Este kit sirve para medir C3 C4 humanos en suero y otros fluidos biolgicos.

. REACTIVOS Placas RID (envasadas en sobres hermticos): Estas contienen anticuerpo monoespecifico

contra C3 y C4 en gel de agarosa. Pueden realizarse hasta catorce (14) muestras en una pasada (incluyendo calibrador(es)). Conservantes: Azida sdica 0,099%, cido E-amino-n-caproico (EACA) 0,1%, Timerosal (etilmercuriotiosalicitalo sdico, slo C4) 0.01%, Benzamidina 0,01%. 4.2 Calibradores. Se suministran en forma lquida estabilizada como un set conteniendo concentraciones de C3 y C4 alta, media y baja. Estas concentraciones indicadas en las etiquetas de los viales han sido obtenidas por comparacin con el Material de Referencia Internacional CRM470. Conservantes: Azida sdica 0,099%, cido E-aminon- caproico (EACA) 0,1%, Benzamidina 0,01%. 4.3 Solucin Albmina de Suero Bovino (BSA) 7%: Para el empleo en las diluciones. Se suministra de forma liquida estabilizado. Conservantes: Azida sdica 0,099%, EACA 0,1%, Benzamidina 0,01%. 4.4 Suero Control: Se suministra en forma liquida estabilizada. La concentracin esperada de C3 y C4 est indicada en la etiqueta del vial. Conservantes: Azida sdica 0,099%, EACA 0,1%, Benzamidina 0,01%. 5 ADVERTENCIAS El material de partida para la elaboracin de los calibradores y controles proviene de sangre humana. Cada una de las muestras han sido examinadas y libres de anticuerpos del virus del Sndrome de Inmunodeficiencia Humana (HIV 1 &2), Hepatitis C as como antgenos superficiales de Hepatitis B (HBsAg). No obstante, hasta la fecha no existen mtodos seguros para la exclusin de estos agentes infecciosos ni de otros. Por lo tanto, deben tratarse los reactivos como potencialmente infecciosos. Tanto la manipulacin como los mtodos de eliminacin de desechos debern realizarse conforme a la normativa de materiales infecciosos y solo personal adecuadamente instruido deber efectuar el test. Las placas RID y otros componentes del kit contienen azida sdica 0,099%, y deben tratarse segn las medidas de seguridad correspondientes. Debe evitarse tanto la ingesta como el contacto con la piel y las mucosas. En caso de contacto, aclarar con abundante agua y consultar a un mdico. La azida sdica puede formar azidas metlicas explosivas en contacto prolongado con tubos de plomo o cobre. Tras la eliminacin aclarar con gran cantidad de agua con el fin de evitar depsitos de azida. Se recomienda seguir el procedimiento descrito en estas instrucciones de empleo. De no seguir estas instrucciones, no se pueden garantizar los resultados. NO SE PUEDEN mezclar reactivos con diferentes nmeros de lote ni utilizar conjuntamente. En caso de realizar gran cantidad de pruebas, deber tenerse en cuenta que todos los reactivos sean del MISMO LOTE. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El kit sin estrenar es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase

almacenndolo entre 2 y 8 C. NO CONGELAR! Las placas RID deben guardarse entre 2 y 8 C. A mayor o inferior temperatura se deterioran! Una congelacin destruir el gel, por lo que debern estar alejados de los elementos congeladores del frigorfico. Asimismo debern evitarse temperaturas elevadas, dado que el gel perdera humedad, afectando a su funcin. Las placas no estrenadas debern almacenarse planas y con la cara superior hacia abajo (la etiqueta est en la cara superior), con el fin de prevenir en los pocillos una acumulacin de condensacin. Tratar las placas con cuidado para evitar deteriorar el gel. Los calibradores y controles no abiertos deben guardarse entre 2 y 8 C. Una vez abiertos son estables durante una semana a una temperatura entre 2 y 8 C. Para un almacenamiento ms largo, debern ser divididos en alcuotas y congelados (-20 C o ms bajo). Todos los dems reactivos deben almacenarse entre 2 y 8 C. 7 TOMA Y PREPARACIIN DE LAS MUESTRAS Para este test deben utilizarse muestras suero frescas o congeladas (-20 C). No deben emplearse suero contaminado microbiolgicamente, hemolizado o muy lipmico as como aquellas muestras que contengan partculas. Las muestras de suero se deben recolectar mediante extraccin intravenosa y separar rpidamente el suero del coagulo con el fin de evitar hemlisis. Las muestras pueden almacenarse entre 2 8 C hasta 48 horas antes del anlisis. Para una conservacin ms prolongada se recomienda dividir en alcuotas y congelar a -20C las muestras. Evitar repetidas congelaciones y descongelaciones. Las placas RID C3 contienen anticuerpos anti C3c, los cuales reaccionarn con C3 y con el producto de degradacin C3c. Por lo tanto, medirn la concentracin combinada de C3 y C3c, la cual es satisfactoria para la mayora de las propuestas. Si se debe medir C3 intacto solamente, entonces deben recolectarse muestras de plasma (no suero) en tubos de EDTA-Futano que previenen la degradacin de C3. C3 puede tambin ser convertido completamente en C3c antes de su medicin, mediante tratamiento con inulina (3 g/L durante una hora a 37 C). Una situacin anloga existe tambin para C4, pero ste es menos susceptible a la degradacin que C3, por lo que se encuentran niveles significativos de C4c solamente en muestras viejas Para diluciones (muestras, controles) se deber utilizar exclusivamente la albmina de suero bovino (BSA) incluida en este kit con el fin de mantener la viscosidad. De todas formas, se pueden comparar los resultados con los obtenidos con los calibradores que tienen una viscosidad similar al suero humano. 8 METODOLOGA (Al final de estas instrucciones se hace un resumen del procedimiento) 8.1 Contenido: 8.1.1 3 x Human Complement C3 o C4 NL Bindarid (Placas de Inmunodifusin radial embaladas en sobres hermticos). 8.1.2 8 x Gel Dividers (Divisores de Gel) 8.1.3 1 x Human Complement C3 o C4 NL Calibrator (llquid) Calibrador (lquido) 8.1.4 1 x 5mL 7% BSA Solution Solucin BSA 7%

8.1.5 1 x Human Complement C3 and C4 Control Serum (liquid) Control (lquido) 8.1.6 1 Instrucciones incluyendo tabla de referencia RID. 8.2 Materials necesarios y no suministrados: 8.2.1 Equipamiento para la coleccin y preparacin de las muestras, p. Ej. tubos de muestras, centrfuga, etc. 8.2.2 pipetas para una adecuada dilucin de las muestras cuando se requiera. 8.2.3 Micropipetas para la aplicacin de las muestras. Estas debern dispensar volmenes de 5 l exactos. Recomendamos las Binding Site Micropipettes (Artculo AD041) o jeringuillas Hamilton. 8.2.4 Lupa de joyero (Artculo AD040) para un aumento y medicin exacta del dimetro del aro precipitado hasta 0,1 mm. 8.2.5. Papel grfico.

PROCEDIMIENTO Tabla de Referencia RID. Este mtodo no necesita la confeccin de una curva de calibracin las concentraciones correspondientes a cada dimetro de aro se leen directamente de la tabla de referencias RID. Para garantizar de que se haya alcanzado el tamao del aro completo la duracin de difusin debe ser de cmo mnimo 72 horas. Para la verificacin debe incluirse en cada placa un calibrador sin diluir. Incubacin Tras la aplicacin de las muestras se debe cerrar la tapa e incubar plana con la tapa hacia arriba a temperatura ambiente (20 24 C). Bajo ninguna circunstancia se puede secar el gel durante la incubacin! Por ello se deben incubar las placas dentro de los sobres hermticos bien cerrados o bien dentro de una cmara hmeda (caja de plstico con tapa con toallitas hmedas). La incubacin mnima para el mtodo TRES es de 18 horas y para la difusin completa (mtodos UNO y DOS) es de 48 horas. La temperatura influye en el dimetro del aro final, incubando a una temperatura de 20-24 C el dimetro para el calibrador alto es de 8 mm (0,3mm). Se deben evitar temperaturas extremas. 8.7 Control de Calidad. El suero control debe ser manipulado exactamente igual que la muestras. Los valores obtenidos de cada control no debe sobrepasar el 10% de la concentracin indicada en la

etiqueta 9 MEDICIN E INTERPRETACIN DE RESULTADOS Tras el tiempo de difusin necesario, se deben medir los dimetros con una precisin de 0,1 mm con una lupa de joyero o un lector RID. En la lectura con lupa debe utilizarse una luz brillante de costado y un fondo oscuro. En caso de tener dificultades, ver la placa a simple vista y marcar los bordes del halo con agujas. De esta forma se puede medir ms fcilmente la distancia. Nota: Con los mtodos UNO y DOS los dimetros deben estar completamente formados. Si hubiera alguna duda, se deber volver a medir transcurridas 24 horas para asegurarse que los dimetros no han aumentado. El calibrador alto debe dar un dimetro de aro de 8,0 mm 0,3 mm al completo. Si el dimetro de aro estuviera fuera de este rango, ver resolucin de problemas (seccin 10.3). Procedimiento UNO La concentracin de C3/C4 en cada muestra ensayada puede ser leda directamente de la Tabla de Referencia RID, siempre que se haya aplicado sin diluir como se recomienda. Las muestras cuyos dimetros de halo sean mayores que el del calibrador alto, debern considerarse como de concentracin aproximada, ya que existe la posibilidad de que no hayan difundido a la totalidad. Tales muestras pueden inducir a una reduccin de anticuerpos locales afectando al tamao de los dimetros de halo adyacentes. stas muestras debern ser testadas de nuevo, empleando una dilucin adecuada. Muestras cuyos dimetros de halo sean inferiores a los lmites inferiores de la tabla de referencia RID, debern testarse de nuevo con una mayor concentracin (ver seccin 8.3.4). Al calcular los resultados se debe tener en cuenta cualquier cambio en la dilucin recomendada. Ejemplo: Muestra ejemplo Dilucin Dimetro halo (mm) Valor de la Tabla

(mg/L) Concentracin Muestra Original (mg/L) C3 Suero A Sin diluir 6.4 888 888 C3 Suero B Sin diluir >10.0 >2590 >2590 C3 Suero B 1/2 7.8 1460 2920* Clculo como sigue: Valor de la Tabla x Dil. Recomendada / Dil. Real. Ejemplo: 1460mg/L x (1)/(1/2). LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 10.1 En el procedimiento UNO, los resultados generados de halos con dimetros mayores que el dimetro del halo del calibrador alto (por ejemplo 8 mm) deben ser considerados como aproximados. VALORES ESPERADOS Concentraciones en suero adulto normal (determinadas utilizando estos kits):

Concentraciones altas y bajas son asociadas numerosas condiciones diferentes (ver Seccin 2). Los datos suministrados han sido generados de un nmero limitado de donantes normales de sangre britnicos y slo son orientativos. Se recomienda encarecidamente que cada usurario debera generar sus propios rangos de concentracin C3 / C4 en condiciones clnicas apropiadas. CARACTERSTICAS

12.1 Precisin La precisin (repetitividad) de este kit se expresa como la media y el porcentaje de Coeficiente de variacin (CV).

TABLA DE REFERENCIA RID Tabla de Referencia RID para Complemento C3 & C4 humano Concentraciones en mg/L.