Rappel de lpisode prcdent: Lors du cours prcdent nous avons trait des

constituants cellulaires et molculaires de la MEC, en particulier de la lame basale

(structure importante pour le maintien des cellules).
Dans ce cours, nous allons tudier les interactions de cette matrice avec le cytosquelette,
puis le remodelage et les pathologies de la MEC.
4 - Interaction de la matrice extracellulaire avec le cytosquelette
Comment la cellule va communiquer avec lenvironnement qui lentoure?
Les cellules en position 1 ont leur cytosquelette lintrieur de la cellule organis de faon
Nord-Sud. Cette orientation va affecter les protines de la MEC, et va lui donner une
orientation identique.
Cette matrice oriente va atteindre les cellules proches (2 et 3), et donner un message
pour que leur cytosquelette soient orients dans le mme sens que la MEC.
Les cellules 2 et 3 vont ensuite scrter de la MEC qui va tre oriente nouveau dans
le mme sens et ce propager de proche en proche aux cellules avoisinantes.
Cest le principe de linteraction rciproque.
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Cette interaction est importante pour le maintien de tissus.
Dans les phnomnes pathologiques comme le cancer (on aura un cours dessus), on va
avoir une dgradation de la MEC, tant donn que les cellules vont prolifrer de manire
anarchiques.
CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
1
A laide des techniques comme la uorescence, on peut mettre en vidence ces
interactions rciproques.
Ici on a pris en exemple des broblastes en culture qui vont produire des bres comme du
collagne.
On marque lactine et la bronectine (protines du cytosquelette), et nous observons que
ces protines sont orientes de la mme faon.
La prof a dit que cette diapo ntait pas trs importante, donc on ne la dtaillera pas
plus.
Cependant, la technique dimmunouorescence est connatre.
5 - Remodelage de la matrice extracellulaire
La MEC est en constante dgradation par des protases.
Cette dgradation de la matrice permet un assemblage de la MEC et un remodelage
structurel permanent en fonction de son tat de dveloppement.
Ces protases ont des fonctions cls dans la formation, la croissance et la cicatrisation
de la MEC.
Par exemple, lorsquil y a une plaie au milieu cutan, non seulement on a les cellules du
dermes ainsi que la MEC qui vont tre affects. Cela dclenche un processus de
cicatrisation pour renouveler le tissu.
Elles sont galement impliques dans des processus pathologiques comme la croissance
tumorale, arthrite, lhypertension artrielle...
AC anu-acune
couples a la uorescelne
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lrom Molecular 8lology of Lhe Cell. 4
Lh
Ldluon
CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
2
La famille de ces protases en gnral qui dgrade la matrice sont les endopeptidases
(coupe lintrieur de la protine) qui sont les principales enzymes dgradant les
protines de la MEC:
Elles sont regroupes en 3 familles:
- mtalloprotinases (en rfrence lactivit enzymatique mtallique comme le zinc)
- srine-protases
- cystine-protases

Dans la famille des mtalloprotinases, on trouve les MMPs

Les MMPs sont des endopeptidases zinc-dpendante. On en trouve au moins 25
comme:
- collagnases (MMP - 1, -8, -13)
- glatinases (MMP -2, -9)
- stromlysines (MMP -3, -10, -11)
- mtallolastase (MMP - 12)
- MMP de type membranaire (MT-MMP; MMP -14 -17)
Leur rles physiologiques:
- apoptose
- dveloppement embryonnaire
- migration cellulaire
- angiognse (formation de nouveaux vaisseaux)
- remodelage tissulaire
Leurs rles pathologiques: cancer, arthrite rhumatode, sclrose en plaques, maladie
dalzheimer... (drglement de la concentration des MMPs)
NB: Il y a aussi de la matrice dans le systme nerveux central, mais il y en a beaucoup
moins.

Elles ont de nombreuses caractristiques et sont synthtiss et scrts sous forme de

proenzymes inactives ou zymognes.
3 domaines en commun:
- domaine pro-peptide
- domaine catalytique
- domaine C-terminal haemopexin-like
Dans le domaine catalytique on a un site de xation pour le zinc (sil nest pas l, il ny a
pas dactivit enzymatique).
Pour que les MMPs soient actifs, il faut un signal extracellulaire.
Par exemple, linammation peut enclencher un certain nombre de signaux qui activent les
MMPs (inltration des cellules inammatoires facilites).
CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
3
Physiologiquement, dans le corps nous avons des inhibiteurs de MMPs quon appelle les
TIMPs (inhibiteurs tissulaires) qui sont des protases endognes.
Alors pourquoi lorganisme besoin de TIMPs? Tout simplement car dans lorganisme, il
faut quil y ait un quilibre dans lactivit de la MMPs (rgulation, empchement dune
activit excessive de ces MMPs).
On peut galement avoir recours des composs pharmacologiques pour inhiber les
MMPs (doxycycline, minocycline) notamment MMPs 2 et 9.

On va maintenant prsenter les diffrents domaines des MMPs:

Comme on peut le voir, les MMPs, ont leur 3 domaines (a galement t dit plus haut):
- le pro-domaine
- le domaine catalytique pour la xation du substrat (dans le premier cas, le substrat est le
collagne, dans le second cas, cest la glatine etc...) et pour la xation du mtal sans
lequel lenzyme ne peut pas fonctionner.
- lhmopexine (domaine qui permet lancrage au niveau de la membrane plasmique dans
le cas des MMPs membranaire)
En fonction du tissu dans lequel on se trouve, lorganisme va synthtiser les MMPs
correspondant.
Pour que ces enzymes soient actives, il faut cliver (couper) ce pro-domaine.
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CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
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Sur ce schma, on peut voir les diffrents procds dactivation et dinhibition des
MMPs.
On rappelle que pour quil y ait production de MMPs, il faut quil y ait un signal venant de
lextrieur. Le stimulus va entraner une srie de cascades lintrieur de la cellule, puis
la synthse de lARN codant pour la MMP, et enn la formation de la forme zymogne de
MMP.
A partir de l, nous allons avoir diffrentes possibilits:
Des furines qui vont cliver le pro-domaine de la MMP et la rendre active. La MMP active
va participer la dgradation de la MEC.
Scrtion dans le milieu extrieur des zymognes (protines inactives), puis cascade
dactivation et dgradation de la MEC.
Il peut y avoir des inhibiteurs (comme TIMPs) qui peuvent former un complexe avec
MMP et son activit sera ainsi inhibe (que cest triste :( )
Dans dautres circonstances, il peut y avoir association des inhibiteurs avec des pro-
MMP pour former un complexe qui va sassembler la MT-MMP (cest la forme
membranaire de la MMP) et permettre ainsi la dgradation de la MEC.
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CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
5
Voici un exemple o pro-MMP associ son inhibiteur, peut tre activ grce laction
des formes membranaires de MMP.
On observe ici MT1-MMP associ la membrane sous forme monomrique qui peut se
xer la molcule inhibitrice (ici TIMP-2).
Lassociation de ce complexe crer une dimrisation de la MT-MMP.
Le complexe MT1-MMP + TIMP-2 va se xer la forme zymogne de MMP-2 (Pro-
MMP2). Cela ne va pas empcher la forme zymogne dtre inhibe par TIMP-2 mais le
pro-domaine va pouvoir tre cliver grce laction de MT1-MMP.
Lactivation de MMP-2 permet la dgradation de la MEC.

Petit point mthode, comment mettre en vidence lactivation de MMP? Quelles

techniques peut-on utiliser?
1) Une immunohistochimie condition davoir des anticorps qui vont reconnatre la
forme active et des anticorps qui vont reconnatre la quantit totale de protine mais cela
reste qualitatif.
2) Une lectrophorse suivie dun Western Blot
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CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
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Maintenant, on souhaite une technique qui
permette de mettre en vidence lactivit
enzymatique => il sagit de la zymographie.
On fait une lectrophorse de nos protines
sur un gel de polyacrylamide qui contient le
substrat de lenzyme que lon cherche.
Lexemple choisi a t celui de la glatinase,
on sest servi comme substrat de la glatine.
On va utiliser des conditions dnaturantes
(SDS) qui va dbobiner et charger
ngativement la protine.
Ensuite, on va effectuer une lectrophorse
pour sparer nos protines.
Le schma de gauche, expliquant trs bien la
suite de la procdure, je vous laisse vous y
rfrer.

Les MMPs ne sont pas les seules enzymes participant la dgradation de la MEC. Dans
la famille des mtalloprotinases, il y a galement les ADAM (portant un domaine
dsintgrine).
En dehors des mtalloprotinases, nous avons dautres enzymes participant dans le
remodelage de la matrice comme les srines protinases, les cystines cathpsines, les
carboxy-amino-peptidase...

Celles sur lesquelles la prof souhaite attirer notre attention sont les srines
protinases. Dans ces enzymes nous allons prendre deux exemples, les tPA (activateur
tissulaire du plasminogne) et les uPA (activateur du plasminogne du type urokinase).
Quel est donc le rle de ces enzymes? Elles participent galement la dgradation de la
MEC.
A partir du plasminogne, il y a formation du plasmine sous laction de tPA et uPA.
La plasmine est une enzyme qui participe la dgradation de la MEC. Elle a un rle dans
la migration, langiognse, mais galement un rle brinolytique (dgrade la brine lors
de la formation de caillot sanguin). De plus elle va agir sur les Pro-MMP-9 et Pro-MMP-2,
et va les rendre actifs pour dgrader de la MEC.
On va avoir diffrents systmes dinhibiteurs qui participent la rgulation de la
dgradation de la matrice. Dune part, nous avons les TIMPs, mais galement la PAI-1, ce
sont des inhibiteurs enzymatiques endognes.
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CM3: MATRICE EXTRACELLULAIRE
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Lorsque lon a un caillot sanguin, comment ce systme peut permettre de le dissoudre?
Mettons nous en situation thrombolytique, nous un avons un patient avec un dcit de tPA,
qui va entraner une baisse de plasmine forme, empchant la dgradation de brine.
Nous avons donc un risque de formation de caillot sanguin. Ces caillots sanguins peuvent
boucher une artre et entraner une ischmie.
Cela peut entraner linfarctus du myocarde, lAVC ischmique ou encore une embolie
pulmonaire.
On peut utiliser comme traitement lActilyse, ce mdicament va augmenter la production
tPA et donc permettre la dissolution de caillot sanguin.
6 - Pathologies de la matrice extracellulaire
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quelques exemples
14
Maladles geneuques :
! Anomalles de synLhese ou de maLurauon de collagene :
syndromes d'Lhlers-uanlos (fraglllLe cuLanee..)
! lraglllLe anormale des bres elasuques
Syndrome de Marfan (anevrysmes de l'aorLe: dllaLauon anormale, dolgLs longs.)

Maladle congenlLale (malformauon des la nalssance) :
! Maladle des os de verre (osLeogenese lmparfalLe: fraglllLe ossesuse)

Maladles acqulses :
! ScorbuL (carence en vlL. C) : fraglllLe ussulalre (dechaussemenL des denLs)
! llbrose
13
uA : uroklnase-Lype plasmlnogen acuvaLor, LA: ussue plasmlnogen acuvaLor, Al: lasmlnogen acuvaLor lnhlblLor
LA: enzyme lnluanL la brlnolyse
Sl ! LA: rlsque de Lhrombose
Appllcauon medlcale : Aculyse (LA recomblnanL), medlcamenL Lhrombolyuque
(dans le cas d'embolle pulmonalre, lnfarcLus du myocarde, AvC lschemlque)
! #$%&'() *+,&+-)
8e dans la dlssoluuon
du callloL sanguln
8le dans la mlgrauon
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