REDUCCIN DE NITRATOS Y DENITRIFICACIN

Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo para reducir los nitratos a nitritos o gas nitrgeno libre, una caracterstica que a menudo tiene valor diferencial.

MEDIO DE CULTIVO Y REACTIVOS

Caldo Nitratado

Extracto de carne Peptona Nitrato de potasio

Agua desionizada pH 7.0

3,0 5,0 1,0 1000,0

g g g mL

Disuelva y esterilice en autoclave por 15 minutos a 121C (15 libras de presin). Reactivo de Griess

Solucin A

cido sulfanlico cido actico 5N

8,0 1000,0

g mL

Solucin B -Naftilamina 5,0 1000,0 g mL

cido actico 5N

Debido a que se ha demostrado que la -naftilamina es carcinognica, se ha recomendado su sustitucin por otras sustancias tales como el -naftol, la N,N-dimetil-1-naftilamina, cido de Cleve (cido 5 amino 2 naftilensulfnico). PROCEDIMIENTO Con el asa de platino transfiera al medio una porcin de cultivo puro. Incube a 35C por 12 a 24 horas. REVELADO Y RESULTADOS Para determinar si el nitrato ha sido reducido a nitrito, despus de la incubacin, adale al medio de cultivo, 2 gotas de solucin A, y luego 2 gotas de la solucin B del reactivo de Griess y mezcle. La aparicin de una coloracin rosada o roja indica que los nitratos han sido reducidos a nitritos.

Resultado positivo

Resultado negativo

Si la reaccin es negativa, aada una muy pequea cantidad de polvo de Zinc. La aparicin de una coloracin rosada o roja confirma la negatividad de la reaccin; en caso de que esto no suceda, significa que los nitratos han sido reducidos a N2 gaseoso, es decir se ha producido una desnitrificacin.

Resultado negativo

Resultado positivo