimentation en air comprim
0,80 m
0,80 m Matriau isolant
Arrive dair comprim
Autoclave
Vers lautoclave Avant de lautoclave Vanne darrt Filtre Manomtre
87
6. Une alimentation en vapeur. Si lautoclave ne possde pas son propre gnrateur de vapeur, il doit tre aliment par le systme central de production de vapeur de ltablissement (salle des machines, chaudire). Linstallation doit rpondre aux spcifications requises : vanne darrt, filtre et manomtre ainsi quune installation approprie pour recueillir le condensat avec un filtre et un pige vapeur, comme indiqu sur la figure 35.
7. Vrifier labsence de fuites de vapeur dans chacun des systmes en fonctionnement dans lautoclave. 8. Nettoyer le devant de lautoclave, les commandes, les indicateurs et les poignes avec un chiffon humide.
Entretien hebdomadaire Responsable : oprateur de lappareil

1. Nettoyer le filtre de vidange de la cuve de strilisation. Enlever tous rsidus pouvant sy trouver. 2. Nettoyer lintrieur de la cuve de strilisation avec des produits de nettoyage ne contenant pas de chlore. Nettoyer galement les glissires servant mettre les paniers. 3. Nettoyer avec une solution dacide actique, si on doit striliser des solutions chlores. Le chlore est corrosif mme pour les implants en acier inoxydable. Rincer ensuite grande eau. 4. Nettoyer les surfaces extrieures inoxydables avec un dtergent doux. On peut utiliser un solvant comme le chlorure dthylne, en vitant de toucher les surfaces peintes, les marquages et les revtements en matire plastique. 5. Dans les autoclaves ayant des portes ouverture manuelle, vrifier que les mcanismes douverture et de fermeture sont bien ajusts et fonctionnent sans -coups. 6. Vidanger le gnrateur de vapeur (si lappareil en possde un). Pour cela, ouvrir un robinet situ au bas du gnrateur et qui permet den vidanger le contenu. En gnral, cette vidange seffectue la fin de la semaine de travail. Suivre les recommandations du fabricant. 7. Ne jamais utiliser de laine dacier pour nettoyer lintrieur de la cuve de strilisation. 8. Vrifier le fonctionnement adquat de lautoclave au moyen dun indicateur biologique ou chimique. Pour vrifier la temprature, utiliser des bandelettes tempstemprature vendues dans le commerce, qui permettent de contrler la dure et la temprature dexposition.
Figure 35. Alimentation en vapeur

Arrive de vapeur
Vanne darrt Manomtre Vers lautoclave Filtre Condenseur Pige vapeur
Alternative : conduite de vapeur au sol
7. Lautoclave doit tre utilis exclusivement par un personnel qualifi spcialement form ces types de procdures.
Lautoclave est un appareil qui ncessite une surveillance et un entretien prventif permanents en raison des nombreux lments et systmes qui le composent. Lentretien comporte essentiellement des oprations de routine simples qui peuvent tre effectues par les oprateurs. Pour un entretien plus complexe, on se conformera aux instructions figurant dans le manuel dutilisation fourni par le fabricant.
Entretien trimestriel Responsable : technicien de maintenance

1. Vrifier que les manomtres fonctionnent comme prvu. 2. Actionner les soupapes de scurit la main pour vrifier leur bon fonctionnement. Utiliser un gros tournevis pour actionner le levier dactivation de la soupape, normalement situ dans la partie suprieure de celle-ci. Faire attention de tenir le visage et le corps en dehors du trajet de la vapeur. Lorsque la soupape est en action, vrifier quil ny a pas de fuites de vapeur. Sil y a des fuites, la soupape doit tre actionne nouveau jusqu ce quelle soit bien hermtique. Avertissement : Si les fuites de vapeur ne sont pas limines, la vapeur endommagera rapidement le joint, et lensemble du systme constituant la soupape de scurit devra tre remplac. 3. Lubrifier le joint dtanchit de la porte. Utiliser le lubrifiant et la procdure recommands par le fabricant. Certains fabricants recommandent la procdure suivante : a) Enlever le joint dtanchit. Pour cela, il est ncessaire
Contrles quotidiens
Avant de dmarrer les processus de strilisation, il faut procder aux vrifications suivantes : 1. Mettre un nouveau formulaire dans lenregistreur pour documenter le droulement du cycle de strilisation. 2. Vrifier que le stylo de lenregistreur ou le module dimpression de lautoclave ont de lencre et quil y a du papier. 3. Vrifier que les robinets dalimentation en eau froide, en air comprim et en vapeur sont ouverts. 4. Actionner linterrupteur de mise en route du chauffage de la double enveloppe. La vapeur pntrera alors dans la double enveloppe de la cuve de strilisation. Lorsque la vapeur pntre dans la cuve de strilisation, le processus de chauffage commence. Pour viter les pertes de chaleur, tenir la porte de lautoclave ferme jusquau moment dy introduire la charge striliser. 5. Vrifier que la pression de la conduite dalimentation en vapeur est au moins gale 2,5 bars. 6. Vrifier ltat des manomtres et des thermomtres.
88
de le sortir de sa rainure en desserrant les lments qui le maintiennent en place (vis et plaques). b) Nettoyer le joint et la rainure avec de lalcool de faon ce quaucune matire trangre ne puisse nuire ltanchit. La surface du joint doit tre lisse et propre. c) Appliquer le lubrifiant recommand par le fabricant sur lensemble du joint jusqu ce quil soit entirement protg. De nombreux fabricants dautoclaves utilisent un lubrifiant au graphite rsistant aux hautes tempratures. d) Remettre le joint en place. Dans les autoclaves cuve rectangulaire, on commence par glisser le joint dans sa rainure au milieu dun des cts puis on procde de proche en proche jusqu ce que le joint soit entirement insr dans sa rainure sur ce ct. On recommence de mme pour les trois autres cts. Dans les autoclaves cuve ronde, on introduit le joint dans la rainure en commenant par le haut puis on procde de proche en proche, sans tirer sur le joint, jusqu ce quil soit entirement insr dans sa rainure. On remet alors en place les lments qui le maintiennent en place 4. Vrifier que les joints des soupapes de scurit sont en bon tat. 5. Nettoyer les pointes de lenregistreur avec de leau ou de lalcool et complter les niveaux dencre. En gnral, la pression est enregistre lencre rouge et la temprature lencre verte. 6. Nettoyer lintrieur du gnrateur de vapeur (pour les autoclaves qui en possdent un). Procder comme suit : a) Dbrancher lappareil. b) Faire tomber la pression de vapeur et attendre que lappareil soit revenu la temprature ambiante. c) Enlever le panneau avant du gnrateur.
d) e)
f) g)
h)
Dconnecter les bornes des rsistances chauffantes (thermoplongeurs). Enlever les vis qui maintiennent le panneau avant o sont installes les rsistances et dmonter le panneau avant. Contrler le joint dtanchit et le remplacer si ncessaire. Enlever les dpts accumuls la surface des rsistances chauffantes. Utiliser les produits recommands1. Remonter lappareil en procdant dans lordre inverse.
La figure 36 reprsente le gnrateur de vapeur et ses lments.
Entretien annuel Responsable : technicien de maintenance

1. Nettoyer tous les filtres. 2. Contrler et ajuster le niveau deau du rservoir jusqu ce quil se trouve environ 20 mm du niveau maximum. 3. Contrler et ajuster la tension des ressorts des soupapes diaphragme. 4. Dmonter, nettoyer et ajuster les soupapes de scurit. 5. Changer le filtre air. 6. Effectuer un test gnral du processus de strilisation, avec contrle dtaill de la pression, de la temprature, du temps ncessaire pour chaque tape du cycle, de ltat des lampes tmoins du droulement du processus, et du fonctionnement de lenregistreur. Vrifier que tous les paramtres de fonctionnement se situent dans les tolrances dfinies par le fabricant. 7. Effectuer les contrles trimestriels de routine.
Il se forme des dpts de tartre lorsque leau utilise par le gnrateur de vapeur na pas t traite comme il convient.
Figure 36. Gnrateur de vapeur
Tuyau dvacuation de la vapeur
Jauge de niveau deau
Flotteur
Bornes des rsistances
Rsistances immersion Couvercle du gnrateur de vapeur
Bride de montage des rsistances
Tuyau darrive deau
Tuyau de vidange du gnrateur de vapeur
89
MAINTENANCE DES LMENTS SPCIALISS

Les oprations ci-dessous doivent tre confies un technicien de maintenance et sappliquent certains lments de lautoclave. Etant donn quil existe une grande varit de modles, les procdures dcrites ici ne sappliquent qu certains appareils.
Nettoyage du ltre vapeur

Avertissement : Avant de dmonter le filtre vapeur, faire tomber la pression de vapeur dans le systme. 1. 2. 3. 4. 5. Soulever le couvercle. Enlever le filtre. Le nettoyer soigneusement. Remettre le filtre. Remettre le couvercle.
Entretien des lectrovannes

1. Contrler le son produit par les bobines ou solnodes (bourdonnement). Un bruit excessif est le signe dune surchauffe due au passage de courants lectriques anormalement intenses dans le solnode. Le courant alternatif augmente lorsque limpdance du circuit (Z) diminue. Cela se produit lorsque le solnode nest pas correctement enferm dans une cage de fer. Il peut se crer un entrefer dans le circuit magntique lorsquun encrassement empche la cage protectrice de prendre sa position dfinitive lorsque le solnode est sous tension. Nettoyer soigneusement le logement de la bobine et son noyau de faon ce que la course du piston ne soit pas entrave par des impurets. 2. Remplacer les joints toriques entre le solnode et le corps de la vanne aprs les avoir dmonts. 3. Avant tout dmontage, vrifier comment llectrovanne est monte. Certaines vannes possdent des instructions de montage claires mais dautres en sont dpourvues. 4. Lors du dmontage dune lectrovanne asservie, contrler la position des orifices de connexion lenvironnement de travail, de faon pouvoir la remonter.
On trouvera ci-aprs une liste des problmes les plus frquents. Etant donn la diversit des marques, des modles et de la technologie utilise, il est conseill de suivre les instructions qui figurent dans le manuel dutilisation de lautoclave.
90
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME CAUSE PROBABLE SOLUTION Contrler la rpartition et le volume de la charge. Suivre les recommandations du fabricant. Contrler le pige vapeur. Le rparer ou le remplacer. Vrifier le temps de strilisation. Corriger en fonction du type de cycle. Lindicateur de strilisation nindique pas que le cycle La cuve de strilisation est charge de faon de strilisation a correctement abouti. incorrecte ou est surcharge. Le pige vapeur est dfectueux. Le temps de strilisation est insuffisant.
Lautoclave natteint pas la temprature et la pression Vrifier la temprature slectionne. Vrifier que la de strilisation slectionnes. pression de vapeur correspond au cycle slectionn. Rechercher une ventuelle fuite de vapeur au niveau du joint de la porte ou des dispositifs de contrle du passage de la vapeur. La pntration de la vapeur est insuffisante. Le prtraitement est inadquat. Il reste trop dair dans la cuve. Lindicateur biologique ne convient pas pour le cycle effectu. Le cycle de strilisation est interrompu sans raison apparente. Les objets striliss sont humides. Rduire la quantit de paquets striliser, pour que la vapeur circule mieux. Appeler le service technique pour faire contrler le systme dvacuation. Contrler les spcifications de lindicateur biologique. Rpter le cycle de strilisation.
Pression de vapeur, deau ou dair insuffisante. De ce Contrler la pression de la vapeur, de leau et de lair fait, les rgulateurs et dispositifs de contrle asservis entrants. Ajuster les systmes de rgulation. ne sont pas activs. Le pige vapeur est dfectueux. Le tuyau de vidange de la cuve de strilisation est bouch. Lautoclave est surcharg. Lautoclave nest pas de niveau. Contrler et nettoyer le pige vapeur. Remplacer le pige vapeur. Contrler le systme de vidange. Le nettoyer. Rduire la charge introduite dans la cuve. Rpter le cycle de strilisation. Mettre lautoclave de niveau. Utiliser un indicateur biologique dun autre lot ou dun autre fabricant. Enregistrer soigneusement les paramtres. Contrler le joint. Le remplacer.
Lindicateur biologique est positif.
Lindicateur biologique a t incorrectement slectionn. Le joint dtanchit de la porte est dfectueux.
La pression de vapeur est trop faible.
La vapeur de lintrieur fuit vers un autre lment de Contrler les piges, lectrovannes, etc. lautoclave. La pression de vapeur est trop forte. Lautoclave est surcharg avec des produits textiles. Lautoclave nest pas talonn. Rduire la charge de lautoclave. Etalonner lautoclave.
91
DFINITIONS
Asepsie. Ensemble de procdures ncessaires pour liminer les micro-organismes. Atmosphre. Ancienne unit de pression quivalente 101 325 Pa (Pascals). Bar. Unit de pression quivalente 105 Pa (Pascals). Chaleur humide.Mthode de strilisation qui limine les micro-organismes par dnaturation des protines, processus acclr par la prsence de vapeur deau. Cuve de strilisation. Aussi appele chambre de strilisation. Emplacement dans lequel les objets striliser sont placs. Lors du processus de strilisation, la cuve est remplie de vapeur deau sous pression qui atteint des tempratures directement lies la pression slectionne. Pendant le cycle de strilisation, la cuve est ferme hermtiquement par une porte munie dun systme de scurit qui ne permet louverture que lorsque le processus de strilisation est achev et que la pression interne est redescendue la pression atmosphrique. Dcontamination. Procdure permettant de rduire la quantit de micro-organismes sur un objet ou dans une substance de faon ce que son utilisation ou sa manipulation ne prsente pas de danger. Par exemple, les objets utiliss pour les soins aux patients et ayant pu tre en contact avec des liquides ou des substances biologiques ou avec des matires organiques ncessitent une dcontamination ou mme une strilisation (voir dfinition ci-dessous). Dsinfection. Procdure qui utilise des moyens physiques ou chimiques pour dtruire toute forme de vie vgtative dans ou sur des objets inanims ( lexclusion des spores). Double enveloppe. Espace clos entourant la cuve de strilisation et dans lequel on fait circuler de la vapeur. Elle a pour fonction de transfrer la chaleur vers la cuve de strilisation lors des stades de prtraitement (vacuation de lair) et de post-traitement (schage du matriel strilis). Electrovannes. Dispositifs lectromagntiques de contrle utiliss dans de nombreuses applications. Aussi appeles vannes lectromagntiques. La position dun piston est contrle par une bobine (solnode) dans laquelle circule un courant lectrique ou qui se trouve au repos. Le piston permet ou empche le passage dun fluide dans un circuit donn. Ces vannes sont utilises dans les systmes hydrauliques et pneumatiques, et dans les systmes de vapeur et de vide. Les fabricants ont dvelopp de nombreux modles pour des applications spcialises. Electrovannes asservies. Vannes lectromagntiques dont louverture et la fermeture sont rgies par la pression du milieu. En gnral, elles possdent une membrane avec une petite ouverture par laquelle scoule le milieu. Indicateur de strilisation. Indicateur chimique ou biologique qui permet de vrifier si un objet ou une substance a t strilis avec succs lissue du processus de strilisation. Les indicateurs les plus connus sont le ruban adhsif thermosensible (qui change de couleur lorsque les conditions de temprature dtermines sont atteintes) et les spores de B. stearothermophilus. Inspection. Evaluation visuelle des articles lavs, dans le but de trouver des dfauts ou des impurets qui pourraient interfrer avec le processus de strilisation. Cest une opration trs importante, pour laquelle on peut saider dune loupe afin de distinguer des dtails trs fins. Nettoyage. Elimination mcanique de toutes les matires trangres situes la surface dobjets inanims ; en gnral, le nettoyage implique lutilisation deau propre associe un dtergent. Il sagit dune procdure de base raliser avant de soumettre les objets leurs processus de strilisation respectifs. Le nettoyage peut tre fait la main ou par des mthodes automatises. Il faut savoir que le nettoyage ne dtruit pas les micro-organismes, mais rduit seulement leur nombre. Pascal (Pa). Unit de pression dans le systme international dunits, qui correspond une force dun Newton (N) sexerant sur un (1) mtre carr :
Pa =
1N m2
Pige vapeur. Dispositif destin rduire le passage de la vapeur et permettre le passage du liquide de condensation. Strilisation. Ensemble doprations par lesquelles toutes les formes de vie sont dtruites (y compris les spores) sur des objets inanims au moyen de mthodes physiques, chimiques et gazeuses. Titre en vapeur. Proprit thermodynamique identifie en gnral par la lettre (X) et dfinie comme la relation entre la masse de vapeur et la masse totale dans des conditions satures.
92
Chapitre 13
tuve
Code GMDN Code ECRI Dnomination 21086 21-086 Etuve de laboratoire
21087 21-087
Etuve de laboratoire, circulation dair
Ltuve est utilise au laboratoire pour scher et striliser des rcipients en verre et en mtal. Les fabricants ont dvelopp plusieurs types dtuves cette fin, les unes convection naturelle ou convection force, les autres convection par gravit. En gnral, une tuve fonctionne entre la temprature ambiante et 350 C. Les tuves sont aussi appeles fours air chaud ou tuves four poupinel.
QUOI SERT UNE TUVE

Ltuve est utilise pour striliser ou scher de la verrerie et des objets en mtal servant pour les examens ou les tests effectus au laboratoire. Sur du matriel propre, la strilisation par lair chaud seffectue 180 C pendant deux heures. Lors du chauffage par de lair sec haute temprature, lhumidit svapore et la possibilit de toute activit biologique rsiduelle est ainsi limine.
PHOTOGRAPHIE DUNE TUVE
En gnral, les tuves ont une cuve interne et un caisson extrieur. La cuve interne est ralise en aluminium ou en acier inoxydable, matriaux ayant de trs bonnes proprits de transfert de la chaleur. Elle est quipe dune srie dtagres en fil dacier inoxydable dont la conception permet lair chaud de circuler librement autour des objets scher ou striliser. Elle est isole du caisson extrieur par un matriau isolant qui maintient une temprature leve lintrieur et retarde le transfert de chaleur vers lextrieur. Le caisson extrieur est ralis en acier lamin recouvert dun film protecteur de peinture lectrostatique. La chaleur est produite par une srie de rsistances lectriques qui transfrent de lnergie thermique la cuve. Ces rsistances sont situes dans le bas de ltuve et la chaleur est transfre et distribue par convection naturelle ou par convection force (dans les tuves avec ventilateur intrieur).
Photo avec l Ph laimable i bl autorisation i i d de C Cole-Parmer l P Instrument I C Co.
93
C H A P I T R E 13 T U V E
La puissance (nergie par unit de temps) dissipe par une rsistance lectrique peut se calculer par la formule :
Tableau de temprature/temps de strilisation par la chaleur sche

Temprature (C) 180 170 160 150 140 121 Temps (minutes)2 30 60 120 150 180 360
P = I 2R
dans laquelle : I = intensit du courant lectrique en ampres (A) R = rsistance lectrique en ohms () Sachant que lnergie ne se cre ni ne se perd mais se transforme, il est possible de calculer lnergie thermique quivalente aux lments rsistifs. Dans le cas dun fil rsistif, la quantit de chaleur (q) dissipe peut se calculer par la formule1:
r02 L I 2R = q
dans laquelle : R = rsistance du fil rsistif I = intensit du courant lectrique r0 = rayon extrieur du fil rsistif L = longueur du fil rsistif = chaleur gnre par unit de volume q La rsistance peut se calculer par la formule :
R=
L A
dans laquelle : = rsistivit du matriau de la rsistance A = aire de la section du fil de la rsistance Ltuve possde une porte mtallique ayant sa propre isolation thermique et munie dune poigne galement isole pour empcher de se brler les mains. La porte est monte sur la face avant de ltuve avec un systme de charnires qui permettent une ouverture un angle de 180. Les tuves modernes sont contrles par un module command par microprocesseur, qui permet de slectionner les paramtres de fonctionnement de lappareil et de fixer les consignes dalarme, et de programmer les cycles ou processus thermiques qui contrlent non seulement les tempratures mais aussi leurs variations au cours des phases de chauffage et de refroidissement (naturel) et les priodes pendant lesquelles elles doivent tre maintenues constantes. Les tuves fonctionnent normalement entre la temprature ambiante et 350 C. Certains modles travaillent dans un intervalle plus restreint. Les modles anciens ne possdent quune srie de rsistances dont le fonctionnement est contrl par un thermostat. Le tableau ci-dessous indique la relation entre la temprature et le temps de strilisation par la chaleur sche dans une tuve.
Pour une utilisation correcte de ltuve, les conditions suivantes doivent tre remplies : 1. Un plan de travail vaste, robuste et de niveau. 2. Un espace libre dau moins 5 cm autour de ltuve et suffisamment de place pour disposer les objets striliser ou scher. 3. Une prise de courant relie la terre et suffisante pour alimenter ltuve. Elle doit tre en bon tat et rpondre aux normes lectriques nationales ou internationales en vigueur dans le laboratoire, et ne doit pas tre situe plus dun mtre de lappareil. Les tuves sont classiquement alimentes en 110 V ou 220 V/60 Hz. 4. Vrifier que le circuit lectrique possde les dispositifs de protection ncessaires pour garantir une alimentation correcte.
UTILISATION DE LTUVE
Pour un fonctionnement correct de ltuve, il faut observer un certain nombre de prcautions, dont les plus importantes sont : 1. Ne pas utiliser de matires inflammables ou explosives dans ltuve. 2. Eviter les projections de solutions acides ou la pntration de vapeurs corrosives dans ltuve afin dempcher la corrosion des surfaces intrieures et des tagres. 3. Utiliser des quipements de protection individuelle (gants isolants, lunettes de scurit) et se servir de pinces pour introduire des substances ou objets dans ltuve ou les en retirer.
Utilisation en routine
En gnral, les procdures dutilisation sont les suivantes : 1. Actionner linterrupteur principal, en appuyant sur le bouton habituellement identifi par le symbole (I). 2. Appuyer sur la touche Programme. 3. Slectionner la temprature de fonctionnement en appuyant sur la touche (+) jusqu ce que la temprature choisie saffiche sur lcran. Le processus de chauffage
Cet exemple dquation de transfert de la chaleur sapplique une rsistance en fil mtallique de section circulaire. Pour dautres formes, il faut utiliser des quations diffrentes. 2 Le temps est compt partir du moment o la temprature correspondante est atteinte..
94
commencera et se poursuivra jusqu ce que la temprature slectionne soit atteinte. 4. Avec les tuves programmables, il faut suivre les instructions du fabricant pour le rglage des autres paramtres tels que le temps, les types de chauffage et les alarmes.
Chaque fabricant fournit des instructions dtailles sur le fonctionnement de ces commandes. En gnral, elles sont situes la partie infrieure de ltuve et sont refroidies par un ventilateur qui fait circuler lair ambiant dans lespace o sont installs les autres lments lectroniques de lappareil.
Circuit lectrique COMMANDES DE LTUVE

La figure 37 montre un panneau de contrle tel quon en trouve sur les tuves modernes. On peut reconnatre les lments suivants : 1. Linterrupteur principal. 2. Des crans indiquant la temprature actuelle et la temprature slectionne. 3. La touche de slection des paramtres (Menu). 4. La touche de programmation des c ycles de fonctionnement. 5. Des touches permettant daugmenter et de diminuer la temprature slectionne. La figure 38 montre le circuit lectrique de base pour une tuve, qui comprend les lments suivants : 1. Interrupteur principal. Il sert allumer ou teindre ltuve. 2. Panneau de contrle. It controls the ovens functions (temperature, time, type of heating and cooling, selected operation modes such as preheating, sterilization, dehydration, preparation, drying and even baking). 3. Rsistances. Elments chauffants qui transforment lnergie lectrique en nergie thermique. 4. Systmes indicateurs. Dispositifs compltant le tableau gnral de commande. Ils indiquent si ltuve est allume (ON) et en cours de fonctionnement.
Figure 37. Panneau de contrle lectronique de ltuve
Temprature actuelle
Position Marche (ON)

Temprature slectionne
Interrupteur principal
Position Arrt (OFF)

Menu Programme
Figure 38. Circuit lectrique de ltuve
Interrupteur principal Indicateur dtuve sous tension Prise Prise de terre
Commande gnrale de ltuve Indicateur de rsistance sous tension Rsistances
95
CONTRLE DE QUALIT
Le contrle de qualit des tuves est assez exigeant car la strilisation par la chaleur sche a pour paramtres critiques la temprature et le temps. En gnral, des spores de Bacillus subtilis (varit Niger) sont utilises comme indicateurs biologiques. Elles doivent tre incubes pendant plusieurs heures aprs la fin du processus de strilisation. La charge en spores initiale de lindicateur se situe entre 5 105 et 1 106. Lefficacit du cycle dpend de la diffusion de la chaleur, de la quantit de chaleur disponible et des pertes de chaleur. Son effet germicide est affect par la prsence de matires organiques ou dimpurets sur lobjet striliser. La strilisation par la chaleur sche doit tre rserve aux articles qui ne peuvent pas tre striliss en autoclave.
3. 4. 5. 6. 7.
Ouvrir la porte et enlever les tagres. Dconnecter la sonde du thermomtre. Enlever les vis de fixation du panneau infrieur. Enlever le panneau infrieur. Enlever les vis de fixation des cbles dalimentation lectrique des rsistances et dconnecter les rsistances. 8. Enlever les vis de fixation des rsistances et enlever les rsistances. 9. Installer de nouvelles rsistances ayant les mmes caractristiques que les rsistances dorigine. 10. Remettre les pices en place et reconnecter les parties lectriques.
Remplacement du ventilateur de refroidissement Frquence : effectuer si ncessaire

Pour changer le ventilateur de refroidissement (qui se trouve gnralement dans le bas de ltuve), procder comme suit : 1. Procder comme expliqu pour louverture du compartiment des lments lectroniques. 2. Dconnecter les cbles dalimentation lectrique du ventilateur. 3. Dfaire les vis qui maintiennent le ventilateur. 4. Installer un ventilateur ayant les mmes spcifications que le ventilateur dorigine. Reconnecter les cbles dalimentation du ventilateur. 5. Remettre le capot de protection en place.
Une tuve na besoin que dun entretien simple, et aucune intervention de maintenance complexe nest ncessaire en routine. Les procdures gnrales ci-dessous sont appliquer selon les besoins. Elles peuvent varier selon le type dtuve et les diffrents modles proposs par les fabricants Avertissement : Avant toute intervention dentretien de routine sur une tuve, sassurer quelle est temprature ambiante et que le cble dalimentation est dconnect de la prise de courant.
Accs aux lments lectroniques Frquence : effectuer si ncessaire

Les lments lectroniques de ltuve sont souvent situs dans la partie infrieure de celle-ci. Pour pouvoir les contrler, procder comme suit 1. Dbrancher ltuve. 2. Avancer ltuve jusqu ce que lavant de sa base soit align avec le bord du plan de travail. 3. Placer deux cales denviron 3 cm dpaisseur sous chaque support avant. Cela soulvera lavant de ltuve et facilitera linspection des lments lectroniques lorsque le capot de la partie infrieure de lappareil sera enlev. 4. Dfaire les vis de fixation du capot de la partie infrieure et soulever celui-ci. Contrler les lments lectroniques de commande. En gnral, les lments suivants se trouvent dans ce compartiment : a) Panneau de contrle programmable b. Dispositif de scurit c. Interrupteur principal et coupe-circuit (ensemble) 5. Remettre le capot en place aprs avoir termin la vrification..
Remplacement du joint dtanchit de la porte Frquence : effectuer si ncessaire

Le joint dtanchit de la porte est gnralement en silicone. 1. Eteindre ltuve et ouvrir la porte. 2. Dfaire les dispositifs de scurit qui maintiennent le joint en place. 3. Enlever le joint laide dun tournevis pour le dgager de sa rainure. Eviter de forcer, pour ne pas endommager la rainure. 4. Mettre le joint de remplacement en place en commenant par le haut de la porte. Puis le mettre en place de proche en proche en avanant vers les cts, et en le fixant mesure avec les dispositifs qui le maintiennent en place. Procder de mme pour le bas de la porte.
Remplacement du thermocouple Frquence : effectuer si ncessaire

1. Ouvrir le compartiment des lments lectroniques. 2. Enlever les cbles du thermocouple de leurs connexions sur la carte de contrle. 3. Librer le support du thermocouple qui se trouve dans le haut de ltuve. Le tirer vers lavant jusqu ce que le cble de connexion soit dgag sur une longueur dau moins 15 cm. 4. Couper le cble du thermocouple et le dnuder. 5. Raccorder les extrmits libres des fils du thermocouple dfectueux avec les fils du thermocouple de rechange. Utiliser du ruban adhsif pour maintenir le raccord. 6. Tirer doucement le thermocouple dfectueux hors du
Remplacement des rsistances chauffantes Frquence : effectuer si ncessaire

La procdure dcrite ci-dessous doit tre effectue par un personnel ayant de bonnes connaissances en lectricit. 1. Dbrancher ltuve. 2. Enlever le thermomtre qui se trouve la partie suprieure de la cuve.
96
compartiment des lments lectroniques en laissant les fils attachs pour servir de guide lors du remplacement. 7. Connecter les fils du nouveau thermocouple aux ples correspondants en veillant ce que la polarit dorigine soit respecte. 8. Remettre le capot de protection en place.
Remplacement des charnires de la porte Frquence : effectuer si ncessaire

Pour remplacer les charnires de la porte, procder comme suit : 1. Ouvrir la porte et la soulever pour la sortir de ses gonds. 2. Enlever les vis de fixation des charnires dfectueuses. 3. Enlever la ou les charnires dfectueuses. 4. Mettre la ou les nouvelles charnires en place et les fixer laide des vis de fixation. 5. Remettre la porte en place.
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Ltuve nest pas alimente en lectricit. CAUSE PROBABLE Ltuve nest pas branche. Linterrupteur principal est sur OFF. Le coupe-circuit est dfectueux. La carte de contrle est dfectueuse. Le cble dalimentation est dfectueux. La temprature est de temps en temps trop leve. Ltuve prsente des erreurs de chauffage. Le thermocouple est dfectueux. La commande de temprature est dfectueuse. Temprature plus basse que la temprature slectionne. Le thermocouple est dfectueux. La rsistance chauffante est dfectueuse. Le relais est dfectueux. La commande de temprature est dfectueuse. Lcran affiche le message Open ( ouvert ) Le circuit du thermocouple est ouvert. SOLUTION Brancher ltuve sur la prise de courant. Mettre linterrupteur sur ON. Remplacer le coupe-circuit. Remplacer la carte de contrle. Contrler/remplacer les cbles de raccordement. Remplacer le thermocouple. Remplacer la commande de temprature . Changer la temprature slectionne. Attendre que la temprature atteigne la valeur slectionne. Remplacer le thermocouple. Remplacer la rsistance chauffante. Remplacer le relais. Remplacer la commande de temprature. Vrifier la connexion du thermocouple ou remplacer le thermocouple.
97
DFINITIONS
Chaleur. Forme dnergie transfre dun systme se trouvant une temprature donne un autre systme se trouvant une temprature plus basse du fait de la diffrence de temprature entre les deux. Lorsquun systme de masse leve (M) est mis en contact avec un autre systme de masse faible (m) se trouvant une temprature diffrente, la temprature rsultante est proche de la temprature initiale du systme ayant la masse la plus leve. On dit alors quune quantit de chaleur Q a t transfre du systme ayant la temprature la plus leve au systme ayant la temprature la plus basse. La quantit de chaleur Q est proportionnelle au changement de temprature T. La constante C, ou capacit calorifique du systme, permet dtablir la relation Q = CT, do lon peut dduire que lune des consquences du changement de temprature dans un systme est un transfert de chaleur. Coupe-circuit. Dispositif de contrle lectrique qui permet un appareil ou dispositif lectrique dtre en marche (ON) ou larrt (OFF). Aussi appel interrupteur Rsistance. Opposition quun matriau ou un circuit lectrique exerce au passage du courant lectrique. Cest la proprit dun circuit qui transforme lnergie lectrique en chaleur en sopposant au passage du courant. La rsistance (R) dun corps de section uniforme, comme un fil mtallique, est directement proportionnelle la longueur (l) et inversement proportionnelle laire de la section (a). La rsistance se calcule par la formule :
l a dans laquelle : k = constante qui dpend des units employes l = longueur du conducteur a = aire de la section du conducteur R =k
Lohm () est lunit courante de rsistance lectrique ; un ohm est gal un volt par ampre. Thermocouple lectrique.Dispositif utilis pour la mesure prcise de la temprature. Il se compose dun assemblage de deux fils mtalliques de nature diffrente relis une de leurs extrmits, qui produit une petite diffrence de potentiel proportionnelle la diffrence de temprature entre ses deux extrmits. Ce phnomne est connu sous le nom deffet Seebeck, du nom du physicien allemand Thomas Seebeck qui la dcouvert. Thermostat.Dispositif qui rgule la temprature dun systme. Il agit habituellement par dilatation de lun de ses lments, qui active mcaniquement un autre lment, par exemple un interrupteur qui contrle une fonction dtermine.
98
Chapitre 14
Incubateur
Code GMDN Code ECRI Dnomination 35482 15-151 Incubateur arobie
35483 15-152
Incubateur anarobie
Le mot incubateur vient du latin incubare qui signifie couver. Lincubateur est une enceinte dont latmosphre, la temprature et lhumidit sont contrles afin de maintenir des organismes vivants dans un environnement adapt leur dveloppement. Parmi ses applications les plus courantes figurent lincubation de cultures bactriennes, virales, microbiologiques en gnral et cellulaires, la dtermination de la demande biochimique en oxygne (DBO) et le stockage de produits biologiques. Il existe divers modles de complexit diffrente. Certains ne contrlent que la temprature tandis que dautres contrlent galement la composition de latmosphre de lenceinte. Il en existe aussi qui peuvent travailler des tempratures plus basses que la temprature ambiante grce des systmes de rfrigration. Selon les modles et les spcifications de ces appareils, les tempratures de travail vont de 10 C 75 C ou un peu plus. Certains incubateurs ont un systme
dinjection de CO2 pour obtenir des conditions favorables au dveloppement de diverses espces de micro-organismes et de cultures cellulaires.
Lincubateur utilise divers moyens de transfert de la chaleur et de contrle de lenvironnement de faon obtenir les conditions requises pour des techniques de laboratoire spcialises. Il possde en gnral un systme de rsistances lectriques contrl par thermostat ou par microprocesseur. En ce qui concerne les systmes de transfert de la chaleur, les incubateurs utilisent la conduction ou la convection naturelle ou force
Conduction thermique
Dans les incubateurs qui fonctionnent par conduction thermique, des rsistances lectriques transfrent directement la chaleur vers les parois de lenceinte dincubation o sont dposs les chantillons. Les rsistances constituent une rgion de haute temprature et lenceinte une rgion de basse temprature. Le transfert dnergie thermique se fait toujours du corps le plus chaud vers le corps le plus froid, selon la loi de Fourier exprime par la formule :
PHOTOGRAPHIE DUN INCUBATEURS Incubateur standard
q = kA
T x
Photo avec laimable autorisation de Cole-Parmer Instrument Co.
dans laquelle : q = quantit de chaleur transfre par conduction k = conductivit thermique du matriau a = aire de la surface de transfert de chaleur T= gradient de temprature dans la direction du flux de chaleur Le signe moins () est ajout en vertu du deuxime principe de la thermodynamique.
99
C H A P I T R E 14 I N C U B AT E U R
Convection thermique
Dans les incubateurs fonctionnant par convection thermique, la chaleur produite par le systme de rsistances est dabord transfr lair circulant dans lenceinte puis de lair aux chantillons. Lefficacit de ce processus dpend du schma dcoulement de lair. En gnral, lair entre par le bas de lincubateur et est chauff dans un compartiment do il passe dans lenceinte dincubation o il circule selon un schma uniforme. Il sort de lenceinte par un tuyau dvacuation situ la partie suprieure de lappareil. Lquation de base qui explique la convection est la suivante1:
de rfrigration est command par le systme de contrle de la temprature de lincubateur. Leau ltat liquide possde un pouvoir lev dabsorption et de rtention de la chaleur. Certains fabricants ont dvelopp des modles dincubateurs dans lesquels lenceinte dincubation est entoure dune double paroi remplie deau. Ce dispositif est particulirement utile pour assurer la stabilit de la temprature lintrieur de lenceinte. Il existe des incubateurs avec dispositif dinjection de gaz comme le dioxyde de carbone (CO2) dans lenceinte des concentrations stables comprises entre 3 et 5 %. Le systme de contrle de la temprature de lincubateur repose sur lutilisation de thermostats (bilames ou dilatation de liquide), thermocouples, thermistors et divers dispositifs semi-conducteurs. Ceux-ci utilisent des circuits lectroniques qui contrlent la temprature ainsi que les fonctions de lincubateur au moyen de microprocesseurs. Chaque fabricant a son propre systme. La temprature actuelle, la temprature programme et autres informations saffichent sur un cran laide de diodes lectroluminescentes (DEL). Pour que la temprature dun incubateur soit correctement rgule, il doit y avoir une diffrence dau moins 5 C entre la temprature de lenceinte (Tc) et la temprature ambiante (Ta). Sil faut que la temprature de lenceinte (Tc) soit plus basse que la temprature ambiante (Ta), un systme de rfrigration est ncessaire. Par consquent, le choix dun incubateur dpend du type de manipulations effectues au laboratoire. Les spcifications doivent tre tudies et dfinies avec soin pour que lappareil que lon envisage dacqurir rponde aux besoins rels du laboratoire.
q = hA(Tw T )
dans laquelle : q = quantit de chaleur transfre par convection h = coefficient de convection pour le transfert de chaleur A = aire de la surface de transfert de chaleur T W = temprature la surface de la rsistance T = temprature du fluide (air) Certains incubateurs ont aussi des ventilateurs qui font circuler lair par convection force. Le schma de la figure 39 montre trois principes diffrents utiliss dans les incubateurs : conduction thermique, convection naturelle et convection force. Quand une temprature plus basse que la temprature ambiante (Ta) est ncessaire dans lenceinte dincubation, lincubateur doit tre muni dun systme de rfrigration. Ce systme permet dextraire la chaleur de lenceinte afin de maintenir celle-ci une temprature plus basse. Le systme
Transfert de chaleur par lquation de convection tablie par Isaac Newton (loi de refroidissement).
Figure 39. Systmes de transfert de chaleur utiliss dans les incubateurs
Conduction
Convection naturelle
Convection force
100 0
COMMANDES DE LINCUBATEUR
Le schma de la figure 40 illustre le type de commandes que lon trouve normalement sur les modles rcents dincubateurs. 1. Un interrupteur principal pour mettre lappareil sur Marche ou sur Arrt. Certains fabricants ajoutent un coupe-circuit de protection. Linterrupteur a deux positions : en position Marche (ON) ou (I), lincubateur est sous tension. En position Arrt (OFF) ou (O), lincubateur est teint. 2. Un cran sur lequel saffichent les paramtres slectionns. Par exemple : temprature slectionne, consignes dalarme (temprature maximale et minimale). 3. Deux touches de commande sont normalement identifies par Menu et Slection (ou Set). Elles servent programmer lincubateur et rgler les consignes dalarme. 4. Deux touches de rglage de la temprature. Elles sutilisent conjointement avec les touches de commande. 5. Une srie de lampes tmoins DEL qui indiquent ltat de fonctionnement. Si le systme de chauffage est en fonction, la DEL Chauffage est allume. Si lincubateur est en cours de programmation, la DEL Programme est allume. 6. Les touches de rglage et de commande sont situes sur le panneau de contrle de lappareil. Chaque fabricant utilise des commandes adaptes au modle dincubateur : en gnral, les incubateurs possdent les commandes mentionnes ci-dessus. On trouvera des instructions dans le manuel dutilisation fourni par le fabricant. En gnral, on slectionne le paramtre voulu au moyen de la touche Menu. A laide des touches de rglage, on ajuste les paramtres la valeur souhaite. On confirme ensuite le rglage en appuyant sur la touche Slection ou Set.

Pour que lincubateur fonctionne correctement, les conditions suivantes doivent tre remplies : 1. Une alimentation lectrique rpondant aux normes lectriques en vigueur dans le pays. La prise de courant alimentant lincubateur doit se trouver au maximum 1,5 m de lappareil. Elle doit tre alimente en 120 V/60 Hz ou en 220-240 V/50-60 Hz et tre relie la terre. 2. Un espace libre sur les cts et larrire de lincubateur pour permettre le passage des cbles et la ventilation ncessaire son fonctionnement normal. Cet espace doit tre de 5 10 cm. 3. Un secteur de travail o les variations de temprature sont rduites au minimum. 4. Une table de travail ou une paillasse solide et de niveau, capable de supporter le poids de lincubateur. Le poids dun incubateur avec trois tagres se situe entre 60 et 80 kg. 5. Des rgulateurs de pression, tuyaux et raccords pour les incubateurs travaillant sous atmosphre de dioxyde de carbone (CO2) et des systmes de fixation pour les bouteilles de CO2 sous pression.
ENTRETIEN DE ROUTINE ET UTILISATION DE LINCUBATEUR

On trouvera ci-dessous un mode demploi gnral et une description des oprations dentretien courantes pour les incubateurs. Pour les procdures exactes, on se conformera aux recommandations du fabricant.
Figure 40. Commandes de lincubateur
Ecran dachage (2)
C
Lampes tmoins (DEL) (5) Programme Alarme Chauage Position Marche (ON)
Panneau de control (6)
Menu
Slec
Position Arrt (OFF) Interrupteur principal (1)
Touches de commande (3)
Touches de rglage (4)
101
Recommandations pour lutilisation de lappareil

1. Ne pas utiliser un incubateur en prsence de matires inflammables ou combustibles car les lments internes de lappareil pourraient constituer des sources dignition pendant le fonctionnement. 2. Eviter les claboussures de solutions acides dans lincubateur. Elles pourraient endommager le matriau de lenceinte dincubation. Si possible, essayer dutiliser des substances de pH neutre. Eviter dincuber des substances mettant des vapeurs corrosives. 3. Eviter de dposer des rcipients dans le fond de lincubateur sur la plaque qui protge les rsistances chauffantes. 4. Utiliser des lments de protection personnelle lors de lutilisation de lincubateur : lunettes de protection, gants, et utiliser des pinces pour dposer et enlever les rcipients. 5. Eviter de se tenir devant un incubateur ouvert. Certaines substances mettent des vapeurs qui ne doivent pas tre inhales. 6. Etalonner lincubateur lendroit o il est install pour vrifier son uniformit et sa stabilit. 7. Vrifier la temprature de fonctionnement le matin et le soir, avec des instruments talonns et certifis (thermomtre, thermocouple, etc.). 8. Enregistrer sur le document ou le formulaire appropri toute anomalie dtecte (temprature, humidit, teneur en CO2) et les mesures correctrices ncessaires. 9. A faire chaque jour : Vrifier que la temprature dans lincubateur ne varie pas de plus de 1 C ( 1 C). Noter la temprature. 10. Sil faut mettre de leau dans lenceinte dincubation pour maintenir un degr dhumidit dtermin, lui ajouter un inhibiteur microbien non volatil.
Avertissement : Avant deffectuer toute rparation, vrifier que lincubateur a t dcontamin, est propre et dbranch de la prise de courant. Lentretien de routine dcrit ci-dessous doit tre effectu exclusivement par un personnel approuv ayant reu une formation technique sur les incubateurs et connaissant les risques associs la manipulation de ce type dappareil. On vrifiera ltat et le fonctionnement correct des lments suivants : 1. Le joint dtanchit de la porte. Il est en gnral en silicone et est garanti pour plusieurs annes dutilisation. Pour remplacer le joint dtanchit, il est ncessaire de dmonter la porte et de dfaire les pices qui servent maintenir le joint en place. En gnral, le joint est insr dans une rainure. Le nouveau joint doit avoir les mmes spcifications que le joint dorigine. On le monte dans sa rainure et on le maintient en place avec le systme de fixation qui peut tre, dans certains incubateurs, un simple jeu de vis. 2. Les lments chauffants (systme de rsistances). Les lments qui constituent le corps de chauffe de lincubateur sont gnralement situs dans le bas de celui-ci. Pour les remplacer, il est ncessaire de dmonter les panneaux de protection et le panneau infrieur de lappareil. Dans certains incubateurs, il faut galement dmonter les portes (porte extrieure mtallique et porte intrieure en verre). Une fois les panneaux de protection enlevs, on dconnecte les rsistances et les capteurs de temprature et on les remplace par de nouveaux ayant les mmes spcifications que les lments dorigine. On remonte ensuite tous les lments et on effectue un talonnage. 3. Le ventilateur de refroidissement. Sil est dfectueux, cet lment doit tre remplac par un ventilateur ayant les mmes caractristiques que le ventilateur dorigine. Pour le remplacer, il faut ouvrir le compartiment o il est install. Dans certains incubateurs, il faut galement dmonter les portes et certains panneaux de protection. Une fois cela fait, on dconnecte le ventilateur endommag et on le remplace par le nouveau, en vrifiant que lair souffle dans la bonne direction. On remonte ensuite tous les lments. Pour remplacer les lments mentionns ci-dessous, procder de la mme manire que pour les lments ci-dessus. Il est trs important dutiliser des pices de rechange ayant les mmes spcifications que la pice dorigine. 4. Ventilateur interne (pour la circulation dair).
Recommandations pour le nettoyage

Nettoyer rgulirement les incubateurs pour cultures bactriennes ou cellulaires, au moins tous les 14 jours et aprs toute projection accidentelle de matriel infectieux, en utilisant un dsinfectant appropri. 1. Dbrancher lincubateur avant de commencer le nettoyage. 2. Utiliser des produits de nettoyage non abrasifs, par exemple un chiffon imbib dun dtergent doux, pour nettoyer les parties intrieures et extrieures facilement accessibles. 3. Eviter tout contact entre les produits de nettoyage et les parties lectriques. 4. Attendre que lincubateur soit sec (quil ny ait plus dhumidit rsiduelle) avant de le rebrancher.
Entretien de routine
Un incubateur bien install et correctement utilis nexige que peu dentretien et il peut scouler des annes avant quune intervention technique soit ncessaire. Pour toute opration dentretien, on se conformera aux recommandations du fabricant.
5. Systme de contrle lectronique. 6. Elments lectroniques. 7. Thermocouples. 8. Porte en verre (intrieure). 9. Poigne. 10. Chssis de lincubateur (intrieur et extrieur).
102
Les situations courantes prsentes dans le tableau ci-dessous ncessitent lintervention dun personnel autoris ayant reu une formation technique sur lutilisation et lentretien des incubateurs. Les cas spciaux doivent tre traits selon les recommandations du fabricant.
GUIDE DE DPANNAGE Incubateur standard

PROBLME Lincubateur ne fonctionne pas. CAUSE PROBABLE Le rseau lectrique nest pas aliment. Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. Le cble dalimentation lectrique est dfectueux. Lincubateur affiche des erreurs de chauffage. Le systme de contrle de la temprature est dfectueux. La rsistance chauffante est dfectueuse. La connexion de la rsistance chauffante est dfectueuse. Le thermocouple lectrique est dfectueux. La temprature slectionne est plus basse que la temprature ambiante. SOLUTION Vrifier ltat du raccordement au secteur. Mettre linterrupteur sur ON. Contrler ltat du cble ou le remplacer. Vrifier et rgler ou remplacer le systme de contrle de la temprature. Remplacer la rsistance par une autre ayant les mmes caractristiques que la rsistance dorigine. Nettoyer les bornes de connexion. Reconnecter correctement la rsistance. Remplacer le thermocouple lectrique. Contrler les spcifications de lincubateur. Seuls les incubateurs rfrigrs peuvent fonctionner dans ces conditions. Normalement, la temprature ambiante est plus basse que celle de lincubateur. Remplacer le relais. Remplacer le ou les joints de la porte. Attendre que la temprature de lincubateur descende jusqu la valeur slectionne. Remplacer le systme de contrle de la temprature. Remplacer le relais. Laisser l'incubateur refroidir jusqu' ce que la temprature atteigne la temprature slectionne et se stabilise.
Le relais est dfectueux. Le ou les joints de la porte sont dfectueux. Lalarme reste allume et la temprature est plus leve que la valeur slectionne. La temprature slectionne a t abaisse une valeur plus basse que la consigne dalarme. Le systme de contrle de la temprature est dfectueux. Le relais est dfectueux. Lcran affiche en permanence un signal derreur. En gnral, la DEL indique EEE. La diode dalarme clignote.
Incubateur basse temprature

PROBLME CAUSE PROBABLE Il ny pas dalimentation lectrique. La temprature affiche est instable. (Plus haute ou plus basse que la valeur slectionne). La temprature de lenceinte dincubation est uniforme, mais suprieure la valeur slectionne. Il y a une accumulation de givre autour de lvaporateur. Il y a une accumulation de givre autour de lvaporateur. SOLUTION Mettre linterrupteur sur ON. Vrifier le circuit dalimentation lectrique. Dgivrer selon la procdure indique par le fabricant. Rduire la temprature de refroidissement. Dgivrer selon la procdure indique par le fabricant. Les commandes de lincubateur ne fonctionnent pas. Linterrupteur est sur OFF.
La circulation de lair dans lenceinte est entrave par Rorganiser le contenu de lenceinte de faon les chantillons. permettre lair de circuler. La temprature est plus haute ou plus basse que la valeur slectionne. Lappareil steint en cours de fonctionnement. Le systme de contrle de la temprature devrait tre talonn. La tension dalimentation est incorrecte. Etalonner selon la procdure indique par le fabricant. Vrifier la tension dalimentation ; elle ne doit pas diffrer de plus de 5 % de la tension spcifie sur la plaque de lappareil. Le branchement lectrique est dfectueux. Le compresseur ne fonctionne pas alors que le tmoin de refroidissement est allum. La protection thermique du compresseur sest active.. Vrifier la tension dalimentation ; elle ne doit pas diffrer de plus de 5 % de la tension spcifie sur la plaque de lappareil.
La temprature affiche est plus leve que la valeur Le relais du circuit de refroidissement est dfectueux. Remplacer le relais du circuit de refroidissement. slectionne et lalarme se dclenche plus de 40 C. Le compresseur est dfectueux. Remplacer le compresseur. Remettre du rfrigrant et talonner (il sagit dune procdure spcialise qui ncessite des outils spciaux).
103
DFINITIONS
Conduction thermique. Forme de transfert de la chaleur dans une substance lorsque la chaleur passe du point dont la temprature est la plus leve au point dont la temprature est la plus basse. Convection thermique Forme de transfert de la chaleur par dplacement dun fluide ou dair. DEL (Diode lectroluminescente). Dispositif lectronique largement utilis pour afficher des donnes sur un cran. Aussi appele LED (Light-emitting diode). Demande biochimique en oxygne (DBO). Quantit doxygne dont des micro-organismes arobies ont besoin pour dcomposer les matires organiques dans un chantillon. Elle est utilise comme indicateur du niveau de pollution de leau. La DBO est mesure par la masse en milligrammes doxygne utilise par litre dchantillon lorsque celui-ci est incub 20 C pendant 6 jours. Rsistance. Opposition quexerce un matriau ou un circuit lectrique au passage du courant lectrique. Cest la proprit dun circuit qui transforme lnergie lectrique en chaleur en sopposant au passage du courant. La rsistance (R) dun corps de section uniforme, par exemple un fil mtallique, est directement proportionnelle sa longueur (l) et inversement proportionnelle sa section (a). La rsistance se calcule au moyen de la formule :
l a dans laquelle : k = constante qui dpend des units employes l = longueur du conducteur a = aire de la section du conducteur R =k
Lohm () est lunit classique de rsistance lectrique ; 1 ohm est gal 1 volt par ampre. Thermistor. Aussi appel thermistance. Composant lectronique dont la rsistance varie avec la temprature. Ce sont des dispositifs peu coteux utiliss dans diverses applications, dont la plus courante est le contrle de la temprature. Thermocouple. Dispositif utilis pour la mesure prcise de la temprature. Il se compose dun assemblage de deux fils mtalliques de nature diffrente relis une de leurs extrmits, qui produit une petite diffrence de potentiel proportionnelle la diffrence de temprature entre ses deux extrmits. Ce phnomne est connu sous le nom deffet Seebeck, du nom du physicien allemand Thomas Seebeck qui la dcouvert. Thermostat. Dispositif qui rgule la temprature dun systme. Il agit habituellement par dilatation de lun de ses lments, qui active mcaniquement un autre lment, par exemple un interrupteur qui contrle une fonction dtermine.
104
Chapitre 15
Microscope
Code GMDN Code ECRI Dnomination 36351 12-536 Microscopes
PHOTOGRAPHIES DE MICROSCOPES Stromicroscope binoculaire C Ce type d de microscope i utilise ili

divers systmes de lentilles et un clairage contrl pour obtenir une image agrandie de lobjet.
Photo avec laimable autorisation de Olympus
Ce type de microscope
permet dobtenir des images tridimensionnelles (en volume) en superposant deux images, une pour chaque il.
Photo avec laimable autorisation de Nikon Instruments
Le mot microscope vient du grec micros qui signifie petit et skopien, qui signifie voir ou examiner. Ce chapitre prsente les prcautions prendre lors de lutilisation des microscopes employs dans la pratique clinique et leur entretien courant. Selon le systme de contraste, il existe diverses sortes de microscopes. Les plus courants sont : Microscope optique fond clair Microscope optique fond noir Microscope optique fluorescence Microscope optique contraste de phase Microscope optique interfrentiel Microscope optique polarisant Microscope optique invers Stromicroscope
Microscope binoculaire
105
C H A P I T R E 15 M I C ROS COP E
QUOI SERT UN MICROSCOPE

Le microscope est un instrument de prcision qui possde divers sous-systmes optiques (lentilles, filtres, prismes, condenseurs), mcaniques, pour contrler la position de lchantillon dans lespace selon des coordonnes tridimensionnelles (X, Y, Z), lectriques (transformateur et source lumineuse), et lectroniques (appareil photo, enregistreur vido, etc.), qui interagissent pour agrandir et contrler limage dobjets non dcelables lil nu. Pour observer des chantillons, il est indispensable de les prparer selon des techniques qui permettent de mettre en vidence les dtails que lon souhaite observer. Le microscope constitue un outil de diagnostic de premier ordre dans le domaine des soins de sant, notamment dans des spcialits comme lhmatologie, la bactriologie et la parasitologie, et pour la formation des professionnels de sant (certains microscopes sont quips daccessoires qui permettent aux tudiants de faire des observations sous la direction dun professeur). Les perfectionnements techniques apports aux microscopes ont permis aux fabricants comme aux chercheurs de mettre au point de nombreux modles spcialiss. Ces appareils jouent un rle fondamental dans les progrs de la connaissance en gnral et dans la comprhension des mcanismes naturels.
Le microscope utilise les proprits physiques de linteraction des lentilles avec la lumire. Une lentille est un lment optique habituellement fabriqu en verre et qui rfracte la lumire. Ses dimensions sont calcules et elle possde en gnral des surfaces paraboliques ou sphriques. Si les rayons lumineux qui frappent lune des faces de la lentille convergent en un point unique F lorsquils en sortent, la lentille est convexe et est dite convergente. Si la lentille disperse les rayons lumineux qui la traversent, elle est concave et est dite divergente. Les lentilles convexes reprsentes sur la figure 41 constituent les lments de base du microscope. Sur la figure 41, on peut identifier le foyer (F), point o les rayons lumineux se concentrent, et la faon dont les rayons lumineux sont rfracts lors de leur passage au travers de la lentille. La distance entre la lentille et le foyer est connue sous le nom de distance focale (D). La figure 42 rsume le principe du fonctionnement des lentilles appliqu au microscope.
Figure 41. Lentille convexe (convergente)
Lentille convexe Rayons lumineux Axe optique de la lentille D
Distance focale
Foyer F Front dondes planes Front dondes sphriques
Figure 42. Optique de la lentille convergente
a Objet h F f
b Lentille convergente
Lobjet (h) situ une distance (a) de la lentille produit une image (h) une distance (b) de la lentille, avec h > h. Le foyer (F), o les ondes lumineuses se rejoignent, se trouve la distance focale (f ) de la lentille. Voir le texte pour les dtails et quations.
h f Image
106
Lorsquun objet clair (h) est plac une distance (a) devant une lentille convergente, les rayons lumineux traversent la lentille et sont rfracts. Un rayon traversant la partie suprieure de lobjet croise laxe optique de la lentille au point focal (F). Il est rfract par les deux faces de la lentille et sort dans une direction parallle laxe optique. Le rayon qui traverse la partie suprieure de lobjet paralllement laxe optique traverse la lentille et est rfract. Il passe ensuite par le point focal (F) du ct image jusqu ce quil croise le premier rayon une distance (b) de la lentille, o se forme limage. Dans le cas illustr par la figure 42, la distance (a) est suprieure la distance focale (f), et il se forme une image relle renverse la distance (b) de la lentille. La distance focale (f ) est lie aux distances (a) et (b) par la relation :
Le grossissement (M) dune lentille, dfini par la relation entre la taille de lobjet et la taille de limage forme, est reprsent par la formule :
M =
h b = h' a
dans laquelle : (h) et (h) correspondent respectivement aux dimensions de limage et de lobjet, et (a) et (b) aux distances entre la lentille et le point o se forme limage, et entre la lentille et le point o se situe lobjet.
1 1 1 = + f a b
Figure 43. Schma dun microscope
Oculaire [1]
Tte binoculaire [3]
Revolver porte-objectifs [4] Objectifs [5] Platine porte-objet [23] Condenseur [6] Diaphragme [7] Verre protecteur avec porte-ltre [10]
Bras du microscope [22] Rglage du condenseur en hauteur [21]
Bouton de rglage macromtrique et micromtrique [20] Bouton de rglage du diaphragme de champ [3] Eclairage Socle [24]
107
Elments du microscope
Les principaux lments des sous-systmes du microscope sont rassembls dans le tableau ci-dessous..

Normalement, les microscopes sont aliments en courant 110 V/60 Hz ou 220 V/60 Hz. Certains ont une source lumineuse rgule qui permet den ajuster lintensit. Dautres ont, au
lieu dune lampe, un miroir qui dirige la lumire vers la lame dpose sur la platine porte-objet. Ces microscopes sont surtout utiles dans les zones loignes des centres urbains, o il ny a pas dlectricit et o ils sont utiliss par des quipes de sant mobiles. Certains types de microscopes ncessitent des installations spciales : par exemple, il faut une chambre noire pour faire des observations avec un microscope fluorescence.
Figure 44. Coupe transversale dun microscope
Lgende
N
1
Systme Tte binoculaire
N 1 2 3 Oculaire Tube binoculaire Tte binoculaire
Elment
1
2
4 5 23 22 21 20
Revolver porteobjectifs Platine et condenseur
4 5 6 7 8
Revolver porte-objectifs Objectifs Condenseur Diaphragme douverture Porte-filtre Lentille grand champ Rglage du condenseur en hauteur Platine porte-objet Verre protecteur avec porte-filtre Bouton de rglage du diaphragme de champ Miroir concave Lampe incandescence Support de la lampe avec bague de rglage Lentille du collecteur Miroir Transformateur interne Rhostat Cble dalimentation Bouton de rglage macromtrique et micromtrique Bras du microscope Socle
6 8 7 9 10 11 12 13 14 19 18 17 16 15
9 21 23 4 Eclairage 10 11 12 13 14 15 16 5 Corps du microscope 17 18 19 20 22 24
108
PROBLMES POTENTIELS AVEC LES MICROSCOPES
Figure 45. Tte binoculaire
Oculaire
Tte binoculaire (prismes, lentilles et miroirs)
Tube binoculaire
intervention trs complexe qui ne peut tre confie qu un laboratoire spcialis ou une socit de maintenance assurant ce type de service. Si on enlve un prisme sans une formation et un outillage adquats, on peut gravement altrer la qualit de limage et mme casser llment du microscope. Miroirs. Leur surface rflchissante est directement expose et peut se corroder. Si une rparation est ncessaire, il faut dmonter le miroir, lenlever de la tte binoculaire et le remplacer par un autre qui sera coup, coll et align directement dans sa position dfinitive.
Figure 46. Systme dclairage

Oculaires
Les problmes les plus frquents avec les oculaires sont dus la poussire et lencrassement, aussi bien sur les surfaces internes que sur les surfaces externes. Ces impurets produisent des ombres qui interfrent avec lobjet analys, surtout fort grossissement (40X-100X). Si elles se trouvent lextrieur, il suffit de nettoyer les lentilles. Si elles sont lintrieur, il faut dmonter loculaire, nettoyer les surfaces internes, remonter loculaire et vrifier son bon tat.
10 11 12 13 14 16 15
Des rayures peuvent sobserver la surface des lentilles de loculaire, surtout si celui-ci est utilis depuis longtemps. Elles sont dues la ngligence lors du nettoyage, du fait de lutilisation de matriaux inadapts. Les rayures produisent des ombres ressemblant des toiles daraigne dans le champ visuel de loculaire. Avec ce type de dommage, il faut malheureusement remplacer loculaire. Parfois, le mcanisme de rglage de la mise au point de loculaire se bloque. Pour le rparer, il faut dmonter loculaire, appliquer un solvant appropri sur le filetage, nettoyer le mcanisme de mise au point et remonter loculaire. Si les lentilles de loculaire sont casses en raison de circonstances particulires (chutes, utilisation inapproprie), il faut remplacer loculaire.
10. Verre protecteur avec ltres interchangeables 11. Bouton de rglage du diaphragme de champ 12. Miroir concave 13. Lampe incandescence 14. Support de la lampe avec bague de rglage 15. Lentille du collecteur 16. Miroir
Tte binoculaire
Ltat de la tte binoculaire a un effet direct sur la qualit de limage fournie par le microscope. Ses lments les plus importants sont les prismes et les miroirs. Lencrassement des lments optiques de la tte affecte la qualit de limage. La tte binoculaire peut dailleurs se salir lors du travail normal de laboratoire, par exemple lorsquon change les oculaires, quon installe des accessoires (par exemple un appareil photo) ou simplement lorsquon oublie de remettre les protections quand le microscope nest pas en service.
Cest un lment fondamental du microscope. Si le systme dclairage ne fonctionne pas bien, le microscope est inutilisable car lintensit lumineuse et le contraste sont indispensables pour observer les chantillons. Plusieurs facteurs peuvent affecter le systme dclairage ; les plus courants sont lencrassement et la dtrioration des miroirs et des lentilles, les dfauts de la tension dalimentation, ou lutilisation dampoules autres que celles recommandes par le fabricant. Ces anomalies provoquent de petites ombres dans le champ de vision et une intensit lumineuse trop faible, ou un manque duniformit de lclairage.
Poussire et encrassement internes

Cela se produit lorsque les systmes dclairage ne sont pas scells pour empcher linfiltration de la poussire et des impurets. La prsence de poussire dans le systme provoque un phnomne de diffusion et diminue la quantit de lumire projete sur lchantillon. Les impurets de grande taille produisent des ombres qui rendent lobservation difficile. Pour remdier ce problme, il faut dmonter le systme dclairage, nettoyer ses lments, le remonter et le raligner.
Prismes. Ils ont des surfaces rflchissantes argentes qui peuvent se corroder avec le temps et perdre leur pouvoir rflchissant. Certains prismes nont quune seule couche de peinture rflchissante, que la lumire peut traverser. Si la surface rflchissante est endommage, on peut enlever le prisme, le nettoyer, le polir ou le repeindre, le rinstaller et laligner dans la tte binoculaire. Il sagit dune
109
Miroirs
Les miroirs ont un revtement rflchissant directement appliqu sur leur surface. Dans les microscopes rcents, ils sont en gnral recouverts dune couche protectrice. Dans les appareils plus anciens, la couche rflchissante est expose la corrosion
Platine porte-objet
La platine du microscope se compose dune srie dlments qui interagissent pour contrler la position de lchantillon observer. La platine peut se dplacer selon les axes X et Y au moyen de boutons macromtrique et micromtrique indpendants. Elle possde aussi des dispositifs qui permettent des dplacements sans -coups grce des glissires en queue daronde, qui sont normalement lubrifies. Le dessus de la platine porte des plaques ou des clips servant maintenir les lames dchantillons. Lentretien consiste assurer que ces lments sont propres, lubrifis et bien ajusts. Lentretien du revolver porte-objectifs est simple. Il possde un mcanisme interne qui assure lalignement de lobjectif utilis avec le systme optique du microscope. On le fait simplement tourner jusqu ce quun mcanisme dencliquetage mette correctement en place lobjectif suivant. Chaque fabricant dfinit le nombre dobjectifs qui peuvent tre monts sur le revolver. Dans la plupart des cas, le revolver porte de trois cinq objectifs. Lentretien consiste assurer que le mcanisme de rotation est propre, lubrifi et bien ajust.
Lampe incandescence
Lampoule est un consommable dont la dure de vie oprationnelle est limite. Son acquisition doit tre prvue lavance de faon assurer quil y aura toujours une ampoule de rechange dans le laboratoire ou ltablissement o le microscope est install. Lampoule doit tre mise en place selon les instructions du fabricant. Certains appareils, comme les microscopes fluorescence, utilisent des ampoules spciales (au mercure ou au xnon) qui ncessitent des procdures de montage et dtalonnage qui, bien que simples, doivent tre ralises selon les recommandations du fabricant. La tension dalimentation du microscope doit tre celle spcifie par le fabricant. Sinon, on sexpose des risques inutiles qui pourraient affecter la qualit de lclairage. Il faut noter que certains microscopes ont des transformateurs internes ou externes et des systmes de rgulation de la tension.
Figure 48. Revolver porte-objectifs Figure 47. Platine porte-objet (platine mcanique)
4 5 23 6 21 7 9 8 4. Revolver porte-objectifs 5. Objectifs
6. Condenseur 7. Diaphragme douverture 8. Porte-ltre 9. Lentille grand champ 21. Rglage du condenseur en hauteur 23. Platine porte-objet
Les surfaces optiques externes des objectifs doivent tre rgulirement nettoyes. Avec les objectifs immersion, il faut essuyer lhuile aprs chaque utilisation de faon viter quelle ne contamine les lments optiques internes par capillarit. Le corps du microscope (aussi appel statif ) est destin recevoir les lments que lon vient de dcrire (tte binoculaire, platine porte-objet, condenseur, revolver porte-objectifs, autres lments comme le transformateur, et lments lectriques et lectroniques du systme dclairage). Lentretien du corps du microscope consiste essentiellement le dbarrasser des poussires et impurets qui peuvent affecter son aspect extrieur et son fonctionnement. Il faut tre prudent avec les produits chimiques qui peuvent tre corrosifs, par exemple les ractifs utiliss au laboratoire pour la coloration des lames.
Condenseur
Le condenseur rgle la faon dont la lumire est concentre ou contraste sur lchantillon examiner. Il se compose dlments optiques et mcaniques. Les lments optiques sont des lentilles et les lments mcaniques sont ceux qui contrlent la position des lentilles et, au moyen dun diaphragme, la quantit de lumire qui atteint lchantillon. Normalement, les lments optiques sont affects par la prsence de poussire. Il faut lenlever comme pour les autres lentilles, en utilisant un pinceau fin en poil de chameau. Les lments mcaniques ncessitent des rglages au moyen doutils spciaux, chaque fabricant ayant ses propres modles. Lentretien courant porte sur le nettoyage, le rglage et la lubrification.
110
Figure 49. Corps du microscope
22 20
19 18 17 17. Transformateur interne 18. Rhostat 19. Cble dalimentation 20. Boutons de rglage macromtrique et micromtrique 22. Bras du microscope
ENTRETIEN GNRAL DU MICROSCOPE

Avant tout, il faut insister sur le fait que le microscope est un instrument de haute prcision. Lintgrit de ses lments optiques, mcaniques et lectriques doit tre prserve afin de le maintenir dans son tat de fonctionnement optimal. Chaque lment du microscope a t dvelopp selon les techniques de fabrication les plus avances. Lassemblage a t ralis en usine laide dun quipement spcialis. Pendant tout ce processus, les tolrances entre les diffrents lments composant lappareil sont strictement contrles au moyen de techniques de mesure trs pousses. La propret de lenvironnement du microscope et le soin apport son installation et son utilisation sont primordiaux pour assurer sa longvit. Lhumidit, la poussire, une alimentation lectrique en mauvais tat, un usage inadapt ou une installation dfectueuse sont des facteurs qui nuisent au contraire sa conservation. Lentretien dun microscope exige du soin, de la patience et de lattention. Il ne doit tre ralis que par un personnel qualifi disposant doutils spcialiss. On trouvera ci-aprs des recommandations gnrales qui devront tre appliques pour installer correctement le microscope et le maintenir en bon tat de fonctionnement.
4. Vrifier que lemplacement choisi a une prise de courant compatible avec le systme dclairage du microscope. Elle doit tre en bon tat et alimente en courant de voltage, dintensit et de frquence conformes aux normes en vigueur. Si le microscope est clair par un miroir, il doit tre plac prs dune fentre donnant un bon clairage mais ne doit pas tre expos la lumire solaire directe. 5. Installer le microscope sur une surface horizontale, qui doit reposer sur une structure rigide laissant suffisamment de place pour les jambes de loprateur. Celui-ci doit pouvoir sapprocher du microscope avec la tte hauteur des oculaires sans occasionner de tensions au niveau de la colonne vertbrale, du dos et du cou. 6. Pour favoriser une bonne position de travail, prvoir une chaise de hauteur rglable avec un bon soutien dorsal. Le cas chant, prvoir un repose-pieds devant le poste de travail (et non fix la chaise), afin que la colonne vertbrale reste aussi droite que possible et que loprateur ne soit pas oblig de pencher la tte et les paules. 7. Eviter de placer le microscope proximit dappareils produisant des vibrations, comme des centrifugeuses ou des rfrigrateurs. 8. Essayer de ne pas dplacer le microscope, surtout sil est utilis quotidiennement de faon intensive. 9. Couvrir le microscope avec une housse de protection contre la poussire si on ne lutilise pas pendant longtemps, en veillant ce quil ne soit pas expos une humidit excessive. Plus lenvironnement est sec, moins on risque de voir se dvelopper des moisissures. La housse peut tre en plastique ou en tissu fin et non pelucheux (comme du tissu mouchoirs). 10. Dans les zones trs humides, placer le microscope dans une bote ou un placard clair par une ampoule de 40 W au maximum pendant la nuit. Cela permet dviter lhumidit et le dveloppement de moisissures. Si on choisit cette solution, il faut vrifier que des trous daration sont prvus pour que lair puisse circuler lintrieur.
Procdures de nettoyage
Le nettoyage du microscope est lune des oprations de routine les plus importantes et doit tre considr comme indispensable. Le matriel suivant est ncessaire. 1. Un chiffon propre en tissu fin (comme du tissu mouchoirs). 2. Un flacon de solution de nettoyage pour lentilles de microscope, que lon peut se procurer chez un opticien. Normalement, cette solution naltre pas le revtement protecteur des lentilles ni les adhsifs ou colles utiliss pour le montage. Lther et le xylne figurent parmi les liquides de nettoyage les plus utiliss. Avertissement : Certains fabricants dconseillent lalcool ou lactone, qui pourraient dissoudre les adhsifs et les colles servant au montage des lentilles.
Installation et rangement
1. Sassurer que lemplacement o sera install le microscope est protg de la poussire et de lhumidit. Dans lidal, il devrait y avoir un systme de climatisation garantissant un air exempt de poussire ou de particules et dont le degr dhumidit et la temprature sont contrls en permanence. 2. Vrifier que le local est sr et possde une porte ferme cl pour prvenir tout enlvement non autoris du microscope. 3. Vrifier que lemplacement du microscope se trouve loin des points deau ou des secteurs o lon manipule des produits chimiques, de faon viter toutes projections ou claboussures. Il faut galement viter les endroits exposs la lumire solaire directe.
111
3. Papier optique. On peut normalement sen procurer chez un opticien. Si ce nest pas possible, on peut le remplacer par un papier absorbant doux ou par du coton hydrophile. On peut aussi utiliser un morceau de tissu de soie. 4. Une peau de chamois trs fine. On peut sen procurer dans les commerces de chaussures. 5. Une poire en caoutchouc (de type mouche-bb) pour souffler de lair. On peut fabriquer un dispositif au laboratoire en montant une pipette Pasteur sur la poire en caoutchouc. 6. Une housse en plastique pour protger le microscope de lenvironnement externe lorsquil nest pas utilis. On peut aussi utiliser un sac en tissu trs fin (comme du tissu mouchoirs). 7. Un pinceau doux en poil de chameau ou un pinceau peinture fin. Il est trs important que les poils du pinceau soient en matire naturelle, de longueur uniforme, trs souples, secs et exempts de graisse. On peut sen procurer dans les magasins de photographie. On peut aussi trouver lquivalent au rayon cosmtiques des magasins. 8. Un paquet de 250 g de dessiccateur (gel de silice). On lutilise pour absorber lhumidit dans la bote de stockage du microscope si elle est tanche. Le gel de silice change de couleur lorsquil est satur dhumidit, ce qui indique quil faut le remplacer ou le rgnrer. Lorsquil est sec, le gel de silice est en gnral bleu ; lorsquil est satur dhumidit, il est rose. 9. Ampoules et fusibles de rechange. Ils doivent tre du mme modle que les ampoules et fusibles installs par le fabricant ou avoir des caractristiques quivalentes. Note: Tout le matriel ncessaire pour le nettoyage du microscope doit tre tenu propre et stock dans des rcipients qui le protgent de lenvironnement externe.
de la poire en caoutchouc. Cela suffit pour nettoyer les surfaces externes. Si ncessaire, on peut humecter la peau de chamois avec de leau distille. 2. Si les conditions dinstallation sont correctes, les surfaces internes des lments optiques ne doivent pas tre salies par de la poussire ou autres particules. Si pour une raison quelconque des particules sont dtectes, il est ncessaire daccder lintrieur des lments du microscope pour effectuer le nettoyage. Il ne faut jamais ouvrir un oculaire ou un objectif sil ny a pas un environnement propre pour effectuer le nettoyage. Nettoyer avec un pinceau doux et une poire en caoutchouc comme indiqu plus haut. Il est absolument dconseill de dmonter les objectifs pour ne pas modifier les tolrances de montage observes par le fabricant. Si on dmonte un objectif, il faudra raligner les lments, ce qui ne sera possible quen se conformant strictement aux instructions du fabricant. Le nettoyage des objectifs se limitera assurer la propret des deux lentilles (postrieure et antrieure). 3. Si on dtecte des rsidus dhuile pour immersion la surface des lentilles, les liminer laide de papier optique ou de coton hydrophile. On peut ensuite nettoyer la surface de la lentille avec une solution compose de 80 % dther de ptrole et 20 % de propane-2-ol.
Nettoyage du corps du microscope

1. Le corps du microscope peut tre nettoy avec une solution dtergente pour enlever les impurets externes et dissoudre la plus grande partie de la graisse et de lhuile. Appliquer cette solution avec un pinceau. Aprs avoir enlev la graisse et les impurets, on nettoiera le corps du microscope avec une solution 50/50 deau distille et dthanol 95 %. Note: Cette solution ne convient pas pour nettoyer les surfaces optiques. 2. Les parties intgres dans le mcanisme de rglage grossier et fin (boutons de rglage macromtrique et micromtrique), de rglage du condenseur et de dplacement de la platine porte-objet doivent tre lubrifies intervalles rguliers avec de lhuile fine pour assurer des dplacements sans -coups..
Nettoyage des lments optiques

Dans un microscope, il existe deux types dlments optiques : les lments externes en contact direct avec lenvironnement et les lments internes, qui se trouvent dans le corps du microscope et qui sont davantage protgs (objectifs, oculaires, miroirs, prismes, condenseur, clairage, etc.). Les procdures de nettoyage, bien que trs voisines, diffrent cependant par le niveau de soin et de prcautions. 1. Les lments optiques externes des oculaires, des objectifs, du condenseur et de lclairage se nettoient laide du pinceau doux, pour enlever la poussire. On utilise ensuite la poire en caoutchouc pour souffler les dernires particules de poussire qui se trouveraient la surface des lentilles. Si de la poussire adhre la surface optique, on nettoie celle-ci en la frottant doucement, par des mouvements circulaires, avec un chiffon propre et trs doux, sans appuyer. On chasse ensuite les particules restantes avec la poire en caoutchouc. On peut aussi utiliser une peau de chamois trs fine. Dans ce cas, disposer la peau de chamois sur lextrmit dun objet cylindrique de diamtre lgrement infrieur celui de la lentille. Sans appuyer, passer doucement la peau de chamois la surface de la lentille. Souffler ensuite les particules restantes laide
Maintenance
Les oprations les plus importantes pour maintenir un microscope en bon tat de fonctionnement sont, entre autres : 1. Vrifier lajustement de la platine mcanique (platine porte-objet). Elle doit se dplacer selon les deux axes X et Y et garder la position choisie par loprateur. 2. Tester le mcanisme de mise au point. Le foyer choisi par loprateur doit rester stable. La hauteur doit rester celle choisie par loprateur. 3. Vrifier le fonctionnement du diaphragme. 4. Nettoyer tous les lments mcaniques. 5. Lubrifier le microscope selon les recommandations du fabricant. 6. Vrifier lajustement des clips porte-lames. 7. Vrifier lalignement optique.
112
Prcautions
1. Eviter de nettoyer les lments optiques avec de lthanol car cela les endommagerait. Ne pas non plus nettoyer la base de la platine avec du xylne ou de lactone. 2. Ne pas utiliser du papier ordinaire pour nettoyer les lentilles car cela pourrait les rayer. 3. Pour viter de laisser des traces de doigts, ne pas toucher les lentilles avec les doigts nus. 4. Ne pas nettoyer les lentilles des oculaires ou des objectifs avec du tissu ou du papier car cela pourrait endommager le revtement protecteur de ces lments optiques. Nettoyer ces surfaces avec un pinceau en poil de chameau ou en soufflant de lair avec une poire en caoutchouc ou un mouche-bb. 5. Eviter de laisser le microscope sans les oculaires. Mettre les capuchons de protection de ces derniers pour empcher la poussire et les particules de pntrer dans la tte binoculaire. 6. Ne pas laisser le microscope rang dans une bote lorsque lenvironnement est humide. 7. Eviter dappuyer lobjectif contre les lames car cela pourrait endommager la lamelle couvre-objet ou la lentille frontale de lobjectif. Faire la mise au point lentement et soigneusement. 8. Faire en sorte que la platine reste propre. 9. Ne pas dmonter les lments optiques car cela pourrait fausser lalignement. Les surfaces optiques doivent tre dabord nettoyes avec un pinceau en poil de chameau puis avec une peau de chamois ou un papier optique. 10. Utiliser les deux mains pour soulever le microscope, lune tenant le bras du microscope et lautre son socle. 11. Eviter de toucher lampoule avec les doigts lors de son remplacement. Les traces de doigts diminuent lintensit lumineuse. 12. Vrifier que la tension dalimentation est correcte, afin de prolonger la dure de vie de lampoule. Si possible, utiliser la plus faible intensit lumineuse ncessaire pour faire les observations. 13. Raccorder le microscope un stabilisateur de tension si le voltage nest pas stable
Prcautions spciales contre les moisissures en climat humide

En climat humide et surtout en climat chaud et humide, les microscopes peuvent tre affects par le dveloppement de moisissures, principalement la surface des lentilles, dans les pas de vis et sous la couche de peinture protectrice. Si linstrument nest pas correctement protg, il risque dtre rapidement mis hors dusage. Les prcautions ci-dessous aideront empcher le dveloppement de moisissures. 1. La nuit, ranger le microscope dans une bote quipe dune ampoule lectrique de 40 W maximum. Lampoule doit tre installe dans le haut de la bote, prs de la tte binoculaire, et doit rester allume toute la nuit. La bote doit avoir quelques ouvertures pour que lair puisse circuler. La temprature lintrieur de la bote ne doit pas dpasser 50 C, pour ne pas nuire aux proprits des lubrifiants. 2. Sil nest pas possible dutiliser une bote quipe dune ampoule lectrique, on peut utiliser un dessiccateur comme le gel de silice ou simplement du riz. Si on utilise un dessiccateur, vrifier que le microscope est rang dans une bote ou protg par une housse en tissu fin comme du tissu mouchoirs. Vrifier que le produit utilis comme dessiccateur est en bon tat. Si ce nest pas le cas, le remplacer. 3. Nettoyer le microscope intervalles rguliers. Utiliser des gants de latex si les lentilles doivent tre manipules. Cela empchera de laisser des traces de doigts et rduira le risque de dveloppement de moisissures. 4. Si aucune des alternatives mentionnes nest ralisable, mettre le microscope dans un endroit bien ventil. Quand le microscope nest pas utilis, on peut lexposer la lumire solaire directe pendant de courtes priodes. Cela rduit lhumidit et le risque de dveloppement de moisissures sur linstrument. 5. La climatisation (contrle de la temprature et de lhumidit) empche de faon notable le dveloppement de moisissures sur les microscopes. Mais, pour un grand nombre de laboratoires, cette option nest pas envisageable. Si la climatisation ne fonctionne pas en permanence dans le secteur o le microscope est install, il faut prendre des prcautions contre lhumidit.
Prcautions spciales pour les climats chauds

En climat chaud ou sec le principal problme qui affecte le microscope est la poussire, car elle endommage les systmes optiques et mcaniques. Pour viter ces inconvnients, observer les prcautions suivantes : 1. Toujours protger le microscope avec une housse en plastique lorsquil nest pas utilis. 2. Aprs utilisation, nettoyer le microscope en soufflant de lair avec une poire en caoutchouc. 3. Nettoyer les lentilles avec un pinceau en poil de chameau ou en soufflant de lair. Si la poussire adhre la surface des lentilles, essayer de lenlever avec du papier optique, mais en frottant la surface trs doucement pour viter les rayures.
Elimination des moisissures

1. Contrler et nettoyer frquemment le microscope selon les procdures dcrites dans ce chapitre. Contrler les conditions dhumidit dans lendroit o le microscope est rang. Si une ventilation adquate peut tre assure, cela diminuera le risque de dveloppement de moisissures sur le microscope. 2. Si on constate la prsence de moisissures, prendre un tampon douate (coton) tremp dans une solution antifongique, normalement de lther ou du xylol (xylne). Frotter doucement en effectuant un mouvement circulaire sur toute la surface de la lentille. On peut aussi frotter en faisant des va-et-vient de bas en haut ou de gauche droite, en appuyant trs lgrement sur la surface de la
113
lentille. Si ncessaire, rpter lopration avec un nouveau tampon douate. 3. Lorsque toutes les moisissures ont t enleves, nettoyer avec un coton propre.

1. Enlever la poussire du corps du microscope. Utiliser un chiffon humect avec de leau distille. 2. Enlever la poussire des oculaires, des objectifs et du condenseur. Utiliser une poire en caoutchouc pour souffler de lair afin de chasser les restes de poussire. Ensuite, nettoyer la surface des lentilles avec une solution de nettoyage pour lentilles de microscope. Ne pas appliquer directement la solution sur les lentilles, mais sur du papier optique puis frotter doucement la surface avec le papier imbib de solution. 3. Retirer le mcanisme porte-lames (clips ou plaques), le nettoyer soigneusement et le remettre en place.
Entretien courant du microscope Frquence : tous les jours (aprs utilisation)

1. Nettoyer lhuile immersion de lobjectif 100X. Utiliser du papier optique ou, dfaut, du coton hydrophile. 2. Nettoyer la platine porte-objet. 3. Nettoyer le condenseur. 4. Mettre le rhostat de rglage de lintensit lumineuse sur le minimum et teindre le systme dclairage. 5. Couvrir le microscope dune housse (en plastique ou en tissu). Sassurer que le microscope se trouve dans un endroit bien ventil, o la temprature et lhumidit sont contrles. Si le microscope possde une bote de rangement ventile et quipe dune ampoule lectrique pour lutter contre lhumidit, le mettre dans la bote, allumer lampoule et fermer la bote.
Frquence : tous les six mois

En complment des procdures dentretien mensuel, les contrles suivants sont recommands : 1. .Procder une inspection visuelle gnrale du microscope. Vrifier que tous les lments sont en bon tat, propres et bien ajusts. 2. Vrifier que de bonnes conditions de ventilation, de temprature et dhumidit sont maintenues lendroit o le microscope est install. 3. Contrler la qualit de linstallation lectrique qui alimente le microscope. Vrifier lintgrit des cbles, des fusibles et de lampoule lectrique.
114
GUIDE DE DPANNAGE Systme dclairage

PROBLME Le systme dclairage ne fonctionne pas. CAUSE PROBABLE Le cble dalimentation lectrique est dbranch. Le fusible a saut. Lampoule a grill. Linterrupteur du systme dclairage est dfectueux. Le systme dclairage ne donne pas une lumire uniforme. Le systme lectrique prsente des erreurs de voltage. SOLUTION Brancher le cble dalimentation. Remplacer le fusible. Remplacer lampoule. Vrifier quelle est bien aligne. Remplacer linterrupteur. Contrler et rparer le systme lectrique. Installer un stabilisateur de tension entre la prise et le microscope. Brancher correctement le cble. Si un lment est dfectueux, le remplacer. Remettre lampoule en place correctement. Remplacer lampoule. Rectifier lalignement du condenseur. Tourner lentement le revolver porte-objectif jusqu entendre lencliquetage. Ouvrir liris du diaphragme jusqu ce que lclairage soit suffisant. Rapprocher le condenseur Nettoyer le condenseur. Enlever la poussire avec un pinceau. Enlever les moisissures avec une solution de nettoyage pour lentilles de microscope. Ouvrir lgrement liris du diaphragme. Fermer lgrement liris du diaphragme.
Le cble dalimentation est mal connect la prise de courant. Lampoule est mal installe et a un mauvais contact. Il y a des dpts mtalliques ou des taches noires sur lampoule. Lchantillon nest pas clair de faon uniforme. La source lumineuse nest pas centre. Lobjectif nest pas bien centr. Lchantillon est insuffisamment clair. Liris du diaphragme est presque ferm. Le condenseur est loin de lchantillon (trop bas). Les lentilles du condenseur prsentent de la poussire ou des moisissures. Limage prsente un contraste excessif. Limage est lgrement trop claire et brillante. Liris du diaphragme du condenseur est presque ferm. Liris du diaphragme du condenseur est trs ouvert.
Systme optique/mcanique
PROBLME CAUSE PROBABLE SOLUTION Rgler le mcanisme de tension de la platine. Desserrer le mcanisme de blocage de la platine. Rgler la hauteur dsire. Resserrer le mcanisme de blocage. Enlever les moisissures avec une solution de nettoyage. Suivre les instructions du fabricant. Contrler lobjectif. Vrifier si les lentilles sont rayes, piquetes ou brches. Remplacer lobjectif. Enlever soigneusement lhuile avec du papier optique. Mettre de lhuile immersion sur la lame. Utiliser de lhuile de bonne qualit. Nettoyer les lentilles avec du papier optique. Si le nettoyage de lextrieur de lobjectif ne suffit pas, envoyer lobjectif un laboratoire spcialis pour le faire rparer. (Dmonter les lentilles, les nettoyer, changer les joints, recoller, raligner et rassembler). Enlever les poussires avec un pinceau en poil de chameau. Enlever les poussires avec un pinceau en poil de chameau. Enlever les poussires avec un pinceau en poil de chameau La platine ne garde pas sa position et la mise au Le rglage de tension de la platine a du jeu. point de limage se drgle continuellement. La platine ne peut tre monte au maximum. La platine est bloque un niveau trs bas.
La qualit de limage est mauvaise avec lobjectif 40X
Les lentilles prsentent des moisissures. Les lentilles sont endommages. Les lentilles sont accidentellement salies par de lhuile immersion.
Lobjectif immersion ne donne pas des images Lobjectif est utilis sans huile immersion. claires. Lhuile immersion a un faible indice de rfraction. Il y a de lhuile immersion lintrieur de lobjectif.
De la poussire ou des impurets apparaissent dans le champ de vision.
Il y a de la poussire sur la lentille du collecteur de la source lumineuse. Il y a de la poussire sur la lentille suprieure du condenseur. Il y a de la poussire sur loculaire.
115
DFINITIONS
Actone. Liquide incolore, inflammable, extrmement miscible leau ; cest un solvant utilis pour de nombreuses substances organiques. Point dbullition : 56 C. Formule chimique : CH3 CO CH3 Champ de vision. Aire de la surface qui est vue lorsquon regarde dans le microscope. Cette aire diminue mesure que le grossissement augmente. Le diamtre du champ de vision est mesur en millimtres sur le plan mdian de limage. Le champ de vision dun microscope optique pour un grossissement donn est exprim par son diamtre en mm ou simplement en valeur absolue (nombre de champ). Diaphragme. Dispositif qui contrle le flux de lumire dans le microscope. Il existe deux types de diaphragmes : le diaphragme douverture, qui rgle langle douverture du faisceau lumineux dans le microscope, et le diaphragme de champ, qui rgle la taille de limage. Dans les microscopes optiques, les diaphragmes servent viter que les rayons lumineux prsentant de fortes aberrations natteignent le plan de formation de limage et assurer une distribution correcte de la lumire dans lchantillon et dans le champ de limage. Ethanol. Liquide incolore aussi appel alcool thylique. Largement utilis comme solvant industriel, par exemple dans lindustrie pharmaceutique. Masse volumique : 0,806 g/cm3 ; point dbullition : 78,3 C ; formule chimique : CH3 CH2OH Ether. Substance liquide drive de lthanol par limination dune molcule deau entre deux molcules dalcool. Cest un excellent solvant, pas trs miscible leau, trs volatil et inflammable. Point dbullition : 35 C ; formule chimique : CH3 CH2 O CH2 CH3 Foyer. Point o, du fait de la rfraction de la lumire, les rayons lumineux traversant une lentille se concentrent. Si les rayons lumineux convergent en un seul point, la lentille est dite convergente (convexe) et limage au foyer est relle ; si les rayons lumineux divergent, la lentille est dite divergente (concave) et limage au foyer est virtuelle. Indice de rfraction. Valeur calcule par la comparaison entre la vitesse de la lumire dans lespace et dans un second milieu plus dense. Il est normalement reprsent par la lettre n ou n dans la littrature technique ou les formules mathmatiques. Indice de rfraction. Valeur calcule par la comparaison entre la vitesse de la lumire dans lespace et dans un second milieu plus dense. Il est normalement reprsent par la lettre n ou n dans la littrature technique ou les formules mathmatiques. Oculaire. Jeu de lentilles au travers desquelles le microscopiste observe limage (image relle ou virtuelle selon la relation qui existe avec les autres jeux de lentilles du microscope). Ouverture numrique. Mesure de la capacit dun objectif concentrer la lumire et distinguer les dtails fins dun objet. Normalement, la valeur de louverture numrique est inscrite sur le ct de lobjectif. Une valeur plus leve de louverture numrique permet un plus grand nombre de rayons lumineux obliques de traverser la lentille frontale de lobjectif, ce qui donnera une meilleure rsolution de limage. Elle sexprime par la formule mathmatique :
NA = n sin( )
Ouverture numrique dans laquelle : NA = ouverture numrique (Numerical Aperture) n = indice de rfraction (n = 1 pour lair ; n = 1,52 pour lhuile immersion) = angle douverture. Plus langle est grand, plus louverture numrique est grande et meilleure est la rsolution.
Expression mathmatique
160
NA = n x Sin 0.27 = 1 x Sin (16) Grossissement : environ 10X
250
430
116
Plage de grossissement utile. La plage de grossissement utile du systme objectif/oculaire est dfinie par louverture numrique du systme. Pour percevoir les dtails dune image, il faut un grossissement classiquement compris entre 500 et 1000 fois louverture numrique de lobjectif. (Le grossissement utile est acceptable entre 500 et 1000 NA). Profondeur de champ. Epaisseur sur laquelle lchantillon ou lobjet est dune nettet satisfaisante pour une mise au point donne. Profondeur de foyer. Intervalle sur lequel le plan de limage peut tre dplac tout en conservant sa nettet. Propanol. Aussi appel alcool isopropylique, prpar par hydratation du propylne. Utilis comme solvant et galement dans la prparation de lactone. Point dbullition : 83 C ; formule chimique : CH3 CHOH CH3 Rsolution. Aptitude distinguer les dtails les plus fins dune prparation ou dun chantillon particulier. Parmi les facteurs qui permettent dobtenir une rsolution leve figurent louverture numrique, le type dchantillon, lclairage, la correction des aberrations et le type de contraste utilis. Cest lune des caractristiques principales du microscope. Revolver porte-objectifs. Dispositif mcanique qui supporte les objectifs et qui permet de changer rapidement dobjectif par simple rotation. Le nombre dobjectifs quil peut recevoir varie selon le type de microscope. En gnral, il peut porter entre trois et cinq objectifs. Xylne. Isomre de lthylbenzne driv du charbon. Utilis comme solvant et dans la prparation des colorants et des laques. Point dbullition : 138-144 C ; formule chimique : CH3 C6H4 CH3
117
Chapitre 16
Pipettes
Code GMDN Code ECRI Dnomination 15166 15-166 Pipettes
Les pipettes sont des dispositifs utiliss pour mesurer ou transfrer de petits volumes de liquides dun rcipient un autre avec une grande prcision. Il existe de nombreux modles de pipettes. Au dbut, elles taient en verre, mais actuellement il en existe une grande varit. On sintressera surtout ici aux pipettes volume fixe et aux pipettes volume variable avec contrle mcanique. Des pipettes contrles par un systme lectronique ont t rcemment introduites sur le march. Le prsent chapitre traite de lentretien et de ltalonnage1 des pipettes mcaniques.
Figure 50. Schma dune pipette
Bouton-poussoir du piston Bouton molet pour le rglage du volume Micromtre Piston Ressort Axe
Bouton djection de la pointe
Poigne de la pipette Raccord Joint torique
Ltalonnage doit tre ralis exclusivement par un personnel qualifi et en se conformant aux normes internationales en vigueur telles que la norme BS EN ISO 8655-6:2002 ou ses mises jour. Les instruments de travail de rfrence doivent tre dment talonns par des organismes nationaux ou internationaux chargs de vrifier la conformit aux talons internationaux de mesure.
Manchon djection de la pointe
PHOTOGRAPHIES ET SCHMA DE PIPETTES Pipette simple Pipette multicanaux
Photo avec laimable autorisation de Eppendorf AG
Photo avec laimable autorisation de Gilson S.A.S.
119
C H A P I T R E 16 PI P E T T E S
QUOI SERT UNE PIPETTE

Les pipettes sont des dispositifs largement utiliss dans les laboratoires danalyses mdicales et dans les laboratoires de recherche pour distribuer des quantits exactes de liquides.
La pipette mcanique ou pipette piston fonctionne en gnral par transmission de la force exerce manuellement sur le bouton-poussoir du piston. La tige du piston est raccorde au corps du piston qui se dplace dans un cylindre de longueur fixe, en forant un volume prdtermin de liquide vers lextrieur ou lintrieur de la pipette. Il existe deux types de pipettes piston : la pipette volume fixe, avec un volume de liquide prdtermin appel volume nominal (VN), et la pipette volume variable, qui permet dajuster le volume dlivr dans un intervalle dtermin qui dpend des spcifications de la pipette. Le rglage du volume se fait en modifiant la course du piston dans le cylindre. Dans les pipettes volume variable, le volume nominal est le volume maximum utile de la pipette selon les spcifications du fabricant. Les pipettes volume fixe et volume variable peuvent se subdiviser en deux types, le type A et le type B. Les pipettes de type A sont appeles pipettes dplacement dair car il y a un volume dair (coussin dair) entre le corps du piston et le liquide qui se trouve dans le cylindre (voir pipette N 1 de la figure 44). Les pipettes de type B sont appeles pipettes dplacement positif car le piston est en contact direct avec le liquide (voir pipette N 2). La figure 44 montre les diffrences entre ces deux types de pipettes. Les pipettes dplacement dair ont lavantage de prsenter moins de risques de contamination en cas dutilisation intensive. Mais elles ne sont pas aussi prcises que les pipettes dplacement positif lorsquon travaille avec de trs petits volumes de liquide, du fait de la compressibilit de lair. Toutes les pipettes piston ont des pointes jetables pour limiter les risques de contamination. Il est recommand dutiliser
exclusivement les pointes fournies par le fabricant ou des pointes compatibles pour garantir un ajustement correct sur le corps de la pipette et lexactitude du volume dlivr. Pour faciliter lidentification de ces volumes, certains fabricants ont adopt un code de couleur qui simplifie lidentification des volumes dlivrer. Le tableau ci-dessous donne les conventions de couleurs.
Tableau des codes de couleur pour les pipettes

Plage de volume en microlitres (l) 0,12,5 l 0,510 l 2,020 l 10100 l 50200 l 1001000 l 5002500 l Couleur Noir Gris Gris/jaune Jaune Jaune Bleu Rouge
CONDITIONS REQUISES POUR LUTILISATION

Pour une utilisation correcte des pipettes, il faut que le laboratoire soit propre et bien clair. Les conditions gnrales remplir sont les suivantes : 1. Vrifier que la temprature du laboratoire est stable, avec une temprature optimale de 20 C et un intervalle de variation de 5 C (entre 15 C et 30 C). 2. Vrifier que lhumidit relative (degr hygromtrique) est suprieure 50 %. Les pipettes et les chantillons ou substances liquides doivent squilibrer avec les conditions du laboratoire. Il est en gnral recommand de les laisser squilibrer au laboratoire pendant deux trois heures avant de commencer le travail. 3. Eviter de travailler avec des pipettes la lumire solaire directe. 4. Utiliser un quipement protecteur appropri pour travailler avec des substances toxiques ou comportant un risque biologique
Figure 51. Types de pipettes
Tige du piston
Piston
Coussin dair Cylindre
Pointe
1. Pipette dplacement dair
Piston
Pointe
Tige du piston 2. Pipette dplacement positif
120 0
UTILISATION DE LA PIPETTE
Pour obtenir des rsultats prcis, exacts et fiables, il est ncessaire que les oprateurs connaissent en dtail les procdures correctes de pipetage. Ils doivent pour cela suivre une formation puis une mise jour rgulire de leurs connaissances sur lutilisation des pipettes. On trouvera cidessous un aperu gnral de lutilisation approprie des pipettes. Avertissement : Avant dutiliser une pipette, vrifier quelle est correctement talonne et quelle convient pour transfrer le volume de liquide envisag.
Recommandations gnrales
1. Vrifier que la pipette est en position verticale pour aspirer un liquide. Cette position garantit labsence dincertitude due de petites variations de la surface du liquide. 2. Suivre les recommandations du fabricant pour la profondeur minimale laquelle la pointe doit tre immerge pour aspirer des liquides. Cette profondeur varie selon le type et la capacit de la pipette. Le tableau ci-dessous donne des indications gnrales ce sujet1:
3. Pour une meilleure justesse du pipetage, humidifier les pointes des pipettes dplacement dair. Pour cela, aspirer de la solution de travail plusieurs reprises en la vidant dans un bac dchets. On rduit ainsi le risque daspirer des bulles dair lorsquon travaille avec des liquides denses ou hydrophobes. Cette faon de faire permet aussi dobtenir une humidit homogne lintrieur du coussin dair de la pipette (espace entre la base du piston et la surface du liquide). Il nest pas ncessaire de pr-humidifier les pipettes dlivrant des volumes infrieurs ou gaux 10 l. Il nest pas non plus ncessaire dhumidifier les pipettes dplacement positif. 4. Aprs avoir rempli la pointe de la pipette, liminer les gouttes qui pourraient rester sur la pointe en la faisant doucement glisser le long de la paroi du tube contenant le liquide. Il peut tre ncessaire dutiliser un matriau absorbant, en vitant de toucher lextrmit de la pointe et en prenant les prcautions voulues, si le matriel prlev prsente des signes de contamination. 5. Pour dlivrer le liquide prlev, placer la pointe contre la paroi du tube receveur. La pointe de la pipette doit former un angle compris entre 30 et 45 avec le tube, une distance de 8 10 mm au-dessus de la surface du liquide
Profondeur dimmersion de la pointe selon la plage de volume de la pipette

Plage de volume de la pipette (l) 1100 1001000 1 0005000 Profondeur dimmersion (mm) 23 24 25
Technique de pipetage correcte

On trouvera ci-dessous une description de la procdure gnrale suivre lors de lutilisation dune pipette mcanique dplacement dair. Loprateur doit tenir compte des recommandations spcifiques du fabricant. Cette rgle vaut galement pour les pipettes lectroniques. Le schma de la figure 52 dcrit les tapes de la procdure.
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipette, UK, National Physical Laboratory, Teddington, Middlesex, 2004, page. 6. (www.npl.co.uk)
Figure 52. Etapes de lutilisation dune pipette

Position
A B C
121
1. Mettre une nouvelle pointe sur lembout selon les spcifications de la pipette. Eviter de contaminer la pointe avec dautres substances. Vrifier quelle est bien ajuste. 2. Appuyer doucement sur le piston jusqu ce quil atteigne le premier cran. Jusqu ce moment, la pointe de la pipette ne doit pas toucher le liquide. 3. Plonger lextrmit de la pointe dans le liquide. Vrifier la profondeur indique dans le tableau de la page 121 ou suivre les recommandations du fabricant. Vrifier que la pipette est en position verticale. Cette tape correspond la position 1B (la premire en partant de la gauche) sur la figure 52. 4. Tirer doucement sur le piston pour que la pipette aspire le liquide (position 2A). Vrifier que le piston est entirement remont. Attendre au moins deux secondes avant de sortir la pointe du liquide. 5. Placer la pointe de la pipette contre la paroi du tube receveur. Vrifier que langle form par la pointe avec la paroi du tube se situe entre 30 et 45. Si le tube receveur contient dj du liquide, viter dy plonger la pointe de la pipette (position 3A). 6. Distribuer le contenu de la pipette en appuyant doucement mais fermement sur le piston, jusquau premier cran (position 4B). Laisser la pointe de la pipette au contact de la paroi du tube. Faire doucement glisser la pointe le long de la paroi du tube jusqu une distance de 8 10 mm du bord du tube pour assurer quil ne reste aucune goutte de liquide sur la pointe de la pipette. 7. Appuyer doucement sur le piston jusquau deuxime cran (position 5C). Cela permet dexpulser toute fraction de liquide restant dans la pointe de la pipette en chassant lair rsiduel par lorifice de la pointe. Maintenir le piston au deuxime cran tout en retirant la pipette du tube receveur. Une fois la pipette sortie du tube, librer doucement le piston jusquau cran suprieur. 8. Jeter la pointe de la pipette. Pour cela, appuyer sur le bouton djection (position 6). Note: Si on utilise une pipette volume variable, il faut dabord choisir le volume distribuer. Suivre pour cela les instructions du fabricant. Normalement, le dispositif de rglage du volume se trouve sur la partie suprieure de la pipette. Il est ncessaire que loprateur sache distinguer les diffrentes chelles de volume.
Inspection: Frquence : une fois par jour

Les pipettes doivent tre frquemment inspectes afin de dtecter toute usure ou dtrioration anormales et/ou de vrifier quelles sont en bon tat de marche. Linspection doit porter sur les aspects suivants : 1. Vrifier lintgrit et lajustement des mcanismes. Ils doivent jouer librement. Le piston doit se dplacer sans -coups. 2. Vrifier que lembout de fixation de la pointe ne prsente pas de distorsions ni de signes dusure, car il est indispensable pour lexactitude des mesures. Vrifier lajustement des pointes. 3. Mettre une pointe en place et la remplir deau distille. La pipette ne doit prsenter aucune fuite.
Nettoyage et dcontamination
1. Vrifier tous les jours que la pipette est propre. Si elle parat sale, la nettoyer avec un solvant appropri ou un dtergent doux en solution. Consulter les recommandations du fabricant sur la compatibilit de la pipette avec les solvants afin de choisir celui qui convient. 2. Striliser la pipette selon les instructions du fabricant. Certaines pipettes peuvent tre strilises en autoclave, avec un cycle de 121 C pendant 20 minutes environ. Certaines devront tre dmontes pour permettre la vapeur dentrer en contact avec les lments internes1. Pour le dmontage, il faut dgager et dvisser le corps central de la pipette selon le mode demploi indiqu par le fabricant. Pour dmonter ou remonter certaines pipettes, il faut utiliser un jeu doutils (cls) fourni par le fabricant au moment de lachat de la pipette. Aprs le cycle de strilisation, attendre que la pipette soit revenue la temprature ambiante pour la remonter. Il faut aussi vrifier que les lments sont secs. Certains fabricants recommandent de striliser les pipettes avec une solution disopropanol 60 %, laver les lments leau distille, les scher et les remonter. 3. Si une pipette a t utilise avec des substances dangereuses, lutilisateur doit sassurer quelle est entirement dcontamine avant dtre utilise pour dautres manipulations ou dtre sortie du laboratoire. Il est conseill de prparer sans tarder un rapport indiquant la marque, le modle et le numro de srie de la pipette, les substances contaminantes et les produits ou procdures employs pour la traiter ou la nettoyer
On trouvera ci-aprs les grandes lignes des procdures dentretien courant des pipettes mcaniques. Les interventions spcifiques devront tre ralises sur les diffrents modles en se conformant au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
Les pipettes strilisables la vapeur ont une marque qui indiquent cette proprit ; le fabricant fournit le mode demploi pour le dmontage..
122
Maintenance Frquence : deux fois par an

Une pipette utilise quotidiennement doit tre soumise aux procdures suivantes afin de garantir son bon fonctionnement : 1. Dmonter la pipette. Suivre le mode opratoire dcrit dans le manuel dutilisation (ce mode opratoire varie selon la marque et le modle). Normalement, on spare le corps de la pipette du systme djection de la pointe en dvissant le corps de la pipette du cylindre. 2. Nettoyer les joints toriques, la tige du piston et lintrieur du cylindre avant de les lubrifier. En cas de contamination accidentelle des lments internes de la pipette, les nettoyer avec un dtergent doux puis leau distille. Si les joints toriques ou les joints dtanchit doivent tre changs, les joints de rechange doivent avoir les mmes caractristiques que ceux dorigine. Le type de joint varie selon la marque, le type et le modle de pipette.
3. Lubrifier la tige et le piston avec de la graisse silicone1 spcialement conue pour les pipettes. Toujours utiliser le lubrifiant recommand par le fabricant. Enlever tout excs de lubrifiant avec un papier absorbant. 4. Remonter la pipette en procdant dans lordre inverse. 5. Etalonner la pipette avant emploi.
Notions dtalonnage des pipettes

Ltalonnage des pipettes est ralis selon des procdures standardises. La mthode dtalonnage dpend principalement du volume manipul par la pipette. Plus la plage de volume est faible, plus ltalonnage est compliqu et coteux. On trouvera ci-dessous une description succincte de la mthode gravimtrique utilise avec les pipettes dlivrant des volumes compris entre 20 l (microlitres) et 1 ml (millilitre).
Matriel et appareillage ncessaires2

1. Balance danalyse 2. Thermomtre lectronique ayant une rsolution dau moins 0,1 C, un intervalle de temprature appropri et une sonde submersible 3. Hygromtre ayant une incertitude type de 10 % ou moins 4. Baromtre ayant une incertitude type de 0,5 kPa ou moins 5. Minuteur 6. Micropipettes de divers volumes 7. Pointes jetables de divers volumes 8. Flacons fond plat 9. Eau bi- ou tri-distille dgaze 10. Un oprateur qualifi.
Figure 53. Dmontage dune pipette
Couvercle de la poigne
Bouton-poussoir
Ejecteur de pointe Poigne Ressort de ljecteur de pointe Fentre indicatrice de volume
Assemblage du piston
Manchon de ljecteur de pointe
Frquence recommande pour ltalonnage des pipettes (Une fois par trimestre) Principe
Piston
Ressort secondaire
Embout conique Joint torique
La procdure est base sur la mesure du volume dun chantillon deau partir de la masse deau dlivre par la pipette, en divisant cette masse par la masse volumique de leau. En pratique, on effectue un groupe de mesures, auxquelles on apporte des corrections pour compenser toutes variations par rapport aux conditions standard de temprature et de pression atmosphrique et toute vaporation importante survenue pendant la dure des tests.
Support du ressort
Ressort du piston Filtre
1 2
Il existe diffrentes spcifications pour la graisse silicone ; il faut donc utiliser celle qui est recommande par le fabricant. Lappareillage utilis pour talonner les pipettes doit tre certifi par un laboratoire dtalonnage accrdit.
123
Ce type de test permet de procder aux vrifications suivantes : 1. Comparer diffrents types de pipettes entre elles pour rechercher dventuelles diffrences. 2. Vrifier la prcision et lexactitude dune pipette. 3. Vrifier lexactitude et la prcision dun lot de pipettes. 4. Vrifier les facteurs imputables lutilisation dune mme pipette par plusieurs oprateurs.
2. Convertir chaque masse en un volume 20 C en divisant la masse par la masse volumique de leau ajuste sur la temprature mentionne.
Vi =
Mi D
Procdure1
La procdure dcrite ci-dessous est valable pour les pipettes dplacement dair. Elle comporte les tapes suivantes : 1. Mettre une nouvelle pointe sur la pipette. 2. Pipeter de leau distille et la vider dans un bac dchets. Rpter au moins 5 fois pour stabiliser lhumidit lintrieur de la pipette. 3. Mettre de leau dans le rcipient de pese jusqu ce que le niveau de liquide atteigne au moins 3 mm. 4. Noter la temprature de leau, la pression atmosphrique et lhumidit relative. 5. Le cas chant, couvrir le rcipient de pese. 6. Noter le poids indiqu par la balance ou appuyer sur la touche de tarage pour mettre la balance sur zro (0). 7. Remplir la pipette avec de leau prise dans le rcipient de stockage et la vider dans le rcipient de pese, en expulsant bien toute leau. Procder de la mme faon que pour lusage quotidien des pipettes (voir point 7 de la section Technique de pipetage correcte). 8. Noter le nouveau poids indiqu par la balance. 9. Rpter les tapes 7 et 8 encore neuf (9) fois en notant le poids enregistr par la balance la fin de chaque cycle. 10. Noter la temprature du liquide dans le rcipient de pese la fin du dixime cycle et mesurer le temps coul depuis le dbut des mesures. 11. Vrifier si lvaporation a t importante (ce point est fondamental lorsquon travaille avec des pipettes de trs petit volume). Si cest le cas, il faut laisser scouler un laps de temps (Ta) gal au temps coul pendant les dix mesures, et au bout de ce temps refaire une mesure. 12. La masse de leau perdue par vaporation au cours de la priode supplmentaire (Ta) est divise par le nombre total dchantillons analyss (dix). Cela donne une indication de la perte moyenne de liquide par vaporation pour chaque cycle. Cette valeur doit tre ajoute chaque lecture de la masse.
3. Calculer la moyenne des volumes calculs au point 2. (Somme des volumes divise par le nombre dchantillons). Faire les corrections pour les phnomnes tels que la pression de lair sur la masse (flottabilit). Pour cela, multiplier chaque valeur de la masse par un facteur de correction (Z).
X = V i n Z
4. Calculer lcart type de lchantillon.
SD =
1 2 ( X i X AV ) n 1 i =1
5. Calculer le coefficient de variation.
[Cv ]CV (%) =
S 100 X AV
Le tableau ci-dessous rcapitule les formules mathmatiques mentionnes.
Tableau des formules mathmatiques

X = V i n Z S 100 X AV
[Cv ]CV (%) =
SD =
1 2 ( X i X AV ) n 1 i =1
D% =
AV
X Nom
X Nom
Vi = Mi D
E s = X Vn
Conventions : X =volume moyen SD = cart type Z = facteur dajustement2 en l/mg
Conventions : CV(%) = coefficient de variation D(%) = erreur
Calculs
Procder comme suit : 1. Calculer la masse deau dlivre par la pipette chaque cycle. Soustraire la valeur enregistre la fin du cycle prcdent de la valeur enregistre pour le cycle en cours. Procder de mme pour toutes les mesures. Le cas chant, ajouter la masse moyenne correspondant au calcul de la quantit vapore par cycle.
1 2
La procdure dcrite ici est un guide gnral. Pour plus de dtails, consulter la norme BS EN ISO 8655-6:2002 ou ses mises jour. La valeur de Z dpend de la temprature et de la pression pour leau distille. Se rfrer aux publications spcialises telles que la norme BS EN ISO 8655-6:2002, Annexe A.
124
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME La pipette prsente des fuites. CAUSE PROBABLE La pointe est mal ajuste sur la pipette. Il y a des corps trangers entre la pointe et lembout. Il y a des corps trangers entre le piston et le joint torique dans le cylindre. Le piston et/ou le joint torique ne sont pas assez lubrifis. Le joint torique est tordu ou endommag. Le piston est sale. Lembout est mal ajust. Des gouttes sont visibles dans la pointe de la pipette. Lhumidification de la paroi en plastique nest pas homogne. La pipette est inexacte. La pipette est utilise de faon incorrecte. Il y a des corps trangers sous le bouton-poussoir. Le montage de la pointe sur la pipette est incorrect. SOLUTION Monter la pointe selon les indications du fabricant. Nettoyer le raccord. Retirer la pointe et nettoyer lembout. Mettre une nouvelle pointe. Dmonter et nettoyer lensemble cylindre/piston. Lubrifier et remonter. Dmonter et lubrifier. Remplacer le joint torique. Dmonter, nettoyer, remplacer le joint, lubrifier et remonter. Nettoyer le piston et lubrifier lgrement. Ajuster lembout. Mettre une nouvelle pointe. Contrler la technique de pipetage et corriger les erreurs observes. Nettoyer lassemblage du bouton-poussoir. Vrifier si la pointe est adapte la pipette. Monter une pointe diffrente adapte aux spcifications de la pipette. Rtalonner la pipette en utilisant une procdure standardise. Vrifier la procdure dutilisation. Mettre une nouvelle pointe. Rtalonner la pipette en utilisant une procdure standardise. Rgler ltalonnage en cas dutilisation de liquides de forte viscosit. Le bouton-poussoir prsente des -coups ou rencontre une forte rsistance. Le piston est sale. Le joint est sale. Le piston est endommag. Des vapeurs de solvant ont pntr dans la pipette. Nettoyer et lubrifier lgrement. Dmonter la pipette, nettoyer tous les joints, ou les remplacer si ncessaire. Lubrifier lgrement. Remplacer le piston et les joints du piston. Lubrifier lgrement. Dvisser le raccord central de la pipette. Ventiler, nettoyer le piston et lubrifier lgrement.
Il y a des interfrences dans ltalonnage. La pointe est sale. La pointe prsente des inexactitudes avec certains liquides. Ltalonnage est inadquat.
125
DFINITIONS
Coefficient de variation. Paramtre statistique reprsentant le quotient de lcart type dune distribution par sa moyenne. Ecart type. Mesure de la dispersion dun ensemble de donnes par rapport sa moyenne. Plus les donnes dont disperses, plus lcart type est grand. On lutilise comme paramtre statistique pour dterminer lerreur globale sur la mesure dun chantillon. Souvent abrg en SD (Standard Deviation). Erreur (dune mesure). Diffrence entre la valeur mesure et la valeur correcte. Exactitude. Concept en relation avec les erreurs de mesure. On dit quun instrument est exact lorsque la valeur dun groupe de mesures est suffisamment proche de la valeur relle. Intervalle de mesure. Diffrence entre la valeur maximale et la valeur minimale quun instrument lit ou mesure. Masse. Proprit physique des corps lie la quantit de matire quils contiennent, exprime en kilogrammes (kg). En physique, on donne le nom de masse deux quantits : la masse gravitationnelle, qui est une mesure de la faon dont un corps interagit avec lacclration de la pesanteur (si la masse du corps est petite, il subit une force plus faible que si sa masse tait plus grande), et la masse inertielle, qui est une mesure quantitative ou numrique de linertie dun corps, cest--dire de sa rsistance lacclration. Masse volumique. Relation entre la masse dun corps et le volume quil occupe. La masse volumique moyenne dun objet est gale au quotient de sa masse totale par son volume total. Elle est identifie par la lettre grecque (ro). Dans le systme international dunits, la masse volumique est exprime en kilogrammes par mtre cube (kg/m3). Microgramme (g). Unit de poids quivalente 1 10-6 grammes (g). Microlitre (l). Unit de capacit quivalente 1 10-6 litres (l). Un (1) l deau pse exactement un (1) mg et a un volume de 1 mm3. Milligramme (mg). Unit de poids quivalente 1 10-3 grammes (g). Millilitre (ml). Unit de capacit quivalente 1 10-3 litres (l). Un (1) ml deau pse exactement un (1) g et a un volume de 1 cm3. Prcision. Concept en relation avec les erreurs de mesure. Un instrument ou une mthode sont prcis lorsquen rptant une mesure lors dessais indpendants, on obtient des rsultats similaires. Volume. Quantit despace physique quoccupe une masse. On le calcule en divisant la masse du corps par sa masse volumique moyenne.
126
Chapitre 17
Agitateur chauffant
Code GMDN Code ECRI Dnomination 36815 16-287 Plaques chauffantes
Lagitateur chauffant ou plaque chauffante avec agitateur est conu pour chauffer et mlanger des liquides contenus dans des rcipients de laboratoire tels que des fioles Erlenmeyer, des tubes essais et des bchers.
En gnral, lagitateur chauffant possde une surface plane sur laquelle on place les rcipients contenant les liquides chauffer et agiter. Cette surface est faite dun matriau bon conducteur de la chaleur, comme laluminium (Al) ou la cramique. Certaines plaques chauffantes utilisent exclusivement une source de rayonnement infrarouge (lumire infrarouge) pour chauffer. Les agitateurs chauffants possdent un lment chauffant (une rsistance lectrique) et un systme de contrle (interrupteur marche/arrt, commande de lagitateur, moteur de lagitateur). Les moteurs utiliss dans ce type dappareils sont en gnral des moteurs asynchrones monophass appels moteurs bagues de dphasage1. La plage de vitesse dpend du nombre de ples et de la frquence du courant dalimentation.
PHOTOGRAPHIE DUN AGITATEUR CHAUFFANT
Temprature :
De la temprature ambiante environ 500 C.
Vitesse de rotation :
De 60 tours/minute (t/min ou RPM) environ 1200 t/min.
COMMANDES DE LAGITATEUR CHAUFFANT

Le schma de la figure 54 montre un panneau de contrle tel quon en trouve classiquement sur un agitateur chauffant. Le schma correspond une plaque chauffante contrle par microprocesseur, dispositif qui quipe la plupart des appareils modernes.
Figure 54. Panneau de contrle dun agitateur chauffant
Achage de la temprature slectionne/temprature relle Mode temprature: Marche / Arrt
Achage de la vitesse slectionne/vitesse relle Mode agitation: Marche/Arrt
HEATw Touches de rglage de la temprature
AGIT Touches de rglage de la vitesse dagitation

1
RESET Touche de slection de lchelle de temprature
Touche dannulation de la slection
Ces moteurs ont une puissance denviron 1/20 ch ; ils se caractrisent par un faible couple et sont peu coteux.
127
C H A P I T R E 17 A G I TAT E U R C H A U F FA N T
Le panneau de contrle possde des touches de rglage de la temprature et de la vitesse dagitation. Ces fonctions peuvent tre utilises de faon indpendante ou combine. Pour slectionner les paramtres, on appuie sur la touche correspondante et on effectue le rglage de la temprature ou de la vitesse, selon le cas.
Lagitateur chauffant est conu pour fonctionner dans des conditions de travail normales et nexige quun entretien mimimal. Sil est correctement install et utilis, il peut fonctionner sans problmes pendant plusieurs annes. On trouvera ci-dessous une description des procdures dentretien de routine recommandes par les fabricants. Pour les procdures spcialises, on suivra soigneusement les recommandations du fabricant.

Lagitateur chauffant doit tre branch sur une prise de courant en bon tat et relie la terre. Lalimentation lectrique doit tre compatible avec lappareil et conforme aux normes lectriques nationales et internationales. Les agitateurs chauffants fonctionnent en gnral sous 230 V/50-60 Hz ou 120 V/60 Hz. Pour fonctionner normalement, lagitateur chauffant doit tre pos sur une surface horizontale suffisamment robuste pour supporter le poids de lagitateur plus celui des rcipients et de leur contenu.
Nettoyage Frquence : une fois par mois 1. Nettoyer lappareil en le laissant en position verticale pour viter que les produits de nettoyage natteignent les lments internes. 2. Utiliser un dtergent doux. Appliquer sur les surfaces externes avec un chiffon en tissu trs fin (comme du tissu mouchoirs). 3. Vrifier que lappareil est bien sec avant de le rebrancher. Remplacement de la surface en cramique Frquence : effectuer si ncessaire
On trouvera ci-dessous des recommandations gnrales concernant le remplacement de la surface en cramique.
UTILISATION DE LAGITATEUR CHAUFFANT Prcautions 1. Toujours brancher lagitateur chauffant sur une prise de courant en bon tat et relie la terre. 2. Dbrancher lappareil avant toute intervention dentretien. 3. Eviter dutiliser lappareil en prsence de matriaux combustibles ou inflammables. Eviter dutiliser lappareil en prsence de vapeurs corrosives. 4. Vrifier soigneusement si les substances ont un point dclair bas. Si leurs vapeurs entrent en contact avec la surface de la plaque chauffante cette temprature, cela pourrait provoquer un incendie ou une explosion. 5. Lors du travail avec des liquides inflammables, utiliser un quipement protecteur : gants et lunettes de protection. 6. Tenir compte du fait que la surface de lagitateur peut rester chaude longtemps aprs que lappareil a t teint ou dbranch. 7. Eviter de dposer sur la plaque chauffante :
a) b) c) Des lamins mtalliques Des matriaux isolants De la verrerie bas point de fusion
8. Laisser un espace libre autour de lappareil pour faciliter le raccordement lectrique et pour pouvoir dposer le matriel et les produits ncessaires. Certains fabricants recommandent un espace libre denviron 15 cm. 9. Eviter de placer des matriaux combustibles proximit de lappareil. 10. Eviter dutiliser des rcipients dont le poids dpasse la capacit indique par le fabricant.
1. Vrifier que la plaque chauffante est dbranche et refroidie, afin dviter le risque de choc lectrique et de brlure. 2. Manipuler lappareil avec la plus grande prudence car une surface en cramique casse a des bords trs coupants. 3. Retourner lappareil ct cramique vers le bas. 4. Dfaire les vis de fixation du panneau infrieur et enlever le panneau. 5. Localiser et dconnecter les cbles dalimentation des rsistances lectriques (sur les modles avec rsistances). 6. Dconnecter les cbles qui relient le panneau de contrle aux rsistances. 7. Dfaire les vis qui fixent le panneau suprieur au socle de lappareil. Vrifier quelles sont sans rapport avec les connexions aux rsistances chauffantes. 8. Mettre la nouvelle surface en cramique en place. 9. Observer comment sont disposs les lments de scurit de la plaque casse. Les enlever et disposer les lments chauffants et isolants sous la nouvelle plaque, en conservant lalignement et le positionnement dorigine. Remettre les lments de scurit. 10. Reconnecter les lments en procdant dans lordre inverse.
128
Remplacement des fusibles Frquence : effectuer si ncessaire

Si lagitateur chauffant est branch et que linterrupteur principal est sur ON mais que la plaque ne chauffe pas, il se peut quun fusible doive tre chang. La procdure est la suivante :
1. Mettre linterrupteur principal sur OFF et dbrancher le cble dalimentation. 2. Enlever le couvercle de la bote fusibles avec un tournevis bout plat. 3. Remplacer le fusible par un nouveau ayant les mmes caractristiques que le fusible dorigine. 4. Remettre le couvercle de la bote fusibles.
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Il ny a pas de courant lectrique. CAUSE PROBABLE Il y a un dfaut au niveau du fusible de protection. Il y a un dfaut dans le raccordement lectrique alimentant lappareil. Lappareil est dbranch. Le cble dalimentation lectrique est dfectueux. La plaque ne chauffe pas. La fonction de chauffage na pas t slectionne. La rsistance chauffante est hors service. SOLUTION Remplacer le fusible. Vrifier ltat du raccordement lectrique. Brancher lappareil sur la prise de courant. Remplacer le cble dalimentation lectrique. Activer la fonction de chauffage sur le panneau de contrle. Remplacer la rsistance chauffante. Les pices de rechange doivent avoir les mmes caractristiques que les pices dorigine. Activer la fonction de rotation sur le panneau de contrle.
Lagitateur ne tourne pas.
La fonction de rotation na pas t slectionne.
DFINITIONS
Fiole Erlenmeyer. Rcipient en verre utilis au laboratoire pour mettre ou mesurer des substances. Moteur bagues de dphasage. Moteur asynchrone utilis dans les petits appareils. Il se caractrise par une bobine (rotor en cage dcureuil) ncessitant un champ magntique tournant pour se mettre en marche. Une partie de chaque ple est encercle par une bague de dphasage (anneau de cuivre) dont les courants induits provoquent un dsquilibre au sein du flux magntique par rapport lautre portion du ple, ce qui cre un couple sur le rotor. Ces moteurs sont peu coteux et ont un faible rendement. On peut calculer leur vitesse par la formule 120 f n( rpm) = p
Figure 55. Moteur bagues de dphasage

dans laquelle : [n] = vitesse synchrone en tours par minute [f] = frquence de la tension applique [p] = nombre de ples du stator
Bobine principale
Le schma ci-dessous montre les lments internes du circuit lectrique.

Bobine secondaire Stator Rotor Ples
Point dclair. Temprature laquelle les molcules dune substance ragissent avec loxygne de lair en dclenchant une combustion.
129
Chapitre 18
Rfrigrateurs et conglateurs
Code GMDN Code ECRI Dnomination 13315 13-315 Rfrigrateurs 13315 15-170 Rfrigrateurs de biologie 17157 17-157 Rfrigrateurs de laboratoire 35486 15-171 Rfrigrateurs pour banque de sang 40513 22065 Conglateur de laboratoire, ultra-basse temprature 15145 15-145 Conglateur de laboratoire
RFRIGRATEURS ET CONGLATEURS
Les rfrigrateurs et conglateurs sont parmi les appareils les plus importants utiliss au laboratoire. Ils assurent un environnement de temprature contrle (enceinte rfrigre) pour divers produits et substances. A basse temprature, lactivit chimique et biologique est rduite, ce qui entrane une meilleure conservation des produits. Pour cela, la temprature lintrieur de lenceinte rfrigre doit tre infrieure la temprature ambiante. Au laboratoire, on utilise diffrents types de rfrigrateurs et de conglateurs. Selon lintervalle de temprature, on distingue : Rfrigrateurs conservateurs, de 2 8 C. Conglateurs basse temprature, de 15 35 C. Conglateurs ultra-basse temprature, de 60 86 C. On choisira un appareil dot de fonctions appropries, selon les activits du laboratoire. Par exemple, sil est ncessaire de conserver du sang total, il faudra utiliser un rfrigrateur pour banque de sang, qui assure des tempratures comprises entre 2 et 8 C. Si en revanche on doit conserver des souches virales ou microbiennes, il faudra un conglateur ultrabasse temprature. Les rfrigrateurs et conglateurs sont indispensables pour conserver les substances biologiques et les ractifs. Le prsent chapitre traite du fonctionnement et de lentretien des rfrigrateurs conservateurs et des conglateurs ultra-basse temprature.
PHOTOGRAPHIE DUNE ENCEINTE RFRIGRE
131
C H A P I T R E 18 R F R I G R AT E U R S E T C O N G L AT E U R S
QUOI SERT UNE ENCEINTE RFRIGRE

Les rfrigrateurs et conglateurs servent conserver le sang et ses drivs, les liquides et tissus biologiques, les ractifs, les produits chimiques et les souches de micro-organismes. En gnral, plus la temprature est leve, plus lactivit chimique et biologique est intense. En abaissant la temprature, on peut contrler les effets de celle-ci sur la composition et la structure des substances conserver. Au laboratoire, on utilise des systmes de rfrigration pour conserver des substances comme des ractifs et des matriels biologiques qui sans cela se dcomposeraient ou perdraient leurs proprits. En tant que technique, la rfrigration assure des conditions qui rendent possible la conservation dlments, tels que le sang et ses drivs, ncessaires pour le diagnostic, la surveillance et les services de sant. Il est possible datteindre des tempratures extrmement basses, comme celles qui sont utilises pour conserver les souches de rfrence (86 C), ou dassurer le maintien de tempratures comprises entre 2 et 8 C, qui suffisent pour conserver les ractifs et divers produits biologiques.
Circuit de rfrigration
Le circuit de base prsent sur la figure 56 montre comment fonctionne un rfrigrateur. Sur le ct gauche, on distingue les lments suivants : vaporateur, condenseur, compresseur, dtendeur, filtre et tubulures de raccordement. Un gaz rfrigrant circule dans chacun de ces lments. Sur le ct droit de la figure se trouve un graphe reprsentant la relation entre la temprature (T) et lentropie (S), qui dmontre le fonctionnement dun cycle de rfrigration idal1. Les numros qui figurent sur le schma de gauche montrent les points des processus adiabatiques (compression (1-2) et tranglement (3-4)) et des processus impliqus dans le transfert de chaleur (entre lvaporateur et lenceinte rfrigre (4-1) et entre le condenseur et lextrieur (2-3)). Le cycle complet est reprsent par la squence 1-2-3-4-1.
Evaporateur. Se compose dun rseau de tuyaux dans lesquels

circule le gaz rfrigrant. Dans lvaporateur, un processus de transfert de la chaleur (QI) seffectue pression constante. Pour que le processus de rfrigration se produise, lenvironnement refroidir doit tre entour par un systme disolation thermique. Ce systme vite que lnergie thermique ne pntre dans la zone dinfluence de lvaporateur une vitesse gale celle de labsorption par le gaz rfrigrant. Le gaz rfrigrant pntre sous forme liquide dans lvaporateur au point 4 (idal) ou 4 (rel) et pendant quil traverse le rseau de lvaporateur il absorbe de la chaleur (QI) et se transforme progressivement en vapeur. Lorsquil atteint le point 1, il est entirement sous forme de vapeur. Il est alors aspir par le compresseur au moyen dune tubulure daspiration.
Les rfrigrateurs et conglateurs fonctionnent selon les lois de la physique qui rgissent le transfert dnergie en prsence de diffrences de temprature. En vertu du deuxime principe de la thermodynamique, on sait que, si de lnergie thermique doit tre transfre dun point de basse temprature un autre point de temprature leve, une action mcanique doit tre produite. Les rfrigrateurs et conglateurs modernes sont des systmes thermiques qui fonctionnent principalement selon un cycle dit de compression, qui utilise un gaz rfrigrant dot de proprits spciales grce auxquelles il effectue le transfert de chaleur. Ce chapitre explique comment fonctionnent les rfrigrateurs et conglateurs compression.
Le cycle rel diffre du cycle idal par certains processus irrversibles, non indiqus sur le graphe pour des raisons de clart et de simplicit.
Figure 56. Circuit de rfrigration
Extrieur
Qh Qh Qh
Ta
Qh
Qh Qh Qh
Zone de haute pression [2-3]
Fluide rfrigrant : cycle de compression idal
Dtendeur 3
Condenseur
QI QI QI QI QI QI QI
Filtre 4 Zone de basse pression [4-1] 1 Evaporateur Enceinte rfrigre
Compresseur
4 4
Isolation thermique Ta
S
132
Compresseur. Habituellement actionn par un moteur

lectrique, le compresseur aspire basse pression le gaz rfrigrant sortant de lvaporateur ltat de vapeur sature, et au moyen dun piston ou dun jeu de pistons exerce sur ce gaz une compression adiabatique (sans transfert de chaleur) entre les points 1 et 2. A la sortie du compresseur, la vapeur est chaude du fait de la compression et arrive au condenseur au point 2.
lappareil de rfrigration fonctionne selon les spcifications du fabricant. Seul le fabricant et les techniciens spcialiss ont accs ces robinets (non indiqus sur le schma de la figure 56).
Protection thermique. Systme de protection qui est activ et

qui dconnecte le compresseur en cas de surcharge touchant les bobines dans le champ du compresseur. (Il fait partie du systme lectrique et nest pas indiqu sur le schma du circuit de rfrigration). Note : Lvaporateur ainsi que le condenseur sont raliss en matriaux bons conducteurs de la chaleur comme laluminium (Al) et le cuivre (Cu). Pour amliorer le transfert de chaleur, il existe des systmes de ventilation qui produisent une convection force. Pour atteindre les diffrentes tempratures exiges au laboratoire ou dans lindustrie, les fabricants ont dvelopp divers modles et systmes rfrigrants adapts au but recherch.
Condenseur. Systme analogue celui de lvaporateur, avec un rseau de tuyaux dans lesquels circule le gaz rfrigrant. Comme la temprature du rfrigrant est suprieure la temprature ambiante (Ta), il se produit un transfert de chaleur (Qh) du rfrigrant vers lenvironnement pression constante. Pour faciliter le transfert de chaleur, les tuyaux du condenseur ont de fines ailettes qui augmentent la surface dchange. A mesure quil perd de la chaleur (Qh) par transfert, le rfrigrant retourne ltat de liquide satur jusqu ce quil atteigne le point 3, o il pntre dans le dtendeur. Dtendeur. En faisant circuler le rfrigrant de manire contrle, le dtendeur oppose une rsistance au passage du rfrigrant pour viter tout transfert de chaleur par un processus adiabatique. La pression dans le dtendeur est donc trs fortement rduite au point 4. Un filtre est en gnral mont la sortie du dtendeur. Certains fabricants remplacent le dtendeur par un tube capillaire qui a un effet dtranglement quivalent sur le passage du gaz rfrigrant. Filtre. Retient lhumidit et les impurets qui pourraient se trouver dans le rfrigrant. A la sortie du filtre, le systme est nouveau connect lvaporateur au point 4 et le cycle cidessus se rpte. Collecteur de liquide. Elment mont par certains fabricants
avant lentre du rfrigrant dans le compresseur. Il sert retenir toute partie du rfrigrant encore en phase liquide pour assurer que seule la phase vapeur pntre dans le compresseur (non indiqu sur le schma de la figure 56).

Pour que les rfrigrateurs et conglateurs fonctionnent correctement, les conditions suivantes doivent tre remplies :
Isolation thermique. Ensemble constitu de matriaux ayant la proprit de ralentir le transfert de chaleur. Lisolation thermique sert viter que lnergie thermique provenant de lenvironnement natteigne lenceinte rfrigre une vitesse gale la vitesse dabsorption de lnergie thermique interne par le systme. Tous les appareils de rfrigration possdent une isolation thermique adquate dans ce but. Les matriaux isolants les plus utiliss sont la mousse de polyurthane et la laine de verre. De mme, les surfaces internes sont couramment ralises en matriaux tels que le plastique ABS. Robinets de service. Robinets utiliss pour charger le circuit en gaz rfrigrant. Ils servent connecter le systme de remplissage et le systme de vidange de faon ce que
1. Un raccordement lectrique avec prise de terre appropri pour le voltage et la frquence de lappareil. Selon leur capacit, les rfrigrateurs et conglateurs fonctionnent en gnral sous 115 V/60 Hz ou 220-240 V/50 Hz. Il faut prvoir des raccordements lectriques conformes aux normes lectriques nationales et internationales en vigueur dans le laboratoire. 2. Si plus dun appareil est install sur le mme circuit lectrique, il faut vrifier que la puissance dlivre et les dispositifs de scurit suffiront pour alimenter ces appareils. 3. Brancher directement lappareil sur la prise. Ne jamais utiliser de prises multiples ni de prises prsentant des dfauts de voltage. Eviter lemploi de prolongateurs. La prise de courant ne doit pas se situer plus de 2 mtres de lappareil. 4. Installer lappareil sur une surface plane et horizontale en laissant un espace libre autour. Les rfrigrateurs et conglateurs ont leur base un systme de calage qui permet de compenser les petites irrgularits du plancher. Il est dusage de laisser un espace de 15 cm sur les cts et larrire de lappareil pour faciliter la ventilation du condenseur. 5. Eviter dinstaller lappareil dans un endroit expos la lumire solaire directe ou prs dune source de chaleur comme un radiateur ou autre appareil de chauffage. Se souvenir que plus la diffrence de temprature entre lenvironnement et le condenseur est grande, plus le processus de transfert de la chaleur sera efficace.
133
CIRCUIT DE CONTRLE DU RFRIGRATEUR

Le schma de la figure 57 reprsente un circuit de contrle type que lon trouve dans les rfrigrateurs et conglateurs. Il donnera une ide de la faon dont les divers sous-systmes sont relis entre eux. Le circuit de contrle de chaque modle varie selon les caractristiques adoptes par le fabricant. Les lments principaux sont :
UTILISATION DU RFRIGRATEUR Rfrigrateurs conservateurs

Le fonctionnement des rfrigrateurs conservateurs est en gnral trs simple. Chaque fabricant donne des recommandations de base. Certaines sont indiques ci-dessous.
1. Linterrupteur principal. Il alimente le rfrigrateur en courant lectrique. 2. Linterrupteur de porte. Il allume la lumire lorsque la porte est ouverte. 3. Le compresseur. 4. Les ventilateurs de lvaporateur. 5. Le sous-systme de dgivrage. Linterrupteur, les rsistances, le temporisateur (5, 5, 5, 5, 5). 6. Le sous-systme de rsistances pour le dgivrage ou pour assurer en permanence labsence de glace sur les lments (dgivrage automatique). 7. Le thermostat.
1. Brancher le cble dalimentation lectrique sur une prise de courant relie la terre et ayant une capacit suffisante pour fournir la puissance requise. 2. Mettre linterrupteur sur ON. Sur certains modles, linterrupteur est une touche sur laquelle on appuie. Attendre que le rfrigrateur atteigne sa temprature de fonctionnement avant dy entreposer des produits. Les fabricants rglent la temprature des rfrigrateurs sur 4C environ. 3. Slectionner la temprature laquelle lalarme doit tre active. Suivre les instructions du fabricant. 4. Charger le rfrigrateur selon la capacit fixe par le fabricant.
Figure 57. Circuit de contrle du rfrigrateur
2. Interrupteur de porte Lumire du rfrigrateur 5 Interrupteur de dgivrage 2 Interrupteur du ventilateur de lvaporateur 2 115 V/ 60 Hz 6. Rsistances frontales 6. Rsistance du condenseur 5 Rsistance de dgivrage 5 Commande du limiteur de dgivrage 5 Temporisateur de dgivrage 5. Interrupteur de dgivrage 1. Interrupteur principal 7. Thermostat Scurit du compresseur 5 Moteur du temporisateur de dgivrage 3. Compresseur Ventilateur du condenseur 4. Ventilateurs de lvaporateur
134
5. Rpartir la charge uniformment dans le rfrigrateur. Luniformit de la temprature dpend de la libre circulation de lair lintrieur de lappareil. 6. Eviter de laisser la porte ouverte pendant longtemps afin dempcher lnergie thermique et lhumidit de lair de pntrer dans lenceinte du rfrigrateur. Cela entranerait la formation de givre et lverait la temprature du systme. Nouvrir la porte que pour dposer ou enlever des objets Commandes des rfrigrateurs conservateurs
La figure 58 prsente le schma dun panneau de contrle de modle rcent pour les rfrigrateurs conservateurs (par exemple un rfrigrateur pour banque de sang). Le schma montre les lments suivants :
OMS Manual on management, maintenance and use of cold chain equipment, 2005 (version franaise sous presse) pour les oprations et les calendriers de maintenance prventive pour les rfrigrateurs pour banque de sang, les conglateurs de plasma, et les chambres froides et conglateurs utiliss dans la chane du froid pour le sang.
1. Interrupteur principal, actionn par une touche 2. Tmoins de porte ouverte, de batterie faible et de problmes techniques 3. Touches de rglage des paramtres 4. Ecran daffichage
ENTRETIEN DE ROUTINE DES RFRIGRATEURS

Les rfrigrateurs sont en gnral peu exigeants en termes de maintenance, mais sont exigeants en ce qui concerne la qualit des systmes dalimentation lectrique. Sils sont connects des circuits lectriques de bonne qualit et que lair peut circuler librement autour, ils peuvent fonctionner pendant des annes sans intervention technique. Le circuit de rfrigration est scell lors de la fabrication et ne possde aucun lment qui ncessite un entretien de routine. On trouvera ci-dessous les principales oprations effectuer en routine. Voir la publication
Nettoyage de lintrieur Frquence : une fois par trimestre 1. Vrifier que les tagres intrieures du rfrigrateur sont propres. Elles sont en gnral en fil mtallique inoxydable. Avant de les nettoyer, enlever du rfrigrateur tout ce qui pourrait gner. Faire glisser les tagres vides vers lavant. Humecter un chiffon avec un dtergent doux et frotter doucement les surfaces nettoyer. Essuyer et remettre en place. 2. Si le rfrigrateur a des tiroirs, procder de la mme faon pour les nettoyer. Vider les tiroirs et les sortir de leurs glissires. Les sortir du rfrigrateur. 3. Une fois les tagres et les tiroirs sortis du rfrigrateur, nettoyer les parois internes de celui-ci avec un dtergent doux. Les scher avant de remettre les lments internes en place. 4. Nettoyer les tiroirs avec un chiffon imbib de dtergent doux. Bien frotter. Essuyer les tiroirs et les remettre sur leurs glissires dans le rfrigrateur.
Avertissement : Eviter dutiliser de la laine dacier ou autre matriau abrasif pour nettoyer les tagres et les tiroirs. Eviter dutiliser de lessence, du white-spirit ou des diluants, car ils endommagent le plastique, les garnitures ou la peinture des surfaces nettoyer.
Figure 58. Panneau de contrle dun rfrigrateur pour banque de sang
Tmoin de service technique Thermomtre Interrupteur principal
Ecran dachage Touche daugmentation de la temprature Slecteur pour les paramtres de temprature et dalarme Alarme sonore
Tmoin de porte ouverte Tmoin de batterie faible
Touche de diminution de la temprature
135
Nettoyage du condenseur Frquence : tous les six mois 1. Dbrancher le cble dalimentation lectrique. 2. Vrifier la position du condenseur. Les fabricants le mettent en gnral larrire et en bas de lappareil. Sur certains rfrigrateurs, il se trouve en haut. 3. Enlever la grille de protection du condenseur et le filtre (qui ne se trouve pas sur tous les modles). 4. Enlever la poussire et les impurets dposes la surface du condenseur. Utiliser un aspirateur quip dune brosse aspirante. Passer la brosse sur toute la surface du condenseur pour enlever la poussire et les impurets. Vrifier que la surface des tubes ainsi que celle des ailettes est propre. Passer galement laspirateur sur le filtre, si lappareil en est quip. 5. Remettre la grille de protection. 6. Rebrancher le rfrigrateur.
Avertissement : Un joint de porte en mauvais tat provoque divers problmes de fonctionnement :
1. Il laisse entrer lhumidit, qui se condense et forme du givre dans lvaporateur. 2.Il allonge le temps ncessaire pour que le compresseur puisse maintenir la temprature slectionne. 3.Il modifie la temprature du compartiment de conservation. 4.Il augmente le cot de fonctionnement. Dgivrage
Frquence : tous les six mois De nombreux conglateurs modernes ont des cycles de dgivrage automatique de lvaporateur afin dviter laccumulation de glace. Normalement, ces cycles utilisent des rsistances qui liminent rapidement le givre. Certains modles ne possdent pas de dgivrage automatique et le processus seffectue manuellement selon un calendrier dfini lavance. La procdure recommande pour le dgivrage est la suivante :
Avertissement : Si le condenseur nest pas propre, cela interfre avec le processus de transfert de chaleur et le rfrigrateur peut chauffer ou fonctionner une temprature diffrente de celle slectionne.
Vrication du joint dtanchit de la porte

Frquence : une fois par trimestre Le joint dtanchit de la porte est un lment qui doit rester en bon tat pour que lappareil fonctionne correctement. Pour vrifier son tat, procder comme suit :
1. 2. 3. 4. 5.
Vrifier que lpaisseur de givre est suprieure 8 mm. Enlever le contenu du compartiment de conglation. Dbrancher le conglateur. Laisser la porte ouverte. Enlever leau mesure quelle saccumule dans les compartiments. Utiliser une ponge ou un chiffon absorbant. 6. Placer une serviette pour viter que la glace qui fond ne mouille le devant et lintrieur du rfrigrateur.
Avertissement : Ne jamais utiliser dinstruments pointus pour enlever la glace ou le givre de lvaporateur. Cela pourrait perforer la paroi de lvaporateur et laisser chapper le gaz rfrigrant, ce qui occasionnerait une panne grave ncessitant lintervention dun technicien spcialis.
1. Ouvrir la porte. 2. Glisser une bande de papier de 5 cm de large entre le joint de la porte et le bord du chssis du rfrigrateur. 3. Fermer la porte. 4. Tirer doucement le papier vers lextrieur. Le papier doit opposer une rsistance lorsquon le tire vers lextrieur. Si on ne sent pas de rsistance, il faut remplacer le joint. Rpter cette opration en procdant par 10 cm la fois sur la totalit du joint.
136
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Lappareil ne fonctionne pas. CAUSE PROBABLE Le fusible a saut. Lappareil est dbranch. La prise de courant nest pas alimente ou le courant est insuffisant. Le conglateur fonctionne en permanence mais ne refroidit pas. Le thermostat est rgl trop haut. Lappareil contient trop de givre. La temprature de lappareil est fluctuante. Le rglage de la temprature nest pas talonn. Le condenseur est sale. La temprature de lappareil est trop leve. La porte est ouverte. La fermeture de la porte nest pas tanche. Il y a un dfaut dans lalimentation lectrique. Une charge chaude (liquide ou solide) a t introduite dans le rfrigrateur. Le compresseur ne fonctionne pas. Le compresseur fonctionne mais il ny a pas de glace dans lvaporateur. Le compresseur fonctionne, mais il ny a pas de glace dans lvaporateur et les ventilateurs de lvaporateur fonctionnent. Le niveau de gaz rfrigrant est bas. Lorsquon met lappareil en marche, on entend un bruit de cliquetis. Fonctionnement bruyant. La protection thermique du compresseur sest active. Le plancher nest pas stable ou lappareil nest pas de niveau. Le plateau du systme de dgivrage vibre. Les pales du ventilateur touchent le couvercle ou le compresseur est mal ajust. Le compresseur fonctionne en permanence. La circulation dair autour de lappareil est insuffisante. Le thermostat est dfectueux. La fermeture de la porte nest pas tanche. La pice est trop chaude. La porte est ouverte trop souvent ou nest pas referme. Linterrupteur de lclairage est dfectueux. Vrifier le fusible. Vrifier le raccordement au secteur. Tester la connexion lectrique. Vrifier linterrupteur principal (coupe-circuit). Vrifier le rglage du thermostat. Rgler le thermostat sur une temprature plus basse. Dgivrer lappareil. Etalonner la temprature de fonctionnement selon la procdure indique par le fabricant. Nettoyer le condenseur selon la procdure indique pour lentretien de routine. Vrifier que la porte est bien ajuste et ferme. Mettre lappareil de niveau et ajuster la fermeture ou remplacer le joint. Vrifier que la connexion lectrique fonctionne correctement. Attendre que le rfrigrateur ait refroidi la charge. Vrifier le fonctionnement du compresseur. Rechercher si une des alarmes sest dclenche. Vrifier si les ventilateurs de lvaporateur fonctionnent. Une vrification complte du systme de rfrigration est ncessaire. Appeler le service technique. Appeler le service technique. Vrifier que la tension dalimentation est correcte. Dplacer lappareil vers un endroit plus adapt ou ajuster le niveau laide des vis de calage. Ajuster le plateau ou le caler. Appeler le service technique. Dplacer lgrement lappareil pour quil y ait assez despace libre. Le changer de place si ncessaire. Appeler le service technique. Vrifier le joint et ajuster la fermeture de la porte. Assurer une ventilation adquate de la pice. Limiter les ouvertures de la porte ou refermer la porte. Vrifier que la lumire steint lorsque la porte est ferme. SOLUTION
137
UTILISATION DES CONGLATEURS ULTRA-BASSE TEMPRATURE Conglateurs ultra-basse temprature

Lutilisation des conglateurs ultra-basse temprature implique de suivre la procdure recommande par le fabricant pour atteindre les performances stipules pour lappareil. Les recommandations communes tous les conglateurs ultrabasse temprature sont les suivantes :
1. Brancher lappareil sur une prise de courant relie la terre spcialement rserve cet appareil. La prise de courant doit tre en bon tat et pouvoir fournir la puissance ncessaire pour le fonctionnement de lappareil. Elle doit aussi satisfaire aux normes lectriques nationales et internationales. La tension ne doit pas varier de plus de + 10 % ou 5 % par rapport au voltage spcifi sur la plaque de lappareil. Certains conglateurs ultra-basse temprature ncessitent une puissance denviron 12 kW. Il est donc indispensable de disposer dun branchement lectrique capable de supporter une telle puissance. 2. Choisir un emplacement ayant un plancher solide et de niveau (horizontal dans toutes les directions). Il doit tre bien ventil et lcart de la lumire solaire directe et de toutes sources de chaleur. Certains fabricants stipulent que la temprature ambiante doit se situer entre 10 et 32 C. Il doit y avoir un espace libre dau moins 15 cm autour de lappareil (cts et arrire). La porte doit pouvoir souvrir un angle de 90. Normalement, les fabricants installent un dispositif de calage la base de lappareil, sur les roulettes.
MISE EN MARCHE
Pour comprendre le mode de fonctionnement des conglateurs ultra-basse temprature, un schma reprsentant un panneau de contrle similaire ceux qui se trouvent sur ces appareils est donn la figure 59. Il sagit dun schma gnrique, cest--dire quil y aura certainement des diffrences selon la marque et le modle. Les recommandations qui suivent sont communes tous les conglateurs.
Procdures 1. Brancher le cble dalimentation lectrique sur la prise de courant. 2. Allumer lappareil (interrupteur sur ON). Lcran doit sallumer et indiquer la temprature de la cuve. Une diode lectroluminescente indique que lappareil est sous tension. La mise sous tension entrane le dmarrage du compresseur et des ventilateurs de lvaporateur et du condenseur. 3. Slectionner la temprature de fonctionnement de lappareil. En gnral, plusieurs touches sont actives simultanment : la touche de commande de temprature et les touches de rglage de la temprature. Une fois la temprature slectionne, les commandes sont actives. Lcran indique la temprature de fonctionnement slectionne. Attendre un temps suffisant pour que lappareil atteigne la temprature slectionne. 4. Slectionner les limites de temprature qui activeront les alarmes. Ces tempratures ne scartent en gnral pas de plus de 10 % de la temprature de fonctionnement. Habituellement, on rgle les alarmes lorsque lappareil a atteint une temprature proche de sa temprature de fonctionnement. La procdure consiste activer la commande dalarme et slectionner les limites de temprature maximale et minimale qui dclencheront lalarme en cas de dpassement. Suivre la procdure recommande par le fabricant. En gnral, le panneau de contrle possde une touche qui permet de dsactiver les alarmes et aussi de tester leur fonctionnement. 5. Les conglateurs ultra-basse temprature possdent une autre srie dalarmes qui avertissent loprateur en cas dincidents qui peuvent affecter le fonctionnement correct de lappareil. Ce sont entre autres les suivants : Un dfaut dalimentation lectrique. Une baisse de tension. Une temprature ambiante excessive. Un dpassement de la limite infrieure de
temprature.
Figure 59. Panneau de contrle dun conglateur ultra-basse temprature

Touche de rinitialisation de lalarme Touche de test dalarme Ecran dachage Unit de temprature Commande de temprature
Interrupteur marche/arrt trois positions
Alarme de temprature ambiante extrme Alarme de ltre sale Alarme de batterie faible Alarme de tension faible Touches de rglage de la temprature (plus/moins)
Commande dalarme de temprature maximale Commande dalarme de temprature minimale
138
ENTRETIEN DE ROUTINE DES CONGLATEURS ULTRA-BASSE TEMPRATURE

Les oprations de routine effectuer sur les conglateurs ultrabasse temprature concernent principalement les lments dcrits ci-dessous. Pour lentretien courant et la maintenance prventive des conglateurs pour plasma et des chambres froides utiliss dans la chane du froid pour le sang, consulter la publication OMS Manual on management, maintenance and use of cold chain equipment, 2005 (version franaise sous presse).
Dgivrage Frquence recommande : une fois tous les six mois

Chaque fois quil est ncessaire de dgivrer le conglateur, il faut procder comme suit :
Nettoyage du condenseur Frquence : tous les six mois 1. Enlever la grille de protection. 2. Enlever et nettoyer le filtre. Sil est trop obstru, le remplacer par un nouveau ayant les mmes caractristiques que le filtre dorigine. 3. Vrifier le fonctionnement du ventilateur. 4. Passer laspirateur sur le condenseur et ses ailettes diffusantes. 5. Remettre la grille de protection et le filtre.
Avertissement : Si le condenseur nest pas propre, cela interfre avec le processus de transfert de chaleur et le rfrigrateur peut chauffer ou fonctionner une temprature diffrente de celle slectionne.
1. Transfrer les produits congels dans un autre conglateur ayant les mmes caractristiques de fonctionnement. 2. Eteindre lappareil et laisser lintrieur de la cuve remonter la temprature ambiante. 3. Enlever la glace et leau accumules lintrieur de la cuve. 4. Si on peroit des odeurs trangres, laver lintrieur de la cuve avec du bicarbonate de sodium et de leau chaude. 5. Nettoyer lextrieur avec un dtergent doux, le scher et appliquer une cire protectrice si ncessaire.
Avertissement : Ne jamais utiliser dinstruments pointus pour enlever la glace ou le givre de lvaporateur. Cela pourrait perforer la paroi de lvaporateur et laisser chapper le gaz rfrigrant, ce qui occasionnerait une panne grave ncessitant lintervention dun technicien spcialis.
Entretien de la pile du systme dalarme Frquence : tous les deux ou trois ans environ
La pile du systme dalarme doit tre change lorsquelle est use. Pour la remplacer, procder comme suit :
Intgrit du joint dtanchit de la porte Frquence recommande : une fois par trimestre
Il est recommand de contrler priodiquement lintgrit du joint dtanchit de la porte. Il doit rester en bon tat et ne pas prsenter de craquelures, de perforations ni de fissures.
1. Enlever le panneau avant. En gnral, la ou les piles sont situes juste derrire le panneau avant. 2. Dconnecter les bornes de la pile. 3. Enlever la pile use. 4. Installer une nouvelle pile ayant les mmes caractristiques que la pile dorigine. 5. Reconnecter les bornes. 6. Remettre le panneau avant.
139
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Le tmoin de tension insuffisante est allum. Le tmoin de filtre sale est allum. CAUSE PROBABLE La prise de courant dlivre une tension insuffisante. Vrifier la propret du filtre. SOLUTION Vrifier la tension dalimentation. Tester la connexion et ses dispositifs de scurit. Nettoyer le filtre de protection du condenseur. Sil est encrass, le remplacer par un autre ayant les mmes caractristiques que le filtre dorigine. Remplacer la pile par une nouvelle ayant les mmes spcifications que la pile dorigine. Brancher lappareil sur la prise de courant. Remplacer le fusible par un autre ayant les mmes caractristiques que le fusible dorigine. Augmenter la temprature slectionne. Nettoyer le condenseur. Vrifier et corriger la ventilation. Dgivrer lappareil. Si le problme persiste, appeler le service technique. Ajuster les charnires de la porte. Si le problme persiste, appeler le service technique. Appeler le service technique. Dplacer lappareil vers un endroit plus adapt ou ajuster le niveau laide des vis de calage. Ajuster le plateau ou le caler. Appeler le service technique. Dplacer lgrement lappareil pour quil y ait assez despace libre. Le changer de place si ncessaire. Appeler le service technique. Vrifier le joint et ajuster la fermeture de la porte. Assurer une ventilation adquate de la pice. Limiter les ouvertures de la porte ou refermer la porte. Vrifier que la lumire steint lorsque la porte est ferme.
Le tmoin de batterie faible est allum. Lappareil ne fonctionne pas.
La pile est use. Lappareil est dbranch. Le fusible a saut.
Lappareil fonctionne en permanence. Lappareil fonctionne en permanence mais ne refroidit pas.
La temprature de fonctionnement slectionne est trs basse. Le condenseur est sale. La ventilation est insuffisante. Une accumulation de glace nuit lisolation.
Accumulation rapide de givre dans lvaporateur. La porte du compartiment de conglation est bloque par le gel. Fonctionnement bruyant.
Le joint de porte fuit. Le chauffage du joint de porte est dfectueux. Le plancher nest pas stable ou lappareil nest pas de niveau. Le plateau du systme de dgivrage vibre. Les pales du ventilateur touchent le couvercle ou le compresseur est mal ajust.
Le compresseur fonctionne en permanence.
La circulation dair autour de lappareil est insuffisante. Le thermostat est dfectueux. La fermeture de la porte nest pas tanche. La pice est trop chaude. La porte est ouverte trop souvent ou nest pas referme. Linterrupteur de lclairage est dfectueux.
Les autres procdures de maintenance ncessitent des outils et un appareillage spcialiss.
140
DFINITIONS
BTU. Unit utilise pour dfinir le transfert de chaleur dans le systme anglais. BTU signifie British Thermal Unit. Une unit BTU est la quantit de chaleur qui doit tre transfre pour augmenter la temprature dune livre (pound) deau de 63 F 64 F. Calorie. Quantit de chaleur qui doit tre transfre un gramme deau pour augmenter sa temprature de 1 C. Cette dfinition sapplique dans les conditions normales (pression atmosphrique gale 760 mm Hg, acclration de la pesanteur gale 9,81 m/s2) ; la temprature dun gramme deau passe de 14,5 C 15,5 C. Chaleur. Forme dnergie transfre dun systme se trouvant une temprature donne un autre systme se trouvant une temprature plus basse, du fait de la diffrence de temprature entre les deux systmes. Lorsquun systme de masse leve (M) est plac au contact dun autre systme de masse plus petite (m) une temprature diffrente, la temprature rsultante finale est proche de la temprature initiale du systme ayant la masse la plus leve. On dit alors quune quantit de chaleur Q a t transfre du systme dont la temprature tait plus leve au systme dont la temprature tait moins leve. La constante proportionnelle (C), appele capacit calorifique du systme, permet dtablir la relation Q = CT, do lon dduit que lune des consquences du changement de temprature dun systme est le transfert de chaleur. Chaleur latente. Quantit dnergie thermique ncessaire pour quun changement de phase se produise dans une substance, par exemple de la phase liquide la phase vapeur. Chaleur sensible. Quantit dnergie ncessaire pour augmenter la temprature du gaz rfrigrant par absorption de chaleur. Par exemple, quantit de chaleur ncessaire pour faire passer la temprature de 15 20 C ou de 30 40 C. Chaleur spcifique. Quantit de chaleur ncessaire pour augmenter dun degr la temprature dune unit de masse. Entropie. Mesure de lnergie dun systme qui nest pas utilise pour le travail, ou du degr de dsordre dun systme. Le diffrentiel rversible dentropie sexprime par la formule.
dS =
dQ T
dans laquelle : dQ: chaleur absorbe depuis une rserve la temprature T pendant un changement dtat infinitsimal rversible. T: temprature de la rserve La formule suivante sapplique tout changement rversible au sein dun cycle.
dQ =0 T Si le cycle est irrversible, la formule devient S =
dS =
dQ <0 T Gaz rfrigrant. Substance utilise comme milieu dabsorption de la chaleur. S =

Processus adiabatique. Processus dans lequel il ny a pas de transfert de chaleur. Cela suppose Q = 0. Systme thermique. Systme fonctionnant dans un cycle thermodynamique et qui effectue une certaine quantit positive de travail comme rsultat du transfert de chaleur entre un corps temprature leve et un corps basse temprature.
141
Chapitre 19
Analyseurs de chimie clinique
Code GMDN Code ECRI Dnomination 35513 15-551 Analyseurs de chimie clinique 18-505 Analyseurs portables 34549* 15-551 Analyseur en chimie sche
Sous-catgorie du code GMDN 35513
Les analyseurs de chimie mesurent la concentration de substances dans le sang ou autres liquides biologiques en utilisant des ractions chimiques spcifiques dont les rsultats sont lus par des mthodes photomtriques. Leurs applications vont du diagnostic clinique et de la surveillance de la consommation de drogues aux analyses de mdecine lgale, etc. Les analyseurs de chimie comprennent essentiellement les analyseurs en chimie sche qui utilisent des bandelettes imprgnes dchantillon sur lesquelles des ractions chimiques sont dtectes, et les analyseurs en chimie liquide, qui dtectent les substances en solution. Il existe de nombreux modles, dont certains ne mesurent quun paramtre, par exemple les appareils de mesure de la glycmie et les hmoglobinomtres, et dautres en mesurent plus de dix. Les analyseurs de chimie existent sous forme dappareils de paillasse avec divers degrs dautomatisation, et dappareils portables. Certains modles, conus pour les climats tropicaux, ont des composants lectroniques protgs contre lhumidit. Les analyseurs de chimie recouvrent toute une famille dinstruments dont des photomtres et des colorimtres (voir chapitre 20). Ils sont souvent appels du nom de lanalyse quils servent effectuer.
Analyseur de paillasse (chimie sche) avec accessoires
Analyseur en chimie liquide
PHOTOGRAPHIES DANALYSEURS DE CHIMIE Analyseur portable (chimie sche)

Photo avec laimable autorisation de F. Hoffmann-La Roche AG Photo avec laimable autorisation de Siemens Healthcare Diagnostics Inc. 2008
143
Photo avec laimable autorisation de F. Hoffmann-La Roche AG
C H A P I T R E 19 A N A LY S E U R S D E C H I M I E C L I N I Q U E
QUOI SERVENT LES ANALYSEURS DE CHIMIE

Au laboratoire danalyses mdicales, lanalyseur de chimie est utilis pour mesurer une ou plusieurs substances (analytes) comme le glucose, lure, la cratinine, lhmoglobine, le cholestrol, etc. dans le sang, lurine, le srum ou le plasma. Il sert galement effectuer des tests de fonction hpatique.
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT Analyseur en chimie sche

Lanalyseur en chimie sche est un photomtre rflectance. La figure 27 du chapitre 11 montre linteraction de la lumire avec la matire et notamment la rflexion, dont la mesure est appele rflectance. Le photomtre rflectance donne une mesure quantitative de lintensit dune raction chimique ou biochimique produisant une couleur sur une surface (par exemple lame de microscope, bandelette ractive, btonnet ractif ou patch). La lumire est mise une longueur donde spcifique sur la bandelette par la source lumineuse de lappareil (par exemple une diode lectroluminescente ou DEL). Le produit color absorbe cette longueur donde lumineuse. Plus la concentration de la substance analyser dans lchantillon est leve, plus la coloration est intense et moins la lumire est rflchie. Le dtecteur de lappareil mesure la rflectance de cette raction colore enzymatique ou chimique sur le btonnet ractif ou la bandelette ractive et la convertit en un signal lectronique. Ce signal est traduit en concentration correspondante de la substance analyser dans le liquide biologique test et le rsultat est imprim ou affich sur un cran digital cristaux liquides (LCD).
la lumire dans les chantillons liquides daprs la loi de Beer-Lambert (voir chapitre 11). Lanalyseur en chimie liquide utilise en gnral comme source lumineuse une lampe halogne munie de filtres. Les modles les plus rcents utilisent une ou plusieurs lampes DEL mettant des longueurs donde spcifiques. Les tests sur chantillons liquides sont bass sur la production dun driv color de la substance analyser en prsence de ractifs spcifiques. La couleur est directement proportionnelle la concentration de la ou des substances dans la solution. Les mesures sont classiquement effectues entre 304 et 670 nm ou avec des filtres supplmentaires. Certains appareils peuvent effectuer des mesures cintiques de la concentration en fonction du temps.
LMENTS DES ANALYSEURS Analyseur en chimie sche

Il existe divers types danalyseurs en chimie sche. Lun des lments de base de ces analyseurs, dont la conception varie selon le fabricant, est le compartiment ou la fentre qui reoit la bandelette ractive. Le compartiment est ferm par un couvercle abattant, ou la bandelette est introduite manuellement ou au moyen dun dispositif de chargement. La source lumineuse est habituellement une diode lectroluminescente (DEL), ou plusieurs DEL de longueurs donde spcifiques. La mthode de mesure de la rflectance diffre selon le type dappareil. La mesure peut tre effectue directement, comme le montre la figure 60, ou dans un compartiment de forme cubique ou sphrique. La figure 61 montre une sphre dUlbricht (aussi appele sphre dintgration ou sphre intgratrice) et la faon dont elle mesure la rflectance. Dans les sphres dUlbricht, une ou plusieurs DEL de longueur donde dtermine, par exemple 567, 642 et/ou 951 nm, servent de source lumineuse pour divers tests. Les rcepteurs sont deux photodiodes symtriques, la photodiode de rfrence (DR) et
Analyseur en chimie liquide

Lanalyseur en chimie liquide est un photomtre. Contrairement au spectrophotomtre, il ne possde pas de prisme ni de grille de diffraction. On utilise un filtre color (un parmi plusieurs filtres ou un filtre unique) pour mesurer labsorption de
Figure 60. Diagramme simplifi de la photomtrie par rflectance sur bandelette ractive. Les flches reprsentent le trajet de la lumire. Les pointills reprsentent le changement dintensit d leffet de la couleur prsente sur la zone de raction de la bandelette.
Zone de raction Bandelette ractive
DEL
Dtecteur
144 4
Figure 61. Sphre dUlbricht.

Photo avec laimable autorisation de Gigahertz-optik GmbH
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION 1. Dballer avec soin lanalyseur de chimie. 2. Sassurer que lappareil est plac lcart de la lumire solaire directe, de toute lumire parasite et de toutes sources de chaleur. 3. Placer lappareil sur une paillasse solide, prs dune prise de courant (pour les appareils ne fonctionnant pas sur piles).
a. La prise de courant doit tre relie la terre pour assurer la protection et la scurit de loprateur et de lappareil. Les analyseurs de chimie fonctionnent en gnral sous 110-120 V/60 Hz ou 220-230 V/50 Hz. Les analyseurs ne fonctionnant pas sur piles doivent tre protgs des sautes de tension par un stabilisateur de tension.
b.
une photodiode de mesure (D). La lumire mise par la DEL est uniformment rflchie par la paroi interne blanche de la sphre. La photodiode DR mesure lintensit de la lumire diffuse (I0) et la photodiode D mesure lintensit lumineuse rflchie de faon diffuse par la partie ractive de la bandelette (I). Le rapport I0/I est proportionnel la valeur de la rflectance R. La rflectance mesure est convertie en une valeur de la concentration ou de lactivit de la substance analyser au moyen de courbes talons spcifiques du test.
4. Suivre les spcifications du fabricant pour linstallation des diffrents modles. 5. Conserver lemballage dorigine de lappareil pour une utilisation future ou pour renvoyer lappareil en rparation. 6. Pour plus de scurit, certains modles danalyseurs peuvent tre rangs dans un placard fermant cl lorsquils ne sont pas utiliss.
UTILISATION DE LANALYSEUR EN CHIMIE SCHE Analyseur en chime liquide

Les analyseurs en chimie liquide sont eux aussi de conception trs variable. Les lments de base communs tous les types dappareils sont les lments photomtriques schmatiss sur la figure 56. Les accessoires supplmentaires peuvent tre trs diffrents selon le degr dautomatisation et de complexit de lappareil. Les analyseurs en chimie liquide sont souvent quips dun ordinateur et dune imprimante, intgrs ou non. Les appareils les plus volus donnent les concentrations des substances analyser dans les units de mesure choisies. Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser lanalyseur en chimie sche. La procdure dcrite ci-dessous sapplique un type dappareil dtermin. Pour les autres modles, se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et lallumer. 2. Le temps de chauffage saffiche en secondes. Pour les autres appareils, attendre 15 minutes avant de commencer les mesures, ou suivre les indications du fabricant.
Figure 62. Elments de base dun photomtre. (Noter que sur certains appareils, le filtre est plac entre la cuve et le dtecteur).
Lampe
Monochromateur
Cuve
Dtecteur
Multiplicateur
Enregistreur/cran dachage
145
3. Lorsque lindication READ apparat sur lcran ou que le temps spcifi est coul, commencer le test. 4. Sortir une bandelette ractive du flacon. 5. A laide dune pipette, prlever la quantit approprie dchantillon (par exemple 32 l) en vitant la formation de bulles dair dans la pointe. 6. Enlever la feuille daluminium de la zone dapplication (zone ractive) de la bandelette, sans la plier. 7. Dposer lchantillon au centre de la zone dapplication rouge, en vitant de toucher la bandelette avec la pointe de la pipette. 8. Soulever le couvercle, mettre la bandelette sur le guide et linsrer horizontalement dans lappareil jusqu ce quun dclic se fasse entendre. 9. Fermer le couvercle. Laffichage sur lcran confirme que le code magntique spcifique du test a t lu par lappareil, par exemple GLU pour le glucose. 10. Le dlai restant avant que les rsultats apparaissent est affich en secondes. 11. La concentration de la substance analyser est habituellement exprime en mg/dl. 12. Aprs utilisation, ouvrir le couvercle et retirer la bandelette. 13. Selon le type dalimentation lectrique, teindre lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile (interrupteur sur OFF).
Frquence : une fois par jour 1. Toute claboussure sur lappareil ou proximit doit tre immdiatement nettoye. 2. A la fin de la journe de travail, selon le type dalimentation lectrique, teindre lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile (interrupteur sur OFF). 3. Pour les analyseurs en chimie sche : Ne pas laisser de bandelettes dans lappareil. Nettoyer rgulirement la fentre ou le compartiment recevant les bandelettes et fermer le couvercle. Utiliser un couvillon propre, doux et humide. 4. Pour les en chimie liquide : Vider et maintenir ferm le compartiment chantillon lorsque lappareil nest pas utilis. 5. Couvrir lappareil aprs usage. 6. Ranger correctement lappareil labri de la poussire. Frquence : effectuer si ncessaire 1. Remplacer les fusibles et lampes usags selon les instructions du fabricant. 2. Si lappareil est dfectueux, consulter un ingnieur qualifi dans le domaine biomdical. Frquence : une fois par mois
Inspecter la fentre et/ou la surface frontale du photodtecteur et les nettoyer avec du papier optique.
UTILISATION DE LANALYSEUR EN CHIMIE LIQUIDE

Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser lanalyseur en chimie liquide. La procdure dcrite ci-dessous sapplique un analyseur portable semi-automatique avec filtres intgrs et affichage numrique. Pour les autres modles, se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et lallumer. 2. Le temps de chauffage saffiche en secondes. 3. Prparer sur un portoir toutes les solutions en tubes essais : blanc, talons, solutions analyser. 4. Lorsque lappareil est prt, faire une mesure blanc. 5. Faire une mesure avec chacun des tubes essais. 6. Enregistrer les rsultats. 7. Selon le type dalimentation lectrique, teindre lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile (interrupteur sur OFF).
Frquence : tous les six mois 1. Inspecter visuellement lappareil pour vrifier lintgrit de tous ses lments conformment aux spcifications du fabricant. 2. Vrifier que les boutons et interrupteurs ainsi que les fermetures mcaniques sont monts correctement et quils sont clairement identifis. 3. Vrifier que tous les accessoires sont propres et intacts. 4. Vrifier que les lments mcaniques dassemblage (boulons, vis, crous, etc.) sont bien ajusts et en bon tat. 5. Vrifier que les cbles lectriques ne sont pas fissurs ni rompus, et quils sont correctement relis au secteur. 6. Pour les analyseurs aliments par le secteur :
a. Vrifier que les cbles de raccordement et leurs bornes sont exempts de poussire et de corrosion et ne sont pas encrasss. Vrifier que les cbles lectriques ne montrent pas de signes de rparations de fortune et ne sont pas uss. Vrifier que le systme de mise la terre (interne et externe) rpond aux normes de scurit lectrique.
b.
ENTRETIEN COURANT DES ANALYSEURS DE CHIMIE

Certains analyseurs de chimie nexigent quun entretien minimal et effectuent automatiquement des procdures dauto-talonnage. On trouvera ci-dessous des procdures gnrales applicables la plupart des analyseurs de chimie. Pour ltalonnage, les contrles priodiques et la maintenance de lanalyseur utilis au laboratoire, toujours suivre les instructions du fabricant. c.
7. Assurer que les interrupteurs et coupe-circuits, la bote fusibles et les indicateurs ne sont pas poussireux, encrasss ou corrods. 8. Vrifier lalignement de la lampe si le fabricant le recommande.
146

Ces tests doivent tre effectus par un lectricien (pour les appareils aliments par le secteur), un ingnieur ou autre personnel qualifi. Les rsultats doivent tre enregistrs et conservs pour permettre un suivi ultrieur.
INTERVENTIONS HORS ROUTINE ET CONDUITE TENIR EN CAS DE PANNE

On trouvera ci-dessous des directives gnrales pour la conduite tenir en cas de panne des analyseurs de chimie. Comme il existe de nombreux modles, il faut toujours se rfrer au manuel dutilisation fourni par le fabricant et suivre la procdure recommande.
1. Contrler la scurit de linstallation lectrique (uniquement pour les appareils aliments par le secteur) et de lenvironnement physique de lappareil. 2. Pour les appareils aliments par le secteur :
a. Vrifier que le voltage est appropri et ne scarte pas de plus de 5 % du voltage figurant dans les spcifications de lappareil. Vrifier que la polarit de la prise est correcte.
b.
3. Vrifier quil y a suffisamment despace autour de lappareil pour les cbles de raccordement et pour la ventilation. 4. Vrifier que la paillasse est en bon tat et propre. 5. Vrifier que lanalyseur nest pas situ proximit dappareils produisant des vibrations et nest pas expos la lumire solaire directe. 6. Vrifier que lappareil nest pas expos des conditions dhumidit, de temprature ou de poussire excessives. 7. Sassurer quil ny a aucune source de fumes, de gaz ou de vapeurs corrosives proximit.
1. Sil ny a pas de lumire dans le systme, ou si son intensit nest pas constante, remplacer lampoule. 2. Sil y a de la lumire dans le systme mais quaucune rponse ne saffiche, remplacer la photodiode. 3. Toujours remplacer les fusibles et ampoules usags en suivant les instructions du fabricant. 4. Si lappareil est dfectueux, consulter un ingnieur qualifi dans le domaine biomdical. 5. Si lanalyseur ne sallume pas, contrler la prise de courant. Brancher et vrifier le fusible ou les bornes de la pile. 6. En cas de panne grave, consulter un ingnieur qualifi dans le domaine biomdical.
147
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME Lanalyseur ne dmarre pas. CAUSE PROBABLE Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. La prise de courant nest pas alimente. Le cble dalimentation lectrique nest pas branch correctement. Les piles sont uses ou mal installes. Les touches du panneau de contrle ne rpondent pas. Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t incomplte. Une commande incorrecte a t active pendant le dmarrage. Le port en srie RS 232 ne rpond pas. Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t incomplte. Le cble de raccordement est mal connect. Lcran LCD est difficile lire. Limprimante est bloque. Le contraste est mal rgl. Le systme dclairage de fond a grill. Il y a un bourrage de papier dans limprimante. Eteindre lappareil puis le rallumer. Vrifier la connexion. Rgler le contraste. Appeler le reprsentant. Enlever lexcdent de papier avec des pinces fines. Eteindre limprimante, enlever le papier et rallumer limprimante. Lalimentation en papier de limprimante ne fonctionne pas ou le papier navance pas automatiquement. Le papier nest pas install correctement. Lavant du papier nest pas align ou est froiss. Eteindre limprimante, remettre le rouleau de papier en place. Eteindre limprimante. Remettre le rouleau de papier en place. Couper lavant du papier et raligner le papier dans le systme dalimentation. Appeler le reprsentant. Utiliser la taille de cuve spcifie par le fabricant. Corriger la position du mcanisme dajustement. Vrifier que le dclic sentend lorsque la bandelette est mise en place (selon le type dappareil). Vrifier que la bandelette a t place dans le bon sens dans lanalyseur, avec la face noire vers le bas. Lanalyseur sur en chimie sche ne fonctionne pas comme prvu. La bandelette utilise ne convient pas pour le test. Vrifier que la bandelette correspond au test effectu. Si ncessaire, refaire le test avec une bandelette correcte. Effectuer les contrles selon les recommandations du fabricant. Certains appareils fournissent des indications sur lcran et sont livrs avec des bandelettes de contrle de la qualit pour vrifier le systme optique. SOLUTION Mettre linterrupteur sur ON. Vrifier lalimentation lectrique gnrale. Vrifier quun dispositif de scurit na pas t activ. Brancher correctement le cble dalimentation. Vrifier ltat et linstallation des piles. Les remplacer ou les recharger si ncessaire. Eteindre lappareil puis le rallumer.
La commande dalimentation en papier ne rpond pas. La cuve ne rentre pas dans le compartiment portechantillon de lanalyseur en chimie liquide. La bandelette nest pas lue par lanalyseur en chimie sche. La cuve nest pas de la bonne taille. Le mcanisme dajustement de la cuve est mal positionn. La bandelette na pas t place correctement dans lanalyseur.
Lappareil est dfectueux.
DFINITIONS
Analyte. Cest la substance analyser. Constituant dun liquide biologique (sang, urine, etc.) qui ne peut lui-mme tre mesur, mais dont on peut mesurer certaines proprits en utilisant un dispositif mdical conu cette fin. Par exemple, le lactate ne peut tre dos, mais sa concentration peut tre mesure. Les analytes (on les appelle souvent simplement paramtres) couramment tudis en chimie clinique sont le cholestrol, lure, la cratinine, le glucose, etc., que lon mesure pour valuer ltat de sant des patients. Bandelette ractive. Dispositif sous forme de bandelette contenant des ractifs et autres produits, et destin un usage diagnostique. Il existe des bandelettes ractives de divers degrs de complexit. Elles peuvent consister simplement en bandes de papier filtre sur lesquelles est li un ractif, ou en un systme labor comprenant du papier ractif, des fibres de transport, des couches de ractifs et dindicateurs, et jusqu des bandelettes magntiques contenant des donnes codes. La zone de test ou de raction est la partie de la bandelette o la raction a lieu et o elle est lue par un analyseur en chimie sche ou directement par un oprateur. Rflectance (R). Rapport entre lintensit de la lumire rflchie sur une surface (I0) et celle de la lumire incidente (I), I0/I. Note : Voir aussi dautres dfinitions au chapitre 11.
148
Chapitre 20
Colorimtres
Code GMDN Code ECRI Dnomination 36910 18-257 Photomtre filtre, automatique 38837 18-258 Photomtre filtre, manuel 15146 15-146 Analyseurs dhmoglobine (hmoglobinomtres)
PHOTOGRAPHIE DUN COLORIMTRE Hmoglobinomtre portable
les lments de lappareil sont protgs par un revtement spcial qui empche la corrosion. Les colorimtres peuvent tre manuels ou semi-automatiques. Les lectures de labsorbance se font sur un cadran ou sur un cran affichage numrique. Lhmoglobinomtre est un colorimtre portable conu pour donner une lecture directe et exacte de la concentration dhmoglobine en g/dl ou en g/l. Il est galement dcrit dans le prsent chapitre.
Photo avec laimable autorisation de Hemocue AB
Un colorimtre utilise des filtres pour produire de la lumire sur une seule longueur donde slectionne en fonction de la couleur de la solution analyser. La lumire colore traverse lchantillon et la quantit de lumire mergente est mesure sur une chelle dabsorbance. Labsorbance est directement proportionnelle la concentration du compos color dans la solution, selon la loi de Beer-Lambert (voir chapitre 11). On peut habituellement mesurer avec une bonne fiabilit des absorbances comprises entre 0 et 0,7 units. Les facteurs dtalonnage sont plus levs pour les colorimtres que pour les photomtres car ces appareils sont moins sensibles. Les facteurs dtalonnage correspondant diverses mthodes et divers ractifs sont en gnral fournis par le fabricant ou trouvs dans la littrature. Les hmoglobinomtres mesurent la concentration dhmoglobine dans le sang. La plupart des modles fonctionnent manuellement et sont aliments par le secteur ou par piles. Les nouveaux modles ont des batteries rechargeables et/ou utilisent lnergie solaire comme source dlectricit. Avec la plupart des hmoglobinomtres, il faut diluer le sang avant de procder la mesure. Certains modles utilisent un dispositif spcial pour recueillir le sang sans dilution ; ces dispositifs sont usage unique (jetables), ce qui augmente le cot de lanalyse.
QUOI SERT UN COLORIMTRE

Un colorimtre est un appareil lectrique qui mesure la concentration de substances analyser dans des solutions colores. Cest une version simplifie du photomtre. En raison de la diffrence de qualit de ses filtres, il est moins sensible quun photomtre. Le colorimtre est utilis en chimie clinique, principalement pour dterminer les taux dhmoglobine. Plusieurs fabricants proposent divers modles comportant des filtres individuels amovibles ou des filtres (jusqu dix longueurs donde diffrentes) monts sur un support pivotant. Certains modles sont adapts une utilisation en climat chaud et humide : les filtres en glatine sont protgs par des plaques de verre pour empcher le dveloppement de moisissures, et
149
C H A P I T R E 20 C O LO R I M T R E S
LMENTS DU COLORIMTRE
Les lments de base du colorimtre sont les mmes que ceux du photomtre, illustrs la figure 56 du chapitre 19. Comme on la dj vu au dbut de ce chapitre, ces appareils sont plus simples et, en raison de la qualit de leurs filtres, moins sensibles. La source lumineuse peut tre une lampe diode mettant une lumire monochromatique. On peut aussi utiliser la lumire dune lampe au tungstne ou dune lampe halogne, filtre de faon obtenir la longueur donde voulue. Selon le modle, le panneau de contrle de lappareil peut comporter les lments suivants : b.
gnral sous 110-120 V/60 Hz ou 220-230 V/50 Hz. Si lappareil ne fonctionne pas sur piles, le protger des sautes de courant par un stabilisateur de tension.
4. Suivre les instructions du fabricant pour linstallation des divers modles. 5. Pour plus de scurit, lappareil peut tre rang dans une armoire fermant cl lorsquil nest pas utilis. Ce nest peut-tre pas possible pour les grands modles, mais on peut les protger dune autre faon si on le juge ncessaire.
1. 2. 3. 4. 5. 6.
Fentre daffichage Touche marche/arrt (ON/OFF) Compartiment chantillon Touche Test Touche Rfrence Touche de slection du mode de fonctionnement, par exemple Absorbance/% Transmittance, Cintique (pas sur tous les modles).
UTILISATION DU COLORIMTRE
Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser le colorimtre. La procdure dcrite ci-dessous sapplique un colorimtre portable avec filtres intgrs et affichage numrique. Pour les autres modles, les procdures peuvent tre diffrentes et il faudra se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION 1. Il faut un environnement propre, sans poussire, vapeurs ni fumes, et non expos la lumire solaire directe. 2. Dballer lappareil avec soin et, le cas chant, lassembler selon les instructions du fabricant. 3. Placer lappareil sur une paillasse solide et si ncessaire proximit (pas plus de 1,5 m) dune prise de courant relie la terre.
a. La prise de courant doit tre relie la terre pour garantir la protection et la scurit de loprateur et de lappareil. Les colorimtres fonctionnent en
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et lallumer (interrupteur sur ON). 2. Attendre 15 minutes pour laisser chauffer les systmes optique et lectronique de lappareil. 3. Slectionner la longueur donde requise pour la substance analyser, par exemple 540 nm pour la cyanmthmoglobine. 4. Slectionner le mode Absorbance avec la touche de slection du mode de fonctionnement. 5. Prparer sur un por toir toutes les solutions ncessaires : blanc (ractif seul, sans chantillon), talon de concentration connue et solutions analyser (chantillons).
Figure 63. Commandes dun colorimtre portable
Fentre daffichage Touche de mode Absorbance/ % Transmittance Touche ON/OFF
Touche Test Touche Rfrence
Touche de mode Cintique
150 0
Photo avec laimable autorisation de Biochrome Ltd
Compartiment chantillon avec cuve
6. Nettoyer soigneusement la cuve avec un chiffon doux non pelucheux ou du papier optique pour viter de la rayer. Toujours tenir la cuve par son ct dpoli opaque. 7. Verser la solution de blanc dans la cuve et placer celleci dans le compartiment chantillon avec les cts transparents face au rayon lumineux. 8. Fermer le compartiment chantillon et mettre laffichage zro avec la touche SET BLANK (rgler blanc). 9. Enlever la cuve du compartiment chantillon et remettre la solution de blanc dans son tube essais dorigine. 10. Verser la solution talon dans la cuve et faire une lecture de labsorbance. 11 Rpter ltape 9. 12. Faire de la mme faon la lecture de labsorbance sur les solutions analyser. 13. A laide dun tableau des valeurs obtenues daprs la courbe dtalonnage de lappareil, lire la concentration des chantillons daprs la valeur de labsorbance. 14. Aprs emploi, dbrancher lappareil et le couvrir pour le protger de la poussire. 15. Rincer la cuve leau distille, la laisser sgoutter et lemballer dans un tissu doux. La ranger soigneusement dans une petite bote pour viter les rayures et la poussire.
11. Retirer le blanc du compartiment chantillon et le remettre dans son tube essais dorigine. 12. Verser la solution talon dans la cuve et placer celle-ci dans le compartiment chantillon. 13. Fermer le couvercle et attendre 3 secondes. Noter la valeur lue sur lcran digital. 14. Retirer ltalon du compartiment chantillon et le remettre dans son tube essais dorigine. 15. Verser la solution chantillon dilue dans la cuve et placer celle-ci dans le compartiment chantillon. 16. Fermer le couvercle, attendre 3 secondes et noter la valeur lue sur laffichage digital. 17. Retirer lchantillon du compartiment et le remettre dans son tube essais dorigine. 18. Rpter les tapes 15 17 pour chaque chantillon analyser. 19. Rincer la cuve leau distille. La laisser sgoutter, lemballer dans un tissu doux et la ranger dans une petite bote pour la protger des rayures. 20. Selon le type dalimentation lectrique, teindre lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile (interrupteur sur OFF). 21. Ranger lappareil dans un tiroir fermant cl ou tout autre endroit appropri.
UTILISATION DE LHMOGLOBINOMTRE
Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser l hmoglobinomtre. La procdure dcrite ci-dessous sapplique un hmoglobinomtre portable avec source lumineuse DEL et affichage numrique. Pour les autres modles, les procdures peuvent tre diffrentes et il faudra se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
Lentretien des colorimtres doit tre effectu par un personnel qualifi. On trouvera ci-aprs les procdures gnrales dentretien de routine des colorimtres et hmoglobinomtres. Certains modles peuvent ncessiter des procdures diffrentes. Toujours suivre soigneusement les instructions du fabricant pour les contrles priodiques et la maintenance des colorimtres et hmoglobinomtres.
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et mettre linterrupteur sur ON ou utiliser lalimentation lectrique interne de lappareil. 2. Mettre linterrupteur marche/arrt sur ON. 3. Choisir lunit qui sera utilise en routine, par exemple g/dl. 4. Le temps de chauffage saffiche en secondes sur certains modles. Pour les autres modles, attendre 15 minutes ou le temps recommand par le fabricant. 5. Prparer sur un portoir toutes les solutions en tubes essais : blanc, talons, solutions analyser. 6. Laisser les solutions squilibrer la temprature ambiante pendant 10 minutes. 7. Pendant ce temps, nettoyer soigneusement la cuve en utilisant un chiffon doux pour viter de la rayer. 8. Eviter de toucher les cts de la cuve qui font face au rayon lumineux ; tenir la cuve par ses cts opaques, qui ne sont pas sur le trajet de la lumire. 9. Verser la solution de blanc dans la cuve et placer celleci dans le compartiment chantillon avec les cts transparents face au rayon lumineux. 10. Faire le blanc de lappareil : fermer le couvercle et attendre environ 3 secondes, puis rgler le bouton de laffichage sur zro (0:00).
Frquence : une fois par jour 1. Toute claboussure sur lappareil ou proximit doit tre immdiatement nettoye. 2. A la fin de la journe de travail, selon le type dalimentation lectrique, teindre lappareil et le dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile. 3. Vider et maintenir ferm le compartiment chantillon lorsque lappareil nest pas utilis. 4. Couvrir lappareil aprs usage. Le ranger correctement, labri de la poussire. Frquence : effectuer si ncessaire 1. Remplacer les fusibles et lampes usags selon les instructions du fabricant. 2. Si lappareil est dfectueux, consulter un ingnieur qualifi dans le domaine biomdical. Frquence : une fois par mois
Inspecter la fentre et/ou la surface frontale du photodtecteur et les nettoyer avec du papier optique.
151
Frquence : tous les six mois 1. Inspecter visuellement lappareil pour vrifier lintgrit de tous ses lments conformment aux spcifications du fabricant. 2. Vrifier que les boutons et interrupteurs ainsi que les fermetures mcaniques sont monts correctement et quils sont clairement identifis. 3. Vrifier que tous les accessoires sont propres et intacts. 4. Vrifier que les lments mcaniques dassemblage (boulons, vis, crous, etc.) sont bien ajusts et en bon tat. 5. Vrifier que les cbles lectriques ne sont pas fissurs ni rompus, et quils sont correctement relis au secteur. 6. Pour les analyseurs aliments par le secteur :
a. Vrifier que les cbles de raccordement et leurs bornes sont exempts de poussire et de corrosion et ne sont pas encrasss. Vrifier que les cbles lectriques ne montrent pas de signes de rparations de fortune et ne sont pas uss. Vrifier que le systme de mise la terre (interne et externe) rpond aux normes de scurit lectrique.
Entretien gnral
Se reporter la section sur lentretien gnral des spectrophotomtres au chapitre 11 pour le nettoyage des claboussures et le remplacement des piles.
Utilisation et entretien des cuves

Les cuves doivent tre rigoureusement propres pour que les mesures soient exactes. Les nettoyer comme dcrit au chapitre 11. Les recommandations supplmentaires suivantes sont applicables :
b.
c.
7. Assurer que les interrupteurs et coupe-circuits, la bote fusibles et les indicateurs ne sont pas poussireux, encrasss ou corrods. 8. Vrifier lalignement de la lampe si le fabricant le recommande. Frquence : une fois par an
Ces tests doivent tre effectus par un lectricien, un ingnieur ou autre personnel qualifi. Les rsultats doivent tre enregistrs et conservs pour permettre un suivi ultrieur.
1. Contrler la scurit de linstallation lectrique et de lenvironnement physique de lappareil. 2. Pour les appareils aliments par le secteur :
a. Vrifier que le voltage est appropri et ne scarte pas de plus de 5 % du voltage figurant dans les spcifications de lappareil. Vrifier que la polarit de la prise est correcte.
b.
3. Vrifier quil y a suffisamment despace autour de lappareil pour les cbles de raccordement et pour la ventilation. 4. Vrifier que la paillasse est en bon tat et propre. 5. Vrifier que lanalyseur nest pas situ proximit dappareils produisant des vibrations et nest pas expos la lumire solaire directe. 6. Vrifier que lappareil nest pas expos des conditions dhumidit, de temprature ou de poussire excessives. 7. Assurer quil ny a aucune source de fumes, de gaz ou de vapeurs corrosives proximit.
1. Toujours tenir les cuves par leurs parois opaques, non optiques. 2. Sauf instructions contraires du fabricant, ne faire aucune mesure sans avoir fait une lecture blanc au pralable. 3. Utiliser une cuve unique ou un jeu de cuves assorties pour un fonctionnement optimal de lappareil. Note : Labsorbance des cuves ne doit pas dpasser 0,01 lorsquon fait la mesure sur de leau distille. Pour viter des rsultats incorrects, une cuve dont labsorbance dpasse cette limite ne doit pas tre utilise dans une srie sauf si elle est apparie avec une cuve ayant la mme absorbance avec leau distille. 4. Enlever les bulles prsentes dans la solution en tapotant doucement la cuve avec le doigt. 5. Vrifier que le niveau de solution dans la cuve est suffisamment haut (au-dessus du faisceau lumineux) pour que la rflexion de la lumire la surface du liquide ninterfre pas avec la mesure. 6. Toutes les solutions utilises et lchantillon analyser doivent tre limpides. Si le mlange entre la solution de ractif et lchantillon est trouble, la mesure doit tre refaite aprs avoir vrifi et confirm la transparence et la propret de la cuve. 7. Si on effectue une mesure cintique sur une longue priode, fermer hermtiquement la cuve pour viter lvaporation, qui donnerait des rsultats faussement levs. 8. Lorsquon effectue des mesures sur une srie dchantillons, refaire le zro toutes les 5 10 mesures en faisant une mesure blanc, pour viter une drive du zro. 9. Ne pas laisser la cuve dans lappareil. 10. Si on utilise des micro-cuves ou des semi-micro-cuves, assurer un positionnement correct sur le trajet lumineux pour viter de fausser les rsultats du fait de la rflexion partielle de la lumire. 11. Conserver les cuves dans une bote labri de la poussire pour viter de les endommager, car des cuves rayes ou endommages peuvent conduire des rsultats incorrects.
152
Utilisation et entretien des ltres optiques 1. Manipuler les filtres amovibles en les tenant par leurs bords pour viter toute contamination. 2. Conserver les filtres de rechange dans une bote labri de la poussire afin dviter quils ne se cassent ou se rayent. 3. Vrifier quun filtre se trouve dans son logement lorsquon allume la lampe pour viter dendommager la cellule photolectrique. Ranger les filtres dans leur bote quand lappareil nest pas utilis. 4. Lorsque lappareil est froid et teint (interrupteur sur OFF), nettoyer les filtres et la fentre optique avec du papier optique selon les instructions du fabricant. Utilisation et entretien de la source lumineuse 1. Eteindre la lampe aprs chaque utilisation pour prolonger sa dure de vie. Certains fabricants recommandent de tenir un registre de lutilisation de la lampe du colorimtre. 2. Contrler la lampe intervalles rguliers. La remplacer si elle est lorigine de linstabilit du signal dabsorption.
Alignement de la lampe
La procdure ci-dessous indique comment procder lalignement dune nouvelle lampe. Se reporter aux instructions du fabricant pour vrifier que la procdure est conforme aux spcifications du modle utilis. Raligner la nouvelle lampe comme suit :
1. Mettre une cuve propre emplie deau distille en place dans lappareil. 2. Mettre lindicateur la moiti de lchelle de lecture, par exemple 50 % de transmission. 3. Dplacer lgrement chaque lment optique et vrifier si la lecture est modifie. 4. Si ncessaire, ajuster lalignement de la lampe pour obtenir une transmission maximale. 5. On peut aussi placer un carton blanc en face de la cellule photolectrique (certains instruments le permettent). Observer limage de la lampe sur le carton. Elle doit tre verticale et nette. Si non, ajuster lalignement de la lampe jusqu ce quon obtienne la meilleure image.
153
On trouvera ci-dessous un guide de dpannage pour les colorimtres. Comme il existe de nombreux modles diffrents, tenir compte en priorit de ce qui suit : 1. Toujours se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant. 2. Si un appareil ne sallume pas, contrler la prise de courant (pour les appareils fonctionnant sur secteur). Brancher lappareil et contrler le fusible ou les bornes des piles. 3. En cas de panne grave, consulter un ingnieur qualifi dans le domaine biomdical.
GUIDE DE DPANNAGE Colorimtre automatique

PROBLME Le colorimtre ne dmarre pas. CAUSE PROBABLE Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. La prise de courant nest pas alimente. Le cble dalimentation lectrique nest pas branch correctement. Les touches du panneau de contrle ne rpondent pas. Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t incomplte. Une commande incorrecte a t active pendant le dmarrage. Le port en srie RS 232 ne rpond pas. Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t incomplte. Le cble de raccordement est mal connect. Lcran LCD est difficile lire. Limprimante est bloque. Le contraste est mal rgl. Le systme dclairage de fond a grill. Il y a un bourrage de papier dans limprimante. Eteindre lappareil puis le rallumer. Vrifier la connexion. Rgler le contraste. Appeler le reprsentant. Enlever lexcdent de papier avec des pinces fines. Eteindre limprimante, enlever le papier et rallumer limprimante. Lalimentation en papier de limprimante ne fonctionne pas ou le papier navance pas automatiquement. Le papier nest pas install correctement. Lavant du papier nest pas align ou est froiss. Eteindre limprimante, remettre le rouleau de papier en place. Eteindre limprimante. Remettre le rouleau de papier en place. Couper lavant du papier et raligner le papier dans le systme dalimentation. Appeler le reprsentant. Utiliser la taille de cuve spcifie par le fabricant. Corriger la position du mcanisme dajustement. Vrifier que la cuve nest pas raye. Vrifier quil ny a pas de particules flottant dans la cuve. Frotter les parois optiques de la cuve avec un chiffon propre. Vrifier que lintervalle de travail slectionn (longueur donde et dilution) convient pour lchantillon analyser. La lecture indique des valeurs ngatives. Il ny a pas de lecture de labsorbance. Il ny a pas dchantillon. La cuve est mal positionne. La longueur donde slectionne est incorrecte. Lappareil a t talonn par erreur avec un chantillon la place dune solution talon. Mettre un chantillon dans la solution. Vrifier lorientation de la cuve. Ses cts transparents doivent tre face au rayon lumineux. Rgler la longueur donde sur un intervalle compatible avec lanalyse. Etalonner avec une solution blanc ou de leau distille. SOLUTION Mettre linterrupteur sur ON. Vrifier lalimentation lectrique gnrale. Vrifier quun dispositif de scurit nest pas activ. Brancher correctement le cble dalimentation. Eteindre lappareil puis le rallumer.
La commande dalimentation en papier ne rpond pas. La cuve ne rentre pas dans le compartiment chantillon. La lecture est fluctuante. La cuve nest pas de la bonne taille. Le mcanisme dajustement de la cuve est mal positionn. Il y a des interfrences sur le trajet de la lumire.
154
Colorimtre non automatique

PROBLME La lampe source ne sallume pas. CAUSE PROBABLE Le filament est cass. Le fusible a saut. Il y a une rsistance dans le filament de la lampe. Le voltage est incorrect. La lecture du cadran ou du galvanomtre est trop faible. La lampe source est dfectueuse. La cellule photolectrique est sale ou dfectueuse. Le photomultiplicateur est dfectueux. La tension aux bornes de la lampe source est faible. SOLUTION Remplacer la lampe. Remplacer le fusible. Remplacer la lampe. Contrler le voltage. Contrler la source dalimentation. Remplacer la lampe. Nettoyer ou remplacer la cellule photolectrique Remplacer ou rparer le photomultiplicateur. Ajuster le voltage.
DFINITIONS
Comme ces appareils sont bass sur le principe du photomtre, voir les dfinitions la fin du chapitre 11.
155
Bibliographie
American Society for Testing and Materials, Annual book of Standards 1994. Water Hardness Determination. Method ASTM D1126-92. Aston, R., Principles of Biomedical Instrumentation and Measurement, Merrill Publishing Company, 1990. Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipettes, National Physical Laboratory, Teddigton, Middlesex, UK, 2004 (www.npl.co.uk). Carter J., Lema O., Practical Laboratory Manual for Health Centres in Eastern Africa, AMREF, 1994. Cheesborough, Monica, District Laboratory Practice in Tropical Countries, Part 1, Tropical Health Technology, UK, 2005. Class II (Laminar Flow) Biohazard Cabinetry, NSF International Standard, NSF-49-1992. Gordon, J., Sonntag, R., Fundamentals of Classical Thermodynamics, New York, John Wiley and Sons, 2nd. Editions, 1976. Guidelines for calibration in laboratories, Drinking water Inspectorate by LGC (Teddington) TLTD, December 2000. Fitzgerald, A., Kingsley, C., Kusko, A., Electric Machinery, Mc Graw Hill Co., 1971. HealthCare Product Comparison System, ECRI, 2002. Holman, J., Heat Transfer, New York, Mc Graw Hill Co., 1972. Johns, Warren L. Selection of basic laboratory equipment for laboratories with limited resources, World Health Organization, 2000. Lobkowicz, F., Melissinos A., Physics for Scientist and Engineers, vol. 2, Philadelphia. W.B. Saunders Company, 1975. Maintenance and repair of laboratory equipment, hospital and diagnostic by image, Geneva, WHO, 1996. Manual for Basic Techniques for a Health Laboratory. WHO, Geneva 2nd. Edition, 2003. Manual on the management, maintenance and use of blood cold chain equipment, WHO, Geneva, 2005. Primary Containment for Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety Cabinets, Washington DC U.S. Department of Health and Human Services, Center for Disease Control and Prevention and National Institute of Health, 2nd. Edition, 2000. Ram S., Lamba, De La Cutara, R., Locally Produced Low Cost Equipment Project, UNESCO-IUPAC.
157
B I BL I OG R A P H I E
The blood cold chain, guide to the selection and procurement of equipment and accessories, WHO, Geneva, 2002. The Laboratory Safety Guidelines, Public Health Agency of Canada. The microscope, A Practical Guide, New Delhi, India, WHO, Regional Office for South-East Asia, 1999. Universal Medical Devices Nomenclature SystemTM (UMDNS), Product category Thesaurus, ECRI,5200 Bulter Pike, Plymouth Meeting, PA, USA 2000.
158

Equipement Du Laboratoire

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Originaltitel

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Equipement Du Laboratoire

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

Manuel dentretien et de

des appareils de laboratoire

Ce document est disponible ladresse suivant : www.who.int/diagnostics_laboratory

Table des matires

Conditions requises pour linstallation Entretien de routine Guide de dpannage Dfinitions

145 146 146 147 148 148

Table des gures

PHOTOGRAPHIE DUN LECTEUR DE MICROPLAQUES

A QUOI SERT UN LECTEUR DE MICROPLAQUES

Photo avec laimable autorisation de BioRad Laboratories

CHAPITRE 1 LECTEUR DE MICROPLAQUES

Matriel ncessaire pour les tests ELISA

Etapes biochimiques de la technique ELISA1

La figure 1 montre comment ces lments sont relis entre eux.

Etapes mcaniques de la technique ELISA Utilisation du matriel

Figure 1. Matriel utilis pour les tests ELISA

Laveur de plaque ELISA

Pour des explications plus dtailles, se reporter la littrature spcialise.

CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION

Entretien courant Frquence : une fois par jour

Etalonnage du lecteur de microplaques

Entretien prventif Frquence : une fois par trimestre

CHAPITRE 1 LECTEUR DE MICROPLAQUES

Le lecteur donne des valeurs de labsorbance trop leves.

Le lecteur donne des valeurs de labsorbance trop faibles.

Valeur lev de labsorbance obtenue avec le blanc.

Substrat contamin. Lavage insuffisant ou inefficace.

Les donnes ne sont pas transmises du lecteur au microprocesseur.

Faisceau lumineux mal align.

Le lecteur a t dplac sans que les prcautions ncessaires aient t prises.

Le lecteur ne dtecte pas les erreurs.

Appeler le service technique.

PHOTOGRAPHIE DUN LAVEUR DE MICROPLAQUES

A QUOI SERT UN LAVEUR DE MICROPLAQUES

Photo avec laimable autorisation de BioRad Laboratories

Figure 2. Laveur ELISA

Pompes dplacement positif

Figure 3. Profils de puits

Distribution et aspiration simultanes. Dans certains

Vrication de la procdure de lavage

CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION

Entretien courant Frquence : une fois par jour

Procdure labore par PANBIO, ELISA Check Plus, Cat. N E-ECP01T.

Entretien prventif Frquence : une fois par trimestre

Lentretien na pas t fait selon le plan.

PHOTOGRAPHIE ET LMENTS DUN PH-MTRE

A QUOI SERT UN PH-MTRE

Valeur du pH de certains liquides biologiques

Photo avec laimable autorisation de Consort

Figure 4. Schma dun pH-mtre

KCI Verre spcial permable aux ions

Pont salin (membrane poreuse)

CIRCUIT LECTRIQUE TYPE

Figure 5. Types dlectrodes

Fil de platine (Pt)

Fil dargent (Ag)

Electrode de rfrence Membrane semi-permable Solution tampon

Chlorure mercureux (HgCl ou calomel)

Chlorure de potassium (KCl)

Figure 6. Circuit lectrique type pour le pH-mtre

Transformateur 110 V / 12 V DC 0.1 fd 3,300 fd 7912

10K Zro Entre 10K Rfrence mV pH

Description des lments du circuit lectrique type