SECRETARA DE EDUCACIN PBLICA SUBSECRETARIA DE EDUCACIN SUPERIOR SISTEMA NACIONAL DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICA DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN SUPERIOR

TECNOLGICA

INSTITUTO TECNOLGICO DEL VALLE DE MORELIA

REPORTE DE PRCTICA

QUINTO SEMESTRE

INGENIERIA EN INNOVACION AGRICOLA SUSTENTABLE

MATERIA: Biologa Molecular NOMBRE DEL ALUMNO: Meja Canizal Jos Antonio NOMBRE DEL PROFESOR: Quiroz Gilberto

MORELIA, MICHOACN. SEPTIEMBRE 2012

ndice Introduccin.3 Objetivo General.4 Objetivo Especifico4 Materiales.5, 6 Metodologa.5, 6 Resultados6, 7 Conclusiones..8

Introduccin. El Cultivo de Tejidos Vegetales o Cultivo In Vitro es una tcnica de produccin en condiciones totalmente aspticas, en la que a partir de un pequeo segmento inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles y millones de plantas genticamente iguales a la planta madre cuando a este tejido le es aplicado un estimulo por medio de variables fsicas o qumicas controladas en un medio de cultivo. El trmino genrico cultivo de tejidos vegetales involucra a diferentes tcnicas de cultivo de material vegetal diverso, incluyendo a los protoplastos (clulas desprovistas de su pared celular), clulas, tejidos, rganos y plantas completas. Mediante stas y otras tcnicas de cultivo, es posible obtener plantas libres de microbios en un medio nutritivo asptico (estril) en condiciones ambientales controladas. Tambin se lo conoce como cultivo in vitro de plantas por realizarse en recipientes de vidrio (hoy tambin de otros materiales). Las primeras experiencias relacionadas con el cultivo de tejidos vegetales se remontan a 1902, pero recin en 1922 se logr el primer experimento exitoso: la germinacin in vitro de semillas de orqudeas. Luego de la germinacin, las plntulas obtenidas se transfirieron a un medio de cultivo en condiciones aspticas, y as se mantuvieron protegidas del ataque de patgenos (hongos, virus y bacterias). Hoy esta tcnica tiene numerosas aplicaciones como son: Propagacin masiva de plantas, especialmente para especies de difcil propagacin por otros mtodos, o en vas de extincin Clonacin de individuos de caractersticas agronmicas muy deseables durante todo el ao. Obtencin de plantas libres de virus Produccin de semillas sintticas Conservacin de germoplasma (conjunto de individuos que representan la variabilidad gentica de una poblacin vegetal) Obtencin de metabolitos secundarios Produccin de nuevos hbridos Mejora gentica de plantas (incluyendo obtencin de plantas transgnicas) Germinacin de semillas. Produccin de haploides. Estudios fisiolgicos diversos.

Objetivo General. Clonacin de plntulas de limn volcameriano por la tcnica de tejido vegetal. Objetivo Especfico. Conocer la metodologa para el cultivo in vitro. Elaborar un medio de cultivo mediante soluciones madre. Evaluar las diferentes dosis de AG3. Materiales Nitrato de amonio Nitrato de potasio Nitrato de calcio Fosfato dicido potsico Sulfato de magnesio Micronutrientes Quelatos Mionositol Piridoxina Thiamina BA AG3 Sacarosa Semillas de limn volcameriano Tubos de ensayo Vasos de precipitado Plancha calentadora Bascula Autoclave Cmara de flujo laminar Mechero Bistur

Metodologa Se preparan las soluciones madre de acuerdo a las proporciones dadas de cada solucin. 1. En un vaso de precipitados, se mezclan todos los nitratos de acuerdo a la cantidad indicada. 2. Se agrega el fosfato y el sulfato. 3. Micronutrientes 4. Quelatos 5. Etc. De acuerdo al orden que se muestra debajo. 6. En un vaso de precipitados se agregan los 30g de sacarosa a 700 ml de agua destilada- se agrega reactivos y 50ml de Cistena. 7. Aforar a 1000ml. 8. Los 1000ml se separaran cada 200ml los cuales son para cinco tratamientos. 9. Uno de los 200ml se queda de testigo, a los dems se le agragan . 5, 1, 1.5, 2 de GA3. 10. Se mezclan. 11. Distribuir cada mezcla de 200ml en 20 tubos de ensaye, etiquetar y colocar papel filtro dentro, sellar y meterlos al autoclave por 15 min a 150C. Nitrato de amonio Nitrato de potasio Nitrato de calcio Fosfato dicido potsico Sulfato de magnesio Micronutrientes Quelatos Mionositol Piridoxina Thiamina BA AG3 Sacarosa 10.3 ml 9.4 ml 15ml 12.5ml 12.5ml 10ml 10ml 10ml 5ml 5ml 5ml 0.5, 1, 1.5, 2ml 30g

1. Extraer las semillas del fruto y lavar de 2 a 3 veces con agua y jabn.

2. Prepara una solucin de 100ml de alcohol de 70% y sumergir la semilla durante un minuto en agitacin. 3. Preparar una solucin de 100ml de hipocloridro de sodio al 10% y sumergir la semilla durante 10 min en agitacin, deje 1 min para llevar a la campana de flujo laminar. 4. Eliminar el cloro dentro de la campana de flujo laminar. 5. Eliminar la testa de la semilla y sembrar una por tubo dentro de la campana. 6. Tapar los tubos y pasar las semillas en obscuridad para su germinacin.

Resultados En la evaluacin del nivel de AG3 cido giberelico se evaluaron 5 tratamientos el testigo, 0.5, 1, 1.5 y 2. Tomando en cuenta diferentes criterios como: das de germinacin, % de contaminacin, % de germinacin, longitud de brotes y nmero de brotes. Obteniendo estos resultados:
Tratamie nto 1 2 3 4 5 AG % de Das de Longitud de % de Nmero de 3 germinacin germinacin brotes contaminacin brotes 0 29.4% 9.8 1.64 23.5% 0.5 17.6% 6.75 5.66 23.5% 1 10.0% 15.5 4 90.0% 1.5 0.0% 0 0 100.0% 2 10.0% 10 9 30.0%

5 3 2 0 2

Conclusin De acuerdo a los resultados en tratamiento 1, el testigo, fue el que demostr tener mayor porcentaje de germinacin, germinando en un promedio de 9.8, obteniendo la mayor cantidad de brotes este tratamiento demuestra tener los mejores resultados sin contenido de AG3. Tambin aprendimos a preparar un medio de cultivo a partir de soluciones madre.