Sie sind auf Seite 1von 96

INFECIILE ZOOANTROPONOZE

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL ANTRAXULUI, TULAREMIEI, BRUCELOZEI I PESTEI

1.

2. 3. 4.

Zooantroponozele reprezint maladii ale animalelor care pot fi transmise oamenilor n rezultatul unui contact direct sau indirect cu populaii animale infectate. Unele dintre aceste infecii - antraxul, tularemia, pesta, bruceloza fac parte din categoria infeciilor extrem de periculoase. Sunt foarte contagioase (transmitere aerogen, alimentar, prin contact direct, receptivitate general) Se manifest nu doar ca epidemii, ci i ca pandemii Reprezint infecii cu evoluie foarte grav Agenii cauzali sunt rezisteni n mediul extern

Microbiologia i diagnosticul de laborator al antraxului


Clasificarea: Familia Bacillaceae Genul: Bacillus Specii: Bacillus anthracis (patogen, agentul antraxului) Bacillus cereus (intoxicaii alimentare), Bacillus polymyxa (genul Paenibacillus), Bacillus brevis (genul Brevibacillus), Bacillus subtilis bacili antracoizi, produceni de AB Bacillus anthracis a fost prima bacterie la care a fost demonstrat rolul ei n patogenia unei infecii. n 1877, Robert Koch a izolat microorganismul n cultur pur, demonstrnd capacitatea lui de a forma endospori i a produs antraxul experimental inoculndu-l la animale.

Caracterele morfobiologice ale B.anthracis Bacil mare (5-6 m x 1 m), cu extremitile drepte (tiate), gram-pozitiv, imobil (antracoizii sunt mobili), n produse patologice se prezint sub form de lanuri scurte, iar n cultur lanuri lungi (tulpin de bambus). Tulpinile virulente formeaz capsul polipeptidic (acidul D-glutamic). Sporul este ovoid, n poziie central, nu deformeaz celula. Sporogeneza are loc n cultur, n sol i n esuturi i exsudate din animale moarte (n prezena oxigenului), dar nu n snge sau esuturi de animale vii.

Caractere de cultur

B.anthracis nu este exigent nutritiv, cultiv pe medii uzuale. Facultativ-anaerob, t optim 35-37 grade, pH 7-7,4. Peste 24 ore de incubare formeaz colonii R, mari, cu contur neregulat, opace, plate, uscate, rugoase (coam de leu, cap de meduz). Nehemolitice pe gelozsnge (antracoizii sunt hemolitici). Pe geloz-ser, n exces de CO2, formeaz colonii S (producerea capsulei). Pe mediu cu 0,5-1 UI de penicilin B.anthracis formeaz lanuri din forme globulare - colier de perle (proprietate absent la antracoizi). n bulion peptonat formeaz flocoane la fundul eprubetei, cu supernatantul clar. B.anthracis este sensibil la fagul gamma.

The following figures (5, 6, and 7) from the CDC are reliable images of Bacillus anthracis grown as described in the figure legends.

Caractere biochimice Activitate proteolitic lichefiaz gelatina n form de brad inversat, peptonizeaz laptele, diger serul coagulat, nu produce H2S. Activitate zaharolitic fermenteaz unele glucide: glucoza, maltoza, zaharoza, tregaloza, etc. Nu fermenteaz lactoza i arabinoza. Rezistena n mediul extern: formele vegetative sunt slab rezistente, sporii rmn viabili n sol decenii, se distrug la fierbere n 30-40 min.

1.

Factori de patogenitate Capsula polipeptidic, codifict de plasmida pX02. Inhib fagocitoza i puterea bactericid a sngelui. Capsula joac un rol important n etapele iniiale ale infeciei. Formarea capsulei are loc in vivo i in vitro, pe medii cu ser i n atmosfer cu 5 % CO2.

2. Exotoxina antraxului, codificat plasmidic (pX01)


Este constituit din 3 componente: Factorul I, edematogen (EF), care este o adenilatciclaz. Acumularea de cAMP duce la modificarea permeabilitii membranare cu producerea edemului. inta celulele endoteliale (efect - oc hipovolemic, oc septic) Factorul III, letal (LF), responsabil de efectele letale ale toxinei anthrax. Este o proteaz Zn++ dependent care induce producerea citokinelor de ctre macrofage i limfocite (efect recie inflamatoare, oc septic) Factorul II, antigen protector (PA), induce sinteza Ac antitoxici protectori. PA este responsabil de fixarea toxinei pe receptorii celulelor sensibile.

Aparte, aceti factori exercit activitate biologic nesemnificativ la animal. Din contra, combinaii din doi sau trei factori toxici determin urmtoarele consecine la animale experimentale: PA+LF = activitate letal PA+EF = produce edem PA+LF+EF = edem i necroz cu efect letal EF+LF = inactiv Acest experiment sugereaz c toxina antraxului are structur clasic de citotoxin bacterian de tip A-B cu PA n calitate de B-fragment (de fixare pe receptori celulari) i cu factorii EF i LF cu funcie de fragment A (activ), care acioneaz n interiorul celulei.

1.

2.

3.

Structura antigenic a B.anthracis Ag polipeptidic capsular (induce Ac neprotectori) Ag polizaharidice somatice termostabile (depistate n reacia de precipitare Ascoli) Toxina (componentul PA), induce formarea Ac protectori, neutralizani

Epidemiologia i patogeneza antraxului Sursa de infecie animalele erbivore bolnave de antrax (ovine, caprine, bovine, suine). Solul contaminat cu spori este un rezervor de germeni important i permanent (decenii). Transmiterea: - prin contact direct cu animalele bolnave sau produse contaminate (carne, piei, ln, blan, etc), puni i nutreuri contaminate, cu ptrunderea agentului prin tegumentul lezat - aerogen, prin inhalarea sporilor de B.anthracis - pe cale alimentar (consum de carne de la animale bolnave de antrax insuficient prelucrate termic) n majoritatea cazurilor antraxul se manifest ca boal profesional a ngrijitorilor de animale, personalului de la abatoare, ntreprinderi de prelucrare a produselor animaliere, veterinarilor, zootehnicienilor, mcelarilor, tbcarilor, etc.

Formele clinice de antrax


cea mai frecvent). Sporii intr printr-o leziune a tegumentului, germineaz i prolifereaz la poarta de intrare, cu dezvoltarea unui edem gelatinos local caracteristic.

I. Antraxul cutanat , pustula malign (forma

La poarta de intrare, peste 12-36 ore de la penetrare, apare o papul, care evolueaz rapid ntr-o vezicul, apoi n pustul cu coninut sanguinolent. La spargerea pustulei se formeaz o leziune necrotic, prezentnd n centru o escar neagr nconjurat de vezicule satelite. Leziunea se localizeaz mai frecvent pe mini, fa, ceaf, etc. Ptrunderea n snge determin diseminarea sistemic a bacteriei.

II. Antraxul pulmonar apare la inhalarea sporilor de B. anthracis , care sunt nglobai de macrofagele alveolare unde ei germineaz i se multiplic, determinnd o pneumonie foarte grav cu edem.

Urmeaz infectarea ganglionilor limfatici mediastinali cu dezvoltarea unei necroze hemoragice. Pacientul manifest febr, stare de ru, mialgie, tuse ne-productiv. Din ganglionii limfatici infecia poate trece n snge. Decesul poate surveni n 24 h.

III. Anthraxul digestiv apare n urma


consumului de carne infectat. n mucoasa intestinal se dezvolt procese identice cu cele din antraxul cutanat (enterocolit ulceroas). Clinic: vom i diaree, cu snge n masele fecale.

Poate urma invazia ganglionilor limfatici mezenterici i a sngelui, asociat cu prostraie profund, oc i moarte. Meningita poate apare (foarte rar) ca urmare a oricrei forme de antrax

Diagnosticul de laborator al antraxului Se efectueaz numai n laboratoare specializate cu respectarea unor reguli stricte de securitate. Prelevate (n funcie de forma clinic): exsudat din leziunea cutanat, sput, snge, LCR, materii fecale, bioptate din ganglioni limfatici, probe necroptice, probe de la animalul suspect i elemente din mediul extern

1.

Examenul microscopic direct n frotiuri pregtite din prelevate i colorate Gram sau cu albastru de metilen se observ bacili mari cu morfologia caracteristic, izolai sau n lanuri scurte. Sporii sunt rareori prezeni.

2. RIF

I.

II.

III.

Examenul bacteriologic Prelevatele monomicrobiene se nsmneaz pe geloz i geloz-snge, iar cele polimicrobiene se nclzesc n prealabil 10 min la 75 grade C. Incubarea la 37 C timp de 24 ore. Sngele n bulion glucozat, repicri zilnice timp de 7 zile pe gelozsnge. Examinarea coloniilor crescute, selecia celor suspecte i acumularea lor Identificarea culturii pure acumulate i diferenierea de antracoizi.

Characteristic
growth requirement for thiamin
Table 1. Differential Characteristics of B. anthracis B. cereus and B. thuringiensis

B. anthracis
+ -

B. cereus and B. thuringiensis +

hemolysis on sheep blood agar

glutamyl-polypeptide capsule
lysis by gamma phage motility growth on chloralhydrate agar

+
+ -

+ +

string-of-pearls test

Examenul biologic Se inoculeaz prelevatele la cobai sau oareci, care sunt foarte sensibili la infecie. Dup moartea lor (36-48h) bacilii sunt depistai n frotiuri din snge i organe. Depistarea Ag polizaharidice termostabile n prelevate (reacia de precipitare inelar Ascoli) Diagnosticul serologic. Ac anti-antrax pot fi depistai la convalesceni n RP sau RFC Diagnosticul imunologic (proba cutanat alergic). Se pune n eviden starea de hipersensibilizare prin inocularea intradermic a 0,1 ml de antraxin (extract din tulpina vaccinant de B.anthracis). Reacie pozitiv edem i hiperemie cu diametrul de peste 8 mm.

Tratamentul antraxului - Antibiotice (peniciline, cefalosporine, fluorochinolone) - Imunoglobulina antiantrax Profilaxia specific a antraxului - Depistarea i izolarea animalelor bolnave, incinerarea animalelor moarte sau ngroparea adnc a cadavrelor i acoperirea cu var nestins - Vaccinarea animalelor - Imunizarea personalului expus cu vaccin viu atenuat , vaccin acelular (elaborat din tulpini acapsulate avirulente, coninnd proteina PA). n curs de elaborare vaccin cu PA i antigen capsular.

Microbiologia i diagnosticul de laborator al tularemiei Clasificarea Familia Francisellaceae Genul Francisella Specii: F.tularensis (agentul cauzal al tularemiei) F.philomiragia (infectii sistemice)

Se cunosc 4 biovaruri (subspecii) de F.tularensis, care difer dupa activitatea biochimic, virulen i rspndire geografic: F.tularensis tularensis (nearctica) (tip A; foarte virulent, raspndit n America de Nord) F. tularensis holarctica (palearctica) (tip B; mai puin virulent, cu raspndire n Europa) F. tularensis mediasiatica: virulen similar cu F. tularensis holarctica F. tularensis novicida: virulen redus, cauzeaza infecie numai la gazde imunocompromise. Izolat n SUA.

Prima descriere a tularemiei a fost realizat n Japonia n 1837. Denumirea agentului provine de la regiunea Tulare, California, unde, n 1911, n timpul unei epizootii printre veveriele de pmnt, a fost izolat tulpina bacterian. Dr Edward Francis, n 1928, studiaz i descrie agentul cauzal i patogeneza maladiei prin experien personal n peste 800 cazuri. F. tularensis are rspdire ubicvitar, parazitnd peste 100 de specii de animale slbatice (n special roztoare), psri i insecte i persist n apa din zonele unde se ntlnesc aceste animale. Toate mamiferele fac o septicemie cu prezena bacteriilor n toate tesuturile.

Caracterele morfobiologice ale F.tularensis Morfologia: F.tularensis reprezint o cocobacterie foarte mic (0.2-0.5 m x 0.71.0 m), gram-negativ, uneori se coloreaz mai intens la poli, pleomorf, imobil, asporogen, tulpinile virulente posed capsul.

Caractere de cultur: bacteria nu poate fi cultivat pe medii uzuale. Pentru izolare se utilizeaz medii mbogite: - mediul Francis (geloz + snge de iepure + cistein + glucoz) - Mediul McCoy (cu glbenu de ou) - Geloz-ciocolat Cultiv la 35 - 37 grade, n aerobioz. Peste 2-4 zile apar colonii S, mici (1 - 2 mm n diametru), albe-cenuii, mucoide, cu marginile regulate i suprafaa lucioas.

Caractere biochimice: F.tularensis este catalazo+ i oxidazo-, nu descompune ureea, produce H2S, unele biovaruri fermenteaz glicerolul. Rezistena n mediul extern Mi/organismele pot supravieui perioade ndelungate de timp n ap, nmol, cadavre de animale (mediu umed). F.tularensis este distrus la 56 grade n 10 minute, dar congelarea permite conservarea bacteriei.

Factorii de patogenitate :
1.

2. 3.

Capacitatea de a penetra n macrofage, supravieuind i multiplicndu-se n interiorul celulelor pn la moartea lor (parazitism facultativ intracelular) Capsula (rol protector) Endotoxina (LPZ)

Epidemiologia i patogeneza tularemiei


Sursa de infecie animale bolnave sau cadavre de animale, transmiterea de la om la om nu are loc. Rezervorul principal mamifere mici i medii (iepuri, veverie, obolani, oareci, roztoare acvatice, lemingi). Omul, pisicile, cinii, anumite specii de psri, peti i amfibii pot fi gazde accidentale Vectori insecte (tuni, nari, cpue ) Pori de intrare tegumentul (chiar intact), mucoasele, conjunctiva

Deer ticks

Transmiterea: - Contact cu animale infectate, cadavre sau cu apa contaminat (lacuri, bazine, etc) - Aerogen prin inhalare (vntori...) - Alimentar, prin consum de ap sau alimente infectate - neptura artropodelor hematofage Francisella tularensis este una dintre cele mai virulente bacterii. Cteva zeci de mi/o (10-50) pot provoca suferine grave.

Patogeneza i formele clinice de tularemie Francisella tularensis este o bacterie facultativ intracelular. Iniial infecteaz macrofagele, cu diseminarea mi/o i afectarea diferitor organe, inclusiv plmnii, ficatul, splina, ganglionii limfatici. Un rol important n patogeneza leziunilor l joac hipersensibilitatea tardiv.

Formele clinice de tularemie sunt n relaie cu calea de ptrundere: - Forma ulceroganglionar (70-85% de cazuri), penetrarea agentului patogen prin tegument sau mucoase. Mi/o se multiplic local i determin apariia, peste 3-5 zile de la expoziie, a unei papule la locul de inoculare. Peste cteva zile se transform n pustul, care se ulcereaz rapid. Ulcerul are 2 - 4 cm n diametru i marginile neregulate. Uneori ulcerul poate fi acoperit cu o crust neagr (asemntoare cu escara n antrax).

Bacteriile se rspndesc spre ganglionii limfatici regionali, unde cauzeaz limfadenite necrotice, nconjurate de infiltrate granulomatoase (bubonul tularemic). Ganglionii limfatici afectai devin fluctuani, uneori crend canale de drenare n tegument. Mi/o pot disemina hematogen infectnd multiple organe, cu dezvoltarea septicemiei. - Forma ganglionar se manifest prin afectarea ganglionilor limfatici regionali, leziunea de la poarta de intrare lipsete.

Forma oculoganglionar apare la ptrunderea agentului cauzal prin conjunctiv. Se dezvolt necroza i ulceraia conjunctivei, cu infiltraie limfocitar. Din conjunctiv bacteriile trec n ganglionii limfatici preauriculari, submandibulari sau cervicali, provocnd leziuni similare cu cele din tularemia ulceroganglionar.

Forma orofaringean (angino-ganglionar) Mi/o intr prin mucoasa orofaringelui n urma ingestiei sau inhalrii lor. Uzual se dezvolt faringite sau tonzilite exsudative, cu ulceraie ulterioar. Ptrunderea n ganglionii limfatici cervicali determin necroz i supuraie. - Forma tifoidic (abdominal), cu afeciuni generalizate. Mi/o ptrund n snge prin tegument sau mucoase i afecteaz plmnii i organele reticulo-endoteliale. Determin frecvent septicemie i oc - Forma pneumonic, foarte grav. Mi/o ptrund n plmni aerogen sau hematogen.
-

Diagnosticul de laborator al tularemiei Se realizeaz doar n laboratoare specializate Prelevate: n funcie de forma clinic: serozitate din leziunea cutanat sau conjunctiv, exsudat faringean, punctat din ganglionul limfatic afectat, sput, snge. Metode directe de diagnostic 1. Examenul microscopic direct este foarte dificil, aproape imposibil. RIF are o sensibilitate mai mare

2. Examenul bacteriologic. Izolarea F.tularensis direct din prelevate este practic imposibil. Uzual se utilizeaz inocularea prelevatelor la animale experimentale sensibile (oareci, cobai). La necropsii se studiaz frotiuriamprente din organele afectate (Giemsa, RIF), se fac nsmnri pe medii speciale (Francis, Mc Coy). Tulpinile izolate sunt identificate morfologic, cultural, biochimic, antigenic (RA cu seruri anti-F.tularensis).

Diagnosticul indirect 1. Serodiagnosticul. Detectarea Ac este un element esenial n diagnosticul tularemiei. Ac apar dup ziua a 7 de boal, ating titrul maxim peste 1-2 luni (1:1000 sau mai mult) i persist mai muli ani. RA cu suspensie de bacterii omorte este cea mai utilizat. Titrul diagnostic 1:80, cu creterea lui n dinamic de cel puin 4 ori. ELISA este posibil. 2. Intradermoreacia cu tularin. Hipersensibilitatea poate fi testat peste 5 zile de la debutul bolii.

Tratamentul tularemiei Antibiotice: aminozide (streptomicin, gentamicin), tetracicline, cloramfenicol, fluorochinolone, eritromicin (exist i tulpini rezistente) Profilaxia tularemiei - Informarea persoanelor expuse contaminrii - Supraveghere sanitar - Vaccinarea contingentelor de risc cu vaccin viu atenuat asigur imunitatea pe o durat de 5-7 ani

Microbiologia i diagnosticul de laborator al pestei

Pesta (din latin pestis, maladie contagioas) este o maladie cu multiple faete mortal pentru om. Ea este cauzat de Yersinia pestis, descoperit de Alexandre Yersin de la Institutul Pasteur n 1894.

Familia Enterobacteriaceae Genul Yersinia Specia Yersinia pestis

Se disting 3 varieti de tulpini - oriental, medieval i antic. Caractere morfotinctoriale yersiniile reprezint bastonae drepte, uneori cocobacterii Gram negative, uneori colorate bipolar, acapsulate, asporulate, imobile la 37 C.

Caractere de cultur yersiniile sunt mi/o anaerobe facultative, cultiv pe medii uzuale la 25-28 C. n BP cultura se manifest printr-un voal la suprafa i un aspect floconos n interior. Pe geloz peste 48h apar colonii R mari, cu margini neregulate Activitate biochimic catalaza+, oxidaza-, fermenteaz glucoza, reduce nitraii n nitrii. Yersiniile sunt rezistente n mediul extern i n cadavre de animale.

Aspecte epidemiologice
Sursa de infecie i transmiterea Roztoarele slbatice constituie rezervorul natural al maladiei. Yersinia este n principal vehiculat de un obolan, Rattus rattus, care o transmite la om prin intermediul puricilor infectai (Xenopsylla cheopsis, Nosopsyllus fasciatus). Foarte rar omul se infecteaz prin muctura obolanului infectat sau consumndu-l. Iepurii i carnivorele pot infecta omul prin contact direct sau muctura animalului infectat. n epidemii transmiterea se poate efectua interuman pe cale aerogen.

Dup neptura unui purice infectat, germenul se multiplic la locul de inoculare cu formarea unei vezicule-pustule apoi ptrund n sistemul limfatic i colonizeaz ganglionii regionali n care se multiplic. Peste 2-5 zile apar semne de limfadenit hemoragic (bubonul pestos). Pesta bubonic 90% din cazurile de pest. Diseminarea hematogen permite bacteriilor s ating ansamblul organelor cu apariia semnelor clinice de septicemie. Afectarea plmnilor duce la pesta pulmonar secundar, cu expectoraii sanguinolente bogate n germeni, foarte contagioase. Contactul cu aceti pacieni duce, prin contact direct, la apariia pestei pulmonare primare care prezint o mortalitate de 90-100% n lips de tratament.

Diagnosticul de laborator al pestei Se realizeaz n laboratoare specializate cu regim special strict. Prelevate: punctat din bubon, sput, snge. Toate prelevatele de la o persoan infectat sunt foarte contagioase i manipularea lor cere msuri special de precauie. Examenul direct 1. Examenul microscopic al punctatului din bubon colorat Gram sau Giemsa poate fi evocator (bacterii Gram-, ovoide, cu coloraie bipolar). RIF nu este destul de semnificativ, deoarece exist recii ncruciate cu alte yesinii.

2. Examenul bacteriologic (izolarea culturii pure cu

identificarea ei ulterioar) este o investigaie de baz. n pesta pulmonar, diagnosticul este confirmat prin izolarea culturii din sput sau din aspirat bronic. Hemocultura (izolarea culturii din snge) reprezint examenul-cheie n forma septicemic. Pot fi examinate i probe necroptice, deoarece germenul este foarte rezistent n cadavre n curs de putrefacie 3. Depistarea rapid a antigenelor F1.

Tratamentul pestei Antibiotice (streptomicin, gentamicin, doxiciclin, cloramfenicol)

Profilaxia pestei Izolarea bolnavilor Persoanele de contact carantin 6 zile