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Universidad Autnoma de Quertaro Facultad de Ciencias Naturales Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia

Bioqumica

Araceli Aguilera Barreyro y Jos Guadalupe Gmez Soto

2008

Bioqumica

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CONTENIDO
Pgina

1. La clula y su composicin 1.1 Elementos que forman la materia orgnica 1.2 Enlaces (covalentes, inicos, puentes de hidrgeno, etc.) y grupos funcionales que ocurren en las molculas orgnicas (alcoholes, teres, steres, aminas, carboxilos, cetonas y aldehdos) 1.3 Unidades estructurales que constituyen las biomolculas y organelos celulares (funciones) 2. El agua y sus propiedades 2.1 Importancia del agua dentro de la funcin celular 2.2 Caractersticas qumicas y fsicas del agua 2.3 Importancia de los puentes de hidrgeno dentro de la estructura de las molculas orgnicas 2.4 Disociacin del agua y molculas orgnicas (cidos y bases dbiles) y concepto de pK 2.5 Escala de pH 2.6 Aplicacin de la ecuacin de Henderson- Hasselbalch 2.7 Soluciones amortiguadoras 3. Aminocidos y protenas 3.1 Caractersticas generales de los Aminocidos 3.1.1 Clasificacin 3.1.2 Aminocidos esenciales y no esenciales 3.1.3 Isomera 3.1.4 Anfolito, disociacin y switterin 3.1.5 Enlace peptdico 3.2 Caractersticas generales de las Protenas 3.2.1 Estructura conformacional 3.2.2 Clasificacin 3.2.3 Procesos de desnaturalizacin 3.2.4 Hidrlisis parcial de las cadenas polipeptdicas 4. Catlisis y energtica de sistemas bioqumicos 4.1 Enzimas y coenzimas 4.1.1 Concepto de catalizador y enzima 4.1.2 Clasificacin de enzimas 4.1.3 Cintica enzimtica 4.1.4 Factores que influyen en la actividad enzimtica 4.1.5 Inhibicin enzimtica 4.1.6 Enzimas alostricas 4.2 Metabolismo y bioenergtica 4.2.1 Concepto de anabolismo y catabolismo 4.2.2 Trminos de auttrofo, hetertrofo, fottrofo y quimitrofo 4.2.3 Molculas almacenadoras de energa (ATP, ADP, AMP) 5. Carbohidratos. Generalidades y metabolismo 5.1 Caractersticas generales de los Carbohidratos 5.1.1 Definicin y frmula emprica 5.1.2 Clasificacin 5.1.3 Isomera estructural y de configuracin 5.1.4 Frmulas de proyeccin de Haworth y enlaces glucosdicos

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5 28 41 41 43 46 49 53 56 59 66 66 67 74 72 74 78 80 83 90 92 95 98 98 99 104 107 110 114 117 119 124 126 129 132 132 133 133 139 147
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5.1.5 Polisacridos estructurales y de reserva 5.2 Metabolismo de carbohidratos 5.2.1 Gluclisis y gluconeognesis (catabolismo y anabolismo de la glucosa) 5.2.2 Glucogenlisis y glucognesis (catabolismo y anabolismo del glucgeno) 5.2.3 Respiracin o procesos aerbicos. Ciclo de Krebs y Cadena respiratoria 5.2.3.1Ciclo de Krebs (ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos) 5.2.3.2 Cadena respiratoria. Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa 5.2.4 Procesos anaerbicos (fermentacin lctica, actica, propinica, butrica, alcohlica, etc.) 5.2.5 Ruta del fosfogluconato o de la pentosa fosfato 5.2.6 Fosforilacin a nivel de sustrato 5.2.7 Balance energtico 6. Lpidos. Generalidades y metabolismo 6.1 Caractersticas generales de los lpidos 6.1.1 Clasificacin 6.1.2 Caractersticas de los lpidos simples saponificables 6.1.2.1 Grasas (triglicridos y cidos grasos saturados e insaturados) 6.1.2.2 Ceras 6.1.3 cidos grasos esenciales 6.1.4 Constantes analticas de las grasas 6.1.5 Caractersticas de los lpidos compuestos saponificables (glucolpidos, fosfolpidos, esfingolpidos, etc.) 6.1.6 Caractersticas de los lpidos no saponificables (terpenos, esteroides, prostaglandinas) 6.2 Metabolismo de lpidos 6.2.1 -oxidacin (catabolismo) 6.2.2 Cuerpos cetnicos 6.2.3 Sntesis de cidos grasos y triglicridos 6.2.4 Sntesis del colesterol 6.2.5 Sntesis de hormonas esteroidales 6.2.6 Modelo del mosaico fluido y su importancia en los procesos de transporte 6.2.7 Integracin del metabolismo de lpidos con el de carbohidratos 7. cidos nucleicos y metabolismo nitrogenado 7.1 Metabolismo nitrogenado (aminocidos y protenas) 7.1.1 Aminocidos gluconeognicos y cetognicos. Procesos de transaminacin y desaminacin 7.1.2 Catabolismo de los aminocidos 7.1.3 Ciclo de la urea 7.1.4 Sntesis de aminocidos 7.1.5 Integracin del metabolismo de aminocidos con el de carbohidratos y lpidos 7.2 cidos nucleicos 7.21 Bases nitrogenadas 7.2.2 Estructura y funcin de los cidos nucleicos 7.2.3 Rplica de DNA 7.2.4 Tipos y sntesis de RNA 7.2.5 Cdigo Gentico y Sntesis de Protenas 7.2.6 Integracin con el metabolismo de carbohidratos, lpidos y nitrogenado 8. Bibliografa

149 153 154 168 175 175 184 187 201 204 206 208 208 210 211 214 218 219 220 221 224 229 231 237 239 244 247 250 252
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1. La clula y su composicin
1.1. Elementos que forman la materia orgnica
El nombre engaoso orgnico es una reliquia de los tiempos en que los compuestos qumicos se dividan en dos clases: orgnicos e inorgnicos, segn su procedencia. Los compuestos inorgnicos eran aquellos que procedan de los minerales, y los orgnicos, los que se obtenan de fuentes vegetales y animales, o sea, de materiales producidos por organismos vivos. De hecho, hasta aproximadamente 1850 muchos qumicos crean que los compuestos orgnicos deban tener su origen en organismos vivos nicamente y, en consecuencia, jams podran ser sintetizados a partir de sustancias inorgnicas. Los compuestos de fuentes orgnicas tenan en comn contener el elemento carbono, y aunque se pueden elaborar en el laboratorio compuestos con este elemento qumico, result conveniente mantener el nombre de orgnico (Morrison y Boyd, 1998). Las plantas y animales bioqumicamente estn conformados de dos grandes fracciones: agua y materia seca. Debido a que las plantas y animales son la fuente de alimento observemos la Figura 1.1. Figura 1.1. Principales componentes de los alimentos de origen vegetal y animal

Fuente: McDonald et al. (2002) La materia seca a su vez se divide en dos grandes bloques: la materia orgnica y la materia inorgnica. La materia orgnica est conformada por los carbohidratos, los lpidos, las protenas, los cidos nucleicos y las vitaminas, mientras que la materia inorgnica se conforma por las cenizas o los minerales (Salinas et al., 1997). Todos los organismos estn formados principalmente por molculas orgnicas (con carbono) que tienen formas tridimensionales complicadas (McKee y McKee, 2003). Las principales clases de sustancias orgnicas (protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y lpidos) se conocen en general como biomolculas, que en general se encuentran formadas por slo 6 elementos, todos de naturaleza no metlica, que son: oxgeno, carbono, hidrgeno, nitrgeno, fsforo y azufre (Bohinski, 1998). Curtis y Barnes (2004) mencionan que estos 6 elementos constituyen aproximadamente el 99% de todos los tejidos vivos (Cuadro 1.1). Algunos minerales encontrados en el organismo animal son calcio, fsforo, sodio, cloro, magnesio, azufre, cobalto, cobre, yodo en vertebrados, manganeso, molibdeno, potasio, zinc, etc. A excepcin del calcio, los dems minerales se encuentran en concentraciones menores al 1 %, y son esenciales para
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vivir, ya que por ejemplo: el calcio, fsforo y magnesio se asocian con los huesos, el hierro con la hemoglobina, etc. (Salinas et al., 1997; Bohinski, 1998). El contenido de agua de los animales vara con la edad, a medida que envejecen es menor (McDonald et al., 2002). Por ejemplo: en el caso de los bovinos, el contenido total de agua del embrin es 95%, al nacer 80%, a los 5 meses de edad 72% y el bovino adulto est constituido de 65 % de agua aproximadamente (Salinas et al., 1997). Cuadro 1.1. Elementos que se encuentran en los organismos

Elementos
Primer nivel (Los ms abundantes en todos los organismos) Segundo nivel (Mucho menos abundantes pero se encuentran en todos los organismos) Tercer nivel (Metales presentes en pequeas cantidades en todos los organismos, pero son esenciales para la vida) Cobalto (Co) Cobre (Cu) Hierro (Fe) Manganeso (Mn) Zinc (Zn) Cuarto nivel (Se encuentran o son necesarios en algunos organismos en cantidades mnimas)

Carbono (C) Hidrgeno (H) Nitrgeno (N) Oxgeno (O)

Calcio (Ca) Cloro (Cl) Magnesio (Mg) Fsforo (P) Sodio (Na) Azufre (S)

Aluminio (Al) Arsnico (As) Boro (B) Bromo (Br) Cromo (Cr) Flor (F) Galio (Ga) Yodo (I) Molibdeno (Mo) Nquel (Ni) Selenio (Se) Fuente: Mathews y Van Holde (1998)

1.2. Enlaces (covalentes, inicos, puentes de hidrgeno, etc.) y grupos funcionales que ocurren en las molculas orgnicas (alcoholes, teres, steres, aminas, carboxilos, cetonas y aldehdos)
McMurry (2001) describe que hay varios tipos de enlaces, desde covalentes hasta inicos, como resultado de la distribucin asimtrica de los electrones. El smbolo quiere decir carga parcial, sea positiva (+) para el tomo pobre en electrones (donador), o parcial negativa (-) para el tomo rico en electrones (aceptor) (Figura 1.2). La polaridad del enlace se debe a diferencias de electronegatividad, que es la capacidad intrnseca de un tomo para atraer los electrones compartidos en un enlace covalente (McMurry, 2001). Dos tomos unidos por enlace covalente comparten electrones, y sus ncleos son mantenidos en la misma nube electrnica, pero los ncleos no comparten los electrones por igual sino que generalmente la nube es ms densa en torno a un tomo que en torno al otro, por ende, un extremo del enlace es relativamente negativo, y el otro, relativamente positivo, se forma un polo negativo y un polo positivo, as, se dice que ste es un enlace polar o que tiene polaridad (Figura 1.3). Cuanto mayor sea la diferencia de electronegatividad, ms polar ser el enlace (Morrison y Boyd, 1998).
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Figura 1.2. Tipos de enlaces

Fuente: McMurry (2001) Figura 1.3. Enlaces polares

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Por regla general, los enlaces entre los tomos con electronegatividades parecidas son covalentes no polares; los enlaces entre tomos cuyas electronegatividades difieren entre 0.3 y 2.0 unidades son covalentes polares, y entre los tomos cuyas electronegatividades difieren ms de 2.0 unidades, son ms bien inicos (McMurry, 2001). Una molcula es polar cuando el centro de la carga negativa no coincide con el de la positiva y tal molcula constituye un dipolo: dos cargas iguales y opuestas separadas en el espacio. La molcula tiene un momento dipolar , que es igual a la magnitud de la carga, e, multiplicada por la distancia, d, entre los centros de las cargas. Molculas como H2, O2, N2, Cl2 y Br2 tienen momentos dipolares nulos, o sea, no son polares. Los dos tomos idnticos de cada una de estas molculas tienen la misma electronegatividad y comparten electrones por igual, e es cero, por tal En 1916 se describieron dos clases de enlaces qumicos: el enlace inico, por Walther Kossel (Alemania), y enlace covalente, por Lewis (USA) y ambos basaron sus ideas debido al concepto del tomo que describe que un ncleo cargado positivamente est rodeado de electrones ordenados en capas o niveles energticos concntricos. Hay un mximo de electrones que se pueden acomodar en cada capa, alcanzando la estabilidad mxima cuando se completa la capa externa como en los gases nobles, as, tanto los enlaces inicos como los covalentes surgen de la tendencia de los tomos a alcanzar esta configuracin electrnica estable (Morrison y Boyd, 1998). Por lo general la electronegatividad aumenta de izquierda a derecha en la tabla peridica, y disminuye de arriba abajo, como se indica en las alturas de las columnas en la siguiente tabla peridica (Figura 1.4). Los valores corresponden a una escala arbitraria, en que F=4.0 y Cs=0.7. El valor de electronegatividad del carbono es 2.5. El tono amarillo es proporcional a la electronegatividad de los elementos (McMurry, 2001).

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Figura 1.4. Valores y tendencias de electronegatividad

Fuente: McMurry (2001) A) Enlaces covalentes: Los enlaces covalentes son enlaces que se forman cuando dos tomos comparten uno o ms pares de electrones. Por lo regular se da entre no metales pero tambin se llega a dar entre metales y no metales. Por ejemplo al formar una molcula de hidrgeno tenemos que cada tomo de hidrgeno tiene un solo electrn, al compartir un par de electrones, ambos hidrgenos pueden completar sus capas de dos. Dos tomos de flor, por mencionar otro ejemplo, cada uno con siete electrones en la capa de valencia, pueden completar sus octetos si comparten un par de electrones, en estos casos la fuerza de unin es la atraccin electrosttica, esta vez entre cada electrn y ambos ncleos (Figura 1.5). Figura 1.5. Ejemplos de enlaces covalentes

Fuente: Morrison y Boyd (1998) La fuerza del enlace covalente est dada por el aumento de atraccin electrosttica. En los tomos aislados, cada electrn es atrado por, y atrae a, un ncleo positivo; en la molcula, cada electrn es atrado por dos ncleos positivos (Morrison y Boyd, 1998). El enlace covalente es tpico de los compuestos del carbono (Figura 1.6).

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Figura 1.6. Otros ejemplos de enlaces covalentes

Fuente: Mathews y Van Holde (1998) Los enlaces covalentes pueden ser de tipo: Apolar: este tipo de enlace se establece cuando la diferencia de electronegatividad entre los tomos que forman el enlace es menor de 0.5 (Figura 1.7): Figura 1.7. Ejemplos de enlaces covalentes

Polar: enlace formado cuando la diferencia de electronegatividad entre los tomos es mayor de 0.5 y no superior de 1.5 (Figura 1.8): Figura 1.8. Ejemplos de enlaces polares

Coordinado: dicho enlace se presenta en elementos que tienen un par electrnico el cul pueden ceder al otro elemento (Figura 1.9). Este tipo de enlaces forma macromolculas:

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Figura 1.9. Ejemplos de enlace coordinado

B) Enlaces inicos: Comprenden la transferencia de electrones de un tomo a otro, o bien, la atraccin electrosttica entre iones de carga opuesta (Figura 1.10). Las fuerzas electrostticas empiezan a operar entre los tomos, o los grupos de tomos con carga elctrica opuesta; por ejemplo, entre un catin y un anin (como Na + y Cl), o entre un carboxilo y un grupo amino (COO y NH3+), lo cual es tpico en las sales formadas por combinacin de elementos metlicos (electropositivos) con los no metlicos (electronegativos): Na+ ClNa+ OHOtro ejemplo sucede en la formacin de cloruro de litio donde un tomo de litio tiene dos electrones en su capa interna y uno en su capa externa o de valencia; la prdida de un electrn dejara al litio con una capa externa completa de dos electrones. Un tomo de flor tiene dos electrones en su capa interna y siete en su capa de valencia, la ganancia de un electrn dara al flor una capa externa completa con ocho electrones. As, el fluoruro de litio se forma por la transferencia de un electrn del litio al flor; el litio tiene ahora una carga positiva y el flor negativa. La atraccin de electrosttica entre iones de carga opuesta se denomina enlace inico (Figura 1.11) (Morrison y Boyd, 1998). Figura 1.10. Enlace inico

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Figura 1.11. Otros ejemplos de enlace inico

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Se observa que la diferencia de electronegatividad entre los tomos que forman el enlace es mayor a 1.5. Existen otras fuerzas denominadas fuerzas intermoleculares que son el puente de hidrgeno, la interaccin dipolo-dipolo, y fuerzas de Van der Waals (Meislich et al., 2000). C) Puente de Hidrgeno: Los puentes de hidrgeno no son exclusivos de las molculas de agua y para que existan se necesitan dipolos permanentes. Es preferible que uno de los dipolos contenga un tomo de hidrgeno con carga parcial positiva y el otro dipolo tenga un tomo de oxgeno o nitrgeno con carga parcial negativa. Los puentes de hidrgeno intermoleculares se forman entre dipolos presentes en molculas distintas, mientras los puentes de hidrgeno intramoleculares lo hacen entre dipolos que estn en la misma molcula Se forma cuando dos tomos comparten un ncleo atmico de hidrgeno (protn). Es una interaccin entre un tomo de hidrgeno enlazado covalentemente en un grupo donador (como O-H =N-H) y un par de electrones libres perteneciente a un grupo aceptor (como O=C- N=). El puente de hidrgeno no se considera como un enlace verdadero, sin embargo, tienen una funcin estructural muy importante. Un ejemplo de tantos es la formacin de puentes de hidrgeno para la conformacin de las protenas secundarias de tipo hlice alfa; as como la intervencin de estos puentes en la estructura de ADN (Figura 1.12 y 1.13) (Bohinski, 1998). Figura. 1.12. Puentes de hidrgeno en las biomolculas

Fuente: Bohinski (1998) Figura 1.13. Puentes de hidrgeno representativos de importancia en sistemas biolgicos

Fuente: Devlin (1999)


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Generalmente en las frmulas los enlaces por puentes de hidrgeno se indican por una lnea punteada como se indica en la Figura 1.14 (Morrison y Boyd, 1998). Figura 1.14. Lnea punteada que representa los enlaces por puentes de hidrgeno

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Los enlaces covalentes entre el hidrgeno y el oxgeno, el nitrgeno o el azufre son suficientemente polares, de forma que el ncleo de hidrgeno es atrado dbilmente hacia el par de electrones solitario de un oxgeno, nitrgeno o azufre de una molcula vecina. En la molcula de agua, cada par de electrones sin compartir del oxgeno puede formar un enlace de hidrgeno con molculas de agua cercanas (McKee y McKee, 2003). En los enlaces de hidrgeno entre las molculas del agua cada molcula puede formar enlaces de hidrgeno con otras cuatro molculas de agua (Figura 1.15) (McKee y McKee, 2003). Figura 1.15. Molculas de agua unidas mediante enlaces de hidrgeno

Fuente: McKee y McKee (2003) y Mathews et al. (2005) Los enlaces de hidrgeno entre molculas de agua en el hielo producen una estructura muy abierta (Figura 1.16). El hielo es menos denso que el agua en su estado lquido (Basurto y Fuentes, 1983). En cuanto a las energas de enlace covalente y no covalente se observa que las energas tpicas de los enlaces no covalentes son de un orden de magnitud ms dbiles que las energas de los enlaces covalentes (Figura 1.17) (Mathews et al., 2005).

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Figura 1.16. Enlaces de hidrgeno en el hielo de agua

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 1.17. Energas de los enlaces covalentes y no covalentes

Fuente: Mathews et al. (2005) D) Fuerzas de Van der Waals: Tambin llamadas Fuerzas de London, se forman como resultado de las fuerzas de atraccin producidas cuando dos tomos o grupos de tomos se acercan entre s. Las fuerzas de unin son suficientemente bajas a las temperaturas celulares, de forma que los enlaces se producen nicamente cuando varios tomos de una molcula interactan con varios tomos de otra molcula cercana.
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Estos enlaces son relativamente inespecficos y pueden formarse entre muchas clases de molculas: - Formacin de estructuras secundarias tridimensionales en las protenas - Formacin de polos en la molcula de agua, otorgando cargas parcialmente positivas y negativas - Formacin de estructuras cuaternarias en las protenas. Los electrones de una molcula no polar pueden causar un desequilibrio momentneo en la distribucin de la carga en molculas vecinas, induciendo de ese modo un momento dipolar temporal (Figura 1.18). Aunque cambian constantemente, estos dipolos inducidos llevan a una fuerza de atraccin neta dbil. Cuanto mayor es el peso molecular de la molcula, tanto mayor es el nmero de electrones y mayores son estas fuerzas (Meislich et al., 2000). Figura 1.18. Fuerzas de Van der Waals

Fuente: Bohinski (1998) E) Enlace hidrofbico: Aunque no es considerado como un enlace qumico verdadero, sino una tendencia reconocida de agrupamientos no polares para asociarse y excluir el agua que pueda estar presente (Figura 1.19). Algunas propiedades del enlace hidrofbico son: - otorga la caracterstica hidrofbica a los cidos grasos - es encargado de formar micelas y pelculas de cidos grasos en agua - otorga la cualidad hidrofbica de la membrana celular en su parte extacelular. Aunque individualmente los enlaces hidrofbicos son dbiles, muchos de stos producen una estructura estable (Roskoski, 2001). En la imagen se muestran las interacciones hidrofbicas entre dos grupos aromticos. Figura 1.19. Enlace hidrofbico

Fuente: Roskoski (2001)


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F) Interaccin dipolo-dipolo: Resulta de la atraccin del extremo + de una molcula polar hacia el extremo - de otra molcula polar (Figura 1.20) (Meislich et al., 2000). McKee y McKee (2003) describe que las interacciones dipolodipolo son un tipo de Fuerzas de van der Waals, mientras que Meislich et al. (2000) las describe como fuerzas intermoleculares diferentes. Morrison y Boyd (1998) describe que el enlace puente de hidrgeno es un tipo de interaccin dipolo-dipolo. Figura 1.20. Interacciones dipolo-dipolo

Fuente: McKee y McKee (2003)

Grupos funcionales
La mayora de las biomolculas pueden considerarse derivadas del tipo ms simple de molculas orgnicas, que son los hidrocarburos que son molculas que contienen carbono e hidrgeno y que son hidrfobas, o sea, insolubles en agua (McKee y McKee, 2003). En los hidrocarburos, el hidrgeno se puede reemplazar por otros tomos o grupos de tomos, dichos reemplazos se denominan grupos funcionales y son los sitios reactivos en las molculas (Meislich et al., 2000). As, un grupo funcional es un conjunto de tomos en una molcula que tienen un comportamiento qumico caracterstico (Cuadro 1.2) (McMurry, 2001). 1.- Alcoholes (R-OH): Se clasifican en primarios, secundarios o terciarios dependiendo del nmero de grupos orgnicos unidos al carbono que lleva el hidroxilo (Figura 1.21) (McMurry, 2001). El grupo puede ser de cadena abierta o cclico, puede contener un doble enlace, un tomo de halgeno, un anillo aromtico o grupos hidroxilo adicionales (Figura 1.22) (Morrison y Boyd, 1998). Todos los alcoholes contienen un grupo hidroxilo (-OH), el cual, al ser su grupo funcional determina las propiedades de esta familia. Las variaciones en la estructura del grupo R puede afectar la velocidad de ciertas reacciones del alcohol y afectar al tipo de reaccin. Cabe aclarar que los compuestos con un grupo hidroxilo directamente unido a un anillo aromtico no son alcoholes, sino fenoles. Los alcoholes de distintas clases suelen diferir en la velocidad o en el mecanismo de la reaccin de forma congruente con la estructura (Morrison y Boyd, 1998). Los alcoholes son muy polares y permiten la formacin de puentes de hidrogeno (McMurry, 2001) debido a que el grupo OH es muy polar y dichos enlaces los realiza con molculas compaeras, con otras molculas neutras y con aniones (Figura 1.23) (Morrison y Boyd, 1998). Entre los hidrocarburos, los factores que determinan los puntos de ebullicin suelen ser principalmente el peso molecular y la forma. Los alcoholes muestran un aumento del punto de ebullicin y una disminucin de la polaridad al aumentar el nmero de tomos de carbono (es decir, al aumentar la cadena R) y una disminucin del mismo con la ramificacin, pero lo notable es el punto de ebullicin tan elevado de los alcoholes que son mucho ms altos que los hidrocarburos del mismo peso molecular, e incluso, ms altos que los de muchos otros compuestos de polaridad considerable. Lo anterior debido
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a que los alcoholes, al igual que el agua, son lquidos asociados (lquidos cuyas molculas se mantienen unidas por puentes de hidrgeno, la ruptura de estos puentes requiere una energa considerable, por lo que los lquidos asociados tienen un punto de ebullicin elevado) (Morrison y Boyd, 1998; McMurry, 2001). Cuadro 1.2. Grupos funcionales importantes de las biomolculas Nombre de la familia Alcohol Estructura del grupo Nombre del grupo Hidroxilo Significado Polar (por ende hidrosoluble), forma enlaces de hidrgeno Polar, se encuentra en algunos azcares

Aldehdo

Carbonil

Cetona

Carbonilo

Polar, se encuentra en algunos azcares

cidos Aminas Amidas Tioles steres Doble enlace

Carbonilo Amino Amido Tiol ster Alqueno

Dbilmente cido, lleva una carga negativa cuando dona un protn Dbilmente bsico, lleva una carga positiva cuando acepta un protn Polar, pero no lleva carga Fcilmente oxidable; puede formar fcilmente enlaces -S-S- (disulfuro) Se encuentran en determinadas molculas lipdicas Componente estructural importante de muchas biomolculas como los lpidos Fuente: McKee y McKee (2003)

Figura 1.21. Clasificacin de alcoholes

Fuente: Morrison y Boyd (1998)


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Figura 1.22. Ejemplos de alcoholes

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Figura 1.23. Puentes de hidrgeno formados por alcoholes

Fuente: McMurry (2001) La posicin central de los alcoholes en qumica orgnica se muestra en la Figura 1.24 se ilustra cmo a partir de numerosas clases de compuestos se puede preparar alcohol y cmo ste se convierte en otras tantas. Los azcares o carbohidratos son una clase amplia de aldehdos y cetonas polihidroxiladas. Por ejemplo, la glucosa (Figura 1.25), denominada igualmente dextrosa es un pentahidroxihexanal (McMurry, 2001). Figura 1.24. Posicin central de los alcoholes en qumica orgnica. Se pueden preparar a partir de numerosas clases de compuestos y convertirse en otras tantas

Fuente: McMurry (2001)


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Figura 1.25. Frmula de la glucosa

Fuente: McKee y McKee (2003) 2.- teres (R - O - R): el ter es una sustancia que tiene dos grupos orgnicos enlazados al mismo tomo de oxgeno, R-O-R (Figura 1.26) (McMurry, 2001). Los teres son ligeramente polares. La ausencia del grupo OH en los teres excluye el puente de hidrgeno, por lo que no hay ninguna fuerza de atraccin intermolecular fuerte entre las molculas del ter como s la hay entre las molculas del alcohol. La dbil polaridad de los teres no tiene ningn efecto apreciable. El oxgeno de los teres puede experimentar puente de hidrgeno con el hidrgeno del agua (Figura 1.27) (Meislich et al., 2000). Figura 1.26. Ejemplos de teres

Fuente: McMurry (2001) Figura 1.27. Puente de hidrgeno entre el ter y el agua

Fuente: Meislich et al. (2000)


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Existen teres cclicos en las molculas de los carbohidratos (Figura 1.28). Los monosacridos se comportan como alcoholes simples en mucha de su qumica. Por ejemplo, los grupos OH de los carbohidratos se pueden convertir en steres y teres, los cuales con frecuencia son ms fciles de trabajar que los azcares libres. Por ejemplo, la -D-glucopiranosa (McMurry, 2001). Figura 1.28. teres cclicos en carbohidratos

Fuente: McKee y McKee (2003) Los teres tienen la capacidad de disolver compuestos no polares y son buenos solventes, por tal, para disolver los compuestos orgnicos (Meislich et al., 2000). Cuando un alcohol (R-OH) reacciona con otro (R-OH), el producto es un ter (R-O-R), los azcares pueden reaccionar de esta manera, y es el sitio anomrico Ca-OH el que tiene un mayor grado de reactividad. Cuando la reaccin se limita al carbono anomrico (Ca), la estructura resultante es un acetal completo llamado glicsido. El enlace recin formado Ca-OR se denomina enlace glucosdico (Figura 1.29). El enlace glucosdico tiene enorme importancia biolgica porque representa, en la mayora de los casos, el enlace covalente entre monosacridos sucesivos en los oligosacridos y polisacridos. Los diferentes enlaces glucosdicos se forman como resultado de distintas combinaciones de los carbonos y de un azcar y los diversos grupos OH del otro azcar. Cada oligosacrido o polisacrido particular contiene un patrn especfico de enlaces glucosdicos entre sus residuos monomricos. Figura 1.29. Enlaces glicosdicos entre molculas de -D-glucosa

Fuente: Bohinski (1998) 3.- cidos carboxlicos: de los compuestos orgnicos que presentan acidez apreciable, los cidos carboxlicos son los ms importantes. Dichas sustancias contienen el grupo carboxilo unido a un hidrgeno (HCOOH), a un grupo alquilo (RCOOH) o a un arilo (ArCOOH) tal como lo mencionan Morrison y Boyd (1998) (Figura 1.30 y 1.31). Sus estructuras hacen suponer que los cidos carboxlicos son molculas polares, y al igual que los alcoholes pueden formar puentes de hidrgeno entre s y con otros tipos de molculas. Por lo anterior, los cidos carboxlicos se comportan de forma similar a los alcoholes en cuanto a sus solubilidades: los
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de bajo peso molecular o cadena corta son miscibles en agua, el cido de cinco carbonos es parcialmente soluble y los superiores o de alto peso molecular y cadena larga son virtualmente insolubles. La solubilidad en agua se debe a los puentes de hidrgeno entre el cido carboxlico y el agua. El cido aromtico ms simple, el benzoico, contiene demasiados tomos de carbono como para tener una solubilidad apreciable en agua. Los cidos carboxlicos son solubles en disolventes orgnicos menos polares como ter, alcohol, benceno, etc. (Morrison y Boyd (1998). Los carboxilos se encuentran presentes en los cidos grasos que son cidos carboxlicos alifticos de cadena larga (Cuadro 1.3). Figura 1.30. Grupo carboxilo

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Figura 1.31. Ejemplos de cidos carboxlicos dentro de los cidos grasos

Fuente: McKee y McKee (2003) Cuadro 1.3. Ejemplos de cidos carboxlicos Frmula P.f., C

Nombre Frmico Actico Propinico Butrico Valrico Caproico Caprlico Cprico Lurico Mirstico Palmtico Esterico Oleico Linoleico Linilnico

HCOOH 8 CH3COOH 16.6 CH3 (CH2)2COOH -22 CH3 (CH2)2COOH -6 CH3 (CH2)3COOH -34 CH3 (CH2)4COOH -3 CH3 (CH2)6COOH 16 CH3 (CH2)8COOH 31 CH3 (CH2)10COOH 44 CH3 (CH2)12COOH 54 CH3 (CH2)14COOH 63 CH3 (CH2)16COOH 70 Cis-9-Octadecanoico 16 Cis, Cis-9,12-Octadecanoico -5 Cis, Cis-9,12,15-Octadecanoico -11 P.f. = Punto de fusin; = alta solubilidad; i = insoluble Fuente: Morrison y Boyd (1998)

Solubilidad, g/100g de agua 3.7 1.0 0.7 0.2 i i i i i i i

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De forma general, los cidos carboxlicos hierven a temperaturas ms elevadas que los alcoholes de peso molecular comparable (por ejemplo: cido propinico a 141 C contra el alcohol n-butlico que hierve a 118 C). Estos puntos de ebullicin tan elevados se deben a que un par de molculas del cido carboxlico se mantienen unidas no por un puente de hidrgeno, sino por dos (Figura 1.32), segn Morrison y Boyd (1998). Figura 1.32. Puentes de hidrgeno en los cidos carboxlicos

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Los olores de los cidos alifticos inferiores progresan desde los fuertes e irritantes del frmico y actico, hasta los abiertamente desagradables del butrico, valerinico y caproico. Los cidos superiores o de cadena larga tienen muy poco olor debido a sus bajas volatilidades. Aunque mucho ms dbiles que los cidos minerales fuertes (sulfrico, clorhdrico, ntrico), los cidos carboxlicos son sustancialmente ms cidos que los grupos orgnicos ms dbiles como los alcoholes, son mucho ms cidos que el agua, por lo que los hidrxidos acuosos los convierten en sus sales con facilidad, y los cidos minerales acuosos reconvierten las sales en los cidos carboxlicos correspondientes (Morrison y Boyd, 1998):

Al igual que todas las sales, las de los cidos carboxlicos son slidos cristalinos no voltiles, constituidas por iones positivos y negativos, y sus propiedades corresponden a dichas estructuras. Las sales de los metales alcalinos de los cidos carboxlicos (sodio, potasio, amonio) son solubles en agua, pero no en disolventes no polares; la mayora de las sales de metales pesados (hierro, plata, cobre) son insolubles en agua. En el caso de cidos de cuatro carbonos o menos, son solubles en agua y en disolventes orgnicos, pero los dems cidos carboxlicos y sus sales de metales alcalinos exhiben un comportamiento de solubilidad exactamente opuesto (Figura 1.33). Figura 1.33. Solubilidad en agua de los cidos carboxlicos

Fuente: Morrison y Boyd (1998)

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Si el sustituyente es un segundo grupo carboxlico, se obtiene un cido dicarboxlico, y si son tres, se obtiene un cido tricarboxlico, cidos presentes en el ciclo de Krebs (Figura 1.34). Figura 1.34. Ejemplo de cido tricarboxlico

Fuente: Morrison y Boyd (1998) De igual manera, los carboxilos se encuentran presentes en los -aminocidos (Figura 1.35) que se forman por un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH) unidos al mismo tomo de carbono, Figura 1.35. Estructura general de un aminocido

Fuente: Bohinski (1998) 4.- Aldehdos y cetonas: Los aldehdos son sustancias con frmula general RCHO; mientras que las cetonas son compuestos de frmula general RCOR (Figura 1.36). Los grupos R y R pueden ser alifticos o aromticos (en el aldehdo, HCHO, R es hidrgeno). Figura 1.36. Aldehdos y cetonas

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Los aldehdos y las cetonas contienen el grupo carbonilo, C=O, y a menudo se denominan colectivamente compuestos carbonlicos. El grupo carbonilo es el que determina en gran medida la qumica de aldehdos y cetonas. Los aldehdos y cetonas se asemejan en la mayora de sus propiedades,
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sin embargo, el grupo carbonlico de los aldehdos contiene, adems, un hidrgeno, mientras el de cetonas tiene dos grupos orgnicos (Figura 1.37 y 1.38). Lo anterior afecta sus propiedades en dos formas: los aldehdos se oxidan con facilidad, las cetonas slo lo hacen con dificultad y los aldehdos suelen ser ms reactivos que las cetonas en reacciones nucleoflicas (caractersticas de los compuestos carbonlicos). Figura 1.37. Ejemplos de aldehdos

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Figura 1.38. Ejemplos de Cetonas

Fuente: Morrison y Boyd (1998) El grupo carbonlico polarizado convierte a aldehdos y cetonas en sustancias polares, por lo que tienen puntos de ebullicin ms elevados que los compuestos no polares de peso molecular comparable. Por s mismas, no son capaces de unirse intermolecularmente por puentes de hidrgeno ya que slo poseen hidrgeno unido a carbono, por lo anterior, sus puntos de ebullicin son inferiores a los de alcoholes y cidos carboxlicos comparables. Los aldehdos y cetonas inferiores son solubles en agua, tal vez por los posibles puentes de hidrgeno que pueden establecerse entre las molculas de disolvente y las de soluto. La solubilidad lmite se alcanza alrededor de unos cinco carbonos. Los aldehdos y cetonas son solubles en disolventes orgnicos usuales, algunas de sus caractersticas son: Los carbohidratos son polihidroxialdehdos, polihidroxicetonas o compuestos que, por hidrlisis, se convierten en stos. Un carbohidrato que no es hidrolizable a compuestos ms simples se denomina monosacrido que se puede clasificar an ms: si contiene un grupo aldehdo, es una aldosa (Figura 1.39); si contiene una funcin cetona, es una cetosa (Figura 1.40). Una aldohexosa, por ejemplo, es un monosacrido de seis carbonos con una funcin aldehdo, mientras que una cetopentosa es un monosacrido de cinco carbonosa con un grupo cetnico. La mayora de los monosacridos naturales son pentosas o hexosas (Morrison y Boyd, 1998).
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Figura 1.39. Ejemplos de aldosas

Fuente: Hicks (2003) Figura 1.40. Ejemplos de cetosas

Fuente: Hicks (2003) 5.- steres: La presencia del grupo C=O (Figura 1.41) confiere polaridad a los derivados de cidos. Los steres tienen puntos de ebullicin casi iguales que los aldehdos y cetonas de peso molecular comparable. La solubilidad lmite en agua es de tres a cinco carbonos. Son solubles en disolventes orgnicos usuales (Morrison y Boyd, 1998). Figura 1.41. Frmula general de los steres

Fuente: McMurry (2001) Los steres ms voltiles tienen olores agradables y muy caractersticos, por lo que se suelen emplear en la preparacin de perfumes y condimentos artificiales (Morrison y Boyd, 1998). Por ende los steres de bajo peso molecular son lquidos de olor agradable y sus olores son de frutos y flores (McMurry, 2001).

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Desde el punto de vista qumico, las grasas son steres carboxlicos derivados de un solo alcohol, el glicerol y se conocen como glicridos, ms especficamente, se trata de triacilgliceroles o triglicridos (Figura 1.42) (Morrison y Boyd, 1998). Figura 1.42. Frmula general de un triacilglicerol (triglicrido)

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Los triacilgliceroles poseen tres cidos grasos esterificados, uno en cada oxhidrilo del glicerol. Cuando el OH-3 se esterifica con el cido fosfrico, se forman glicerofosforilgliceroles (Figura 1.43), con varios sustituyentes en el fosfato establecido. Los lpidos que poseen un sustituyente en el fosfato como colina, serina o inositol son estructurales (Hicks, 2003). Figura 1.43. Frmula general del fosfoglicrido

Fuente: Morrison y Boyd (1998) 6.- Aminas: Las aminas son derivados orgnicos del amoniaco, NH3 (McMurry, 2001). De las sustancias orgnicas que muestran basicidad apreciable (azulean al tornasol), las ms importantes son las aminas. Una amina tiene frmula general RNH2, R2NH R3N, donde R es un grupo alquilo o arilo (Figura 1.44). Las aminas se clasifican en primarias, secundarias o terciarias, segn el nmero de grupos que se unen al nitrgeno (Figura 1.45).

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Figura 1.44. Ejemplos de aminas

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Figura 1.45. Clasificacin de aminas

Fuente: Morrison y Boyd (1998) En relacin con sus propiedades fundamentales (basicidad y nucleofilicidad que la acompaan), las aminas de tipos diferentes son prcticamente iguales. En muchas de sus reacciones, los productos finales dependen del nmero de tomos de hidrgeno unidos al de nitrgeno, por esa razn son diferentes para aminas de distintos tipos. Las aminas son compuestos polares y pueden formar puentes de hidrgeno intermoleculares (Figura 1.46). Las aminas tienen puntos de ebullicin ms altos que los compuestos no polares de igual peso molecular, pero inferiores a los de los alcoholes o cidos carboxlicos. Figura 1.46. Puentes de hidrgeno intermoleculares formados por aminas

Fuente: Morrison y Boyd (1998)


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Las aminas pueden formar enlaces de hidrgeno con el agua. Las aminas de bajo peso molecular son bastantes solubles en agua y tienen solubilidad lmite al tomar unos seis tomos de carbono. Son solubles en disolventes menos polares, como ter, alcohol, benceno, etc. Las metil y etilaminas huelen muy semejante al amoniaco. Las aminas aromticas suelen ser muy txicas, ya que son absorbidas por la piel, con resultados a menudo fatales. Las aminas alifticas son tan bsicas como el amoniaco, pero las aromticas son considerablemente menos bsicas. Las aminas son ms bsicas incluso que el agua. Por ello, los cidos minerales acuosos y los carboxlicos las convierten en sus sales con facilidad y el in hidrxido acuoso las reconvierte con igual facilidad, en aminas libres (Figura 1.47). Figura 1.47. Interconversin de aminas y su hidrosolubilidad

Fuente: Morrison y Boyd (1998) Las aminas se encuentran en macromolculas como los aminocidos (Figura 1.48), en algunas vitaminas (Figura 1.49), bases nitrogenadas y cidos nucleicos (Figura 1.50) (Morrison y Boyd, 1998). Los -aminocidos cuentan con un carbono denominado alfa con cuatro enlaces covalentes unidos a los grupos amino (NH2), carboxilo (COOH), hidrgeno (H) y a una estructura variable (Figura 1.48) (Hicks, 2003). Figura 1.48. Estructura general de los -aminocidos

Fuente: Morrison y Boyd (1998)

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Figura 1.49. Estructura de la vitamina cido flico

Fuente: Church (2004) Figura 1.50. Estructura de las bases nitrogenadas de los cidos nucleicos

Fuente: Bohinski (1998) En el ADN se encuentran las bases adenina, guanina que contienen el sistema anular purnico y citosina y timina que contienen el anillo de la pirimidina. El ARN contiene adenina, guanina, citosina y uracilo (Morrison y Boyd, 1998). 7.- Amidas: son derivados de los cidos carboxlicos y de las aminas. Su frmula general se muestra en la Figura 1.51. Las amidas tienen puntos de ebullicin bastante elevados debido a su capacidad para establecer puentes de hidrgeno bastante firmes (Figura 1.52). Figura 1.51. Frmula general de las amidas

Fuente: McMurry (2001)

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Figura 1.52. Puentes de hidrgeno en las amidas

Fuente: Morrison y Boyd (1998) La solubilidad lmite en agua es de 5-6 carbonos para amidas. El enlace amida es tan estable que sirve como la unidad bsica que constituye a las protenas (Figura 1.53) (Morrison y Boyd, 1998). Figura 1.53. Amidas en las protenas

Fuente: McMurry (2001)

1.3. Unidades estructurales que constituyen las biomolculas y organelos celulares (funciones)
La clula es la unidad ms pequea capaz de manifestar las propiedades del ser vivo (Maillet, 2002). La teora celular de la biologa establece que las clulas vivas se derivan de otras clulas vivas. Las clulas se diferencian en clulas especializadas, que forman los rganos y tejidos especficos, aunque cada sistema de rganos puede consistir en muchos tipos celulares distintos. Por ejemplo, Roskoski (2001) menciona que el sistema digestivo est constituido por cavidad bucal, glndulas salivales, esfago, estmago, intestino delgado, intestino grueso, hgado, vescula biliar y pncreas, cada uno de estos tejidos contiene una cantidad de tipos celulares diferentes. Las clulas de los organismos vivos estn rodeadas por una membrana plasmtica que separa el interior del exterior de la clula. Las clulas de organismos superiores tambin contienen organelos intracelulares membranosos y redes de membranas (Figura 1.54 y Cuadro 1.4) (McKee y McKee, 2003). La forma de las clulas animales a menudo se describe como esferoidal, pero la especializacin influye en la forma. El contacto, la presin y la capacidad de las clulas para alterar la forma, determinan tambin su aspecto. As, las clulas pueden ser redondas, estrelladas, fusiformes, alargadas, cilndricas, escamosas, cbicas, etc. y tener organelos especficos como pared celular en el caso de las clulas vegetales (Figura 1.55) (Banks, 1998).

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Figura 1.54. Estructura esquemtica de una clula animal

Fuente: McKee y McKee (2003) Cuadro 1.4. Propiedades metablicas de los componentes de las clulas animales

Fuente: Roskoski (2001)


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Figura 1.55. Estructura esquemtica de una clula vegetal

Fuente: McKee y McKee (2003)

Membrana citoplasmtica
Las membranas biolgicas estn formadas por bicapas de lpidos y protenas asociadas, teniendo un espesor de 8 nm (Banks, 1998). Los lpidos en las membranas estn formados por una porcin polar, hidroflica, que se encuentra al exterior de cada una de las dos capas de la membrana, y una porcin no polar que se proyecta hacia el interior de la membrana. Las protenas embebidas en el lpido se denominan protenas integrales de membrana, mientras que las que se hallan en la superficie de la membrana se conocen como protenas perifricas o extrnsecas (Figura 1.56). La membrana esta compuesta por 55 % de protena, 35 % de lpidos (fosfolpidos, colesterol y glucolpidos) y 10 % de CHOS (glucolipidos y glucoprotenas) (Roskoski, 2001). Figura 1.56. Componentes de la membrana citoplasmtica

Fuente: Banks (1998) y Roskoski (2001)


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Algunas protenas integrales de membrana atraviesan a la membrana una o ms veces. Las protenas integrales sirven para varias funciones celulares esenciales como mediar el transporte del exterior al interior de la clula de varias clases de molculas que sirven como combustible transportando azcares especficos y aminocidos, adems de iones. Los iones, los protones y la mayor parte de los compuestos orgnicos no pasan fcilmente a travs de las membranas. La mayora de los metabolitos intracelulares son ionizados, y la impermeabilidad de las membranas evita el escape de las clulas de estas sustancias con carga. Sobre la superficie externa de muchas clulas eucariotas hay una estructura denominada glucocliz (Figura 1.57) que est formado por carbohidratos unidos a las protenas de la membrana y a determinadas molculas de lpidos y que es una capa superficial celular (Roskoski, 2001). El espesor del glicocliz o manto celular es de 50 a 200 nm y las fibras que lo forman tienen un dimetro de 1-2 nm y se encuentran implantadas de manera perpendicular a la membrana formando un tapiz cerrado y continuo. El glicocliz constituye un cemento intercelular en los organismos pluricelulares y siempre est presente entre dos clulas (Callen, 2000). Figura 1.57. Glicocliz en la superficie de un linfocito

Fuente: Callen (2000) En los vegetales, la membrana celular se encuentra cubierta y protegida exteriormente por una pared celular ms gruesa (celulosa, hemicelulosa y lignina) (McKee y McKee, 2003). Dentro de las funciones de la membrana citoplsmica se encuentran que proporciona forma a la clula, da resistencia mecnica y proteccin, as como barrera de permeabilidad. Los canales de transporte de la membrana llevan iones, molcula y hay receptores que unen a las molculas sealizadoras, transporta y participa en procesos de sealizacin (Roskoski, 2001), reconocimiento entre clulas segn los componentes especficos, la adherencia entre clulas y la unin con el tejido conjuntivo se efecta mediante molculas de adherencia molecular que se encuentran en el glucocliz (McKee y McKee, 2003). Adems en la absorcin y digestin de algunos materiales participa el glucocliz, y la membrana citoplsmica tambin se relaciona con la antigenicidad. Regula los intercambios entre la clula y el medio exterior: 1.- Endocitosis y exocitosis: La endocitosis es la interiorizacin o penetracin de material a la clula y la exocitosis es la secrecin de compuestos al medio extracelular. En la endocitosis la membrana plasmtica se invagina a nivel de la zona donde se absorber el material extracelular y despus se repliega y forma una vescula cerrada. En la exocitosis las vesculas internas de la clula a menudo se encuentran cargadas de productos de secrecin, y tras abrirse a nivel de la membrana citoplsmica emiten su contenido al exterior de la clula. En funcin del tamao del material absorbido se distinguen dos procesos que se realizan por diferentes mecanismos: pinocitosis (ingestin de fluidos o macromolculas mediante pequeas vesculas de dimetro cercano a 150 nm) y fagocitosis (absorcin
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de partculas grandes o de clulas al interior de vesculas de dimetro superior a 250 nm, y que pueden alcanzar varios m, denominadas fagosomas. La mayor parte de los constituyentes absorbidos se dirigen hacia el compartimiento lisosomal, tras haber sido seleccionados y apartados en un compartimento membranario intermediario denominado compartimiento endosomal. Los lisosomas poseen gran nmero de hidrolasas que son enzimas de degradacin. Finalmente los materiales capturados se digieren y los productos obtenidos sirven para nutrir a la clula (Callen, 2000). 2.- Permeabilidad: Se realiza transporte pasivo o activo, de diversas sustancias. a) Pasiva: regida por fenmenos fsicos tales como la smosis o la difusin. b) Transporte activo: intervienen sistemas enzimticos, adems de un gasto de energa. La fluidez de la membrana o movimiento de diversos componentes ocurre en el seno de sta. Los cidos grasos no saturados de cadena corta aumentan la fluidez debido al movimiento de rotacin de los enlaces C=C. Los cidos grasos no saturados de cadena larga y el colesterol, disminuyen la fluidez de la membrana (Banks, 1998). En los tejidos animales, las clulas segregan protenas y carbohidratos que forman la matriz extracelular, un material gelatinoso que une a las clulas y a los tejidos (McKee y McKee, 2003).

Ncleo
Es el centro de control del crecimiento y la reproduccin celular. Segn la naturaleza de su ncleo, los organismos vivos consisten en dos clases principales que son procariotes (no tienen ncleo bien definido) y eucariotes que tienen un ncleo bien definido rodeado por una membrana nuclear. Los animales, plantas y protistas estn formados por clulas eucariotas, mientras que los protistas son organismos unicelulares que incluyen a las algas, hongos, levaduras y protozoarios (Roskoski, 2001). Controla la actividad celular mediante la informacin codificada en las molculas de su DNA que es el fundamento de todas las caractersticas de la clula, ya que todos los ncleos celulares de determinado animal, tienen la misma informacin gentica (Banks, 1998). Las clulas especializadas muestran la expresin diferencial de la informacin gentica por medio de represin o liberacin de loci de genes especficos (Banks, 1998). Las clulas contienen un ncleo o un cuerpo nuclear que contienen al material gentico de la clula y estn compuestos de DNA en un 35 % de la masa del ncleo, un 60 % de protenas especficas y 5 % de RNA (Roskoski, 2001). El ncleo est formado por un nucleoplasma rodeado de una envoltura nuclear. El nucleoplasma es abundante en DNA en el que las protenas denominadas lminas, forman una red fibrosa que da soporte estructural. El nucleoplasma tiene una red de fibras de cromatina de DNA e histonas. Las caractersticas generales del ncleo son: a. Forma: masa esfrica u ovoide. La morfologa del ncleo vara segn la forma celular. Algunas clulas tienen el ncleo redondo, otras alargado, forma de luna menguante, etc. b. Talla: la talla es proporcional a la de la clula, ocupa poco menos de una cuarta parte de la superficie celular. El tamao vara con el estado de diferenciacin y actividad fisiolgica de la clula. Sin embargo, en algunas clulas el ncleo puede ser la nica caracterstica sobresaliente, ya que clulas escamosas o estrelladas tienen pequeas cantidades de citoplasma.
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c. Nmero: normalmente cada clula contiene no ms de un ncleo (mononucleadas), aunque algunas son binucleadas y otras multinucleadas. Por ejemplo, los eritrocitos de mamfero son anucleados, mientras los de aves s tienen ncleo. Las clulas musculares estriadas son multinucleadas (Banks, 1998). Las formaciones estructurales del ncleo son (Figura 1.58): Figura 1.58. Estructura nuclear

Fuente: McKee y McKee (2003) a.- Membrana nuclear o envoltura nuclear: esta provista por numerosos poros nucleares (Figura 1.59). Existe la membrana nuclear interna y la externa, cada una de ellas mide 7.5 nm de espesor y estn separadas entre s por un espacio perinuclear o cisterna cuya amplitud es de 40-70 nm. El espacio perinuclear y su membrana externa se continan con el retculo endoplsmico rugoso. A menudo, los ribosomas se encuentran adheridos a la membrana nuclear externa. El retculo endoplsmico rugoso forma la envoltura nuclear. Las membranas nucleares interna y externa son discontinuas. Los puntos no continuos o de fusin entre estas membranas son los poros nucleares que miden 70 nm de dimetro por los que pasan protenas al interior y sale RNA. La clula tpica tiene de 3000 a 4000 poros (Banks, 1998). Figura 1.59. Ncleo celular

Fuente: McKee y McKee (1999)


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En la Figura 1.60 se muestra parte del ncleo y del retculo endoplsmico rugoso. Los ribosomas se encuentran sobre la membrana nuclear externa. Figura 1.60. Ncleo y retculo endoplsmico rugoso

Fuente: Banks (1998) b.- Matriz: la membrana de revestimiento encierra la matriz nuclear que es la sustancia fundamental del ncleo. Este jugo nuclear o cariolinfa constituye el medio disuelto del material nuclear. c.- Cromatina : se encuentra dentro del ncleo suspendida en la matriz nuclear. Cromatina es cualquier rea del ncleo que contenga DNA. d.- Nuclolo: pueden observarse uno o varios. Constituido principalmente por RNA. Es un cuerpo intranuclear y tiene formas variadas. Se encuentra separado de la membrana nuclear (Banks, 1998). Los principales componentes nucleares son cidos nucleicos, protenas, lpidos, sales de Mg, de Ca, de Fe, de Co, de Zn y agua (De Robertis e Hib, 2001).

Retculo endoplasmtico o endoplsmico


Es un sistema de tbulos, vesculas y grandes sacos planos membranosos interconectados (Figura 1.61). Las lminas continuas de membranas de retculo endoplsmico plegadas repetidamente encierran un espacio interno denominado luz del retculo endoplsmico y dicho compartimiento se denomina espacio de las cisternas y est separado del citoplasma por la membrana del retculo endoplsmico. Existen dos formas de retculo endoplsmico que son el retculo endoplsmico rugoso (RER) y retculo endoplsmico liso (REL). El RER participa en la sntesis de protenas de las membranas y las protenas que va a exportar la clula, tiene numerosos ribosomas en la superficie citoplsmica, se presenta en clulas con actividad intensa de sntesis de protena principalmente. El REL carece de ribosomas unidos. Las membranas del REL se continan con las del RER. El REL sintetiza y transporta glucgeno y lpidos y biotranforma las molculas orgnicas insolubles en agua (McKee y McKee, 2003), almacena y transporta iones (Banks, 1998). El REL est muy desarrollado en clulas hepticas. Las protenas sintetizadas, atraviesan las membranas y se acumulan en las cisternas del RE. Luego son transportadas por el RE de una zona celular a otra, sin entrar en contacto con el citoplasma. Las protenas que han transitado por el RE se concentran, se modifican y se asocian a otras sustancias en los sculos golgianos. El producto elaborado se embala dentro de una membrana de origen golgiano que permite su transito por el citoplasma (De Robertis e Hib, 2001). Los ribosomas del citoplasma de

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las eucariotas son complejos de RNA y protenas con un dimetro de 20 nm, cuya funcin es la biosntesis de protenas, formados por rRNA. Figura 1.61. Retculo Endoplsmico

Fuente: McKee y McKee (2003) Composicin qumica del RE: 1.- Membranas: - lipoprotenas (35 %) - protenas (60 %) numerosas enzimas 2.- Ribosomas: RNA y protenas 3.- Canales y reservorios: numerosas enzimas (fosfatasas) (De Robertis e Hib, 2001).

Aparato o complejo de Golgi


Descrito en 1898 por vez primera, est formado por vesculas membranosas en forma de saco, relativamente grandes y aplanadas que se parecen a una pila de platos (Figura 1.62). En los vegetales es llamado dictiosoma. Participa en el empaquetamiento y la distribucin de los productos celulares hacia los compartimientos interno y externo. Tiene dos caras: la lmina o cisterna (situada ms cerca del RE y est en la cara formadora o cis, ya que la que est en la cara maduradora o trans est habitualmente cerca de la porcin de la membrana plasmtica de la clula que acta en la secrecin). Sobresalen del RE (Figura 1.63) y se funden con la membrana cis del Golgi pequeas vesculas membranosas que contienen protenas y lpidos recin sintetizados. Dichas molculas se transportan desde un saco del Golgi al siguiente por vesculas, donde son procesadas por enzimas. Una vez que alcanzan los productos, la cara trans se dirige a otras partes de la clula. Los productos de secrecin, como las enzimas digestivas o las hormonas, se concentran dentro de vesculas secretoras o grnulos secretores que sobresalen de la cara trans. Los grnulos secretores se almacenan en el citoplasma hasta que se estimula su secrecin por el proceso de exocitosis (Figura 1.64) en el que se fusionan los grnulos unidos a la membrana citoplasmtica con dicha membrana, luego se libera al espacio extracelular el contenido de los grnulos (McKee y McKee, 2003).
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Figura 1.62. Aparato de Golgi

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 1.63. Relacin del aparato de Golgi y el RER

Fuente: Banks (1998) En el proceso de exocitosis, las protenas producidas en el RE se procesan en el aparato de Golgi y se empaquetan en vesculas que migran a la membrana plasmtica y emergen con sta (McKee y McKee, 2003). Las membranas del aparato de Golgi estn en constante recambio. Por medio de la incorporacin de vesculas de transporte, nuevas membranas se suman y las membranas viejas se pierden en la superficie madura a travs de vesculas de secrecin (Banks, 1998). Las membranas de aparato de Golgi catalizan
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la transferencia de precursores glucdicos o lipdicos a las protenas para sintetizar glucoprotenas o lipoprotenas. El aparato de Golgi es el principal sitio de formacin de nuevas membranas (Maillet, 2002). Figura 1.64. Proceso de exocitosis

Fuente: McKee y McKee (2003)

Lisosomas
Son orgnulos esfricos con forma de saco y un dimetro de 500 nm. Se encuentran rodeados por una membrana nica. Contienen grnulos que son agregados de enzimas digestivas proteicas llamadas hidrolasas cidas, ya que actan mejor en medios cidos y utilizan las molculas de agua para escindir las molculas grandes en fragmentos (Figura 1.65). Actan en la digestin intracelular y extracelular. Son capaces de degradar la mayor parte de las biomolculas. Los lisosomas participan en la vida celular de la siguiente manera: mediante la digestin
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de las molculas del alimento y otras sustancias captadas por endocitosis (Figura 1.66), mediante la digestin de los componentes celulares gastados e innecesarios y mediante la degradacin del material extracelular (McKee y McKee, 2003). Figura 1.65. Lisosomas

Fuente: McKee y McKee (2003) La membrana lisosmica tiene determinadas protenas que transportan protones a travs de la membrana, creando el medio cido que se requiere dentro de los lisosomas. En determinadas circunstancias las enzimas lisosmicas se escapan a otras partes de la clula (McKee y McKee, 2003). La membrana lisosmica es una barrera eficaz que protege a la clula de las enzimas lisosmicas, pero en ocasiones se puede romper, en cuyo caso las enzimas liberadas actuaran sobre su sustrato y la clula sera completamente destruida (Maillet, 2002). La funcin de los lisosomas tiene caractersticas comunes en varios tejidos, difieren sus funciones especficas. Por ejemplo, los macrfagos tienen lisosomas que degradan las clulas daadas o las sustancias extraas del cuerpo de los animales, los osteoclastos segregan lisosomas que trabajan en la resorcin del remodelado seo. A continuacin se explica el proceso de endocitosis (Figura 1.67) mediada por el receptor: las sustancias extracelulares pueden entrar en la clula durante la endocitosis, un proceso en el que las molculas receptoras de la membrana plasmtica se unen a molculas especficas o complejos moleculares denominados ligandos. Las regiones especializadas de la membrana plasmtica, denominasas hoyos recubiertos, se invaginan progresivamente para formar vesculas cerradas. Tras eliminarse las protenas de la cubierta, la vescula se fusiona con un endosoma precoz, el precurso de los lisosomas. Las protenas de la cubierta se reciclan hacia la membrana plasmtica. Durante la maduracin del endosoma aumenta la concentracin de protones y se liberan los ligandos de sus receptores que a continuacin se reciclan tambin al volver a la membrana plasmtica. Al continuar la maduracin del endosoma, el aparato de Golgi proporciona las hidrolasas lisosmicas. La formacin del lisosoma se completa cuando se han transferido todas las hidrolasas al endosoma tardo y se ha reciclado la membrana de Golgi de nuevo al aparato de Golgi (McKee y McKee, 2003).

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Figura 1.66. Endocitosis

Fuente: McKee y McKee (2003) La composicin qumica de los lisosomas es la siguiente: A. Membrana protenas, fosfolpidos y polisacridos. B. Contenido coleccin de poderosas enzimas lticas (ms de 50 enzimas diferentes) que operan generalmente en medio cido (pH de 3-6). Ej.: fosfatasas, lipasas, glucosidasas, proteasas, ribonucleasas y desoxiribonucleasas (De Robertir e Hib, 2001). Figura 1.67. Acontecimientos iniciales de la endocitosis tomadas con microscopa electrnica

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Mitocondrias
El metabolismo aerobio que es el mecanismo por el cual la energa del enlace qumico de las molculas de alimento se captura y utiliza para impulsar la sntesis dependiente del oxgeno de la adenosina trifosfato (ATP), la molcula de almacenamiento de energa de las clulas, tiene lugar dentro de las mitocondrias (McKee y McKee, 2003). La mitocondria est ausente en los procariotas y es un orgnulo limitado por una pared de doble membrana. A partir de la fosforilacin del ADP, transforma la energa liberada por el catabolismo aerobio de distintos nutrientes en ATP, reaccin durante la cual se produce H2O y CO2. Produce la mayor parte de la energa necesaria para el desarrollo normal de las distintas funciones celulares. Otro orgnulo, el peroxisoma, tambin produce energa por catabolismo oxidativo, pero en forma de calor. La mitocondria interviene, junto con el REL, en la sntesis de esteroides y de fosfolpidos (Maillet, 2002). Cada mitocondria est rodeada por dos membranas (Figura 1.68). La membrana externa es lisa y relativamente porosa, mide 7 nm de grosor. La membrana interna mide casi 8 nm de grosor (Banks, 1998), es impermeable a los iones y a diversas molculas orgnicas, se proyecta hacia el interior en pliegues denominados crestas. En la membrana interna estn integradas estructuras formadas por complejos moleculares denominados ensamblajes respiratorios que son responsables de la sntesis de ATP. En las mitocondrias tambin hay protenas que transportan molculas e iones especficos. Juntas ambas membranas crean dos compartimientos separados que son el espacio intermembrana y la matriz. El espacio intermembrana contiene varias enzimas que participan en el metabolismo de los nucletidos, mientras que la matriz, gelatinosa, est formada por una concentracin elevada de enzimas e iones y molculas orgnicas pequeas. La matriz contiene varias molculas de DNA circular y todos los componentes que se requieren para la sntesis de protenas. Las mitocondrias son capaces de una fisin independiente y el nmero de mitocondrias por clula vara de la actividad de la clula. La forma de las mitocondrias vara segn las diferentes especies y tipos celulares, segn el estado fisiolgico de la clula (McKee y McKee, 2003). Figura 1.68. Esquema de una mitocondria

Fuente: Banks (1998)


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2. El agua y sus propiedades


2.1. Importancia del agua dentro de la funcin celular
La vida se inici en el agua hace alrededor de 3000 millones de aos y sigue existiendo gracias a ella. En los seres vivos, la principal funcin del agua es brindar un sistema lquido en el que puedan realizarse los procesos fisicoqumicos vitales: es el disolvente del estado vivo (Bohinski, 1998). El agua es el medio de transporte de nutrimentos, hormonas, metabolitos y participa en la catlisis enzimtica y en los procesos relacionados con la transferencia de energa qumica (Hicks, 2003). El contenido de agua de un organismo est en relacin con la edad y con la actividad metablica; es mayor en el embrin (80% - 90%) y menor progresivamente en el adulto (cerca del 60% del peso) (DiBartola, 1992; Murray et al., 2001). El agua total del cuerpo se distribuye en dos principales compartimientos lquidos: lquido intracelular (LIC) y lquido extracelular (LEC) (Figura 2.1). El LIC se encuentra dentro de las clulas y constituye dos terceras partes del agua total corporal; el LEC est fuera de las clulas y representa un tercio del agua corporal total. El LIC y el LEC estn separados por las membranas celulares (Costanzo, 1999). El LEC est en constante movimiento en todo el cuerpo, es transportado rpidamente en la sangre circulante, y mezclado despus entre la sangre y los lquidos tisulares mediante difusin a travs de las paredes capilares (Guyton y Hall, 2002). El LEC se puede dividir adems en dos compartimientos: plasma y lquido intersticial. El plasma es el lquido circulante en los vasos sanguneos y es el ms pequeo de los dos subcompartimientos del LEC. El lquido intersticial es el que realmente baa a las clulas. El plasma y lquido intersticial estn separados por la pared de los capilares (Costanzo, 1999). En el lquido extracelular se encuentran los iones y nutrientes que necesitan las clulas para mantener la vida celular. Por tal motivo, todas las clulas viven esencialmente en el mismo medio, el lquido extracelular. Las clulas son capaces de vivir, crecer y desarrollar sus funciones especiales en tanto dispongan de las concentraciones correctas de oxgeno, glucosa, diferentes iones, aminocidos, sustancias grasas y otros constituyentes en el medio interno (Guyton y Hall, 2002). A continuacin se describirn algunas de las funciones del agua: Las molculas polares presentes en las clulas vivas, existen y reaccionan principalmente en un ambiente acuoso. Solubiliza y modifica las propiedades de las biomolculas como cidos nucleicos, protenas y carbohidratos, al formar enlaces de hidrgeno con los grupos polares funcionales de dichas biomolculas. El agua constituye el principal producto final del metabolismo oxidativo de los alimentos. Sirve como reactante y como producto en muchas reacciones metablicas. La homeostasis, el mantenimiento de la composicin del ambiente interno que es esencial para la salud, incluye considerar la distribucin del agua en el cuerpo, as como el mantenimiento de un pH y concentraciones de electrolitos adecuados.

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Figura 2.1. Regulacin y compartimientos de los lquidos corporales y las membranas que los separan

Fuente: Modificado de Guyton y Hall (2002) Los organismos vivos se han adaptado efectivamente a su entorno acuoso y han desarrollado mtodos para aprovechar las propiedades del agua. El elevado calor especfico del agua resulta til para los grandes animales terrestres, porque el agua de su organismo acta como un amortiguador trmico y permite que la temperatura del mismo permanezca relativamente constante aunque vare la temperatura ambiente. El elevado calor de vaporizacin del agua, debido a los puentes de hidrgeno, constituye el medio eficaz por el que los vertebrados pierden gran parte del calor, generado durante el metabolismo, por evaporacin del sudor a travs de los poros de la piel. En su punto de ebullicin (100 C a 1 atm de presin) se necesitan 540 caloras para convertir un gramo de agua lquida en vapor, casi 60 veces ms que lo necesario para el ter y casi el doble de lo necesario para el amonaco. La vaporizacin ocurre porque parte de las molculas que se mueven muy rpidamente en un lquido abandonan su superficie y pasan al aire. El elevado grado de cohesin interna del agua lquida, a causa de los enlaces de hidrgeno, es explotado por la plantas superiores para el transporte de los elementos nutritivos en disolucin, desde las races hasta las hojas, durante el proceso de transpiracin (Lehninger, 1983; Curtis y Barnes, 2001). As, el agua es el solvente natural para los iones minerales y otras sustancias y es el medio de dispersin para la estructura coloidal del citoplasma. Los procesos fisiolgicos se llevan a cabo exclusivamente en medio acuoso. A travs del agua se eliminan sustancias, ya sea a travs de la sudoracin, moco, lgrimas, eructo, respiracin u orina. El agua interviene en la absorcin de calor, evitando cambios drsticos de temperatura en la clula (Murray et al., 2001). El contenido de agua de la clula est formado por una fraccin libre y otra ligada:
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- El agua libre representa el 95% del agua total y es la parte usada principalmente como solvente para los solutos y como medio de dispersin del sistema coloidal del citoplasma. - El agua ligada representa slo el 4 - 5% y es la que est unida laxamente a la protena por uniones de hidrogeno (De Robertis e Hib, 2001).

2.2. Caractersticas qumicas y fsicas del agua


El agua es un compuesto formado por 2 tomos de hidrgeno y uno de oxgeno, que en estado puro se encuentra polimerizado, ya que las molculas se unen entre s mediante enlaces de hidrgeno (Garca, 1993). La estructura tridimensional de la molcula del agua es un tetraedro irregular con el oxgeno en el centro (Figura 2.2). Los dos enlaces con el hidrgeno se dirigen hacia las dos esquinas del tetraedro y los electrones no compartidos comparten las esquinas restantes. El ngulo entre los dos tomos de hidrgeno es de 105 que es un poco menor que el de un tetraedro que es de 109.5, lo que da origen a un tetraedro ligeramente asimtrico (Figura 2.3) (Murray et al., 2001). Figura 2.2. Modelo espacial compacto de la molcula del agua

Fuente: Modificado de Hicks (2003) y McKee y McKee (2003) En la naturaleza el agua se encuentra en tres estados fsicos: lquido, slido y gaseoso. En el Cuadro 2.1 se muestran algunas constantes fsicas del agua y se comparan con las del heptano. Figura 2.3. Estructura de la molcula del agua

Fuente: Hicks (2003)

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Cuadro 2.1. Principales constantes fsicas del agua y del heptano

Constante

Valor del agua

Valor del heptano

Punto de ebullicin (oC a 1 atm) 100 98.4 Calor de fusin (kcal/l) 79 34 Calor especfico (cal/g C) 1 0.49 Densidad a 25 C (g/ml) 0.997 0.684 Tensin superficial (dinas/cm a 20 C) 72.76 19.2 Calor de vaporizacin (cal/g) 540 76 (Devore y Mena, 1978; Rakoff y Rose, 1985; Pontn, 1986) Otras constantes fsicas del agua son: peso molecular de 18.016 g/mol, punto de congelacin de 0 o C a 1 atm, densidad a 4 C de 1 g/ml, densidad a 0 C de 0.9998 g/ml, ndice de refraccin relativo al aire a 20 C de 1.333, velocidad del sonido de 1496.3 m/s a 25 C, coeficiente de dilatacin de 0.018 (Atkins, 1986; Pontn, 1986). El punto de ebullicin lo describe Hicks (2003) como la temperatura en que cualquier sustancia lquida cambia al estado de vapor. El punto de ebullicin de los alcanos simples aumenta de manera gradual al aumentar el nmero de tomos de carbono, en tanto que los puntos de fusin no aumentan en forma tan regular. La magnitud de las fuerzas de van der Waals entre las molculas aumenta al aumentar su superficie, as entre molculas compactas las fuerzas de Van der Waals son menores que entre las molculas alargadas del mismo nmero de tomos de carbono y por ende, los puntos de ebullicin de las molculas ms compactas son menores. Los alcanos no son polares y por tal no son solubles en agua y tienen una densidad menor que la del agua. Los alcanos son inodoros (Rakoff y Rose, 1985). El calor de fusin de un slido cristalino es la cantidad de calor requerida para fundir una unidad de masa (o peso) del slido a temperatura constante, lo que es igual a la cantidad de calor emitido por la unidad de masa del slido fundido cuando se cristaliza a la misma temperatura (Bueche, 1982). El agua congelada presenta un efecto acumulativo de muchos enlaces de hidrgeno y tienen una forma de estructura abierta, formando huecos en su interior. Por su estructura abierta, el agua al congelarse se expande como se muestra en la Figura 2.4 (Hicks, 2003). Figura 2.4. Esquema de las molculas de agua congelada (hielo) y lquida

Fuente: Timberlake (1997)


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El calor especfico es la cantidad de calor necesaria para incrementar la temperatura 1 C de 1 gramo de agua, por ejemplo de 14.5 a 15.5 C (Hicks, 2003). La densidad () de un material es la masa por unidad de volumen del material, es decir: = masa del cuerpo/volumen del cuerpo= m/V. La unidad del sistema internacional para la densidad es kg/m 3 g/cm3 (Bueche, 1982). Las fuerzas de atraccin de las molculas del agua lquida se dirigen tambin en todas direcciones, pero en la superficie del lquido slo subsisten las fuerzas laterales y hacia abajo. Dado que la superficie es distinta (atmsfera), las molculas se aglutinan ms estrechamente en la superficie, constituyendo una especie de membrana muy delgada, que incluso soporta el peso de algunos insectos o polvo que son ms densos que el agua, sin romper la interfase. A este fenmeno se le denomina tensin superficial del agua como se muestra en la Figura 2.5 (Hicks, 2003). Para que una molcula de agua se separe de las molculas vecinas, o sea, que se evapore, deben romperse los puentes de hidrgeno, lo que requiere energa trmica. En consecuencia, cuando el agua se evapora, por ejemplo, de la superficie de la piel, las molculas que escapan llevan consigo calor. As, la evaporacin tiene un efecto refrigerante (Curtis y Barnes, 2001). El calor de vaporizacin o calor latente de vaporizacin se define como la cantidad de calor que se ha de proporcionar a 1 g de lquido para transformarlo en vapor, a su temperatura de ebullicin. El calor latente de vaporizacin del agua es mayor que el que se requiere para vaporizar un volumen igual de cualquier otro disolvente (Jimnez y Macarulla, 1984). Figura 2.5. Tensin superficial del agua

Fuente: Timberlake (1997) Los compuestos que contienen regiones polares (cargadas) y no polares se denominan anfiflicos o anfipticos. Cuando una molcula con estas caractersticas se mezcla con agua, las dos regiones de la sustancia presentan tendencias conflictivas, el extremo polar tiende a interactuar con el solvente favorablemente, mientras la regin hidrfoba, no (Figura 2.6) (Hicks, 2003). Las regiones no polares se agrupan juntas, exponiendo la mnima rea hidrfoba al solvente, mientras que las hidroflicas tienen un arreglo que maximiza su interaccin con el solvente acuoso. Estas estructuras estables se denominan miscelas (Figura 2.7) y pueden ser miles en una solucin. Las fuerzas que mantienen unidas las regiones no polares se denominan interacciones hidrfobas o hidroflicas. En las miscelas, todos los extremos polares de las molculas anfiflicas se orientan hacia el agua, con la que interactan, mientras que los extremos hidrfobos se dirigen hacia el interior de la miscela (Hicks, 2003).

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Figura 2.6. Interaccin anfiflica

Fuente: Hicks (2003) Figura 2.7. Formacin de miscelas

Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003)

2.3. Importancia de los puentes de hidrgeno dentro de la estructura de las molculas orgnicas
El agua presenta enlaces de hidrgeno, donde la accin electrosttica recproca entre el ncleo de hidrgeno de una molcula de agua y el par de electrones no compartidos de otra, se llama enlace de hidrgeno. Cada molcula de agua es capaz de unirse hasta con 4 molculas de agua vecinas. Los puentes de hidrgeno son principalmente interacciones electrostticas. La electronegatividad del tomo al cual el hidrgeno est unido covalentemente separa la densidad electrnica del tomo de hidrgeno, de forma que ste desarrolla una carga positiva parcial (+). Por tanto, puede interactuar con un tomo que tenga una carga negativa parcial ( ) a travs de una interaccin electrosttica (Figura 2.8).

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Los puentes de hidrgeno son mucho ms dbiles que los enlaces covalentes, son ms largos que los enlaces covalentes, sin embargo, los enlaces de hidrgeno ms fuertes tienen tendencia a ser lineales, de tal forma que el donador de hidrgeno, el tomo de hidrgeno y el aceptor se encuentran en lnea recta (Stryer et al., 2003). Figura 2.8. Puentes de hidrgeno entre molculas de agua

Fuente: Timberlake (1997) En trminos generales, un puente de hidrgeno puede generarse cuando un tomo de hidrgeno unido de manera covalente a un oxgeno, a un nitrgeno o a un azufre, se halla a una distancia de 0.27 a 0.30 nm de otro tomo de oxgeno, nitrgeno o azufre, que posee un par de electrones sin compartir. Los enlaces intermoleculares e intramoleculares son comunes en las biomolculas, los cuales se forman con mucha frecuencia mediante enlaces de hidrgeno. La estabilidad de ambos tipos de molculas es muy similar, por ejemplo, la estabilidad entre dos molculas de agua y una protena (intermolecular), donde intervienen los grupos C=O e H-N. Como diversos grupos funcionales producen puentes de hidrgeno con el agua, dichos puentes de hidrgeno participan en uniones entre biomolculas que expongan de manera accesible estos grupos (Figura 2.9) (Hicks, 2003). Figura 2.9. Tipos de enlaces de hidrgeno con diversos grupos funcionales

Fuente: Hicks (2003) Los puentes de hidrgeno son interacciones relativamente dbiles, sin embargo, resultan cruciales para las macromolculas biolgicas como el DNA (Figura 2.10) y las protenas, ya que se presentan en diversos grupos funcionales. Estas interacciones tambin son responsables de muchas de las propiedades que hacen del agua un disolvente tan especial. El tomo de hidrgeno en un puente de hidrgeno est parcialmente compartido entre dos tomos relativamente electronegativos, tales como el oxgeno o nitrgeno (Figura 2.11). El donador o dador del enlace de hidrgeno es el grupo que incluye
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tanto al tomo al que el hidrgeno est ms estrechamente unido como al propio tomo de hidrgeno, mientras que el aceptor del enlace de hidrgeno es el tomo menos estrechamente unido al tomo de hidrgeno (Stryer et al., 2003). Figura 2.10. Enlaces de hidrgeno entre el par de bases complementarias del DNA, guanina y citosina

Fuente: Hicks (2003) Figura 2.11. Enlaces de hidrgeno

Fuente: Hicks (2003) Debido a la polaridad y a la capacidad para establecer puentes de hidrgeno, el agua interacciona rpidamente con los solutos polares, disminuyendo las interacciones electrostticas y el nmero de los enlaces de hidrgeno entre las molculas del soluto. Por ejemplo, cuando el cloruro de sodio se mezcla con agua, las fuerzas que mantienen al cristal se debilitan y el slido inico se disuelve (Figura 2.12). Cada ion Na+ y Cl- al escapar de la celda cristalina se rodea de agua (esfera de solvatacin). El sodio se rodea de cinco molculas de agua (el potasio, por ejemplo, se rodea de tres). El sodio retiene ms agua porque tiene mayor poder de solvatacin (Hicks, 2003; McKee y McKee, 2003).

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Figura 2.12. Iones hidratados

Fuente: Hicks (2003) Los solutos polares o inicos como el cloruro de sodio (NaCl), el cido clorhdrico (HCl) y la sacarosa forman soluciones con disolventes polares (Figura 2.13), mientras que los solutos no polares como el aceite forman soluciones con disolventes no polares (Timberlake, 1997). Figura 2.13. Solucin de azcar

Fuente: Timberlake (1997)

2.4. Disociacin del agua y molculas orgnicas (cidos y bases dbiles) y concepto de pK
El agua al disociarse produce hidrogenin (H+) y oxhidrilo (OH-). Al igual que todas las reacciones reversibles, la ionizacin del agua puede describirse como una constante de equilibrio. Cuando los cidos o bases dbiles se disuelven en agua, pueden donar protones, en el caso de los primeros, y capturarlos en caso de las segundas, dicho proceso tambin se gobierna por constantes de equilibrio. La concentracin total de iones hidrgeno se expresa como el pH de la solucin.

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Las molculas de agua tienen una ligera tendencia a ionizarse reversiblemente, produciendo un ion hidrogenin y un oxhidrilo (H2O H+ + OH-) (Hicks, 2003). Generalmente se considera que el agua es un no electrlito que slo contiene molculas de agua. Sin embargo, si se efectan mediciones cuidadosas se observa que algunas molculas de agua pura (una por cada 10 millones) forman iones a 25 C. Cuando el agua se ioniza, se transfiere un protn de una molcula de agua a otra para producir un ion hidronio (H3O+) y un ion hidroxilo (OH-) (Figura 2.14) (Timberlake, 1997). Figura 2.14. Transferencia de hidrgeno

Fuente: Timberlake (1997) La ecuacin de ionizacin del agua se puede escribir para dos molculas de agua como lo describe Timberlake (1997):

y simplificando la reaccin anterior obtenemos:

Debido a que la ionizacin reversible del agua es crucial en la funcin celular, se expresan las propiedades de ionizacin del agua en trminos cuantitativos. La posicin de equilibrio de cualquier reaccin qumica se proporciona por su constante de equilibrio. Para la siguiente reaccin generalizada:

A+B

C+D

una constante de equilibrio puede definirse en trminos de las concentraciones de reactantes (A y B) y productos (C y D) presentes en el equilibrio (Hicks, 2003), como sigue:

Keq = [C][D] / [A][B]


La constante de equilibrio es fija y caracterstica para cualquier tipo de reaccin qumica a una temperatura especfica. Define la composicin de la mezcla de la reaccin en el equilibrio final, sin considerar las concentraciones iniciales de reactantes y productos. A la inversa, se puede calcular la constante de equilibrio para una reaccin y una temperatura dadas, si las concentraciones de equilibrio de todos los reactantes y productos se conocen (Hicks, 2003). La frmula de la constante de equilibrio para la ionizacin reversible del agua es la siguiente:

Keq = [H+][OH-] / [H2O]


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En agua pura a 25 C, la concentracin de agua es de 55.5 M (gramos de agua en 1 litro, dividido entre el peso molecular del agua en gramos, ya que 1 mol de agua pesa 18 g, es decir, 1000/ 18 = 55.5 molar 55.5 M) segn Murray et al. (2001), y es en esencia constante en relacin con la muy pequea concentracin de (H+) y oxhidrilo (OH-), que es de 1 x 10-7 M. Sustituyendo 55.5 M en la expresin de la constante de equilibrio se tiene lo siguiente:

Keq = [H+][OH-] / 55.5 M


Arreglando se tiene lo siguiente:

(55.5 M)(Keq) = [H+][OH-]=Kw


Donde Kw es el producto inico del agua a 25 C. El valor de Keq se ha calculado por la medicin de la conductividad elctrica del agua pura (en el agua pura slo los iones producidos por el agua pueden conducir la corriente elctrica), y se ha obtenido un valor de 1.8 x 10 -16 M a 15 C, pudiendo sustituir este valor en la frmula anterior:

(55.5M)(1.8 x 10-16 M) = [H+][OH-] 99.9 x 10-16 M2 = [H+][OH-] 1.0 x 10-14 M2 = [H+][OH-] = Kw


Teniendo en cuenta que el producto [ H+ ][ OH-] en solucin acuosa a 25 C es siempre igual a 1x 10-14 M2, donde hay una concentracin exactamente igual de H+ y OH-, es posible reforzar el concepto de que el agua representa un pH neutro. A este pH, la concentracin de H+ y OH- puede calcularse a partir del producto inico del agua:

Kw = [H+][OH-] = [H+]2
Despejando [H+] de la frmula anterior, se obtiene:

[H+] = Kw = 1 x 10-14 M2 [H+] = [OH-] = 1 x 10-7 M


Como el producto inico del agua es constante, en ocasiones en que la concentracin de iones H + es mayor de 1 x 10-7 M, la concentracin de OH- debe ser menor de 1 x 10-7 M y viceversa. Cuando el valor de H+ es muy alto, como en una solucin de cido clorhdrico, el valor de OH- debe ser muy pequeo. A partir del producto inico se puede calcular la concentracin de H+ si se conoce la concentracin de OH- (Hicks, 2003). Esto significa que el producto de [H+] y [OH-] en cualquier disolucin de agua a 25 C es siempre 1 x 10-14. Como [H+] es igual a [OH-] cuando se disocia el agua pura, tenemos que [H+] = [OH-] = 1x10-7 M. As, la concentracin de ion hidrgeno en agua pura es igual a 1 x 10-7 M. El ion hidrgeno es uno de los iones ms importantes en los sistemas biolgicos. La concentracin de este ion afecta a la mayora de los procesos celulares y del organismo. Por ejemplo, la estructura y funcin de las protenas, y las velocidades de la mayora de las reacciones bioqumicas estn muy

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afectadas por la concentracin del ion hidrgeno. Adems, el ion hidrgeno desempea un papel fundamental en procesos como la generacin de energa y la endocitosis (McKee y McKee, 2003). Muchas biomolculas poseen propiedades cidas o bsicas. Un cido puede definirse como un donador de iones hidrgeno, y una base como un aceptor de iones hidrgeno (Del Caizo, 2007). Los cidos fuertes como el HCl (cido clorhdrico) y bases fuertes como NaOH (hidrxido de sodio) se ionizan casi completamente en agua (McKee y McKee, 2003).

cido: Base:

HCl NaOH

H+ + ClNa+ + OH-

Sin embargo, muchos cidos y bases no se disocian completamente. Los cidos orgnicos (compuestos con grupo carboxilo) no se disocian completamente en agua, y se denominan cidos dbiles. Las bases orgnicas poseen una capacidad pequea, aunque mensurable, para combinarse con los iones hidrgeno. Muchas bases dbiles comunes contienen grupos amino. La siguiente reaccin describe la disociacin de un cido orgnico:

HA cido dbil

H+ + ABase conjugada de HA

El producto desprotonado de la reaccin de disociacin se denomina base conjugada. Por ejemplo, al cido actico (CH3COOH) se disocia para formar la base conjugada acetato (CH3COO-) (McKee y McKee, 2003). La fuerza de un cido dbil (es decir, su capacidad para liberar iones hidrgeno) puede determinarse utilizando la siguiente expresin:

Keq = [H+][A-] / [HA]


La potencia relativa de los cidos y bases dbiles, se expresa de manera cuantitativa como su constante de disociacin (K), la cul expresa su tendencia a ionizar. Keq es la constante de disociacin del cido. Cuanto mayor es el valor de Keq, el cido es ms fuerte. Como los valores numricos para los cidos dbiles son exponentes negativos, conviene expresar K como pK, donde:

pK= - logK
El pK se relaciona con la K, como el pH se relaciona con la concentracin del H+. Cuando las variantes asociadas (protonada) y disociada (base conjugada) se presentan en concentraciones iguales, la concentracin prevalente del ion hidrgeno [H +] es numricamente igual a la constante de disociacin, K. Si se toman los logaritmos en ambos lados de ecuaciones (como K = [H+]) y se multiplica por -1, la expresin queda:

-log K=-log[H+]

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Toda vez que el logaritmo negativo (-log) de K se define como pK, y el logaritmo negativo (-log) de [H+] define al pH, es posible escribir la ecuacin:

pK = pH
Lo anterior expresa que el pK de un grupo cido o bsico corresponde al pH al cual las variantes protonada y no protonada se presentan con iguales concentraciones (Murray et al., 2001). Cuanto menor es el pKa ms fuerte es el cido y cuanto mayor es el pKb ms fuerte es la base (McKee y McKee, 2003). En el Cuadro 2.2 se muestran los valores de las constantes de disociacin y los pK a y pKb de varios cidos y bases dbiles comunes Cuadro 2.2. Valores de las constantes de disociacin y los pKa y pKb de varios cidos y bases dbiles comunes Constante de Estructura cida Estructura bsica cidos disociacin pKa HA AKa (M) CH3COOH CH3COO1.76x10-5 4.76 cido actico -7 H2CO3 HCO3 4.3 x10 6.37 cido carbnico 2-11 HCO3 CO3 5.61 x10 10.25 Bicarbonato H3PO4 H2PO47.25 x10-3 2.14 cido fosfrico -2 -8 H2PO4 HPO4 6.31 x10 7.20 Fosfato dicido Constante de Estructura cida Estructura bsica Bases disociacin pKb HA AKb (M) + NH4 NH3 5.5 x10-10 9.26 Amoniaco + -11 CH3 - NH3 CH3 NH2 2.3 x10 10.64 Metilamina + -11 (CH3)2- NH2 (CH3)2- NH 1.9 x10 10.72 Dimetilamina + -10 (CH3)3 - NH (CH3)3 N 1.8 x10 9.74 Trimetilamina + -5 C6H5NH3 C6H5NH2 2.6 x10 4.58 Anilina + -6 C5H5NH C5H5N 5.9 x10 5.23 Piridina Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003)

2.5. Escala de pH
La escala de pH expresa de forma conveniente la concentracin de ion hidrgeno. Se define el pH como el logaritmo negativo de la concentracin de iones hidrgeno:

pH = -log [H+]
Cuando una disolucin contiene cantidades iguales de H+ y OH-, se dice que es neutra y se define la neutralidad como pH 7 (es decir, [H+] es igual a 1 x 10-7 M). Las soluciones con valores de pH menores de 7 (es decir, [H+] mayores de 1 x 10-7 M) son cidas. Aquellas con valores de pH mayores de 7 (es decir, [H+] menores de 1 x 10-7 M) son bsicas o alcalinas.

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Cuando una sustancia inica o polar se disuelve en agua, puede cambiar el nmero relativo de H + y OH-. Las disoluciones con un exceso de H+ son cidas, mientras que aquellas con un nmero mayor de OH- son bsicas. La concentracin del ion hidrgeno vara en un intervalo muy amplio: corrientemente entre 100 y 10-14.M, lo cual proporciona la base de la escala de pH (pH = -log[H+]) (McKee y McKee, 2003). Los cidos son electrolitos que producen iones hidrgeno (H+) en solucin. Los solutos que producen iones al disolverse en agua se denominan electrlitos. Los iones, al desplazarse por la solucin, conducen la corriente elctrica. Cuando la solucin slo contiene iones y no molculas de soluto, se dice que es un electrlito fuerte (Timberlake, 1997). Por ejemplo, el gas cloruro de hidrgeno, un compuesto covalente (molecular), reacciona con el agua para formar cido clorhdrico, HCl (ac), un cido fuerte que se encuentra formado de iones H+ y Cl-. La ionizacin del HCl (g) en agua se expresa como sigue:

HCl

H2O

H+ + Cl-

Los cidos existen en forma de compuestos moleculares hasta que se disuelven en agua y producen iones hidrgeno. En realidad, el ion hidrgeno no existe por s slo en el agua. Se transfiere un protn de la molcula de HCl a una molcula de agua y se forma un ion hidronio (H3O+) y un ion cloruro (Cl-). La formacin de iones a partir de compuestos moleculares se llama reaccin de ionizacin (Figura 2.15). Por conveniencia se emplea el smbolo H+ para los cidos, pero hay que recordar que el ion H3O+ es el que se encuentra presente en las soluciones cidas (Timberlake, 1997). Las propiedades de los cidos segn Timberlake (1997) son: - Producen iones hidrgeno (H+) en solucin. - Tienen sabor agrio. - Transforman el papel indicador azul en rojo. - Son electrolitos. - Reaccionan con las bases. Figura 2.15. Reaccin de ionizacin

Fuente: Timberlake (1997) Las bases son compuestos inicos que se caracterizan por separarse en un ion metlico y un ion hidroxilo (OH-) al disolverse en agua. Por ejemplo, el hidrxido de sodio (NaOH) es una base que se disocia en agua produciendo iones Na+ y OH-, como se muestra a continuacin:
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NaOH
Hidrxido de sodio

H2O

Na+ + OHin sodio in hidroxilo

Las propiedades de las bases, segn Timberlake (1997), son: - Producen iones hidroxilo (OH-) en solucin. - Tienen sabor amargo. - Producen sensacin resbalosa, similar al jabn. - Hacen que el papel indicador rojo cambie a color azul. - Son electrolitos. - Reaccionan con los cidos. En el Cuadro 2.3 se muestra la comparacin de [H+] y [OH-] y los valores correspondientes de pH a 25 C. Cuadro 2.3. Comparacin de [H+] y [OH-] y los valores correspondientes de pH a 25 C

pH
0 1 2 3 4 5 6

[H+], M
100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

[OH-],M
10-14 10-13 10-12 10-11 10-10 10-9 10-8

cido

7
8 9 10 11 12 13 14

10-7
10-8 10-9 10-10 10-11 10-12 10-13 10-14

10-7
10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 100 Neutro

Bsico

Fuente: Modificado de Timberlake (1997) El pH de algunos fluidos fisiolgicos y lquidos se muestra en el Cuadro 2.4.

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Cuadro 2.4. pH de algunos fluidos fisiolgicos y lquidos

Fluido
Bilis Agua de mar Plasma sanguneo Fluido intersticial Fluido intracelular muscular Fluido intracelular heptico Jugo gstrico Jugo pancretico NaOH 1.0 M

pH

Fluido

pH

8.0 Agua para beber 7.2 7.0-7.5 Saliva 6.3-6.8 7.4 Leche de vaca 6.6 7.4 Orina 5.8 6.1 Zumo de tomate 4.3 6.9 Refresco a base de cola 2.8 1.2-3.0 Zumo de limn 2.3 7.8-8.0 HCl 1.0 M 0 14 Vinagre 2.8 Fuente: Modificado de Lehninger (1983) y Timberlake (1997)

2.6. Aplicacin de la ecuacin de Henderson- Hasselbalch


Para el agua, como cido dbil, el pH de una solucin que contiene un cido dbil se correlaciona con la constante de disociacin de dicho cido. La interrelacin puede establecerse de modo convencional en la ecuacin de Henderson-Hasselbalch, que se desarrolla a continuacin. Un cido dbil, HA, se ioniza:

HA H+ + ALa constante de equilibrio para esta disociacin es:

K = [H+][A-] / [HA]
Despejamos [HA] y obtenemos:

K[HA] = [H+][A-]
Si ambos trminos se dividen entre [A-] obtenemos:

K[HA] / [A-] = [H+]


Si se obtiene el logaritmo de cada trmino obtenemos:

log [H+] = log K ([HA] / [A-]) = log K + log ([HA] / [A-])


Se multiplica todo por -1 y obtenemos:

-log [H+] = -log K -log ([HA] / [A-])


Se sustituye el log de [H+] y -log K, por el pH y la pK, respectivamente:

pH = pK - log ([HA] / [A-])

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En seguida, el ltimo trmino se invierte para eliminar el signo negativo, obteniendo la ecuacin de Henderson- Hasselbalch:

pH = pK + log ([A-]/[HA])
La ecuacin de Henderson-Hasselbalch es una ecuacin con gran valor predictivo en los equilibrios protnicos y describe el comportamiento de los cidos dbiles y amortiguadores (Murray et al., 2001). Un ejemplo del uso de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch lo muestra McKee y McKee (2003) calculando el pH de una mezcla de cido actico 0.25 M y acetato sdico 0.1 M. El pKa del cido actico es 4.76. La solucin es:

pH = pKa + log ([acetato]/[cido actico])


Y resolviendo queda:

pH = 4.76 + log (0.1/0.25) = 4.76 0.398 = 4.36


De forma general, la ecuacin de Henderson-Hasselbalch se puede escribir como lo hace Hicks (2003):

pH = pKa + log ([aceptor de protones]/[dador de protones])


La relacin entre el pH de una disolucin y el pK de un cido dbil permite que el pK se pueda medir con facilidad mediante titulacin. La titulacin consiste en aadir alcuotas de una disolucin valorada de una base fuerte a una solucin diluida de un cido dbil, como el actico, mientras se cuantifica el pH de la disolucin tras cada adicin de base, hasta que en el punto de equivalencia todo el cido se encuentre en forma de base conjugada; por lo general, en estas titulaciones se usa como base el hidrxido de sodio, que neutraliza un protn del cido. El equilibrio de esta reaccin se halla muy desplazado hacia la derecha:

HA + OH-

A- + H2O

Cada vez que se aade una alcuota de una base, se mide el pH de la disolucin. Los resultados de la titulacin de cido actico (CH3COOH) se representa grficamente en una curva, trazada en una grfica en la que los valores de pH se presentan en el eje de las ordenadas (y), y la adicin de NaOH en la de las abscisas (x). El punto medio de la meseta corresponde al punto en el cual la mitad del cido dbil, HA, se ha transformado en la especie bsica conjugada, A-. Al sustituir estos valores en la ecuacin de Henderson-Hasselbalch se advierte que esto ocurre a un pH igual al valor de pK del cido dbil, es decir:

[A-] = [HA], [A-]/[HA] = 1, y log 1=0


En la Figura 2.16 se muestra la curva de titulacin a 25 C de 50 ml de cido actico (CH 3COOH) 0.10M con una disolucin de hidrxido de sodio (NaOH (ac)) 0.10 M. La pendiente de la curva cambia en el punto medio de la primera meseta, y en este punto se cumple que [A-] =[AH] y pH=pK. En el punto de equivalencia todas las molculas de cido actico se han convertido en base conjugada, el anin acetato (CH3COO-), por la adicin de 50 ml de hidrxido de sodio 0.10 M.

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Muchos cidos y bases de importancia biolgica tienen dos o ms grupos ionizables y, por ende, las curvas de titulacin son ms complejas que las del cido actico. En la curva de titulacin del cido fosfrico (H3PO4) (Figura 2.17), presente en los fluidos celulares de todos los organismos, se diferencian tres regiones, las cuales corresponden a las disociaciones de las especies H3PO4, H3PO4- y HPO42- , cuyos valores de pK a 25 C son 2.12, 7.21 y 12.67, respectivamente. Para medir la concentracin relativa de cada una de las especies inicas en las clulas a pH 7.0, podran resolverse simultneamente las ecuaciones que implican la disociacin de todas las formas del cido fosfrico (Hicks, 2003). Figura 2.16. Curva de titulacin del cido actico

Fuente: Hicks (2003) El pKa para el grupo ms cido es el pK1. El pKa del siguiente grupo ms cido es pK2. El valor de pKa del tercer grupo ms cido es pK3. A pH bajo, la mayora de las molculas se encuentran totalmente protonadas. Al aadir NaOH se liberan los protones, en orden decreciente de acidez, ionizndose el ltimo protn menos cido (con el mayor valor de pKa). Cuando el pH es igual a pK1, en la disolucin hay cantidades iguales de H3PO4 y H2PO4-. Otro ejemplo mostrado por McKee y McKee (2003) del uso de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch es el siguiente problema: calcular el cociente de cido lctico y lactato que se requiere en un sistema amortiguador de pH 5.0, el pKa del cido lctico es de 3.86. La solucin se muestra a continuacin: La ecuacin: puede reagruparse a

pH = pKa + log ([lactato] / [cido lctico]) log ([lactato]/[cido lctico]) = pH-pKa = 5.0-3.86 = 1.14

Por lo tanto, el cociente que se requiere es:

[lactato]/[cido lctico] = antilog 1.14 = 13.8


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Figura 2.17. Titulacin de una disolucin de cido fosfrico (H3PO4) con hidrxido de sodio (NaOH) a 25 C

Fuente: McKee y McKee (2003) El resultado del ejercicio anterior indica que para que el amortiguador lactato tenga un pH de 5.0, los componentes lactato y cido lctico deben estar presentes con un cociente 13.8 a 1 (McKee y McKee, 2003).

2.7. Soluciones amortiguadoras


El mantenimiento del pH del medio interno en los seres vivos es de vital importancia. El metabolismo intermediario genera una gran cantidad de cidos, pese a lo cual, la concentracin de hidrogeniones (H+) libres va a permanecer fija dentro de lmites estrechos debido a los tampones, buffers o amortiguadores fisiolgicos que van a actuar de forma inmediata y debido a los mecanismos de regulacin pulmonar y renal que son en ltima instancia los responsables del mantenimiento del pH (Del Caizo, 2007; Ruiz et al., 2007). La concentracin de hidrogeniones influye en la estructura y actividad de las protenas, en la distribucin de iones en el organismo y en la actividad de hormonas, drogas y otros iones. Se llama amortiguador a cualquier sustancia capaz de unirse de manera reversible a los iones hidrgeno. La forma general de la reaccin de amortiguamiento, mostrada por Guyton y Hall (2002), es:

Amortiguador - + H+

Amortiguador H

En este ejemplo, un H+ libre se combina con el amortiguador para formar un cido dbil (amortiguador H) que puede permanecer como una molcula no disociada o volver a disociarse en amortiguador y H+. Cuando aumenta la concentracin de iones hidrgeno, la reaccin se desplaza hacia la derecha, con lo que se incrementa la cantidad de iones hidrgeno que son captados por el amortiguador, en tanto existan cantidades disponibles de ste. Por el contrario, cuando la concentracin de iones hidrgeno disminuye, la reaccin se desva hacia la izquierda, liberando los iones hidrgeno del amortiguador. De esta forma se consiguen minimizar los cambios de la concentracin de iones hidrgeno (Guyton y Hall, 2002).

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El pH de una disolucin amortiguadora (buffer o tampn) permanece casi constante tras la adicin de pequeas cantidades de cidos y bases. La capacidad de una disolucin para minimizar los cambios de pH producidos por la adicin de un cido o una base se llama capacidad de amortiguacin. Los fluidos intracelulares y extracelulares poseen esta capacidad, que se necesita para el mantenimiento de la vida en un organismo. La eficacia amortiguadora de una disolucin es mxima cuando las concentraciones de las especies cidas (HA) y bsica (A-) son iguales; es decir, cuando el pH de la disolucin es igual al pK del cido dbil (Hicks, 2003). El pK representa el valor de pH en el que un sistema tampn o amortiguador puede alcanzar su mxima capacidad amortiguadora (Del Caizo, 2007). Esta propiedad puede explicarse mediante la ecuacin de Henderson- Hasselbalch; si se aade un cido fuerte a la disolucin amortiguadora, la base conjugada del amortiguador se encarga de neutralizar los hidrogeniones, o bien, si se aade una base fuerte a la disolucin amortiguadora, la estructura cida del amortiguador se encarga de neutralizar los iones hidroxilo (Hicks, 2003), tal y como se muestra en la Figura 2.18. Figura 2.18. Accin de amortiguamiento

Fuente: Modificado de Garret y Grisham (1999) El mantenimiento de un pH constante, un ejemplo de homeostasis, es importante porque el pH influye en gran medida en la velocidad de las reacciones qumicas. Los animales resisten cambios fuertes y repentinos en el pH de la sangre y otros fluidos corporales por medio de amortiguadores o buffers, que son combinaciones de formas dadoras de H+ y aceptoras de H+ de cidos o bases dbiles (Curtis y Barnes, 2001). Existen tres sistemas fundamentales que regulan la concentracin de iones hidrgeno en los lquidos corporales para evitar tanto la acidosis como la alcalosis y son: los sistemas qumicos de amortiguamiento acidobsico de los lquidos corporales que se combinan de forma inmediata con el cido o con la base para evitar variaciones excesivas de la concentracin de iones hidrgeno, el centro respiratorio que regula la eliminacin del CO2 (y por ende del H2CO3) del lquido extracelular, y el tercer sistema son los riones, que pueden excretar una orina tanto cida como alcalina, lo que permite un reajuste de la concentracin de iones hidrgeno en el lquido extracelular hacia la normalidad en casos de acidosis y alcalosis. En pocas palabras, la regulacin del pH en el organismo se realiza con el sistema de fosfatos, de carbonatos y mediante las protenas. Cuando se produce un cambio de la concentracin de iones hidrgeno, los sistemas amortiguadores de los lquidos corporales reaccionan en una fraccin de segundo para contrarrestar estos cambios. Estos sistemas amortiguadores no eliminan ni aaden iones hidrgeno al organismo, ya que se limitan a atraparlos hasta que puede restablecerse el equilibrio.
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La segunda lnea de defensa, el aparato respiratorio, acta tambin en pocos minutos, eliminando CO2 y, por tanto, H2CO3 del organismo. Estas dos primeras lneas de defensa impiden que la concentracin de iones hidrgeno cambie demasiado hasta que comienza a funcionar la tercera lnea de defensa de respuesta ms lenta, es decir, los riones, que s pueden eliminar del organismo el exceso de cido o base. Aunque la respuesta de los riones es relativamente lenta en comparacin con las otras defensas, ya que requiere un intervalo de horas o varios das, es con mucho, el sistema regulador acidobsico ms potente (Guyton y Hall, 2002).

- Sistema amortiguador bicarbonato:


El principal sistema buffer en el torrente sanguneo es el par cido-base: H2CO3 (cido carbnico) HCO3- (bicarbonato) como lo seala. El cido dbil H2CO3 se disocia en H+ e iones HCO3-:
H2O

pK = 6.1 Dador de H+
H2O

CO2

H2CO3

Aceptor de H+

H++HCO3-

El sistema buffer H2CO3 - HCO3- resiste los cambios de pH que podran resultar de la adicin de pequeas cantidades de cidos o bases, absorbindolos, por as decirlo. Por ejemplo, si se aade una pequea cantidad de H+ al sistema, ste se combina con el aceptor de H+ del HCO3- para formar H2CO3 (Curtis y Barnes, 2001). Esta reaccin quita H+ aadido y mantiene el pH cerca de su valor original. Si se aade una pequea cantidad de OH-, se combina con el H+ para formar H2O. El control del pH de la sangre es an ms riguroso por el hecho de que el H2CO3 est en equilibrio con el dixido de carbono (CO2) disuelto en ella (Curtis y Barnes, 2001):

H2O + CO2

H2CO3

El CO2 disuelto en la sangre, a su vez, est en equilibrio con el CO2 de los pulmones. Al cambiar su ritmo respiratorio, un individuo puede cambiar la concentracin de HCO3- en la sangre y, as, ajustar el pH de sus fluidos internos (Curtis y Barnes, 2001). El CO2 va a ser eliminado por los pulmones sin que se produzca una retencin neta de cido, por lo que se denomina cido voltil (Del Caizo, 2007). Por otra parte, el metabolismo va a generar una serie de cidos no voltiles, tambin denominados cidos fijos que representan de un 1-2% de la carga cida y cuya principal fuente es el catabolismo oxidativo de los aminocidos sulfurados de las protenas. Estos cidos fijos no pueden ser eliminados por el pulmn siendo el rin el principal rgano responsable en la eliminacin de los mismos (Ruiz et al., 2007). El incremento de la ventilacin, ocasionado por el descenso del pH que estimula a los quimiorreceptores, elimina CO2 del lquido extracelular, lo que por la accin de masas, reduce la concentracin de iones hidrgeno. Por el contrario, la disminucin de la ventilacin, ocasionado por un aumento del pH que inhibe a los quimiorreceptores (Del Caizo, 2007), aumenta el CO2 y, elevando as la concentracin de iones hidrgeno en el lquido extracelular. A continuacin se muestra un resumen del sistema amortiguador de carbonato (SISIB, 2007):

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pK = 6.1

H2O + CO2
Eliminacin por pulmones Baja [H+] Menor ventilacin

H2CO3

H+ + HCO3Eliminacin por orina Alta [H+] Mayor ventilacin

- Sistema amortiguador fosfato:


Aunque el sistema amortiguador fosfato no es muy importante en el lquido extracelular, s interviene activamente en el amortiguamiento del lquido de los tbulos renales y de los lquidos intracelulares. Los elementos principales de este sistema son H2PO-4 (fosfato dicido) y HPO=4 ( HPO42-, fosfato cido): pK = 6.8

H2PO-4

H+ + HPO42-

Cuando se aade a una mezcla de estas sustancias un cido fuerte como el HCl, la base HPO=4 acepta el hidrgeno y se convierte en H2PO-4:

HCl + Na2HPO4

NaH2PO4 + NaCl

El resultado de esta reaccin es que el cido fuerte, HCl, es sustituido por una cantidad adicional de un cido dbil, el NaH2PO4, con lo que se minimiza la disminucin del pH. Cuando se aade al sistema amortiguador una base fuerte como el NaOH, el H2PO-4 amortigua los grupos OH-, formndose cantidades adicionales de HPO=4 + H20:

NaOH + NaH2PO4

Na2HPO4 + H2O

En este caso, una base dbil, Na2HPO4 sustituye a otra fuerte, NaOH, lo que hace que el aumento del pH sea slo ligero. La capacidad de amortiguamiento total del sistema fosfato en el lquido extracelular es muy inferior a la del sistema bicarbonato. El amortiguador fosfato es especialmente importante en los lquidos tubulares de los riones, ya que el fosfato suele encontrarse en los tbulos. La concentracin de fosfato en el lquido intracelular es muy superior a la que existe en el lquido extracelular. El pH del lquido intracelular es menor que el del extracelular (Guyton y Hall, 2002, McKee y McKee, 2003)

- Sistema amortiguador de protenas:


Gracias a sus elevadas concentraciones, sobre todo en el interior de las clulas, las protenas son uno de los amortiguadores ms abundantes del organismo. La membrana celular permite un cierto grado de difusin de los iones hidrgeno y bicarbonato. El CO2 difunde rpidamente a travs de todas las membranas celulares. Esta difusin de los elementos del sistema amortiguador bicarbonato produce cambios de pH de los lquidos intracelulares que siguen a los del pH extracelular. As, los sistemas amortiguadores del interior de las clulas ayudan a evitar los cambios de pH de los lquidos extracelulares, aunque pueden pasar varias horas hasta que logran su eficacia mxima (Guyton y Hall, 2002). Los grupos amino y carboxilo de los radicales de los aminocidos de las protenas actan regulando el pH, ya sea aceptando o cediendo protones (Figura 2.19).
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Figura 2.19. Accin amortiguadora del grupo imidazol de las protenas

Fuente: Lehninger (1983) En los glbulos rojos, la hemoglobina que es descrita por Del Caizo (2007) como la protena ms abundante de la sangre, acta como un amortiguador importante:

H+ + HB

HHb

Guyton y Hall (2002) mencionan que entre un 60 y un 70% del amortiguamiento qumico total de los lquidos corporales se produce en el interior de las clulas y que, en su mayor parte, depende de las protenas intracelulares. En el caso de los glbulos rojos la lentitud del movimiento de los iones hidrgeno y bicarbonato, a travs de las membranas celulares, suele retrasar varias horas el momento en que la protenas intracelulares alcanzan su mxima capacidad de amortiguamiento de las anomalas acido-bsicas extracelulares (Guyton y Hall, 2002). En el interior del glbulo rojo, por accin de la anhidrasa carbnica, el CO2 se va a convertir en cido carbnico (H2CO3) que se disocia dando un H+ que rpidamente ser tamponado por la hemoglobina, y bicarbonato que saldr fuera del hemate en intercambio con iones cloro (Del Caizo, 2007). El rin es el principal rgano implicado en la regulacin del equilibrio cido-base, ya que es la principal va de eliminacin de la carga cida y de los metabolitos cidos patolgicos y es el responsable de mantener la concentracin plasmtica de bicarbonato por su capacidad para reabsorber y generar bicarbonato de modo variable en funcin del pH de las clulas tubulares renales (Del Caizo, 2007). La excrecin de una orina cida reduce la cantidad de cido en el lquido extracelular, mientras que la excrecin de una orina alcalina elimina bases de los lquidos extracelulares (Guyton y Hall, 2002). El bicarbonato es filtrado continuamente hacia la luz del tbulo renal (generalmente asociado a iones Na+) como se muestra en la Figura 2.20, de modo que en el filtrado glomerular intacto la concentracin de bicarbonato es prcticamente igual a la del plasma, de ah la importancia del proceso de reabsorcin del mismo. Prcticamente todo el bicarbonato filtrado va a ser reabsorbido. Este proceso tiene lugar fundamentalmente en el tbulo contorneado proximal (TCP) donde se reabsorbe un 85%. El resto es reabsorbido en el asa de Henle (10-15%) y en el tbulo contorneado distal (TCD) y colector. La reabsorcin de bicarbonato se desencadena por la secrecin de H+ a la luz del TCP en intercambio con iones Na+ por accin de un antiportador Na+ - H+ lo que permite mantener la neutralidad elctrica. Los H+ secretados a la luz tubular reaccionan con el bicarbonato filtrado formando cido carbnico que se disocia en CO2 y agua por accin de la anhidrasa carbnica (A.C.). El CO2 producido puede difundir de nuevo al interior de la clula tubular donde reacciona con agua transformndose en cido carbnico , el cul se va a disociar en bicarbonato que se reabsorber hacia el capilar peritubular, y un hidrogenin
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que es secretado y amortiguado por el bicarbonato filtrado. De este modo los hidrogeniones se eliminan formando parte de una molcula de agua, y por tanto sin acidificar la orina. En este proceso de intercambio Na+-H+ los iones potasio pueden competir con los hidrogeniones, de manera que en una situacin de hiperpotasemia se va a intercambiar ms K+ que H+ por Na+ por lo que al secretarse pocos H+ se reabsorber poco bicarbonato. En situaciones de hipopotasemia ocurrir lo contrario, es decir, aumentar la recuperacin de bicarbonato y la excrecin de hidrogeniones. Figura 2.20. Mecanismos renales implicados en la excrecin de hidrogeniones y reabsorcin de bicarbonato

Fuente: Ruiz et al. (2007) Si a pesar del proceso de reabsorcin la concentracin de bicarbonato plasmtico permanece por debajo del valor normal, en las clulas tubulares se va a sintetizar bicarbonato (Figura 2.21). Esto sucede fundamentalmente en el tbulo contorneado distal a partir del CO2 procedente de la sangre o del propio metabolismo de la clula tubular por accin de la anhidrasa carbnica (A.C.) El H2CO3 as generado se disocia en bicarbonato que se reabsorbe hacia la sangre y un hidrogenin que es eliminado. En este caso los hidrogeniones s van a acidificar la orina, de ah la gran importancia de los amortiguadores urinarios. Aproximadamente un tercio de los H+ secretados van a ser titulados sobre fosfato y el resto sobre amoniaco, siendo por tanto la cantidad de cido libre que se elimina por la orina mnima. La produccin renal de amoniaco (NH3) representa aproximadamente un 60% en la eliminacin de H+ asociada a cidos no voltiles. Este se va a producir principalmente por desaminacin de la glutamina en las clulas del tbulo renal y difunde fcilmente a travs de la membrana hacia la luz del tbulo dnde se combina con H+ formando iones amonio (NH4+), un cido muy dbil que es eliminado por la orina (Ruiz et al., 2007).

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El hueso interviene en la amortiguacin de la carga cida captando los H+ en exceso, liberando carbonato a la sangre por disolucin del hueso mineral. El papel ms importante del hueso ocurre en situaciones de acidosis crnica como en la insuficiencia renal crnica. Este sistema se amortiguacin tambin va a intervenir en presencia de una carga bsica a travs del depsito de carbonato en el hueso (Del Caizo, 2007). Figura 2.21. Mecanismos renales de produccin de bicarbonato

Fuente: Ruiz et al. (2007)

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3. Aminocidos y protenas
3.1. Caractersticas generales de los Aminocidos
Los aminocidos son los precursores moleculares de las protenas (Stryer et al., 2003), ya que las protenas son polmeros de aminocidos, los que varan en cuanto cantidad y tipo entre protena y protena (Maynard et al., 1998). Bohinski (1991) y Murray et al. (2001) mencionan que existen alrededor de 300 aminocidos diferentes de origen natural. Muchos de ellos se observan en determinadas formas de vida, algunos slo aparecen en una especie. Sin embargo, todos los organismos usan slo 20 de ellos para la biosntesis de protenas. -aminocidos son los monmeros que se combinan para formar las protenas y su frmula general se muestra en la Figura 3.1. El grupo amino est unido al carbono que es el carbono contiguo al grupo carboxilo. Al carbono de cada aminocido tambin estn unidos un tomo de hidrgeno y una cadena lateral (R). Los distintos aminocidos se diferencian por sus cadenas laterales. El pKa de los grupos carboxilo y amino de los -aminocidos es aproximadamente 2 y 10, respectivamente (Mathews et al., 2005). Figura 3.1. Frmula general de los -aminocidos

Fuente: Mathews et al. (2005) Los aminocidos son derivados de los cidos grasos de cadena corta y contienen un grupo bsico amino (-NH2) y un grupo carboxilo cido (-COOH). En la naturaleza los aminocidos asumen la configuracin L, comparados con la L-glicerosa (Figura 3.2). La mayora de ellos son solubles en agua y todos, excepto la glicina, muestran actividad ptica. Ya que tienen tanto el grupo amino como el grupo carboxilo son anfteros, pues asumen propiedades cidas o bsicas dependiendo del pH del medio. En un pH cido el aminocido es un catin, mientras que en un pH bsico es un anin, y al pH en que es elctricamente neutro es un ion dipolar y se llama zwitterion (Figura 3.2). Este pH se llama punto isoelctrico del aminocido (Maynard et al., 1998).

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Figura 3.2. Frmula de la L-glicerosa, L-aminocido y su forma zwitterion

Fuente: Maynard et al. (1998)

3.1.1. Clasificacin
Los 20 aminocidos contienen, en sus 20 cadenas laterales diferentes, una notable coleccin de grupos qumicos, por ende, estos monmeros permiten a las protenas exhibir una variedad tan grande de estructuras y propiedades. Existen varias clases diferentes de cadenas laterales, que se distinguen por sus caractersticas qumicas dominantes. Dichas caractersticas incluyen si son hidrofbicos o hidroflicos, polar o no polar, presencia o ausencia de grupos ionizables, etc. (Mathews et al., 2005). Aminocidos con grupos R no polares o hidrfobos: son la alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptfano y metionina, cuya frmula se muestra en la Figura 3.3. Los aminocidos ms hidrfobos, como la isoleucina, se encuentran normalmente en el interior de las molculas proteicas, donde estn protegidos del agua. El radical no se ioniza, slo el grupo amino y carboxilo. Figura 3.3. Aminocidos no polares

Fuente: Modificado de Mathews et al. (2005) Aminocidos con grupos R polares sin carga: son la glicina, serina, treonina, tirosina, cistena, asparagina y glutamina (Figura 3.4). De estos aminocidos, algunos que tienen el grupo OH solamente se disocian cuando se encuentran en el fenol como la treonina y tirosina y la cistena que tiene el grupo SH.

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Figura 3.4. Aminocidos con grupos R polares sin carga

Fuente: Modificado de Mathews et al. (2005) En el caso de la cistena, su cadena lateral puede ionizarse a pH ligeramente elevado, como se muestra en la Figura 3.5. Figura 3.5. Ionizacin de la cadena lateral de la cistena

Fuente: Mathews et al. (2005) En la cistena puede producirse una oxidacin entre pares de cadenas laterales de cistena para producir enlaces disulfuro, cuyo resultado del enlace de las dos cistenas se denomina cistina (Figura 3.6). Figura 3.6. Formacin de la cistina

Fuente: Mathews et al. (2005)


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La tirosina puede ionizarse a pH elevado, como se muestra en la Figura 3.7. Figura 3.7. Ionizacin de la tirosina

Fuente: Mathews et al. (2005) El cido asprtico y cido glutmico estn acompaados por sus amidas, la asparagina y la glutamina que tienen cadenas laterales sin carga, aunque son claramente polares. Aminocidos con grupos R cargados positivamente: son la histidina, lisina y arginina (Figura 3.8). Llevan grupos bsicos en sus cadenas laterales. Dado que la cadena lateral de la histidina puede intercambiar protones cerca del pH fisiolgico, suele participar a menudo en la catlisis enzimtica donde hay transferencia de protones. La lisina y la arginina son aminocidos ms bsicos, sus cadenas laterales estn siempre cargadas positivamente a pH fisiolgico. Los aminocidos bsicos son muy polares y en consecuencia pueden hallarse normalmente en las superficies exteriores de las protenas, donde pueden hidratarse por el entorno acuoso que las rodea. Figura 3.8. Aminocidos bsicos

Fuente: Modificado de Mathews et al. (2005) Aminocidos con grupos R cargados negativamente: son el cido asprtico y cido glutmico (Figura 3.9). Son los nicos aminocidos que llevan cargas negativas a pH 7.0. Los
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valores de pKa de los aminocidos cidos son tan bajos que cuando se incorporan a las protenas, la carga negativa de la cadena lateral se conserva en condiciones fisiolgicas. Por lo tanto, se suele denominar a estos residuos de aminocidos aspartato y glutamato, esto es, sus bases conjugadas en lugar de los cidos. Como los aminocidos bsicos, los aminocidos cidos tambin son claramente hidrfilos y tienden a encontrarse en la superficie de las molculas de protenas, en contacto con el agua que los rodea (Mathews et al., 2005). Figura 3.9. Aminocidos cidos

Fuente: Modificado de Mathews et al. (2005) Existen ciertos aminocidos modificados. Todos los aminocidos anteriores estn codificados en el DNA y se incorporan directamente en las protenas. Hay algunos aminocidos que se modifican qumicamente una vez que se ensamblan en las protenas. En la Figura 3.10 se muestran estos aminocidos con el grupo modificador en rojo. Figura 3.10. Aminocidos modificados

Fuente: Mathews et al. (2005) En el Cuadro 3.1 se describen las caractersticas funcionales de los grupos R de los aminocidos.

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Cuadro 3.1. Caractersticas funcionales de los grupos R de los aminocidos

Aminocido
Glicina Alanina Valina Leucina Isoleucina Serina Treonina Cistena Metionina Fenilalanina Tirosina Triptfano cido asprtico Asparagina cido glutmico Glutamina Arginina Histidina Lisina Prolina

Caractersticas
Apolar, neutro, no esencial Apolar, neutro, no esencial Apolar, neutro, esencial Apolar, neutro, esencial Apolar, neutro, esencial Polar, neutro, no esencial Polar, neutro, esencial Polar, dbilmente cido, no esencial Polar, neutro, esencial Apolar, neutro, esencial Polar, no esencial, dbilmente cido Apolar, neutro, esencial Polar cido, no esencial Polar, neutro, no esencial Polar cido, no esencial Polar, neutro, no esencial Polar, bsico, esencial Polar, dbilmente bsico, esencial Polar, bsico, esencial Apolar, neutro, no esencial Fuente: Bohinski (1991)

3.1.2. Aminocidos esenciales y no esenciales


Los aminocidos que no se sintetizan en los tejidos animales de la mayora de las especies en cantidades suficientes para llenar las necesidades metablicas se denominan esenciales o indispensables y deben suministrarse en la dieta, mientras que aquellos que no se necesitan en la dieta debido a que tienen una sntesis tisular apropiada, se denominan no esenciales o dispensables (Cuadro 3.2). La arginina se necesita en la dieta de algunas especies para obtener un crecimiento mximo, pero no apta para el mantenimiento. En aquellos animales cuya microflora gastrointestinal sintetiza protenas a partir de fuentes de Nitrgeno no proteico (NNP) (rumiantes y otros herbvoros), el equilibrio de los aminocidos de la dieta tiene poca importancia nutricional, con excepcin de aquellos animales de alta productividad; las cantidades de nitrgeno y de los carbohidratos que se encuentran disponibles con facilidad son especialmente importantes (Church et al., 2004). En general, los aminocidos esenciales son los mismos para todas las especies pecuarias, slo hay diferencias en las cantidades y proporciones requeridas. En el caso de dos aminocidos esenciales, el requerimiento puede cubrirlo en forma parcial un aminocidos no esencial. La cistina puede proporcionar hasta 50 % del requerimiento de metionina y de hecho en ocasiones se habla de un requerimiento global de aminocidos azufrados; igual sucede en el caso de la tirosina y la fenilalanina (Shimada, 2003).

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Cuadro 3.2. Aminocidos esenciales y no esenciales

Aminocidos esenciales
Arginina Fenilalanina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Treonina Triptfano Valina

Aminocidos no esenciales

cido asprtico cido glutmico Alanina Asparagina Cistena Cistina Glicina* Glutamina* Prolina Serina* Taurina Tirosina *Esenciales para las aves

Fuente: Shimada (2003) La L-glutamina est clasificado como un aminocido condicionalmente esencial. Esto significa que bajo determinadas circunstancias el organismo puede sintetizar suficiente L-glutamina para cubrir la demanda fisiolgica. Existen as, aminocidos condicionalmente esenciales, que bajo ciertas circunstancias son necesarios suministrarlos en la dieta animal (Reeds, 2000). Los gatos cuya alimentacin es deficiente en arginina rpidamente entran en un estado comatoso por intoxicacin amoniacal, aunque lo anterior es reversible si se suministra arginina u ornitina en la dieta. Los pollos tambin necesitan prolina en la dieta por su capacidad limitada para sintetizarlo proveniente del cido glutmico (DMello, 1994).

3.1.3.

Isomera

Las frmulas en el plano no evidencian algunas de las caractersticas importantes de las estructuras de los aminocidos. Los enlaces alrededor del carbono son tetradricos (Mathews et al., 2005). En la Figura 3.11 las cuas slidas representan enlaces que sobresalen de la pgina, mientras que las cuas rayadas representan enlaces que se extienden hacia el fondo de la pgina. Los estereoismeros pticos se llaman enantimeros (Hicks, 2003). Cuando un tomo de carbono tiene cuatro sustituyentes distintos fijados a l, formando una molcula asimtrica, se dice que el carbono es quiral, un centro de quiralidad o un estereocentro o un carbono asimtrico. Si una molcula contiene un carbono asimtrico, existen dos estereoismeros distinguibles; se trata de imgenes especulares (Figura 3.11) que no se pueden superponer una a la otra, o enantimeros como los de la alanina de la Figura 3.12, y se denominan enantimeros L y D (o ms recientemente S-R). Aunque las reservas de aminocidos libres existentes en los mamferos constan casi exclusivamente de ismeros L, recientemente se demostr la presencia de dos D-aminocidos libres: la D-serina en el encfalo anterior y el D-aspartato en el encfalo y la periferia. Sin embargo, en las protenas de los mamferos slo se han detectado los ismeros L de los aminocidos (Murray et al. 2001).

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Figura 3.11. Estereoisomera ptica de la asparagina

Fuente: Hicks (2003) Los enantimeros L y D pueden distinguirse entre s experimentalmente debido a que sus soluciones rotan el plano de la luz polarizada en direcciones opuestas. Por esta razn, los enantimeros se llaman a veces ismeros pticos. Todos los aminocidos, excepto la glicina, pueden existir en las formas D y L, ya que en todos los casos el carbono es quiral, y en la glicina dos de los grupos unidos al carbono son iguales (H), con lo que se elimina la quiralidad. Figura 3.12. Isomera de los aminocidos

Fuente: Mathews et al. (2005) Todos los aminocidos que incorporan los organismos a las protenas son de la forma L. La mayor parte de los polisacridos naturales emplean azcares D, al igual que el DNA y RNA. Los aminocidos D existen en la naturaleza pero nunca se hallan en las protenas (Mathews et al., 2005).

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Algunos aminocidos con importancia biolgica que no se hallan en las protenas se muestran en el Cuadro 3.3.

3.1.4. Anfolito, disociacin y switterin


Los grupos amino y carboxilo se pueden ionizar, y dicha caracterstica confiere a estas molculas orgnicas la capacidad de actuar como reguladoras del pH, o como sustancias amortiguadoras o buffer (Cuadro 3.4). La presencia de regiones polares facilitan la formacin de enlaces dbiles, como las interacciones electrostticas y los puentes de hidrgeno con el agua, orientados hacia la fase acuosa; mientras que las regiones no polares inducen la creacin de interacciones hidrfobas, lo cual estabiliza una conformacin especfica, indispensable para que una protena cumpla una funcin determinada (Hicks, 2003). Cuadro 3.3. Aminocidos con importancia biolgica que no se hallan en las protenas

Fuente: Mathews et al. (2005) Los anfolitos son compuestos orgnicos con carga positiva y negativa (Bohinski, 1991). Es decir, un anfolito es una molcula que contiene grupos con valores de pKa cidos y bsicos. Un anfolito con igual nmero de cargas positivas y negativas, se denomina zwitterion (Figura 3.13). Recordando, el punto isoelctrico (pI) es el pH en que la carga es cero. Las molculas grandes como las protenas pueden tener muchos grupos cidos o bsicos y se denominan polianflitos (Mathews et al., 2005).
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Los aminocidos en disolucin a pH neutro existen predominantemente como iones dipolares, tambin llamados zwitteriones. En la forma dipolar, el grupo amino est protonado (-NH3+) y el grupo carboxlico desprotonado (-COO-). El estado de ionizacin de un aminocido vara con el pH. En disolucin cida (por ejemplo, pH 1.0), el grupo amino est protonado (-NH3+) y el grupo carboxilo no est disociado (-COOH). Cuando se eleva el pH, el grupo carboxlico es el primero en ceder un protn, ya que su pKa es cercano a 2. La forma dipolar persiste hasta que el pH se acerca a 9.0, cuando el grupo amino protonado pierde un protn (Stryer et al., 2003). Cuadro 3.4. Propiedades de los aminocidos de las protenas

Fuente: Mathews et al. (2005) Figura 3.13. Forma no inica y zwitterion de los aminocidos

Fuente: Modificado de Garrido (1991) y Mathews et al. (2005)


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El pKa de los grupos carboxilo y amino de los respectivamente. Por consiguiente, en la proximidad del pH neutro, el grupo carboxilato habr perdido un protn y el grupo amino habr capturado un protn, para dar la forma zwitterion (Figura 3.14) (Mathews et al., 2005). Figura 3.14. Reacciones presentes en los aminocidos

Fuente: Stryer et al. (2003) A pH fisiolgico los aminocidos comunes existen como iones dipolares o zwitteriones (Roskoski, 2001). Debido a que los aminocidos contienen grupos ionizables, la forma inica predominante de estas molculas en disolucin depende del pH. La titulacin de un aminocido explica el efecto del pH sobre la estructura del aminocido. La titulacin es una herramienta til para determinar la reactividad de las cadenas laterales de los aminocidos (McKee y McKee, 2003). McKee y McKee (2003) describen por ejemplo a la alanina, un aminocido sencillo con dos grupos titulables (Figura 3.15). Durante la titulacin con una base fuerte como el NaOH, la alanina pierde dos protones de forma escalonada. En una disolucin muy cida (a pH de 0), la alanina se encuentra en la forma sin carga en el grupo carboxilo. En estas circunstancias la carga neta de la molcula es +1, debido a que el grupo de amonio est protonado. El descenso de la concentracin de H+ hace que el grupo carboxilo pierda su protn y se transforme en un grupo carboxilato con carga negativa. En este punto, la alanina no tiene carga neta y es elctricamente neutra. El punto al que se produce estos se denomina punto isoelctrico. Figura 3.15. Titulacin de la alanina

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Debido a que no hay carga neta en el punto isoelctrico, a este pH los aminocidos son menos solubles. El punto isoelctrico de la alanina puede calcularse (McKee y McKee, 2003):

Los valores de pK1 y pK2 de la alanina son, respectivamente, 2.34 y 9.7. Por lo que el valor pI de la alanina es:

Al continuar la titulacin, el grupo amonio pierde su protn, dejando el grupo amino sin carga. La molcula tiene entonces una carga neta negativa debido al grupo carboxilato. Los aminocidos con cadenas laterales ionizables tienen curvas de titulacin ms complejas (Figura 3.16). Por ejemplo, el cido glutmico tiene un grupo carboxilo en la cadena lateral. A pH bajo, el transformarse en grupo carboxilato. El glutamato no tiene ahora carga neta. Al aadir ms base, el segundo grupo carboxilo pierde un protn y la molcula tiene carga -1. La adicin de ms base hace que el ion amonio pierda su protn. En este punto el glutamato tiene una carga neta de -2. Figura 3.16. Titulacin del cido glutmico
K

Fuente: McKee y McKee (2003) El valor de punto isoelctrico para el glutamato es el pH a mitad de camino entre los valores de pKa de los grupos carboxilo, y su frmula desarrollada es:

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Los valores de pKa y punto isoelctrico de los aminocidos en los pptidos y las protenas difieren algo de los aminocidos libres, ya que los grupos carboxilo y amino no estn ionizados sino que estn unidos en forma covalente con los enlaces peptdicos (McKee y McKee, 2003).

3.1.5. Enlace peptdico


La combinacin de un grupo -amino de un aminocido con el grupo carboxilo de un segundo aminocido, con eliminacin de agua, causa la formacin de un enlace peptdico que une un tomo de N a otro de C (Garrido, 1991). El compuesto resultante es un dipptido (Figura 3.17). Este es un enlace covalente (Hicks, 2003), por formacin de un enlace amida (McKee y McKee, 2003). Un tripptido contiene tres residuos de aminocidos, un oligopptido de 25 a 30 residuos de aminocidos (Garrido, 1991) y un polipptido posee ms de 30 aminocidos. Figura 3.17. Formacin de un dipptido

Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003) El enlace peptdico es plano (Figura 3.18). Tanto el carbonilo como los grupos amida sustituidos se encuentran en un plano, y la rotacin alrededor del enlace C-N est prohibida, lo que limita las conformaciones que puede asumir la cadena polipeptdica (Roskoski, 2001). La incapacidad de rotacin del enlace restringe la conformacin del esqueleto polipeptdico y es la causa de la planaridad del enlace. El enlace peptdico no tiene carga, lo que permite a los polmeros de aminocidos unidos por enlaces peptdicos formar estructuras globulares fuertemente empaquetadas (Stryer et al., 2003). Figura 3.18. Reaccin de un enlace peptdico

Fuente: Guyton y Hall (2002)


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El extremo en que se encuentra el grupo amino libre se denomina extremo N-terminal y se considera, por convencin, el comienzo de la cadena polipeptdica. En el otro extremo se sita el grupo carboxilo libre que se denomina C-terminal (Figura 3.19) (Garrido, 1991). Figura 3.19. Extremo N-terminal y extremo C-terminal de una cadena polipeptdica

Fuente: Garrido (1991) Una cadena polipeptdica tiene polaridad porque sus extremos son diferentes: hay un grupo -amino -carboxilo en el otro. Una cadena polipeptdica consiste en una parte, repetida regularmente, llamada la cadena principal o esqueleto y una parte variable constituida por las cadenas laterales distintivas (Figura 3.20). El esqueleto polipeptdico es potencialmente rico en capacidad para formar puentes de hidrgeno. Cada residuo contiene un grupo carbonilo, que es un buen aceptor de puentes de hidrgeno y, con la excepcin de la prolina, un grupo NH que es un buen dador de puentes de hidrgeno. Estos grupos interaccionan entre s y con grupos funcionales de las cadenas laterales para estabilizar estructuras particulares. Figura 3.20. Esqueleto constante (negro) y cadenas laterales variables (verde)

Fuente: Stryer et al. (2003) La mayora de cadenas polipeptdicas naturales contienen entre 50 y 2000 residuos de aminocidos y se conocen comnmente como protenas. En algunas protenas, la cadena polipeptdica lineal posee enlaces cruzados. Los entrecruzamientos ms habituales son los puentes disulfuro, que se forman por la oxidacin de un par de residuos de cistena, resultando en la cistina (Figura 3.21), los puentes disulfuro se presentan ms a menudo en protenas extracelulares. Un enlace peptdico plano tiene dos configuraciones posibles: configuracin trans (los dos tomos de car el mismo lado del enlace peptdico) (Figura 3.22). Casi todos los enlaces en las protenas son trans.

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Figura 3.21. Formacin de cistina

Fuente: Stryer et al. (2003) La preferencia de trans sobre cis puede explicarse por el hecho de que los choques estricos entre los grupos unidos a los tomos de carbono impiden la adopcin de la forma cis, mientras que estos choques no se producen en la forma trans. Figura 3.22. Formas cis y trans

Fuente: Stryer et al. (2003) A diferencia del enlace peptdico, los enlaces entre el grupo amino y el tomo del carbono , y entre el tomo de carbono y el grupo carbonilo son enlaces sencillos puros. Las dos unidades peptdicas adyacentes rgidas pueden girar alrededor de estos enlaces, dando lugar a varias orientaciones. Esta libertad de rotacin alrededor de dos enlaces de cada aminocido permite a las protenas plegarse de forma muy diversa (Stryer et al., 2003). Dado que en el enlace peptdico sucede una deshidratacin, ya que se elimina una molcula de agua, los aminocidos unidos se llaman residuos de aminocidos (McKee y McKee, 2003).

3.2.

Caractersticas generales de las Protenas

Las protenas desempean una gran variedad de funciones: unas transportan y almacenan molculas pequeas; otras constituyen gran parte de la organizacin estructural de las clulas y los tejidos. La contraccin muscular, la respuesta inmunitaria y la coagulacin de la sangre se producen mediante las

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protenas. Tal vez las protenas ms importantes son las enzimas, que son catalizadores que facilitan la variedad inmensa de reacciones del metabolismo. Las protenas no son slo polipptidos: sino que son polipptidos de secuencia definida (Mathews et al., 2005). De todas las molculas que se encuentran en los seres vivos, las protenas son las que tienen las funciones ms diversas participando en la catlisis (enzimas), estructura (proteccin y sostn), movimientos (endocitosis, exocitosis, movimiento ameboide de los leucocitos por la actina y tubulina), defensa (queratina, inmunoglobulinas, fibringeno y trombina en la coagulacin sangunea), regulacin (factores de crecimiento, hormonas), transporte (transportador de glucosa), almacenamiento (reservas de nutrientes), respuesta a las agresiones (secuestrantes de metales txicos, protenas de choque trmico), entre otras (McKee y McKee, 2003). La protena ms abundante en los humanos es la colgena (Roskoski, 2001). En los animales, la colgena es, entre las protenas estructurales, la que presenta mayor distribucin y la ms abundante, al igual que en humanos, ya que el hgado de los animales tiene alrededor de 4% de colgena, el cartlago hialino posee casi 50% de esta fibra de colgena y la dermis tiene 72% de colgena. En todos estos rganos, la colgena proporciona fuerza tensora y resistencia al estiramiento (Banks, 1998). La alteracin de la concentracin o estructura de una protena puede disminuir la funcin celular y conducir a la aparicin de una enfermedad, por ejemplo, la reduccin de la concentracin de insulina o la falla de esta produce diabetes mellitus (Hicks, 2003). Existen procedimientos de separacin para purificar y caracterizar las protenas. Las protenas en disolucin muestran cambios profundos de su solubilidad en funcin del pH, la fuerza inica, las propiedades dielctricas del disolvente y la temperatura (Lehninger, 1983; Laguna y Pia, 2002). Estas variables que son reflejo del hecho de que las protenas son electrolitos de peso molecular muy grande, pueden utilizarse para separar mezclas de protenas, ya que cada protena posee una composicin en aminocidos caracterstica, la cual determina su comportamiento como electrolito. La solubilidad de la mayor parte de las protenas globulares se halla profundamente influida por el pH del sistema. Por ejemplo, la -lactoglobulina, una protena de la leche, es mnima cuando el pH se encuentra entre 5.2 y 5.3, independientemente de la concentracin de cloruro de sodio presente. A cada lado de este valor crtico del pH, la solubilidad experimenta un incremento muy agudo (Figura 3.23). Casi todas las protenas globulares muestran un mnimo de solubilidad, aunque el pH al que ello ocurre vara de una protena a otra. El pH al que una protena muestra un mnimo de solubilidad es su pH isoelctrico o punto isoelctrico (pI), definido como aquel valor de pH al que la molcula de protena no posee carga elctrica y es incapaz de desplazarse en un campo elctrico (Cuadro 3.5).

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Figura 3.23. Efecto del pH y de la concentracin salina sobre la solubilidad de la -lactoglobulina a 25 C. Las cifras dan la concentracin de NaCl

Fuente:Lehninger (1983) Cuadro 3.5. Puntos isoelctricos de algunas protenas

Protena
Pepsina Ovoalbmina Seroalbmina Ureasa -lactoglobulina 1-globulina Hemoglobina Mioglobina Ribonucleasa Quimiotripsingeno Citocromo C Lisozima

pH isoelctrico
1.0 4.6 4.9 5.0 5.2 6.6 6.8 7.0 9.6 9.5 10.65 11.0

Fuente: Lehninger (1983) En estas condiciones no existe repulsin electrosttica entre molculas de protena vecinas y tiende a precipitar. Cuando se cuaja el queso lo que se busca es que las protenas de la leche, por ejemplo, se encuentren a un pH en que dichas protenas se encuentren en su punto isoelctrico, y ya no sean solubles en la leche y precipiten. Sin embargo, cuando los valores de pH estn por encima o por debajo del punto isoelctrico, todas las molculas de protena poseen una carga elctrica neta del mismo signo. Por dicha razn, se repelen mutuamente, impidiendo la coalescencia de las molculas sencillas para formar agregados insolubles. Algunas protenas son virtualmente insolubles en sus pH isoelctricos. Puestos que las diferentes protenas poseen valores de puntos isoelctricos diferentes, ya que difieren en el contenido de aminocidos con grupos R ionizables, con frecuencia pueden separarse una de otra, mediante precipitacin isoelctrica. Cuando el pH de una mezcla de protenas se ajusta al pH
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isoelctrico de uno de sus componentes, la mayor parte o casi todo el componente precipitar, quedando en la disolucin las protenas cuyos valores de pH isoelctrico se hallen por encima o por debajo de aqul. La protena isoelctrica precipitada permanece en su conformacin nativa, y puede redisolverse en un medio de pH apropiado y concentracin salina adecuada. Para una protena determinada, el pH isoelctrico variar algo segn la composicin inica del medio, puesto que las protenas pueden unirse a ciertos aniones o cationes. Cuando una disolucin de protena se dializa a fondo frente a agua destilada para eliminar todos los iones pequeos distintos a los H + y OH-, el pH de la disolucin resultante se conoce como pH isoinico que es constante para cualquier protena determinada (Lehninger, 1983).

3.2.1. Estructura conformacional


Se diferencian varios niveles en la organizacin estructural de las protenas. La estructura primaria (es la secuencia de aminocidos, especificada por la informacin gentica), la estructura secundaria que se forma al plegarse la cadena polipeptdica donde se forman ciertas disposiciones localizadas de los aminocidos adyacentes, la forma tridimensional global que asume un polipptido se denomina estructura terciaria. Las protenas que constan de dos o ms cadenas polipeptdicas (o subunidades) se dice que tienen estructura cuaternaria (McKee y McKee, 2003). Estructura primaria: Cada polipptido tiene una estructura de aminocidos especfica, un nmero, orden y variedad de aminocidos especfica. Las interacciones entre los residuos de aminocidos determinan la estructura tridimensional de la protena, su papel funcional y sus relaciones con otras protenas. Los polipptidos que tienen secuencias de aminocidos y funciones semejantes se dice que son homlogos. Las comparaciones de secuencias de polipptidos homlogos han sido utilizadas para trazar las relaciones genticas de las distintas especies. Los residuos de aminocidos que son idnticos en las protenas homlogas, que se denominan invariables, son esenciales para la funcin de la protena. La estructura primaria nos indica el nmero, el orden o secuencia y la variedad de los aminocidos que conforman una protena (Figura 3.24). Figura 3.24. Secuencia de aminocidos de la insulina bovina

Fuente: Stryer et al. (2003) Se ha determinado la composicin de aminocidos de cientos de protenas y, en varios casos, se conoce la estructura exacta de la protena. Por ejemplo, la ribonucleasa A (Figura 3.25) que es una enzima del pncreas de los bovinos que digiere el RNA que es una molcula muy pequea comparada con la mayora de las protenas (Church et al., 2004).

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Estructura secundaria: las cadenas polipeptdicas se pueden plegar en estructuras regulares como la hlice alfa, la hoja plegada beta y giros y bucles. La hlice o helicoide es una estructura en forma de cilindro, un esqueleto helicoidal plegado muy firmemente forma la parte interior del cilindro, mientras que las cadenas laterales se extienden hacia fuera en una distribucin helicoidal. La hlice se estabiliza por puentes de hidrgeno (Figura 3.26) entre los grupos NH y CO de la cadena principal. En particular, el grupo CO de cada aminocido forma un puente de hidrgeno con el grupo NH del aminocido situado cuatro residuos ms adelante en la cadena principal. Salvo para los aminocidos cercanos al final de una hlice , todos los grupos CO y NH de la cadena principal estn unidos por puentes de hidrgeno. Figura 3.25. Estructura de la ribonucleasa A del pncreas bovino

La distribucin de secundaria.

Fuente: Church et al. (2004) y giros en una cadena proteica se conoce como estructura Figura 3.26. Puentes de hidrgeno para una -hlice

Fuente: Stryer et al. (2003) En la Figura 3.26 se muestra que en la -hlice el grupo CO del residuo n forma un puente de hidrgeno con el grupo NH del residuo n+4. Todas las hlices que se encuentran en las protenas son dextrgiras.
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En la Figura 3.27 se muestra un diagrama de cintas (a) que muestra los tomos del carbono y las cadenas laterales (en verde). Al centro (b), se observa una vista lateral, en versin esferas y varillas, representa los puentes de hidrgeno (lneas discontinuas) entre los grupos NH y CO. En la parte superior derecha (c) se observa una visin apical mostrando el esqueleto enrollado y las cadenas laterales (en verde) proyectndose hacia afuera. En la parte inferior derecha (d) se observa el ncleo interior de la hlice estrechamente empaquetado. Figura 3.27. Estructura de la -hlice

Fuente: Stryer et al. (2003) El contenido en hlice de las protenas oscila entre amplios lmites, desde nada hasta casi el 100%. Por ejemplo, el 75% de los residuos de la ferritina, una protena que ayuda a almacenar el hierro, estn organizados en hlices Figura 3.28. Ferritina. Una protena principalmente en

Fuente: Stryer et al. (2003) Dos o ms hlices muy estable. Tales superhelicoides de hlices (Figura 3.29) se encuentran en la miosina y la

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tropomiosina del msculo, en la fibrina de los cogulos sanguneos y en la queratina capilar (Stryer et al., 2003). Figura 3.29. Superhelicoide de hlices

Fuente: Stryer et al. (2003) Las hojas plegada u hoja se estabilizan por puentes de hidrgeno entre las cadenas polipeptdicas. La hebra , est casi completamente extendida en vez de estar enrollada y empaquetada como la hlice . Las cadenas laterales de aminocidos contiguos apuntan en direcciones opuestas. Figura 3.30. Hebra plegada

Fuente: McKee y McKee (2003) Una hoja se forma uniendo dos o ms hebras mediante puentes de hidrgeno. Las cadenas adyacentes de una hoja pueden dirigirse en sentidos opuestos (hoja en el mismo sentido (hoja En el ordenamiento antiparalelo, los grupos NH y CO de cada aminocido establecen puentes de hidrgeno, respectivamente, con un grupo CO y NH de un aminocido situado en la cadena adyacente. En el ordenamiento paralelo, el esquema de puentes de hidrgeno es ms complicado ya que, en cada aminocido, el grupo NH forma puentes de hidrgeno con el grupo CO de un aminocido de la cadena adyacente, mientras que el grupo CO forma puentes de hidrgeno con el grupo NH del aminocido situado dos residuos ms lejos de la cadena. Muchas cadenas, normalmente 4 5, pero hasta 10 ms, se pueden unir en hojas . Tales hojas pueden ser estrictamente paralelas o antiparalelas (Figura 3.31) o mixtas (Stryer et al., 2003).

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Figura 3.31. Proyeccin ms detallada de la lmina plegada antiparalela

Fuente: McKee y McKee (2003) Estructura terciaria: las protenas solubles en agua se pliegan en estructuras compactas con un ncleo no polar. Aunque las protenas globulares suelen contener cantidades significativas de elementos estructurales secundarios, otros factores contribuyen a su estructura. El trmino estructura terciaria seala las conformaciones tridimensionales nicas que asumen las protenas globulares al plegarse en sus estructuras nativas (biolgicamente activas). El plegamiento proteico, un proceso en el que una molcula desorganizada naciente (recin sintetizada) adquiere una estructura muy organizada, se produce como una consecuencia de las interacciones entre las cadenas laterales en su estructura primaria.

La estructura terciaria tiene varias caractersticas importantes como: Muchos polipptidos se pliegan de forma que los residuos de aminocido distantes en la estructura primaria queden cerca. Debido al eficaz empaquetamiento al plegarse la cadena polipeptdica, las protenas globulares son compactas. Durante este proceso, la mayora de las molculas de agua quedan excluidas del interior de la protena permitiendo las interacciones entre los grupos polares y apolares. Las protenas globulares grandes (con ms de 200 residuos de aminocidos) suelen contener varias unidades compactas llamadas dominios. Los dominios son segmentos estructuralmente independientes que poseen funciones especficas como la unin de un in o molcula pequea como el dominio mano EF que se forma por una configuracin hlice-vuelta-hlice, que se une especficamente al Ca2+ (Figura 3.32). Figura 3.32. Dominio mano EF

Fuente: McKee y McKee (2003)


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McKee y McKee (2003) describen que la estructura terciaria se estabiliza por las interacciones siguientes (Figura 3.33): Figura 3.33. Interacciones que mantiene la estructura terciaria

Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003) Interacciones hidrfobas: al plegarse un polipptido, los grupos R hidrfobos se acercan debido a que son excluidos del agua. Posteriormente, las molculas de agua muy ordenadas en cubiertas de solvatacin se liberan del interior, aumentando el desorden o entropa de las molculas de agua. La variacin de entropa favorable es una fuerza impulsora fundamental en el plegamiento proteico. Interacciones electrostticas: este tipo de interacciones se produce de una manera ms fuerte entre los grupos inicos de carga opuesta. Denominados puentes salinos, estos enlaces no covalentes slo son significativos en las regiones de la protena donde est excluida el agua, debido a la energa que se requiere para eliminar las molculas de agua de los grupos inicos cerca de la superficie. Se ha observado que los puentes salinos contribuyen a las interacciones entre las subunidades adyacentes en las protenas complejas. Lo mismo ocurre con las interacciones electrostticas ms dbiles (in-dipolo, dipolo-dipolo, van der Waals). Son significativas en el interior de la protena plegada y entre las subunidades o en las interacciones protena-ligando. Cabe aclarar que en las protenas que constan de varias cadenas polipeptdicas, cada polipptido se denomina subunidad. Los ligandos son molculas que se unen a lugares especficos en molculas mayores, como las protenas. Los bolsillos de unin de ligando son regiones sin agua de las protenas. Enlaces de hidrgeno: se forman un nmero significativo de enlaces de hidrgeno dentro del interior de una protena y sobre su superficie. Adems de formar enlaces de hidrgeno entre ellas, las cadenas laterales polares de los aminocidos pueden interaccionar con el agua o con el esqueleto polipeptdico. De nuevo, la presencia de agua impide la formacin de enlaces de hidrgeno con otras especies.

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Enlaces covalentes: se crean por reacciones qumicas que alteran la estructura del polipptido durante su sntesis o posteriormente (modificaciones posteriores a la traduccin). Los enlaces covalentes ms destacados en la estructura terciaria son los puentes disulfuro, que se encuentran en muchas protenas extracelulares. En los ambientes extracelulares estos enlaces fuertes protegen, en parte, a la estructura proteica en los cambios adversos de pH o de concentracin salina. Las protenas intracelulares no contienen enlaces disulfuro debido a las elevadas concentraciones de agentes reductores. Estructura cuaternaria: sobretodo las protenas que tienen pesos moleculares elevados estn formadas por varias cadenas polipeptdicas. Cada componente polipeptdico se denomina subunidad. Las subunidades en un complejo proteico pueden ser idnticas o diferentes. Las protenas con varias subunidades en las que alguna o todas sus subunidades son idnticas se llaman oligmeros. Los oligmeros estn formados por protmeros, que pueden estar formados por una o varias subunidades. Un gran nmero de protenas oligomricas contienen dos o cuatro subunidades protomricas, denominadas dmeros y tetrmeros, respectivamente. Parece haber varias razones para que existan las protenas con varias subunidades:

La sntesis de subunidades aisladas es ms eficaz que aumentar sustancialmente la longitud de una nica cadena polipeptdica. En los complejos supramoleculares, como las fibras de colgeno, la sustitucin de componentes ms pequeos gastados o daados pueden realizarse de manera ms eficaz. Las interacciones complejas de varias subunidades sirven para regular la funcin biolgica de una protena. Las subunidades polipeptdicas se ensamblan y se mantienen unidas por interacciones no covalentes, como el efecto hidrfobo, las interacciones electrostticas y enlaces de hidrgeno, as como los estrecruzamientos covalentes. Como con el plegamiento proteico, el efecto hidrfobo es claramente el ms importante, ya que las estructuras de la superficie de unin complementarias entre las subunidades son semejantes a las observadas en el interior de los dominios de las protenas globulares. Aunque son menos numerosos, los entrecruzamientos covalentes estabilizan significativamente determinadas protenas con varias subunidades. Entre los ejemplos ms destacados se encuentran los puentes disulfuro de las inmunoglobulinas y los enlaces de desmosina y lisinorleucina (Figura 3.34) en determinadas protenas del tejido conjuntivo. Se forman como consecuencia de diversas reacciones que implican la oxidacin de las cadenas laterales de lisina. Se produce un proceso semejante en la formacin de lisinorleucina, una estructura entrecruzada que se encuentra en la elastina y el colgeno (McKee y McKee, 2003). Figura 3.34. Formacin de lisinorleucina

Fuente: McKee y McKee (2003)


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El tetrmero 22 de la hemoglobina (Figura 3.35) contiene dos subunidades idnticas (rojo) que es similar pero no idntica a las dos subunidades (amarillo). La molcula contiene cuatro grupos hemo (negro con tomo de hierro en prpura). Figura 3.35. Tetrmero 22 de la hemoglobina

Fuente: Stryer et al. (2003) Para resumir consideremos que la estructura primaria es la secuencia de aminocidos, la estructura secundaria se refiere al ordenamiento espacial de los residuos de aminocidos que estn cerca de la secuencia, la hlice y la hebra son elementos de estructura secundaria. La estructura terciaria nos habla del ordenamiento espacial de los residuos de aminocidos que se encuentran alejados en la secuencia y del esquema de enlaces disulfuro. La estructura cuaternaria se refiere al ordenamiento espacial de las subunidades (protenas con ms de una cadena polipeptdica) y la naturaleza de sus interacciones (Stryer et al., 2003). Adems, las protenas se presentan en una diversidad enorme de tamaos y formas, como se muestra en la Figura 3.36 (McKee y McKee, 2003).

3.2.2. Clasificacin
Una forma de clasificar a las protenas es por su forma, su composicin y su funcin. Segn su forma se clasifican en fibrosas y globulares. Las protenas fibrosas son molculas largas con forma de varilla, insolubles en agua y fsicamente correosas. Ejemplos son la queratina de la piel, pelo y uas que protegen y dan estructura, y la elastina. Las protenas globulares son molculas esfricas compactas, generalmente hidrosolubles y tienen funciones dinmicas o mviles en la clula y como ejemplos estn la mayora de las enzimas, inmunoglobulinas, hemoglobina, albmina, etc. Las protenas fibrosas-globulares se parecen a las fibrosas por sus largas estructuras cilndricas y a las globulares por ser solubles en disoluciones acuosas salinas, por ejemplo la miosina y fibringeno. Segn su composicin, las protenas se clasifican en simples y conjugadas. Las protenas simples contienen slo aminocidos como la albmina srica, lactoalbmina, ovoglobulinas, prolaminas, colgeno, histonas y la queratina. Cada protena conjugada consta de una protena simple conjugada con un componente no proteico, que se denomina grupo prosttico (una protena sin un grupo prosttico se llama apoprotena. Una molcula proteica combinada con su grupo prosttico se llama haloprotena). Las protenas conjugadas se clasifican de acuerdo con la naturaleza de su grupo prosttico, por ejemplo en glucoprotenas (contienen un componente de hidratos de carbono), lipoprotenas (contienen molculas lipdicas), metaloprotenas (contienen iones metlicos),
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fosfoprotenas (contienen grupos fosfato) y hemoprotenas (contienen grupos hemo) y nucleoprotenas (McKee y McKee, 2003). Figura 3.36. Diversidad de tamaos y formas de las protenas

Fuente: McKee y McKee (2003) En la Figura 3.37se muestra un resumen grfico de los niveles de organizacin de las protenas. Las protenas poseen muy diversas funciones biolgicas. En el Cuadro 3.6 se dan ejemplos representativos de los diferentes tipos de protenas clasificados de acuerdo con su funcin. Las enzimas representan la clase ms amplia ya que se conocen cerca de un millar de enzimas diferentes, cada una de las cuales cataliza un tipo diferente de reaccin qumica. Otras protenas tienen la funcin de almacenar aminocidos como elementos nutritivos como la ovoalbmina de la clara de huevo, la casena de la leche y la gliadina de las semillas de trigo. Algunas protenas desempean la funcin de transporte siendo capaces de unirse y transportar tipos especficos de molculas por la sangre: la seroalbmina se une estrechamente a los cidos grasos libres y as transporta sus molculas entre el tejido adiposo y otros rganos de los vertebrados; las lipoprotenas del plasma sanguneo transportan lpidos entre el intestino, el hgado y los tejidos adiposos; la hemoglobina de los eritrocitos de los vertebrados transporta oxgeno desde los pulmones a los tejidos, en el caso de los invertebrados las hemocianinas son las protenas que transportan el oxgeno. Otras protenas actan como elementos esenciales de los sistemas motiles y contrctiles, por ejemplo la actina y miosina son los dos elementos proteicos principales de los sistemas contrctiles del msculo. Algunas protenas desempean una
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funcin protectora o defensiva, por ejemplo las protenas sanguneas trombina y fibringeno participan en la coagulacin de la sangre, otro ejemplo son los anticuerpos o inmunoglobulinas que se combinan con protenas extraas y las neutralizan. Otro grupo de protenas son las toxinas como la ricina de la semilla del ricino, la gosipina de las semillas de algodn, etc. Otro grupo son aquellas protenas que actan como hormonas como la hormona del crecimiento o somatotropina, la insulina, etc. Otras protenas actan como elementos estructurales como la protena fibrosa colgeno que es la principal protena estructural extracelular en el tejido conectivo y en el hueso, otro ejemplo son la elastina y la queratina. Las araas y los gusanos de seda segregan una disolucin espesa de la protena fibrona que solidifica rpidamente formando un filamento insoluble de fuerza tensil excepcional y que sirve para formar telaraas y capullos (Lehninger, 1983). Figura 3.37. Niveles de organizacin de las protenas

Fuente: Modificado de Protena (2007)

3.2.3. Procesos de desnaturalizacin


La funcionalidad de las protenas est estrictamente relacionada con una determinada conformacin, por tal, la prdida de esta organizacin estructural va a constituir una prdida de su actividad biolgica. Estas conformaciones son muy sensibles a los cambios del entorno. La desnaturalizacin es un fenmeno que tiene lugar cuando estos cambios del entorno dan lugar a una alteracin de la estructura proteica que provoca una prdida de su actividad biolgica. Las protenas son particularmente sensibles a diversos factores desnaturalizantes como la temperatura (por encima de 50 60 C la estabilidad de la conformacin plegada disminuye drsticamente) y las variaciones bruscas de pH. Otros agentes desnaturalizantes son mercaptoheptanol, hidrocloruro de guanidina (6M), urea (6 a 8 M), agitacin o sacudimiento vigorosos, detergentes como el sulfato dodeclico de sodio (SDS) (Bohinski, 1991; Garrido, 1991). Dado que se trata de un estado muy frgil, la conformacin original de las protenas globulares est sujeta a alteraciones por diversos agentes fsicos, qumicos o fisicoqumicos sin que ocurran cambios en la secuencia de aminocidos. As, la desnaturalizacin, tambin se puede describir como una prdida de la conformacin original.

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Cuadro 3.6. Clasificacin de las protenas segn su funcin biolgica Tipos y ejemplos Localizacin o funcin
Enzimas Hexoquinasa Lactato-deshidrogenasa Citocromo c DNA-polimerasa Protenas de reserva Ovoalbmina Casena Gliadina Cena Protenas transportadoras Hemoglobina Hemocianina Mioglobina Seroalbmina Globulina que liga hierro Ceruloplasmina Protenas contrctiles Miosina Actina Dinena Protenas protectoras en sangre de vertebrados Anticuerpos Complemento Fibringeno Trombina Toxinas Toxina de Clostridium botulinum Toxina diftrica Venenos de serpiente Ricina Gosipina Hormonas Insulina Hormona adrenocorticotrpica Hormona del crecimiento Protenas estructurales Protenas recubrimiento viral Glucoprotenas Queratina Esclerotina Fibrona Colgeno Elastina Mucoprotenas Fosforila glucosa Deshidrogena lactato Transfiere electrones Replica y repara DNA Protena de la clara de huevo Protena de la leche Protena de la semilla de trigo Protena de la semilla de maz Transporta O2 en sangre de vertebrados Transporta O2 en sangre de algunos invertebrados Transporta O2 en el musculo Transporta cidos grasos en la sangre Transporta hierro en la sangre Transporta Cu en la sangre Filamentos estacionarios en las miofibrillas Filamentos mviles en las miofibrillas Cilios y flagelos Forman complejos con protenas extraas Complejos con algunos sistemas antgeno-anticuerpo Precursor de la fibrina en la coagulacin sangunea Componente del mecanismo de coagulacin Envenenamiento bacteriano en alimentos Toxina bacteriana Enzimas que hidrolizan fosfoglicridos Protena txica de la semilla del ricino Protena txica de la semilla de algodn Regula el metabolismo de la glucosa Regula la sntesis de corticosteroides Estimula el crecimiento de los huesos Cubierta alrededor del cromosoma Recubrimientos celulares y paredes celulares Piel, plumas, uas, pezuas Exoesqueleto de los insectos Seda de los capullos y telaraas Tejido conectivo fibroso (tendones, cartlago, hueso) Tejido conectivo elstico (ligamentos) Secresiones mucosas, fluido sinovial

Fuente: Lehninger (1983) La diferencia de energa libre entre la protena desnaturalizada y su conformacin nativa, en algunos casos es muy pequea. La modificacin de alguna interaccin que contribuya de forma esencial al mantenimiento de la estructura, puede ser suficiente para desnaturalizar una protena. Este proceso puede ser reversible y en tal caso se habla de una renaturalizacin (Figura 3.38). En algunos casos la renaturalizacin recupera del 95 al 100% de la actividad biolgica, como ocurre cuando estn implicados puentes disulfuro en las posiciones esenciales (Figura 3.39). As, la conformacin nativa puede restaurarse y de forma espontnea se restablece un estado de menor energa libre y mayor estabilidad. La estructura primaria tiene toda la informacin para el plegamiento de la protena (Garrido, 1991).

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Figura 3.38. Conformacin original y estados de desnaturalizacin

Fuente: Bohinski (1991) Figura 3.39. Desnaturalizacin y renaturalizacin de una protena; estabilizacin por puentes disulfuro

Fuente: Garrido (1991) La mayora de las protenas desnaturalizadas precipitan en las disoluciones en que se encuentran, como consecuencia de las interacciones entre grupos hidrofbicos, que en la conformacin nativa se sitan en el interior de las diferentes molculas (Garrido, 1991).

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3.2.4. Hidrlisis parcial de las cadenas polipeptdicas


Los aminocidos ingeridos por los vertebrados se hallan en su mayor parte como protenas. Puesto que los aminocidos slo pueden incorporarse en forma libre a las rutas metablicas, las protenas ingeridas son hidrolizadas por las enzimas proteolticas del tracto gastrointestinal, bsicamente enzimas secretadas por el estmago, pncreas y el intestino delgado (Figura 3.40). Figura 3.40. Digestin de las protenas

Fuente: Guyton y Hall (2002) La digestin de las protenas comienza en el estmago cuya enzima proteoltica principal es la pepsina que es secretada en su forma zimgena, el pepsingeno, por las clulas principales de la mucosa gstrica. El pepsingeno se convierte en pepsina activa por accin de la propia enzima al pH cido del jugo gstrico, con liberacin de 42 restos de aminocidos del extremo N-terminal de su nica cadena polipeptdica. La pepsina posee una especificidad muy amplia pero ataca preferentemente a los enlaces peptdicos en los que intervienen restos de aminocidos aromticos, as como metionina y leucina, rindiendo pptidos pero muy pocos aminocidos libres (Lehninger, 1983). El jugo pancretico es secretado al intestino delgado y aporta los zimgenos quimotripsingeno, tripsingeno, procarboxipeptidasas A y B, adems de la proelastasa. El quimotripsingeno se convierte en quimotripsina activa por separacin de dos dipptidos, por la accin de la tripsina y de la quimotripsina libres. La quimotripsina hidroliza los enlaces peptdicos que contienen grupos carboxilo de los aminocidos aromticos. El tripsingeno se convierte en tripsina activa por separacin de un hexapptido N-terminal por la accin de la enzima proteoltica enteroquinasa. La tripsina hidroliza los enlaces peptdicos en los que intervienen los grupos carboxilo de la arginina y de la lisina. La carboxipeptidasa A es una enzima que contiene Zn2+ e hidroliza casi todos los tipos de enlaces peptdicos con carboxilos terminales, mientras que la carboxipeptidasa B escinde a los restos de lisina o de arginina C-terminales. Como resultado de la accin de la pepsina en el estmago, seguida de la accin de las proteasas pancreticas, las protenas se convierten en pptidos cortos y en aminocidos libres. Los pptidos cortos que quedan se degradan despus completamente para dar aminocidos libres por accin de las peptidasas que se encuentran en la mucosa intestinal y que son secretadas por la misma, particularmente la leucn-aminopeptidasa (aminopeptidasa) que es una enzima que contiene Zn2+ y que separa los restos N-terminales de los pptidos. Los aminocidos libres resultantes son absorbidos hacia la sangre y alcanzan el hgado donde tiene lugar gran parte del metabolismo ulterior de los aminocidos, incluida su degradacin.

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Las protenas endgenas tienen tambin que degradarse hasta aminocidos antes de que puedan ser utilizadas como combustible (Lehninger, 1983). El nitrgeno de la dieta de los rumiantes principalmente proviene de la protena preformada a la cual se le denomina protena verdadera y de nitrgeno no proteico proveniente de la urea, sales de amonio, nitratos, nitritos y cidos nucleicos, adems de la protena microbiana y la urea que contiene la saliva. En el rumen, la protena de la dieta puede ser fermentada o escapar de la digestin ruminal, a esta protena que pasa al intestino sin sufrir transformaciones en el rumen, se le denomina protena de escape. Si la protena es fermentada en el rumen, puede ser transformada a aminocidos o a amonaco por accin de las enzimas microbianas, estos compuestos pueden ser usados por las bacterias para la sntesis de protena microbiana. En el caso del nitrgeno no proteico, puede ser desdoblado en amonaco y servir tambin para la formacin de protena microbiana. Muchas especies de bacterias ruminales, protozoarios y hongos son proteolticos. Cantidades importantes de cidos grasos voltiles (AGV) son derivados de la fermentacin de aminocidos. Los principales productos son acetato, butirato y cidos grasos de cadena ramificada, valerato, isobutirato, isovalerato y 2-metilbutirato. Con relacin a aminocidos esenciales, valina, leucina e isoleucina, son convertidos en cidos grasos de cadena ramificada por desaminacin oxidativa y descarboxilacin. Como resultado de la actividad de los microorganismos del rumen, el modo de utilizacin de las protenas por los rumiantes difiere significativamente del que tiene lugar en los animales no rumiantes. Los microorganismos del rumen se caracterizan por su capacidad para sintetizar todos los aminocidos, incluyendo los esenciales, necesarios para el animal husped. Por tanto, los rumiantes son casi totalmente independientes, respecto a la calidad de las protenas ingeridas. La utilizacin de las protenas ingeridas se realiza del modo mostrado en la Figura 3.41 en el rumen. Figura 3.41. Hidrlisis de las protenas en el rumen

Fuente: Spross (2002) Los microorganismos (bacterias y protozoos) que contienen protenas como componente principal pasan con las protenas de la racin no modificadas en el retculo-rumen, a travs del omaso y abomaso, hasta el intestino delgado. Entre 30% y 80% de la protena de los forrajes se degrada en el rumen, la cantidad depende del tiempo de permanencia en el mismo y del nivel de alimentacin. La digestin y absorcin de las protenas, microbiana y del alimento, tiene lugar en el intestino delgado de los rumiantes del mismo modo que en los no rumiantes mediante las enzimas mostradas en el Cuadro 3.7. La protena microbiana y la
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procedente del alimento no degradado se digieren en el intestino delgado por proteasas. Las enzimas y dems protenas endgenas segregadas al intestino tambin son digeridas. Cuadro 3.7. Principales enzimas digestivas proteolticas secretadas en el tubo gastrointestinal de los rumiantes Enzima Origen Sustrato Productos finales Estmago (clulas Proteosas, peptonas, Pepsina Protena nativa principales) polipptidos Renina Abomaso Coagula leche (casena) Caseinato de Calcio Pptidos con un grupo Tripsina Pncreas Protenas y polipptidos arginina o lisina Protenas nativas o los Pptidos con un Quimotripsina Pncreas productos de digestin aminocido aromtico de la pepsina Elastina y otras Pptidos con un Elastasa Pncreas protenas aminocido aliftico Pptidos con Pptidos, pequeos Carboxipeptidasa Pncreas aminocidos aromticos aminocidos neutros, A o alifticos aminocidos cidos Pptidos con una Carboxipeptidasa Pncreas arginina o lisina Aminocidos bsicos B terminal Aminocidos Aminopeptidasas Intestino delgado Pptidos Dipeptidasas Nucleasas Intestino delgado Pncreas e intestino delgado Dipptidos cidos nucleicos Aminocidos Nucletidos

Bases de purinas y pirimidinas, cido Nucleotidasas Intestino delgado Nucletidos fosfrico, azcares pentosas Fuente: Spross (2002) Los aminocidos procedentes de la protena microbiana, de los alimentos y de la protena endgena, participan en el flujo de aminocidos absorbidos en el intestino. Los aminocidos considerados esenciales para los rumiantes parecen ser los mismos que los esenciales para los dems mamferos. Para el aporte de los aminocidos esenciales, los rumiantes dependen de la protena microbiana y de la protena de la racin que escapa de la digestin del rumen. Aproximadamente 40% de las bacterias del rumen tienen actividad proteoltica. Las proteasas de las bacterias del rumen estn ligadas a las clulas, pero se localizan en la superficie celular, de modo que tienen libre acceso al sustrato. Los protozoos existentes en el rumen estn equipados con potentes proteasas intracelulares. Estas enzimas proteolticas microbianas operan a un pH ptimo de 6 a 7. El abomaso est dividido en dos regiones: la proximal o fndica y la distal o pilrica. La regin fndica contiene la mayor parte de las glndulas que segregan cido clorhdrico, pepsina, mucina, gastrina, y en los becerros jvenes, renina (Spross, 2002).

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4. Catlisis y energtica de sistemas bioqumicos


4.1. Enzimas y coenzimas

Una de las funciones ms importantes de las protenas es su papel como catalizadores. Cabe mencionar que hasta hace poco tiempo se consideraba que todas las enzimas eran protenas, sin embargo, se ha comprobado la existencia de varias molculas de RNA catalticas (McKee y McKee, 2003). Las enzimas se requieren para casi todas las reacciones celulares (Roskoski, 2001). Hay diferencia entre catlisis qumica y enzimtica, ya que se diferencia en varios aspectos como los descritos por Hicks (2003): Gran capacidad de reaccin: la eficacia cataltica de las enzimas es de 106 a 1012, la cul es mayor que la de reacciones no catalizadas e incluso es mayor cuando se compara con catalizadores qumicos. Por ejemplo, la hidratacin del bixido de carbono para formar cido carbnico es una reaccin que puede efectuarse de manera espontnea, sin embargo, su realizacin eficaz y rpida es trascendente para la vida de los seres que dependen del intercambio oxgeno-bixido de carbono (Figura 4.1). Cada molcula de la enzima anhidrasa carbnica cataliza la hidratacin de 105 molculas de CO2 en un segundo. Esta reaccin se verifica 107 veces ms rpidamente que si se realizara en ausencia de la enzima. En los organismos aerobios, el CO2 producido por los tejidos difunde a la sangre, en donde es inmediatamente hidratado. Posteriormente llega a los alvolos donde es deshidratado, liberando CO2. Ambos procesos son catalizados por la enzima anhidrasa carbnica. Figura 4.1. Reacciones de los organismos aerobios catalizadas por enzimas

Fuente: Stryer et al. (2003) Condiciones especficas de reaccin: las enzimas catalizan sus reacciones a temperaturas menores a 100 C y a pH cercanos a la neutralidad, mientras que los catalizadores qumicos frecuentemente requieren altas temperaturas y presiones, as como pH extremos. Especificidad: alta especificidad molecular. Por ejemplo, en la Figura 4.2 se muestra que la trips ina (A) rompe en el lado carboxlico de los residuos de arginina y lisina, mientras que la trombina (B) rompe los enlaces Arg-Gly slo en secuencias especficas. Capacidad de regulacin: la actividad cataltica de muchas enzimas vara en respuesta a la concentracin de sustancias diferentes al sustrato. Los mecanismos de este proceso regulador incluyen: control alostrico, modificacin covalente y variacin en la cantidad de enzima sintetizada.

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Figura 4.2. Especificidad enzimtica de tripsina (A) y trombina (B)

Fuente: Stryer et al. (2003)

4.1.1. Concepto de catalizador y enzima


Una enzima es un catalizador protenico. Un catalizador es una sustancia que altera la velocidad de una reaccin qumica. Las molculas sobre las cules actan las enzimas se denominan sustratos y las molculas resultantes son productos (Roskoski, 2001). Las enzimas se unen con los sustratos por medio de interacciones hidrofbicas y electrostticas, puentes de hidrgeno y fuerzas de van der Waals (Laguna y Pia, 2002). En ausencia de un catalizador, las diferentes reacciones bioqumicas se efectuaran tan lentamente que sera insignificante su participacin en un ecosistema, e incluso la lentitud en la reaccin de un proceso sera incompatible con la vida. Prcticamente todas las reacciones bioqumicas que ocurren en los sistemas biolgicos requieren una cantidad de energa que permita su inicio. La funcin de un catalizador es la de disminuir el requerimiento de energa inicial necesaria para que un proceso se lleve a cabo. Las enzimas son protenas que disminuyen la cantidad de energa que se requiere para llevar a cabo una reaccin, dicha actividad cataltica es especfica. Para realizar su funcin se unen a las molculas por catalizar, o sustratos, en un sitio especfico denominado sitio activo, para establecer un complejo enzima-sustrato, el cul se puede disociar en sus molculas originales, enzimas y sustratos, o bien generar un producto y la enzima libre (Hicks, 2003). La unin del sustrato a la enzima se puede explicar por medio de dos mecanismos. En 1890 Emil Fischer plante el modelo de la llave y la cerradura, el cual considera que el sitio activo de la enzima est preformado, de tal manera que los residuos de aminocidos mantienen una posicin fija y complementaria a los grupos del sustrato (Figura 4.3). La lisozima es una enzima presente en las lgrimas y es capaz de hidrolizar uno de los polisacridos presentes en las paredes bacterianas, siendo uno de los pocos casos que se adaptan al modelo de la llave y la cerradura.

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Figura 4.3. Modelo de la llave y la cerradura donde se muestra que el sitio activo de la enzima es complementario a la estructura del sustrato

Fuente: Laguna y Pia (2002) En contraste con este mecanismo rgido, el modelo del ajuste inducido propuesto por Koshland Jr. en 1958, propone que al interactuar el sustrato con la enzima se inducen cambios conformacionales en sta, que dan lugar a la formacin del sitio activo. Se ha dicho que la enzima semeja un guante vaco, y la presencia del sustrato equivale a introducir la mano en el guante, con lo que se le da forma precisa al sitio activo (Figura 4.4). El modelo del ajuste inducido es el que se observa ms frecuentemente en la naturaleza (Laguna y Pia, 2002). Figura 4.4. Modelo del ajuste inducido

Fuente: Laguna y Pia (2002) Algunas enzimas responden a estmulos reguladores, ya que presentan en su estructura uno o varios sitios de control, denominados sitios alostricos. Estas regiones de la enzima son reconocidas por sustancias con efectos activadores o inhibidores, que son generalmente productos del metabolismo, que ejercen una interaccin no covalente. Existe un grupo de enzimas de control o alostricas que requieren modificaciones covalentes en su estructura, como es el caso de la adicin de grupos funcionales como el fosfato, para ser reguladas. Algunas enzimas necesitan para su funcionamiento una o ms molculas no protenicas, que participan de manera directa en la reaccin qumica durante la catlisis. Se les denomina grupos prostticos y se clasifican en cofactores y coenzimas. Los cofactores generalmente son iones inorgnicos como el Ca2+ y Mg2, y las coenzimas son sustancias orgnicas derivadas de las vitaminas hidrosolubles. Los cofactores se subdividen en dos grupos: metales y molculas orgnicas pequeas (Cuadro 4.1). La enzima anhidrasa carbnica, por ejemplo, necesita Zn2+ para su actividad (Hicks, 2003).

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Stryer et al. (2003), a diferencia de Hicks (2003), describe que los cofactores que son molculas orgnicas pequeas se llaman coenzimas que generalmente son derivados de vitaminas y pueden estar unidos a la enzima fuerte o dbilmente. Si la unin es muy fuerte se denominan grupos prostticos. Una enzima sin su cofactor se denomina apoenzima; el enzima completo activo catalticamente se llama holoenzima: apoenzima + cofactor = holoenzima (Stryer et al., 2003). Los cofactores actan generalmente por alguno de los siguientes mecanismos, segn Hicks (2003): El cofactor, de manera aislada es capaz de catalizar una reaccin; sin embargo, en presencia de la enzima aumenta su capacidad cataltica y adquiere especificidad por el sustrato. Puede formar un complejo con el sustrato y el sitio activo de la enzima, permitiendo as, la catlisis. Suele funcionar como un poderoso atrayente de electrones en algn punto del ciclo cataltico. Las coenzimas tienen un tamao molecular mayor que los cofactores. La unin del cofactor a la enzima es reversible en la mayora de los casos, pero en otros se establece un enlace covalente . Las caractersticas de las coenzimas son las siguientes: Son termoestables, es decir, mantienen su estructura qumica a temperaturas en que las protenas se desnaturalizan. Generalmente son derivados de vitaminas. Diversas enzimas que realizan la misma actividad catalica, utilizan la misma coenzima; dinucletido de nicotinamida y adenina (NAD), que participan en varias reacciones de deshidrogenacin. En algunos casos funcionan como cosustratos, ya que son modificadas durante una reaccin cataltica, retornando a su forma original en otra reaccin. La mayora de las coenzimas derivan de las vitaminas. Las vitaminas son nutrientes orgnicos que se requieren en cantidades pequeas en la alimentacin animal y se dividen en dos clases: hidrosolubles y liposolubles (Cuadro 4.1). Existen determinados nutrientes semejantes a las vitaminas como el cido lipoico, carnitina y cido para-aminobenzoico, que pueden sintetizarse en pequeas cantidades y que facilitan los procesos catalizados por las enzimas (McKee y McKee, 2003). En algunos casos, una reaccin metablica especfica es catalizada por varias enzimas distintas, a las que se les denomina isoenzimas (Hicks, 2003). Las caractersticas generales de las enzimas, segn Hicks (2003), son las siguientes: La mayora de las enzimas se constituyen por ms de 100 aminocidos. Disminuyen la energa de activacin facilitando as, el inicio de una reaccin, es decir, son catalizadores que son agentes que afectan la velocidad de una reaccin qumica, sin participar como reactantes y sin aparecer en los productos finales de la reaccin. Se requieren en cantidades mnimas. Alta especificidad. Una enzima generalmente cataliza una reaccin. El grado de especificidad por el sustrato es alto y en ocasiones absoluto. Pueden ser regulables (alostricas) Son sensibles de ser inhibidas al disminuir o abolir su actividad por medio de diversas sustancias. Modifican la estructura qumica del sustrato, segn el tipo de reaccin que catalicen.
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No alteran el equilibrio de las reacciones, por ejemplo, la interconversin de A en B alcanza un equilibrio en el que existe un porcentaje de A (90) y un porcentaje de B (10). En presencia de la enzima especfica, se incrementa la velocidad de reaccin para que se establezca tal equilibrio (90:10). Pueden ser capaces de intercambiar diferentes formas de energa, por ejemplo, durante la fotosntesis, la energa luminosa es convertida en energa qumica de enlace. En la mitocondria, la energa libre contenida en algunas molculas provenientes de la alimentacin es atrapada como energa de enlace disponible para otras reacciones; en este caso, la energa est presente en enlaces altamente energizados como en el caso del trifosfato de adenosina (ATP). Esta energa acumulada puede usarse para realizar diversos procesos. Las clulas y sus orgnulos tienen sistemas que utilizan el ATP para transportar iones y molculas contra gradientes qumicos y elctricos. Cuadro 4.1. Vitaminas y cofactores que son precursores de coenzimas Vitamina Coenzima Reaccin en que participa Hidrosolubles Biocitina Carboxilacin Biotina Alquilacin Cobalamina (B12) Coenzimas de cobamida Tetrahidrofolato Transferencia de un carbono cido flico Oxidorreduccin Nicotinamida (B5) NAD, NADP CoA Transferencia de gpos. acilos Pantotenato Fosfato de piridoxal Transferencia de gpos. amino Piridoxina (B6) Oxidorreduccin Riboflavina (B2) FAD, FMN Pirofosfato de tiamina Transferencia de aldehdos, Tiamina (B1) descarboxilacin Liposolubles Retinal Visin, crecimiento y reproduccin Vitamina A 1,25-dihidroxicolecalciferol Metabolismo del Ca y P Vitamina D Desconocida Antioxidante lipdico Vitamina E Desconocida Coagulacin de la sangre Vitamina K Cofactor Se requiere en: Procesos ++ Enzimas que usan ATP Fosforilacin Mg ++ Activacin por AMPc Contraccin muscular, glucogenlisis Ca 2+/ 3+ Hemoglobina, citocromos Transporte de electrones Fe Fe 1+ 2+ Citocromo oxidasa Transporte de electrones Cu /Cu ++ Deshidrogenasa lctica, Varios Zn Anhidrasa carbnica Xantina oxidasa Oxidasas y deshidrogenasas Mo6+ ++ DNAasa Varios Mn Amilasa Hidrlisis Cl Glutatin peroxidasa Se Nitrato reductasa Va Ureasa Ni Fuente: Hicks (2003) En la Figura 4.5 se muestra una molcula de ATP que constituye el reservorio principal de energa en diversos organismos, la cual libera al hidrolizarse un fosfato y 7.3 kcal/mol, energa que se utiliza en muy diversas reacciones bioqumicas.
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Figura 4.5. Molcula de ATP

Fuente: Hicks (2003) Las enzimas disminuyen la energa de activacin que es la cantidad de energa en caloras, necesaria para llevar a todas las molculas de un mol de una sustancia desde un estado dado hasta un determinado estado activo (Figura 4.6). En una reaccin qumica en que la molcula de sustrato es modificada a producto, el sustrato tiene que pasar por un estado de transicin con un contenido energtico mayor al del sustrato y del producto. La cantidad del producto de la reaccin depende de la temperatura, as como de la cantidad de energa libre entre la molcula del sustrato y la del estado de transicin, a esta diferencia se ha denominado energa libre de Gibbs y se simboliza por G. Figura 4.6. Definicin de energa libre de activacin (G)

Fuente: Hicks (2003) G es el smbolo de una cantidad termodinmica denominada cambio de energa libre real o fisiolgica. Existen dos formas de energa til: la energa libre que puede realizar trabajo a temperatura y presin constantes, se representa por G, y energa calrica que puede realizar trabajo, produciendo un cambio en la temperatura o presin. La velocidad de una reaccin es proporcional al nmero de molculas que tienen una energa libre igual o mayor que G. El nmero de estas molculas aumenta con la temperatura, as, las enzimas aceleran las reacciones al disminuir G, que es la barrera de activacin. La combinacin de enzima y
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sustrato crea una nueva posibilidad de reaccin, cuyo estado de transicin energtico es menor que si se lleva a cabo en ausencia de la enzima (Figura 4.7). Figura 4.7. Las enzimas disminuyen la energa de activacin

Fuente: Hicks (2003) El sustrato se une a una regin especfica de la enzima denominada sitio activo o sitio isostrico cuyas caractersticas son las siguientes: Tamao: es relativamente pequeo cuando se compara con el resto de la enzima, ya que esta regin est formada por pocos aminocidos. Forma: es tridimensional. Unin: el sustrato se une a las enzimas por fuerzas relativamente dbiles. Interaccin: al interactuar el sitio activo con el sustrato, se forma un complejo tan compacto que en su espacio intermolecular no cabe ni la molcula de agua. El sitio activo contiene varias zonas polares, que son esenciales para el enlace y la catlisis; asimismo, posee otras regiones no polares en la que el sustrato interacta con mayor o menor intensidad, segn sus caractersticas. Especificidad: un sustrato debe tener una forma, tamao y caractersticas de carga para interactuar en el sitio especfico (Hicks, 2003).

4.1.2. Clasificacin de enzimas


Las seis ategoras principales de enzimas (Cuadro 4.2), as como algunos ejemplos representativos (Cuadro 4.3) descritos por McKee y McKee (2003), son las siguientes: Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidacin-reduccin. Entre las subclases de este grupo se encuentran deshidrogenasas, oxidasas, oxigenasas, reductasas, peroxidasas e hidrolasas. Transferasas: catalizan reacciones en las que hay una transferencia de grupos de una molcula a otra. Entre los ejemplos de estos grupos estn: amino, carboxilo, carbonilo, metilo, fosforilo y acilo (RC=O). Los nombres comunes triviales suelen incluir el prefijo trans, por ejemplo: transcarboxilasas, transmetilasas y transaminasas. Hidrolasas: catalizan reacciones en las que se produce la rotura de enlaces por la adicin de agua. Entre las hidrolasas estn: esterasas, fosfatasas y peptidasas.
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Liasas: catalizan reacciones en las que se eliminan grupos de sus sustratos (por ejemplo: H2O, CO2 y NH3), por cualquier reaccin que no sea hidrlisis, dejando enlaces dobles o que, a la inversa, aaden grupos a enlaces dobles (Blood y Studdert, 1994). Los ejemplos son liasas, descarboxilasas, hidratasas, deshidratasas, desaminasas y sintasas. Isomerasas: se trata de un grupo heterogneo de enzimas. Las isomerasas catalizan varios tipos de reordenamientos intramoleculares. Las epimerasas catalizan la inversin de tomos de carbono asimtricos. Las mutasas catalizan la transferencia intramolecular de grupos funcionales. Ligasas: catalizan la formacin de un enlace entre dos molculas de sustrato. La energa para estas reacciones la aporta siempre la hidrlisis del ATP. Los nombres de muchas ligasas incluyen el trmino sintetasa. Otras ligasas se denominan carboxilasas. Cuadro 4.2. Clasificacin internacional de las enzimas de acuerdo a su funcin Nmero de cdigo y Caractersticas nombre sistemtico
1. Oxidorreductasas

1.1 1.2 1.4 1.6 2. Transferasas 2.1 2.3 2.6 2.7 3. Hidrolasas 3.1 3.2 3.4 3.5 4. Liasas 4.1 4.2 4.3 5. Isomerasas

5.1 5.2 5.3 6. Ligasas 6.1 6.3 6.4

Catalizan la reaccin de oxidorreduccin al adicionar o sustraer un hidruro(H:) y un hidronio (H+) Actan en grupos alcohol Reaccin aldehdo o cetona alcohol Actan en grupos amino (NH3) Actan con NADH o NADPH Transfieren diferentes molculas Un tomo de carbono en sus diferentes formas Aminocidos Nitrgeno en sus diferentes formas Fsforo en sus diferentes formas Introducen una molcula de agua en el sitio de rotura steres Carbohidratos Enlaces peptdicos Enlaces C-N diferentes al enlace peptdico Catalizan el rompimiento de un enlace covalente o su formacin C-C C-O C-N Catalizan esta reaccin qumica en sus diferentes posibilidades (molculas con igual frmula condensada y diferente frmula desarrollada, o con propiedades qumicas iguales y fsicas diferentes). Las enzimas distinguen las diferentes formas de isomera. Recemasas y epimerasas Cis-Transisomerasas Oxidorreductasas intramoleculares Catalizan la reaccin que permite la unin de dos molculas con hidrlisis simultnea de ATP Enlace C-O Enlace C-N Enlace C-C

Fuente: Hicks (2003) Una vez clasificadas de acuerdo a la reaccin que catalizan, se pueden subdividir en tres grupos. De un total de 1500 enzimas diferentes que posee la clula, existe un grupo que se encuentra presente pero en
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forma inactiva, otro grupo que es el ms numeroso est integrado por enzimas presentes en la clula con capacidad cataltica activa independiente de los requerimientos fisiolgicos o patolgicos del metabolismo y un tercer grupo integrado por enzimas que se encuentran en baja concentracin o que no se hallan presentes en un momento dado y requieren un estmulo adecuado que active su sntesis de novo (denominadas enzimas inducibles). Los dos primeros grupos anteriores se denominan enzimas constitutivas y proporcionan un control fino y rpido del metabolismo, mientras que las inducibles o adaptativas efectan un ajuste tardo y ms exacto an. Cuadro 4.3. Ejemplos seleccionados de enzimas Ejemplo Reaccin catalizada Alcohol deshidrogenasa Hexoquinasa Quimiotripsina Piruvato descarboxilasa Alanina racemasa D-Alanina L-Alanina Glucosa + ATP Glucosa-6-fosfato + ADP Polipptido + H2O Pptidos

Clase enzimtica Oxidorreductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Isomerasas

Ligasas

Piruvato carboxilasa

Fuente: McKee y McKee (2003) En funcin de su capacidad intrnseca para ser regulables o no, las enzimas pueden dividirse en dos grandes grupos: Enzimas alostricas o regulables: adems del sitio activo o isostrico presentan otros sitios no catalticos o alostricos que son capaces de aceptar molculas interaccionantes que ejercen un efecto regulador sobre el sitio activo, al modificar las caractersticas esteroisomricas de la protena, y como consecuencia, del sitio activo. La activacin puede ser de dos tipos: Activacin alostrica: la enzima aumenta su afinidad por el sustrato (disminuye su Km), as como su velocidad de catlisis.

Ihibicin alostrica: se habla de efectores negativos y el tipo de respuesta implica una modificacin en la protena que da como resultado una disminucin en la velocidad de reaccin o en la afinidad por el sustrato (aumenta la Km). Este efecto inhibitorio se ejerce tambin en el sitio alostrico. Tambin son llamadas enzimas de no equilibrio y catalizan una reaccin dada independientemente de la concentracin de sustrato o productos, como en el caso de la hexocinasa, fosfofructocinasa y piruvatocinasa en la gluclisis, as como de la isocitrato deshidrogenasa en el ciclo de Krebs. Enzimas isostricas: a diferencia de las anteriores no son reguladas por molculas diferentes de su sustrato o productos de la reaccin que catalizan. Tambin se conocen como enzimas de equilibrio
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porque mantienen un porcentaje dado de sustratos y productos, por lo que tienen una participacin importante en la regulacin de las vas metablicas, puesto que su funcin primordial es mantener una concentracin dada de productos y de sustrato, permitiendo un aporte adecuado e productos a las enzimas subsecuentes. Para explicar la regulacin de una va metablica a nivel enzimtico se considera que es innecesario y poco econmico para la clula, si una va metablica requiere la actividad cataltica de seis enzimas consecutivas, regular cada una de ellas individualmente, es mejor que un solo sitio de control sea suficiente para regular el flujo de molculas (Hicks, 2003).

4.1.3. Cintica enzimtica


Para que sean tiles para un organismo, las reacciones bioqumicas deben producirse a velocidades razonables. La velocidad de una reaccin bioqumica se define como el cambio de la concentracin de un reactante o producto por unidad de tiempo. La velocidad inicial v0 de la reaccin AP, donde A=sustrato y P=producto es:

Donde [A] es la concentracin del sustrato y [P] es la concentracin del producto y t es el tiempo. La velocidad inicial (v0), la velocidad cuando [A] es mucho mayor que la concentracin de la enzima [E] y el tiempo de reaccin es muy corto, es la velocidad de la reaccin inmediatamente despus de mezclar la enzima y el sustrato. Se mide ya que puede suponerse que la reaccin inversa, conversin del producto a sustrato, s es posible. El estudio cuantitativo de la catlisis enzimtica, que se denomina, cintica enzimtica, proporciona informacin sobre las velocidades de reaccin. Los estudios cinticos miden tambin la afinidad de las enzimas por los sustratos y los inhibidores, y proporcionan conocimientos sobre los mecanismos de reaccin (McKee y McKee, 2003). El efecto cataltico de una enzima siempre es precedido por la formacin de un complejo enzimasustrato que al formarse produce la modificacin de algunas de las propiedades fsicas de las enzimas, como la solubilidad y la estabilidad al calor. A una concentracin constante de enzima, la velocidad de una reaccin se incrementa directamente en proporcin al aumento de la cantidad de sustrato, hasta alcanzar un ptimo, es decir, a una concentracin suficientemente alta de sustratos, los sitios catalticos de la enzima se saturan y la reaccin alcanza su velocidad mxima. En contraste, las reacciones no catalizadas no presentan este efecto de saturacin. La saturacin indica tambin que la enzima presenta un nmero finito de sitios de combinacin con el sustrato. Cuando todos los sitios estn ocupados por sustrato, se puede hablar de saturacin y es posible explicar el tipo de cintica descrito por Michaelis y Menten en 1913. En este caso, debe considerarse que slo un sustrato y un producto son libremente interconvertibles. El complejo enzima-sustrato (ES) puede disociarse para dar enzima (E) y sustrato (S) o puede generar el producto de la reaccin (P) y liberar la enzima (E):

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Donde k es igual a la velocidad de la reaccin. La ecuacin de Michaelis-Menten para reacciones de un solo sustrato es:

v = (Vmx[S])/(Km+[S])
Donde relaciona Vmx [S], con la constante de Michaelis-Menten (Km) (Hicks, 2003). Se puede evaluar la ecuacin de Michaelis-Menten que relaciona la velocidad de la reaccin catalizada por una enzima, a dos constantes cinticas con las siguientes propiedades. Bajo condiciones definidas y con una cantidad especfica de enzima, sta muestra la velocidad mxima que se alcanza como valor limitante cuando la concentracin de sustrato aumenta. La Km (constante de Michaelis) es la concentracin de sustrato para alcanzar la mitad de la velocidad mxima (Roskoski, 2001). Si se mide la velocidad de la reaccin (v) a diferentes valores de [S], el valor de Km puede estimarse a partir de la curva hiperblica obtenida (Figura 4.8). Figura 4.8. Trazo de la actividad relativa de una enzima (v) como una funcin de la concentracin de sustrato, para una enzima que obedece la cintica de Michaelis-Menten

Fuente: Hicks (2003) Vmx es la velocidad mxima y Km es la constante de Michaelis. Como una funcin de la concentracin de la enzima Vmx es 1.0 y la concentracin de sustrato requerida para alcanzar 1/2 Vmx es igual a Km. Sin embargo, la Vmx casi nunca puede ser calculada a partir de esta curva, ya que las concentraciones de sustrato no son suficientes para saturar a la enzima. En contraste con la curva hiperblica obtenida, cuando se grafica velocidad relativa (y) en contraposicin a [E] es una recta (Figura 4.9).

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Figura 4.9. Grfica de velocidad en contraposicin a [E]

Fuente: Hicks (2003) Pero utilizando la recproca de la ecuacin de v, se obtiene la ecuacin lineal conocida como ecuacin de Lineweaver-Burk (Hicks, 2003):

Resulta difcil determinar la Km y la velocidad mxima a partir de una hiprbola rectangular. Un procedimiento comn para establecer las constantes cinticas es por la ecuacin de Lineweaver-Burk o doble recproca que se puede comparar con la siguiente ecuacin de lnea recta, donde b es la interseccin con el eje Y, y m es la pendiente: y = mx + b. En la ecuacin de Lineweaver-Burk, 1/Vmx es la interseccin con el eje y (b), y Km/ Vmx es la pendiente (m) (Figura 4.10). Figura 4.10. Grfica de Lineweaver-Burk o doble recproca

Fuente: Roskoski (2001) La curva obtenida al graficar 1/v contra 1/[S] (doble recproca) produce una lnea recta con una pendiente Km/Vmx y un intercepto en la ordenadas 1/Vmx . La pendiente y el intercepto pueden medirse rpidamente utilizando la grfica o, de manera alternativa, al multiplicar la ecuacin por [S]:

El valor de Km de una enzima generalmente es bajo (10-1 a 10-6 M), cuanto ms pequeo es, indica que la enzima tiene mayor afinidad por su sustrato, y por tal, la unin es ms fuerte (Hicks, 2003).
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Roskoski (2001) describe de una forma ms simple todo lo anterior y menciona que en una reaccin catalizada por una enzima hay aumento de la velocidad de la reaccin cuando la concentracin del sustrato aumenta (Figura 4.11). A menudo, una grfica de velocidad como funcin de la concentracin del sustrato da una hiprbola rectangular. A concentraciones cada vez mayores del sustrato, el aumento de actividad es progresivamente menor. Estos datos demuestran que las enzimas exhiben el llamado efecto de saturacin. La saturacin significa que los sustratos interactan con un nmero dado de molculas catalticas y son convertidos a productos. Figura 4.11. Velocidad de una reaccin catalizada por una enzima como funcin de la concentracin de sustrato

Fuente: Champe et al. (2006) A bajas concentraciones, un aumento en la concentracin de sustrato produce un incremento lineal o de primer orden en la velocidad de la reaccin catalizada por una enzima. A muy altas concentraciones, un aumento en la concentracin de sustrato produce incremento muy pequeo de la velocidad de la reaccin catalizada por una enzima con cintica de orden cero (cuando la velocidad es independiente de la concentracin de sustrato) (Roskoski, 2001).

4.1.4. Factores que influyen en la actividad enzimtica


Dada su naturaleza protenica, las enzimas son afectadas en su actividad por factores fsicos, temperatura, fuerza inica, pH, factores qumicos, presencia de cofactores, activadores especficos e inhibidores, la concentracin de la enzima y la concentracin del sustrato (Hicks, 2003; Boyer, 2000; Mertz, 1985; Bronk, 1980; Cantarow y Schepartz, 1977). Cualquier factor ambiental que distorcione dicha estructura proteica puede alterar la actividad enzimtica. Sobretodo son especialmente sensibles a las variaciones de temperatura y pH.

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Temperatura: La temperatura afecta a todas las reacciones qumicas. Cuanto mayor es la temperatura, mayor es la velocidad de reaccin, que aumenta debido a que hay ms molculas con la energa suficiente para entrar en el estado de transicin (Figura 4.12). Las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas aumentan tambin al incrementarse la temperatura, sin embargo, las enzimas son protenas que se desnaturalizan a temperaturas elevadas. Cada enzima tiene una temperatura ptima a la que acta con su mxima eficacia. Los valores de temperatura ptima dependen del pH y de la fuerza inica. Si la temperatura se incrementa ms all de la ptima, la actividad enzimtica desciende bruscamente (McKee y McKee, 2003). La temperatura ptima de una enzima normalmente est cerca de la temperatura normal del organismo del que procede. La mayor parte de las enzimas animales comienzan a ser desnaturalizadas de manera importante a temperaturas que exceden de 40 C (Cantarow y Schepartz, 1977).

Figura 4.12. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica, se aprecia que la actividad cataltica se pierde ya que el calor desnaturaliza a la enzima

Fuente: McKee y McKee (2003) pH: La concentracin de in hidrgeno afecta a las enzimas de diversas formas, ya que la actividad cataltica est relacionada con el estado inico del lugar activo que se ve afectado por las variaciones de concentracin del in hidrgeno. Los sustratos pueden afectar tambin la actividad enzimtica, ya que si un sustrato tiene un grupo ionizable, un cambio del pH puede alterar su capacidad para unirse al lugar activo. Los cambios de los grupos ionizables pueden alterar la estructura terciaria de la enzima. Los cambios drsticos del pH frecuentemente conducen a la desnaturalizacin. El valor de pH al que la actividad de una enzima es mxima se denomina pH ptimo y varan considerablemente segn la enzima (McKee y McKee, 2003; Boyer, 2000). El pH ptimo de la pepsina, una enzima proteoltica que se produce en el estmago, es aproximadamente de 2.0; la quimiotripsina digiere las protenas en el intestino delgado y su pH ptimo es 8.0 (Figura 4.13) (McKee y McKee, 2003). Concentracin del sustrato: Cuando la concentracin del reactante es alta, la cantidad de molculas con energa suficiente para reaccionar, as como la frecuencia de las colisiones, tambin son altas. Esto resulta cierto ya sea que todas las molculas o slo una fraccin de ellas, tengan energa suficiente para reaccionar. Considrese las reacciones que involucran dos molculas diferentes, A y B: A+B AB. Al duplicar la concentracin de A o B se duplicar la velocidad de la reaccin; al duplicar la concentracin de ambas, se incrementa cuatro veces la
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probabilidad de una colisin, por tanto, la velocidad de reaccin se incrementa cuatro veces y resulta proporcional a la concentracin de las molculas reactantes. En la explicacin siguiente, las reacciones enzimticas se tratan como si tuvieran un solo sustrato y un solo producto. Si bien ste es el caso en algunas reacciones catalizadas por enzimas, la mayor parte de las reacciones tiene dos o ms sustratos y productos. Sin embargo, tal consideracin no invalida la explicacin. Al incrementarse la concentracin de un sustrato [S], al tiempo que el resto de las condiciones se conserva constante, la velocidad inicial medida vi (la velocidad medida cuando ha reaccionado muy poco sustrato), se incrementa hasta alcanzar un valor mximo Vmx. La velocidad se incrementa conforme aumenta la concentracin del sustrato, hasta un punto en el que se dice que la enzima se satura con dicho sustrato. La velocidad inicial medida, alcanza un valor mximo que no se modifica por incrementos subsecuentes de la concentracin del sustrato, debido a que existe un gran exceso molar de sustrato respecto a la enzima (Figura 4.12) (Murray et al., 2001). Figura 4.13. Efecto del pH sobre dos enzimas

Fuente: McKee y McKee (2003) Concentracin de la enzima: la velocidad de una reaccin enzimtica es directamente proporcional a la concentracin de la enzima, es decir, a mayor concentracin de enzimas, la reaccin es ms rpida como se observa en la Figura 4.14 (Toporek, 1985). Si existe un exceso de sustrato, al duplicar la concentracin de la enzima, generalmente, se duplica la velocidad de formacin de productos finales. Esto se aplica, de ordinario, slo al comienzo de la reaccin, ya que los productos finales de la reaccin tienen a menudo un efecto inhibitorio sobre la enzima, y disminuyen su eficiencia. A medida que se aumenta la concentracin de la enzima, se puede llegar a un punto (tericamente) en el que el sustrato (manteniendo su concentracin constante) est saturado con la enzima (todo en la forma de complejo enzima-sustrato). Esto requerira una relacin mol a mol para la mayora de las enzimas. Si pudiera alcanzarse este punto, los incrementos adicionales en la concentracin de la enzima no tendran influencia sobre la velocidad de la formacin de productos finales. En la Figura 4.15 se muestra la forma general de la curva que relaciona la concentracin de la enzima con la actividad enzimtica, manteniendo constantes los dems factores. La parte punteada de la Figura 4.16 es hipottica y casi imposible de alcanzar in vitro, puede ocurrir hasta un grado limitado en la clula viva. Fuerza inica: la actividad de muchas enzimas es afectada por la concentracin de iones en la solucin. Este efecto se agrega a los efectos ms especficos de ciertos activadores de cationes y de aniones. La sensibilidad de las enzimas a la concentracin de iones se debe a la presencia de una atmsfera inica difusa alrededor de cada molcula de protena enzimtica que atrae iones del signo opuesto.

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Figura 4.14. Efecto de la concentracin de la enzima sobre la velocidad de la reaccin

Fuente: Toporek (1985) Figura 4.15. Relacin de la concentracin de la enzima con la actividad enzimtica

Fuente: Mertz (1985) Activadores especficos: los iones metlicos son partes integrantes de muchos sistemas enzimticos. Puesto que pueden eliminarse reversiblemente de la apoenzima, pueden considerarse como activadores. As, la arginasa requiere iones de cobalto, manganeso o hierro, pero la apoenzima no puede ser activada por otros iones. La leucilpeptidasa es activada por iones de magnesio o manganeso. La enzima amilasa salival requiere la presencia de un anin, ion cloruro, para su completa actividad. La teora para las propiedades activadoras de la mayora de los iones metlicos es que forman compuestos de coordinacin y actan como puentes entre el sustrato y la enzima. En la Figura 4.16 se observa el sustrato leucil glicina y su enzima leucil peptidasa empleando manganeso como el ion activador (Mertz, 1985). Figura 4.16. Accin del manganeso como ion activador

Fuente: Mertz (1985)


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Activadores proenzimticos: muchas protenas son elaboradas por las clulas en una forma inactiva denominada preenzima, cimgeno o proenzima. Esta es la forma en que la naturaleza protege a la clula madre de la autodigestin a autolisis. Ejemplos de zimgenos son el pepsingeno, tripsingeno, quimiotripsingeno y protrombina. El pepsingeno es activado a pepsina por hidrogeniones y ms rpidamente por la pepsina misma (autocatlisis). El tripsingeno es activado a tripsina por la enzima enterocinasa y por la misma tripsina. El quimiotripsingeno es activado a quimiotripsina por la tripsina. La protrombina es activada a trombina por la accin combinada de iones calcio, tromboplastina, acelerador del plasma y factores de las plaquetas. Si la trombina fuera secretada por el hgado en la corriente sangunea como trombina activa causara la muerte rpida del animal por coagulacin intravascular (Toporek, 1985; Mertz, 1985).

4.1.5. Inhibicin enzimtica


La actividad de las enzimas puede inhibirse. Las molculas que reducen la actividad de una enzima, denominadas inhibidores, incluyen muchos frmacos, antibiticos, conservantes alimentarios y venenos. Dicha inhibicin es importante para regular las rutas metablicas, numerosos tratamientos clnicos se fundamentan en la inhibicin enzimtica. La inhibicin enzimtica puede producirse cuando un compuesto compite con el sustrato por el lugar activo de la enzima libre, se une al complejo ES en un lugar separado del lugar activo, o se une a la enzima libre en un lugar separado del lugar activo. Se describen tres clases de inhibidores enzimticos: competitivos, acompetitivos y no competitivos Inhibidores competitivos: se unen de forma reversible a la enzima libre, y no al complejo ES, para formar un complejo enzima-inhibidor (EI) como se muestra en la Figura 4.17. Figura 4.17. Formacin del complejo enzima-inhibidor mostrando que no hay reaccin

Fuente: McKee y McKee (2003) Con frecuencia el sustrato y el inhibidor compiten por el mismo lugar en la enzima. El complejo EI se disocia fcilmente, por lo que la enzima est disponible nuevamente para unirse al sustrato. El efecto de un inhibidor competitivo sobre la actividad puede revertirse aumentando la concentracin del sustrato. A [S] elevadas, todos los lugares activos estn llenos de sustrato y la velocidad de reaccin alcanza el valor que se observa sin un inhibidor. Las sustancias que se comportan como inhibidores competitivos, es decir, que reducen la afinidad aparente de una enzima por el sustrato, suelen tener una estructura semejante a la del sustrato. En la grfica de la Figura 4.18 se muestra la representacin de MichaelisMenten de una actividad enzimtica sin inhibir frente a una inhibicin competitiva.

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Figura 4.18. Representacin de Michaelis-Menten de una actividad enzimtica sin inhibir frente a una inhibicin competitiva

Fuente: McKee y McKee (2003) Inhibidores acompetitivos: el inhibidor slo se une al complejo enzima-sustrato, y no a la enzima libre (Figura 4.19). Figura 4.19. Inhibicin acompetitiva

Fuente: McKee y McKee (2003) La adicin de ms sustrato a la reaccin da lugar a un aumento de la velocidad de reaccin, pero no hasta el grado que se observa en las reacciones sin inhibir. La inhibicin acompetitiva suele observarse en las reacciones en las que las enzimas unen ms de un sustrato. Inhibidores no competitivos: el inhibidor puede unirse tanto a la enzima como al complejo enzimasustrato (Figura 4.20). Figura 4.20. Inhibicin no competitiva

Fuente: McKee y McKee (2003) En estas circunstancias el inhibidor se une a un lugar diferente del lugar activo. La unin del inhibidor ocasiona la modificacin de la conformacin de la enzima que impide la formacin del producto. Generalmente, los inhibidores no competitivos, no afectan a la unin del sustrato y se parecen poco o
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nada a ste. La inhibicin no competitiva slo se invierte parcialmente aumentando la concentracin de sustrato. En la Figura 4.21 se representa la grfica de Michaelis-Menten de una actividad enzimtica sin inhibir frente a una inhibicin no competitiva. Figura 4.21. Representacin de Michaelis-Menten de una actividad enzimtica sin inhibir frente a una inhibicin no competitiva

Fuente: McKee y McKee (2003) La inhibicin competitiva, acompetitiva y no competitiva puede diferenciarse fcilmente con representaciones dobles inversas (Figura 4.22), observndose: Figura 4.22. Anlisis cintico de la inhibicin enzimtica

Fuente: McKee y McKee (2003) a) Inhibicin competitiva. Las representaciones de 1/v frente a 1/[S] en presencia de varias concentraciones del inhibidor cortan en el mismo punto sobre el eje vertical, 1/Vmx. b) Inhibicin acompetitiva. Las representaciones de 1/v frente a 1/[S] en presencia de varias concentraciones del inhibidor no tienen una interseccin comn ni en el eje horizontal ni en el eje vertical. c) Inhibicin no competitiva. Las representaciones de 1/v frente a 1/[S] en presencia de varias concentraciones del inhibidor cortan en el mismo punto sobre el eje horizontal -1/Km. Se supone que las constantes de disociacin de ES y ESI son las mismas (McKee y McKee, 2003).

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Algunas sustancias se combinan de forma covalente con las enzimas y las inactivan de manera irreversible (Cuadro 4.4). Casi todos los inhibidores enzimticos irreversibles son sustancias txicas, naturales o sintticas. En la mayora de los casos, estas sustancias reaccionan con algn grupo funcional del lugar activo para bloquear el lugar del sustrato o para dejarlo catalticamente inactivo (Mathews et al., 2005).

4.1.6. Enzimas alostricas


La regulacin de la velocidad de reaccin de las enzimas es un aspecto esencial para que el organismo pueda coordinar sus numerosos procesos metablicos. Las velocidades de la accin de la mayor parte de las enzimas reaccionan a los cambios de la concentracin de los sustratos, porque la concentracin intracelular de muchos de ellos se encuentra dentro de los lmites de la Km. De esta manera, el aumento en la concentracin de sustrato incrementa de inmediato la velocidad de la reaccin, que tiende a hacer volver a esta concentracin hacia sus lmites normales. Por aadidura, algunas enzimas con funciones reguladoras especializadas reaccionan a los efectores alostricos o a la modificacin covalente, o manifiestan velocidades alteradas de sntesis de enzimas cuando cambian las condiciones fisiolgicas. Las enzimas alostricas se encuentran reguladas por molculas que se denominan efectores (o modificadores) que se fijan de manera no covalente en un sitio distinto al sitio activo. Estas enzimas estn compuestas por subunidades mltiples, y el sitio regulador que se enlaza con el efector puede estar localizado en una subunidad que en s misma no es cataltica. La presencia de un efector alostrico puede alterar la afinidad de la enzima por su sustrato, modificar la actividad cataltica mxima de la enzima, o hacer ambas cosas. Los efectores que inhiben la actividad enzimticas se denominan efectores negativos, en tanto que los que incrementan la actividad enzimtica se denominan efectores positivos. Las enzimas alostricas suelen contener subunidades mltiples y a menudo catalizan la etapa programada al principio de una va de reaccin. Cuando el propio sustrato funciona como efector se dice que el efecto es homotrpico. Ms a menudo un sustrato alostrico funciona como efector positivo. En este caso, la presencia de una molcula del sustrato en un sitio sobre la enzima incrementa las propiedades catalticas de los otros sitios de fijacin del sustrato, es decir, los sitios en los que se fijan manifiestan cooperatividad. Estas enzimas producen una curva sigmoidea cuando se proyecta la velocidad de reaccin (V0) contra la concentracin del sustrato (Figura 4.23) en contraste con la curva hiperblica caracterstica de las enzimas que siguen la cintica de Michaelis-Menten. Los efectores positivos y negativos de las enzimas alostricas pueden afectara la Vmx, a la Km o a ambas. En la Figura 4.23 se muestra que en A) est alterada la Vmx y en B) est alterada la concentracin de sustrato que produce la velocidad submxima (K0.5). El efector puede ser diferente del sustrato, caso en el que se dice que el efecto es heterotrpico. Por ejemplo la inhibicin de retroalimentacin que se ilustra en la Figura 4.24 donde la enzima que convierte a A en B tiene un sitio alostrico que se fija al producto final E. Si la concentracin de E aumenta (por ejemplo si no se emplea con la misma rapidez con la que se sintetiza), se inhibe la enzima inicial de la va de reaccin. La inhibicin de retroalimentacin provee a la clula con un producto que necesita al regular el flujo de molculas de sustrato por la va que sintetiza a ese producto.

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Nombre
Cianuro

Cuadro 4.4. Inhibidores enzimticos irreversibles Frmula Origen Modo de accin


Almendras amargas Reacciona con iones metlicos de enzimas (Fe, Zn, Cu); sus dianas primarias son las enzimas de la cadena respiratoria Inhibe enzimas con serina en el lugar activo, como la acetilcolinesterasa Inhibe enzimas con serina en el lugar activo, como la acetilcolinesterasa

Diisopropil fluorofosfat o (DFP)

Sinttico

Sarn

Sinttico (gas nervioso)

Fisostigmin a

Semillas de Physostigma venosum

Inhibe enzimas con serina en el lugar activo, como la acetilcolinesterasa

Paratin

Sinttico (insecticida)

Inhibe enzimas con serina en el lugar activo, como la acetilcolinesterasa pero especialmente de insectos

N-tosil-Lfenilalaninaclor o-metilcetona (TPCK)

Sinttico

Reacciona con la His 57 de la quimiotripsina

Penicilina

Del hongo Penicillium

Inhibe las enzimas de la sntesis de la pared de la clula bacteriana

Fuente: Mathews et al. (2005) Muchas enzimas pueden estar reguladas por modificacin covalente, con ms frecuencia mediante aadidura o remocin de grupos fosfato de residuos de serina, treonina o tirosina especficos de la enzima. La fosforilacin de las protenas se reconoce como una de las maneras primarias en las que se regulan los procesos celulares.

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Figura 4.23. Accin resultante de los efectores negativos (rojo) o positivos (verde) sobre un enzima alostrica

Fuente: Champe et al. (2006) Figura 4.24. Inhibicin de retroalimentacin de una va metablica

Fuente: Champe et al. (2006) Para resumir el tema de enzimas y coenzimas en la Figura 4.25 se muestra un mapa conceptual.

4.2.

Metabolismo y bioenergtica

La transformacin de las sustancias dentro de la clula se lleva a cabo mediante rutas metablicas. Una ruta metablica consiste en una serie de reacciones catalizadas enzimticamente en las que el producto de una enzima es el sustrato de la siguiente. Al conjunto de rutas metablicas que tienen lugar en las clulas vivas se conoce como metabolismo. Las funciones especficas del metabolismo son obtencin de energa de la luz solar o de los nutrientes, transportar los nutrientes al interior de la clula y transformarlos en molculas sencillas, unir estas molculas sencillas para formar macromolculas y otros componentes celulares y, finalmente, sintetizar biomolculas con funciones especializadas en la clula y su degradacin (Figura 4.26) (Garrido, 1991).

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Figura 4.25. Mapa conceptual clave de las enzimas

Fuente: Champe et al. (2006)

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Figura 4.26. Visin general del metabolismo

Fuente: Mathews et al. (2005) La bioenergtica es una rama de la termodinmica (investigacin de las transformaciones energticas que acompaan a los cambios fsicos y qumicos de la materia cuyos principios se utilizan para evaluar el flujo y los intercambios de materia y energa) que estudia las transformaciones energticas en los seres vivos, especialmente es til en la determinacin de la direccin y la cuanta a la que se producen las reacciones bioqumicas especficas. Estas reacciones estn afectadas por tres factores, dos de los cules estn relacionados con la primera y segunda ley de la termodinmica respectivamente y son: entalpa (contenido total de calor) y entropa (desorden). El tercer factor denominado energa libre (energa disponible para realizar un trabajo qumico), deriva de una relacin matemtica entre la entalpa y la entropa (Figura 4.27). Las leyes de la termodinmica describen las transformaciones energticas y son: Primera ley de la termodinmica: la cantidad total de energa del universo es constante. La energa no puede crearse ni destruirse, sino que slo puede transformarse de una forma en otra. Segunda ley de la termodinmica: el desorden del universo aumenta siempre. En otras palabras, todos los procesos fsicos y qumicos slo se producen espontneamente cuando aumenta el desorden. Tercera ley de la termodinmica: al acercarse la temperatura de un cristal slido perfecto al cero absoluto (0 K), el desorden se aproxima a cero.
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Figura 4.27. Relaciones entre los cambios en la energa libre (G), la entalpa (H) y la entropa (S).

Fuente: Champe et al. (2006) T es la temperatura absoluta en grados Kelvin (K=C+273) La termodinmica trata de las transformaciones del calor y la energa que tienen lugar en un universo compuesto por un sistema y su entorno. Cada sistema se define segn el investigador, desde una clula hasta un ser vivo entero o una reaccin en un recipiente. En un sistema abierto la materia y la energa se intercambian entre el sistema y su entorno (Figura 4.28). Si slo puede intercambiarse energa con el entorno, el sistema se dice que es cerrado. Los seres vivos, que consumen nutrientes de su entorno y liberan a l productos de desecho, son sistemas abiertos (McKee y McKee, 2003). Figura 4.28. Un universo termodinmico formado por un sistema y su entorno

Fuente: McKee y McKee (2003) La primera ley establece que la energa no puede crearse ni destruirse, es decir, la cantidad total de energa de un sistema y su entorno, que se denomina energa interna (E), debe ser la misma antes y despus de producirse un proceso. Cuando se est realizando trabajo y se est transfiriendo calor, la primera ley puede establecerse de la siguiente forma:

E = q+w
Donde: E = variacin de energa del sistema q = calor del entorno absorbido por el sistema w = trabajo realizado por el entorno sobre el sistema
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Los qumicos han definido el trmino entalpa (H), que est relacionado con la energa interna, mediante la ecuacin:

H=E+PV
Donde PV = trabajo presin-volumen, es decir, el trabajo realizado sobre o por un sistema que supone variaciones de la presin y del volumen. En los sistemas bioqumicos en los que la presin es constante, las variaciones de entalpa (H) son iguales al calor ganado o perdido por el sistema (E=q). Cuando la variacin del volumen en este proceso es relativamente despreciable, como ocurre en las clulas, la variacin de entalpa es esencialmente igual a la energa interna:

H=E
Cuando H es negativa (H<0), la reaccin o proceso desprende calor y se denomina exotrmico. Cuando H es positiva (H >0), se absorbe calor del entorno y ese proceso se llama endotrmico. En los procesos isotrmicos (H=0), no se intercambia calor con el entorno. Respecto a la segunda ley de la termodinmica, el grado de desorden de un sistema se mide por la funcin del estado denominada entropa (S). Cuanto ms desordenado est un sistema, mayor es el valor de su entropa. La variacin de entropa del universo es positiva para todos los procesos espontneos. El aumento puede tener lugar en cualquier parte del universo (Ssis o Sent):

Suniv=Ssis+Sent.
El conocimiento de las funciones termodinmicas como la entalpa, la entropa y la energa libre permite a los bioqumicos predecir si un proceso es espontneo (termodinmicamente favorable). Esto no indica que se producir la reaccin (es cinticamente favorable), sino que puede tener lugar con un conjunto adecuado de condiciones. Las reacciones slo son cinticamente favorables cuando el sistema que experimenta el cambio dispone de energa suficiente. La variacin de la energa libre (G) es negativa cuando Suniv es negativa, la cual refleja una reaccin espontnea, que se dice es exergnica. Si G es positiva, se dice que el proceso es endergnico (no espontneo). Cuando G es cero, el proceso se encuentra en equilibrio (Figura 4.29). Figura 4.29. Ecuacin de la energa libre de Gibbs

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Un convenio conocido como estado estndar proporciona una base uniforme para los clculos de energa libre. Se define la energa libre estndar, G, para las reacciones a 25 C (298 K) y 1 atm de presin con todos los solutos a una concentracin de 1.0 M. La variacin de energa libre estndar est relacionada con la constante de equilibrio de la reaccin, Keq, el valor del cociente de la reaccin es el equilibrio cuando las velocidades de las reacciones en sentido directo e inverso son iguales. A presin constante, la entalpa (H) es esencialmente igual al contenido total de energa del sistema. Un proceso es espontneo cuando disminuye su energa libre. Las variaciones de energa libre G son negativas si disminuye la entalpa o si el trmino de entropa TS es suficientemente grande. La variacin de la energa libre de la reaccin est relacionada con la constante de equilibrio de la reaccin (McKee y McKee, 2003).

4.2.1. Concepto de anabolismo y catabolismo


El metabolismo se divide en dos fases principales: catabolismo y anabolismo. El catabolismo es la fase degradativa del metabolismo, en el cual las molculas que constituyen los nutrientes, en algunos casos complejas como carbohidratos, protenas y lpidos, que proceden del entorno o de sus propios depsitos de reserva, se degradan para producir molculas sencillas de uno, dos o tres tomos de carbono como CO2, cido actico, cido lctico, etc. El catabolismo va acompaado de liberacin de energa qumica, inherente en las molculas de los nutrientes, parte de la cual se conserva en molculas de ATP. El anabolismo constituye la fase biosinttica del metabolismo. En esta fase se forman, a partir de algunas molculas sencillas procedentes del catabolismo, molculas de elevado peso molecular como protenas, polisacridos, lpidos y cidos nucleicos y otros componentes celulares. La biosntesis de estas biomolculas requiere el consumo de molculas de ATP producidas durante el catabolismo, por lo que precisan de energa (Garrido, 1991):

En las clulas vivas, el catabolismo y anabolismo se llevan a cabo simultneamente, pero al ser dos procesos opuestos, se realizan de forma coordinada y regulados independientemente. El metabolismo implica una serie de rutas metablicas tanto anablicas y catablicas en las que a su vez intervienen varias reacciones con intermediarios, por tal, se emplea con frecuencia el trmino metabolismo intermediario para designar a las rutas qumicas del metabolismo y a los compuestos intermediarios implicados en dichas rutas se les denomina metabolitos (Figura 4.30) (Garrido, 1991). En la Figura 4.31 se observa el organelo donde se efectan las principales rutas metablicas en una clula eucariota vegetal y animal.

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Figura 4.30. Rutas catablicas y anablicas del metabolismo

Fuente: Mathews et al. (2005)

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Figura 4.31. Localizacin de las principales rutas metablicas en una clula eucariota vegetal y animal

Fuente: Mathews et al. (2005)

4.2.2. Trminos de auttrofo, hetertrofo, fottrofo y quimitrofo


Las clulas, segn las diferentes fuentes de carbono que utilizan se pueden clasificar en dos grandes grupos: auttrofas (autoalimentadas) que pueden emplear CO2 como fuente nica de carbono y hetertrofas (alimentadas de otros) que obtienen el carbono de molculas relativamente complejas como glucosa, fructosa, etc.; las clulas auttrofas deben construir a partir del CO2 el esqueleto carbonado de todas las biomolculas de la clula, mientras las hetertrofas lo construyen a partir de las molculas sencillas que se obtienen degradando las molculas complejas que constituyen los nutrientes. Las clulas fotosintticas y algunas bacterias son auttrofas, mientras que las clulas de los animales superiores y de la mayor parte de los microorganismos son hetertrofas. Respecto a la naturaleza de la fuente de energa las clulas se pueden clasificar en fottrofas, que emplean la energa solar, y quimitrofas que utilizan la energa procedente de las reacciones de oxidacin-reduccin. En las plantas superiores, las hojas verdes, que contienen clorofila, son auttrofas, mientras las clulas de las races son hetertrofas. Las clulas de las hojas actan como hetertrofas en la oscuridad, es decir, durante la noche, estas clulas usan como nutrientes las sustancias que sintetizan durante el da.
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El ltimo aceptor de electrones de la cadena respiratoria es el oxgeno y las clulas que requieren de oxgeno se denominan aerobias. Otras clulas emplean otros elementos o molculas como aceptores de electrones y se denominan anaerobias. Otras clulas pueden vivir en medios anaerobios o aerobios y se denominan anaerobias facultativas, ellas pueden usar el oxgeno cuando disponen de l o emplear otras sustancias como aceptores electrnicos. Algunas clulas, sobretodo de microorganismos, no pueden usar el oxgeno en absoluto, son aerobias estrictas y la presencia de oxgeno las envenena. Entre las clulas auttrofas fotosintticas y las hetertrofas existe una relacin denominada sintropa en la que los productos de unas clulas pueden ser utilizados por las otras. As, las clulas fotosintticas producen compuestos orgnicos, como la glucosa a partir de CO2 de la atmsfera, del agua y de la energa solar (Figura 4.32). Las clulas hetertrofas utilizan la glucosa y otros compuestos producidos por las clulas fotosintticas y el O2 de la atmsfera para obtener la energa y los componentes celulares y liberan CO2 que puede ser utilizado nuevamente por las clulas fotosintticas nuevamente. En resumen, el carbono realiza un ciclo entre ambas clases de clulas (Figura 4.33). Figura 4.32. Ciclos del carbono y el oxgeno en la naturaleza

Fuente: Garrido (1991) El nitrgeno es otro elemento esencial de algunos componentes moleculares como protenas, cidos nucleicos y otras biomolculas. Este elemento se encuentra en gran proporcin en la atmsfera, como nitrgeno molecular, N2, pero desde el punto de vista qumico es bastante inerte y no puede ser usado como fuente de nitrgeno por la mayor parte de clulas vivas, por ello, lo obtienen a partir de compuestos nitrogenados como nitratos o aminocidos. La inmensa mayora de las plantas obtienen el nitrgeno del suelo en forma de nitratos, y lo transforman en aminocidos y otros compuestos nitrogenados. Los animales obtienen el nitrgeno de las protenas de las plantas o de otros animales. Las clulas hetertrofas, tanto animales como vegetales, devuelven su nitrgeno al suelo, generalmente en forma de aminocidos, amonaco y urea. Las plantas lo hacen, una vez que han muerto, como productos de procesos de putrefaccin y los animales como productos de excrecin. En el suelo, bacterias de los gneros Nitrosomonas y Nitrobacter oxidan el amonaco a nitratos, los cules pueden ser de nuevo utilizados por las plantas. Resulta as, el ciclo del nitrgeno. Algunas clulas bacterianas, ya sea solas o asociadas con otras vegetales, pueden convertir el nitrgeno atmosfrico en amonaco o en nitratos, aumentando as la fuente de nitrgeno que precisan los seres vivos; dichas bacterias se denominan bacterias fijadoras de nitrgeno o nitrificantes (Figura 4.34) (Garrido, 1991).
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Figura 4.33. Fotosntesis

Fuente: Mathews et al. (2005) Figura 4.34. El ciclo del nitrgeno en la biosfera

Fuente: Garrido (1991)


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4.2.3. Molculas almacenadoras de energa (ATP, ADP, AMP)


La adenosina trifosfato (ATP) desempea una funcin extraordinariamente importante dentro de las clulas. La hidrlisis del ATP proporciona de forma inmediata y directa la energa libre para impulsar una variedad inmensa de reacciones bioqumicas. Producido a partir del ADP y el Pi con la energa liberada por la degradacin de las molculas del alimento y las reacciones luminosas de la fotosntesis, el ATP impulsa varias clases de procesos, entre los que se encuentran la biosntesis de macromolculas, el transporte activo de sustancias a travs de las membranas celulares y el trabajo mecnico, como la contraccin muscular. El ATP est adecuado de forma ideal para su funcin como moneda de intercambio universal debido a su estructura. El ATP es un nucletido formado por adenina, ribosa y una unidad trifosfato. Los dos grupos fosforilo terminales (-PO2-3) estn unidos mediante enlaces fosfoanhdrido (Figura 4.35). Aunque los anhdridos son fcilmente hidrolizables, los enlaces fosfoanhdrido del ATP son suficientemente estables en condiciones intracelulares suaves. Existen enzimas especficas que facilitan la hidrlisis del ATP. Figura 4.35. Estructura de ATP, ADP y AMP. El signo (~) en al ATP indica que los enlaces se hidrolizan con facilidad

Fuente: McKee y McKee (2003) La tendencia del ATP a hidrolizarse, que tambin se denomina potencial de transferencia de grupo, no es singular. Diversas biomolculas pueden transferir grupos fosfato a otros compuestos como los que se muestran en el Cuadro 4.5. Los compuestos fosforilados con valores de hidrlisis G negativos elevados poseen potenciales de transferencia de grupo fosfato ms elevados que aquellos compuestos con valores negativos ms pequeos. Dado que el ATP tiene un poder de transferencia de grupo fosfato intermedio, puede ser un transportador intermedio de grupos fosforilo desde los compuestos de energa ms elevada, como el fosfoenolpiruvato, a los compuestos de energa baja. Por lo tanto, el ATP es la moneda de intercambio para los sistemas vivos, debido a que las clulas normalmente transfieren el fosfato acoplando las
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reacciones a la hidrlisis del ATP. Los dos enlaces fosfoanhdrido del ATP con frecuencia se denominan de energa elevada (Figura 4.36) (McKee y McKee, 2003). Cuadro 4.5. Energa libre estndar de la hidrlisis de biomolculas fosforiladas seleccionadas

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 4.36. Funcin del ATP

Fuente: McKee y McKee (2003) Cuando se oxida un mol de glucosa en una clula aerbica se producen 36 molculas de ATP y cuando se oxida cido palmtico se forman 129 molculas de ATP (Garrido, 1991). El ATP puede hidrolizarse para formar ADP y Pi (ortofosfato) o AMP (adenosina monofosfato) y PPi (pirofosfato). El pirofosfato puede a continuacin hidrolizarse a ortofosfato, liberando ms energa libre. La hidrlisis del ATP para formar AMP y pirofosfato se utiliza frecuentemente para impulsar reacciones con valores de G positivos elevados, o para asegurar que una reaccin procede hasta completarse (Figura 4.37).

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Figura 4.37. Hidrlisis del ATP

Fuente: McKee y McKee (2003) El ATP es un intermediario en el flujo de energa desde las molculas de alimento a las reacciones de biosntesis del metabolismo. La energa libre desprendida en la hidrlisis del ATP se usa para impulsar reacciones que requieren un aporte de energa libre, como son las de contraccin muscular (McKee y McKee, 2003).

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5. Carbohidratos. Generalidades y metabolismo


5.1. Caractersticas generales de los Carbohidratos

Los carbohidratos constituyen la mayor parte de la materia orgnica de la tierra y tienen muy variadas funciones en los seres vivos. Tienen funciones de almacn de energa, son combustibles e intermediarios metablicos. El almidn en los vegetales y el glucgeno en los animales son carbohidratos que pueden ser usados rpidamente para formar glucosa, que es el combustible primario para liberar energa para llevar a cabo las funciones celulares. Participan en la formacin de la pared celular de las bacterias y, adems, los carbohidratos desempean un papel estructural fundamental ya que constituyen parte del exoesqueleto de los artrpodos y forman parte del esqueleto leoso de las plantas; tambin se encuentran unidos a muchas protenas y lpidos en las membranas celulares participando en el reconocimiento intercelular (Laguna y Pia, 2002). En los vegetales, la glucosa se sintetiza mediante la fotosntesis a partir de bixido de carbono y agua, y se almacena como almidn o se convierte en la celulosa vegetal. Los animales tienen la capacidad de sintetizar algunos carbohidratos a partir de las grasas y las protenas, pero el volumen mayor de los carbohidratos animales se obtiene finalmente de los vegetales (Murray et al., 2001). En la fotosntesis, las plantas utilizan la energa de la luz solar para combinar dixido de carbono y agua en hidratos de carbono, liberando oxgeno en el proceso. En la respiracin, tanto las plantas como los animales oxidan los carbohidratos elaborados por las plantas, liberando energa y volviendo a formar CO2 y H2O (Figura 5.1) (Mathews et al., 2005). Figura 5.1. Ciclo energtico de la vida

Fuente:Mathews et al. (2005) Laguna y Pia (2002) mencionan que los carbohidratos componen cerca del 0.3% del organismo (mientras que el agua constituye el 70%, las protenas el 16% y los lpidos 9% en promedio) pero son objeto de un elevado recambio y metabolismo.

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5.1.1. Definicin y frmula emprica


Los carbohidratos o hidratos de carbono o azcares o sacridos o glcidos, son compuestos orgnicos formados por carbono, hidrgeno y oxgeno, aunque en algunos tipos de carbohidratos tambin hay azufre y nitrgeno. Desde el punto de vista qumico se definen como derivados aldehdicos o cetnicos de alcoholes polihdricos, o sea, con varios grupos OH (Laguna y Pia, 2002; Roskoski, 2001). Cuando se inici el estudio de la glucosa se deca que, como era un compuesto formado por 6 carbonos, 12 hidrgenos y 6 oxgenos, o sea, que tena 6 carbonos hidratados, C6(H20)6, se les llamara carbohidratos y posteriormente se comprob que no eran carbonos hidratados, por lo que la frmula de la glucosa se represent C6H12O6 (Laguna y Pia, 2002). Los carbohidratos pueden representarse con la frmula estequiomtrica simple (CH2O)n o son derivados de estos compuestos. Sin embargo, esta frmula est demasiado simple, ya que muchos carbohidratos estn modificados o algunos contienen grupos amino, sulfato y fosfato (Mathews et al., 2005). Laguna y Pia (2002) describen que la frmula general de los polisacridos de mayor importancia es: (C6(H20)5)n que corresponde a un polmero de hexosa, u homopolisacrido. Algunos de estos polmeros son la celulosa, el glucgeno y el almidn, los tres son homopolmeros de glucosa. La inulina es un homopolmero de la fructosa. Cuando la unidad monomrica de monosacrido es variable, se tiene a los heteropolisacridos como el agar-agar, el muclago, la mucina y las gomas vegetales. Cuando los azcares que contienen al polisacrido contienen nitrgeno, se tienen los mucopolisacridos como la heparina, el condroitn-sulfato, el cido hialurnico y la quitina. Lehninger (1983) describe que las fibrillas de celulosa en las paredes celulares de las plantas se encuentran muy densamente empaquetadas y dispuestas en haces paralelos que rodean a la clula y frecuentemente forman capas cruzadas; dichas fibrillas se hallan aglutinadas por una matriz de otros tres materiales polmeros: la hemicelulosa, la pectina y la extensina. Las hemicelulosas no estn estructuralmente relacionadas con la celulosa, sino que son polmeros de las pentosas, sobre todo Dxilanos, los cules son polmerosde la D-xilosa con enlaces (14) y poseen cadenas laterales de arabinosa y de otros azcares. La pectina es un polmero del metil-D-galacturonato. La extensina es una glucoprotena compleja que se halla unida covalentemente a las fibrillas de celulosa y se parece a su correspondiente animal, el colgeno. Los compuestos derivados de los carbohidratos son, entre otros, el cido silico, la vitamina C, la estreptomicina, el inositol, el cido glucornico, el sorbitol, el xilitol, etc. (Laguna y Pia, 2002).

5.1.2. Clasificacin
Los carbohidratos se clasifican en monosacridos, disacridos, trisacridos, tetrasacridos, pentasacridos, hexasacridos, heptasacridos y polisacridos, segn conste de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o muchas molculas de azcares simples o monmeros. Cuando se unen dos molculas de azcares simples, con prdida de una molcula de agua, se constituyen los disacridos o dmeros. Cuando son tres lo que se unen se forman los trisacridos o trmeros, y as sucesivamente; se denominan en general polmeros o polisacridos cuando estn constituidos por muchas molculas de azcares simples o monmeros (Olvera, 1992).

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Murray et al. (2001) realiza una descripcin ms especfica de la clasificacin de los carbohidratos y lo hace as (Cuadro 5.1): Cuadro 5.1. Clasificacin de carbohidratos y ejemplos I. Monosacridos simples Aldosas Cetosas Triosas Gliceraldehdo Dihidroxiacetona Tetrosas Eritrosa Eritrulosa Pentosas Ribosa Ribulosa Hexosas Glucosa Fructosa Heptosas Seudoheptulosa II. Monosacridos derivados steres Glucosa-6-fosfato Azcares alcoholes Glicerol Azcares cidos cido glucornico Azcares aminados Glucosamina III. Oligosacridos Disacridos Maltosa, Lactosa, Sacarosa Trisacridos, etc. Rafinosa, Melicitosa IV. Polmeros (de un monosacrido): Almidones, Glucgenos, Celulosas, Quitina V. Glucosaminoglicanos: Acido hialurnico, Condroitn 4-sulfato, Dermatn sulfato, Heparina, Queratn sulfato, Heparn sulfato, etc. VI. Carbohidratos con protenas Glicoprotenas Receptores de hormonas Proteoglicanos Fuente: Modificado de Lehninger (1983), Murray et al. (2001), Laguna y Pia (2002)

Monosacridos: Son aquellos carbohidratos incapaces de hidrolizarse en carbohidratos ms


simples. Pueden subdividirse en triosas, tetrosas, pentosas, hexosas, heptosas u octosas segn la cantidad de tomos de carbono que poseen, y como aldosas o cetosas por la presencia del grupo aldehdo o del grupo cetona (Cuadro 5.1 y Figuras 5.2), el nombre de estos compuestos termina con osa, y la frmula general es:

Cn(H2O)n
Las molculas ms simples que cumplen con esta definicin son el gliceraldehdo y la dihidroxiacetona (Figura 5.3). El carbono central del gliceraldehdo es asimtrico, es decir, tiene sus 4 valencias saturadas por distintos tomos o radicales (H-C=O, H, OH y H2C-OH). Mertz (1985) define un carbn asimtrico como los tomos de carbono con 4 tomos o grupos atmicos diferentes unidos a ellos. Esta estructura le permite tener dos estereoismeros, el D y el L, de acuerdo a la posicin del H y OH vecinos al alcohol primario, -CH2OH. En las clulas predominan los azcares derivados del D-gliceraldehdo. La dihidroxiacetona no tiene carbono asimtrico (Figura 5.3) (Laguna y Pia, 2002). En el caso del gliceraldehdo y la dihidroxiacetona, poseen la misma composicin atmica, por lo que son tautmeros (ismeros estructurales que difieren en la disposicin de sus hidrgenos y dobles enlaces) y pueden interconvertirse a travs de un intermediario enediol inestable (Figura 5.4).
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Figura 5.2. Grupos funcionales de los monosacridos aldosas (aldehdo) y cetosas (cetona)

Fuente: Lehninger (1983) Figura 5.3. Gliceraldehdo y dihidroxiacetona

Fuente: Modificado de Laguna y Pia (2002) Figura 5.4. Interconversin aldosa-cetosa a travs de un intermediario enediol que es inestable y no puede aislarse

Fuente: Mathews et al. (2005) La D-glucosa, tambin llamada dextrosa o azcar de la uva, se obtiene del jarabe de maz. Tambin est presente como uno de los principales azcares en la miel y en el jugo de muchas plantas y frutas. En los animales la glucosa es un componente vital presente en la sangre (Mertz, 1985). La manosa procede de la digestin de los alimentos que contienen determinados polisacridos o glucoprotenas. La galactosa procede principalmente de la hidrlisis de la lactosa que se encuentra en la leche (Figura 5.5). La fructosa es una cetohexosa que est presente como azcar libre en muchas frutas y tambin se obtiene de la hidrlisis de la sacarosa (Figura 5.6) (Mathews et al., 2005). La L-arabinosa puede aislarse de la goma arbica, la D-ribosa y la 2-D-desoxirribosa son componentes importantes de los cidos nucleicos y la D-xilosa (Figura 5.7) se obtiene de la xilina que existe en los olotes de maz, la paja y la madera (Mertz, 1985).
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Figura 5.5. Estructuras de cadena lineal de algunas hexosas aldosas (aldohexosas)

Fuente: Mertz (1985) Figura 5.6. Ejemplos de cetosas de importancia fisiolgica

Fuente: Murray et al. (2001) Figura 5.7. Estructuras de cadena lineal y representacin de Haworth (*) de las pentosas aldosas

Fuente: Modificado de Mertz (1985), Laguna y Pia (2002)

Disacridos: Son carbohidratos que al hidrolizarse dan lugar a dos molculas de monosacridos.
Los ejemplos son la maltosa (Figura 5.8), sacarosa (Figura 5.9), lactosa (Figura 5.10) y celobiosa (Figura 5.11). Los anhdridos ms simples de los monosacridos se forman por eliminacin de una molcula de agua partiendo de las formas cclicas de dos molculas de monosacridos iguales o diferentes unidos mediante un enlace glucosdico (Figuras 5.8, 5.9, 5.10 y 5.11) (Mertz, 1985, McKee y McKee, 2003).
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Figura 5.8. Frmula de la Maltosa

Fuente: Mertz (1985) Figura 5.9. Frmula de la Sacarosa

Fuente: Mertz (1985) La maltosa da origen a dos molculas de glucosa. La sucrosa o sacarosa da lugar a una molcula de glucosa y una de fructosa. La lactosa da lugar a una molcula de glucosa y una de galactosa. Los tres disacridos anteriores son los que se encuentran libres en cantidades apreciables en la naturaleza, aunque McKee y McKee (2003) comenta que la maltosa es un producto intermediario de la hidrlisis del almidn y no parece existir en forma libre en la naturaleza. La celobiosa se obtiene por la accin de clulas microbianas sobre la celulosa y contiene dos molculas de glucosa ligadas por un enlace glucosdico (1,4) y su estructura es idntica a la maltosa excepto por la direccin del enlace glucosdico. La celobiosa no existe en la naturaleza en forma libre.
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Figura 5.10. Frmula de la Lactosa

Fuente: Mertz (1985) Figura 5.11. Frmula de la Celobiosa

Fuente: Mertz (1985)


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Oligosacridos: Al hidrolizarse producen de 2 a 10 unidades monosacrido, por ejemplo, la


maltotriosa que es un trisacrido que contiene tres residuos de -glucosa.

Polisacridos: Tambin llamados glicanos por Laguna y Pia (2002), al hidrolizarse producen
ms de 10 molculas de monosacrido. McKee y McKee (2003) define a un polisacrido como una molcula que contiene un gran nmero de monosacridos unidos por enlaces glucosdicos. Los almidones y las dextrinas son ejemplos y stos pueden ser lineales o ramificados. En ocasiones se les conoce como hexosanas o pentosanas, de acuerdo con la identidad de los monosacridos producidos al hidrolizarse. La sustitucin de alguno de los grupos funcionales (aldehdo, cetona o alcohol) de un monosacrido por otro grupo funcional, por ejemplo, amino o carboxilo, da lugar a azcares derivados. Si el grupo funcional alcohol primario reacciona con un cido, se forman los steres correspondientes. Por ejemplo, en la bioqumica los steres ms importantes son los que se forman con cido fosfrico, dando como resultado azcares fosforilados, por ejemplo, la ribosa 5-P y la glucosa 6-P (Laguna y Pia, 2002).

5.1.3. Isomera estructural y de configuracin


A los compuestos que poseen la misma frmula estructural pero difieren en la configuracin espacial se les conoce como estereoismeros. La formacin de los ismeros es posible por la presencia de tomos de carbono asimtricos (tomos de carbono unidos a cuatro tomos o grupos diferentes) (Figura 5.3). La cantidad de ismeros posibles de un compuesto depende de la cantidad (n) de tomos de carbono asimtricos y equivale a 2n. Por tanto, la glucosa, con cuatro tomos de carbono asimtricos, presenta 16 ismeros, ya que 24 es igual a 16 (Murray et al., 2001). Los tipos ms importantes de isomera que estn presentes en los monosacridos corresponden a: Isomerismo D y L: la designacin de un ismero de monosacrido como la variante D o, en el caso de la imagen en espejo de ste, como la variante L, est determinada por su relacin espacial con el compuesto progenitor de la familia de los carbohidratos, el monosacrido de tres carbonos glicerosa (gliceraldehdo) (Figura 5.12). Las orientaciones de los grupos H y OH alrededor del tomo de carbono adyacente al carbono del alcohol terminal primario (por ejemplo, el tomo de carbono 5 en la glucosa) determinan la pertenencia del azcar a la serie D o a la serie L. Cuando el grupo OH en este carbono se encuentra a la derecha, el monosacrido constituye un integrante de la serie D; cuando se localiza a la izquierda, a la serie L. La mayor parte de los monosacridos presentes en los mamferos tienen la configuracin D, y las enzimas responsables del metabolismo de dichos monosacridos son especficas para esta configuracin. En los organismos vivos dominan los monosacridos D, Aunque existen monosacridos L como la L-arabinosa que se encuentra en plantas y paredes celulares bacterianas y la L-galactosa. Una caracterstica importante de la estructura de los monosacridos es la que puede apreciarse analizando la frmula del gliceraldehdo. El segundo tomo de carbono tiene sustituyentes diferentes, por lo que es un carbono quiral. Por tal, el gliceraldehdo tiene dos estereoismeros del tipo denominado enantimeros, que son imgenes especulares, no superponibles, uno del otro (Figura 5.13) (Murray et al., 2001; Mathews et al., 2005).

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Figura 5.12. Variantes L y D del gliceraldehdo junto con los ismeros correspondientes de la glucosa

Fuente: Murray et al. (2001) Figura 5.13. Enantimeros del gliceraldehdo

Fuente: Mathews et al. (2005) Cuando se consideran los monosacridos de ms de tres carbonos, aparece una complicacin estructural ya que pueden tener ms de un carbn quiral y ello hace que existan dos tipos de estereoismeros. Estos tipos son los enantimeros (ismeros especulares) y los diasteremeros que se encuentran a partir de las tetrosas. Las tetrosas tienen una frmula emprica (CH2O)4 y poseen dos carbonos quirales en las formas aldosa. As, una aldotetrosa tendr cuatro estereoismeros (Figura 5.14). En general, una molcula con n centros quirales tendr 2n estereoismeros, puesto que existen dos posibilidades en cada centro quiral. Los estereoismeros de este tipo, que no son imgenes especulares se denominan diasteremeros. La treosa y la eritrosa son diasteremeros y cada uno tiene dos enantimeros (D y L) que son imgenes especulares no superponibles.

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Figura 5.14. Estereoqumica de las aldotetrosas

Fuente: Mathews et al. (2005) A diferencia de las aldosas de cuatro carbonos, la cetosa de cuatro carbonos, denominada eritrulosa, slo tiene un carbono quiral (C3) y un nico par de enantimeros (Figura 5.15). Figura 5.15. Los dos enantimeros de la eritrulosa

Fuente: Mathews et al. (2005) Las aldopentosas tienen tres centros quirales, y por tal, cabe preveer 23, o sea, ocho estereoismeros en cuatro pares de enantimeros Mathews et al (2005) muestra en dos figuras las relaciones estereoqumicas de las D-aldosas (Figura 5.16) y las D-cetosas (Figura 5.17). Cada una de las dos series anteriores se genera por adiciones sucesivas de un grupo CHOH (sombreado) inmediatamente por debajo del carbono carbonilo. En cada caso, las dos posibles orientaciones del grupo aadido generan un par de diasteremeros. No se presentan las formas L, que son simplemente las imgenes especulares de las formas D. Olvera (1992) analiza a la glucosa en sus formas D y L (Figura 5.12) y explica que los carbonos que son simtricos son los carbonos nmeros 1 y 6, mientras que los carbonos nmeros 2, 3, 4 y 5 son asimtricos. Segn si una sustancia tiene o no carbonos asimtricos, desva la luz polarizada. De los 16 ismeros de la glucosa, 8 pertenecen a la serie D y 8 a la serie L. Isomeria ptica: La presencia de tomos de carbono asimtricos tambin confiere actividad ptica al compuesto. Al pasar un haz de luz polarizada a travs de una solucin de un ismero ptico,
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dicho haz rota hacia la derecha, dextrorrotacin (d) (+), o hacia la izquierda, levorrotacin (l) (-). Un ismero puede designarse D(+), D (-), L(-) o L(+) para indicar su rotacin estructural con la D o la L gliceraldehdo, pero no necesariamente presenta la misma rotacin ptica. Por ejemplo, la variante de la fructosa presente en la naturaleza corresponde al ismero D(-) (Mathews et al., 2005). Figura 5.16. Relaciones estereoqumicas de las D-aldosas

Fuente: Mathews et al. (2005) En presencia de una cantidad igual se ismeros D y L, la mezcla resultante no tiene actividad ptica, toda vez que las actividades de los ismeros se anulan entre s. Se dice que tal mezcla es racmica. Murray et al. (2001) menciona que los compuestos sintticos necesariamente corresponden a los racmicos, ya que las oportunidades de la formacin de cada ismero ptico son iguales.

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Figura 5.17. Relaciones estereoqumicas de las D-cetosas

Fuente: Mathews et al. (2005) Estructuras cclicas piranosa y furanosa: esta terminologa se basa en que las estructuras cclicas estables de los monosacridos son similares a las estructuras cclicas del pirano y del furano (Figura 5.18). Las cetosas tambin pueden adaptar una forma cclica; por ejemplo, la D-fructofuranosa o la Dfructopiranosa. En el caso de la glucosa en solucin, ms de 99% se presenta en la variante de piranosa (Figura 5.19). Anmeros y : Las formas y de los monosacridos se interconvierten con facilidad cuando se disuelven en agua. Este proceso espontneo se denomina mutarrotacin, en el caso de la D-glucosa cuando sta se disuelve en agua a 25 C y al alcanzar el equilibrio (o sea, no hay un cambio neto en la cantidad de cada forma), la disolucin de glucosa contiene los porcentajes que se indican en la Figura 5.20.
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Figura 5.18. Formas piranosa y furanosa de la glucosa

Fuente: Murray et al. (2001) Figura 5.19. Formas piranosa y furanosa de la fructosa

Fuente: Murray et al. (2001) La estructura cclica de una aldosa es un hemiacetal, ya que se forma por la combinacin de un aldehdo y de un grupo alcohol. De manera similar, la estructura cclica de una cetosa es un hemicetal (Figura 5.21). La glucosa cristalina es -D-glucopiranosa (Figura 5.22). La estructura cclica se conserva en solucin, pero la isomera tiene lugar en la posicin 1, el carbonilo o tomo de carbono anomrico, para dar una mezcla de -glucopiranosa (38%) y est constituido por los anmeros de la glucofuranosa. Este equilibrio se acompaa de rotacin ptica (mutarrotacin) conforme el anillo hemiacetal se abre y forma de nuevo con el cambio de la posicin del H y de los grupos OH en el carbono 1 (Murray et al., 2001).

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Figura 5.20. Mezcla de equilibrio de la D-glucosa

Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003) Figura 5.21. Formacin de hemiacetales y hemicetales de un aldehdo y de una cetona

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 5.22. Frmulas de silla de los anmeros de la D-glucopiranosa

Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003)

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Los anillos hemiacetal y hemicetal cclicos ms estables contienen cinco o seis tomos. Al producirse la ciclacin, el carbono carbonilo se transforma en un nuevo centro quiral. Este carbono se denomina tomo de carbono anomrico. Los dos diasteremeros posibles que pueden formarse durante la reaccin de ciclacin se denominan anmeros (Figura 5.23). Figura 5.23. Mutarrotacin de la glucosa y anmeros de la misma

Fuente: Murray et al. (2001) Los carbohidratos que contienen cuatro o ms carbonos se encuentran principalmente en formas cclicas. La formacin del anillo se produce en disolucin acuosa debido a que los grupos aldehdo y cetona reaccionan reversiblemente con los grupos hidroxilo presentes en el azcar para formar hemiacetales y hemicetales cclicos (Figura 5.24), respectivamente (McKee y McKee, 2003). Figura 5.24. Formacin de la estructura hemiacetal de la glucosa por las Proyecciones de Fischer

Fuente: Modificado de McKee y McKee (2003) Epmeros o estereoisomera: Los ismeros que difieren como resultado de las variaciones en la configuracin del OH y del H en los tomos de carbono 2, 3 y 4 de la glucosa, se conocen como epmeros (Figura 5.25). Desde el punto de vista biolgico, los epmeros ms importantes de la glucosa son la manosa y la galactosa, formados mediante la epimerizacin de los carbonos 2 y 4, respectivamente (Murray et al., 2001).
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Figura 5.25. Epimerizacin de la glucosa

Fuente: Murray et al. (2001) Mathews et al. (2005) define a los diasteremeros que se diferencian en la configuracin de un nico tomo de carbono asimtrico como epmeros. Por ejemplo, la D-glucosa y la D-galactosa son epmeros debido a que sus estructuras slo se diferencian en la configuracin del grupo OH del carbono 4 (Mathews et al., 2005). Olvera (1992) describe el fenmeno de isomera en el espacio o estereoisomera como los carbohidratos en cuyas frmulas tienen igual nmero de carbonos, igual funcin qumica y los mismos grupos alcohlicos, y sin embargo, cada frmula caracteriza a una sustancia con propiedades fsicas, qumicas y biolgicas particulares; en lo nico en que dichas frmulas varan, y que es suficiente para tener diferentes propiedades, es en la distribucin de los hidrgenos e hidroxilos en los carbonos intermedios. Isomerismo aldosa-cetosa: La fructosa presenta la misma frmula molecular que la glucosa, pero difiere en la frmula estructural, debido a que en la posicin 2 existe un grupo ceto potencial (el carbono anomrico de la fructosa), en tanto que en la posicin 1 existe un grupo aldehdo potencial (el carbono anomrico de la glucosa).

5.1.4. Frmulas de proyeccin de Haworth y enlaces glucosdicos


La glucosa es el monosacrido ms importante desde el punto de vista biomdico. La frmula estructural de cadena recta puede explicar algunas de las propiedades de la glucosa, pero desde el punto de vista termodinmico se prefiere la estructura que explica el resto de sus propiedades qumicas. En la mayor parte de los casos es posible representar la frmula estructural como un anillo simple en perspectiva, de acuerdo con la propuesta de Haworth (Figura 5.26). Figura 5.26. Representacin de la glucosa

Fuente: Modificado de Murray et al. (2001), McKee y McKee (2003)


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En la representacin de Haworth la molcula se visualiza lateralmente y por arriba del plano del anillo. Por conveniencia, los enlaces cercanos al observador se representan ms anchos y engrosados. El anlisis mediante difraccin de rayos X muestra que el anillo de seis integrantes y un tomo de oxgeno en realidad presentan forma de silla (Murray et al., 2001). Las proyecciones de Fischer de las molculas de monosacridos cclicas utilizan un enlace largo para indicar la estructura de anillo. Las estructuras de Haworth representan de forma ms ajustada los ngulos y longitudes de enlace que las representaciones de Fischer. Los anillos hemiacetlicos de cinco miembros se denominan furanosas debido a su semejanza estructural con el furano. Por ejemplo, la frmula cclica de la fructosa se denomina fructofuranosa (Figura 5.27). Los anillos de seis miembros se denominan piranosas debido a su semejanza con el pirano. La glucosa, en la forma piranosa, se denomina glucopiranosa. En las proyecciones de Fischer, el hidroxilo anomrico se produce hacia la derecha y el hidroxilo hacia la izquierda, en el caso se los azcares D, los ms comunes en la naturaleza. Figura 5.27. Formas de Fischer y de Haworth de la D-fructosa

Fuente: McKee y McKee (2003) Los hemiacetales y hemicetales reaccionan con los alcoholes para formar el correspondiente acetal o cetal. Cuando la forma cclica hemiacetlica o hemicetlica del monosacrido reacciona con un alcohol, el nuevo enlace se denomina enlace glucosdico (Figura 5.28) y el compuesto se denomina un glucsido. El nombre del glucsido especifica el componente azcar. Por ejemplo, los acetales de la glucosa y los cetales de la fructosa se denominan glucsido y fructsido, respectivamente. Adems, los glucsidos derivados de los monosacridos con anillos de cinco miembros se denominan furansidos y los anillos de seis miembros se denominan piransidos. Si se forma un enlace acetal entre el grupo hidroxilo del hemiacetal de un monosacrido y el grupo hidroxilo de otro monosacrido, el glucsido que se forma se denomina disacrido. Una molcula que contiene un gran nmero de monosacridos unidos por enlaces glucosdicos se denomina polisacrido. Figura 5.28. Ejemplo de un enlace glucosdico

Fuente: Mathews et al. (2005)


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Cuando una molcula de monosacrido est unida a travs de su tomo de carbono anomrico al grupo hidroxilo del carbono 4 de otro monosacrido, el enlace glucosdico se denomina 1,4. Debido a que el grupo hidroxilo anomrico potencialmente puede estar en la configuracin o , pueden formarse dos disacridos posibles cuando se unen dos molculas de azcar: (1,4) o (1,4). Tambin se producen otras variedades de enlaces glucosdicos, es decir, enlaces o (1,1), (1,2), (1,3) y (1,6) (McKee y McKee, 2003). En la Figura 5.29 se muestra al disacrido maltosa con una unin 1,4 y cuyo nombre qumico es -D-glucsido de -D-glucosa, igualmente se muestra el disacrido lactosa con una unin 1,4 y cuyo nombre qumico es D-galactsido de -D-glucosa (Laguna y Pia, 2002). Figura 5.29. Ejemplos de enlaces glucosdicos en disacridos

Fuente: Modificado de Laguna y Pia (2002)

5.1.5. Polisacridos estructurales y de reserva


Las molculas de polisacridos se utilizan como formas de almacenamiento de energa o como materiales estructurales. Estn formadas por un gran nmero de unidades de monosacridos unidos por enlaces glucosdicos. La mayora de los polisacridos comunes son molculas grandes que contienen desde cientos hasta miles de unidades de azcar. Estas molculas pueden tener una estructura lineal, como la de la celulosa o la amilosa (Figura 5.30), o pueden tener formas ramificadas, como las que se encuentran en el glucgeno y la amilopectina. Los pesos moleculares de muchos polisacridos no tienen valores fijos. El tamao de estas molculas es un reflejo del estado metablico de la clula que las produce. Por ejemplo, cuando las concentraciones de glucosa en sangre son elevadas, despus de comer, el hgado sintetiza glucgeno. Las molculas de glucgeno en un animal bien alimentado pueden tener pesos moleculares elevados. Cuando la concentracin de glucosa en sangre decae, las enzimas del hgado empiezan a degradar las molculas de glucgeno, liberando la glucosa al torrente sanguneo. Si el animal sigue en ayunas, el proceso contina hasta que las reservas de glucgeno estn casi agotadas. Los polisacridos se dividen en dos clases: homopolisacridos (formados por un tipo de monosacrido) y heteropolisacridos que contienen dos o ms tipos de monosacridos.

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Figura 5.30. Estructura de la amilosa

Fuente: McKee y McKee (2003) Los homopolisacridos que se encuentran en abundancia en la naturaleza son el almidn, el glucgeno, la celulosa y la quitina. Los tres primeros anteriores al hidrolizarse dan D-glucosa. El almidn (formado por amilosa y amilopectina) y el glucgeno son molculas de almacenamiento de glucosa de las plantas y los animales, respectivamente. La celulosa es el componente estructural principal de las clulas vegetales. La quitina es el componente estructural principal de los exoesqueletos de los artrpodos, como los insectos y los crustceos, y de las paredes celulares de muchos hongos, produce cuando se hidroliza el derivado de glucosa N-acetil glucosamina. En el almidn se encuentran juntos dos polisacridos: amilosa y amilopectina (Figura 5.31). La amilosa est formada por cadenas largas sin ramificar de residuos de D-glucosa que estn unidos por enlaces glucosdicos su forma compacta es ideal para su funcin de almacenamiento. La otra forma de almidn, la amilopectina, es un polmero ramificado que contiene ambos enlaces glucosdicos y Los puntos de ramificacin (1,6) pueden producirse cada 20-25 residuos de glucosa e impiden la formacin de una hlice. El nmero de unidades de glucosa en la amilopectina puede variar desde unos pocos miles a un milln. Los residuos de D-glucosa de la amilosa estn unidos mediante enlaces glucosdicos Figura 5.31. Estructura de la amilopectina y glucgeno

Fuente: McKee y McKee (2003) La inulina es un almidn presente en tubrculos y races de dalias, alcachofas y diente de len. Se puede hidrolizar a fructosa y, por tanto, es fructosano. A diferencia del almidn de papa, la inulina resulta fcilmente soluble en agua tibia, y se ha utilizado en investigaciones fisiolgicas para determinar la velocidad de filtracin glomerular (Murray et al., 2001). El glucgeno es el carbohidrato de almacenamiento de energa de los vertebrados. Se encuentra abundantemente en las clulas hepticas y musculares. El glucgeno tiene una estructura semejante a la de la amilopectina, excepto que tiene ms puntos de ramificacin, posiblemente cada 4 residuos de glucosa en el centro de la molcula (Figura 5.32). En las regiones ms externas de las molculas de glucosa, los puntos de ramificacin no estn tan cercanos (aproximadamente cada 8-12 residuos).

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Debido a que la molcula es ms compacta que otros polisacridos, ocupa poco espacio, una caracterstica importante en los cuerpos animales que se mueven. Figura 5.32. Detalle de la amilopectina y del glucgeno

Fuente: McKee y McKee (2003) La celulosa es un polmero formado por residuos de D-glucopiranosa unidos por enlaces glucosdicos Varios pares de molculas de celulosa sin ramificar, que pueden contener hasta 12 000 unidades de glucosa cada una, se mantienen juntas por enlaces de hidrgeno para formar tiras en forma de lminas denominadas microfibrillas (Figura 5.34). Cada haz de microfibrillas contiene aproximadamente 40 pares de stos (McKee y McKee, 2003). Estas fibrillas se hallan aglutinadas por una matriz de otros tres materiales polmeros: hemicelulosa, pectina y extensina. Las hemicelulosas no estn estructuralmente relacionadas con la celulosa, sino que son polmeros d las pentosas, sobre todo Dxilanos, los cules son polmeros de la D-xilosa con enlaces (14) y poseen cadenas laterales de arabinosa y de otro azcares. La pectina es un polmero del metil-D-galacturonato. La extensina, que es una glucoprotena compleja, se parece a su correspondiente animal, el colgeno y contiene restos de arabinosa y de galactosa (Lehninger, 1983). Figura 5.33. Celulosa

Fuente: McKee y McKee (2003) En la Figura 5.33 se observa que los enlaces de hidrgeno intermoleculares entre molculas de celulosa adyacentes son, en gran medida, responsables de la gran fuerza de la celulosa.
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Figura 5.34. Organizacin de las paredes de las clulas vegetales

Fuente: Mathews et al. (2005) La estructura y funcin de la quitina son semejantes a las de la celulosa. Las unidades monomricas de N-acetil-glucosamina estn unidas en cadenas sin ramificar por enlaces glucosdicos (1,4). Se forman microfibrillas a partir de las molculas de quitina adyacentes que estn unidas fuertemente por enlaces de hidrgeno y las cadenas pueden estar en forma paralela o antiparalela. Los heteropolisacridos son polmeros de hidratos de carbono de peso molecular elevado que contienen ms de una clase de monosacrido. Entre los ejemplos importantes se encuentran los glucosaminoglucanos (GAG), los componentes principales de los proteoglucanos y la murena, un componente importante de las paredes de las clulas bacterianas. Los glucosaminoglucanos son polmeros lineales con unidades repetitivas de disacridos. Muchos de los residuos de azcar son aminoderivados. Muchas unidades disacrido contienen ambos grupos funcionales carboxilo y sulfato. Los GAG se clasifican de acuerdo con sus residuos de azcar, los enlaces entre estos residuos y la presencia y localizacin de los grupos sulfato. Se diferencian 5 clases de GAG: cido hialurnico, condroitn sulfato, dermatn sulfato, heparina y heparn sulfato y queratn sulfato. A pH fisiolgico los GAG tienen muchas cargas negativas. La repulsin de carga separa a los GAG unos de otros. Adems, las cadenas polipeptdicas relativamente inflexibles son muy hidrfilas. Los GAG ocupan un enorme volumen con relacin a su masa porque atraen grandes volmenes de agua. Por ejemplo, el cido hialurnico hidratado ocupa un volumen 1000 veces mayor que en su estado seco. Los compuestos que se producen por enlaces covalentes entre molculas de carbohidratos y protenas y/o lpidos se denominan de forma genrica glucoconjugados. Estas sustancias tienen efectos profundos sobre la funcin de las clulas individuales, as como sobre las interacciones clula-clula de los organismos multicelulares. Existen dos clases de conjugados carbohidrato-protena: proteoglucanos y glucoprotenas. Los glucolpidos son oligosacridos que contienen molculas de lpidos y se encuentran principalmente en la superficie externa de las membranas plasmticas (McKee y McKee, 2003).
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5. 2. Metabolismo de carbohidratos
Las clulas se encuentran en un estado de actividad incesante. Para mantener su vida, cada clula depende de reacciones bioqumicas complejas y muy coordinadas (McKee y McKee, 2003). Mathews et al. (2005) describe los siguientes trminos referentes al metabolismo en general: Metabolismo intermediario: Comprende todas las reacciones relacionadas con el almacenamiento y la generacin de energa metablica y con el empleo de esa energa en la biosntesis de compuestos de bajo peso molecular y compuestos de almacenamiento de energa. No se incluye la biosntesis de cidos nucleicos y las protenas a partir de sus precursores monomricos. Las reacciones del metabolismo intermediario pueden interpretarse como aquellas que no implican un molde de cido nucleico, puesto que la informacin necesaria para especificar cada reaccin est incluida en la estructura de la enzima que cataliza esa reaccin. Metabolismo energtico: Es la parte del metabolismo intermediario formada por las rutas que almacenan o generan energa metablica. Rutas centrales del metabolismo: Son bsicamente las mismas en muchos organismos muy distintos, y explican las cantidades relativamente grandes de transferencia de masa y de generacin de energa que se producen en el interior de una clula; son las rutas principales desde el punto de vista cuantitativo. Durante la gluclisis, una ruta que se encuentra en casi todos los organismos, se captura una cantidad pequea de energa al convertirse una molcula de glucosa en dos molculas de piruvato. El glucgeno, que es una forma de almacenamiento de glucosa en los animales vertebrados, se sintetiza por glucognesis cuando la concentracin de glucosa es alta y se degrada por glucogenlisis cuando el aporte de glucosa es pequeo. La glucosa puede tambin sintetizarse a partir de precursores distintos de los carbohidratos mediante reacciones denominadas gluconeognesis. La ruta de las pentosas fosfato permite a las clulas convertir la glucosa-6-fosfato, un derivado de la glucosa, en ribosa-5-fosfato que es el azcar que se utiliza para sintetizar los nucletidos y los cidos nucleicos y otros monosacridos, adems de producir NADPH que es un agente reductor importante. La sntesis y utilizacin de la glucosa, el combustible principal de la mayora de los organismos, son el centro del metabolismo de los carbohidratos. En los vertebrados, la glucosa se transporta en la sangre por todo el cuerpo. Cuando las reservas de energa celular son bajas, la glucosa se degrada en la ruta glucoltica. Las molculas de glucosa que no se requieren para producir energa de forma inmediata se almacenan en forma de glucgeno en el hgado y en el msculo. Dependiendo de los requerimientos metablicos de la clula, la glucosa tambin puede utilizarse para sintetizar otros monosacridos, cidos grasos y determinados aminocidos. Por esta razn, la gluclisis es un ejemplo de ruta anfiblica, las cuales son rutas que operan como procesos anablicos y catablicos (McKee y McKee, 2003). En la Figura 5.35 se muestran las principales rutas del metabolismo de los carbohidratos en los mamferos. Se observa, entre otras cosas, que la glucosa se oxida por gluclisis, una ruta que genera energa, que la convierte en piruvato. En ausencia de oxgeno, el piruvato se convierte en lactato. Cuando se encuentra presente el oxgeno, el piruvato se degrada ms para formar acetil-CoA. Pueden extraerse de la acetil-CoA, por el ciclo del cido ctrico y el sistema de transporte de electrones, cantidades significativas de energa en forma de ATP. El nmero 1 representa la digestin de los
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carbohidratos y la absorcin de los monosacridos, el nmero 2 la interconversin de hexosas, el 3 la glucognesis, el 4 la glucogenlisis, el 5 la gluclisis, el 6 la gluconeognesis y el 7 la va de las pentosas (Laguna y Pia, 2002; McKee y McKee, 2003). Figura 5.35. Principales rutas del metabolismo de los carbohidratos

Fuente: Laguna y Pia (2002) La gluclisis, que consta de 10 reacciones, tiene lugar en dos fases (Figura 5.36):

5.2.1. Gluclisis y gluconeognesis (catabolismo y anabolismo de la glucosa) Gluclisis: Es un conjunto de reacciones que tienen lugar en todas las clulas. Tanto las enzimas como el nmero y mecanismos de los pasos de la ruta son muy semejantes en procariotas y eucariotas. Tambin es llamada ruta de Embdem-Meyerhof-Parnas. Cada molcula de glucosa se divide y convierte en dos unidades de tres carbonos (piruvato). Durante este proceso se oxidan varios tomos de carbono. La pequea cantidad de energa que se captura durante las reacciones glucolticas (alrededor del 5% del total disponible) se almacena temporalmente en dos molculas de ATP y dos de NADH. El destino ulterior del piruvato depende del organismo que se considere y de sus circunstancias metablicas. En los organismos anaerobios (los que no usan oxgeno para generar energa como los microorganismos del rumen), el piruvato puede convertirse en productos de desecho y/o energticos como el etanol, cido lctico, cido actico, etc. Utilizando el oxgeno como aceptor electrnico

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terminal, los organismos aerobios, como los animales y vegetales, oxidan totalmente el piruvato para formar CO2 y agua en un mecanismo complejo por pasos, conocido como respiracin aerobia. Figura 5.36. Ruta glucoltica

Fuente: McKee y McKee (2003) Fase 1: La glucosa se fosforila dos veces y se fracciona para formar dos molculas de gliceraldehdo3-fosfato (G-3-P). Las dos molculas de ATP que se consumen durante esta fase son una inversin ya que esta fase crea los sustratos reales de la oxidacin de una forma que se atrapan dentro de la clula. Fase 2: El G-3-P se convierte en piruvato. Se producen cuatro molculas de ATP y dos de NADH. Debido a que se han consumido dos ATP en la fase 1, la produccin neta de ATP por molcula de glucosa es de 2 (McKee y McKee, 2003).
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La ruta glucoltica puede resumirse en la siguiente ecuacin:

D-Glucosa + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+ 2 piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2H+ + 2 H2O


En la Figura 5.36, las reacciones con flechas dobles son reacciones reversibles, y las que tienen una nica flecha son reacciones irreversibles que sirven como puntos de control de la ruta. Las 10 reacciones de la ruta glucoltica, descritas por McKee y McKee (2003), son las siguientes: 1. Sntesis de glucosa-6-fosfato, con gasto de una molcula de ATP.

2. Conversin de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.

3. Fosforilacin de la fructosa-6-fosfato, con gasto de una molcula de ATP.

La PFK-1 es la fosfofructoquinasa-1. 4. Escisin de la fructosa-1,6-bisfosfato

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5. Interconversin del gliceraldehdo-3-fosfato y la dihidroxiacetona fosfato

6. Oxidacin del gliceraldehdo-3-fosfato con gasto de 2 molculas de cido fosfrico y formacin de dos molculas de NADH

7. Transferencia del grupo fosforilo con produccin de 2 molculas de ATP

8.

Interconversin del 3-fosfoglicerato y 2-fosfoglicerato

9. Deshidratacin del 2-fosfoglicerato

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La interconversin de las formas ceto y enol, que tambin se llaman tautmeros, se denomina tautomerizacin:

10. Sntesis de piruvato con produccin de 2 molculas de ATP

En trminos de energa, el resultado de la gluclisis es la produccin de 2 ATP y 2 NADH por molcula de glucosa. El piruvato, el otro producto de la gluclisis, es una molcula con gran energa, que puede producir una cantidad sustancial de ATP siguiendo la va aerbica o tambin llamada respiracin (ciclo de Krebs, transporte de electrones y fosforilacin oxidativa), pero primeramente se descarboxila y se forma una molcula intermedia, para que pueda esto suceder. Dicha molcula es la acetil-CoA, que es el sustrato de entrada del ciclo del cido ctrico, una ruta anfiblica que oxida totalmente dos carbonos a CO2 y NADH. En presencia de oxgeno, este ciclo opera al ceder los electrones del NADH (y el FADH2, otro transportador electrnico) producido en el ciclo del cido ctrico al oxgeno a travs del sistema de transporte electrnico para producir agua. El sistema de transporte electrnico consiste en una serie de reacciones ligadas de oxidacin-reduccin que transfiere los electrones desde los donadores, como el NADH, hasta los aceptores, como el O2. Acoplado a este proceso est la generacin de un gradiente de protones que impulsa la sntesis de ATP. En condiciones anaerobias est impedida una posterior oxidacin del piruvato y se lleva a cabo un proceso llamado fermentacin. Diversas clulas y organismos lo compensan convirtiendo esta molcula en un compuesto orgnico ms reducido y regenerando el NAD+ que se requiere para que contine la gluclisis. Este proceso de regeneracin del NAD+ se denomina fermentacin. Las clulas musculares y determinadas especies bacterianas, como Lactobacillus, producen NAD+ transformando el piruvato en lactato. En las clulas musculares que se contraen rpidamente la energa demandada es elevada. Tras reducirse el suministro de O2, la fermentacin del cido lctico proporciona NAD+ suficiente para permitir que contine la gluclisis (con su bajo nivel de produccin de ATP) durante un perodo de tiempo corto. Los animales rumiantes tienen la peculiaridad de que en el rumen se lleva a cabo una fermentacin anaerobia con un pH entre 5.5 y 7.2, dependiendo del alimento que est consumiendo el animal. En el rumen se encuentran gases como producto de la fermentacin ruminal, los principales son el bixido de carbono (60-70%), metano (30-40%), nitrgeno (7%), oxgeno (0.6%), hidrgeno (0.6%) y cido sulfhdrico (0.01%). El lquido ruminal contiene bicarbonato, amonaco y cidos grasos voltiles (AGV). Un contenido normal d AGV sera alrededor de 100158

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acetato, 20% de propionato, 15% de butirato y 5% de cidos mayores como isobutirato, valerato e isovalerato. Los AGV son absorbidos a travs de la pared ruminal y son la principal fuente de energa para el rumiante ya que la mayor parte de la glucosa disponible a nivel celular se forma a partir de estos cidos (Spross, 2002). En la figura 5.37 se observa que cuando se dispone de oxgeno (izquierda), los organismo aerobios oxidan totalmente el piruvato a dixido de carbono y agua. En ausencia de oxgeno, el piruvato puede convertirse en varias clases de molculas reducidas. En algunas clulas, como las levaduras, se produce etanol y dixido de carbono (centro). En otras clulas, como las musculares, tiene lugar la fermentacin homolctica en la que el lactato es el nico producto orgnico (derecha). En todos los procesos de fermentacin el fin principal es regenerar el NAD+, de forma que pueda continuar la gluclisis (McKee y McKee, 2003). Figura 5.37. Destinos del piruvato

Fuente: McKee y McKee (2003) La regulacin de la gluclisis es compleja por el papel crucial de la glucosa en la generacin de energa y sntesis de diversos metabolitos. El ritmo al que opera la ruta glucoltica est controlado principalmente por la regulacin alostrica de tres enzimas: hexoquinasa (reaccin 1), PFK-1 (reaccin 3) y piruvato quinasa (reaccin 10) (Cuadro 5.2 y Figura 5.38). Las reacciones catalizadas por estas enzimas son irreversibles y pueden activarse o desactivarse por efectores alostricos que son molculas cuyas concentraciones celulares son indicadores sensibles del estado metablico de una clula. Algunos efectores alostricos son molculas producto. Por ejemplo, la hexoquinasa se inhibe por el exceso de glucosa-6-fosfato. Varias molculas relacionadas con la energa actan tambin como efectores alostricos. Por ejemplo, una concentracin elevada de AMP (un indicador de una produccin baja de energa) activa a la PFK-1 y a la piruvato quinasa. Por el contrario, una concentracin elevada de ATP (un indicador de que estn satisfechas las necesidades metablicas de la clula) inhibe ambas enzimas. El citrato y la acetil-CoA, que se acumulan cuando hay abundancia de ATP, inhiben la PFK-1 y la piruvato quinasa, respectivamente. La fructosa-2,6-bisfosfato, producida por la modificacin covalente de la PFK-2 inducida hormonalmente, es un indicador de concentraciones elevadas de glucosa
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disponible y activa alostricamente la PFK-1. La fructosa-1,6-bisfosfato que se acumula activa la piruvato quinasa, proporcionando un mecanismo de control hacia adelante (es decir, la fructosa-1,6bisfosfato es un activador alostrico). Cuadro 5.2. Regulacin alostrica de la gluclisis Enzima Activador Inhibidor Glucosa-6-fosfato, ATP Hexoquinasa Fructosa-2,6-bisfosfato, AMP Citrato, ATP PFK-1 Fructosa-1,6-bisfosfato, AMP Acetil-CoA, ATP Piruvato quinasa Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 5.38. Esquema general de la regulacin de la gluclisis y puntos de coordinacin con otras rutas metablicas

Fuente: Mathews et al. (2005) El glucagn, presente cuando la glucosa srica es baja, activa la funcin fosfatasa de la PFK-2, reduciendo la concentracin de fructosa-2,6-bisfosfato de la clula. La insulina, presente cuando la
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glucosa srica es elevada, activa la funcin quinasa de la PFK-2, aumentando la concentracin de fructosa-2,6-bisfosfato de la clula (McKee y McKee, 2003). En la Figura 5.39 se observa que los intermediarios de la glucosa son precursores de numerosos compuestos, en especial de lpidos y aminocidos. Hay muchas rutas que conducen a la gluclisis y otras que divergen a partir de ella, lo cual crea un flujo considerable a travs de la ruta (Mathews et al., 2005). Figura 5.39. Destinos alternativos de los intermediarios glucolticos en las rutas de biosntesis

Fuente: Mathews et al. (2005)

Gluconeognesis: La mayora de los rganos animales pueden metabolizar diversas fuentes de


carbono para generar energa: triacilgliceroles, diversos azcares, piruvato, aminocidos, etc., sin embrago, el cerebro y el sistema nervioso central necesitan glucosa como nica o principal fuente de carbono. Lo mismo ocurre en algunos otros tejidos, como la mdula renal, los testculos y los eritrocitos. Por ende, las clulas animales deben ser capaces de sintetizar glucosa a partir de otros precursores y tambin de mantener las concentraciones sanguneas de glucosa dentro de lmites estrechos, tanto para el funcionamiento del cerebro y sistema nervioso central de manera adecuada,

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como para proporcionar precursores para el almacenamiento de glucgeno en otros tejidos ( Mathews et al., 2005). La gluconeognesis es la formacin de molculas nuevas de glucosa a partir de precursores que no son carbohidratos y se produce principalmente en el hgado. Estos precursores son el lactato, el piruvato, el glicerol y determinados -cetocidos (molculas que derivan de los aminocidos). En determinadas situaciones (acidosis metablica e inanicin) el rin puede formar glucosa. Entre comidas se mantienen las concentraciones sanguneas adecuadas de glucosa por la hidrlisis del glucgeno heptico. Cuando el glucgeno heptico se agota (como en un ayuno prolongado o ejercicio vigoroso), la ruta gluconeognica proporciona al organismo la glucosa adecuada. En circunstancias excepcionales, las clulas cerebrales tambin pueden utilizar determinados derivados de los cidos grasos para generar energa. La secuencia de la gluconeognesis es, en gran medida, la inversa de la gluclisis (Figura 5.40). Sin embargo, hay tres reacciones glucolticas, las catalizadas por la hexoquinasa, la PFK-1 y la piruvato quinasa, que son irreversibles y, por ende, se usan reacciones alternativas catalizadas por enzimas diferentes (McKee y McKee, 2003). Las reacciones de la gluconeognesis, mostradas por McKee y McKee (2003), son las siguientes: 1er rodeo: Sntesis de fosfoenolpiruvato (PEP): la sntesis de PEP a partir de piruvato requiere dos enzimas: piruvato carboxilasa y PEP carboxiquinasa. La piruvato carboxilasa, que se encuentra dentro de las mitocondrias, convierte el piruvato en oxalacetato (OAA) (Figura 5.40 y 5.41). La coenzima biotina acta como transportador de CO2 y est unida covalentemente a la enzima piruvato carboxilasa a travs de un grupo amino de la cadena lateral de un residuo de lisina. El OAA se descarboxila y fosforila por la PEP carboxiquinasa en una reaccin impulsada por la hidrlisis de la guanosina trifosfato (GTP). La PEP carboxiquinasa se encuentra dentro de las mitocondrias de algunas especies y en el citoplasma de otras. La membrana mitocondrial interna es impermeable al OAA y las clulas que carecen de PEP carboxiquinasa mitocondrial transfieren el OAA al citoplasma, usando la lanzadera de malato que consiste en que el OAA se convierte en malato por la malato deshidrogenasa mitocondrial. Tras el transporte del malato a travs de la membrana mitocondrial, la reaccin inversa est catalizada por la malato dehidrogenasa citoplsmica (McKee y McKee, 2003). 2 rodeo: Conversin de la fructosa-1,6-bisfosfato en fructosa-6-fosfato: la reaccin irreversible de la gluclisis catalizada por la PFK-1 se evita por la fructosa-1,6-bisfosfatasa:

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Figura 5.40. Va de la gluconeognesis

Fuente: Nelson y Cox (2001) Esta reaccin exergnica es tambin irreversible en las condiciones celulares. El ATP no se regenera. La fructosa-1,6-bisfosfatasa es una enzima alostrica. Su actividad se estimula por el citrato y se inhibe por el AMP y la fructosa-2,6-bisfosfato.

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3er rodeo: Formacin de glucosa a partir de glucosa-6-fosfato: la glucosa-6-fosfatasa, que slo se encuentra en el hgado y el rin, cataliza la hidrlisis irreversible de la glucosa-6-fosfato para formar glucosa y Pi. A continuacin, la glucosa se libera a la sangre. Figura 5.41. Reacciones clave de la gluconeognesis

Fuente: Lehninger, 2001 Cada una de las tres reacciones anteriores est emparejada con una reaccin opuesta irreversible en la gluclisis. Cada conjunto de estas reacciones emparejadas se denomina ciclo de sustrato. Debido a que estn reguladas de forma coordinada (un activador de la enzima que cataliza la direccin directa sirve como inhibidor de la enzima que cataliza la reaccin inversa), se desperdicia muy poca energa a pesar de que ambas enzimas pueden estar funcionando al mismo nivel al mismo tiempo. El control de flujos (regulacin del flujo de sustrato y eliminacin del producto) es ms eficaz si la acumulacin transitoria de un producto se alcanza hacia atrs a travs del ciclo. La velocidad cataltica de la enzima en sentido directo permanecer elevada si la concentracin del sustrato se hace mxima. La ganancia de eficacia cataltica compensa con creces la pequea prdida de energa del reciclado del producto. La gluconeognesis es un proceso que consume energa. En lugar de generar ATP (como la gluclisis), la gluconeognesis requiere la hidrlisis de seis enlaces fosfato de energa elevada (Figura 5.40) (McKee y McKee, 2003). Los precursores gluconeognicos son molculas que se pueden utilizar para la sntesis neta de glucosa. Son todos los intermediarios de la gluclisis y del ciclo del cido ctrico. Los ms importantes son glicerol, lactato, propionato (rumiantes) y cetocidos alfa obtenidos de la desaminacin de los aminocidos glucognicos A continuacin se describen dichos precursores: Glicerol: Se libera durante la hidrlisis de los triacilgliceroles en el tejido adiposo y pasa por la sangre hacia el hgado. Se fosforila por la accin de la cinasa del glicerol hasta fosfato de glicerol, al que oxida la deshidrogenasa de glicerol hasta fosfato de dihidroxiacetona, que es un intermediario de la
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gluclisis. Cabe mencionar que los adipocitos no pueden fosforilar al glicerol porque carecen de cinasa de glicerol (Champe et al., 2006). As, los mamferos no pueden efectuar una transformacin neta de cidos grasos en glucosa, mientras que el glicerol, componente de muchos lpidos, s (Laguna y Pia, 2002). Lactato: El msculo esqueltico en actividad descarga lactato hacia la sangre, al igual que las clulas que carecen de mitocondrias, como los eritrocitos. Durante el ciclo de Cori o ciclo del cido lctico (Figura 5.42), la glucosa transportada en la sangre se convierte, en el msculo esqueltico activo, en lactato, que se difunde hacia la sangre. El hgado capta este lactato sanguneo y lo convierte en glucosa, a la que devuelve hacia la circulacin (Champe et al., 2006; Murray et al., 2001). Figura 5.42. Ciclo de cori

Fuente: Mathews et al. (2005) Propionato: En todos los organismos, una acil-CoA de tres carbonos, la propionil-CoA, se genera, bien a partir de la degradacin de algunos aminocidos o bien a partir de la oxidacin de los cidos grasos que tienen un nmero impar de tomos de carbono. La propionil-CoA entra en la gluconeognesis a travs de su conversin en succinil-CoA y de sta en oxalacetato:

En el proceso interviene una coenzima que deriva de la vitamina B12. Aunque todos los organismos utilizan el propionato como sustrato gluconeognico, este compuesto es especialmente importante en el metabolismo de los animales rumiantes como las vacas que realizan una gran cantidad de
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gluconeognesis a partir de diversos sustratos, debido a la gran cantidad de fermentacin bacteriana que se produce en sus diversas cmaras estomacales, donde la accin de las diversas bacterias degrada las sustancias vegetales, en especial la celulosa, para dar glucosa, pero antes de que la glucosa pueda absorberse al torrente sanguneo, como ocurre en la digestin humana, se fermenta para producir diversos productos, en especial lactato y propionato. El propionato se convierte en propionil-CoA y luego en succinil-CoA, y el lactato simplemente se deshidrogena a piruvato (Mathews et al., 2005). Aminocidos: Los aminocidos derivados de la hidrlisis de las protenas tisulares son las fuentes principales de glucosa durante el ayuno (Cuadro 5.3). Los cetocidos alfa, como oxalacetato y cetoglutarato alfa, se derivan del metabolismo de los aminocidos glucognicos. Estas sustancias pueden entrar en el ciclo del cido ctrico y formar oxalacetato, un precursor directo del fosfoenolpiruvato. Existen aminocidos que son cetgenos, ya que originan cuerpos cetnicos como la leucina y la lisina. Cuadro 5.3. Clasificacin de aminocidos

Arginina e histidina son esenciales en algunas condiciones. Fuente: Modificado de Champe et al. (2006 La regulacin de la gluconeognesis depende de la concentracin del glucagn circulante y de la disponibilidad de sustratos gluconeognicos. Las concentraciones disminuidas de insulina favorecen la movilizacin de aminocidos a partir de las protenas musculares y ofrecen los esqueletos de carbono para la gluconeognesis. El glucagn es una hormona de los islotes pancreticos que estimula la gluconeognesis mediante tres mecanismos: 1. Cambios en los efectores alostricos, es decir, el glucagn disminuye la concentracin de fructosa-2,6-difosfato, lo que da por resultado activacin de fructosa-1,6-difosfatasa e inhibicin de fosfofructocinasa. 2. Modificacin covalente de la actividad enzimtica ya que el glucagn, mediante la elevacin de la concentracin de cAMP y actividad de la cinasa de protenas dependiente del cAMP, estimula la conversin de cinasa de piruvato hasta su forma inactiva o fosforilada, lo que disminuye la conversin de PEP en piruvato y llevando el PEP hacia la sntesis de glucosa. 3. Induccin de la sntesis de enzimas ya que el glucagn incrementa la transcripcin del gen de la carboxicinasa de PEP, lo que aumenta la disponibilidad de la actividad de esta enzima conforme lo hacen las concentraciones de su sustrato durante el ayuno.
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Otra manera de regular la gluconeognesis es mediante la activacin alostrica por la acetil-CoA y la inhibicin alostrica por el AMP. La activacin alostrica de la carboxilasa de piruvato heptica por la acetil-CoA se produce durante el ayuno. El hgado se ve inundado por cidos grasos como resultado de la liplisis excesiva en el tejido adiposo. La tasa de formacin de acetil-CoA por la oxidacin beta de estos cidos grasos excede la capacidad del hgado para oxidarla hasta CO2 y H2O. Como resultado se acumula acetil-CoA, lo que activa la carboxilasa de piruvato. El AMP activa la fosfofructocinasa e inhibe la fructosa-1,6-difosfatasa, as, el AMP elevado estimula las vas que oxidan a los nutrimentos a fin de proveer energa a la clula (Figura 5.43). Figura 5.43. Mapa conceptual de la gluconeognesis

Fuente: Champe et al. (2006)

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5.2.2. Glucogenlisis y glucognesis (catabolismo y anabolismo del glucgeno)


El metabolismo del glucgeno est regulado de forma cuidadosa para evitar el derroche de energa. Tanto la sntesis como la degradacin estn controladas mediante un mecanismo complejo con participacin de la insulina, el glucagn y la adrenalina. Estas hormonas inician procesos que controlan varios conjuntos de enzimas (Figura 5.44). La unin del glucagn a las clulas hepticas estimula la glucogenlisis e inhibe la glucognesis. Al caer la concentracin sangunea de glucosa horas despus de una comida, el glucagn asegura la liberacin de glucosa al torrente sanguneo. Tras unirse el glucagn a su receptor, la adenilato ciclasa (una enzima de la membrana celular) se estimula y convierte el ATP en la molcula sealizadora intracelular AMP 3-5-cclico, que se abrevia cAMP. Luego el cAMP inicia una cascada de reacciones que amplifica la seal original. En segundos, unas pocas molculas de glucagn han iniciado la liberacin de miles de molculas de glucosa. Figura 5.44. Control hormonal de la glucogenlisis, glucognesis y gluconeognesis

Fuente: Delgado (2007)

Glucogenlisis: Es la degradacin del glucgeno que requiere de las dos siguientes reacciones:
1. Eliminacin de la glucosa de los extremos no reductores del glucgeno (el extremo reductor es en el que el anillo puede abrirse para formar un grupo aldehdo libre con propiedades reductoras. La reduccin de los grupos aldehdo y cetona de los monosacridos proporciona los azcares alcohol o alditoles). Utilizando fosfato inorgnico (Pi), la glucgeno fosforilasa rompe los enlaces (1,4) de las ramificaciones externas del glucgeno para dar glucosa-1-fosfato. La glucgeno fosforilasa se detiene cuando llega a cuatro residuos de glucosa hasta el punto de ramificacin, denominndose a esta molcula de glucgeno que llega a este punto de ramificacin dextrina lmite (Figura 5.45).
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La glucgeno fosforilasa, nombrada en la Figura 5.45, cataliza la separacin de los residuos de glucosa de los extremos no reductores de una cadena de glucgeno. Figura 5.45. Principales factores que afectan el metabolismo del glucgeno

Fuente: Champe et al. (2006) 1. Hidrlisis de los enlaces glucosdicos (1,6) en los puntos de ramificacin del glucgeno. La amilo- (1,6)-glucosidasa, que tambin se denomina enzima desramificante, comienza a eliminar los puntos de ramificacin (1,6) transfiriendo los tres residuos de glucosa ms externos de los cuatro unidos al punto de ramificacin a un extremo no reductor cercano. Luego elimina el nico residuo de glucosa unido en cada punto de ramificacin. El producto de esta ltima reaccin es glucosa libre (Figura 5.46).
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Figura 5.46. Degradacin de glucgeno por la amilo--(1,6)-glucosidasa (enzima desramificante)

Fuente: McKee y McKee (2003) En la Figura 5.47 y Figura 5.48 se presenta un resumen de la glucogenlisis donde se muestra que la glucgeno fosforilasa rompe los enlaces (1,4) del glucgeno para producir glucosa-1-fosfato hasta que llega a cuatro residuos de glucosa de un punto de ramificacin. La enzima desramificante transfiere tres de estos residuos a un extremo no reductor cercano y libera el cuarto residuo como glucosa libre. Las acciones repetidas de ambas enzimas pueden conducir a la degradacin completa del glucgeno. Cuando est ocupado, el receptor de insulina se convierte en una enzima tirosina quinasa activa que produce una cascada de fosforilacin que en ltima instancia tiene el efecto opuesto al sistema glucagn/cAMP: las enzimas de la glucogenlisis se inhiben y las enzimas de la glucognesis se activan. La insulina aumenta tambin el ritmo de la captacin de la glucosa en varias clases de clulas diana, pero no en las clulas hepticas o cerebrales. El estrs emocional o la agresin fsica liberan adrenalina por la mdula suprarrenal. La adrenalina estimula la glucogenlisis e inhibe la glucognesis. En situaciones de urgencia se libera gran cantidad de adrenalina, la produccin masiva de glucosa proporciona la energa que se requiere para controlar la situacin, dicho efecto se llama respuesta de escape o lucha. La adrenalina inicia el proceso activando la adenilato ciclasa del hgado y las clulas musculares.
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Figura 5.47. Degradacin del glucgeno

Fuente: McKee y McKee (2003) La glucgeno sintasa y la glucgeno fosforilasa poseen ambas conformaciones activas e inactivas que se interconvierten por modificacin covalente. La forma activa de la glucgeno sintasa, conocida como forma I (independiente), se convierte en la forma inactiva o D (dependiente) mediante fosforilacin. Por el contrario, la forma inactiva de la glucgeno fosforilasa (fosforilasa b) se convierte en la forma activa (fosforilasa a) por la fosforilacin de un residuo especfico de serina. La enzima fosforilante se denomina fosforilasa quinasa. La fosforilacin de la glucgeno sintasa y de la fosforilasa est catalizada por una protena quinasa, que se activa por cAMP. La sntesis de glucgeno tiene lugar cuando la glucgeno sintasa y la glucgeno fosforilasa se han desfosforilado. Esta conversin est catalizada por la fosfoprotena fosfatasa, que tambin inactiva a la fosforilasa quinasa (McKee y McKee, 2003). El glucgeno constituye la principal forma de almacenamiento de los carbohidratos en los mamferos y se presenta sobre todo en hgado y msculo esqueltico. En el hgado su funcin principal consiste en servir a los otros tejidos mediante la formacin de glucosa sangunea. En el msculo atiende exclusivamente a las necesidades del rgano como fuente de combustible metablico. En el hgado la glucogenlisis forma glucosa y en el msculo lactato, debido, respectivamente, a la presencia o ausencia de la glucosa-6-fosfatasa (Murray et al., 2001).

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Figura 5.48. Degradacin completa del glucgeno

Fuente: McKee y McKee (2003) Glucognesis: El glucgeno se sintetiza a partir de molculas de D-glucosa alfa (Figura 5.49). El proceso se produce en el citosol de las clulas hepticas y musculares, y requiere la energa proporcionada por el ATP (o la fosforilacin de la glucosa) y el trifosfato de uridina (UTP) (Champe et al., 2006).

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Figura 5.49. Estructura ramificada del glucgeno

Fuente: Champe et al. (2006) La glucognesis est constituida por el siguiente grupo de reacciones: 1.- Sntesis de glucosa-1-fosfato: la glucosa-6-fosfato se convierte de forma reversible en glucosa-1fosfato por la fosfoglucomutasa, una enzima que contiene en grupo fosforilo unido a un residuo de serina reactivo:

El grupo fosforilo de la enzima se transfiere a la glucosa-6-fosfato, formando glucosa-1,6-bisfosfato. Al formarse la glucosa-1-fosfato, el grupo fosforilo unido a C-6 se transfiere al residuo de serina de la enzima. 2.- Sntesis de UDP-glucosa: la formacin del enlace glucosdico es un proceso endergnico. La derivatizacin del carbohidrato con un buen grupo de salida proporciona la fuerza impulsora para la mayora de las reacciones de transferencia de carbohidratos. Por esta razn, la sntesis de nucletidosmonosacridos es una reaccin comn que precede a la transferencia de monosacridos y a los procesos de polimerizacin. La uridina difosfato glucosa (UDP-glucosa) es ms reactiva que la glucosa y se mantiene de forma ms segura en el lugar activo de las enzimas que catalizan las reacciones de transferencia (denominadas glucosil transferasas). Debido a que la UDP-glucosa contiene dos enlaces fosforilo, es una molcula muy energtica y su formacin es una reaccin reversible catalizada por la UDP-glucosa pirofosforilasa:

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Sin embargo, la reaccin se completa ya que el pirofosfato (PPi) se hidroliza inmediatamente y de forma irreversible por la pirofosforilasa con una prdida grande de energa libre:

3.- Sntesis de glucgeno a partir de UDP-glucosa: que requiere de dos enzimas, la glucgeno sintasa que cataliza la transferencia del grupo glucosilo de la UDP-glucosa a los extremos no reductores del glucgeno y la amilo- -(1,41,6)-glucosil transferasa (enzima ramificante) que crea los enlaces (1,6) para las ramificaciones de la molcula (Figura 5.50). Figura 5.50. Sntesis de glucgeno

Fuente: McKee y McKee (2003)


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La sntesis de glucgeno requiere una cadena de glucgeno llamada cebo. La sntesis de glucgeno, al parecer, se inicia por la transferencia de glucosa desde la UDP-glucosa a un residuo especfico de tirosina en una protena cebadora denominada glucogenina. En el citoplasma de las clulas hepticas y musculares de los animales bien alimentados puede observarse grnulos grandes de glucgeno, cada uno formado por una molcula de glucgeno muy ramificada. Las enzimas responsables de la sntesis y degradacin del glucgeno recubren cada grnulo (McKee y McKee, 2003). En el Cuadro 5.4 se comparan los tipos de glucgeno y sus respectivas funciones. Cuadro 5.4. Comparacin de las funciones del glucgeno heptico y muscular Glucgeno heptico Glucgeno muscular de la Combustible de reserva para la Funcin principal Mantenimiento concentracin de glucosa en contraccin muscular sangre Utilizado como combustible para Ninguna. El msculo carece de Otras funciones cualquier tejido: el hgado glucosa-6-fosfatasa y la glucosa-6contiene glucosa-6-fosfatasa que fosfato no puede abandonarlo desfosforila la glucosa y permite que salga a sangre Aproximadamente 10% del peso Aproximadamente 1-2% del peso Depsitos del hgado. Slo duran 12-24 del msculo (pero debido a que hrs. durante el ayuno tenemos mucha ms masa muscular, hay el doble de glucgeno que en el hgado) adrenalina estimula la Control hormonal El glucagn y adrenalina La estimulan la glucogenlisis. glucogenlisis. La insulina estimula la La insulina estimula la glucognesis. glucognesis. Fuente: Laguna y Pia (2002), Champe et al. (2006), Delgado (2007)

5.2.3. Respiracin o procesos aerbicos. Ciclo de Krebs y Cadena respiratoria 5.2.3.1. Ciclo de Krebs (ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos)
El metabolismo aerobio de la glucosa a bixido de carbono y agua, provee mucha ms energa que la liberada durante la gluclisis anaerobia. Despus que la glucosa es convertida en piruvato, el cul es convertido a acetil-CoA por descarboxilacin oxidativa antes de entrar al ciclo de Krebs, que es la va final comn para la oxidacin de los carbohidratos, los cidos grasos y los aminocidos (Figura 5.51). Las reacciones de descarboxilacin oxidativa tienen un papel importante en el metabolismo. El ciclo de Krebs, que se lleva a cabo en las mitocondrias, tambin es llamado ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos (Roskoski, 2001). En la Figura 5.52 se muestran las fuentes de glucosa sangunea despus de la ingestin de 100 gr de glucosa en el humano. Durante un breve perodo de absorcin, la glucosa de la dieta es la principal fuente de glucosa sangunea. Varias horas despus de consumir los alimentos, los niveles sanguneos de glucosa disminuyen lo suficiente para inducir un aumento en la secrecin de glucagn y reducir la
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liberacin de insulina. El aumento en la proporcin entre glucagn e insulina induce una movilizacin rpida de las reservas hepticas de glucgeno (Champe et al., 2006). Figura 5.51. Procedencia y destinos del Acetil-CoA

Fuente: Modificado de Roskoski (2001) Figura 5.52. Fuentes de glucosa sangunea despus de la ingestin de 100 g de glucosa

Fuente: Champe et al. (2006) El ciclo incluye la combinacin de una molcula de acetil-CoA con el oxalacetato (cido dicarboxlico de 4 carbonos), con los que se forma el citrato, un cido tricarboxlico de 6 carbonos. A partir del citrato sigue una serie de reacciones en el transcurso de las cuales se liberan dos molculas de CO 2 y se regenera el oxalacetato. Debido a que para facilitar la conversin de una gran cantidad de unidades acetilo en CO2 se requiere slo una pequea cantidad de oxalacetato, se considera que ste participa como catalizador. El ciclo de Krebs es una parte integral del proceso mediante el cual queda disponible la mayor parte de la energa liberada durante las oxidaciones de los carbohidratos, lpidos y aminocidos. En el transcurso
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de la oxidacin de la acetil-CoA y como resultado de la actividad de deshidrogenasas especficas en el ciclo, se forman equivalentes reductores en forma de hidrgeno o electrones. Estos equivalentes reductores ingresan a la cadena respiratoria y en ella se generan grandes cantidades de ATP durante el proceso de fosforilacin oxidativa. Este proceso es aerobio y requiere oxgeno como oxidante final de los equivalentes reductores (Figura 5.53). Por tanto, la ausencia (anoxia) o deficiencia parcial (hipoxia) del O2 produce la inhibicin total o parcial del ciclo. Figura 5.53. Respiracin o procesos anaerobios. Formacin de Acetil-CoA, Ciclo de Krebs y Cadena respiratoria

Fuente: Murray et al. (2001)


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Las enzimas del ciclo de Krebs se localizan en la matriz mitocondrial, libres o fijas a al superficie interior de la membrana interna mitocondrial, lo que facilita la transferencia de los equivalentes reductores a las enzimas adyacentes de la cadena respiratoria situadas en la membrana interna mitocondrial (Murray et al., 2001). Antes de iniciar el ciclo de krebs se requiere la conversin del piruvato en acetil-CoA, la cual se tras el transporte del piruvato a la matriz mitocondrial, ste se convierte en acetil-CoA en un conjunto de reacciones catalizadas por las enzimas del complejo piruvato deshidrogenasa. La reaccin neta, una descarboxilacin oxidativa, es la siguiente:

Piruvato + NAD++ CoASH Acetil-CoA + NADH + CO2 + H2O + H+


A pesar de la simplicidad aparente de esta reaccin exergnica, su mecanismo es uno de los ms complejos que se conocen. El complejo piruvato deshidrogenasa es una estructura multienzimtica grande que contiene tres actividades enzimticas: piruvato deshidrogenasa (E1), conocida tambin como piruvato descarboxilasa, dihidrolipoil transacetilasa (E2) y dihidrolipoil deshidrogenasa (E3). Cada actividad enzimtica est presente en varias copias (*) (Cuadro 5.5). Cuadro 5.5. Complejo piruvato deshidrogenasa de E. coli Actividad Funcin Nmero de Coenzimas enzimtica copias por complejo * Descarboxila al piruvato 24 (20-30) TPP Piruvato deshidrogenasa (E1) Cataliza la transferencia del 24 (60) cido lipoico, Dihidrolipoil grupo acetilo a la CoASH CoASH transacetilasa (E2) Oxida de nuevo a la 12 (20-30) NAD+, FAD Dihidrolipoil dihidrolipoamida deshidrogenasa (E3) En parntesis se presenta el nmero de molculas de cada actividad enzimtica que se encuentra en la piruvato deshidrogenasa de mamferos. Fuente: McKee y McKee (2003) La actividad de la piruvato deshidrogenasa est regulada por dos mecanismos: inhibicin por el producto y modificacin covalente. El complejo enzimtico se activa alostricamente por el NAD +, la CoASH y el AMP. Se inhibe por concentraciones elevadas de ATP y los productos de la reaccin acetil-CoA y NADH. En los vertebrados, estas molculas activan tambin una quinasa, que convierte el complejo piruvato deshidrogenasa activo en una forma fosforilada inactiva. Las elevadas concentraciones de los sustratos piruvato, CoASH y NAD+ inhiben la actividad de la quinasa. El complejo piruvato deshidrogenasa se reactiva por una reaccin de desfosforilacin catalizada por una fosfoprotena fosfatasa. La fosfoprotena fosfatasa se activa cuando la concentracin mitocondrial de ATP es baja. La coenzima Tiamina pirofosfato (TPP) descarboxila y transfiere grupos aldehdo. La coenzima cido lipoico transporta grupos hidrgeno o acetilo. La coenzima NADH y la coenzima FADH 2 sirven como

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transportadores electrnicos. La coenzima A (CoASH) sirve como transportador de grupos acetilo (Figura 5.54). Figura 5.54. Estructura de la Coenzima A (CoASH)

Fuente: McKee y McKee (2003) En el ciclo de Krebs o del cido ctrico, los tomos de carbono se oxidan a CO 2 y los electrones de energa elevada se transfieren al NAD+ y al FAD para formar las coenzimas reducidas NADH y FADH2, respectivamente. Existen dos formas coenzimticas del cido nicotnico: el dinucletido de nicotinamida y adenina (NAD) y el dinucletido de nicotinamida y adenina fosfato (NADP). Estas coenzimas se encuentran en sus formas oxidadas (NAD+ y NADP+) y en sus formas reducidas (NADH y NADPH). En la primera reaccin del ciclo de Krebs, un grupo acetilo de dos carbonos (acetil-CoA) se condensa con una molcula de cuatro carbonos (oxalacetato) para formar una molcula de seis carbonos (citrato). Durante las siete reacciones siguientes, en las que se producen dos molculas de CO2 y se eliminan cuatro pares de electrones de compuestos carbonados, el citrato se convierte de nuevo en oxalacetato. Durante un paso del ciclo, se produce la molcula de energa elevada guanosina trifosfato (GTP) durante una fosforilacin a nivel sustrato (Figura 5.55). La reaccin neta del ciclo de Krebs es:

Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O 2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + CoASH + GTP + 3H+
El ciclo del cido ctrico desempea otro papel importante en el metabolismo adems de producir energa, porque durante el ciclo se producen intermediarios que son sustratos de diversas reacciones de sntesis. Las rutas anfiblicas pueden actuar como procesos anablicos o catablicos. El ciclo de Krebs es catablico ya que los grupos acetilo se oxidan para formar CO2 y la energa se conserva en las molculas de coenzima reducidas. El ciclo de Krebs es tambin anablico ya que varios intermediarios del mismo son precursores de rutas de biosntesis. Por ejemplo, el oxalacetato se utiliza en la -cetoglutarato desempea un papel importante en la sntesis de aminocidos. La sntesis de porfirinas como el hemo utiliza la succinilCoA. Finalmente, la sntesis de los cidos grasos y del colesterol en el citoplasma requiere acetil-CoA (Figura 5.56).
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Figura 5.55. Ciclo de Krebs o del cido ctrico o de los cidos tricarboxlicos

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Los procesos anablicos extraen del ciclo de Krebs molculas que se requieren para mantener su funcin en la generacin de energa. Varias reacciones, denominadas anaplerticas, lo rellenan. Una de las reacciones anaplerticas ms importante es la que cataliza la piruvato carboxilasa. Una concentracin elevada de acetil-CoA, un indicador de concentracin insuficiente de oxalacetato, activa la piruvato carboxilasa. Como consecuencia aumenta la concentracin de oxalacetato y el exceso de oxalacetato que no se utiliza dentro del ciclo de Krebs se emplea en la gluconeognesis. Figura 5.56. Ciclo del cido ctrico anfiblico

Fuente: McKee y McKee (2003)


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El ciclo de Krebs est regulado con precisin, de forma que se satisfagan constantemente los requerimientos energtico y de biosntesis de la clula. La regulacin se consigue principalmente por la modulacin de enzimas clave y la disponibilidad de determinados sustratos. Dado su papel destacado en la produccin de energa, el ciclo depende tambin de un aporte continuo de NAD +, FAD y ADP (McKee y McKee, 2003). El ciclo de Krebs se encuentra bajo el control de la actividad reguladora de diversas enzimas, siendo las ms importantes la sintasa del citrato, deshidrogenasa de isocitrato y complejo de deshidrogenasa de cetoglutarato alfa (Figura 5.57). Figura 5.57. Inhibidores y activadores del ciclo de Krebs

Fuente: Champe et al. (2006) En la Figura 5.58 se observa que el consumo de energa que resulta de diversas funciones como la contraccin muscular, reacciones biosintticas, etc., produce hidrlisis de ATP hasta ADP y Pi. El incremento resultante en la concentracin de ADP acelera las reacciones que emplean a este ltimo para generar ATP, de las cuales la ms importante es la fosforilacin oxidativa. La produccin de ATP aumenta hasta que iguala el ritmo de consumo provocado por las reacciones que requieren energa. Si hay ADP o Pi en concentraciones limitadas, disminuye la formacin de ATP por fosforilacin oxidativa como resultado de la falta de aceptadores de fosfato (ADP) o de fosfato inorgnico (Pi).

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Figura 5.58. Mapa conceptual clave del ciclo de Krebs

Fuente: Champe et al. (2006) La tasa de fosforilacin oxidativa es proporcional al resultado de la ecuacin [ADP] [Pi] / [ATP]; esto se conoce como control respiratorio de la produccin de energa. La oxidacin de NADH y FADH2 por la cadena de transporte de electrones puede detenerse del mismo modo si es limitada la cantidad de ADP. Esto se debe a que los procesos de oxidacin y fosforilacin estn firmemente acoplados y ocurren de manera simultnea. Conforme se acumulan NADH y FADH2, se agotan sus formas oxidadas y esto produce oxidacin de la acetil-CoA por el ciclo de Krebs, de modo que este queda inhibido como resultado de la falta de coenzimas oxidadas (Champe et al., 2006).

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5.2.3.2. Cadena respiratoria. Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa


El papel de la cadena respiratoria o del transporte de electrones, es el de aceptar equivalentes reductores, en forma de hidruros o electrones, provenientes de los metabolitos y eventualmente transferirlos al oxgeno molecular (Laguna y Pia, 2002). La cadena o sistema de transporte electrnico (CTE) mitocondrial, es un conjunto de transportadores electrnicos situados en la membrana interna de la mitocondria, en orden creciente de afinidad electrnica, que transfiere los electrones que proceden de las coenzimas reducidas hasta el oxgeno. Durante esta transferencia se produce una disminucin del potencial de oxidacin-reduccin. Cuando el donador de electrones es el NADH y el oxgeno es el aceptor de electrones, la variacin del potencial es +1.14 V (es decir, +0.82 V (-0.32V), esto se explicar en el apartado de xido-reduccin. Este proceso, en el que se utiliza el oxgeno para generar energa a partir de las molculas de alimento, suele denominarse respiracin aerobia. La energa que se libera durante la transferencia electrnica est acoplada a varios procesos endergnicos, de los que el ms importante es la sntesis de ATP. Otros procesos que impulsan el transporte electrnico bombean Ca2+ dentro de la matriz mitocondrial y generan calor en el tejido adiposo marrn. Las coenzimas reducidas, que proceden de la gluclisis, el ciclo de Krebs y la oxidacin de los cidos grasos, son las principales fuentes de electrones (McKee y McKee, 2003).

xido- reduccin: En los seres vivos, tanto los procesos que capturan energa como los que la
liberan constan en gran medida de reacciones redox. Las reacciones redox se producen cuando se transfieren electrones entre un donador electrnico (reductor) y un aceptor electrnico (oxidante). En algunas reacciones redox slo se transfieren electrones. Por ejemplo, en la reaccin:

Cu+ + Fe3+ Cu2+ + Fe2+


Se transfiere un electrn del Cu+ al Fe3+. El Cu+, el reductor, se oxida para formar Cu2+. Al tiempo, el Fe3+ se reduce a Fe2+. Sin embargo, en muchas reacciones se transfieren electrones y protones. Por ejemplo, en la reaccin catalizada por la lactato deshidrogenasa, se transfieren 2 protones (H+) y 2 electrones al reducirse el piruvato para formar lactato y NAD+:

Las reacciones redox se entienden mejor si se separan en dos semirreacciones, por ejemplo la reaccin entre el hierro y el cobre:

Cu+ Cu2+ + e-, en donde Cu+ y Cu2+ son un par redox conjugado. Fe3+ + e- Fe2+, en donde el Fe3+ es un aceptor de electrones.
La tendencia de una sustancia especfica para perder o ganar electrones se denomina potencial redox o de reduccin. El potencial redox de un par redox conjugado se mide en una clula electroqumica frente
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a un estndar de referencia, normalmente un electrodo estndar de hidrgeno. El potencial redox del electrodo estndar de hidrgeno es, por definicin, 0.0 V a 1 atm. Las sustancias con un potencial de reduccin ms negativo transferirn los electrones a una sustancia con un potencial de reduccin ms positivo. En bioqumica, la semirreaccin de referencia es:

2 H+ + 2 e- H2 Cuando: pH = 7, Temperatura = 25 C y Presin = 1 atm


En estas condiciones el potencial de reduccin del electrodo de hidrgeno es -42 V cuando se mide frente al electrodo de hidrgeno estndar en el que [H+] es 1 M. Las sustancias con potenciales de reduccin menores de -42 V (aquellas con valores ms negativos) tienen una afinidad menor por los electrones que el H+. Las sustancias con potenciales de reduccin mayores (con valores ms positivos) tienen una afinidad mayor por los electrones (Cuadro 5.6). Cuadro 5.6. Potenciales de reduccin estndar

Fuente: McKee y McKee (2003) Por convenio, las reacciones redox se escriben con el agente reductor a la derecha del agente oxidante y el nmero de electrones que se transfieren. La mayor parte de la energa libre de las clulas aerobias se captura por el sistema de transporte electrnico mitocondrial. Durante este proceso, los electrones se transfieren desde un par redox con un potencial de reduccin ms negativo (NADH/NAD+) a aquellos con potenciales de reduccin ms positivos. El ltimo componente del sistema es el par H2O/ 0.5 O2:

O2 + NADH + H+ H2O + NAD+


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Una porcin significativa de la energa libre que se genera al moverse los electrones desde el NADH al O2 en el sistema de transporte electrnico se utiliza para sintetizar ATP. En varios procesos metablicos, los electrones se mueven desde pares redox con potenciales de reduccin ms positivos a aquellos con potenciales de reduccin ms negativos. Evidentemente se requiere energa. El flujo electrnico puede utilizarse para generar energa y capturarla, en la respiracin aerobia. La energa puede tambin utilizarse para impulsar el flujo electrnico en la fotosntesis. El NADP+ es una versin ms fosforilada del NAD+ (Figura 5.59) (McKee y McKee, 2003). Figura 5.59. Flujo energtico y energa

Fuente: McKee y McKee (2003) As, la oxidacin (prdida de electrones) de un compuesto se acompaa siempre de reduccin (ganancia de electrones) de una segunda sustancia. Por ejemplo, en la Figura 5.60 se observa que la oxidacin del NADH hasta el NAD+ acompaada por reduccin del FAD hasta FADH2. Cada reaccin de oxidorreduccin puede interpretarse como el resultado de dos medias reacciones: una oxidacin aislada y una reaccin de reduccin separada. NAD+ y NADH forman un par redox, como FAD y FADH2. Los pares redox difieren en su tendencia a perder electrones. Esta tendencia, tal como se muestra en el Cuadro 5.6, es una caracterstica de un par redox particular y se puede especificar de manera cuantitativa mediante una constante, E0 (potencial de reduccin estndar), con unidades en voltios (Champe et al., 2006).

Componentes de la cadena respiratoria: Los componentes de la cadena de transporte


electrnico (CTE) de los eucariotas se encuentran en la membrana mitocondrial interna. En la Figura 5.61 podemos apreciar que los complejos I y II transfieren los electrones del NADH y el succinato, respectivamente, a la coenzima Q o ubiquinona (UQ). El complejo II transfiere los electrones desde la UQH2 al citocromo c. El complejo IV transfiere los electrones desde el citocromo c al O2. Las flechas representan el flujo de electrones. Figura 5.60. Oxidacin del NADH por mononucletido de flavina (FMN), separada en dos pares redox componentes

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Fuente: Champe et al. (2006) Cuadro 5.7. Componentes supramoleculares de la cadena de transporte electrnico

Complejo enzimtico
Complejo I (NADH deshidrogenasa) Complejo II (succinato deshidrogenasa) Complejo III (complejo citocromo bc1) Cirocromo c Complejo IV (citocromo oxidasa)

Grupos protticos

FMN, FeS FAD, FeS Hemos, FeS Hemo Hemos, Cu Fuente: McKee y McKee (2003) La mayora de los componentes estn organizados en cuatro complejos (Cuadro 5.7), cada uno de los cules consta de varias protenas y grupos prostticos (cada protena conjugada consta de una protena simple combinada con un componente no proteico denominado grupo prosttico; una protena sin su grupo prosttico se denomina apoprotena y una molcula proteica combinada con su grupo prosttico se denomina haloprotena). El complejo I, tambin denominado complejo NADH deshidrogenasa, cataliza la transferencia de electrones desde el NADH a la coenzima Q. Las principales fuentes de NADH son varias reacciones de la gluclisis, del ciclo de Krebs y la oxidacin de los cidos grasos. Formado al menos por 25 polipptidos diferentes, el complejo I es el componente proteico ms grande de la membrana interna. Adems de una molcula de FMN (coenzima mononucletido de flavina), el complejo contiene varios centros hierro-azufre. Los centros hierro azufre, que pueden constar de dos o cuatro tomos de hierro formando complejo con un nmero igual de iones sulfuro, hacen de intermediarios en las reacciones de transferencia de 1 electrn. Las protenas que contienen centros hierro-azufre se denominan tambin protenas con hierro no hemo. Aunque la estructura y la funcin del complejo I no se conocen an muy bien, se cree que el NADH reduce al FMN a FMNH2. A continuacin se transfieren los electrones de uno en uno desde el
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FMNH2 a un centro hierro-azufre. Tras la transferencia de un centro hierro-azufre a otro, los electrones finalmente se ceden a la UQ (Figura 5.62) (McKee y McKee, 2003) Figura 5.61. Cadena de transporte electrnico

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 5.62. Transferencia de electrones a travs del complejo I de la cadena de transporte electrnico mitocondrial

Fuente: McKee y McKee (2003) En la Figura 5.63 se observa la estructura y estados de oxidacin de la coenzima Q. La cadena lateral de la coenzima Q vara en las distintas especies, en mamferos es de 10 unidades isopreno y en las
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bacterias de 6 unidades isopreno. As, la coenzima Q es un transportador electrnico respiratorio que sirve para que las mitocondrias oxiden sustratos. La coenzima Q es un transportador electrnico extremadamente lipoflico que se encuentra ligado de forma laxa a las protenas. Dado que la coenzima Q est presente de manera ubicua (en todas) en las clulas vivas, un grupo de investigadores le nombr ubiquinona, otros CoQ. El trmino Q10 se usa para especificar la forma de CoQ que contiene 10 unidades isopreno. La cola isoprenoide proporciona a la molcula su carcter apolar, que permite a la CoQ una difusin rpida a travs de la membrana mitocondrial interna (Mathews et al., 2005). Figura 5.63 . Estructura y estados de oxidacin de la coenzima Q

Fuente: McKee y McKee (2003) El complejo succinato deshidrogenasa (complejo II) consta principalmente de la enzima del ciclo de Krebs, succinato deshidrogenasa, y dos protenas hierro-azufre. El complejo II participa en la transferencia de electrones desde el succinato a la UQ. El lugar de oxidacin del succinato se encuentra en la protena hierro-azufre ms grande. Esta molcula contiene tambin un FAD unido covalentemente. Tambin ceden electrones a la UQ otras flavoprotenas. En algunos tipos celulares, el glicerol-3-fosfato deshidrogenasa, una enzima situada en la cara externa de la membrana mitocondrial interna, transfiere los electrones desde el NADH citoplsmico hasta la CTE. La acil-CoA deshidrogenasa, la primera enzima de la oxidacin de los cidos grasos, transfiere los electrones a la UQ desde el lado de la matriz de la membrana interna (Figura 5.64). El complejo III transfiere los electrones desde la coenzima Q reducida (UQH2) al citocromo c. Al complejo III se le denomina complejo citocromo bc1, ya que contiene dos citocromos de tipo b, un citocromo c1 (cit c1) y un centro hierro-azufre. Los citocromos son un conjunto de protenas de transporte de electrones que contienen un grupo prosttico hemo semejante a los de la hemoglobina y la mioglobina. Los electrones se transfieren de uno en uno y se reduce de forma reversible un tomo de hierro oxidado (Fe3+) a Fe2+. El movimiento de electrones desde UQH2 al citocromo c es un proceso complejo de varios pasos (Figura 5.65).

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Figura 5.64. Ruta de los electrones desde el succinato (ciclo de Krebs), el glicerol-3-fosfato -oxidacin) hasta la UQ

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 5.65. Transporte electrnico a travs del complejo III

Fuente: McKee y McKee (2003) Durante el proceso de transporte electrnico, el hierro del hemo se oxida y se reduce alternativamente. El citocromo oxidasa (complejo IV) es un complejo proteico que cataliza la reduccin de cuatro electrones del O2 para formar H2O. El complejo que atraviesa la membrana en los mamferos puede contener entre 6 y 13 subunidades, dependiendo de las especies. Puede contener tambin dos tomos de cobre, adems de los tomos de hierro del hemo de los citocromos a y a3 (Figura 5.66). Figura 5.66. Transporte electrnico a travs del complejo IV

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Fuente: McKee y McKee (2003) Los tomos de cobre se alternan entre los estados de oxidacin +1 y +2, Cu1+ y Cu2+. El tomo de hierro del cit a3 est ntimamente asociado con un tomo de cobre denominado CuB. El otro tomo de cobre, CuA, se encuentra a corta distancia del hemo del cit a. El citocromo c, una protena que est unida dbilmente a la membrana interna sobre su superficie externa, transfiere los electrones de uno en uno al cit a y al CuA. Los electrones se ceden a continuacin al cit a3 y al CuB, lo que se produce en el lado de la matriz, interno, de la membrana. Esta lanzadera de electrones permite que se cedan a la molcula de dioxgeno unida al cit a3-Fe2+. Se forman dos molculas de agua que abandonan el lugar, mediante la siguiente reaccin:

O2 + 4H+ + 4e- 2 H2O


Durante cada reaccin redox secuencial de la CTE, un electrn pierde energa. Durante la oxidacin del NADH hay tres pasos en los que la variacin del potencial de reduccin es suficiente para sintetizar ATP. Estos pasos, que se producen en los complejos I, II y III, se denominan lugares I, II y III, respectivamente. Aproximadamente se sintetizan 2.5 molculas de ATP por cada par de electrones que se transfieren entre el NADH y el O2 en la CTE (es decir, el cociente P/O mximo medido para la oxidacin del NADH es 2.5). En la transferencia de cada par donado por el FADH2 producido por la oxidacin del succinato se forman aproximadamente 1.5 molculas de ATP. Lo anterior tiene que ver con el valor del cociente P/O (el nmero de moles Pi que se consumen para que se reduzca cada tomo de oxgeno a H2O) y que refleja el grado de acoplamiento que se observa entre el transporte electrnico y la sntesis de ATP. (McKee y McKee, 2003). Sin embargo, Mathews et al. (2005), describe que en la actualidad parece claro que la fosforilacin y la oxidacin no estn acopladas de manera directa. Como sugiere la Figura 5.67, el acoplamiento se produce de forma indirecta. Este mecanismo no requiere una relacin estequiomtrica entera entre los equivalentes reductores consumidos y el ATP sintetizado. Por otro lado, la mayora de las medidas de la relacin P/O dan valores cercanos a 3 para la oxidacin de los sustratos ligados al NAD+ y 2 para el succinato. Teniendo en cuenta lo anterior, se puede escribir una ecuacin equilibrada para la oxidacin mitocondrial del NADH:

NADH + 4H+ + O2 + 3 ADP + 3 Pi NAD+ + 4 H2O + 3 ATP


Figura 5.67. Identificacin experimental de los lugares de acoplamiento
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Fuente: Mathews et al. (2005) En la Figura 5.67 el transporte electrnico se limit a determinadas partes de la cadena mediante el empleo de determinados donadores electrnicos, aceptores electrnicos e inhibidores respiratorios, segn se indica. Para cada segmento de la cadena aislado de esta forma, se determinaron las relaciones P/O, como se muestra en la Figura. Se aadi antimicina A en el experimento que identific el primer lugar de acoplamiento para bloquear el flujo de electrones a partir del citocromo b.

Inhibidores de la cadena respiratoria. Varias molculas inhiben de forma especfica el proceso de transporte electrnico (Figura 5.68). Los inhibidores han sido muy valiosos para determinar el orden correcto de los componentes de la CTE cuando se han utilizado junto con las medidas del potencial de reduccin. En estos experimentos se mide el transporte electrnico con un electrodo de oxgeno. El consumo de oxgeno es una medida sensible del transporte electrnico. Cuando est inhibido el transporte electrnico, el consumo de oxgeno se reduce o elimina. Los componentes oxidados de la CTE se acumulan en el lado del oxgeno del lugar de la inhibicin. Los componentes reducidos de la CTE se acumulan en el lado contrario al del oxgeno del lugar de la inhibicin. Por ejemplo, la antimicina A inhibe al cit b. Si se aade este inhibidor a una suspensin de mitocondrias, quedan ms reducidas las molculas de NAD+, las flavinas y el cit b. Los citocromos c1, c y a quedan ms oxidados. Otros ejemplos destacados de inhibidores de la CTE son la rotenona y el amital, que inhiben a la NADH deshidrogenasa (complejo I). el monxido de carbono (CO), la azida (N-3) y el cianuro (CN-) inhiben la citocromo oxidasa (Figura 5.69) (McKee y McKee, 2003).
Figura 5.68. Ejemplos de inhibidores de la CTE mitocondrial

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 5.69. Inhibidores especficos de sitio de transporte de electrones
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Fuente: Champe et al. (2006) Fosforilacin oxidativa. La transferencia de electrones por debajo de la cadena de transportadores de stos se favorece desde el punto de vista energtico porque el NADH es un donador potente de electrones y el oxgeno molecular es un receptor vido de stos. Sin embargo, el flujo de electrones desde el NADH hacia el oxgeno no da directamente por resultado sntesis de ATP. La hiptesis quimioosmtica o hiptesis de Mitchell, explica la manera en que la energa libre que se genera por la actividad de la cadena de transporte de electrones se emplea para producir ATP a partir de la reaccin ADP + Pi. El Pi es el fosfato inorgnico. El transporte de electrones est acoplado con la fosforilacin del ADP por el transporte de protones (H+) a travs de la membrana mitocondrial interior desde la matriz hacia el espacio intermembranoso. Este proceso establece un gradiente elctrico a travs de la membrana mitocondrial interior (con ms cargas positivas en el exterior de la membrana que en el interior de sta) y un gradiente de pH (el exterior de la membrana est a pH ms bajo que su interior). La energa que se genera por esta gradiente de protones es suficiente para impulsar la sntesis de ATP. Por este motivo, el gradiente de protones funciona como intermediario comn que acopla la oxidacin con la fosforilacin. El complejo enzimtico sintasa del ATP (complejo V), sintetiza ATP valindose de la energa del gradiente de protones que se genera por la cadena de transporte de electrones. Tambin se denomina ATP-asa, porque la enzima aislada cataliza tambin la hidrlisis del ATP hasta ADP y fosfato inorgnico. La hiptesis quimioosmtica propone que, una vez que se han transferido protones hacia el lado citoslico de la membrana mitocondrial interior, stos reingresan en la matriz mitocondrial pasando a travs de un canal en el complejo de sintasa de ATP, lo que tiene como consecuencia sntesis de ATP a partir de ADP + Pi y, al mismo tiempo, disipacin de los gradientes de pH y elctrico (Figura 5.70). La inhibicin de la fosforilacin inhibe la oxidacin, por lo que el transporte de electrones y la fosforilacin son procesos firmemente enlazados. Las protenas desacopladoras (UCP) se encuentran en la membrana mitocondrial interior de los mamferos. Dichas protenas crean una fuga de electrones, es decir, permiten que los protones reingresen en la matriz mitocondrial sin que se capture energa en forma de ATP. La UCP1 o termogenina, se encarga de activar la oxidacin de los cidos grasos y la produccin de calor en los adipocitos pardos de los mamferos.

Figura 5.70. Cadena de transporte de electrones que se ilustra acoplada con


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el transporte de protones. No se ilustra el complejo II.

Fuente: Champe et al.(2006) El transporte de electrones y la fosforilacin pueden ser desacoplados por compuestos que incrementan la permeabilidad de la membrana mitocondrial interior a los protones. El ejemplo clsico es el 2,4dinitrofenol, transportador de protones lipfilo que se difunde con facilidad a travs de la membrana mitocondrial. Este desacoplador hace que prosiga el transporte de electrones a ritmo rpido sin establecer un gradiente de protones, de manera muy semejante a lo que hacen las protenas desacopladoras (Figura 5.71). Figura 5.71. Transporte de H+ a travs de la membrana mitocondrial por el 2,4-dinitrofenol

Fuente: Champe et al. (2006)

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La energa producida por el transporte de electrones se descarga en forma de calor en vez de utilizarla para la sntesis de ATP. La membrana mitocondrial inferior es impermeable a la mayor parte de las sustancias con carga o hidrfilas. Sin embargo, contiene numerosas protenas tansportadoras que permiten el paso de molculas especficas desde el citosol (espacio intermembranoso) hacia la matriz mitocondrial. La membrana mitocondrial interior necesita transportadores especializados de ADP y Fi desde el citosol (en el que se emplea ATP y se convierte en ADP en muchas reacciones que necesitan energa) hacia el interior de la mitocondria, sitio en el que se puede resintetizar el ATP. Un transportador de nucletido de adenina transporta una molcula de ADP desde el citosol hacia el interior de la mitocondria, a la vez que exporta un ATP desde la matriz de nuevo hacia el citosol. La membrana mitocondrial interior carece de protena transportadora de NADH, y el NADH que se produce en el citosol no puede penetrar directamente en la mitocondria. Sin embargo, se transportan dos electrones de NADH (equivalentes reductores) desde el citosol hacia el interior de la mitocondria mediante ciertos mecanismos de transportacin. En el transportador glicerofosfato se transfieren dos electrones desde el NADH hacia la deshidrogenasa de flavoprotenas dentro de la membrana mitocondrial interior. Esta enzima dona a continuacin sus electrones a la cadena de transporte de stos de una manera semejante a lo que hace la deshidrogenasa de succinato. El transportador glicerofosfato, en consecuencia, produce sntesis de 2 ATP por cada NADH citoslico oxidado. Lo anterior contrasta con el transportador de malato y aspartato, que produce NADH en la matriz mitocondrial, produciendo 3 ATP por cada NADH citoslico oxidado (Figura 5.72) (Champe et al., 2006). Figura 5.72. Vas transportadoras de electrones a travs de la membrana mitocondrial interior

Fuente: Champe et al. (2006)


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En la Figura 5.73 el flujo de electrones y la sntesis de ATP se han representado como juegos de engranes que dan una idea de acoplamiento. Figura 5.73. Mapa conceptual del transporte de electrones y de la fosforilacin oxidativa

Fuente: Champe et al. (2006)

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5.2.4. Procesos anaerbicos (fermentacin lctica, actica, propinica, butrica, alcohlica, etc.)
La respiracin es dependiente de oxgeno, la fermentacin no. La glucosa como sustrato oxidable habr de disponer de algn tipo de aceptor de electrones, ya que en su ausencia no suceder la oxidacin. Cuando el aceptor de electrones es el oxgeno, el proceso es aerobio. El catabolismo aerbico de la clula, que incluye a la glucosa y otros sustratos, se llama en general respiracin. La degradacin celular de compuestos para extraer su contenido de energa en ausencia de oxgeno, esto es, en condicin anaerobia, se conoce como metabolismo anaerobio o fermentacin y se identifica por el principal producto final de la va. Por ejemplo, en el caso de la glucosa en el msculo, el producto final es el lactato, por lo que la va se denomina fermentacin lctica; en la levadura, el producto final es el alcohol, por lo que recibe el nombre de fermentacin alcohlica. En estos procesos fermentativos se requiere de un aceptor externo de electrones, de ordinario, la coenzima NAD+ y se liberan cantidades pequeas de energa, parte de la cual se almacena en forma de ATP (Laguna y Pia, 2002). El aparato digestivo de los rumiantes es un sistema complejo de fermentacin que permite al animal aprovechar nutrimentos que de otra manera no podran ser digeridos. Este beneficio se logra gracias a la participacin de microorganismos que poseen la capacidad de digerir y aprovechar determinadas sustancias, como la celulosa (fibra) o la urea que de otra manera resultara txica. El rumen y retculo forman una cmara de fermentacin anaerobia con un pH entre 5.5 y 7.2, dependiendo del alimento que est consumiendo el animal. En el rumen existe una gran variedad de microorganismos: protozoarios ciliados, protozoarios flagelados, levaduras, hongos anaerobios, bacterias, micoplasmas y bacterifagos. Los microorganismos que se encuentran en mayor proporcin en el rumen son las bacterias, cuya poblacin es variable y se encuentran clasificadas segn el sustrato sobre el que actan: Celulolticas: producen celulasas que hidrolizan los enlaces glucosdicos (1,4) para producir celobiosa, como ejemplos estn: Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus albus y Ruminococcus flavefaciens. Xylanolticas: incluyen a las tres anteriores y adems a Prevotella ruminicola y Eubacterium ruminantium. Petinolticas: la ms activa es Lechnospira multpara. Amilolticas: muchas bacterias producen amilasa, siendo las ms importantes: Streptococcus bovis, Bacteroides ruminicola y Selenomonas ruminantium.

La celulosa es el carbohidrato ms resistente a la digestin, y su degradacin es el paso ms limitante en la fermentacin ruminal. La mayora de las bacterias pueden usar azcares solubles, y la mayora de la glucosa y celobiosa liberadas durante la degradacin de la celulosa es fermentada por bacterias no celulolticas. Los protozoarios ruminales, cuya mayora son ciliados, lo que les permite una propulsin rpida a travs del lquido ruminal, pueden metabolizar azcares solubles y muchos de ellos tambin hidrolizan a las bacterias, las cules les sirven como alimento. Los protozoarios ciliados conforman dos familias principales, la ms numerosa es la Ophryoscolecidae, que incluye 17 gneros, los cules son mviles y anaerobios. La otra familia es la de los Holotricos (15 gneros) pertenecientes al orden Vestibuliferida. Los hongos ruminales tienen la capacidad de fermentar polisacridos.
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Entre el animal rumiante y los microorganismos ruminales existe una simbiosis: el rumiante provee el hbitat a la microbiota y sta desdobla los alimentos en forma qumica (enzimtica) y mecnica, proporcionndole nutrimentos que, al absorberse, son la principal fuente de energa de los rumiantes. La degradacin de la fibra en los rumiantes ocurre, principalmente, por la accin de microorganismos celulolticos que son extremedamente sensibles a la cada del pH, as, el crecimiento bacteriano celuloltico se inhibe a un pH inferior a 6.0. Muchas bacterias y hongos producen enzimas celulolticas que son capaces de hidrolizar celulosa a celobiosa y glucosa, por lo que los animales herbvoros que no pueden producir estas enzimas, han desarrollado la forma de utilizar la celulosa y otros polisacridos, indirectamente, al establecer una relacin simbitica con estos microorganismos. La celulolisis es llevada a cabo por varias especies de bacterias ruminales, junto con los protozoarios Ophryoscolecidae y hongos anaerobios. Los xylanos y la hemicelulosa son degradados por bacterias celulolticas, por la mayora de las especies de protozoarios, as como por hongos anaerbicos. La pectina es digerida por bacterias y protozoarios, pero no por hongos. El almidn es tragado por protozoarios Ophryoscolecidae, lo cual permite ayudar a estabilizar la fermentacin ruminal, al proteger el almidn de una rpida degradacin bacteriana. Muchas especies digieren almidn, incluidos Ruminobacter amylophilus, S. bovis, Succinimonas amylolytica, S. ruminantum, B. fibrisolvens y E. ruminantium. Los azcares son degradados por la mayora de las especies encontradas en el rumen. Se piensa que los protozoarios holtricos son particularmente dependientes de los azcares para su crecimiento. En el Cuadro 5.8 se muestran las caractersticas de las bacterias que fermentan carbohidratos estructurales y carbohidratos no estructurales. Cuadro 5.8. Caractersticas de las bacterias ruminales que fermentan carbohidratos Fermentan slo carbohidratos de la pared celular de la planta Usan slo amonaco como fuente de N para la sntesis de protenas La eficiencia de su actividad aumenta en presencia de pptidos Requieren de la presencia de AGVs de cadena ramificada que se forman como consecuencia de la fermentacin de aminocidos de Bacterias que fermentan cadena ramificada carbohidratos estructurales Tasa de fermentacin ms baja que las bacterias que fermentan nutrimentos concentrados Fermentacin de estos carbohidratos produce relacin alta de acetato a propionato en la mezcla AGV que se produce Requieren de pH alto ya que si es menor a 6.0 su actividad decrece Presentan alta tasa de fermentacin Bacterias que fermentan Usan como fuente de N al amonaco y a pptidos carbohidratos no estructurales Tienen mayor tolerancia a pH bajo (cido) Fuente: Adaptado de Spross (2002) Por medio de la fermentacin microbiana en el rumen, los polisacridos complejos, glcidos simples (almidones, sacarosa), protenas y otros sustratos fermentables se transforman en cidos grasos voltiles (AGV), vitaminas hidrosolubles, CO2 y metano; y las fuentes nitrogendas en amonaco. Estos compuestos sirven como sustrato energtico, protenico y vitamnico para el crecimiento de la poblacin microbiana (Spross, 2002). Laguna y Pia (2002) y McKee y McKee (2003) mencionan que en el caso de la degradacin celular de la glucosa en los mamferos, especialmente en el tejido muscular, se distingue una etapa aerbica
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inicial y otra posterior que sucede en condiciones anaerbicas. La etapa anaerbica corresponde a la fermentacin lctica que se mencion anteriormente (o gluclisis). El producto final de la gluclisis muscular es el lactato, sin embargo, en el msculo en reposo y en presencia de oxgeno, el lactato es convertido en piruvato, el cual es degradado hasta H2O y CO2 en condiciones aerbicas, en el llamado ciclo de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs. Si el msculo mantiene su estado de contraccin y no hay suficiente oxgeno, el lactato formado pasa a la sangre para su uso por otros tejidos. La Figura 5.74 en la parte superior muestra que la gluclisis puede producir dos intermediarios: el piruvato o el lactato, segn las condiciones ambientales en las que se encuentre la clula. En la porcin inferior se muestra cmo se conecta la gluclisis (metabolismo anaerobio) con el ciclo de Krebs (metabolismo aerobio) a travs del cetocido de tres tomos de carbono, el piruvato. Figura 5.74. Esquema de conexin entre la gluclisis y el ciclo de Krebs

Fuente: Modificado de Laguna y Pia (2002) La etapa final de la gluclisis anaerobia muscular tiene como producto final caracterstico un compuesto orgnico de tres tomos de carbono, el lactato, el cual se produce en un proceso de reduccin, donde los electrones del NADH son transferidos directamente al grupo carbonilo del piruvato con el concurso de la enzima lactato deshidrogenasa, que cataliza la reaccin. En los mamferos, la lactato deshidrogenasa en una enzima tetramrica, con varias isoenzimas; las subunidades que la forman son de dos tipos: M (msculo estrado) y H (msculo cardaco). Las isoenzimas del corazn se inhiben por el piruvato, por lo que el sustrato preferencial en el corazn es el lactato. La secuencia de reacciones glucolticas, a partir de una molcula de glucosa, da lugar a dos molculas de NADH y a dos molculas de piruvato, cuya reaccin en presencia de la deshidrogenasa lctica es la siguiente:

2 piruvato + 2 NADH + 2 H+
La gluclisis anaerobia da como resultado:

2 lactato + 2 NAD+

Glucosa + 2 ADP + Pi

2 lactato + 2ATP + 2 H2O

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Este proceso fermentativo es la principal va metablica en la produccin de ATP en numerosas bacterias y en algunas clulas animales que funcionan en condiciones anaerobias o parcialmente anaerobias. En el caso del tejido muscular, el lactato producido es acarreado por el sistema circulatorio al hgado, donde es utilizado en el proceso de gluconeognesis. La glucosa proveniente del lactato participa en el ciclo de Cori mostrado en la Figura 5.42. La fermentacin alcohlica (Figura 5.75) es una va alterna al proceso de fermentacin lctica y se observa en levaduras mantenidas en condiciones anaerbicas y tiene una gran importancia comercial. El proceso se inicia con una molcula de glucosa y a travs de las reacciones de la gluclisis anaerobia obteniendo dos molculas de piruvato y 2 de NADH, de manera muy similar como en el tejido muscular. En este caso, el piruvato es descarboxilado para producir un compuesto de dos tomos de carbono, el acetaldehdo, que se convierte en el aceptor de electrones. La reduccin del acetaldehdo produce el etanol, alcohol del cual deriva su nombre el proceso. Las reacciones que involucran la produccin de etanol son dos: la descarboxilacin del piruvato y la reduccin posterior del acetaldehdo; estas reacciones son catalizadas por dos enzimas diferentes. Aadiendo este proceso reductivo a la conversin de glucosa en 2 de piruvato y 2 de NADH se llega al siguiente resumen:

Glucosa + 2 ADP + 2 Pi

2 etanol + 2 CO2 + 2ATP + 2 H2O

Figura 5.75. Fermentacin alcohlica

Fuente: Mathews et al. (2005) A pesar de que el lactato y el etanol son los productos de fermentacin de mayor importancia econmica, no son las nicas vas fermentativas que tienen los microorganismos. Por ejemplo, la fermentacin propinica convierte al piruvato de manera reductiva en propionato (CH3-CH2-COO-), reaccin de importancia en la produccin del queso suizo. Muchas bacterias tambin realizan la fermentacin del butilenglicol, cuyo producto final es el butirato (olor de grasas en mantequilla), la acetona y el isopropanol. Todas las posibilidades de fermentacin sealadas son solamente variaciones del tema comn: la reoxidacin del NADH+H+ por medio de la transferencia de sus electrones a un aceptor orgnico (Laguna y Pia, 2002). Los AGVs sirven al rumiante como fuente de energa, ya que la mayor parte de la glucosa disponible a nivel celular se forma a partir de estos cidos. Los productos de degradacin de polisacridos en rumiantes ocasionalmente convergen en mono y disacridos los cules entran a la va de la gluclisis. Durante el curso del metabolismo del fosfoenolpiruvato, se forma ATP, combustible para el crecimiento microbiano. Sin embargo, NAD+ es reducido a NADH, y para que la fermentacin contine es necesario reoxidar el NADH a NAD+. El acetato, formado a partir del piruvato, produce ATP. El propionato es generado en el rumen por dos vas, la aleatoria (succinil-CoA) y la no aleatoria (acrilil-CoA). Las dos vas eliminan el mismo nmero de equivalentes reductores y permiten la formacin de ATP. En la va aleatoria, el piruvato o fosfoenol
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piruvato) es convertido a malato (u oxalacetato), despus es deshidratado a fumarato, el cul es reducido a succinato. En las etapas finales de la produccin de propionato se forma succinil-CoA, se genera una reaccin mutasa dependiente de vitamina B12, ocurre una descarboxilacin y, finalmente, una hidrlisis del ster-CoA en una reaccin que produce ATP. En la va no aleatoria, el lactato produce lactil-CoA, y despus acrilil-CoA, el cual es reducido a propionil-CoA. Las dos bacterias principales productoras de propionato son S. ruminantium y M. elsdenii que usan las vas aleatoria y no aleatoria, respectivamente. El butirato es formado por la condensacin de dos molculas de acetil-CoA, siendo la principal especie productora B. fibrisolvens, aunque los protozoarios ciliados son activos en su formacin. El metano es producido por bacterias de la especie Methanobrevibacter ruminantium. El lactato es metabolizado por bacterias ruminales como Veillonella prvula, S. ruminantium y M. elsdenii, lo que forma propionato. Tambin es metabolizado por protozoarios ciliados. El succinato es utilizado por S. ruminantium, se forma propionato. Los principales AGVs produidos en el rumen son: actico (C2), propinico (C3) y butrico (C4). Cuando el animal est consumiendo una dieta basada en forrajes, la relacin o patrn de fermentacin en que se encuentran stos es de 65:25:10 a 70:20:10, respectivamente; mientras que si la dieta es alta en granos o concentrados, la proporcin variar entre 45:40:15 y 50:40:10, respectivamente. El cido lctico es canalizado a la produccin de grasa en la leche. El cido propinicose canaliza al incremento de grasa en el cuerpo y menos a la produccin de leche. En raciones con concentrado hay relativamente ms cido propinico que en raciones a base de forrajes. La fermentacin de la fibra produce ms cido actico. La fermentacin de forraje de buena calidad produce relativamente ms cido propinico que la de forraje de baja calidad. La razn de esto es que mientras mejor es la calidad de los forrajes, mayor cantidad de carbohidratos solubles contienen. Durante la fermentacin ruminal se producen AGVs de cadena corta ramificada como: cido isobutrico, cido isovalrico, etc., pero se producen en proporciones bajas. Los AGVs ruminales son empleados como sustratos para la sntesis de otros AGVs o para la formacin de protena microbiana; el resto se absorbe a travs de la pared ruminal y pasa a la vena porta para ser metabolizados, posteriormente, en el hgado y otros tejidos. Los AGVs se absorben principalmente en el rumen y retculo aunque tambin se absorben en el omaso, abomaso e intestinos. Los disacridos y almidones que escapan de la fermentacin ruminal pasan al intestino delgado, donde son digeridos por enzimas pancreticas e intestinales, en la misma forma que en los animales no rumiantes (Spross, 2002).

5.2.5. Ruta del fosfogluconato o de la pentosa fosfato


Tambin llamada derivacin de la hexosa monofosfato o va del 6-fosfogluconato, funciona en el citosol (Champe et al., 2006). La va oxidativa de la pentosa fosfato (ribosa 5-fosfato) de Warburg-Dickens es un esquema importante para el catabolismo de la glucosa. Esta va es motivo de la biosntesis de los azcares de cinco carbonos encontrados en los nucletidos (ATP, NAD+, NADP+, coenzima A, FAD), RNA y DNA. Otra caracterstica importante de esta va es que genera NADPH + H+. El NADPH generado
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puede utilizarse en la biosntesis de cidos grasos o de colesterol y funciona como reductor bioqumico. Los eritrocitos tambin contienen las enzimas de esta va, debido a que en estas clulas portadoras de oxgeno, el NADPH tiene un papel protector contra la toxicidad del oxgeno (Roskoski, 2001). Consiste en dos reacciones oxidativas irreversibles seguidas por una serie de interconversiones reversibles de azcar y fosfato. En el ciclo no se consume o produce directamente ATP. El carbono nmero 1 de la glucosa-6-fosfato se descarga como CO2 y se producen dos molculas de NADPH por cada molcula de glucosa-6-fosfato que ingresa en la parte oxidativa de esta va. La tasa y la direccin de las reacciones reversibles de la pentosa fosfato dependen de la provisin y la demanda de intermediarios del ciclo (Champe et al., 2006). La ruta de las pentosas consta de dos fases: la oxidativa (Figura 5.76) y la no oxidativa (Figura 5.77). En la fase no oxidativa se produce la isomerizacin y la condensacin de varias molculas de monosacridos diferentes. Tres intermediarios de este proceso que son tiles en otras rutas son la ribosa-5-fosfato, la fructosa-6-fosfato y el gliceraldehdo-3-fosfato. La fase oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato consta de tres reacciones. En la primera reaccin, la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PD) cataliza la oxidacin de la glucosa-6-fosfato. La 6-fosfogluconolactona y el NADPH son los productos de esta reaccin. A continuacin la 6-fosfogluconolactona se hidroliza para producir 6fosfogluconato. Durante la descarboxilacin oxidativa del 6-fosfogluconato, una reaccin que produce ribulosa-5-fosfato, se produce una segunda molcula de NADPH. Estas reacciones proporcionan una cantidad sustancial del NADPH que se requiere para los procesos reductores (biosntesis de lpidos) y los mecanismos antioxidantes. Por esta razn, esta ruta es ms activa en las clulas en las que se sintetizan cantidades relativamente grandes de lpidos como en el tejido adiposo, la corteza suprarrenal, la glndula mamaria y el hgado. El NADPH tambin es un antioxidante potente. Los antioxidantes son sustancias que impiden la oxidacin de otras molculas. As, la fase oxidativa de la va de las pentosas fosfato tambin es bastante activa en las clulas con riesgo elevado de dao oxidativo, como los eritrocitos. La fase no oxidativa comienza con la conversin de la ribulosa-5-fosfato en ribosa-5-fosfato por la ribulosa-5fosfato isomerasa, o en xilulosa-5-fosfato por la ribulosa-5-fosfato epimerasa. Durante las reacciones restantes de la ruta, la transcetolasa y la transaldolasa catalizan las interconversiones de triosas, pentosas y hexosas. La transcetolasa es una enzima que requiere TTP (tiamina pirofosfato) que transfiere unidades de dos carbonos desde una cetosa a una aldosa. La TTP es la forma coenzimtica de la tiamina o vitamina B1. Dos reacciones estn catalizadas por la transcetolasa. En la primera reaccin, la enzima transfiere una unidad de dos carbonos desde la xilulosa-5-fosfato a la ribosa-5-fosfato, produciendo gliceraldehdo-3-fosfato y sedoheptulosa-7-fosfato. En la segunda reaccin catalizada por la transcetolasa, una unidad de dos carbonos de otra molcula de xilulosa-5-fosfato se transfiere a la eritrosa-4-fosfato para formar una segunda molcula de gliceraldehdo-3-fosfato y fructosa-6-fosfato. La transaldolasa transfiere unidades de tres carbonos desde una cetosa a una aldosa. En la reaccin catalizada por la transaldolasa, se transfiere una unidad de tres carbonos desde la sedoheptulosa-7fosfato al gliceraldehdo-3-fosfato. Los productos que se forman son fructosa-6-fosfato y eritrosa-4fosfato. El resultado de la fase no oxidativa de la ruta es la sntesis de ribosa-5-fosfato y los intermediarios glucollicos gliceraldehdo-3-fosfato y fructosa-6-fosfato.

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Figura 5.76. Fase oxidativa de la ruta del fosfogluconato

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Figura 5.77. Fase no oxidativa de la ruta del fosfogluconato

Fuente: McKee y McKee (2003) Cuando no se requieren las pentosas para las reacciones de biosntesis, los metabolitos de la porcin no oxidativa de la ruta se convierten en intermediarios glucolticos que pueden degradarse posteriormente para generar energa o convertirse en molculas precursoras para los procesos de biosntesis (Figura 5.78). Por esta razn, la ruta de las pentosas fosfato tambin se llama derivacin de las hexosas monofosfato (McKee y McKee, 2003).

5.2.6. Fosforilacin a nivel de sustrato


En las fosforilaciones a nivel del sustrato se produce el ATP debido a la transferencia de un grupo fosforilo desde un sustrato con un potencial elevado de transferencia de un grupo fosforilo. Debido a que se forman dos molculas de glicerato-1,3-bisfosfato por cada molcula de glucosa, esta reaccin produce dos molculas de ATP y se recupera la inversin de energa del enlace fosfato. Cualquier
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sntesis posterior de ATP puede considerarse un rendimiento de esta inversin. Un ejemplo de fosforilacin a nivel del sustrato es la reaccin 7 de la gluclisis denominada transferencia del grupo fosforilo (Figura 5.79). Figura 5.78. Gluclisis y ciclo de las pentosas fosfato

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 5.79. Transferencia del grupo fosforilo

Fuente: McKee y McKee (2003) McKee y McKee (2003) muestra en la reaccin 5 del ciclo de Krebs, denominada ruptura de la succinil-CoA que est acoplada a una fosforilacin a nivel sustrato, otro ejemplo de fosforilacin a nivel de sustrato. En esta reaccin, la ruptura del enlace tioster de energa elevada de la succinil-CoA

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para formar succinato, que cataliza la tiosuccinato quinasa, est acoplada en los mamferos a la fosforilacin a nivel de sustrato del GDP. En otros organismos se fosforila el ADP (Figura 5.80). Figura 5.80. Reaccin 5 del ciclo de Krebs

Fuente: McKee y McKee (2003)

5.2.7. Balance energtico


Los rendimientos energticos del metabolismo oxidativo, segn la ruta, se muestran a continuacin, adems, se calcula la cantidad de ATP que pude obtenerse mediante la fosforilacin oxidativa a partir de los transportadores electrnicos reducidos:

Estos tres procesos generan 4 moles de ATP directamente, mas 10 moles de NADH y 2 moles de FADH2. Para medir la eficacia de la fosforilacin oxidativa, debemos determinar la energa capturada en forma de ATP como una fraccin de la energa total liberada en la oxidacin de un sustrato. Esta medida fue posible cuando se pudo determinar la cantidad de ATP sintetizado por mol de sustrato oxidado en las mitocondrias aisladas. Lo que se mide normalmente es la relacin P/O, que es el nmero de molculas de ATP sintetizadas por par de electrones transportados a travs a travs del transporte electrnico. La sntesis de ATP se cuantifica como incorporacin de fosfato al ATP, y los pares electrnicos se cuantifican como captacin de oxgeno en tomos reducidos a agua (un tomo de O2 son 0.5 moles). Hasta hace poco se aceptaba que la oxidacin mitocondrial de NADH se produce con una relacin P/O de 3, por tanto, cualquier sustrato metabolizado a travs de la deshidrogenasa mitocondrial ligada al NAD+ debe producir 3 moles de ATP por mol de NADH oxidado. En la actualidad se sabe que la mayora de las medidas de la relacin P/O dan valores cercanos a 3 para la oxidacin de los sustratos

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ligados al NAD+ y 2 para el succinato. Por lo anterior, se puede escribir la siguiente ecuacin equilibrada para la oxidacin mitocondrial del NADH:

NADH + 4H+ + 1/2O2 + 3 ADP + 3 Pi NAD+ + 4H2O + 3 ATP


Aunque las relaciones P/O para la oxidacin del NADH y FADH2 pueden no tener valores enteros, se usan los valores de 3 y 2 respectivamente. En consecuencia, el rendimiento total de ATP que puede alcanzarse es de unos 38 por mol de glucosa oxidada [(4 + (3X10) + (2X2)]. En los procariotas y en las clulas que utilizan la lanzadera malato/aspartato, estos equivalentes reductores se transportan a las mitocondrias, sin coste energtico. Sin embargo, las clulas que utilizan la lanzadera del glicerol/fosfato deben pagar un costo energtico. Los electrones del NADH citoslico entran en la cadena respiratoria en forma de FADH2. En consecuencia el rendimiento de ATP a partir de cada uno de estos dos NADH es de 2 y no 3. Esto reduce el rendimiento global de ATP a 36 por mol de glucosa (Mathews et al., 2005). En el Cuadro 5.9, Mathews et al., (2005) muestra el balance energtico de la oxidacin completa de la glucosa. Cuadro 5.9. Rendimiento del ATP de la oxidacin completa de la glucosa ATP producido Gluclisis per se 2 4 6 (glicerol fosfato o intercambiador 2 NADH de la gluclisis malato-aspartato, respectivamente) Piruvato deshidrogenasa (2NADH) 6 Isocitrato deshidrogenasa (2NADH) 6 -cetoglutarato deshidrogenasa (2NADH) 6 Succinato tiocinasa (2 GTP 2 ATP) 2 Succinato deshidrogenasa (2 FADH2) 4 Malato deshidrogenasa (2NADH) 6 TOTAL: 36 38 Fuente: Mathews et al., (2005) Murray et al. (2001) en el cuadro Generacin del fosfato de alta energa en el catabolismo de la glucosa muestra que la oxidacin de la glucosa, en condiciones aerobias, genera hasta 38 moles de ATP, pero en ausencia de O2 slo produce 2 moles. Laguna y Pia (2002) define a la lanzadera como el sistema que usa la clula heptica de los mamferos para convertir al NADH del citosol del hepatocito en NAD+.

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6. Lpidos. Generalidades y metabolismo


La funcin de los lpidos en los animales es la de servir de fuente de energa metablica, de sistemas de almacenamiento y transporte de energa y de componentes estructurales de las membranas celulares (Montgomery et al., 1999). Los lpidos es el grupo de biomolculas estructuralmente ms heterogneo y Lozano et al. (2000) y McKee y McKee (2003) describen otras funciones como: la funcin lubricante y protectora, algunos son vitaminas y pigmentos, reguladores hormonales, emulsionantes digestivos y reguladores intracelulares del metabolismo. A causa de su diversidad, el trmino lpido tiene una definicin ms operativa que estructural. Los lpidos se definen como aquellas sustancias orgnicas de los seres vivos que se disuelven en solventes apolares como el ter, el cloroformo, la acetona y el benceno, y que no lo hacen apreciablemente en el agua (McKee y McKee, 2003; Murray et al., 2001). Por su insolubilidad en el agua, los lpidos corporales suelen encontrarse distribuidos en compartimientos, como es el caso de los lpidos relacionados con la membrana y de las gotitas de triacilglicerol o triglicrido en los adipocitos, o transportarse en el plasma, enlazados con protenas, como las partculas de lipoprotena. Los lpidos ofrecen una barrera hidrfoba (Figura 6.1) que permite distribuir el contenido acuoso de las clulas y los elementos subcelulares (Champe et al., 2006). En la Figura 6.1 se muestran en anaranjado las pociones hidrfobas de las molculas. Figura 6.1. Estructuras de algunas clases de lpidos comunes

Fuente: Champe et al. (2006)

6.1. Caractersticas generales de los lpidos


A diferencia de las protenas, los cidos nucleicos y los polisacridos, los lpidos no son polmeros, sino que son molculas bastante pequeas que presentan una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Generalmente los lpidos se caracterizan por una cabeza hidrfila polar conectada a una cola hidrocarbonada hidrofbica apolar (Figura 6.2). Las molculas lipdicas en un medio acuoso tienden a agruparse formando una asociacin no covalente mediante un efecto hidrfobo que estimula la entropa en las colas apolares, aunque tambin se agrupan por la fuerza de estabilizacin de la interaccin de van der Waals entre las zonas hidrocarbonadas de las molculas. Por otro lado, los grupos de cabeza hidrfilos polares de las
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molculas lipdicas tienden a asociarse con el agua, por su capacidad anfiptica (molculas que muestran propiedades hidrfilas e hidrfobas al mismo tiempo). En consecuencia, los lpidos pueden formar monocapas de superficie, bicapas, micelas y vesculas, por los lpidos en contacto con el agua. En la monocapa en la superficie del agua los grupos de cabeza estn sumergidos. Si la mezcla de las sustancias anfipticas (Figura 6.3 y Figura 6.4) con el agua se mezcla enrgicamente, se pueden formar micelas que es una estructura esfrica formada por una nica capa de molculas) (Mathews et al., 2005). Figura 6.2. Estructura general de los lpidos

Fuente: Mathews et al. (2005) Los lpidos actan como amortiguadores fsicos y aislantes de la temperatura corporal. Figura 6.3 Molculas anfipticas

Fuente: Mathews et al. (2005)


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Figura 6.4. Interacciones de las molculas anfipticas con el agua

Fuente: Mathews et al. (2005)

6.1.1. Clasificacin
Roskoski (2001) muestra las diversas clases qumicas de lpidos en el Cuadro 6.1. Cuadro 6.1. Clasificacin de los lpidos

Lpido
cidos grasos Triglicrido

Funcin

Combustible metablico. Componente de otra clase de lpidos Forma principal de almacenamiento de los cidos grasos y energa qumica Fosfolpidos Componente de membranas. Fuente de cido araquidnico, inositol trifosfato y diglicrido para la transduccin de seales Esfingolpidos Componente de membranas Colesterol Componente de membranas. Precursor de las sales biliares y de las hormonas esteroideas Sales biliares Digestin y absorcin de lpidos. Producto principal del metabolismo del colesterol Hormonas Seales intercelulares que regulan la expresin gentica en las clulas esteroideas blanco Eicosanoides Reguladores de funciones fisiolgicas Vitaminas Visin. Metabolismo del calcio. Antioxidantes. Coagulacin sangunea Cuerpos cetnicos Combustible metablico Fuente: Roskoski (2001) Murray et al. (2001) clasifica a los lpidos en simples y complejos. Los lpidos simples son steres de los cidos grasos con diversos alcoholes y son dos tipos: las grasas (steres de cidos grasos con glicerol. Una grasa en estado lquido se conoce como aceite) y las ceras (steres de cidos grasos con alcoholes monohdricos de peso molecular alto). Los lpidos complejos son steres de cidos grasos que contienen grupos adicionales al alcohol y el cido graso y son: fosfolpidos (lpidos que contienen un residuo de cido fosfrico adicional a los cidos grasos y el alcohol. Con frecuencia contienen bases nitrogenadas y otros constituyentes, por ejemplo, en los glicerofosfolpidos el alcohol es un glicerol, y en los esfingolpidos el alcohol es la esfingosina), glucolpidos o glucoesfingolpidos (lpidos con un
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cido graso, esfingosina y carbohidrato) y otros lpidos complejos (como los sulfolpidos, los aminolpidos y las lipoprotenas). Murray et al. (2001) menciona como tercer grupo de lpidos a los lpidos precursores y derivados que incluyen cidos grasos, glicerol, esteroides, alcoholes adicionales al glicerol y los esteroles, aldehdos grasos y cuerpos cetnicos, hidrocarburos, vitaminas liposolubles y hormonas. Los acilgliceroles (glicridos), colesterol y steres del colesterilo se denominan lpidos neutros por no presentar ninguna carga. Lozano et al. (2000) realiza la clasificacin de la siguiente manera: los lpidos simples los clasifica en tres, como unidades no esterificadas (cidos y alcoholes grasos), steres (mono, di y triacilglicridos o grasas neutras) y derivados de importancia reguladora (prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos). Los lpidos complejos, los clasifica de manera semejante a Murray et al. (2001) y describe un tercer grupo denominado lpidos isoprenoides o insaponificables que derivan estructuralmente del isopreno o 2-metil-butadieno y no contienen enlaces ster, incluyen los terpenos y aromas, esteroides, retinoles y carotenoides, ocoferoles y poliprenilquinonas. Montgomery et al. (1999) menciona que los cuerpos cetnicos son parte de la clasificacin de los lpidos y su funcin es de energa metablica.

6.1.2. Caractersticas de los lpidos simples saponificables


El almacenamiento de los cidos grasos en el organismo se realiza en gran parte en forma de triacilgliceroles o grasas. Si las grasas se hidrolizan con lcalis como NaOH o KOH (antiguamente se utilizaba madera de fresno), se obtiene un jabn. Este proceso se denomina saponificacin. Los cidos grasos se liberan en forma de sales sdicas o potsicas, que estn totalmente ionizadas. Sin embargo, como limpiadores, los jabones tienen el inconveniente de que los cidos grasos precipitan con los iones calcio o magnesio presentes en el agua dura, formando espuma y destruyendo la accin emulsificante. Se han diseado detergentes sintticos que no tienen este efecto, un tipo de ellos es el dodecil sulfato sdico (SDS), cuya frmula muestra Mathews et al. (2005):

Las sales de dodecil sulfato con los cationes divalentes como CA2+ y Mg2+ son ms solubles. El SDS se utiliza mucho para formar micelas alrededor de las protenas en la electroforesis en gel. Tambin existen detergentes sintticos no inicos, como el Triton X-100, cuya frmula se muestra en la Figura 6.5. Figura 6.5. Frmula del Tritn X-100

Fuente: Mathews et al. (2005)

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El grupo hidrfilo es en este caso el grupo de cabeza de polioxietileno (que se indica en azul, en la imagen anterior). Los alcoholes grasos, de forma semejante a los cidos grasos, definidos por Lozano et al. (2000), son cadenas hidrocarbonadas de longitud variable que contienen al menos una funcin alcohol. Segn su abundancia como constituyentes de lpidos se pueden clasificar en dos grupos: alcoholes muy ubicuos (estn en todas las clulas): existen dos, el glicerol (llamado tambin glicerina o 1,2,3-propanotriol, que es el alcohol bsico en la estructura de acilgliceridos y fosfoacilglicridos) y la esfingosina (alcohol bsico de la estructura de derivados de las ceramidas) (Figura 6.6). Figura 6.6. Estructura del glicerol y la esfingosina

Fuente: Lozano et al. (2000) alcoholes de menor abundancia relativa: incluye a la serie de alcoholes de cadena larga y nmero par de carbonos (semejantes en tamao a los cidos grasos y que se encuentran normalmente en ceras, como el alcohol cetlico que es saturado y de 16 carbonos). En segundo lugar, un grupo de alcoholes de estructura diversa que se encuentran en fosfoacilglicridos (la mayora contiene otros grupos funcionales adems de la funcin alcohol y aparece en otras biomolculas no lipdicas. Cabe destacar la colina, la etanolamina, el aminocido serina y la familia del inositol) (Figura 6.7). Figura 6.7. Otras estructuras de alcoholes grasos

Fuente: Lozano et al. (2000) Los steres de los cidos grasos o acilglicridos o aceites o grasas neutras, son steres del glicerol con cidos grasos. Son las principales molculas de reserva energtica, y su poder calorfico, cerca de 8740 cal/g, es muy superior al de carbohidratos y protenas (sobre 3910 cal/g). Como la glicerina tiene tres grupos hidroxilo, puede esterificarse con uno, dos o tres cidos grasos, dando lugar a monoglicridos
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(MAG), diacilglicridos (DAG) y triacilglicridos (TAG) (Figura 6.8). Las grasas naturales contienen ms del 99% de TAG (Lozano et al., 2000). Figura 6.8. Molcula de triacilglicerol

Fuente: McKee y McKee, (2003) Debido a que los triacilgliceroles no tienen carga, ya que el grupo carboxilo de cada cido graso est unido al glicerol mediante un enlace covalente, es por lo que se les denomina grasas neutras. La mayora de los triacilgliceroles contienen cidos grasos de diversas longitudes, que pueden ser insaturados, saturados o una combinacin de ambos. Dependiendo de sus composiciones de cidos grasos, las mezclas de triacilgliceroles se denominan grasas (slidos a temperatura ambiente, gran cantidad de cidos grasos saturados) o aceites (lquidos a temperatura ambiente, gran cantidad de cidos grasos insaturados) (McKee y McKee, 2003). Los TAG sintticos pueden formarse por esterificacin (Figura 6.9) del glicerol con un solo cido graso, dando un ster que se denomina con el prefijo tri- seguido de un nombre que hace referencia al cido graso que contiene, mas el sufijo ina ( como la tributirina, triolena). Las grasas naturales son mezclas de TAG en los que las tres posiciones del glicerol estn esterificadas por cidos grasos diferentes, y se nombran especificando los radicales acilo correspondientes a cada cido graso y sus posiciones (Figura 6.10). Los TAG naturales suelen tener la posicin 2 esterificada por un cido graso insaturado, y son de tipo L debido a que muestran quiralidad con el carbono central (Lozano et al., 2000). Figura 6.9. Esterificacin

Fuente: Lozano et al. (2000) Por su naturaleza heterognea, los TAG naturales no tienen un punto de fusin definido, aunque es tanto menor cuanto mayor es su contenido en cidos grasos insaturados. El grado de insaturacin de los TAG puede determinarse mediante algunos ensayos qumicos como el del ndice de yodo. Las olenas son lquidas a temperatura ambiente y abundantes en los aceites, mientras que las margarinas o
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palmitinas son slidas y abundan en las grasas slidas. Las plantas y los animales de sangre fra tienen TAG ms ricos en cidos grasos insaturados que los animales de sangre caliente, con el fin de comunicar cierta fluidez a sus tejidos. Figura 6.10. Estructura del 1-estearoil-2-oleoil-3-palmitoil-glicerol

Fuente: Lozano et al. (2000) Los TAG pueden hidrolizarse, por lipasas o lcalis, como ya se mencion anteriormente, mediante la saponificacin (Figura 6.11) que es contraria a la esterificacin (Lozano et al., 2000). Figura 6.11. Proceso de saponificacin

Fuente: Laguna y Pia (2002)

6.1.2.1 Grasas (triglicridos y cidos grasos saturados e insaturados)


Los cidos grasos son cidos monocarboxlicos que contienen tpicamente cadenas hidrocarbonadas de longitudes variables (entre 12 y 20 carbonos). Los cidos grasos son componentes importantes de varias clases de molculas lipdicas. Se encuentran principalmente en los triacilgliceroles y varias clases de molculas lipdicas unidas a la membranas (McKee y McKee, 2003). La mayor parte de los cidos grasos naturales posee un nmero par de tomos de carbono que forman una cadena sin ramificar, aunque en algunas especies se encuentran cidos grasos poco habituales con cadenas ramificadas o con anillos. Las cadenas de los cidos grasos que slo contienen enlaces sencillos carbono-carbono se denominan saturadas, mientras que las cadenas que contienen uno o varios dobles enlaces se denominan insaturadas. Dado que los dobles enlaces son estructuras rgidas, las molculas que los contienen pueden presentarse en dos formas isomricas: cis y trans. En los ismeros cis, los grupos semejantes o idnticos se encuentran en el mismo lado de un doble enlace. Cuando estos grupos se encuentran en lados opuestos de un doble enlace, se dice que la molcula es un ismero trans (Figura 6.12) (McKee y McKee, 2003; Mathews et al., 2005).
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Figura 6.12. Isomera cis y trans

Fuente: Montgomery et al. (1999) En la mayora de los cidos grasos naturales, los dobles enlaces se encuentran en configuracin cis. La presencia de un doble enlace cis produce un retorcimiento inflexible en una cadena de cido graso. Debido a esta caracterstica estructural, los cidos grasos insaturados no se colocan tan juntos como los cidos grasos saturados. Se requiere menos energa para romper las fuerzas intermoleculares entre los cidos grasos insaturados. Por lo tanto, poseen menores puntos de fusin y a temperatura ambiente son lquidos. Por ejemplo, el cido palmtico (16:0), que es un cido graso saturado, funde a 63C, mientras que el cido palmitoleico (16:19) funde a 0C (en la abreviaturas de los cidos grasos, el nmero a la izquierda de los dos puntos es el nmero de tomos de carbono totales, y el nmero a la derecha indica el nmero de dobles enlaces; un superndice indica la colocacin del doble enlace, 9 indica que hay ocho carbonos entre el grupo carboxilo y el doble enlace, es decir, el doble enlace se encuentra entre los carbonos 9 y 10) (Cuadro 6.2). Los cidos grasos con dobles enlaces trans tienen estructuras tridimensionales semejantes a las de los cidos grasos insaturados. La presencia de dobles enlaces en un cido graso lo hace susceptible al ataque oxidativo, por lo que los aceites tienden a enranciarse (Figura 6.13) (McKee y McKee, 2003). Cuadro 6.2. Ejemplos de cidos grasos de importancia biolgica
Nombre comn Nombre sistemtico Abreviatura Estructura Punto de fusin (C) 31.6 44.2 53.9 63.1 69.6 76.5 81.5 0 16 5 -11 -50

cidos grasos saturados Cprico n-Decanoico Lurico n-Dodecanoico Mirstico n -Tetradecanoico Palmtico n -Hexadecanoico Esterico n -Octadecanoico Araqudico n -Eicosanoico Behnico n -Docosanoico cidos grasos insaturados Palmitoleico cis-9-Hexadecenoico Oleico cis-9-Octadecenoico Linoleico cis,cis-9,12Octadecatrienoico Linolnico all-cis-9,12,15Octadecatrienoico Araquidnico all-cis-5,8,11,14Eicosatetraenoico cidos ramificados y cclicos Tuberculoesterico I-D-10Metiloctadecanoico

10:0 12:0 14:0 16:0 18:0 20:0 22:0 16:1c9 18:1c9 18:2c9,12 18:3c9,12,15 20:4c

CH3(CH2)8COOH CH3(CH2)10COOH CH3(CH2)12COOH CH3(CH2)14COOH CH3(CH2)16COOH CH3(CH2)18COOH CH3(CH2)20COOH CH3(CH2)5CH= CH(CH2)7COOH CH3(CH2)7CH= CH(CH2)7COOH CH3(CH2)4CH= CHCH2CH= CH(CH2)7COOH CH3CH2CH= CHCH2CH= CHCH2CH= CH(CH2)7COOH CH3(CH2)4CH= CHCH2CH= CHCH2CH= CHCH2CH= CH(CH2)3COOH CH3 CH3(CH2)7CH(CH2)8COOH

13.2

Lactobaclico

-(2-n-Octilciclopropil)octadecanoico

CH2 CH3(CH2)5CH-CH(CH2)9COOH

29

Fuente: Mathews et al. (2005)


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Figura 6.13. Modelos de relleno espacial y conformacionales

Fuente: McKee y McKee (2003) Los cidos grasos con un doble enlace se denominan molculas monoinsaturadas. Cuando hay dos o ms dobles enlaces en los cidos grasos, normalmente separados por grupos metileno (-CH2-), se denominan poliinsaturados. El cido graso cido oleico (omega 9) y el cido linoleico se encuentran entre los cidos grasos ms abundantes en los seres vivos. Los cidos grasos n-6 son poliinsaturados de cadena larga, con el primer enlace doble a partir del sexto tomo de carbono (cuando se cuenta desde el extremo metilo de la molcula de cido graso) y tambin se denominan cidos grasos omega 6, ejemplos son el cido linoleico que disminuye el colesterol plasmtico cuando sustituye a las grasas saturadas y tambin protege contra cardiopata coronaria. Los cidos grasos n-3 u omega 3, son poliinsaturados y de cadena larga, con el primer enlace doble a partir del tercer tomo de carbono (cuando se cuenta desde el extremo metilo de la molcula de cido graso). Dichos lpidos suprimen arritmias cardiacas, disminuye los triacilgliceroles sricos y reducen la tendencia de trombosis. Las grasas poliinsaturadas n-3 se encuentran en las plantas (sobretodo el cido linolnico alfa) y en el aceite de pescado que tiene cido docosahexanoico y cido eicosapentaenoico (Champe et al., 2006). Los organismos como los vegetales y las bacterias pueden sintetizar todos los cidos grasos que requieren a partir de acetil-CoA. Los mamferos obtienen la mayora de sus cidos grasos de la alimentacin. Sin embargo, estos organismos pueden sintetizar los cidos grasos saturados y algunos insaturados, tambin pueden modificar algunos cidos grasos de la alimentacin aadiendo unidades de dos carbonos e introduciendo algunos dobles enlaces. Los cidos grasos poseen varias propiedades qumicas importantes. Las reacciones que experimentan son tpicas de los cidos carboxlicos de cadena corta. Por ejemplo, los cidos grasos reaccionan con los alcoholes para formar steres. La reaccin de la Figura 6.14 es reversible. Los cidos grasos insaturados con dobles enlaces pueden experimentar reacciones de hidrogenacin para formar cidos grasos saturados, como ocurre dentro del rumen, reacciones realizadas por la microflora ruminal en un proceso denominado biohidrogenacin ruminal.
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Figura 6.14. Formacin de steres a partir de cidos grasos

Fuente: McKee y McKee (2003) Determinados cidos grasos como el mirstico y palmtico estn unidos covalentemente a una gran variedad de protenas eucariotas denominadas aciladas. Los grupos cido graso (denominados grupos acilo) facilitan de forma clara las interacciones entre las protenas de la membrana y sus entornos hidrfobos. Los cidos grasos se transportan desde las clulas grasas a las clulas del cuerpo esterificadas con protenas del suero y entran en las clulas mediante reacciones de transferencia de acilo (McKee y McKee, 2003). Los cidos grasos son cidos dbiles, con valores de pKa que son, en promedio, de alrededor de 4.5 (Mathews et al., 2005):

Estos cidos grasos se encuentran a pH fisiolgico en forma aninica (RCOO-) y, en estas condiciones, sera ms correcto hablar de estearato y olearato, en vez de cido esterico u oleico. La carga del grupo carboxilo hace que ste sea extremadamente hidrfilo, mientras que las colas hidrocarbonadas largas son muy hidrfobas (Mathews et al., 2005). Montgomery et al. (1999) describe que los steres de glicerol de los cidos grasos, los acilgliceroles, se denominan habitualmente glicridos por los cientficos de la salud. La porcin de cido graso de los steres de lpidos se conoce como grupo acilo. Existen tres tipos generales de glicridos: monoglicridos, diglicridos y triglicridos que tambin son denominados monoacilgliceroles, diacilgliceroles y triacilgliceroles, respectivamente (Figura 6.15). Los trminos se usan indistintamente, por ejemplo, triacilglicerol se emplea en mayor medida en el mbito qumico y bioqumico, mientras que triglicrido predomina en las ciencias de la salud. Los TAG ya fueron descritos en el tema Caractersticas de los lpidos simples saponificables, por lo que no se van a describir en esta unidad, mas que comentar que los triglicridos son los acilgliceroles ms comunes, dado que son las formas de almacenamiento principal y de transporte de los cidos grasos. Figura 6.15. Acilgliceroles

Fuente: Montgomery et al. 1999)


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6.1.2.2 Ceras
Definidas por Murray et al. (2001) como steres de cidos grasos con alcoholes monohdricos de peso molecular alto, las ceras forman parte del grupo de los lpidos simples. Las ceras son mezclas complejas de lpidos apolares y son cubiertas protectoras de las hojas, los tallos y las frutas de los vegetales y la piel de los animales. Los steres formados por cidos grasos de cadenas larga y alcoholes de cadena larga son constituyentes destacados de la mayora de las ceras. Entre los ejemplos bien conocidos se encuentran la cera de carnauba, producida por las hojas de la palma de cera brasilea, y la cera de abeja. El constituyente predominante de la cera de carnauba es el ster de cera melisil cerotato (Figura 6.16). El triacontil hexadecanoato es uno de los steres de cera importantes de la cera de abeja. Las ceras contienen tambin hidrocarburos, alcoholes, cidos grasos, aldehdos y esteroles (alcoholes esteroides) (McKee y McKee, 2003). Figura 6.16. ster de cera melisil cerotato

Fuente: (McKee y McKee, 2003) Debido a que en las ceras naturales, un cido graso de cadena larga se esterifica con un alcohol de cadena larga para dar un grupo de cabeza que tan slo es dbilmente hidrfilo unido a dos cadenas hidrocarbonadas, las ceras son completamente insolubles en agua. Al igual que con los triglicridos, la dureza de las ceras viene dada por al longitud de la cadena y su grado de saturacin (Figura 6.17) (Mathews et al., 2005). Figura 6.17. Estructura de una cera caracterstica

Fuente: Mathews et al. (2005)


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6.1.3. cidos grasos esenciales


La formacin de dobles enlaces en la cadena de los cidos grasos ocurre tanto en plantas como en animales, aunque en stos ltimos se realiza con mayores limitaciones. El proceso est catalizado por sistemas enzimticos denominados desaturasas, las cuales funcionan como oxidasas y utilizan NADH (o NADPH), citocromo b5 y oxgeno molecular, actuando sobre los derivados acil-CoA del correspondiente cido graso (Figura 6.18). Figura 6.18. Sistema enzimtico desaturasas

Fuente: Herrera (1986) Los animales disponemos de desaturasas capaces de introducir un doble enlace en las posiciones 5 y 6 (5 y 6), adems de la 9 (9), de los cidos grasos saturados, contando a partir del terminal carboxlico. Sin embargo, no podemos introducir dobles enlaces en posiciones posteriores al carbono 9, cosa que s realizan las plantas, que cuentan con desaturasas para 12 y 15, adems de 9. En todos los casos, conviene resaltar que los dobles enlaces de los cidos grasos naturales presentes en mamferos poseen siempre la configuracin cis. La especificidad de accin cataltica de la desaturasa nos obliga a determinados condicionamientos dietticos. As, el cido palmtico es el sustrato ms corto sobre el que acta la 9 desaturasa de origen animal, dando lugar a la formacin de cido palmitoleico (9), cuya frmula se muestra a continuacin:

CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)7-COOH
Esto supone que hay siete tomos de carbono detrs del doble enlace. Nosotros podemos elongar el cido palmitoleico introduciendo tomos de carbono en el terminal carboxlico, pero aunque esta elongacin se combine con la desaturacin, siempre tendremos siete carbonos detrs del ltimo doble enlace. Ello implica que cualquier cido graso de nuestro organismo que tenga menos de siete tomos de carbono por detrs del ltimo doble enlace ha de proceder de la dieta de origen vegetal (Herrera, 1986). Los cidos grasos que se pueden sintetizar se denominan cidos grasos no esenciales. Debido a que los mamferos no poseen las enzimas que se requieren para sintetizar los cidos linoleico y linolnico, estos cidos grasos esenciales deben obtenerse del alimento (McKee y McKee, 2003). Las fuentes ms abundantes de los cidos grasos esenciales, que tienen varias funciones fisiolgicas fundamentales, son algunos aceites vegetales, las nueces y las semillas. Adems de contribuir a la
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estructura adecuada de la membrana, los cidos linoleico y linolnico son precursores de varios metabolitos importantes. Los ejemplos ms estudiados de derivados de los cidos grasos son los eicosanoides. La dermatitis (piel escamosa) es un sntoma precoz en las personas con una alimentacin con pocas grasas, y por lo tanto con carencias de cidos grasos esenciales. Otros signos de esta deficiencia son una mala cicatrizacin de las heridas, una disminucin de la resistencia a las infecciones, alopecia (prdida de pelo) y trombocitopenia (reduccin del nmero de plaquetas que participan en la coagulacin sangunea) (McKee y McKee, 2003; Montgomery et al., 1999).

6.1.4. Constantes analticas de las grasas


Es posible conocer algo de la naturaleza de los cidos grasos en las grasas de distinta procedencia mediante el ndice de acidez que nos indica la cantidad de cido graso libre que existe en una grasa. En el caso de grasas expuestas al enranciamiento bacteriano, mide el grado de enranciamiento hidroltico. El ndice de saponificacin proporciona informacin sobre la longitud promedio de las cadenas de cidos grasos en las grasas, y el ndice de yodo mide el grado de insaturacin de los cidos grasos en una muestra de grasa. El ndice de acidez de una grasa es el nmero de miligramos de KOH que se requieren para neutralizar los cidos grasos libres en un gramo de grasa. El ndice de saponificacin de una grasa es el nmero de miligramos de KOH que se requiere para saponificar un gramo de grasa. Cunto ms elevado es el ndice, ms corta es la longitud promedio de las cadenas de cidos grasos (Mertz, 1985). El ndice de saponificacin proporciona el peso molecular medio de los cidos grasos. Un ndice de saponificacin elevado seala la existencia de una gran proporcin de cidos grasos de peso molecular bajo, puesto que para un peso determinado de cidos grasos, los ms sencillos consumen ms KOH que los superiores (Thorpe, 1984; Toporek, 1984) Las grasas que contienen, como todas las grasas naturales, cierta proporcin de cidos grasos no saturados, se comportan como sustancias no saturadas y adicionan fcilmente elementos qumicos (Thorpe, 1984). Los halgenos pueden unirse a los dobles enlaces. Por lo tanto, la cantidad de yodo que reacciona con un lpido constituye un ndice de la riqueza en dobles enlaces de esta sustancia (Toporek, 1984). El Cuadro 6.3 muestra los ndices de yodo y saponificacin de algunas grasas. Cuadro 6.3. ndice de yodo y saponificacin de algunas grasas

Grasas
Aceite de coco Mantequilla Sebo o grasa de vaca Manteca o grasa de cerdo Grasa humana Aceite de oliva Aceite de algodn Aceite de hgado de bacalao Aceite de linaza

ndice de yodo
9 25-50 36-48 50-70 57-66 78-90 106-112 144-168 192-195

ndice de saponificacin
246-260 220-233 192-200 195-197 193-199 185-195 192-196 175-193 190-195 Fuente: Thorpe (1984)
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En condiciones adecuadas, puede lograrse que una grasa fije yodo cuantitativamente en cada doble enlace (Figura 6.19). Figura 6.19. Reaccin que tiene lugar en el clculo del ndice de yodo

Fuente: Herrera (1986) El nmero de gramos de yodo fijados de esta forma por 100 gr de una grasa expresa su ndice de yodo o nmero de yodo, que permite conocer de modo fcil el grado de insaturacin de la grasa y, por lo tanto, su reactividad (Thorpe, 1984). En la cual el I2 que es de color violeta (o rosa en disoluciones diluidas), al reaccionar con el doble enlace, pierde dicha coloracin, pasando a ser incoloro. Si se conoce la concentracin de yodo en la disolucin, as como los volmenes de cido graso utilizado y de yodo aadido, se puede determinar cuantitativamente el nmero de dobles enlaces en el cido graso. El propio yodo nos indicar cuando todos los dobles enlaces han reaccionado, ya que, en una gota, el yodo mantendr su coloracin violeta, lo que significar que ya no ha reaccionado (Garrido, 1991).

6.1.5. Caractersticas de los lpidos compuestos saponificables (glucolpidos, fosfolpidos, esfingolpidos, etc.)
Se ha clasificado a los lpidos de diferentes maneras. La clasificacin ms satisfactoria es la que se basa en las estructuras de sus esqueletos. Los lpidos complejos comprenden a los glucolpidos, los fosfoglicridos, los esfingolpidos, sulfolpidos, los aminolpidos y las lipoprotenas (Lehninger, 1983; Murray et al., 2001). Champe et al. (2006) define a los glucolpidos como molculas que contienen componentes carbohidratos y lpidos, casi todos son derivados de ceramidas en las que se encuentra un cido graso de cadena larga unido al aminoalcohol esfingosina, por lo que este autor, menciona que se denominan de manera ms precisa glucoesfingolpidos. Las ceramidas son los precursores de los esfingolpidos tanto fosforilados como glucosilados (Figura 6.20). Figura 6.20. Componentes de los esfingolpidos

Fuente: McKee y McKee (2003)


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En los glucolpidos se encuentran unidos a la ceramida un monosacrido, disacrido u oligosacrido mediante un enlace glucosdico. Los glucolpidos no contienen fosfato. Los glicolpidos (Figura 6.21) tienen la unidad ceramida unida por un enlace glucosdico de configuracin Son muy abundantes en las membranas del sistema nervioso central mxime en la sustancia blanca. De acuerdo con la naturaleza del carbohidrato, Lozano et al. (2000) y McKee y McKee (2003) los clasifican en: Figura 6.21. Ejemplos de glucolpidos

Fuente: McKee y McKee (2003) Cerebrsidos: esfingolpidos que contienen slo un monosacrido, generalmente D-galactosa, que no son inicas a diferencia de los fosfolpidos. Un ejemplo son los galactocerebrsidos. Sulftidos o sulfolpidos: son glicolpidos en los que el carbohidrato contiene a su vez steres sulfato. Si se sulfata un cerebrsido, se denomina sulftido. El ms abundante es el cerebrsido con Dgalactosa esterificada en el hidroxilo de C3. Los sulftidos a pH fisiolgico estn cargados negativamente. Globsidos: contienen un oligosacrido relativamente simple. El ms abundante contiene lactosa. Ganglisidos: esfingolpidos que contienen un oligosacrido complejo y ramificado, con enlaces glucosdicos diversos, y siempre existen una o varias unidades de un azcar cido, el cido Nacetilneuramnico. Los glucoesfingolpidos son componentes esenciales de todas las membranas del organismo y al igual que lo menciona Lozano et al. (2000), se encuentran en su mayor representacin en el tejido nervioso.
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Estn localizados en la hojuela externa de la membrana plasmtica, sitio en el que entran en interaccin con el ambiente extracelular. Como tales, desempean una funcin en las interacciones, el crecimiento y desarrollo celulares. Los glucoesfingolpidos son antignicos y se han identificado como el origen de los antgenos de grupo sanguneo, diversos antgenos embrionarios especficos de etapas particulares del desarrollo fetal y ciertos antgenos tumorales. La porcin carbohidrato de un glucolpido es su determinante antignico. Tambin funcionan como receptores de la superficie celular para toxinas de clera y ttanos, as como de ciertos virus y bacterias. Los fosfolpidos (Figura 6.22) son compuestos inicos polares compuestos por un alcohol que se encuentra unido por un puente fosfodiestrico a diacilglicerol o a esfingosina. Al igual que los cidos grasos, los fosfolpidos son de naturaleza anfiptica. Los fosfolpidos son los lpidos predominantes en las membranas celulares. En ellas la porcin hidrfoba de una molcula de fosfolpido est relacionada con las porciones apolares de otros constituyentes de la membrana como glicolpidos, protenas y colesterol. La cabeza hidrfila (polar) del fosfolpido se extiende hacia el exterior, mirando hacia el ambiente acuoso intracelular o extracelular. Los fosfolpidos de la membrana tambin funcionan como reservorios para los mensajeros intracelulares, y en el caso de algunas protenas, como fijadores o anclas de stas a la membrana celular. Los fosfolpidos que no se relacionan con la membrana tienen funciones adicionales en el organismo como componentes del agente tensoactivo pulmonar e ingrediente esencial de la bilis, en la que sus propiedades detergentes ayudan a la solubilizacin del colesterol (Champe et al., 2006). Figura 6.22. Estructura de algunos fosfolpidos

Fuente: Champe et al. (2006) Son dos las clases de fosfolpidos: los que tienen glicerol como espinazo o esqueleto bsico y los que contienen esfingosina. Ambas clases se encuentran como componentes estructurales de las membranas y desempean una funcin en la generacin de molculas de sealamiento de lpidos y segn Champe et al. (2006) son: Glicerofosfolpidos o fosfoglicridos: son fosfolpidos que contienen glicerol y constituyen la clase mayor de fosfolpidos. Todos contienen cido fosfatdico (Figura 6.23) (diacilglicerol con un grupo fosfato en el tercer carbono) o se derivan de ste. El cido fosfatdico es el fosfoglicrido ms simple y el precursor de los dems miembros de este grupo. Los fosfoglicridos estn formados por cido fosfatdico y un alcohol: el grupo fosfato situado sobre el cido fosfatdico (PA) se puede esterificar con otro compuesto que contiene un grupo alcohol (Cuadro 6.4).

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Figura 6.23. cido fosfatdico

Fuente: Champe et al. (2006) Cuadro 6.4. Esterificacin del cido fosfatdico Serina + PA Fosfatidilserina Etanolamina + PA Fosfatidiletanolamina (cefalina) Colina + PA Fosfatidilcolina (lecitina) Inositol + PA Fosfatidilinositol Glicerol + PA Fosfatidilglicerol Fuente: Champe et al. (2006) Esfingolpidos (esfingomielina): el espinazo de la esfingomielina es el aminoalcohol esfingosina, en lugar del glicerol. Tiene un cido graso de cadena larga unido al grupo amino de la esfingosina por medio de un enlace amdico lo que genera en la produccin de una ceramida que puede funcionar como precursora de los glucolpidos. El grupo alcohol del carbono 1 de la esfingosina se esterifica hasta fosforilcolina, con produccin de esfingomielina, el nico esfingofosfolpido de importancia en el ser humano. La esfingomielina es un constituyente importante de la mielina de las fibras nerviosas (Champe et al., 2006; Laguna y Pia, 2002). Laguna y Pia (2002) mencionan que existen tres subclases de esfingolpidos, todos derivados de la molcula de ceramida, pero difieren en sus cabezas: esfingomielinas, glicolpidos neutros o no cargados y ganglisidos. En la Figura 6.24 se muestra la esfingosina que es un compuesto de C18 con grupos hidroxilo en C1 y C3, un grupo amino en C2, y un enlace doble trans en C4 (Roskoski, 2001). Algunos lpidos se asocian con protenas especficas para formar sistemas de lipoprotena donde las propiedades fsicas especficas de estas dos clases de biomolculas estn fusionadas. Existen dos tipos principales: las lipoprotenas de transporte y los sistemas de membrana. En estos sistemas los lpidos y las protenas no estn unidos covalentemente, pero se mantienen juntos debido, en gran parte, a las acciones hidrofbicas entre las porciones no polares de los componentes lipdico y proteico (Lehninger, 1983).

6.1.6. Caractersticas de los lpidos no saponificables (terpenos, esteroides, prostaglandinas)


Los isoprenoides son un gran grupo de biomolculas que contienen unidades estructurales de cinco carbonos que se repiten y que se denominan unidades isopreno (Figura 6.25). Los isoprenoides no se sintetizan a partir del isopreno (metilbutadieno), sino que todas sus rutas de biosntesis comienzan con la formacin de isopentenil pirofosfato a partir de acetil-CoA.
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Figura 6.24. Esfingosina y esfingolpidos representativos

Fuente: Roskoski (2001) Figura 6.25. Isopreno

Fuente: McKee y McKee (2003) Los isoprenoides constituyen a los terpenos y esteroides. Los terpenos son un grupo enorme de molculas que se encuentran en gran medida en los aceites esenciales de las plantas (Cuadro 6.5). Los aceites esenciales son extractos de plantas que se han utilizado durante miles e aos en perfumes y medicinas. Los esteroides son derivados del sistema del anillo del colesterol. Terpenos: Los terpenos se clasifican de acuerdo con el nmero de residuos de isopreno que contienen. Los monoterpenos estn formados por dos unidades isopreno (10 tomos de carbono). Los carotenoides, pigmentos naranja que se encuentran en la mayora de las plantas, son los nicos tetraterpenos (molculas formadas por ocho unidades isopreno). Varias biomolculas importantes estn formadas por componentes no terpnicos unidos a grupos isoprenoides (a menudo denominados grupos prenilo o isoprenilo). Entre estas molculas, que se denominan terpenoides mixtos, se encuentran la vitamina E (-tocoferol), la ubiquinona, la vitamina K y algunas citoquininas (hormonas vegetales) (Figura 6.26) (McKee y McKee, 2003).

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Los terpenos se encuentran en las membranas hidrfobas del retculo endoplsmico y el aparato de Golgi de todas las clulas, fosfatados en un extremo, y sirven de transportadores de glucoprotenas inmaduras durante la glicosilacin de stas (Lozano et al., 2000). Cuadro 6.5. Ejemplos de terpenos

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 6.26. Terpenoides mixtos

Fuente: McKee y McKee (2003) Esteroides: son derivados complejos de los triterpenos. Se encuentran en todos los eucariotas y en un pequeo nmero de bacterias. Cada tipo de esteroide est formado por cuatro anillos fusionados llamado ciclo perhidropentanofenantreno (Figura 6.27). Los esteroides se diferencian entre ellos por la

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posicin de los dobles enlaces carbono-carbono y diversos sustituyentes como grupos hidroxilo, carbonilo y alquilo. El colesterol es un ejemplo de esteroide. Adems de ser un componente esencial de las membranas de las clulas animales, el colesterol es precursor de la biosntesis de todas las hormonas esteroideas, la vitamina D y las sales biliares (Figura 6.27). El colesterol posee dos sustituyentes metilo esenciales, que estn unidos al C-13 y C-10, respectivamente, y un doble enlace 5. Una cadena lateral hidrocarbonada ramificada est unida a C-17. Debido a que esta molcula tiene un grupo hidroxilo (unido a C-3), se clasifica como esterol. Aunque el trmino esteroide es ms adecuado para designar a las molculas que contienen uno o varios grupos carbonilo o carboxilo, suele utilizarse para describir todos los derivados con la estructura de anillo esteroide. El colesterol normalmente se almacena dentro de las clulas en forma de ster de cido graso. La reaccin de esterificacin est catalizada por la enzima acil-CoA: colesterol aciltransferasa (ACAT), que se encuentra en la cara citoplsmica del retculo endoplsmico. Todas las molculas esteroideas de los vegetales son esteroles. Los esteroles desempean un papel importante en la estructura y funcin de la membrana. Determinados derivados de los esteroles, como los glcidos cardacos, protegen a las plantas que los producen de los depredadores. La mayora de los esteroles vegetales poseen un sustituyente de uno o dos carbonos unido a C-24. Los esteroles ms abundantes de las algas verdes y de los vegetales superiores son el -sitosterol y el estigmasterol (McKee y McKee, 2003). Prostaglandinas: las prostaglandinas (PG) y los compuestos relacionados tromboxanos (TX) y leucotrienos (LT) se conocen de manera colectiva como eicosanoides, para reflejar su origen en los cidos grasos poliinsaturados de 20 carbonos. Son compuestos muy potentes que desencadenan gran variedad de reacciones fisiolgicas y patolgicas. Aunque su accin se ha comparado con la de las hormonas, los eicosanoides difieren de las verdaderas hormonas en que se producen en cantidades muy pequeas en casi todos los tejidos y no en glndulas especializadas; adems, actan de manera local y no despus de su transporte en la sangre hasta sitios distantes. Los eicosanoides no se almacenan y tienen una vida muy breve ya que se metabolizan con rapidez hasta productos inactivos en su sitio de sntesis. Sus acciones biolgicas son mediadas por receptores de las membranas plasmtica y nuclear, que son distintos en los diferentes sistemas orgnicos. El precursor de las prostaglandinas contenido en la dieta es el cido graso esencial llamado cido linoleico. Se alarga y desatura hasta cido araquidnico, precursor inmediato de la clase predominante de prostaglandinas (las que tienen dobles enlaces) en humanos (Champe et al., 2006). Las prostaglandinas, al igual que otros eicosanoides, son mediadores endgenos que se forman como consecuencia de la oxigenacin de ciertos cidos grasos poliinsaturados de cadena larga, como el cido araquidnico (Botana et al., 2002). Las prostaglandinas se norman como sigue: PG mas una tercera letra (ejemplo, A, D, E o F), la cual se refiere al tipo de estructura o grupos funcionales de la molcula. El nmero de subnidice indica el nmero de enlaces dobles de la molcula (Figura 6.28) (Champe et al., 2006).

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Figura 6.27. Esteroides de los animales

Fuente: Lehninger (1983); McKee y McKee (2003); Mathews et al. (2005)


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Figura 6.28. Estructuras de las prostaglandinas

Fuente: Mathews et al. (2005)

6.2. Metabolismo de lpidos


Los cidos grasos almacenados en el tejido adiposo en forma de triacilglicridos (TAG) neutros sirven como las reservas de combustible mayores del cuerpo. Los TAG constituyen las reservas concentradas de energa metablica porque estn altamente reducidos, y en su mayor parte, son anhidros. El rendimiento de la oxidacin completa de los cidos grasos hasta CO2 y H2O es de 9 kcal/g de grasa, en comparacin con 4 kcal/g de protenas o carbohidratos (Figura 6.29) (Champe et al., 2006). Figura 6.29. Energa disponible de los principales componentes de los alimentos

Fuente: Champe et al. (2006)


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Cuando descienden las reservas energticas, los almacenes de grasa del cuerpo se movilizan por un proceso que se denomina liplisis. La liplisis tiene lugar durante el ayuno, durante el ejercicio vigoroso y como respuesta a la agresin. Varias hormonas como el glucagn y la adrenalina se unen a receptores especficos de la membrana plasmtica de los adipocitos y comienza una secuencia de reacciones semejantes a la activacin de la glucgeno fosforilasa. La unin de la hormona al receptor eleva la concentracin citoslica de cAMP, el cual a su vez activa la triacilglicerol lipasa sensible a las hormonas que incrementa la velocidad de hidrlisis de los triacilgliceroles (McKee y McKee, 2003). La movilizacin de la grasa almacenada requiere descarga hidrollica de cidos grasos y glicerol a partir de su forma previa, TAG (Figura 6.30 y 6.31). Inicia este proceso la lipasa sensible a hormonas, que retira un cido graso del carbono 1 del TAG, uno del carbono 3 de ste o ambas cosas. Retiran los cidos grasos restantes lipasas adicionales especficas para el diacilglicerol o monoacilglicerol (Champe et al., 2006). Figura 6.30. Reaccin de la liberacin de los cidos grasos y glicerol

Fuente: Laguna y Pia (2002) Figura 6.31. Representacin esquemtica de la liplisis

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Ambos productos de la liplisis (cidos grasos y glicerol), as como los provenientes de la dieta digeridos y absorbidos en el intestino delgado, se liberan a la sangre. El glicerol se transporta al hgado donde puede utilizarse para la sntesis de lpidos o de glucosa. Tras su transporte a travs de la membrana plasmtica del adipocito, los cidos grasos se unen a la albmina srica que es una protena abundante que transporta numerosas sustancias en la sangre. Los cidos grasos unidos a la albmina se transportan a todos los tejidos del cuerpo, donde se oxidan para generar energa. Los cidos grasos se introducen a las clulas por una protena de la membrana plasmtica, dicho proceso est ligado al transporte activo del sodio. Las clulas se diferencian mucho en su capacidad para transportar y utilizar los cidos grasos, por ejemplo, algunas clulas como las del cerebro y eritrocitos no pueden utilizar como combustible los cidos grasos, aunque otras como las del msculo cardiaco dependen de ellos para obtener una proporcin importante de la energa que necesitan. Una vez que entran a la clula, los cidos grasos se transportan a las mitocondrias, el retculo endoplsmico y otros orgnulos mediante varias protenas de unin a cidos grasos (protenas solubles en agua que unen y transportan cidos grasos hidrfobos). La mayora de los cidos grasos (endgenos y exgenos) se degradan para formar acetil-CoA dentro de las mitocondrias en un proceso denominado -oxidacin que tambin se lleva a cabo en los peroxisomas, aunque tambin existen otros mecanismos oxidativos para degradar determinados cidos grasos no estndar. Los cidos grasos se sintetizan cuando un organismo tiene cubiertas sus necesidades energticas y las concentraciones de nutrientes son elevadas. La glucosa y varios aminocidos son sustartos de la sntesis de los cidos grasos. Los cidos grasos se sintetizan a partir de la acetil-CoA en un proceso que es semejante a la inversa de la -oxidacin, conocido como -reduccin (McKee y McKee, 2003).

6.2.1. -oxidacin (catabolismo)


En presencia de O2, los cidos grasos se catabolizan a CO2 y H2O y aproximadamente el 40% de la energa libre generada en este proceso se almacena como adenosina trifosfato (ATP). El resto de la energa se libera en forma de calor. Esto se produce en el interior de la mitocondria mediante un proceso enzimtico conocido como -oxidacin (Montgomery et al., 1999). McKee y McKee (2003) explican que se denomina -oxidacin porque se oxida el carbono de los cidos grasos, que es el que se encuentra separado dos carbonos del grupo carboxilo. Durante la -oxidacin se eliminan de forma sucesiva fragmentos de dos tomos de carbono del cido graso en forma de acetil-CoA. El metabolismo del acetil-CoA a CO2 y H2O se produce en el ciclo de Krebs, que impulsa la formacin de ATP. El catabolismo del cido graso al estado de acetil-CoA se denomina va de la -oxidacin. En la -oxidacin, las unidades de acetilo son eliminadas del extremo carboxilo del cido graso. En una serie de reacciones se eliminan dos tomos de hidrgeno del tomo del carbono , el C3 en la cadena, y se forma un grupo ceto. Por tanto, es el tomo de carbono el que se oxida en este proceso (Montgomery et al., 1999). En la Figura 6.32 se presenta un esquema general de la -oxidacin, utilizando un cido graso con ocho tomos de carbono para este propsito. Aunque se generan cuatro unidades de acetil-CoA, slo se necesitan tres secuencias de -oxidacin, ya que la oxidacin final produce dos unidades de acetil-CoA. De forma anloga, la oxidacin de un cido graso de 16 tomos de carbono genera ocho unidades de acetil-CoA, pero slo se necesitan 7 ciclos de -oxidacin.
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Figura 6.32.

-oxidacin mitocondrial ilustrada con un acil-CoA de 8 carbonos

Fuente: Montgomery et al. (1999) Una nica secuencia de -oxidacin que produce 1 mol de acetil-CoA proporciona a la clula 5 moles de ATP. El primer paso de la va de la -oxidacin es la activacin del cido graso, es decir, la formacin del tioster de acil-CoA. La enzima que cataliza dicho proceso se denomina acil-CoA ligasa (Figura 6.33). Figura 6.33. Reaccin de activacin del cido graso

Fuente: Montgomery et al. (1999) En la frmula anterior se observa que el ATP se degrada a adenosina monofosfato (AMP) y pirofosfato y se forma un enlace tioster. El complejo aciladenilato (Figura 6.34) es un intermediario en la reaccin de la acil-CoA sintasa. Este intermediario, unido a la enzima, contiene un enlace de alta energa, el anhdrido acilfosfato, que impulsa la transferencia del grupo acilo a la CoA. Figura 6.34. Aciladenilato

Fuente: Montgomery et al. (1999) El pirofosfato que se forma en esta reaccin se hidroliza a dos moles de ion fosfato inorgnico (Pi) mediante la accin de la pirofosfatasa inorgnica, esta reaccin adicional es irreversible. Al menos estn presentes cinco acil-CoA ligasas diferentes: una ligasa de cadena corta que activa el acetato y el propionato, una ligasa de cadena media que activa los cidos grasos de 4 a 10 tomos de carbono, una ligasa de cadena larga que activa los cidos grasos de 12 a 18 tomos de carbono, una ligasa que es especfica para el cido araquidnico y una ligasa de cadena muy larga que acta sobre los cidos grasos de 24 y 26 tomos de carbono. Las ligasas de cadena corta y media se localizan en el retculo endoplsmico y las ligasas de cadena muy larga en los peroxisomas. En la matriz mitocondrial se encuentra un acil-coA ligasa unida a guanosina trifosfato (GTP). A diferencia de la ligasas unidas al
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ATP, los productos d ela reaccin del GTP son guanosina difosfato (GDP) y Pi, no guanosina monofosfato (GMP) ni pirofosfato, como lo muestra Montgomery et a . (1999) en la siguiente frmula:

La sintasa unida al GTP activa cualquier cido graso libre que se genere en el interior de la mitocondria. Los acil-CoA de cadena larga no pueden penetrar a travs de la membrana mitocondrial interna hacia la matriz mitocondrial, lugar de la -oxidacin de los cidos grasos. Para atravesar esta barrera, el grupo acilo se transfiere mediante transenterificacin desde la CoA a la carnitina, dicha reaccin est catalizada porla carnitina palmitoiltransferasa (CPT), pero la enzima no es especfica de la palmitoilCoA. La reaccin es reversible. Existen dos formas de la enzima: la CPT I que se localiza en la superficie externa de la membrana mitocondrial interna y que cataliza la transferencia del grupo acilo graso desde la CoA a la carnitina (Figura 6.35). Figura 6.35. Reaccin de transferencia del grupo acilo

Fuente: Montgomery et al. (1999) El grupo acilo atraviesa la membrana mitocondrial interna en forma de ster de acilcarnitina. La segunda forma de la enzima, CPT II, se localiza en la superficie de la matriz de la membrana mitocondrial interna. Cataliza la transferencia del grupo acilo graso desde la carnitina a la CoA presente en la matriz mitocondrial. Mediante estas reacciones el grupo acilo atraviesa la membrana mitocondrial interna hacia el lugar de la -oxidacin, la matriz mitocondrial (Figura 6.36). Al contrario de los cidos grasos de cadena larga, los cidos grasos de cadena corta o media no necesitan carnitina para entrar en la mitocondria. En el primer paso de deshidrogenacin, el dinucletido flavina adenina (FAD) se reduce y se forma un intermediario acil-CoA trans insaturado. El FADH2 transfiere un par de electrones a la flavoprotena de transferencia de electrones (FP2), que desplaza los electrones hacia la cadena respiratoria a nivel de la coenzima Q y genera dos ATP. El segundo paso consiste en la hidrtacin del enlace insaturado, con formacin de un L--hidroxiacil-CoA. La deshidrogenasa que cataliza la tercera reaccin reduce el NAD+, y el NADH formado transfiere un par de electrones a la cadena respiratoria, generando 3 ATP. El paso final, una reaccin catalizada por una tiolasa, forma acetil-CoA y un acil-CoA que tiene dos tomos de carbono menos que el acil-CoA original que se incorpor a la secuencia de la -oxidacin.
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Figura 6.36. Funcin de la carnitina en la transferencia de los cidos grasos a travs de la membrana mitocondrial interna. CPT, carnitina palmitoiltransferasa

Fuente: Montgomery et al. (1999) Una vez que el acil-CoA se encuentra en la matriz mitocondrial, se producen cuatro reacciones sucesivas, que junto con las enzimas que las catalizan se muestran en la Figura 6.37. Figura 6.37. Algunas reacciones de la -oxidacin

Fuente: Montgomery et al. (1999)


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El acil-CoA ms corto que se genera vuelve a entrar en el ciclo de la -oxidacin y el proceso se repite hasta que la cadena completa se degrada a acetil-CoA. Por tanto, puede considerarse que estas reacciones constituyen un ciclo de -oxidacin (Figura 6.38). Figura 6.38. Ciclo de la -oxidacin mitocondrial de los cidos grasos

Fuente: Montgomery et al. (1999) Existen tres situaciones en las que se necesitan reacciones auxiliares para llevar a cabo la secuencia de -oxidacin. Son la oxidacin de cidos monoinsaturados, de cidos poliinsaturados y de cidos grasos con un nmero impar de tomos de carbono. La -oxidacin mitocondrial de los cidos grasos es una de las vas principales de obtencin de energa celular. Existen cuatro pasos en los que la energa se utiliza o se capta. Dichos pasos se muestran tomando como ejemplo la oxidacin completa del cido palmtico (cido graso saturado de 16 tomos de carbono) (Figura 6.39). Se necesitan dos enlaces fosfato de alta energa para activar el grupo palmitato. En el ciclo de la oxidacin, el palmitil-CoA sufre 7 -oxidaciones y cada una produce 5 ATP. Se forman 12 enlaces fosfato de alta energa adicional cuando se oxida cada una de las 8 unidades de acetil-CoA en el ciclo de Krebs. En realidad se forman 11 ATP y 1 GTP, pero ya que el GTP y ATP son energticamente equivalentes, pueden considerarse como 12 ATP. La oxidacin de las 8 unidades de acetil-CoA genera 96 ATP. El rendimiento total de ATP de la -oxidacin y el ciclo de Krebs es de 131. Dado que se utilizaron dos enlaces de alta energa en el primer paso, el rendimiento neto es de 129. Esto representa aproximadamente el 40 % de la energa contenida en el cido palmtico y el resto de la energa contribuye al mantenimiento de la temperatura corporal.

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Figura 6.39. Oxidacin completa del cido palmtico

Fuente: Champe et al. (2006) Algunos cidos grasos se oxidan siguiendo otras vas, como la -oxidacin en donde slo se elimina el tomo de carbono carboxlico, siendo un proceso peroxismico que utiliza NAD+ y ascorbato. El intermediario es un -hidroxicido graso. La -oxidacin tambin tiene lugar en los peroxisomas, que son unos orgnulos rodeados de membranas y estn implicados en los procesos oxidativos. Existen varias diferencias entre la oxidacin peroxismica y la mitocondrial. La va peroxismica oxida principalmente cidos grasos de 20 a 26 tomos de carbono, de cadena ramificada o hidroxilados y el acil-CoA graso no tiene que convertirse en un derivado de la carnitina para entrar en el peroxisoma, en esta va los cidos grasos pasan slo por uno o dos ciclos de -oxidacin, formando acetil-CoA y un acil-CoA de cadena ms corta, en lugar de degradarse completamente a acetil-CoA, el proceso peroxismico no genera enlaces de alta energa y las enzimas son diferentes ya que el FADH2 formado en la primera oxidacin es oxidado por el oxgeno para formar perxido de hidrgeno. Las reacciones segunda y tercera se llevan a cabo por una sola enzima que se denomina enzima bifuncional o trifuncional (Montgomery et al., 1999). En la Figura 6.40 se muestra una visin general de la ruta de oxidacin de los cidos grasos donde una acil-CoA saturada de 16 carbonos (palmitoil-CoA) sufre siete ciclos de oxidacin para dar 8 molculas de acetil-CoA.

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Figura 6.40. Visin general de la ruta de oxidacin de los cidos grasos

Fuente: Mathews et al, (2005)

6.2.2. Cuerpos cetnicos


Las mitocondrias del hgado tienen la capacidad de convertir a la acetil-CoA derivada del catabolismo de aminocidos, carbohidratos y cidos grasos en cuerpos cetnicos. Los compuestos considerados cuerpos cetnicos son acetoacetato, 3-hidroxibutirato y acetona. Acetoacetato y 3-hidroxibutirato se transportan en la sangre hasta los tejidos perifricos. Ellos se pueden reconvertir en acetil-CoA, que a continuacin puede oxidarse en el ciclo del cido tricarboxlico. Los cuerpos cetnicos son fuentes importantes de energa para los tejidos perifricos porque son solubles en agua y por ende no necesitan incorporarse en lipoprotenas o ser transportados por la albmina como sucede con otros lpidos, se producen en el hgado durante perodos en los que la cantidad de acetil-CoA presente excede a la capacidad oxidativa del hgado y los emplean en proporcin con su concentracin sangunea los tejidos extrahepticos, como el msculo esqueltico y cardiaco y la corteza suprarrenal (Figura 6.41). Incluso
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el cerebro puede emplear a los cuerpos cetnicos para satisfacer sus necesidades energticas si sus concentraciones sanguneas se incrementan lo suficiente. Figura 6.41. Sntesis de cuerpo cetnicos en el hgado y su empleo en los tejidos perifricos

Fuente: Champe et al. (2006) Durante el ayuno el hgado se ve inundado por cidos grasos movilizados desde el tejido adiposo. La acetil-Coa heptica elevada resultante producida primordialmente por la degradacin de cidos grasos inhibe a la deshidrogenasa de piruvato y activa a la carboxilasa de piruvato. El hgado emplea el oxalacetato producido de esta manera para la gluconeognesis ms que para el ciclo de Krebs, por este motivo, la acetil-CoA se enva a la sntesis de cuerpos cetnicos. La primera etapa sinttica es la formacin de la acetoacetil-CoA que ocurre por inversin de la reaccin de tiolasa de la oxidacin de los cidos grasos. La sintasa de 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) combina a una tercera molcula de acetil-CoA con acetoacetil-CoA para producir HMGCoA, que tambin es una precursora del colesterol. Estas vas estn separadas por la localizacin en la clula y las condiciones de sta. La sintasa de HMG-CoA es la etapa limitante del ritmo en la sntesis de cuerpos cetnicos, y se encuentra en cantidades importantes slo en el hgado (Figura 6.42). La HMG-CoA se segmenta para que se produzca acetoacetato y acetil-CoA. El acetoacetato se puede reducir para formar 3-hidroxibutirato, con NADH como donador de hidrgeno. El acetoacetato tambin puede descarborxilarse de manera espontnea en la sangre para formar acetona, compuesto voltil no biolgicamente metabolizado que se puede eliminar con el aliento. Aunque el hgado sintetiza constantemente cuerpos cetnicos en concentraciones bajas, su produccin se vuelve mucho ms importante durante el ayuno, perodo en el que se necesitan para brindar energa a los tejidos perifricos. La deshidrogenasa de 3-hidroxibutirato oxida a ste hasta acetoacetato, con produccin de NADH. A continuacin se dispone de acetoacetato con una molcula de coenzima A que la transferasa de succinil-CoA:acetoacetato-CoA (tioforasa) toma de la succinil-CoA. Esta reaccin es reversible, pero el producto, acetoacetil-CoA, se remueve activamente por su conversin en dos molculas de acetil-CoA. Los tejidos extrahepticos, entre ellos el cerebral, oxidan con eficiencia el acetoacetato y 3-hidroxibutirato. En contraste, aunque el hgado produce activamente cuerpos cetnicos, carece de tioforasa, por lo que no puede emplear como combustible a los cuerpo cetnicos (Champe et al., 2006).

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En la Figura 6.43 se observa a la acetil-CoA como intermediario clave entre el metabolismo de las grasas y de los carbohidratos. Figura 6.42. Biosntesis de los cuerpos cetnicos en el hgado

Fuente: Mathews et al. (2005)

6.2.3. Sntesis de cidos grasos (-reduccin) y triglicridos


Entre los componentes obligatorios de la dieta hay un pequeo grupo de cidos grasos poliinsaturados, los cidos grasos esenciales que el organismo no puede sintetizarlos. El resto de los cidos grasos, saturados o insaturados, s pueden ser sintetizados en las clulas de los mamferos (Lozano et al., 2000).

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Figura 6.43. Papel clave de la acetil-CoA

Fuente: Mathews et al. (2005) En condiciones de alta disponibilidad de ATP, de acetil-CoA, o de ambos, y de baja velocidad del ciclo de Krebs, se sintetizan los cidos grasos, siendo la fuente de carbono para ello la acetil-CoA, que puede proceder de los aminocidos cetgenos, de la oxidacin de los cidos grasos o de los carbohidratos. Esta acetil-CoA se forma en las mitocondrias o en los peroxisomas, mientras que el sistema enzimtico de la sntesis de cidos grasos, la sintasa se cidos grasos o palmitato sintasa, es citoplasmtica. Como no hay transportadores de acil-CoA en la membrana mitocondrial, para que el precursor salga al citoplasma se necesita un sistema de lanzadera. Cuando baja el nivel celular de ATP, se desbloquea el ciclo de Krebs y se paraliza la salida de citrato al citoplasma. Para regular la sntesis de cidos grasos de manera independiente de la -oxidacin, la molcula clave no es la acetil-CoA sino la malonil-CoA. Antes de que acte el complejo sintasa de cidos grasos, acta una enzima, la acetilCoA carboxilasa, que cataliza la conversin de acetil-CoA en malonil-CoA. Esta enzima ser la que regule el funcionamiento del proceso global. La reaccin que cataliza se muestra en la Figura 6.44 Figura 6.44. Reaccin catalizada por la acetil-CoA carboxilasa

Fuente: McKee y McKee (2003) La enzima puede encontrarse en dos formas: la activa es un agregado molecular de peso molecular elevado asociado a unas 20 molculas de biotina y la forma menos activa es de menor tamao, con slo una biotina. El paso de una a otra forma est controlado por metabolitos que intervienen en el proceso, y constituye la clave de la regulacin del proceso. La sntesis de cidos grasos, ms concretamente del palmitoilCoA, a partir de malonilCoA y acetilCoA est catalizada, en mamferos, por el sistema multienzimtico cido graso sintasa, integrado por siete actividades enzimticas y una protena sin actividad cataltica, la protena transportadora de acilos (PTA o ACP) dotada con un grupo captador de acilos, la 4-fosfopantena, tambin presente en la coenzima A, que se comportan como un largo brazo mvil, a cuyo extremo, y gracias a su grupo tiol, permanece unido durante todo el proceso el grupo
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acilo en crecimiento, al que transporta hacia los centros activos de las diferentes actividades enzimticas cuando es preciso, aumentando as la eficacia del sistema, as, los precursores, en mamferos, entran al complejo y no lo dejan hasta haberse convertido en palmitoilCoA (Figura 6.45). Figura 6.45. Biosntesis de los cidos grasos

Fuente: McKee y McKee (2003) Durante la primera reaccin de la sntesis de los cidos grasos, la acetil transacilasa cataliza la transferencia del grupo acetilo desde una molcula de acetil-CoA al grupo SH de un residuo de cistena de la -cetoacil-ACP sintasa. Se forma malonil ACP cuando la malonil transacilasa transfiere un grupo malonilo desde la malonil-CoA al grupo SH del grupo prosttico pantetena del ACP en la que se forma acetoacetil-ACP.

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Durante los tres pasos siguientes, que consisten en dos reducciones y una deshidratacin, el grupo acetoacetilo se convierte en grupo butirilo. El brazo flexible fosfopantena acta como una atadura para que el sustrato no difunda lejos entre los pasos del ciclo. Esto incrementa mucho la velocidad y eficacia del proceso. La -cetoacil-ACP reductasa cataliza la reduccin de la acetoacetil-ACP para formar hidroxibutiril-ACP. La -hidroxiacil-ACP deshidrasa cataliza posteriormente una deshidratacin, formando as crotonil-CoA. La butiril-ACP se produce cuando la 2,3, trans-enoil-ACP reductasa reduce el doble enlace de la crotonil-ACP. En el ltimo paso del primer ciclo de la sntesis de los cidos grasos, se transfiere el grupo butirilo desde el grupo pantetena al residuo de cistena de la -cetoacilACP sintasa. El grupo ACP-SH recin liberado une ahora otro grupo malonilo y se repite el proceso. Finalmente, se sintetiza la palmitoil-ACP. Ahora se libera el grupo palmitoilo de la cido graso sintasa cuando la tioesterasa lo convierte en palmitato. La elongacin y desaturacin de los cidos grasos que se sintetizan en el citoplasma o de los obtenidos en la alimentacin se realizan principalmente por enzimas del RE. La elongacin y la desaturacin (formacin de dobles enlaces) de los cidos grasos son especialmente importantes en la regulacin de la fluidez de la membrana y de la sntesis de los precursores de diversos derivados de los cidos grasos, como los eicosanoides. La elongacin de los cidos grasos en el RE, que utiliza unidades de dos carbonos que proporciona la malonil-CoA, es un ciclo de reacciones de condensacin, reduccin, deshidratacin y reduccin semejante al que se observa en la sntesis citoplsmica de los cidos grasos. Al contrario que en el proceso citoplsmico, los intermediarios del proceso de elongacin del RE son steres de CoA. Estas reacciones pueden alargar cidos grasos tanto saturados como insaturados. Los equivalentes reductores los proporciona el NADPH:

Las molculas de acil-CoA se desaturan en las membranas del RE en presencia de NADH y O2. Todos los componentes del sistema desaturasa son protenas integrales de membrana que aparentemente estn distribuidas al azar sobre la cara citoplsmica del RE. La asociacin de la citocromo b5 reductasa (una flavoprotena), el citocromo b5 y las desaturasas dependientes del oxgeno constituyen un sistema de transporte electrnico. Este sistema introduce de forma eficaz dobles enlaces en los cidos grasos de cadena larga. Tanto la flavopotena como el citocromo b5, que se encuentran en una proporcin aproximada de 1:30, tienen pptidos hidrfobos que anclan las protenas a la membrana microsmica. Los animales tienen de forma caracterstica desaturasas 9, 6 5 que utilizan los electrones que aporta el NADH por el sistema de transporte electrnico para activar el oxgeno necesario para crear el doble enlace. Debido a que los sistemas de elongacin y desaturacin estn prximos uno del otro en la membrana microsmica, se producen diversos cidos poliinsaturados de cadena larga. Un ejemplo destacado de esta interaccin es la sntesis del cido araquidnico (20:4 5,8,11,14) a partir del cido linoleico (18:2 9,12)

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Por razones complejas, el alargamiento del acilo no contina despus de que se alcancen los 16 tomos de carbono. El caso es que, llegando a este punto, se libera la molcula de palmitato, que mediante una actividad de tipo acilCoA sintetasa, es convertida en palmitoilCoA, el producto final de la actividad del complejo cido graso sintasa. Si se suman paso a paso todos los que son necesarios para alcanzar una molcula de palmitoilCoA, el balance sera:

La regulacin de este proceso de sntesis se hace por la accin de metabolitos cuya presencia es una seal de la disponibilidad, o no, de la clula para invertir ATP en fabricar cidos grasos. Como la acetilCoA carboxilasa tiene dos formas, una ms activa que la otra, el desplazamiento del equilibrio entre ambas constituye el principal mecanismo de regulacin, ya que esta enzima es la fuente de aprovisionamiento de malonilCoA, el principal suministrador de carbonos para la cido graso sintasa. El citrato, cuyo nivel citoplasmtico es una seal del estado energtico celular y, por tanto, de la existencia de remanentes para la sntesis de cidos grasos, es el principal inductor de la transformacin de la forma monomrica, menos activa, de acetil-CoA carboxilasa a la polimrica, ms activa. PalmitoilCoA y la propia malonilCoA, por el contrario, son desagregadoras de la enzima y, por tanto, inhiben la sntesis. As, el citrato es fundamental para la sntesis de cidos grasos porque puede salir de la mitocondria por el transportador de tricarboxilatos de la membrana interna mitocondrial, el citrato puede convertirse en acetilCoA por la citrato liasa citoplsmica y el citrato induce la activacin de la enzima que controla el proceso de sntesis de cidos grasos, la acetilCoA carboxilasa. Los mamferos no slo pueden sintetizar cido palmtico, sus clulas disponen de sistemas de elongacin de cadena de cidos grasos que permiten alargarla hasta C18, en el caso de los cidos grasos saturados, y hasta C26, en el de los insaturados. Tambin tienen sistemas enzimticos denominados desaturasas de cidos grasos, reductasas que introducen dobles enlaces cis en tres posiciones diferentes de la cadena (5 6 y 9 desaturasas). Sin embargo no se pueden introducir dobles enlaces en posiciones posteriores a C9. Por ello, los cidos grasos insaturados con dobles enlaces en posiciones posteriores al carbono 9 no pueden ser sintetizados por los mamferos y deben ser ingeridos en la dieta, de ah su carcter de esenciales. Las grasas o triacilgliceroles (TAG) se sintetizan en casi todos los tejidos de los mamferos, mxime en el hgado y el tejido adiposo, cuando las condiciones energticas son favorables, ya que son las molculas ms adecuadas para almacenar energa por su hidrofobia. No slo los lpidos en exceso sino los carbohidratos y buena parte de los aminocidos en exceso pueden convertirse en TAG si las circunstancias lo permiten. En el hgado, los TAG se incorporan a la formacin de lipoprotenas, mxime VLDL (lipoprotenas de muy baja densidad que son transportadores de los TAG, mientras que las lipoprotenas de baja densidad, LDL, y las lipoprotenas de alta densidad, HDL, lo son de los steres de colesterol), lo que les permite salir a la sangre y ser transportados hasta los tejidos consumidores de cidos grasos, mientras que los TAG del tejido adiposo se depositan all como reserva hasta que se movilizan.

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Los cidos grasos que se emplean para la sntesis de TAG, procedentes de la dieta o sintetizados en el tejido, deben ser activados a acilCoA; el otro sustrato, el glicerol, puede proceder de los TAG previamente hidrolizados o de intermediarios de la gliclisis, y tambin debe activarse previamente a glicerolfosfato (Figura 6.46) (Lozano et al., 2000). Figura 6.46. Principales rutas de biosntesis de triacilglicerol en mamferos

Fuente: Lozano et al. (2000) En la Figura 6.47 se observa que la sntesis de una molcula de triacilglicrido a partir de glicerol fosfato y acil-CoA abarca cuatro reacciones que consisten en la aadidura secuencial de dos cidos grasos provenientes de la acil, remocin de fosfato y aadidura de un tercer cido graso (Champe et al., 2006). En el intestino, la sntesis de TAG, destinados tanto para el uso en ese tejido como al paso a la sangre de los lpidos de la dieta, en forma de quilomicrones, se hace a partir del producto mayoritario de la digestin de las grasas, el 2-monoacilglicerol (2-MAG). Un porcentaje muy alto de los TAG tiene un cido graso saturado (palmtico o esterico) en el carbono 1 del glicerol, mientras que los carbonos 2 y 3 suele haber uno insaturado, casi siempre oleico (9C18:1). El equilibrio entre la grasa depositada y movilizada est regulado hormonalmente; no obstante, hay ocasiones en que se producen descontroles en la ingestin de compuestos de carcter lipdico, o en la regulacin hormonal, y el equilibrio puede inclinarse hacia alguno de los extremos (Lozano et al., 2000).

6.2.4. Sntesis del colesterol


El colesterol que se utiliza en todo el organismo procede de dos fuentes: la alimentacin y la sntesis de novo. Cuando la alimentacin aporta suficiente colesterol, la sntesis de esta molcula est inhibida. El colesterol que proporcionan las LDL inhibe la sntesis de colesterol. La biosntesis de colesterol se estimula cuando la alimentacin tiene poco colesterol. El colesterol se utiliza como componente de la

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membrana celular y para la sntesis de metabolitos importantes. Un mecanismo fundamental para eliminar el colesterol es la conversin en cidos biliares. Figura 6.47. Sntesis de triacilglicerol

Fuente: Champe et al. (2006) Aunque todos los tejidos pueden sintetizar colesterol (por ejemplo, glndulas suprarrenales, ovarios, testculos, piel e intestino), la mayora de las molculas de colesterol se sintetizan en el hgado. La sntesis de colesterol puede dividirse en tres fases, segn McKee y McKee (2003): Formacin de HMG-CoA (-hidroxi- -metilglutaril-CoA) a partir de acetil-CoA, Conversin de HMG-CoA en escualeno, y Conversin de escualeno en colesterol.

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La primera fase de sntesis de colesterol es un proceso citoplsmico y consiste en la condensacin de dos molculas de acetil-CoA para formar -cetobutiril-CoA o tambin llamado acetoacetil-CoA, reaccin catalizada por la tiolasa:

En la reaccin siguiente, la -cetobutiril-CoA se condensa con otra molcula de acetil-CoA para formar la HMG-CoA. Esta reaccin la cataliza la -hidroxi- -metilglutaril-CoA sintasa (McKee y McKee, 2003). La segunda fase de la sntesis de colesterol comienza con la reduccin de la HMG-CoA para formar mevalonato. El agente reductor es el NADPH. La HMG-CoA reductasa que cataliza la ltima reaccin es el paso limitante de la velocidad de la sntesis de colesterol. Una acumulacin de colesterol en la clula, bien sea por sntesis endgena o bien por la captacin y degradacin de las LDL, reduce la actividad de la HMG-CoA reductasa de dos maneras: inhibe la sntesis de HMG-CoA reductasa y aumenta la degradacin de la enzima que ya existe. La actividad y la concentracin celular de la HMG-CoA reductasa, que se sita en la cara citoplasmtica del retculo endoplsmico, estn afectadas en varios grados por la concentracin de productos intermediarios de la ruta (por ejemplo: mevalonato, farnesol, escualeno y 7deshidrocolesterol). Sin embargo, permanece an por resolver el mecanismo preciso por el que se regula esta enzima estratgicamente situada. En un conjunto de reacciones citoplsmicas, el mevalonato se convierte a continuacin en farnesil pirofosfato. La mevalonato quinasa cataliza la sntesis de fosfomevalonato. Una segunda reaccin de fosforilacin que cataliza la fosfomevalonato quinasa da lugar al 5-pirofosfomevalonato. La solubilidad en el citoplasma de estas molculas hidrocarbonadas se incrementa de forma significativa por las reacciones de fosforilacin. El 5-pirofosfomevalonato se convierte en isopentenil pirofosfato en un proceso en el que hay una descarboxilacin y una deshidratacin: El isopentil pirofosfato a continuacin se transforma en su ismero dimetilalil pirofosfato por la isopentil pirofosfato isomerasa. El geranil pirofosfato se produce durante una reaccin de condensacin entre el isopentenil pirofosfato y el dimetilalil pirofosfato. El pirofosfato tambin es un producto de esta reaccin y de dos reacciones siguientes. En las reacciones en las que se libera pirofosfato son irreversibles por la posterior hidrlisis del pirofosfato. La geranil transferasa cataliza la reaccin de condensacin entre el geranil pirofosfato y el isopentenil pirofosfato que da lugar al farnesil pirofosfato. El escualeno se sintetiza cuando la farnesil transferasa (enzima microsmica tambin llamada escualeno sintasa) cataliza la condensacin de dos molculas de farnesil pirofosfato. Esta reaccin requiere de NADPH como donador de electrones. La ltima fase de la ruta de biosntesis de colesterol comienza con la unin del escualeno a una protena transportadora citoplsmica especfica que se denomina protena transportadora de esteroles. La conversin del escualeno en lanosterol tiene lugar con el intermediario unido a esta protena. Las
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actividades enzimticas que se requieren para la formacin del epxido dependiente del oxgeno (escualeno monooxigenasa) y laposterior ciclacin (2,3-oxidoescualeno lanosterol ciclasa) que dan lugar a la sntesis de lanosterol se encuentran en los microsomas. La escualeno monooxigenasa requiere para su actividad NADPH y FAD. Tras su sntesis, el lanosterol se une a una segunda protena transportadora, a la que permanece unido durante las reacciones restantes. Todas las actividades enzimticas que catalizan las 20 reacciones restantes necesarias para convertir el lanosterol en colesterol estn embebidas en las membranas microsmicas. Es un conjunto de transformaciones que utilizan el NADPH y el oxgeno, el lanosterol se convierte en 7-deshidrocolesterol que posteriormente se reduce por el NADPH para formar colesterol (Figura 6.48) (McKee y McKee, 2003). Figura 6.48. Sntesis de colesterol a partir del escualeno

Fuente: McKee y McKee (2003)

6.2.5. Sntesis de hormonas esteroidales


El colesterol es el precursor de todas las hormonas esteroideas y de las sales biliares. El metabolismo de los esteroides es muy complejo y todava comprendido de forma incompleta. Diversas clulas y orgnulos figuran de forma destacada en la produccin y procesado de estas potentes sustancias. La reaccin inicial de la sntesis de hormonas esteroideas que es la conversin del colesterol en
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pregnenolona est catalizada por la desmolasa, una enzima mitocondrial. La desmolasa es un complejo enzimtico formado por dos hidrolasas, una de las cuales es una enzima citocromo P450 que participa en reacciones del metabolismo de los esteroides y de los xenobiticos. Tras su sntesis, la pregnenolona se transporta al retculo endoplsmico, donde se convierte en progesterona (Figura 6.49). La pregnenolona y la progesterona son precursores de las dems hormonas esteroideas. Figura 6.49. Sntesis de progesterona

Fuente: McKee y McKee (2003) Adems de su funcin precursora (Figura 6.50), la progesterona acta como una hormona. Su papel hormonal principal es la regulacin de diversos cambios fisiolgicos del tero. Durante el ciclo estral, la progesterona se produce en clulas especializadas del ovario. Durante el embarazo, la progesterona, que produce la placenta en grandes cantidades, impide las contracciones de la musculatura lisa, evitando la expulsin del feto. Las cantidades y los tipos de esteroides que se sintetizan en un tejido especfico estn cuidadosamente regulados. Las clulas de cada tejido se programan durante el desarrollo embrionario y fetal para responder a las seales qumicas induciendo la sntesis de un conjunto singular de enzimas especficas. Las seales qumicas ms importantes que actualmente se piensa influyen sobre el metabolismo de los esteroides son las hormonas peptdicas que segrega la hipfisis y diversas prostaglandinas

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Figura 6.50. Sntesis de esteroides seleccionados

Fuente: McKee y McKee (2003) Los procesos enzimticos por los que el colesterol se convierte en esteroides con actividad biolgica, as como los medios por los que se inactivan los esteroides y se preparan para su eliminacin, constituyen un mecanismo complejo que se denomina biotransformacin. El colesterol y otros esteroides no pueden degradarse a molculas ms pequeas sino que se convierten en derivados cuya mayor solubilidad permite su eleiminacin. El mecanismo ms importante para degradar y eliminar el colesterol es la sntesis de cidos biliares que tiene lugar en el hgado (McKee y McKee, 2003).

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6.2.6. Modelo del mosaico fluido y su importancia en los procesos de transporte


Las membranas de las clulas vivas son pedazos muy notables de arquitectura molecular con funciones mltiples y variadas dentro de las cuales se encuentran: lmite de clulas individuales, lmite de organelos intracelulares, adhesin intercelular, intercambio gaseoso, marco estructural para enzimas y receptores, difusin facilitada de azcares y aminocidos, permeabilidad selectiva a iones, transmisin de la excitacin, secrecin, motilidad y formacin de estructuras especializadas como desmosomas (Laguna y Pia, 2002). La afirmacin de que una membrana es esencialmente una bicapa de fosfolpidos constituye una simplificacin excesiva. Ciertamente, la bicapa de fosfolpidos constituye la estructura bsica, pero en las membranas plasmticas de las clulas hay mucho ms (Cuadro 6.6) (Mathews et al., 2005). Cuadro 6.6. Composicin qumica de algunas membranas celulares

Membranas
Membrana plasmtica de los eritrocitos humanos Membrana plasmtica de los hepatocitos de ratn Membrana polasmtica de la ameba Membrana mitoconsrial interna Membrana lamelar del cloroplasto de la espinaca Membrana prpura de Halobacteria

Protenas Lpidos % %
49 46 54 76 70 75

Carbohidratos %

43 8 54 2-4 42 4 24 1-2 30 6 25 0 Fuente: McKee y McKee (2003) La membrana consiste en una capa bimolecular de lpidos con protenas insertadas en ella o unidas en ambas superficies. Las protenas integrales de la membrana estn firmemente adheridas a las capas de lpidos. Algunas de estas protenas estn dentro de la bicapa y se les conoce como protenas transmembranales, mientras que otras estn adheridas en las hojas externa o interna de la bicapa lipdica. Las protenas perifricas estn laxamente unidas a la superficie externa o interna de la membrana. Muchas de las protenas y lpidos tienen cadenas de oligosacridos externamente expuestas (Murray et al., 2001). Las protenas integrales intervienen con frecuencia en la transmisin de sustancias especficas o seales qumicas a travs de la membrana. Toda la membrana es un mosaico de lpidos y protenas, muchos de los cuales estn en constante movimiento. Los lados de la bicapa suelen ser diferentes, tanto en su composicin lipdica como en la colocacin y orientacin de las protenas y los oligosacridos. La mayor parte del conocimiento actual sobre las membranas biolgicas se basa en el modelo de mosaico fluido propuesto por Singer y Nicholson en 1972 (Figura 6.51). Una clula o un orgnulo no pueden estar totalmente abiertos ni totalmente cerrados a su entorno. Su interior debe estar protegido frente a determinados compuestos txicos y, sin embargo, es preciso que se capten metabolitos y se eliminen productos de desecho. Dado que la clula debe de manejar miles de sustancias, no es de extraar que gran parte de la compleja estructura de las membranas est dedicada a la regulacin del transporte. Las tres categoras de transporte: pasivo, facilitado y activo, son muy diferentes y en general sirven a propsitos distintos en la clula. El transporte pasivo o difusin pasiva o simple se realiza mediante el movimiento aleatorio de las molculas a travs de las membranas. El transporte pasivo conduce en ltima instancia a que la
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concentracin libre de sustancia que se difunde sea la misma a ambos lados de la membrana (Figura 6.52) (Mathews et al., 2005). Figura 6.51. Estructura de la membrana celular caracterstica. Modelo de mosaico fluido

Fuente: Mathews et al, (2005) En la Figura 6.52 se observa que en el tiempo t, una cuarta parte de las molculas presentes a un lado de la membrana semipermeable han difundido al otro lado por el movimiento trmico aleatorio, finalmente se alcanza el equilibrio (McKee y McKee, 2003). Figura 6.52. Difusin pasiva o simple

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Para muchas sustancias, el transporte lento que proporciona la difusin pasiva es simplemente insuficiente para las necesidades funcionales y metablicas de las clulas, y es preciso que haya otros medios para aumentar las tasas de transporte; hay dos tipos generales de transporte facilitado, un tipo usa poros formados por protenas transmembrana (Figura 6.53 a), el otro tipo se produce a travs de molculas portadoras transmembrana (Figura 6.53 b) (Mathews et al., 2005). Figura 6.53. Mecanismos principales de transporte facilitado

Fuente: Mathews et al. (2005) El transporte activo es cuando se transportan sustancias en contra de gradientes de concentracin, incluso en gradientes muy desfavorables y es necesaria una fuente de energa libre de algn tipo que generalmente procede de la hidrlisis del ATP. Se considera que globalmente la mayor parte de las clulas gastan el 25% de su ATP en este tipo de transporte (Mathews et al., 2005). Las dos formas de transporte activo son el primario (como la bomba Na+-K+ o Na+-K+ ATPasa) donde el ATP proporciona la energa, por ejemplo, las enzimas transmembrana que hidrolizan el ATP usan la energa procedente del ATP para impulsar el transporte de iones o molculas, y el transporte activo secundario donde el gradiente de concentracin que genera el transporte activo primario se acopla para mover sustancias a travs de las membranas, por ejemplo, el gradiente de Na+ creado por la bomba Na+-K+ ATPasa se utiliza en las clulas tubulares renales y las clulas intestinales para transportar la Dglucosa (Figura 6.54) (McKee y McKee, 2003).

6.2.7. Integracin del metabolismo de lpidos con el de carbohidratos


Muchos de los principales alimentos se pueden interconvertir (Figura 6.55, Figura 6.56, Figura 6.57). Los carbohidratos se convierten a cidos grasos por medio de la reaccin de la piruvato deshidrogenasa, siendo esta reaccin irreversible. Tampoco puede acontecer una conversin total de la acetil-CoA a glucosa a travs del ciclo de Krebs, ya que se consume una molcula de oxaloacetato por cada molcula de ste convertida en glucosa.
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Figura 6.54. La Na+-K+ ATPasa y el transporte de glucosa

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 6.55. Interconversin de los principales alimentos

Fuente: Murray et al. (2001)


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Figura 6.56. Interrelaciones metablicas entre tejido adiposo, hgado y tejidos extrahepticos

Fuente: Murray et al. (2001)

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Figura 6.57. Visin general del metabolismo

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Los carbohidratos y los lpidos tienen funciones estructurales y metablicas. La regulacin de este flujo de combustible y la forma en que se integra con otros combustibles tisulares son de inters bsico, ya que afectan otros procesos metablicos. Con un balance calrico positivo, una proporcin importante de la energa de los alimentos consumidos, se almacena como glucgeno o como grasa en el tejido adiposo. Si la dieta consta principalmente de carbohidratos, la glucosa constituye el principal combustible tisular. Sin embargo, en algunos tejidos, incluso con una alimentacin adecuada, los cidos grasos se oxidan con preferencia sobre la glucosa, pero en particular bajo condiciones de dficit calrico o ayuno. El propsito es ahorrar glucosa para los tejidos como el encfalo y los eritrocitos que la requieren en todas circunstancias. Muchos de los esqueletos de carbono de los aminocidos no esenciales se pueden producir a partir de los carbohidratos mediante el ciclo de Krebs y la transaminacin. La inversin de este proceso permite que los aminocidos glucognicos ingresen a la va de la gluconeognesis. Durante la inanicin, los cidos grasos libres y los cuerpos cetnicos se oxidan con preferencia sobre la glucosa, la cual se ahorra para los tejidos que, como el encfalo, lo requieren permanentemente. Esto se logra mediante la inhibicin de la fosfofructocinasa y de lapiruvato deshidrogenasa. Este efecto, acoplado a la inhibicin de la movilizacin de los cidos grasos libres en el tejido adiposo a cargo de la glucosa ahorrada, se denomina ciclo glucosa-cido graso (Murray et al., 2001)

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7. cidos nucleicos y metabolismo nitrogenado


Las dos formas de cidos nucleicos son ADN (cido desoxirribonucleico) y ARN (cido ribonucleico). Las molculas de ADN son largos polmeros hechos de cuatro unidades de mononucletidos diferentes que son adenina, timina, guanina y citosina. El ADN es el material gentico de las clulas. El ARN tiene un papel importante en la transferencia de la informacin gentica del ADN a las protenas. El ARN es el material gentico de algunos virus y tambin es un polmero formado por cuatro unidades diferentes de mononucletidos que son adenina, uracilo, guanina y citosina (Roskoski, 2001). El nitrgeno se encuentra es una enorme cantidad de biomolculas. Entre los ejemplos de los metabolitos nitrogenados principales se incluyen los aminocidos, las bases nitrogenadas, las porfirinas y varios lpidos. En el metabolismo de algunos organismos eucariotas las aminas bigenas y el glutatin son compuestos nitrogenados que se requieren en cantidades pequeas. La incorporacin del nitrgeno a las molculas orgnicas comienza con la fijacin (reduccin) del gas nitrgeno (N2) por los microorganismos procariotas como el Rhizobium que se encuentran en las races de determinadas plantas, otros organismos fijadores de nitrgeno se encuentran en las aguas marinas y dulces, en manantiales de aguas termales o en los intestinos de ciertos animales. Los vegetales como el maz dependen de la absorcin de NH3 y NO3- que se sintetizan por las bacterias del suelo o que se suministran en los fertilizantes artificiales. Debido a que normalmente las plantas disponen de poco nitrgeno fijado, el aporte de nitrgeno es con frecuencia el factor limitante del crecimiento y desarrollo de la planta. Sea como sea, la forma en que las plantas adquieren NH3, por fijacin de nitrgeno, por absorcin del suelo o por reduccin del NO3- absorbido, el NH3 se asimila por su conversin en el grupo amida de la glutamina. Posteriormente este nitrgeno orgnico se transfiere a otros compuestos carbonados para producir los aminocidos que utiliza la planta para sintetizar las molculas nitrogenadas como protenas, nucletidos y hemo. El nitrgeno orgnico, principalmente en forma de aminocidos, fluye luego por todo el ecosistema cuando los animales y los microorganismo de descomposicin consumen las plantas. El complejo proceso que transfiere el nitrgeno por el mundo vivo se denomina ciclo del nitrgeno. Los organismos distintos de los vegetales varan en su capacidad para sintetizar los aminocidos a partir de intermediarios metablicos y del nitrgeno fijado. Por ejemplo, muchos microorganismos pueden producir todos los aminocidos que necesitan. Por el contrario, los animales slo pueden sintetizar alrededor de la mitad de los aminocidos que requieren (McKee y McKee, 2003).

7.1.

Metabolismo nitrogenado (aminocidos y protenas)

El metabolismo nitrogenado incluye protenas y aminocidos, as como muchos otros compuestos importantes que se pueden considerar derivados de los aminocidos: bases purnicas y pirimidnicas (constituyentes de nucletidos, coenzimas y cidos nucleicos), hemo y molculas relacionadas, poliaminas, creatina, diversos neurotransmisores y hormonas, pigmentos melnicos, etc. El esqueleto carbonado aminoacdico puede servir de punto de partida, dependiendo las vas particulares de cada caso, en la obtencin de cidos grasos, grasas y esteroides o como punto de partida gluconeognico, ayudando, en este supuesto, al aporte necesario de glucosa al cerebro en condiciones en que las existencias del carbohidrato sean insuficientes. Adems de ese papel precursor que tienen los aminocidos, su catabolismo oxidativo es esencial para proporcionar la energa que precisa el organismo en situaciones de necesidad energtica como puede ser el ayuno (Lozano et al., 2000)

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A diferencia de los lpidos y los carbohidratos, los aminocidos no se almacenan en el organismo, en otras palabras, no existen protenas cuya nica funcin sea mantener un aporte de aminocidos para su uso futuro. Por lo tanto, los aminocidos deben obtenerse de la dieta, sintetizarse de novo u obtenerse a partir de la degradacin normal de protenas. Cualquier aminocido que rebase las necesidades biosintticas de la clula se destruye rpidamente. La primera fase del catabolismo incluye la remocin de los grupos amino alfa (habitualmente por transaminacin y ulterior desaminacin oxidativa), formacin de amonio y el cetocido alfa correspondiente (los esqueletos de carbono de los aminocidos) (Figura 7.1). Una parte del amonio libre se excreta por la orina, pero la mayor parte se utiliza para la sntesis de urea, la cual es, en el sentido cuantitativo, la va de mayor importancia para la eliminacin del nitrgeno del organismo. Figura 7.1. Resumen del metabolismo proteico Protenas de la dieta DIGESTIN ABSORCIN Protenas corporales Reserva de aminocidos Aminas bigenas y hormonas

Carbamil fosfato

NH3 Creatina

-cetocidos

Pirimidinas Ciclo de la urea Urea


NH3

Purinas

Ciclo de Krebs

Porfirinas Hemo

cido rico

Creatinina

Bilirrubina Fuente: Montgomery et al. (1999)

En la segunda fase del catabolismo de los aminocidos los esqueletos de carbono de los cetocidos alfa se convierten en intermediarios comunes de las vas metablicas productoras de energa. Estos compuestos pueden metabolizarse a CO2 y agua, glucosa, cidos grasos o cuerpos cetnicos mediante las vas metablicas centrales (Champe et al., 2006). As, las protenas de la dieta cumplen cuatro grandes funciones: los aminocidos que las constituyen se utilizan en la sntesis de las protenas corporales, los esqueletos de carbono de los aminocidos pueden oxidarse para producir energa, sus tomos de carbono y nitrgeno pueden utilizarse para sintetizar metabolitos nitrogenados y pueden ser una fuente de sustancias no nitrogenadas como la glucosa (Montgomery et al., 1999).

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7.1.1. Aminocidos gluconeognicos y cetognicos. Procesos de transaminacin y desaminacin


Los aminocidos pueden clasificarse como glucognicos o cetognicos, segn cul de los siete intermediarios se produzca durante su catabolismo. Los aminocidos cuyo catabolismo produce piruvato o alguno de los intermediarios del ciclo de Krebs como -cetoglutarato, succinil coenzima A, fumarato y oxalacetato, se denominan glucognicos; estos intermediarios son sustratos para la gluconeognesis, por lo que pueden derivarse a la formacin neta de glucosa o glucgeno en el hgado, y de glucgeno en el msculo. Los aminocidos derivados de la hidrlisis de las protenas tisulares son las fuentes principales de glucosa durante el ayuno. Los cetocidos alfa, como oxalacetato y cetoglutarato alfa que se derivan del metabolismo de los aminocidos glucognicos ya que al entrar al ciclo de Krebs forman oxalacetato, un precursor directo del fosfoenolpiruvato (Champe et al., 2006; Laguna y Pia, 2002). Los aminocidos cuyo catabolismo produce acetoacetato o alguno de sus precursores (acetil-CoA o acetoacetil-CoA) se denominan cetognicos. El acetoacetato es uno de los cuerpos cetnicos, los otros dos son el 3-hidroxibutirato y la acetona. La leucina y la lisina son los nicos aminocidos exclusivamente cetognicos que contienen las protenas. Sus esqueletos de carbono no son sustratos para la gluconeognesis. La eliminacin del grupo -amino de los aminocidos incluye dos tipos de reacciones qumicas: transaminacin y desaminacin oxidativa. La presencia del grupo -amino protege a los aminocidos de la degradacin oxidativa. La remocin del grupo -amino es esencial para la produccin de energa a partir de cualquier aminocido, adems de ser un paso obligatorio en el catabolismo de todos los aminocidos. Una vez removido, el nitrgeno puede incorporarse en otros compuestos o puede ser excretado cuando se metabolizan los esqueletos de carbono. Las reacciones de transaminacin y desaminacin oxidativa finalmente proporcionan amonio y aspartato que son las fuentes de nitrgeno de la urea. El primer paso en el catabolismo de la mayora de los aminocidos es la transferencia de sus grup amino al -cetoglutarato (Figura 7.2). Los productos son un -cetocido (derivado del aminocido original) y glutamato (Champe et al., 2006). El -cetoglutarato desempea un papel nico en el metabolismo de aminocidos porque acepta grupos amino procedentes de otros aminocidos, por lo tanto, se transforma en glutamato que se produce por transaminacin y puede desaminarse en forma oxidativa, o usar se como un donador de grupos amino en la sntesis de aminocidos no esenciales. Una familia de enzimas, las aminotransferasas o transaminasas, cataliza esta transferencia de grupos amino de un esqueleto de carbono a otro. Estas enzimas se encuentran en el citosol de las clulas de casi todo el organismo especialmente en el hgado, rin, intestino y msculo. Todos los aminocidos, excepto la lisina y treonina, se someten a transaminacin en algn punto de su catabolismo. La lisina y la treonina pierden sus grupos -amino por desaminacin. Cada aminotransferasa es especfica para uno, o cuando mucho, unos cuantos donadores de grupos amino. Las aminotransferasas se denominan de acuerdo con el donador especfico del grupo amino debido a que el receptor de dicho grupo amino es casi siempre el -cetoglutarato. La aminotransferasa

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de alanina la aminotransferasa asprtica catalizan las dos reacciones ms importantes de aminotransferencia. Figura 7.2. Reaccin en la que la aminotransferasa utiliza al cetoglutarato alfa como receptor del grupo amino

Fuente: Champe et al. (2006) La aminotransferasa de alanina (ALT) es una enzima que antiguamente se llamaba transaminasa glutmico-pirvica (TGP) y est presente en muchos tejidos. Cataliza la transferencia de grupos amino de la alanina al -cetoglutarato , lo que condiciona la formacin de piruvato y glutamato. La reaccin es fcilmente reversible, as, el glutamato acta como un colector de nitrgeno procedente de la alanina (Figura 7.3). Figura 7.3. Reacciones del catabolismo de aminocidos I

Fuente: Champe et al. (2006) La enzima aminotransferasa asprtica (AST) originalmente se denominaba transaminasa glutmicooxalactica (TGO) y es una excepcin a la regla de que las aminotransferasas acarrean grupos amino para formar glutamato. Durante el catabolismo los aminocidos, la AST transfiere grupos amino del glutamato al oxalacetato para formar aspartato (Figura 7.4), el cual se usa como fuente de nitrgeno en el ciclo de la urea.

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Figura 7.4. Reacciones del catabolismo de aminocidos II

Fuente: Champe et al. (2006) Todas las aminotransferasas requieren fosfato de piridoxal (derivado de la vitamina B6) como coenzima, el cual se une en forma covalente al grupo amino psilon de un residuo especfico de lisina en el sitio activo de la enzima. Las aminotransferasas actan por transferencia del grupo amino de un aminocido a la porcin piridoxal de la coenzima para generar fosfato de de piridoxamina. La forma piridoxamina de la coenzima reacciona entonces con un cetocido alfa para formar un aminocido, de manera simultnea se regenera la forma aldehdo de la coenzima (Figura 7.5). Figura 7.5. Interconversin cclica de fosfato de piridoxal y fosfato de piridoxamina durante la reaccin de la aminotransferasa de aspartato

Fuente: Champe et al.(2006) Para la mayora de las reacciones de transaminacin la constante de equilibrio es cercana a 1, lo que permite a la reaccin funcionar tanto en la degradacin de aminocidos, mediante la remocin de los grupos amino alfa (por ejemplo, despus de un alimento con alto contenido de protenas), como en la biosntesis, mediante la adicin de grupos amino a los esqueletos de carbono de los cetocidos alfa (por ejemplo, cuando el aporte de aminocidos en la dieta no es adecuado para satisfacer las necesidades sintticas de las clulas).
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A diferencia de las reacciones de transaminacin que transfieren grupos amino, la desaminacin oxidativa a cargo de la deshidrogenasa de glutamato induce la liberacin de grupos amino en forma de amonio libre (Figura 7.6). Estas reacciones ocurren primordialmente en el hgado y rin, aportan cetocidos alfa que pueden entrar a la va central del metabolismo energtico, y amonio, que es una fuente de nitrgeno en la sntesis de urea (Champe et al., 2006). Figura 7.6. Desaminacin oxidativa por la deshidrogenasa de glutamato

Fuente: Champe et al. (2006) Los grupos amino de la mayora de los aminocidos se dirigen al glutamato mediante transaminacin con cetoglutarato alfa. El glutamato es particular porque es el nico aminocido que se somete a una desaminacin oxidativa rpida, una reaccin catalizada por la deshidrogenasa de glutamato. Por tanto, la accin secuencial de transaminacin (que resulta en la coleccin de grupos amino de otros aminocidos en el cetoglutarato alfa para producir glutamato) y la subsecuente desaminacin oxidativa de ese glutamato (lo que regenera cetoglutarato alfa) aportan una va para que los grupos amino de la mayora de los aminocidos puedan librarse como amonio. La deshidrogenasa de glutamato es inusual en el sentido de que puede utilizar ya sea NAD+ o NADP+ como coenzima. El NAD+ se utiliza primariamente en la desaminacin oxidativa (la prdida simultnea de amonio acoplada con la oxidacin del esqueleto de carbono), y el NADPH se utiliza en la aminacin reductiva (adquisicin simultnea de amonio acoplada con la reduccin del esqueleto de carbono) (Figura 7.7). Figura 7.7. Acciones combinadas de las reacciones de la aminotransferasa y la deshidrogenasa de glutamato

Fuente: Champe et al. (2006)


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La direccin de la reaccin depende de las concentraciones relativas de glutamato, cetoglutarato alfa, amonio y la proporcin entre coenzimas oxidadas y reducidas. Por ejemplo, despus de la ingestin de un alimento protenico, los niveles de glutamato en el hgado se elevan y la reaccin se orienta en direccin a la degradacin de aminocidos y la formacin de amonio, aunque la reaccin tambin puede usarse para la sntesis de aminocidos a partir de los cetocidos alfa correspondientes. El ATP y el GTP son inhibidores alostricos de la deshidrogenasa de glutamato, mientras que el ADP y el GDP son activadores de esta enzima. Por lo tanto, cuando los niveles de energa de la clula estn bajos la degradacin de aminocidos por la deshidrogenasa de glutamato es alta, lo que facilita la produccin de energa a partir de los esqueletos de carbono derivados de los aminocidos (Champe et al., 2006).

7.1.2. Catabolismo de los aminocidos


El catabolismo de los aminocidos es parte del proceso integral del metabolismo del nitrgeno en el organismo. El nitrgeno ingresa al organismo mediante una variedad de constituyentes de la alimentacin, los ms relevantes de ellos son los aminocidos que contienen las protenas de la dieta. El nitrgeno sale del organismo en forma de urea, amonio y otros productos derivados del metabolismo de los aminocidos. El papel de las protenas es estas transformaciones incluye dos conceptos trascendentes: el fondo comn de aminocidos y el intercambio de protenas. Los aminocidos que se liberan de la hidrlisis de las protenas tisulares o de la dieta, o bien, los sintetizados de novo, se mezclan con otros aminocidos libres distribuidos en el organismo. En conjunto integran el fondo comn de los aminocidos. Slo un 75% de los aminocidos obtenidos mediante hidrlisis de protenas corporales se recupera a travs de la biosntesis de nuevas protenas tisulares, el resto se metaboliza o sirve como precursor de los compuestos como porfirinas, creatinina, neurotransmisores, purinas, pirimidinas y otros compuestos nitrogenados. La mayora de las protenas del organismo est en constante sntesis y degradacin, lo que permite la remocin de protenas innecesarias o anormales. Para muchas protenas la regulacin de su sntesis determina la concentracin de protenas en la clula, en estos casos, la degradacin de protenas tiene un papel menor. Para otras protenas la tasa de sntesis es constitutiva, o sea, es constante y los niveles celulares de protena se controlan mediante degradacin selectiva (Champe et al., 2006). El catabolismo de los aminocidos normalmente comienza con la eliminacin del grupo amino. Los grupos amino pueden luego eliminarse en la sntesis de la urea. Los esqueletos carbonados que se producen a partir de los aminocidos se degradan posteriormente para formar siete productos metablicos que son: acetil-CoA, acetoacetil-CoA, piruvato, -cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y oxalacetato (Champe et al., 2006; McKee y McKee, 2003). Dependiendo de los requerimientos del animal, estas molculas se utilizan para sintetizar cidos grasos o glucosa o para generar energa. Los aminocidos que se degradan para formar acetil-CoA o acetoacetil-CoA se denominan cetognicos, debido a que pueden convertirse en cidos grasos o cuerpos cetnicos. Los esqueletos carbonados de los aminocidos glucognicos, que se degradan a piruvato o a un intermediario del ciclo del cido ctrico, pueden utilizarse a continuacin en la gluconeognesis. Tras considerar las rutas de desaminacin y la sntesis de urea, a continuacin se describen las rutas que degradan los esqueletos carbonados descritas por McKee y McKee (2003): Los -aminocidos pueden agruparse en clases, de acuerdo a sus productos finales como acetil-CoA, acetoacetil-CoA, piruvato, y varios intermediarios del ciclo del cido ctrico. Como se muestra en la
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siguiente figura, los grupos -amino se eliminan al inicio de las rutas catablicas, los esqueletos carbonados se convierten en intermediarios metablicos comunes. Del total, 10 -aminocidos dan acetil-CoA. Este grupo puede dividirse de acuerdo a si el piruvato es un intermediario en la formacin de acetil-CoA. El piruvato se convierte en acetil-CoA por el complejo piruvato deshidrogenasa. Los aminocidos cuya degradacin implica al piruvato son la alanina, serina, glicina, cistena y treonina. Los otros cinco aminocidos que se convierten en acetil-CoA mediante rutas que no implican al piruvato son la lisina, triptfano, tirosina, fenilalanina y leucina. Cinco aminocidos (Arginina, prolina, histidina, glutamato y glutamina) se degradan a cetoglutarato. La succinil-CoA se forma a partir del esqueleto carbonado de la metionina, la isoleucina, la valina y la treonina. El aspartato y la asparagina se degradan para formar oxalacetato. El aspartato se convierte en oxalacetato con una nica reaccin de transaminacin. La asparagina inicialmente se hidroliza para dar aspartato y NH4+ por la asparaginasa (McKee y McKee, 2003). En la figura 7.8 los aminocidos glucognicos se indican en color naranja, los aminocidos cetognicos de color azul, y los pocos aminocidos tanto glucognicos como cetognicos, de color morado. Los aminocidos con ms de una va de entrada en las rutas centrales se indican con un asterisco (Mathews et al., 2005). Figura 7.8. Destino de los esqueletos carbonados de los aminocidos

Fuente: Mathews et al. (2005)


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7.1.3. Ciclo de la urea


La urea es la forma principal de desecho de los grupos amino derivados de los aminocidos; representa cerca de un 90% de los componentes nitrogenados de la orina. Un nitrgeno de la molcula de urea es aportado por el NH3 (amonaco) libre y el otro por el aspartato. El glutamato es el precursor inmediato tanto del amonio mediante desaminacin oxidativa por la deshidrogenasa de glutamato, as como el glutamato es el precursor del nitrgeno del aspartato mediante la transaminacin del oxalacetato por la aminotransferasa asprtica. El carbono y el oxgeno de la urea derivan del CO2. La urea se produce en el hgado y se transporta despus en la sangre a los riones para ser excretada en la orina (Champe et al., 2006). En los organismos ureotlicos, definidos por Mathews et al. (2005) como los organismos que excretan la mayor de su nitrgeno en forma de urea, el ciclo de la urea (Figura 7.9) elimina aproximadamente el 95% del nitrgeno sobrante. La urea se forma a partir de amonaco, CO2 y aspartato en una ruta cclica denominada ciclo de la urea, ciclo de la urea de Krebs o ciclo de Krebs-Henseleit . La sntesis de urea tiene lugar en los hepatocitos y comienza con la formacin de carbamoil fosfato en la matriz mitocondrial. Los sustratos de esta reaccin que cataliza la carbamoil fosfato sintetasa I, son NH4+ y HCO3-. La fuente de nitrgeno de la carbamoil fosfato sintetasa II, la enzima que participa en la sntesis de pirimidinas, es la glutamina. As, el ciclo de la urea convierte el NH4+ (amonio) en urea, una molcula menos txica. En la imagen siguiente se muestra en color las fuentes de los tomos de la urea. La citrulina se transporta a travs de la membrana inteARN por un transportador de aminocidos neutros. La ornitina se transporta mediante intercambio con H+ o citrulina. El fumarato se transporta de vuelta a la matriz mitocondrial para su reconversin en malato mediante transportadores para el -cetoglutarato o los cidos tricarboxlicos. Como en la sntesis de carbamoil fosfato se requieren dos molculas de ATP, esta reaccin es esencialmente irreversible (una molcula de ATP se usa para activar el HCO3- y la segunda molcula se utiliza para fosforilar el carbamato. El carbamoil fosfato reacciona a continuacin con la ornitina para formar citrulina. Esta reaccin, que cataliza la ornitina transcarbamoilasa, se lleva hasta completarse debido a que se libera fosfato del carbamoil fosfato. El carbamoil fosfato tiene un potencial de transferencia de grupo fosfato elevado. Una vez formada, la citrulina se transporta al citoplasma, donde reacciona con el aspartato para formar arginosuccinato (el grupo -amino del aspartato, que se forma a partir del oxalacetato mediante reacciones de transaminacin en el hgado, proporciona el segundo nitrgeno que se incorpora en ltima instancia en la urea). Esta reaccin, que est catalizada por la arginosuccinato sintasa, es reversible. Se impulsa hacia adelante por la rotura del pirofosfato por la pirofosfatasa. A continuacin, la arginosuccinato liasa rompe el arginosuccinato para formar Arginina (el precursor inmediato de la urea) y fumarato. En la reaccin final del ciclo de la urea, la arginasa cataliza la hidrlisis de la Arginina para formar ornitina y urea. Una vez formada, la urea difunde fuera de los hepatocitos al torrente sanguneo. Finalmente se elimina en la orina por el rin. La ornitina (un aminocido bsico) vuelve a las mitocondrias para condensarse con el carbamoil fosfato e iniciar de nuevo el ciclo. Debido a que la arginasa slo se encuentra en cantidades significativas en el hgado de los animales ureotlicos, la urea slo se produce en este rgano. Tras su transporte de vuelta a la matriz mitocondrial, el fumarato se deshidrata para formar malato, un componente del ciclo del cido ctrico. El producto oxalacetato del ciclo del cido ctrico puede utilizarse para generar energa o puede convertirse en glucosa o aspartato.
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Figura 7.9. Ciclo de la urea

Fuente: McKee y McKee (2003) El aspartato que se utiliza en la sntesis de urea se genera a partir de oxalacetato, un intermediario del ciclo del cido ctrico. En la sntesis de una molcula de urea se consumen cuatro fosfatos de energa elevada. Se requieren dos molculas de ATP para regenerar el ADP a partir del AMP, y dos molculas de ATP a partir de dos molculas de ADP. Como el amonaco es tan txico, el ciclo de la urea est estrictamente regulado. Existen mecanismos reguladores a corto y largo plazo. Las concentraciones de las cinco enzimas del ciclo de la urea se alteran por variaciones del consumo de protenas en el alimento. Varios das despus de un cambio alimentario, hay variaciones de las concentraciones enzimticas de dos o tres veces. Se cree que varias hormonas como el glucagn y los glucocorticoides participan en las modificaciones de las velocidades de sntesis de las enzimas. Las enzimas del ciclo de la urea estn controladas a corto plazo por las
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concentraciones de sus sustratos. La carbamoil fosfato sintasa I tambin est activada de forma alostrica por el N-acetilglutamato que es un indicador sensible de las concentraciones celulares de glutamato. Una cantidad significativa de NH4+ procede del glutamato. El N-acetilglutamato se produce a partir del glutamato y acetil-CoA en una reaccin catalizada por la N-acetilglutamato sintasa (McKee y McKee, 2003). El amonio se produce en todos los tejidos durante el metabolismo de una gran variedad de compuestos y se desecha principalmente por medio de la formacin de urea en el hgado (Figura 7.10). Sin embargo, el nivel de amonio en la sangre debe mantenerse muy bajo, porque concentraciones incluso ligeramente elevadas (hiperamonemia) son txicas para el sistema nervioso central (Champe et al., 2006). Figura 7.10. Metabolismo del amonio

Fuente: Champe et al. (2006) 7.1.4. Sntesis de aminocidos El esqueleto de los aminocidos no esenciales puede derivarse de intermediarios glucolticos y del ciclo de Krebs. La alanina y la serina pueden derivar de intermediarios glucolticos y la glicina puede obtenerse de la serina. Los tomos de carbono de la cistena pueden derivarse de la serina a travs de la cistationina. Los tomos de carbono del aspartato y la asparagina pueden derivarse del oxalacetato, y los tomos de carbono del glutamato, la glutamina y la prolina pueden ser derivados del -cetoglutarato (Figura 7.11). La tirosina (no esencial) puede derivarse de la fenilalanina (esencial) (Roskoski, 2001). La sntesis a partir de los cetocidos alfa se da en la alanina, aspartato y glutamato, se sintetizan por transferencia de un grupo amino a los cetocidos piruvato alfa, oxalacetato y cetoglutarato alfa, respectivamente (Figura 7.12). Estas reacciones de transaminacin son las ms directas de las vas biosintticas. El glutamato es inusual porque tambin puede sintetizarse por la reaccin inversa a la desaminacin oxidativa, catalizada por la deshidrogenasa de glutamato.
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Figura 7.11. Biosntesis de los aminocidos indicando con las flechas el nmero de reacciones en cada ruta

Se indica con asteriscos los aminocidos no esenciales para los mamferos Fuente: McKee y McKee (2003)
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Figura 7.12. Formacin de alanina, aspartato y glutamato a partir de los cetocidos alfa correspondientes

Fuente: Champe et al. (2006)

7.1.5. Integracin del metabolismo de aminocidos con el de carbohidratos y lpidos


La primera premisa sobre la integracin del metabolismo celular es la coordinacin entre los procesos anablicos y catablicos. La funcin primordial de las vas catablicas es la oxidacin de los sustratos, derivados de los carbohidratos, los lpidos o los aminocidos, para generar NADH y FADH2 y finalmente ATP, la moneda energtica celular. La funcin del anabolismo es la de formar las molculas propias de la clula a partir de un pequeo nmero de molculas precursoras, con el concurso del NADPH y del ATP. Los equivalentes reductores generados durante el catabolismo son el NADH y el FADH2, mientras que durante el anabolismo se utiliza el NADPH, todo lo cual coadyuva a una mejor coordinacin e integracin metablica. El ATP es el puente de unin entre el catabolismo donde se genera y en anabolismo donde se usa; la sntesis de molculas propias de la clula (glucgeno, lpidos especializados, protenas, ARN, ADN, etc.), slo podr existir si existe ATP disponible (Figura 7.13). Molculas como el ATP, el NADH y otras, funcionan como seales que inhiben vas metablicas responsables de su misma generacin, o bien, activan vas metablicas encargadas de la biosntesis de compuestos propios de la clulas (Cuadro 7.1)). De manera recproca, un exceso en la poza de molculas como el ADP, el NAD+ y otras, funcionan como seales de carencia de energa para la sntesis de compuestos propios de la clula, que activarn vas que formen ms ATP y NADH, e inhibirn vas metablicas que los consuman (Laguna y Pia, 2002).

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Figura 7.13. Visin general del metabolismo

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Cuadro 7.1. Principales moduladores fisiolgicos de las vas metablicas en un hepatocito

Fuente: Laguna y Pia (2002) Otra conexin entre los procesos catablicos y anablicos que coadyuva en la coordinacin de ambas vas es a nivel celular. Las molculas producidas a lo largo del catabolismo son los bloques que se utilizan en el anabolismo para la sntesis de molculas propias de la clula. En realidad se trata de unos cuantos precursores con los cules la clula llega a formar hasta cientos y miles de compuestos propios. Un excelente ejemplo son los aminocidos y protenas. El catabolismo de las protenas da lugar a 20 aminocidos, bloques precursores con los que la clula, en una etapa posterior y con suficiente energa disponible, llega a formar sus propias protenas: cientos de copias idnticas de unas cuantas miles de protenas, distintas entre s. El ejemplo ilustra, a decir de Laguna y Pia (2002), la elegancia y sencillez de la solucin y la coordinacin e integracin del metabolismo. En la Figura 7.14 se muestra la relacin entre el metabolismo de los aminocidos y el de carbohidratos y lpidos.
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Figura 7.14. Interconversin de los principales alimentos

Fuente: Murray et al. (2001)

7.2. cidos nucleicos


Durante incontables siglos, los seres humanos hemos observado los patrones de herencia sin entender los mecanismos que transmiten los rasgos fsicos y los procesos evolutivos de los padres a la progenie. Muchas culturas humanas han usado estas observaciones para mejorar sus condiciones econmicas, como en la crianza de los animales domsticos o en los cultivos. La investigacin cientfica de la herencia, que actualmente se denomina gentica, empez hasta el siglo XIX. Al comienzo del siglo XX, los cientficos comenzaron a admitir de forma generalizada que los rasgos fsicos se heredaban en unidades discretas (genes) y que los cromosomas del interior del ncleo son los depositarios de la informacin gentica. Finalmente se eludi la composicin qumica de los cromosomas y se identific el ADN como la informacin gentica. En la actualidad, al conjunto completo de esta informacin de un organismo, codificado en la secuencia de nucletidos de su ADN, se denomina su genoma.

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La biologa molecular es la ciencia que se dedica a elucidar la estructura y funcin de los genomas. El descubrimiento de la estructura de ADN como un conjunto helicoidal dplex de polmeros de nucletidos por James Watson y Francis Crick en 1953 ha permitido a los cientficos reexaminar a la mayora de los fenmenos biolgicos usando herramientas investigadoras descubiertas por los bilogos moleculares y los bioqumicos. La informacin codificada en el ADN, que dirige el funcionamiento de las clulas y que se transmite a la progenie, consiste en una secuencia especfica de bases nitrogenadas. La sntesis de ADN comporta el apareamiento complementario de las bases de los nucletidos de las dos cadenas del ADN. La funcin fisiolgica y gentica del ADN requiere la sntesis de copias relativamente sin errores. El mecanismo de descodificacin y de utilizacin de la informacin gentica en la direccin de los procesos celulares comienza con la sntesis del ARN que tiene lugar mediante el apareamiento complementario de las bases de los ribonucletidos con las bases de una molcula de ADN. En la sntesis de las enzimas, las protenas estructurales y otros polipptidos que se requieren para la sntesis de las dems biomolculas que intervienen en la funcin del organismo, participan varias clases de ARN (McKee y McKee, 2003). La secuencia de la Figura 7.15 se denomina dogma central de la biologa molecular, ya que indica el flujo de la informacin gentica. En dicha figura se muestra el sentido de los flujos de informacin en la replicacin, la transcripcin y la traduccin (Nelson y Cox, 2001). Figura 7.15 Flujo de la informacin biolgica

Fuente: McKee y McKee (2003) La sntesis de ADN se denomina replicacin (copiar o duplicar). La transcripcin es el proceso en el que se utiliza ADN para sintetizar ARN y cada molcula de ARN se denomina transcrito. La sntesis de protenas se denomina traduccin (McKee y McKee, 2003).

7.2.1. Bases nitrogenadas


Las bases nitrogenadas presentes en los cidos nucleicos derivan de dos estructuras planas cclicas nitrogenadas bsicas: purina y pirimidina. Las bases pirimidnicas (citosina, timina y uracilo) y las purnicas (adenina y guanina) derivan fundamentalmente de la sustitucin de tomos de hidrgeno por grupos amino o hidroxilo en diferentes posiciones del anillo pirimidnico o purnico, respectivamente. Debido al fenmeno de tautomera cetoenlica, las bases nitrogenadas pueden presentar diversas formas tautomricas en funcin del pH del medio. A pH fisiolgico, la estructura ceto es la forma predominante.
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Las formas tautomricas de las bases nitrogenadas difieren en su capacidad para formar enlaces por puentes de hidrgeno, siendo este tipo de enlaces fundamental para las interacciones moleculares de los cidos nucleicos, que afectan tanto a su propia sntesis como a la sntesis de protenas (Figura 7.16). Figura 7.16. Bases nitrogenadas y tautomera cetoenlica

Fuente: Lozano et al. (2000) A parte de las cinco bases nitrogenadas mayoritarias de los cidos nucleicos, existen otras bases purnicas y pirimidnicas minoritarias que tambin forman parte de ciertos tipos de cidos nucleicos (dihidrouracilo, 5-metilcistosina, tiouracilo, bases Q e Y, etc.), o bien se forman como intermedios de las rutas metablicas de los cidos nucleicos (hipoxantina, xantina). Los nuclesidos (Figura 7.17) se forman por la unin de una base nitrogenada con la D-ribosa (ribonuclesido) o con la 2-desoxirribosa (desoxirribonuclesidos). La unin de la base y el azcar se produce mediante un enlace -N-gucosdico entre el carbono anomrico de la azcar y el nitrgeno N1 de la pirimidina o el nitrgeno N9 de la purina. La posibilidad de rotacin del enlace C-N glucosdico determina que los nuclesidos puedan adoptar diferentes conformaciones espaciales en disolucin (syn, anti). Figura 7.17. Estructura general de los nuclesidos y nucletidos

Fuente: Lozano et al. (2000)

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La adicin de un grupo fosfrico o fosfato a un nuclesido origina un nucletido (ribonucletido o desoxirribonucletido en funcin de la pentosa) (Figura 7.17). Los nucletidos que incorporan un solo grupo fosfato se denominan monuclesidos monofosfato (NMF), y los ms abundantes son aquellos en los que el grupo fosfato se encuentra unido al carbono 5de la pentosa. El enlace que mantiene unido el grupo fosfato al nuclesido es un ster fosfato. Cuando el enlace ster se forma entre el cido fosfrico y las posiciones C3o C2de la ribosa o C3de la desoxirribosa se obtienen nuclesidos monofosfato 3o 2. En algunos casos, el grupo fosfrico forma dos enlaces ster entre los hidroxilos 3y 5de la ribosa, dando lugar a los denominados nucletidos cclicos. De ellos el ms importante es el denominado AMP cclico (AMPc) (Figura 7.18), que es una molcula que ejerce importantes funciones como regulador del metabolismo, formndose en la clula en respuesta a la accin de diferentes hormonas, para funcionar como un segundo mensajero (Cuadro 7.2). Figura 7.18. Estructuras del AMP cclico y del ATP

Fuente: Lozano et al. (2000) Cuadro 7.2. Nomenclatura de los nuclesidos y nucletidos (5-monofosfato)

Fuente: Lozano et al. (2000) Otros tipos de nucletidos existentes en la clula son los nuclesidos difosfato (NDF) y los nuclesidos trifosfato (NTF), que incorporan uno o dos grupos fosfato al grupo fosfato de la posicin 5. Los nuclesidos trifosfato (tanto el ribonuclesido trifosfato, NTF, como la desoxirribonuclesidos trifosfato, dNTF) son las unidades estructurales que sirven para la sntesis de los cidos nucleicos, aunque algunos de ellos como el ATP o GTP ejercen, adems, importantes funciones intracelulares tanto en las reacciones de intercambio energtico y fosforilacin de protenas (ATP) como en la modulacin de gran nmero de protenas reguladoras (GTP). Ciertos nucletidos forman parte de determinadas coenzimas como NAD+, FAD, coenzima A, etc. La unin de dos mononucletidos por enlace fosfodister, entre el grupo fosfato de la posicin 5de uno de ellos y el hidroxilo de la posicin 3del otro, da lugar a un dinucletido. La formacin de un nuevo enlace fosfodister entre un dinucletido y un nuevo nucletido origina la formacin de un trinucletido, y la incorporacin sucesiva de nuevos nucletidos da lugar a la formacin de trinucletido, y la incorporacin sucesiva de nuevos nucletidos da lugar a la formacin de un polinucletido (Figura 7.19).

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Figura 7.19. Estructura de la cadena polinucleotdica de ARN

Fuente: Lozano et al. (2000) La estructura qumica bsica de las molculas de los cidos nucleicos es una cadena polinucleotdica formada por la repeticin de unidades (nucletidos) unidas por enlaces tpicos: enlaces fosfodister entre la posicin entre la posicin 5de un nucletido y la 3del nucletido adyacente. La cadena polinucleotdica est formada por un esqueleto de uniones pentosa-fosfato alteARNnte, comn a cualquier molcula de cido nucleico, y una sucesin de bases nitrogenadas unidas a las pentosas por enlaces N-glucosdicos, que forman la denominada secuencia. El esqueleto de la cadena polinucleotdica tiene una determinada polaridad, marcada por la unin de los grupos fosfato a diferentes posiciones de la pentosa. Se toma como sentido normal de la cadena el de 5a 3, por lo que la secuencia de base a lo largo de la cadena se suele leer: 53 (Lozano et al., 2000)

7.2.2. Estructura y funcin de los cidos nucleicos


Desde el punto de vista qumico los cidos nucleicos son polinucletidos, es decir, molculas polimricas formadas por la repeticin de unidades sencillas, los mononucletidos, los cules se mantienen unidos entre s por medio del enlace dister fosfrico o fosfodister. La rotura hidroltica de estos enlaces produce la transformacin de los cidos nucleicos en una mezcla de desoxinucletidos (en el caso del ADN) o de ribonucletidos (en el caso del ARN). La degradacin hidroltica de estas unidades produce a su vez, una mezcla de tres componentes caractersticos de los nucletidos: cido ortofosfrico, una pentosa y una base nitrogenada. Mientras que el ADN est formado por cuatro bases nitrogenadas: adenina (A), guanina(G), citosina (C) y timina (T), y 2-desoxirribosa como pentosa, mientras que el ARN posee ribosa en lugar de desoxirribosa y cuatro bases nitrogenadas: adenina, guanina, citosina y uracilo (U), en vez de timina (Figura 7.20) (Lozano et al., 2000; Jimnez y Merchant, 2003). Los cidos nucleicos son macromolculas celulares, llamadas as originalmente por su tamao, por su reaccin cida y por su localizacin nuclear. El cido desoxirribonucleico (ADN) reside principalmente en el ncleo, en las mitocondrias y en los cloroplastos de organismos eucariotas, mientras que el cido ribonucleico (ARN), tiene una distribucin an ms amplia; se le encuentra tambin en el citoplasma y asociado al retculo endoplsmico. Su localizacin estriba en sus funciones celulares. El ADN, el portador permanente de la informacin genotpica celular, puede determinar el fenotipo celular desde el interior del ncleo gracias a la transcripcin de su informacin en ARN, molculas efmeras que viajan a otros
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compartimientos celulares para ejecutar las instrucciones genotpicas en ellas transcritas. Los organismos procariotas carecen de ncleo celular (Laguna y Pia, 2002). Figura 7.20. Formas abreviadas de representacin de cadenas de cidos nucleicos

Fuente: Lozano et al. (2000)

cido desoxirribonucleico (ADN): Las molculas de ADN son relativamente estables, pero por
hidrlisis dan lugar a las cuatro bases nitrogenadas: A, G, C y T, 2-desoxirribosa y fosfato. La composicin en cuanto a bases nitrogenadas es caracterstica de cada ADN en particular, existiendo en todos los ADN una proporcin determinada entre las mismas: as, la concentracin molar de A es igual a la de T, mientras que la de G es igual a la de C. Esto determina que el porcentaje G+C, se pueda saber el contenido de cada una de las bases. El valor de G+C vara entre los ADN de especies diferentes, siendo constante para todas las clulas de un individuo de una especie determinada. Las molculas de ARN son ms inestables que las de ADN, y por hidrlisis producen bases nitrogenadas (A, G, C y U), ribosa y fosfato. Las molculas de ARN albergan una proporcin variada de bases, no existiendo entre ellas relaciones similares a las encontradas en el ADN. Existen distintos tipos de ARN, con propiedades y funciones ms diversas que las que se encuentran en el ADN. Las molculas de ARN sirven como portadoras de la informacin gentica en determinados tipos de virus, mientras que en la clula el ARN puede llevar a cabo funciones de transmisor temporal de parte de la informacin gentica (ARN mensajero o ARNm), o bien participar en el proceso de sntesis de protenas o como componente esencial de parte de la maquinaria biosinttica: ARN de transferencia (ARNt) y ARN ribosomal (ARNr). Algunos tipos de ARN sirven como precursores de otros tipos de ARN como el ARN nuclear heterogneo (ARNhn) o participan en la formacin de otras partculas celulares, como los espliceosomas, las partculas de reconocimiento de las seales, etc. Las cadenas polinucleotdicas de ADN y ARN son similares, ya que slo se diferencian en que la pentosa es 2-desoxirribosa en el ADN y ribosa en el ARN, y en que el ADN utiliza la base timina en
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lugar de uracilo, que es tpico del ARN. La ausencia de hidroxilo en la posicin 2del azcar en el ADN confiere una mayor estabilidad a los enlaces fosfodister; por ello, las cadenas de ADN son ms estables que las de ARN. El hecho de que las molculas de ADN posean T en lugar de U permite que las desaminaciones espontneas que transforman C en U en el ADN den lugar a la aparicin de una base anmala en el ADN, alteracin que puede ser corregida por sistemas que eliminan el uracilo como base extraa del ADN, reparacin que no podra hacerse si el uracilo fuese un componente normal del ADN. En el esqueleto de la cadena polinucleotdica, debido a la presencia de los grupos fosfato, se localiza un gran nmero de cargas negativas, mientras que las pentosas y las bases nitrogenadas no se encuentran ionizadas a pH fisiolgico. Las molculas polinucleotdicas se comportan como polianiones que adoptan una conformacin ms estable mediante el plegamiento espacial de la cadena (Lozano et al., 2000). El ADN es el depositario de la informacin gentica. Su estructura consta de dos cadenas de polinucletidos enrolladas una alrededor de la otra para formar una doble hlice a (Figura 7.21). Figura 7.21. Estructura del ADN

Fuente: McKee y McKee (2003) En la Figura 7.21 se observa que los esqueletos azcar-fosfato de la doble hlice estn representados por cintas coloreadas. Las bases unidas al azcar desoxirribosa estn en el interior de la hlice. La doble hlice se forma por el apareamiento complementario entre las bases mediante la formacin de enlaces de hidrgeno. La adenina se aparea con la timina, y la guanina con la citosina. Cada gen est formado por una secuencia lineal de bases especficas y singulares. Se han medido con precision las dimensiones del ADN: una vuelta de la doble hlice ocupa 3.4 nm y est formada por aproximadamente 10.4 pares de bases, aunque los cambios de pH y de concentracin salina afectan estos valores ligeramente. El dimetro de la doble hlice es 2.4 nm. El espacio interior de la doble
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hlice slo es adecuado para el apareamiento de una purina y una pirimidina. El apareamiento de dos pirimidinas creara un hueco y el apareamiento de purinas desestabilizara la hlice. La distancia entre los pares de bases adyacentes es de 0.34 nm (Figura 7.22) (McKee y McKee, 2003). En la Figura 7.22 la doble hlice del ADN se representa como una escalera de caracol. Los lados de la escalera representan los esqueletos azcar-fosfato. Los peldaos representan los pares de bases. Figura 7.22. Dimensiones de la estructura de ADN

Fuente: McKee y McKee (2003) Debido a que la uniones entre las dos cadenas del ADN son dbiles (enlaces por puentes de hidrgeno e interacciones entre bases), es posible separar parcial o totalmente ambas cadenas con un aporte bajo de energa. La separacin parcial de segmentos de las cadenas tiene lugar de manera natural durante los procesos relacionados con la sntesis de cidos nucleicos. La separacin total de las cadenas de ADN bicatenario en disolucin recibe el nombre de desnaturalizacin, y sta se puede conseguir fcilmente elevando el pH de la disolucin o por calentamiento de la misma. La temperatura requerida para separar las cadenas est directamente relacionada con el contenido en G+C, ya que cuanto ms elevada sea la proporcin de G+C, mayor ser el promedio de enlaces por puentes de hidrgeno, puesto que el par G+C posee tres enlaces por slo dos del par A-T. El proceso es reversible; al restablecerse las condiciones normales, las cadenas complementarias vuelven a aparearse para formar la estructura bicatenaria, mediante el proceso de renaturalizacin (Figura 7.23). El ADN del ncleo de las clulas eucariotas presenta una organizacin estructural compleja, en la que participa un conjunto de protenas diferentes que interactan con las cadenas lineales de ADN para formar la cromatina cuya estructura es variable, pudindose encontrar en estados pocos compactos en forma de fibras delgadas (10 nm de grosor) o en otros ms empaquetados, como el que presentan los cromosomas durante la metafase.

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Figura 7.23. Desnaturalizacin y renaturalizacin del ADN

Fuente: Lozano et al. (2000) La cromatina (Figura 7.24) est formada por ADN y protenas en cantidades casi equivalentes, siendo las histonas las protenas ms abundantes de la cromatina. Las histonas son protenas ricas en aminocidos bsicos, por lo que estn cargadas positivamente a pH fisiolgico, de bajo peso molecular. Existen cinco histonas principales en las clulas de los mamferos, denominadas H1, H2A, H2B, H3 y H4. Las histonas son protenas que muestran una gran conservacin de secuencia, siendo las histonas H3 y H4 idnticas en los diferentes tipos de vertebrados. Cuatro de las histonas se asocian para dar lugar a un octmero formado por dos copias de las histonas H2A, H2B, H3 y H4. Una porcin de ADN, de aproximadamente 200 pares de bases, se enrolla sobre el octmero de histonas y da lugar a la formacin del nucleosoma (Figura 7.25), que es el componente unitario y repetitivo de la fibra de cromatina de 10 nm. El ADN se enrolla dando un poco menos de dos vueltas sobre el octmero (aproximadamente 80 pares de bases por vuelta), por lo que alrededor de 146 pares de bases estn en estrecho contacto con el octmero, mientras que el resto del ADN, denominado ADN espaciador, se encuentra uniendo nucleosomas adyacentes, estando este ADN en contacto con la histona H1. Figura 7.24. Estructura de la cromatina

Fuente: Lozano et al. (2000)


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Figura 7.25. Estructura del nucleosoma

Fuente: Lozano et al. (2000) La fibra fina de cromatina, con aspecto de un collar de cuentas, adquiere un plegamiento espacial para dar lugar a una fibra ms gruesa (30 nm) en la que los nucleosomas estn organizados en forma de selenoide, ocupando 6 nucleosomas cada vuelta helicoidal de la fibra. Este plegamiento empaqueta el ADN unas 50 veces, aunque la cromatina, para alcanzar la organizacin del cromosoma metafsico, requiere un empaquetamiento adicional de unas 100 veces. En la Figura 7.26 se muestra otra imagen de la estructura de la cromatina en los cromosomas metafsicos. Figura 7.26. Niveles de organizacin de la molcula de ADN

Fuente: Jimnez y Merchant (2003) El nmero 1 de la Figura 7.26 muestra la molcula de ADN de 2nm de dimetro, el nmero 2 se muestra que el ADN se enreda alrededor de un octmero de histonas para formar estructuras discretas de 10 nm de dimetro o nucleosomas, el nmero 3 muestra que la histona H1 compacta a los nucleosomas y stos forman una hlice o selenoide de 30 nm de dimetro y el nmero 4 se muestra que el selenoide se organiza en asas muy compactas de 60 nm de dimetro y 300 nm de largo. A diferencia del ADN nuclear, el ADN mitocondrial est formado por un genoma de ADN circular, que presenta una organizacin mucho ms sencilla (Lozano et al., 2000).

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cido ribonucleico (ARN): En el ARN los nucletidos estn unidos por enlaces fosfodister. El ARN es de cadena sencilla (Figura 7.27). Las molculas de ARN se doblan en estructuras tridimensionales creadas por las regiones locales de apareamiento complementario de bases. Durante un proceso complejo, la doble hlice del ADN se desenrrolla parcialmente y se sintetizan las molculas de ARN utilizando una cadena de ADN como molde.
Figura 7.27. Estructura general del ARN

Fuente: Jimnez y Merchant (2003) Existen 3 tipos de ARN: ARNm, ARNt y ARNr. Cada secuencia singular o molcula de ARNm posee la informacin que codifica directamente la secuencia de aminocidos de un polipptido especfico. Los ribosomas, estructuras supramoleculares grandes y complejas formadas formadas por ARNr y molculas proteicas, convierten la secuencia de bases del ARNm en la secuencia de aminocidos de un polipptido. Las molculas de ARNt actan como adaptadoras durante la sntesis de protenas. Cada clase de molcula de ARNt se une a un aminocido especfico. Cada polipptido se construye al traducirse en cada ribosoma la informacin de la secuencia de bases del ARNm por el apareamiento de bases entre las molculas de ARNm y ARNt. Al aproximarse los aminocidos se forman los enlaces peptdicos (McKee y McKee, 2003). Las molculas de ARN suelen ser en la mayor parte de los casos monocatenarias y de tamao mucho menor que el de las molculas de ADN, oscilando desde alrededor de 70 nucletidos en las molculas de ARNt hasta ms de 100 000 en algunas molculas de ARNnh (Lozano et al., 2000).
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En las molculas de ARN monocatenario se pueden producir apareamientos intracatenarios entre regiones cortas que poseen secuencias complementarias, lo que da lugar a la formacin de pequeas zonas bicatenarias, denominadas horquillas (Figura 7.28). Figura 7.28. Estructura del ARN donde se muestran las regiones con apareamiento intracatenario de bases

Fuente: Lozano et al. (2000) La formacin de determinadas estructuras de este tipo en las molculas de ARN naciente puede controlar el proceso de la transcripcin. En otros casos estas estructuras estn presentes en las molculas maduras de ARN (ARNt y ARNr), en las que existen diferentes regiones de apareamiento intracatenario, que dan lugar a la formacin de estructuras helicoidales caractersticas. En algunos casos se conoce la estructura tridimensional de las molculas de ARN, como en el ARNt, siendo esta estructura fundamental para el plegamiento espacial de la cadena de ARN y, por ende, para el mantenimiento de la funcin biolgica. En las clulas, el ARN es ms abundante que el ADN, ocupando el ARNr alrededor del 80% del total, seguido del ARNt con 15% y el ARNm 5% del total de ARN celular. Aunque la mayor parte de los ARN tienen una funcin relacionada con el proceso de sntesis de protenas, se han identificado molculas de ARN que presentan por s mismas una actividad cataltica semejante a la de las enzimas, por lo que se conocen con el nombre de ribosomas (Lozano et al., 2000)

7.2.3. Rplica de ADN


La informacin gentica almacenada en la secuencia de nucletidos del ADN sirve a dos propsitos: es la fuente de informacin para la sntesis de todas las molculas de protena, tanto de la clula como del organismo, y proporciona la informacin heredada a las clulas hijas o a los descendientes. Ambas funciones requieren que la molcula de ADN sirva como un molde, en el primer caso para la transcripcin de la informacin en el ARN, y en el segundo para la replicacin de la informacin en las molculas hijas de ADN. La complementariedad del modelo de ADN de doble cadena de Watson y Crick sugiere fuertemente que la replicacin de la molcula de ADN ocurre en una forma semiconservadora. De esta manera, cuando cada una de las cadenas de la molcula madre de ADN de doble cadena se separa de su complemento durante la replicacin, cada una sirve como un molde sobre el cual se sintetiza una nueva cadena complementaria (Figura 7.29). Las dos molculas hijas de ADN recin formadas, cada una de las cuales contiene una cadena (son complementarias ms que idnticas) de la molcula madre de doble cadena, se distribuye entre las dos hijas. Cada clula hija contiene molculas de ADN con informacin idntica a la que posee la madre; as, en cada clula hija, slo se ha semiconservado la molcula de ADN de la clula madre (Murray et al., 2001).
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Figura 7.29. Estructura de doble cadena de ADN y funcin de molde de cada cadena antigua

Fuente: Murray et al. (2001) La principal funcin de la replicacin del ADN se entiende que es la provisin de una progenie con la informacin gentica poseda por los padres. As, la replicacin del ADN debe ser completa y llevada a cabo con una alta fidelidad para mantener la estabilidad gentica dentro del organismo y las especies. Este proceso de replicacin del ADN es complejo e involucra muchas funciones celulares y algunos procedimientos de verificacin, para asegurar la fidelidad de la replicacin. Cerca de 30 protenas estn involucradas en la replicacin del cromosoma de E. coli, y este proceso es sin duda ms complejo en los organismos eucariotas (Murray et al., 2001). Las enzimas participantes en el proceso de replicacin del ADN son polimerasas dirigidas por molde que pueden sintetizar la secuencia complementaria de cada cadena con extraordinaria fidelidad. En los eucariotas la replicacin comienza en mltiples sitios a lo largo de la hlice de ADN (Figura 7.30). Estos sitios incluyen una pequea secuencia formada casi exclusivamente por pares de bases AT (esto se conoce como secuencia de concenso, porque el orden de los nucletidos es el mismo en cada
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sitio). La presencia de mltiples sitios de replicacin proporciona un mecanismo para la replicacin rpida de la gran longitud de las molculas de ADN de los eucariotas. Figura 7.30. Replicacin del ADN: orgenes y tenedores de replicacin. ADN eucariota muy largo

Fuente: Champe et al. (2006) Cuando las dos cadenas se destuercen y separan, forman una V en la que ocurre la sntesis activa. Esta regin se denomina tenedor de replicacin. Se mueve a lo largo de la molcula de ADN conforme se produce la sntesis. La replicacin del ADN de cadena doble es bidireccional, as, los tenedores de replicacin se mueven en ambas direcciones a partir del origen, como se observa en la Figura 7.29. Para que se inicie la replicacin del ADN es necesario que un grupo de protenas que forman el complejo precebador reconozca el origen de replicacin. Estas protenas son las encargadas de mantener la separacin de las cadenas originales y de desenredar la doble hlice frente al tenedor de replicacin en avance. Estas protenas incluyen las siguientes: Protena ADN-A: entre 20 y 50 monmeros de protena ADN-A se unen con secuencias especficas de nucletidos al principio de la replicacin, que es muy rica en pares de bases AT. Este proceso que ocupa ATP hace que la cadena doble de ADN se disuelva; o sea que las cadenas se separan y forman regiones localizadas de ADN de cadena sencilla. Protenas de unin con ADN de cadena sencilla (SSB): tambin denominadas protenas desestabilizadoras de la hlice; slo se unen con ADN de cadena sencilla de forma cooperativa, o sea, que la unin de una molcula de protena SSB facilita la unin firme de ms molculas de protena SSB con la cadena de ADN. Las protenas SSB no son enzimas, sirven para cambiar el equilibrio entre el ADN de cadena doble y de cadena sencilla en la direccin de las formas de una sola cadena. Estas protenas mantienen las cadenas de ADN separadas en el rea de origen de la replicacin, lo que brinda el molde de una sola cadena que necesitan las polimerasas y protege al ADN de las nucleasas que dividen al ADN de cadena sencilla.

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Helicasas de ADN: estas enzimas se unen con ADN de cadena sencilla cerca del tenedor de replicacin y luego se mueven a la regin vecina de cadena doble, con lo que obliga a las cadenas a separarse y desenreda la doble hlice. Las helicasas requieren energa que proviene del ATP. Cuando las cadenas se separan, las protenas SSB se unen y previenen la reformacin de la doble hlice (Figura 7.31). Figura 7.31. Protenas encargadas de mantener la separacin de las cadenas originales y desenredar las cadenas originales y desenredar la doble hlice frente al tenedor de replicacin que avanza

Fuente: Champe et al. (2006) Conforme se separan las dos cadenas de la hlice doble, aparece el problema la aparicin de posibles superhlices o supergiros en la regin del ADN frente al tenedor de replicacin. Las superhlices positivas (Figura 7.32) que se acumulan interfieren con el destorcido de la doble hlice. Para resolver este problema, hay un grupo de enzimas llamadas topoisomerasas de ADN que eliminan las superhlices. Figura 7.32. Superhlice positiva producida por la separacin de la cadena de ADN

Fuente: Champe et al. (2006) Las topoisomerasas de ADN tipo I cortan en forma reversible una cadena sencilla de la hlice doble (Figura 7.33). Tienen actividad nucleasa (corte de cadena) y ligasa (reunin de cadena). No requieren ATP, sino que parecen almacenar energa a partir del enlace fosfodister, al cual dividen y utilizan de nuevo la energa para sellar la cadena. Cada vez que se crea una muesca transitoria en una cadena de ADN, la cadena de ADN intacto pasa por la rotura antes que se selle de nuevo, lo que alivia (relaja) las
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superhlices acumuladas. Las topoisomerasas tipo I relajan las superhlices negativas (las que contienen menos giros de la hlice que el ADN relajado) en E. coli y las superhlices negativas y positivas (las que contienen menos o ms giros de la hlice que el ADN relajado) en las clulas eucariotas. Figura 7.33. Accin de las topoisomerasas tipo I de ADN

Fuente: Champe et al. (2006) Las topoisomerasas de ADN tipo II se unen con fuerza a la doble hlice de ADN y forman roturas transitorias en ambas cadenas (Figura 7.34). Luego, la enzima hace que un segundo segmento de ADN de doble hlice pase por la rotura y al final sella de nuevo la rotura. Como resultado, pueden liberarse las superhlices positivas y negativas. Las topoisomerasas de ADN tipo II tambin son necesarias en clulas procariotas y eucariotas para la separacin de molculas entrelazadas de ADN despus de la replicacin cromosmica. La girasa de ADN, una topoisomerasas de ADN tipo II de E. coli, tiene la propiedad inusual de introducir superhlices negativas en el ADN circular relajado con energa proveniente de la hidrlisis del ATP. Esto facilita la replicacin futura del ADN porque las superhlices negativas neutralizan las superhlices positivas introducidas durante la abertura de la doble hlice. Tambin ayuda a la separacin transitoria de las cadenas necesaria durante la transcripcin. Figura 7.34. Accin de la toposiomerasa tipo II de ADN

Fuente: Champe et al. (2006) Las polimerasas de ADN encargadas de copiar los moldes de ADN slo pueden leer las secuencias originales de nucletidos en sentido 35 y sintetizan nuevas cadenas de ADN en direccin 53 (antiparalela). Por tanto, al iniciar con una doble hlice original, los dos nuevos segmentos recin sintetizados de cadenas de nucletidos deben crecer en sentidos opuestos, uno en direccin 53
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hacia el tenedor de replicacin, y el otro en direccin 53 al lado contrario del tenedor de replicacin. Esta hazaa se realiza por un mecanismo distinto en cada cadena. La cadena que se copia en sentido del tenedor de replicacin que avanza se llama cadena lder y se sintetiza casi en forma continua. La cadena que se copia en sentido contrario al tenedor de replicacin se sintetiza en forma discontinua, se copian pequeos fragmentos de ADN cerca del tenedor de replicacin. Estos cortos segmentos de ADN discontinuo, llamados fragmentos de Okazaki, se unen al final para convertirse en una sola cadena continua. La nueva cadena de ADN producida por este mecanismo se llama cadena rezagada (Figura 7.35). Figura 7.35. Elongacin de las cadenas lder y rezagada

Fuente: Champe et al. (2006) Las polimerasas de ADN no pueden iniciar la sntesis de una cadena complementaria de ADN con un molde que slo sea de cadena sencilla. Requieren un cebador de ARN; o sea, una regin corta de doble cadena consistente en bases de ARN emparejadas con el molde de ADN, con un grupo hidroxilo libre en el extremo 3de la cadena de ARN. Este grupo hidroxilo sirve como el primer receptor de un nucletido por la accin de la polimerasa de ADN. En la sntesis de ADN de novo, un segmento corto de ARN, no de ADN, proporciona ese hidroxilo libre 3. Una polimerasa de ARN especfica, llamada primasa, sintetiza los segmentos cortos de ARN (de unos 10 nucletidos de largo) que son complementarios y antiparalelos al molde de ADN. En la cadena doble hbrida resultantes, el U del ARN forma pareja con A del ADN. Estas secuencias cortas de ARN se sintetizan en forma constante en el tenedor de replicacin de la cadena rezagada, pero slo se necesita una secuencia de ARN en el origen de la replicacin en la cadena lder. Los bloques de construccin para este proceso son trifosfatos de 5-ribonuclesido y se libera pirofosfato en la formacin de cada enlace fosfodister. Antes de iniciar la sntesis de cebador de ARN en la cadena rezagada, se ensambla un complejo precebador con varias protenas y se une con la cadena sencilla de ADN, lo que desplaza algunas de las protenas de unin con ADN de cadena sencilla. Este complejo proteico ms la primasa se llama primosoma. Inicia la formacin del complejo de Okazaki al moverse a lo largo del molde para la cadena rezagada en direccin 53, y mientras reconoce peridicamente las secuencias de nucletidos que lo dirigen para crear el cebador de ARN que se sintetiza en direccin 53 (antiparalela a la cadena de ADN molde).

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Las polimerasas de ADN procariotas y eucariotas alargan a la nueva cadena de ADN con la adicin de desolxirribonucletidos, uno a la vez, al extremo 3de la cadena creciente. La secuencia de nucletidos que se agrega depende de las secuencias de bases de la cadena molde con la que se emparejan los nucletidos entrantes. La elongacin de la cadena de ADN est catalizada por la polimerasa III de ADN. Usando el grupo hidroxilo 3del cebador de ARN como receptor del primer desoxirribonucletido, la polimerasa 3de ADN empieza a agregar nucletidos a lo largo del molde de cadena sencilla que especifica la secuencia de las bases en la cadena nueva. La polimerasa III de ADN es una enzima de proceso por lo que permanece unida a la cadena molde mientras se mueve sobre sta y no tiene que alejarse y unirse de nuevo antes de agregar cada nuevo nucletido. La nueva cadena crece en sentido 53, antiparalelo a la cadena original. Los bloques de construccin de nucletido son trifosfatos de 5-desoxirribonuclesido. Se libera pirofosfato (PPi) cuando se agrega cada nuevo nucletido a la cadena en crecimiento. La hidrlisis adicional del pirofosfato en dos fosfatos indica que se usa un total de dos enlaces de alta energa para impulsar la adicin de cada desoxinucletido. Deben estar presentes los cuatro trifosfatos de desoxirribonuclesido (d-ATP, d-TTP, d-CTP y d-GTP) para que ocurra la elongacin. Si es escaso el suministro de alguno de los cuatro, la sntesis de ADN se suspende cuando ese nucletido se agota. Para la supervivencia de un organismo es importante que la secuencia de nucletidos del ADN se replique con la menor cantidad de errores posible. La lectura errnea de la secuencia molde podra originar nutaciones nocivas o mortales. Para asegurar la fidelidad d la replicacin, la polimerasa III del ADN tiene una actividad de correccin de pruebas (exonucleasa 35) adems de su actividad polimerasa 53. Conforme se agrega cada nuevo nucletido a la cadena, la polimerasa III de ADN revisa para confirmar que el nucletido nuevo en verdad concuerda con su base complementaria en el molde. Si no es as, la actividad exonucleasa 35edita el error. La enzima requiere una terminacin hidroxilo 3mal apareada, por lo que no degrada las secuencias de nucletidos emparejadas en forma correcta. La escisin debe hacerse en sentido contrario al de la sntesis. La polimerasa III de ADN contina la sntesis de ADN en la cadena rezagada hasta que se bloquea por la proximidad de un cebador de ARN. Cuando esto ocurre, se retira el ARN y la polimerasa I de ADN llena el hueco (Figura 7.36). Figura 7.36. Eliminacin del cebador de ARN y llenado de los huecos resultantes por la polimerasa I de ADN

Fuente: Champe et al. (2006)


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La polimerasa I de ADN tambin tiene actividad exonucleasa 53 que puede eliminar por hidrlisis el cebador de ARN. Primero, la polimerasa I de ADN localiza el espacio o muesca entre el extremo 3 del ADN recin formado mediante la polimerasa III de ADN y el extremo 5del cebador de ARN adyacente. A continuacin, la polimerasa I de ADN retira por hidrlisis los nucletidos de ARN que le quedan por delante con lo que se mueve en direccin 53 (actividad exonucleasa 53). C onforme retira el ADN, la polimerasa I de ADN lo repone con desoxirribonucletidos y sintetiza ADN en sentido 53 (la actividad de polimerasa 53). Conforme sintetiza ADN, tambin corrige las pruebas de la cadena nueva con su actividad exonucleasa 35 . Esta remocin-sntesis-correccin de pruebas contnua, un nucletido a la vez, hasta que el ARN se degrada por completo y la brecha se llena con ADN. La actividad exonucleasa 53 de la polimerasa I de ADN difiere de la exonucleasa 35 de las polimerasas I y III de ADN en dos aspectos importantes. Primero, la exonucleasa 53 puede retirar un nucletido a la vez de una regin de ADN con bases bien emparejadas. Los nucletidos que retira pueden ser ribonucleidos o desoxirribonucletidos. Segundo, la exonucleasa 53 tambin puede retirar grupos de nucletidos alterados en direccin 53, con lo que elimina de uno a 10 nucletidos de una sola vez. Esta capacidad es importante en la reparacin de algunos tipos de ADN daado. El enlace fosfodister final entre el grupo fosfato 5de la cadena de ADN sintetizada por la polimerasa III de ADN y el grupo hidroxilo 3de la cadena formada por la polimerasa I de ADN est catalizado por la ligasa de ADN. La unin de estos dos segmentos de ADN requiere energa, que en el caso del hombre proviene de la divisin del ATP en AMP + pirofosfato (Figura 7.37) (Champe et al., 2006). Figura 7.37. Formacin de un enlace fosfodister por la ligasa de ADN

Fuente: Champe et al. (2006) El ADN recin replicado se ensambla rpidamente en nucleosomas, y la histona octamrica preexistente y la recin ensamblada se distribuyen al azar en cada brazo de la horquilla de replicacin. En la Figura 7.38 se muestra un mapa conceptual de la estructura y replicacin del ADN.

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Figura 7.38. Mapa conceptual clave de la estructura y replicacin de DNA

Fuente: Champe et al. (2006)

7.2.4. Tipos y sntesis de ARN


Para que la informacin gentica almacenada en el DNA pueda hacerse efectiva debe ser transcripta en el RNA. El DNA sirve slo como molde, es decir que no se modifica durante la transcripcin. Los segmentos que pueden ser transcriptos y que codifican un producto definido se llaman genes. Se calcula que el
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genoma de los mamferos contiene entre 30 000 a 50 000 genes que en total representan menos del 10% del DNA (Koolman y Rhm, 2004). Los cidos ribonucleicos son una clase de polinucletidos que participan, casi todos ellos, en algn aspecto de la sntesis de protenas. Las molculas de ARN se sintetizan en un proceso que se denomina transcripcin. Durante la transcripcin se producen molculas nuevas de ARN mediante un mecanismo semejante a la sntesis de ADN, esto es, a travs de la formacin de apareamientos de bases complementarias. La secuencia de bases del ARN est, por lo tanto, especificada en la secuencia de bases de una de las dos cadenas del ADN. Por ejemplo, la secuencia de ADN 5-CCGATTACG-3 se transcribe en la secuencia de ARN 3-GGCUAAUGC-5. Las secuencias de ADN y ARN complementarias son antiparalelas. Las molculas de ARN se diferencian de las de ADN en los siguientes aspectos: La parte del azcar del ARN es la ribosa en lugar de la desoxirribosa del ADN. Las bases nitrogenadas del ARN se diferencian algo de las observadas en el ADN ya que en vez de timina en el ARN hay uracilo. El ARN es una nica cadena, por lo que puede enrollarse sobre s mismo y formar estructuras tridimensionales singulares y bastante complejas. El 2-OH de la ribosa puede formar enlaces de hidrgeno con grupos moleculares cercanos. Normalmente no es igual el contenido de A y U, as como el de C y G, de una molcula de ARN (McKee y McKee, 2003). Las clases ms destacadas de ARN son los ARN de transferencia, los ARN ribosmicos y los ARN mensajeros, aunque existen otras clases menos abundantes como el ARN heterogneo y ARN nuclear pequeo. En la Figura 7.39 se observan diferentes tipos de estructuras secundarias que se producen en el ARN. Figura 7.39. Estructura secundaria del ARN

Fuente: McKee y McKee (2003) Las molculas de ARN de transferencia (tARN) transportan los aminocidos a los ribosomas para su ensamblaje en las protenas. Representan alrededor del 15% del ARN celular y la longitud promedio de una molcula de tARN es de 75 nucletidos. Debido a que cada molcula de tARN se une a un
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aminocido especfico, las clulas poseen al menos una clase de tARN para cada uno de los 20 aminocidos que se encuentran habitualmente en las protenas. La estructura tridimensional de las molculas de tARN, que se asemeja a una hoja de trbol alabeada, es consecuencia principalmente de un gran apareamiento de bases intracatenario. Las molculas de tARN contienen diversas bases modificadas. La estructura del tARN (Figura 7.40) le permite realizar dos funciones esenciales en las que intervienen los componentes estructurales ms importantes: el 3-terminal y el bucle del anticodn. El 3-terminal forma un enlace covalente con un aminocido especfico. El bucle del anticodn contiene una secuencia de tres pares de bases que es complementaria con el triplete del ADN que codifica el aminocido especfico. La relacin conformacional entre el 3terminal y el bucle del anticodn permite al tARN alinear su aminocido unido de forma adecuada durante la sntesis de protenas. El tARN posee tambin otras tres caractersticas estructurales destacadas, que se denomina el bucle D, el bucle TC y el bucle variable ( es una abreviatura de la base modificada pseudouridina). Se desconoce la funcin de estas estructuras, tal vez estn relacionadas con el alineamiento del tARN dentro del ribosoma o la unin del tARN a la enzima que cataliza la unin del aminocido adecuado. El bucle D recibe este nombre porque contiene dihidrouridina. El bucle TC contiene la secuencia de bases timina, pseudouridina y citosina. Los tARN pueden clasificarse de acuerdo con la longitud de su bucle variable. La mayora (aproximadamente el 80 %) de los tARN tienen bucles variables con 4 5 nucletidos, mientras que otros tienen bucles variables de hasta 20 nucletidos. El ARN ribosmico (rARN) es la forma ms abundante de ARN en las clulas. La estructura secundaria del rARN es muy compleja. Aunque existen diferencias entre las especies en las secuencias primarias de nucletidos del rARN, la estructura tridimensional global de estas molculas est conservada. El rARN es un componente de los ribosomas que son estructuras citoplsmicas que sintetizan protenas. Los ribosomas de los procariotas y eucariotas tienen forma y funcin semejantes, aunque se diferencian en tamao y composicin qumica. Ambos tipos de ribosomas constan de dos subunidades de tamao desigual, que normalmente se denominan en trminos de sus valores de S (S es una abreviatura de la unidad de Svedberg o sedimentacin, que es una medida de la velocidad de sedimentacin de una centrfuga. Debido a que la velocidad de sedimentacin depende del peso molecular y de las formas de una partcula, los valores de S no son necesariamente aditivos). Los ribosomas procariotas (70S) estn formados por una subunidad 50S y una subunidad 30S, mientras que los ribosomas de los eucariotas (80S) contienen una subunidad 60S y una unidad 40S. en cada tipo de subunidad ribosmica se encuentran varias clases diferentes de rARN y protenas, por ejemplo, una subunidad ribosmica eucariota grande tpica contiene tres rARN (5S, 5.8S y 28S) y 49 polipptidos, mientras que la subunidad pequea contiene un rARN 18S y 30 polipptidos. No se conocen bien y se estn investigando las funciones de los rARN (Figura 7.41) y de los polipptidos en los ribosomas. El ARN mensajero (mARN) es el transportador de la informacin gentica desde el ADN para la sntesis de protenas. Las molculas de mARN, que constituye aproximadamente el 5% del ARN celular, varan considerablemente de tamao. Por ejemplo los mARN de E. coli varan desde 500 hasta 6000 nucletidos. El mARN procariota y el mARN eucariota se diferencian en varios aspectos ya que muchos mARN procariotas son policistrnicos (contienen informacin que codifica varias cadenas polipeptdicas), mientras el mARN eucariota codifica un nico polipptido (monocistrnico). Un cistrn es una secuencia de ADN que contiene la informacin que codifica un polipptido y varias seales que se requieren para la funcin del ribosoma. Adems, los mARN procariotas y eucariotas se procesan de manera diferentes. Los mARN procariotas se traducen a protenas por los ribosomas sintetizndose inmediatamente despus, mientras que los mARN eucariotas se modifican en gran medida, dichas modificaciones incluyen la
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formacin de la caperuza (unin de una 7-metilguanosina al residuo 5-terminal), el corte y empalme (eliminacin de los intrones) y la unin de un polmero de adenilato que se denomina cola de poli A. Figura 7.40. Representacin esquemtica de una molcula de tARN indicndose las posiciones de las bases que no varan y las bases que varan con poca frecuencia

Fuente: McKee y McKee (2003) Figura 7.41. Estructura del rARN

Fuente: McKee y McKee (2003)


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Las porciones que codifican para aminocidos se denominan exones y son interrumpidas por los intrones que son las secuencias de intervencin que son removidos en el procesamiento del transcrito primario a mRNA maduro. El ARN heterogneo y el ARN nuclear pequeo desempean funciones complementarias en las clulas eucariotas. Las molculas de ARN nuclear heterogneo (hnARN) son los transcritos primarios del ADN y los precursores del mARN. Los hnARN se procesan por corte y empalme y modificaciones para formar el mARN. El corte y empalme es una eliminacin enzimtica de los intrones de los transcritos primarios. Una clase de molculas de ARN nuclear pequeo (snARN) que contienen entre 90 y 300 nucletidos, que se encuentran formando complejos con varias protenas para formar partculas ribonucleoproteicas nucleares pequeas (snRNP o snurps), participan en las actividades de corte y empalme, y otras formas de procesamiento del ARN (McKee y McKee, 2003). La sntesis de una molcula de RNA a partir de DNA es un proceso complejo que involucra una de las enzimas del grupo de RNA polimerasas y varias protenas asociadas, y dicho proceso se denomina transcripcin. Los pasos generales requeridos para sintetizar el transcrito primario son: iniciacin, elongacin y terminacin. El proceso de sntesis del RNA a partir de un molde de DNA se ha caracterizado mejor en los procariotas. Aunque en las clulas de mamferos la regulacin de la sntesis de RNA y el procesamiento de los transcritos del RNA son diferentes al de los procariotas, el proceso de sntesis de RNA es muy similar en estas dos clases de organismos. Por tanto, la descripcin de la sntesis de RNA en los procariotas es aplicable a los eucariotas, aun cuando las enzimas involucradas y las seales de regulacin son diferentes. La secuencia de ribonucletidos en una molcula de RNA es complementaria a una secuencia de desoxirribonucletidos de una cadena de la molcula de DNA de doble cadena. El RNA transcrito con una polaridad 5 a 3 es complementario a la cadena molde con polaridad 3 a 5 (Figura 7.42). La cadena que se transcribe a una molcula de RNA se conoce como la cadena molde del DNA. Con frecuencia, a la otra cadena se le conoce como cadena codificadora del gen. sta se denomina as debido a que, excepto los cambios de T por U, corresponde exactamente a la secuencia del transcrito primario, que codifica el producto protenico del gen. En el caso de una molcula de DNA de doble cadena que contiene muchos genes, la cadena molde para cada gen, no necesariamente ser la misma cadena de la doble hlice del DNA; en la Figura 7.43 las cabezas de las flechas indican la direccin de la transcripcin (polaridad) y se observa que la cadena molde se lee siempre en la direccin de 3 a 5, mientras que la cadena opuesta se conoce como cadena codificadora debido a que es idntica (excepto por los cambios de T por U) al transcrito de mRNA (el transcrito primario en las clulas eucariotas) que codifica el producto proteico del gen .De esta manera, una determinada cadena de una molcula de DNA de doble cadena servir como cadena de molde para algunos genes, y como cadena codificadora de otros genes. La secuencia de nucletidos de un transcrito de RNA ser la misma (excepto en U que reemplaza a T) que la de la cadena codificadora. La informacin en la cadena molde se lee en direccin de 3 a 5. Figura 7.42. Relacin entre las secuencias en un RNA transcrito y su gen

Fuente: Murray et al. (2001)


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Figura 7.43. Transcripcin de los genes de ambas cadenas del DNA

Fuente: Murray et al. (2001) El RNA polimerasa dependiente de DNA es la enzima responsable de la polimerizacin de los ribonucletidos en una secuencia complementaria de la cadena molde del gen. La enzima se una a un sitio especfico, el promotor, en la cadena molde. Esto es seguido por la iniciacin de la sntesis de RNA en el punto de inicio y el proceso contina hasta que se alcanza una secuencia de terminacin. Una unidad de transcripcin se define como la regin del DNA que se extiende entre el promotor y el terminador. El RNA producido, el cual se sintetiza en direccin 5a 3, es el transcrito primario. En los procariotas, ste puede ser el producto de varios genes continuos; en las clulas de mamferos, por lo general representa el producto de un solo gen. Las terminales 5 del transcrito primario del RNA y el RNA citoplsmico maduro son idnticos. De esta forma, el punto de inicio de la transcripcin corresponde al nucletido 5 del mRNA. Esta posicin se designa +1, lo mismo que el nucletido correspondiente en el DNA. Los nmeros se aumentan conforme la secuencia procede "corriente abajo", esto facilita la localizacin de regiones particulares, como los lmites de intrones y exones. El nucletido del promotor adyacente al sitio de iniciacin de la transcripcin se designa como -1, y estos nmeros negativos aumentan conforme la secuencia procede "corriente arriba", alejndose del sitio de iniciacin. Esto proporciona una forma convencional para definir la localizacin de los elementos reguladores en el promotor. Los transcritos primarios generados por la RNA polimerasa II, son rpidamente encapsulados por las cpsulas de 7-metilguanosina trifosfato que persiste y finalmente aparece, en la terminal 5del mRNA maduro citoplsmico. Al parecer estas cpsulas son necesarias para el subsiguiente procesamiento del transcrito primario en mRNA, para la traduccin del mRNA, y para la proteccin del mRNA en contra del ataque exonucleoltico 53. Cada una de las RNA polimerasas dependientes de DNA parece ser responsable de la transcripcin de diferentes conjuntos de genes. Dichas enzimas son mucho ms complejas que los RNA polimerasas de los procariotas. Todas tienen dos subunidades grandes y un nmero de pequeas subunidades, que puede llegar hasta 14 en el caso de la RNA polimerasa II. Las RNA polimerasas de eucariotas tienen una extensa homologa de aminocidos con los RNA polimerasas de los procariotas. Las funciones de cada una de las subunidades no se comprenden completamente, aunque muchas de ellas podran tener funciones reguladoras, como asistir a la polimerasa en el reconocimiento de secuencias especficas como promotores y seales de terminacin. En las bacterias, el proceso de sntesis de RNA, comprende primero la unin de la molcula de RNA holopolimerasa con el molde en el sitio del promotor. Esta unin es seguida por un cambio conformacional de la RNA polimerasa, y a continuacin el primer nucletido (casi siempre una purina) se une al sitio de iniciacin en la subunidad de la enzima. En presencia de los cuatro nucletidos, la RNA polimerasa se mueve hacia la segunda base en el molde, forma un enlace fosfodister, y la cadena naciente ahora se una al sitio de polimerizacin en la subunidad de la RNA polimerasa. La iniciacin de la formacin de la molcula de RNA sigue con la liberacin del factor , en tanto que la elongacin de la molcula de RNA partir de la terminal 5 a 3 contina en direccin antiparalela de
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su molde. La enzima polimeriza los ribonucletidos en una secuencia especfica, dictada por la cadena molde, e interpretada por las reglas de apareamiento de Watson-Crick. En la reaccin de polimerizacin se libera pirofosfato. Tanto en procariotas como en eucariotas, por lo general un nucletido de purina se polimeriza primero en la molcula de RNA. El trifosfato en 5de este primer nucletido se mantiene en el mRNA de procariotas. ste se elimina en el proceso de formacin de cpsulas en el mRNA de eucariotes. Conforme el proceso de elongacin que contiene la RNA polimerasa central progresa a lo largo de la molcula de DNA, debe ocurrir el desenrrollamiento del DNA para proporcionar acceso para el apareamiento de bases apropiado con los nucletidos de la cadena codificadora. La extensin del DNA desenrrollado es constante a lo largo de la transcripcin y se ha calculado que es cercano a 17 pares de bases por molcula de polimerasa. Parece que la polimerasa dicta el tamao de la regin del DNA desenrrollado, y es independiente de la secuencia de DNA en el complejo. Esto sugiere que la RNA polimerasa se relaciona con una actividad de desenrrollasa que abre la hlice de DNA. El hecho de que la doble hlice del DNA deba desenrollarse y las cadenas deban separarse, por lo menos temporalmente para la transcripcin, implica alguna alteracin en la estructura del nucleosoma de las clulas eucariotas. La topoisomerasa permite la progresin de la RNA polimerasa para prevenir la formacin de complejos superhelicoidales En las bacterias, la terminacin de la sntesis de la molcula de RNA est sealada por una secuencia en la cadena molde de la molcula de DNA; es una seal que se reconoce por una protena de terminacin, el factor rho (); que es una helicasa RNA-DNA dependiente de ATP que rompe el complejo RNA-DNA naciente. Despus de la terminacin de la sntesis de la molcula de RNA, la enzima central se separa del molde de DNA. Con la asistencia de otro factor , la enzima central reconoce a un promotor en el cual se inicia la sntesis de una nueva molcula de RNA. En las clulas eucariotas, la terminacin est menos definida; parece ser que est vinculada a la adicin de la cola polimerasa A3del mRNA y podra involucrar la desestabilizacin del complejo RNA/DNA en una regin de pares de bases A-U. Ms de una molcula de RNA polimerasa puede transcribir la misma cadena molde deun gen de manera simultnea, pero el proceso est en fase y espaciado de tal manera que en cualquier momento cada uno transcribe una porcin diferente de la secuencia de ADN (Murray et al., 2001).

7.2.5. Cdigo Gentico y Sntesis de Protenas


La informacin gentica que se almacena en los cromosomas y se transmite a las clulas hijas mediante la replicacin del ADN se expresa a travs de la transcripcin de ARN y, en el caso del mARN, con la traduccin ulterior en cadenas polipeptdicas (Figura 7.44). La va de sntesis de protenas se llama traduccin porque el lenguaje de la secuencia de nucletidos en el mARN se traduce al lenguaje de una secuencia de aminocidos. El proceso de traduccin requiere un cdigo gentico a travs del cual se expresa la informacin contenida en la secuencia de cidos nucleicos para producir una secuencia especfica de aminocidos. Cualquier alteracin en la secuencia de cidos nucleicos puede conducir a la insercin de in aminocido inapropiado en una cadena polipeptdica, lo que puede producir una enfermedad o la muerte del organismo. Muchas cadenas polipeptdicas se modifican de manera covalente despus de su sntesis para activarlas, alterar sus actividades o dirigirlas a sus destinos finales, dentro o fuera de la clula. El cdigo gentico es un diccionario que identifica la correspondencia entre una secuencia de bases de nucletidos y una secuencia de aminocidos. Cada palabra individual del cdigo se compone de tres bases de nucletidos. Estas palabras genticas se llaman codones (Champe et al., 2006).
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Figura 7.44. Sntesis de protenas o traduccin

Fuente: Champe et al. (2006) Existen 64 secuencias de trinucletidos posibles, de las cuales slo 61 codifican aminocidos. Los tres codones restantes (UAA, UAG y UGA) son seales de parada o de terminacin de la cadena polipeptdica. AUG, el codn de metionina, sirve tambin como seal de comienzo o tambin se denomina codn de iniciacin (McKee y McKee, 2003). Por lo general, los codones se presentan en el lenguaje del ARN mensajero de adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U), sus secuencias de nucletidos siempre se escriben del extremo 5al 3. Las cuatro bases de nucletidos se usan para producir los codones de tres bases (Figura 7.45). Por lo tanto, hay 64 combinaciones diferentes de bases, tomadas tres a la vez. En la Figura 7.45 se muestran los codn es de terminacin de cadena, o de detencin, se muestra de color naranja, y el codn de comienzo habitual, AUG, en verde oscuro. Otros codones de comienzo, que rara vez se emplean, son UUG, AUU y GUG. La tabla o diccionario anterior puede usarse para traducir cualquier secuencia de codn y as reconocer cules aminocidos estn codificados por una secuencia de mARN. Por ejemplo, el codn 5-AUG-3 codifica para metionina. Tres de los codones: UAG, UGA y UAA, no codifican aminocidos sino que son una secuencia de mARN e indican que la sntesis de la cadena peptdica codificada por ese mARN est completa, por lo que se denominan codones de terminacin (Champe et al., 2006).

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Figura 7.45. Cdigo gentico (tal como se escribe en el ARN)

Fuente: Mathews et al. (2005) El uso del cdigo gentico es muy consistente en todos los organismos vivos. Se asume que una vez que el cdigo gentico estndar evolucion en los organismos primitivos, cualquier mutacin que alterara la forma en que se traduca el cdigo habra ocasionado la alteracin de la mayora de las secuencias proteicas, o de todas, lo que seguro habra sido mortal. La adopcin del cdigo gentico se describe como un accidente congelado en el tiempo (Champe et al., 2006). Las caractersticas del cdigo gentico descritas por McKee y McKee (2003) son:

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Degenerado: tambin llamado redundancia por Champe et al. (2006) y se refiere a que cualquier sistema de codificacin se denomina degenerado cuando diversas seales tienen el mismo significado. El cdigo gentico es parcialmente degenerado debido a que la mayora de los aminocidos estn codificados por varios codones. Por ejemplo, la leucina est codificada por seis codones diferentes (UUA, UUG, CUU, CUC, CUA y CUG). De hecho, la metionina (AUG) y el triptfano (UGG) son los nicos aminocidos que estn codificados por un nico codn. Especfico: cada codn es una seal para un aminocido especfico. La mayora de los codones que codifican el mismo aminocido poseen secuencias semejantes. Por ejemplo, en cada uno de los cuatro codones de serina (UCU, UCC, UCA y UCG) la primera y la segunda base son idnticas. Por consiguiente, una mutacin puntual en la tercera base de un codn de serina no sera lesiva. No solapante y sin puntuacin: la secuencia codificante del mARN se lee por un ribosoma que comienza desde el codn de iniciacin (AUG) como una secuencia contnua cogiendo cada vez tres bases hasta que se llega a un codn de parada. Se denomina marco de lectura a un conjunto de codones o tripletes contiguos en un mARN. El trmino marco de lectura abierto describe un conjunto de secuencias de bases tripletes de un mARN que contiene un codn de parada. Universal: con unas pocas excepciones menores, el cdigo gentico es universal. En otras palabras, el examen del proceso de traduccin en las especies investigadas ha descubierto que las seales de codificacin de los aminocidos son siempre las mismas. Se necesitan una gran cantidad de componentes para la sntesis de una cadena polipeptdica. Incluyen todos los aminocidos que se encuentran en el producto terminado, el mARN que va a traducirse, las molculas de tARN, ribosomas funcionales, fuentes de energa y enzimas, as como los factores proteicos necesarios para la iniciacin, elongacin y terminacin de la cadena polipeptdica. Todos los aminocidos que aparecern al final en la protena terminada deben estar presentes al momento de la sntesis. Si falta un aminocido la traduccin se detendr en el codn que especifica ese aminocido. Se necesita por lo menos un tipo especfico de tARN por cada aminocido. En humanos, hay por lo menos 50 especies de tARN, mientras que las bacterias contienen de 30 a 40 especies. Como slo hay 20 aminocidos diferentes transportados por los tARN, algunos aminocidos tienen ms de una molcula especfica de tARN, mxime los aminocidos codificados por varios codones. Cada molcula de tARN tiene un sitio de unin para un aminocido especfico en su extremo 3. El grupo carboxilo del aminocido tiene un enlace ster con el 30-hidroxilo de la fraccin ribosa del nucletido de adenosina en el extremo 3del tARN. Se dice que un tARN est cargado cuando se une en forma covalente con un aminocido; cuando el tARN no se une con un aminocido, se describe como descargado. Se dice que el aminocido unido con la molcula de tARN est activado. Cada molcula de tARN tambin contiene una secuencia de nucletidos de tres bases, el anticodn, que reconoce un codn especfico en el mARN. Este codn especifica la insercin del aminocido en la cadena peptdica creciente por ese tARN. Por su capacidad para transportar un aminocido especfico y para reconocer el codn de ese aminocido, los tARN se conocen como molculas adaptadoras. Las sintetasas de aminoacil-tARN son una familia de enzimas necesaria para unir los aminocidos con sus tARN correspondientes (Figura 7.46). Cada miembro de esta familia reconoce un aminocido especfico y al tARN que le corresponde. Por tanto, estas enzimas implementan el cdigo gentico
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porque actan como diccionarios moleculares que pueden leer tanto el cdigo de tres letras de los cidos nucleicos, como el cdigo de 20 letras de los aminocidos. Cada sintetasa de aminoacil-tARN cataliza una reaccin de dos pasos que produce un enlace covalente entre el grupo carboxilo de un aminocido y el extremo 3de su tARN correspondiente. La reaccin general requiere ATP, el cual se divide hasta AMP y PPi. La especificidad extrema de la sintetasa para reconocer tanto al aminocido como a su tARN especfico es lo que explica la fidelidad de la traduccin del mensaje gentico. Adems, las sintetasas tienen una actividad de correccin de pruebas o edicin que les permite eliminar los aminocidos mal cargados de la molcula de tARN. Figura 7.46. Unin de un aminocido especfico con su tARN correspondiente mediante la sintetasa de aminoacil-tARN (E)

Fuente: Champe et al.(2006) Debe estar presente el mARN especfico necesario como molde para la sntesis de la cadena polipeptdica deseada. Los ribosomas son grandes complejos de protena y rARN (Figura 7.47). Consisten en dos subunidades, una grande y otra pequea, cuyos tamaos relativos casi siempre se mencionan en trminos de su coeficiente de sedimentacin, o valores S (Svedberg). Su funcin es de fbricas en las que ocurre la sntesis de protenas. Los ribosomas procariotas contienen tres molculas de rARN, en tanto los eucariotas contienen cuatro molculas de rARN. Los rARN tienen regiones extensas de estructura secundaria originadas del emparejamiento de bases entre secuencias complementarias de nucletidos en porciones diferentes de la molcula. La formacin de regiones intramoleculares de doble cadena es comparable a la que se observa en el tARN.

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Figura 7.47. Composicin de los ribosomas

Fuente: Champe et al.(2006) Existe una cantidad mucho mayor de protenas ribosomales en los ribosomas eucariotas que en los procariotas. Estas protenas tienen varios papeles en la estructura y funcin del ribosoma y sus interacciones con otros componentes del sistema de traduccin. El ribosoma tiene tres sitios de unin para las molculas de tARN, los sitios A, P y E, y cada uno abarca varias subunidades. En conjunto cubren tres codones vecinos. Durante la traduccin, el sitio A se une con un aminoacil-tARN entrante segn la direccin del codn que ocupe en ese momento este sitio. Este codn especifica el siguiente aminocido que se va a agregar a la cadena peptdica en formacin. El codn P est ocupado por el peptidil-tARN. Este tARN transporta la cadena de aminocidos ya formada. El sitio E est ocupado por el tARN vaco que est a punto de salir del ribosoma. En las clulas eucariotas, los ribosomas estn libres en el citosol o en estrecha relacin con el retculo endoplsmico rugoso (RER). Los ribosomas unidos con el RER se encargan de sintetizar protenas que deben exportarse de la clula; las destinadas a integrarse en las membranas plasmticas, del retculo endoplsmico o complejo de Golgi y las que se incorporan en los lisosomas. Las mitocondrias contienen su propio conjunto de ribosomas y su propio ADN circular nico. Los factores de iniciacin, elongacin y terminacin (o liberacin) son necesarios para la sntesis de pptidos. Algunos de estos factores proteicos tienen una funcin cataltica, otros parecen estabilizar la maquinaria de sntesis. Se necesita la divisin de cuatro enlaces de alta energa para la adicin de un aminocido a la cadena polipeptdica en crecimiento: dos del ATP en la reaccin de la sintasa de aminoacil-tARN (uno en la remocin del pirofosfato y otro en la hidrlisis ulterior del PPi en fosfato orgnico por accin de la pirofosfatasa) y dos ms de GTP (uno para unir el aminoacil-tARN con el sitio A y otro para el paso de traslado). Se necesitan molculas adicionales de ATP y GTP para la iniciacin y terminacin de la sntesis de la cadena polipeptdica.
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El reconocimiento de un codn particular en una secuencia de mARN se realiza mediante la secuencia del anticodn del tARN. Algunos tARN reconocen ms de un codn para un aminocido determinado. La unin del anticodn del tARN con el codn del mARN sigue las reglas de unin complementaria y antiparalela, es decir, que el codn del mARN se lee 53 por un anticodn que forme pareja en orientacin invertida (35). Cuando se escriben las secuencias de los codones y anticodones, la secuencia del nucletido siempre debe escribirse en el orden 53. El mecanismo por el cual los tARN pueden reconocer ms de un codn para un aminocido especfico se describe como la hiptesis del bamboleo, en la que la base en el extremo 5del anticodn (la primera base del anticodn) no tiene una definicin espacial tan estricta como las otras dos bases. El movimiento de esa primera base permite el emparejamiento de bases no tradicional con la base 3del codn (la ltima base del codn). Este movimiento se llama bamboleo y permite que un solo tARN reconozca ms de un codn. Como resultado del bamboleo, no es necesario que haya 61 especies de tARN para leer los 61 codones que codifican para aminocidos. La va de la sntesis de protena traduce el alfabeto de tres letras de las secuencias de nucletidos en el mARN en el alfabeto de 20 letras de los aminocidos que constituyen las protenas. El mARN se traduce desde el extremo 5al extremo 3, lo que produce una protena sintetizada desde el extremo amino terminal a su extremo carboxilo. Los mARN procariotas a menudo tienen varias regiones codificadoras; o sea, que son policistrnicos. Cada regin codificadora tiene su propio codn de iniciacin y produce una especie separada de polipptido. En contraste, cada mARN eucariota codifica slo una cadena polipeptdica, es monocistrnico. El proceso de traduccin se divide en tres pasos: iniciacin, elongacin y terminacin. Las cadenas polipeptdicas producidas pueden modificarse despus de la traduccin. La sntesis proteica de los eucariotas se parece a la de los organismos procariotas en la mayora de los detalles.

Iniciacin de la sntesis de protenas: La iniciacin de la sntesis de protenas compromete el


ensamble de los componentes del sistema de traduccin antes que se forme un enlace peptdico. Estos componentes ncluyen dos subunidades ribosomales, el mARN que va a traducirse, el aminoacil-tARN especificado por el primer codn del mensaje, GTP (que proporciona energa para el proceso) y factores de iniciacin que facilitan el ensamble de este complejo de iniciacin. En los procariotas se conocen tres factores de iniciacin (IF-1, IF-2 e IF3), mientras que en los eucariotas hay por lo menos diez (designados eIF, para indicar su origen eucariota). Hay dos mecanismos por los cuales el ribosoma reconoce la secuencia de nucletidos que inicia la traduccin. Un tARN iniciador que entra al sitio P del ribosoma reconoce el codn AUG al principio del mensaje. Esta identificacin se facilita por la accin de IF-2 en E. coli y de varios eIF en humanos. Slo el tARN iniciador entra al sitio P, todos los dems tARN cargados entran en el sitio A. en las bacterias y en las mitocondrias, el tARN iniciador transporta una metionina N-formilada (Figura 7.48). El grupo formilo se agrega a la metionina despus que el aminocido se une con el tARN iniciador por accin de la enzima transformilasa, que emplea tetrahidrofolato de N10-formilo como donador de carbono. En los eucariotas el tARN iniciador trasporta una metionina que no lleva un grupo formilo. Tanto en las clulas procariotas como en las mitocondrias, esta metionina N-terminal casi siempre se elimina antes de completar la protena (Figura 7.49).

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Figura 7.48. Generacin del iniciador N-formil-metionil-tARN (fMet-tARN)

Fuente: Champe et al. (2006)

Elongacin en la sntesis de protenas: La elongacin de la cadena polipeptdica compromete


la adicin de aminocidos al extremo carboxilo de la cadena en crecimiento (Figura 7.49). Durante la elongacin, el ribosoma se mueve del extremo 5al extremo 3del mARN que se traduce. En E. coli, la entrega del aminoacil-tARN cuyo codn es el siguiente en el molde de mARN en el sitio ribosomal A se facilita por los factores de elongacin EF-Tu y EF-Ts, y requiere GTP. En los eucariotas, los factores de elongacin comparables se designan eEF. La formacin de los enlaces peptdicos est catalizada por la peptidiltransferasa (Figura 7.50), una actividad intrnseca del rARN 23S que se encuentra en la subunidad ribosomal 50S. Como este rARN cataliza la reaccin, se conoce como una ribozima. Despus que se forma el enlace peptdico, el ribosoma avanza tres nucletidos hacia el extremo 3del mARN. Este proceso se conoce como translocacin y en E. coli necesita la participacin de EF-G y el gasto de GTP (las clulas eucariotas tienen requerimientos similares. Esto produce el movimiento del tARN no cargado al sitio ribosomal E (antes de liberarse) y el movimiento del peptidil-tARN hacia el sitio P (Champe et al., 2006). La traduccin comienza en el extremo 5 del mARN y el ribosoma avanza a lo largo de la molcula de ARN. Gracias a la longitud del mARN, casi siempre puede haber ms de un ribosoma que traduzca un mensaje. Este complejo de un mARN con varios ribosomas se llama polisoma o polirribosoma que traducen al mismo tiempo un mARN (Figura 7.52).

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Figura 7.49. Pasos en la sntesis de protenas en procariotas (traduccin)

Fuente: Champe et al. (2006)

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Figura 7.50. Formacin de un enlace peptdico

Fuente: Champe et al. (2006)

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Figura 7.51. Continuacin de pasos en la sntesis de protenas en procariotas (traduccin)

Fuente: Champe et al. (2006)

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Figura 7.52. Estructura de un polirribosoma

Fuente: Champe et al. (2006) Aunque la mayor parte de la sntesis de protenas ocurre en el citoplasma de las clulas eucariotas, muchas protenas estn destinadas a realizar sus funciones en organelos celulares especficos. Por lo general, estas protenas contienen secuencias de aminocidos que las dirigen a su localizacin final. Por ejemplo, las protenas nucleares contienen una seal de localizacin nuclear, en tanto las protenas mitocondriales tienen una secuencia de entrada mitocondrial. La expresin gentica por lo general est regulada al nivel de la transcripcin, la velocidad de la sntesis de protenas a veces tambin est regulada. Por ejemplo, el hem estimula la traduccin general porque previene la fosforilacin del factor eucariota de iniciacin el IF-2, que slo est activo en su forma no fosforilada. La traduccin de algunas molculas de mARN est regulada por la unin de protenas reguladoras, que a veces bloquean la traduccin (por ejemplo, del mARN de la ferritina) y a veces estabilizan el mARN para prolongar su tiempo de vida (por ejemplo, el mARN del receptor para transferrina). En presencia de las cantidades adecuadas de hierro, estas protenas reguladoras se separan de las molculas de mARN, lo que aumenta el ritmo de sntesis de la ferritina y disminuye el ritmo de sntesis del receptor de transferrina. Muchas cadenas polipeptdidicas se modifican en forma covalente, ya sea mientras estn unidas con el ribosoma o cuando se completa su sntesis. Como las modificaciones ocurren despus del principio de la traduccin, se llaman modificaciones posteriores a la traduccin. Estas modificaciones incluyen remocin de una parte de la secuencia traducida o la adicin covalente de uno o ms grupos qumicos necesarios para la actividad proteica. A continuacin Champe et al. (2006) menciona algunos de los tipos de modificacin posterior a la traduccin: Recorte: muchas protenas destinadas para secrecin celular al principio son molculas precursoras grandes funcionalmente inactivas. Algunas proteasas especializadas deben retirar algunas porciones de la cadena, lo que produce la liberacin de una molcula activa. El sitio celular de la reaccin de separacin depende de la protena que va a modificarse. Por ejemplo, algunas protenas precursoras se dividen en el retculo endoplsmico o en el aparato de Golgi; otras en las vesculas secretoras en desarrollo (por ejemplo la insulina), y otras, como la colgena, se dividen despus de la secrecin. Los cimgenos son precursores inactivos de las enzimas secretadas (incluidas las proteasas necesarias para la digestin). Se activan mediante divisin cuando llegan a sus sitios de accin adecuados. Por ejemplo, el cimgeno pancretico tripsingeno se activa en tripsina en el intestino delgado. La sntesis de enzimas como cimgenos protege a la clula de ser digerida por sus propios productos Alteraciones covalentes: las protenas, tanto enzimticas como estructurales, pueden activarse o desactivarse mediante la unin covalente de diversos grupos qumicos: como por fosforilacin, glucosilacin, hidroxilacin.

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Degradacin de las protenas: las protenas defectuosas o destinadas a un recambio rpido se marcan para su destruccin con la unin de ubiquinina, una pequea molcula muy conservada. Las protenas con esta marca se degradan con rapidez en un componente celular llamado proteosoma, que es un sistema proteoltico complejo dependiente de ATP que se localiza en el citosol. En la Figura 7.53 se muestra un resumen del flujo de la informacin gentica. Figura 7.53. Flujo de informacin gentica

Fuente: Champe et al. (2006)


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7.2.6. Integracin del metabolismo de carbohidratos, lpidos y nitrogenado


Este tema se encuentra bsicamente ejemplificado con esquemas como los que se muestran en la Figura 7.13, en la Figura 7.54 y en la Figura 7.55. Figura 7.54. Diagrama de flujo resumiendo las relaciones mutuas entre los metabolismos de carbohidratos, lpidos y protenas

Fuente: Toporek (1984)


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Figura 7.55. Esquema del aporte metablico de los distintos tejidos

Fuente: Herrera (1986)

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Bibliografa
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