FACULTAD MEDICINA HUMANA

CARIOTIPO HUMANO
El cariotipo es el arreglo ordenado de los cromosomas que generalmente se muestra organizado de acuerdo a su tamao y patrn de bandeo de los mismos en la metafase mittica.

Jueves, 17 de Mayo del 2012

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

GENETICA

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NDICE
CARIOTIPO HUMANO I ....................................................................................................... 3 1.Introduccin .................................................................................................................. 3 2.Objetivos ....................................................................................................................... 6 3.Marco Terico ............................................................................................................... 6 Requisitos ...................................................................................................................... 8 Tincin ........................................................................................................................... 9 Metodologa ................................................................................................................. 10 Observaciones en cariotipo .......................................................................................... 13 Historia ......................................................................................................................... 13 Diversidad y evolucin del cariotipo ............................................................................. 13 Nmero de cromosomas en cada serie ........................................................................ 15 Cultivo de Linfocitos en Sangre .................................................................................... 18 4.Materiales ...........................................................................Error! Bookmark not defined. 5.Mtodo ................................................................................Error! Bookmark not defined. 6.Actividad ............................................................................Error! Bookmark not defined. 7.Conclusiones .............................................................................................................. 21 CARIOTIPO HUMANO II CROMATINA SEXUAL ............................................................ 23 1.Introduccin ................................................................................................................ 23 2.Objetivos ..................................................................................................................... 25 3.Marco Terico ............................................................................................................. 25 Clasificacin de Sinch .................................................................................................. 25 Cromatina Sexual ......................................................................................................... 26 Anomalas cromosmicas ............................................................................................ 26 Nomenclatura ............................................................................................................... 29 4.Materiales .................................................................................................................... 30 5.Mtodo ......................................................................................................................... 30 6.Actividad ..................................................................................................................... 30 7.Conclusiones .............................................................................................................. 39 8.Bibliografa .................................................................................................................. 40 9.Linkografa .................................................................................................................. 40

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CARIOTIPO HUMANO I
1. INTRODUCCIN
Los cromosomas son las estructuras en que se organiza la cromatina nuclear y que tienen una expresin dinmica en las distintas fases del ciclo celular. En la mitosis estas estructuras comienzan un proceso de compactacin que alcanza su mximo nivel en la metafase. Los cromosomas se tien fcilmente cuando estn condensados y pueden ser individualizados con el microscopio ptico. Cada cromosoma contiene una molcula de ADN lineal asociado a distintas protenas y el contenido de genes es variable aunque est en relacin con su tamao. Por eso, cualquier alteracin en el nmero o la estructura de los cromosomas puede ser causa de enfermedades. Para la deteccin de estas alteraciones se desarrollaron numerosas tcnicas y todas ellas requieren de un observador entrenado que las interprete. La citogentica es la rama de la biologa que se encarga del estudio de los cromosomas y sus anomalas. Los cromosomas mitticos humanos cuando estn duplicados tienen una forma similar a una X. Las cromtides hermanas se mantienen unidas por una regin de constitucin primaria llamada centrmero. Su posicin es variable; si se encuentra en la parte media los cromosomas metacntricos; si se encuentra desplazado hacia un extremo (dando brazos de diferente tamao, p y q), produce cromosomas submetacntricos; si est cerca del extremo final son acrocntricos y si es terminal telocntricos. Los humanos tenemos un nmero total de 46 cromosomas y este nmero vara segn las especies. Los 46 cromosomas estn constituidos por 23 pares de homlogos y cada miembro del par proviene de un progenitor. El cariotipo es la constitucin cromosmica de un individuo y es un estudio de rutina en gentica mdica. Los cariotipos se pueden informar presentando todos los pares cromosmicos ordenados de acuerdo a su tamao, que en un principio eran recortados de la fotografa de una metafase, y ahora se pueden hacer con analizadores automticos. De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales se seala por separado para indicar el sexo del individuo. Para citar el cariotipo de un individuo se indica primero el nmero total de cromosomas y seguidamente los componentes del par sexual precedido de una coma. As, el cariotipo normal de un varn se escribe 46,XY y el de una mujer 46,XX. Las anomalas cromosmicas son una causa ms importante de abortos espontneos, retardo mental y malformaciones. El cariotipo es el arreglo ordenado de los cromosomas que generalmente se muestra organizado de acuerdo a su tamao y patrn de bandeo de los mismos en la metafase mittica. Representa el complemento cromosmico de un individuo de una especie.

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA El anlisis de las caractersticas de los cromosomas y sus anomalas es el objeto de estudio de la citogentica humana. Cada cromosoma normal tiene una morfologa y un tamao constantes. En la actualidad, el anlisis cromosmico, con una mejora espectacular en su resolucin a nivel citolgico y genmico, es un procedimiento de importancia creciente en numerosas reas de la medicina clnica. Para el anlisis cromosmico sistemtico que se lleva a cabo por motivos clnicos, las clulas tienen que ser capaces de crecer y dividirse rpidamente. Es posible realizarlo con una variedad de tejidos, pero el de eleccin es el cultivo de linfocitos de sangre perifrica. Adems de linfocitos, es posible realizar cultivos (ms laboriosos) de fibroblastos drmicos, de clulas exfoliadas de mucosas, de clulas fetales presentes en el lquido amnitico y otras. Se pueden efectuar preparaciones directas (sin cultivo) de clulas de mdula sea obtenidas por puncin; aunque la calidad de estas preparaciones es menor que las de los cultivos, tienen la ventaja de ser analizables el mismo da de la toma de la muestra. La clasificacin bsica de los cromosomas humanos en metafase fue derivada de conferencias en Denver (1960), Londres (1963) y Chicago (1966). Se acord numerar los autosomas en pares de 1 al 22 de acuerdo al tamao decreciente y posicin del centrmero principalmente. Los 22 pares de autosomas se dividen en 7 grupos (A-G) los cuales son fcilmente distinguibles con tinciones comunes. Los cromosomas sexuales fueron designados X e Y. El bandeo cromosmico contribuye a identificar los cromosomas individuales y las anomalas estructurales de los cromosomas. Las tcnicas de bandeo incluyen el bandeo de quinacrina, Giemsa, invertido, C y NOR. El bandeo de alta resolucin, utilizando cromosomas en profase o en prometafase, aumenta el nmero de bandas observables. El objetivo de esta prctica es aprender a reconocer los cromosomas humanos, elaborar un cariotipo a partir de una fotografa y saber determinar las anomalas cromosmicas ms frecuentes. La clula con la que vamos a trabajar se ha obtenido a partir de un cultivo de sangre perifrica, despus se hizo un tratamiento con tripsina y posteriormente tincin con Giemsa para obtener un bandeo G. La microfotografa as obtenida pertenece a una persona que no tiene ninguna anomala cromosmica. La dotacin cromosmica normal de la especie humana es de 46,XX para las mujeres y de 46, XY para los varones.

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA En el cariotipo humano los cromosomas se ordenan de mayor a menor. Hay cromosomas grandes, medianos y pequeos. Al ordenar los comosomas se constituyen 7 grupos atendiendo no slo al tamao sino tambin a la forma de las parejas cromosmicas, dentro del cariotipo humano podemos encontrar cromosomas metacntricos (tienen los dos brazos aproximadamente iguales en longitud), submetacntricos (con un brazo ms pequeo que otro) y acrocntricos (con un brazo corto muy pequeo). Concretamente en el cariotipo humano hay 7 grupos de cromosomas. Dentro de cada grupo vamos a ordenar y reconocer los cromosomas con la ayuda de un idiograma:

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Fig. 1: Cariotipo Humano, cada par de autosomas vinculados por su centrmero, obtenidos de un proceso metafsico

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CROMOSOMAS GRANDES

CROMOSOMAS MEDIANOS

CROMOSOMAS PEQUEOS

Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), metacntricos 1 y 3, submetacntrico el 2 Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas X), submetacntricos Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocntricos Grupo E, (cromosomas 16,17 y 18) el16 metacntrico, el 17 y 18 submetacntricos Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos Grupo G, (cromosomas 21, 22 e Y) acrocntricos

*Nota: Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos correspondientes y se colocan juntos al final del cariotipo.

2.OBJETIVOS
Explicar los fundamentos en que se basa la tcnica del cultivo de linfocitos y el bandeo Giemsa (bandeo G) Reconocer los cromosomas humanos y elaborar un cariotipo a partir de una fotografa

3. MARCO TERICO
La clasificacin de los cromosomas para identificar las anormalidades morfolgicas y numricas ms importantes se lleva a cabo en un nmero creciente de centros genticos mdicos. El resultado del procedimiento es una demostracin grfica del complemento cromosmico -o dotacin cromosmica- conocida como cariotipo Los cromosomas que se muestran en un cariotipo son cromosomas en metafase de la mitosis cada uno de los cuales consiste en dos cromtides hermanas unidas por sus centrmeros. Tcnica para obtener el cariotipo para preparar un cariotipo, el proceso de divisin celular se interrumpe en la metafase, aadiendo colchicina, una droga que evita los siguientes pasos de la mitosis, ya que interfiere con los microtbulos del huso Despus del tratamiento y de la tincin, los cromosomas se fotografan, se ampla la fotografa, se los recorta y se los ordena de acuerdo con su tamao. Los cromosomas del mismo tamao se aparean segn la posicin del centrmero, lo que evidencia la presencia de "brazos" de distinta longitud. A partir del cariotipo

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA pueden detectarse ciertas anormalidades, como la aparicin de un cromosoma o de un segmento cromosmico supernumerario. Si bien se puede determinar el nmero, el tamao y la forma de los cromosomas e identificar los pares homlogos presentes en la metafase mittica de una clula somtica de un organismo determinado, algunos de los cromosomas ms pequeos son bastante semejantes en su morfologa. En estos casos, la tincin para mostrar patrones de bandas posibilita distinguir cromosomas del mismo tamao e identificar los homlogos. El cariotipo es el patrn cromosmico de una especie expresado a travs de un cdigo, establecido por convenio, que describe las caractersticas de sus cromosomas. Debido a que en el mbito de la clnica suelen ir ligados, el concepto de cariotipo se usa con frecuencia para referirse a un cariograma, el cual es un esquema, foto o dibujo de los cromosomas de una clula metafsica ordenados de acuerdo a su morfologa (metacntricos, submetacntricos, telocntricos, subtelocntricos y acrocntricos) y tamao, que estn caracterizados y representan a todos los individuos de una especie. El cariotipo es caracterstico de cada especie, al igual que el nmero de cromosomas; el ser humano tiene 46 cromosomas (23 pares porque somos diploides o 2n) en el ncleo de cada clula, organizados en 22 pares autosmicos y 1 par sexual (hombre XY y mujer XX).Cada brazo ha sido dividido en zonas y cada zona, a su vez, en bandas e incluso las bandas en subbandas, gracias a las tcnicas de marcado. No obstante puede darse el caso, en humanos, de que existan otros patrones en los cariotipos, a lo cual se le conoce como aberracin cromosmica.

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Fig. 2: Cariotipo del linfocito de una mujer

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Los cromosomas se clasifican en 7 grupos, de la A a la G, atendiendo a su longitud relativa y a la posicin del centrmero, que define su morfologa. De esta manera, el cariotipo humano queda formado as:

Grupo A: Se encuentran los pares cromosmicos 1, 2 y 3. Se caracterizan por ser cromosomas muy grandes, casi metacntricos. En concreto, 1 y 3 metacntricos; 2 submetacntrico. Grupo B: Se encuentran los pares cromosmicos 4 y 5. Se trata de cromosomas grandes y submetacntricos (con dos brazos muy diferentes en tamao). Grupo C: Se encuentran los pares cromosmicos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, X. Son cromosomas medianos submetacntricos. Grupo D: Se encuentran los pares cromosmicos 13, 14 y 15. Se caracterizan por ser cromosomas medianos acrocntricos con satlites. Grupo E: Se encuentran los pares cromosmicos 16, 17 y 18. Son cromosomas pequeos, metacntrico el 16 y submetacntricos 17 y 18. Grupo F: Se encuentran los pares cromosmicos 19 y 20. Se trata de cromosomas pequeos y metacntricos. Grupo G: Se encuentran los pares cromosmicos 21, 22, Y. Se caracterizan por ser cromosomas pequeos y acrocntricos (21 y 22 con satlites).

Mediante el cariotipado se pueden analizar anomalas numricas y estructurales, cosa que sera muy difcil de observar mediante gentica mendeliana.

Requisitos
Ante todo, deben guardarse las mximas condiciones de esterilidad. Adems, debe cumplirse lo siguiente:

Las clulas deben encontrarse en divisin. Para ello, se har la incubacin de la muestra en presencia de productos inductores de la mitosis (mitgenos), como es el caso de fitohemoaglutinina.

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Las clulas deben pararse en prometafase, empleando colchicina, la cual interfiere en la polimerizacin de los microtbulos del huso mittico. Con el objetivo de conseguir una buena separacin cromosmica, las clulas deben someterse a choque osmtico. Para ello, se emplea un medio hipotnico (0,075M KCl), que ocasiona el aumento de volumen de las clulas. Las clulas tienen que ser fijadas. Hay que proceder a la tincin de los cromosomas para que sean identificables.

Tincin
El estudio de los cariotipos es posible debido a la tincin. Usualmente un colorante adecuado es aplicado despus de que las clulas hayan sido detenidas durante la divisin celular mediante una solucin de colchicina. Para humanos los glbulos blancos son los usados ms frecuentemente porque son fcilmente inducidos a crecer y dividirse en cultivo de tejidos. Algunas veces las observaciones pueden ser realizadas cuando las clulas no se estn dividiendo (interfase). El sexo de un neonato feto puede ser determinado por observacin de clulas en la interfase (ver puncin amnitica y corpsculo de Barr). La mayora (pero no todas) las especies tienen un cariotipo estndar. El ser humano normalmente tiene 22 pares de cromosomas autosmicos y un par de cromosomas sexuales. El cariotipo normal para la mujer contiene dos cromosoma X denominado 46,XX, y el varn un cromosoma X y uno Y, denominado 46 XY. Cualquier variacin de este cariotipo estndar puede llevar a anormalidades en el desarrollo. En los laboratorios de Citogentica se utilizan varias tcnicas de bandeo cromosmico. En este sentido, destaca el mtodo de tincin de las bandas de quinacrina (bandas Q). Fue el primero en emplearse, requiere un microscopio de fluorescencia, aunque su uso ya no est tan extendido como el de las bandas de giemsa (bandas G). Para producir estas bandas G se aplica una tincin de Giemsa tras digerir parcialmente las protenas cromosmicas con tripsina. Las bandas reversas (bandas R) requieren tratamiento por calor y en ellas se invierte el patrn normal blanco y negro que se observa en las bandas Q y G. Este mtodo destaca por su gran utilidad en la tincin de los extremos distales de los cromosomas. Existen otras tcnicas de tincin como las bandas C y las NOR (regin de organizadores nucleolares), tiendo estos ltimos especficamente ciertas regiones del cromosoma. As, las bandas C tien la heterocromatina constitutiva, que se localiza normalmente cerca de los centrmeros, y la tincin NOR marca los satlites y tallos de los cromosomas acrocntricos.

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA Las bandas de alta resolucin suponen la tincin de los cromosomas en profase o metafase precoz (prometafase) antes de alcanzar la condensacin mxima. Los cromosomas en profase y prometafase estn ms elongados que los cromosomas en metafase; por este motivo, el nmero de bandas observadas, para el conjunto de cromosomas, aumenta desde 300-450 hasta casi 800. Ello permite detectar anomalas menos claras, que con las bandas convencionales no suelen apreciarse. Para obtener este tipo de bandas se necesita aadir otro requisito para la realizacin del cariotipo. Se trata de un componente utilizado en quimioterapia, el metotrexato que junto con la colchicina se aade antes de realizar la tincin.

Metodologa

Toma de sangre perifrica y separacin de los glbulos blancos (linfocitos T) Incubacin en presencia de productos que inducen a la mitosis (mitgenos), como la fitohemoaglutinina Detencin de la mitosis en la metafase (utilizando colchicina, que interfiere en la polimerizacin de los microtbulos del huso mittico) Paso por un medio hipotnico que hace que las clulas se hinchen Depositar una gota de la preparacin entre porta y cubre (sobre el cual se hace presin para dispersar los cromosomas)

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Fijar, teir y fotografiar los ncleos estallados (10-15; 30 en mosaicos). Se miran de 10 a 15 ncleos porque puede haber muchos falsos positivos debido a que le hemos aadido mitgenos (de manera que las clulas se dividen de forma rpida y precipitada) y colchicina, los cuales pueden provocar mutaciones e irregularidades en los cromosomas. Si los 10-15 ncleos no son iguales puede ser debido a estas sustancias o a que nos encontremos delante de un organismo mosaico (por lo que deberamos mirar ms ncleos) Observacin, fotografiado, identificacin y cuenta de cromosomas. Elaboracin del cariotipo. La figura de los cromosomas ordenados por tamao y estructura (desde el par 1, 2, 3,..22 y par sexual.

Cariotipo clsico
En el cariotipo clsico se suele utilizar una solucin de Giemsa como tincin (especfica para los grupos fosfato del ADN) para colorear las bandas de los cromosomas (Bandas-G), menos frecuente es el uso del colorante Quinacridina (se une a las regiones ricas en Adenosina-Timina). Cada cromosoma tiene un patrn caracterstico de banda que ayuda a identificarla. Los cromosomas se organizan de forma que el brazo corto de este quede orientado hacia la parte superior y el brazo largo hacia la parte inferior. Algunos cariotipos nombran a los brazos cortos p y a los largos q. Adems, las diferentes regiones y subregiones teidas reciben designaciones numricas segn la posicin a la que se encuentren respecto a estos brazos cromosmicos. Por ejemplo, el sndrome de Cri

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA du Chat implica una delecin en el brazo corto del cromosoma 5. Est escrito como 46, XX, 5p-. La regin crtica para este sndrome es la delecin de 15.2, la cual es escrita como 46,XX, del(5)(p15.2)

Cariotipo espectral
El anlisis espectral de los cariotipos (o SKY) se trata de una tecnologa de citogentica molecular que permite el estudio y visualizacin de los 23 pares de cromosomas en forma simultnea. Sondas marcadas fluorescentemente son hechas para cada cromosoma al marcar DNA especfico de cada cromosoma con diferentes fluorforos. Debido a que hay un limitado nmero de fluorforos espectralmente distintos, un mtodo de etiquetado combinatorio es usado para generar muchos colores diferentes. La diferencias espectrales generadas por el etiquetado combinatorio son capturadas y analizadas usando un interfermetro agregado a un microscopio de fluorescencia. El programa de procesamiento de imgenes entonces asigna un pseudocolor a cada combinacin espectralmente diferente, permitiendo la visualizacin de cromosomas coloreados. Esta tcnica es usada para identificar aberraciones estructurales cromosmicas en clulas cancergenas y otras patologas cuando el bandeo con Giemsa u otras tcnicas no son lo suficientemente precisas. no son suficientemente seguras Este tipo de tcnicas mejorar la identificacin y diagnstico de las aberraciones cromosmicas en citogentica prenatal as como en clulas cancerosas.
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Fig. 3: El cariotipo espectral del linfocito roto de un hombre

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Cariotipo digital
El cariotipo digital es una tcnica utilizada para cuantificar el nmero de copias de ADN en una escala genmica. Se trata de secuencias de locus de ADN especficos de todo el genoma que son aisladas y enumeradas. Este mtodo es tambin conocido como cariotipado virtual.

Observaciones en cariotipo

Los cromosomas sufren grandes variaciones en su tamao a lo largo del ciclo celular, pasando de estar muy poco compactados (interfase) a estar muy compactados (metafase). Diferencia de posicin del centrmero. Las diferencias en el nmero bsico de cromosomas puede ocurrir debido a desplazamientos sucesivos que quitan todo el material gentico de un cromosoma, haciendo que este se pierda. Diferencias de grado y distribucin de regiones de heterocromatina. La heterocromatina, es una forma inactiva de ADN condensada localizada sobre todo en la periferia del ncleo que se tie fuertemente con las coloraciones, tomando coloracin ms oscura que la cromatina.

La variacin de estos cromosomas es encontrada frecuentemente:

Entre sexos Entre gametos y el resto del cuerpo. Entre los miembros de una poblacin. Variacin geogrfica

Historia Los cromosomas se observaron por primera vez en las clulas vegetales por Karl Wilhelm von Ngeli en 1842 - Su comportamiento en las clulas animales fue descrito por Walther Flemming, el descubridor de la mitosis, en 1882 - El nombre fue acuado por otro anatomista alemn, von Waldeyer en 1888. La siguiente etapa se llev a cabo despus de que el desarrollo de la gentica en el siglo 20, cuando se aprecia que los cromosomas era el portador de genes. Levitsky parece haber sido el primero en definir el cariotipo como la apariencia fenotpica de los cromosomas somticos, en contraste con su contenido gnico. La historia posterior del concepto se puede seguir en las obras de Darlington y Blanco.

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA Investigacin sobre el cariotipo humano llev muchos aos para resolver la pregunta ms bsica: cuntos cromosomas contiene una clula huma na diploide normal? En 1912, Hans von Winiwarter report 47 cromosomas en espermatogonias y 48 de oogonios, la celebracin de un XX/XO mecanismo de determinacin del sexo. Pintor en 1922 no estaba seguro de si el diploide de los humanos era 46 o 48, en un principio que favorece 46, pero revis su opinin, 46-48, y l insisti correctamente en los seres humanos tienen un sistema XX/XY. Teniendo en cuenta las tcnicas de la poca, estos resultados fueron notables. En los libros de texto, el nmero de cromosomas humanos se mantuvo en 48 por ms de treinta aos. Se necesitaban nuevas tcnicas para corregir este error. Joe Hin Tjio de trabajo en el laboratorio de Albert Levan era responsable de encontrar el enfoque: El uso de clulas en cultivo de tejidos Pretratamiento clulas en una solucin hipotnica, lo que les hincha y se extiende a los cromosomas Detener la mitosis en la metafase por una solucin de colchicina Aplastando la preparacin en el portaobjetos obligando a los cromosomas en un solo plano Cortando una microfotografa y la organizacin de estos datos en indicaciones karyogram indiscutible.

El trabajo se llev a cabo en 1955, y fue publicado en 1956 - El cariotipo de los seres humanos incluye slo 46 cromosomas. Ms bien, curiosamente, los grandes simios tienen 48 cromosomas. Cromosoma humano 2 est ahora conocido por ser un resultado de un extremo a extremo fusin de dos cromosomas simios ancestrales.

Diversidad y evolucin del cariotipo

Aunque la replicacin del ADN y la transcripcin del ADN estn altamente estandarizadas en eucariotas, no puede decirse lo mismo de sus cariotipos, ya que son sumamente variables entre especies en el nmero de cromosomas y en la organizacin detallada a pesar de haber sido construidos con las mismas macromolculas. Esta variacin proporciona la base para una gama de estudios que podra llamarse citologa evolutiva. En algunos casos incluso hay significantes variaciones dentro de las especies. En una revisin del 2000 Godfrey y Masters concluyen: "En nuestra visin, es poco probable que un proceso o el otro, puedan independientemente contar para el amplio rango de estructuras de cariotipo que son observadas.. Pero usadas en

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA conjunto con otros datos filogenticos, el fisionamiento cariotpico puede ayudar a explicar dramticas diferencias en los nmeros diploides entre especies estrechamente relacionadas, que antes fueron inexplicables.

Cambios durante el desarrollo A lo largo del tiempo, algunos de los organismos fueron eliminando la presencia de algunos componentes de su ncleo, as como la heterocromatina.

La eliminacin del cromosoma; En algunas especies (moscas) los cromosomas se van eliminando durante el desarrollo. La disminucin de la cromatina; En este proceso (en algunos coppodos) parte de los cromosomas son emitidos hacia fuera en algunas clulas. Este es un proceso donde el genoma est cuidadosamente organizado, donde se organizan y construyen nuevos telmeros y donde ciertas regiones de la heterocromatina se pierden X-inactivacin; La inactivacin de un cromosoma X se lleva a cabo durante el desarrollo temprano de los mamferos. En los mamferos placentarios, la inactivacin es al azar entre los dos X, pero en marsupiales es el cromosoma X paterno el que se inactiva.

Nmero de cromosomas en cada serie

Un ejemplo de la variabilidad entre especies estrechamente relacionadas es el del muntjac (un mamfero de la familia de los crvidos que vive en la India y el sudeste asitico), que fue investigado por Kurt Benirschke y su compaero Doris Wurster donde demostraron que el nmero diploide del muntjac Chino (Muntiacus reevesi) result ser de 46 y todos telocntricos.

Fig. 4

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Fig. 5

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Fig. 4: Cariotipo clsico de un linfocito degenerado de un hombre Fig. 5: Vnculo comn de un cariotipo entre par de cromosomas homlogos en un hombre

"Ellos simplemente no podan creer lo que haban visto... Ellos se mantuvieron en silencio por dos o tres aos porque ellos pensaban que algo haba andado mal con su cultivo de tejidos... Pero cuando ellos obtuvieron un par ms de especimenes, ellos confirmaron sus hallazgos". El nmero de cromosomas en el cariotipo entre especies no relacionadas es enormemente variable. El record ms bajo le pertenece al nematodo Parascaris univalens, donde el nmero haploide es n = 1; el record ms alto podra estar en algn lugar entre los helechos, con el helecho Lengua de Adder Ophioglossum adelante con un promedio de 1262 cromosomas.

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA El ms alto score para animales podra estar entre el esturin de nariz corta Acipenser brevirostrum con solamente 372 cromosomas. La existencia de cromosomas supernumerarios o B significa que el nmero de cromosomas puede variar incluso dentro de una misma poblacin. (El cromosoma supernumerario se sita en el lugar del cromosoma normal 21. La frmula de este triple cromosoma puede ser XXY o XYY).

EL CULTIVO CELULAR Y EL PROCESAMIENTO DEL MATERIAL Para el estudio cromosmico se debe realizar el cultivo un tejido del individuo donde las clulas crezcan y se dividan rpidamente. El tejido ms accesible para ese fin es la sangre y las clulas que crecen son los linfocitos. La tcnica comienza con la toma de una muestra de sangre perifrica por venopuntura con heparina como anticoagulante. Se siembran alrededor de 10 gotas en un medio enriquecido y se incuba a 37C durante 72 horas. La estimulacin de la divisin celular se logra con la adicin de un factor mitognico como es la fitohemaglutinina. Pasado ese tiempo, se agrega una solucin de colchicina al medio para detener la divisin celular y evitar que las clulas completen la mitosis. La colchicina acta inhibiendo la formacin del huso mittico y las clulas que alcanzan la metafase se acumulan en el cultivo. Luego se agrega una solucin hipotnica que hace que las clulas se hinchen y se las hace estallar con una tcnica de goteo sobre un portaobjeto y los cromosomas se liberan. Posteriormente el material se fija y se tien de acuerdo a las diferentes tcnicas. EL BANDEO CROMOSMICO Con la tcnica convencional de tincin con Giemsa los cromosomas se tien intensamente y en forma homognea y se los puede contar y agrupar por su aspecto general y eso era lo nico que se poda hacer en los primeros cariotipos. La identificacin de cada cromosoma vino posteriormente con las tcnicas de bandeo. Estas tcnicas que generan bandas transversales permiten definir a cada cromosoma y estudiar su estructura. Cada cromosoma tiene del patrn de bandas caracterstico y existen varias 3 tcnicas de tincin con fines especficos (Tabla I). El bandeo G es el ms utilizado en citogentica clnica. El bandeo G se logra con un tratamiento controlado con tripsina antes de la coloracin con Giemsa y produce bandas claras y oscuras en los cromosomas. Las bandas oscuras contienen ADN rico en bases A-T que replica tardamente y son pobres en genes constitutivos y las bandas claras contienen ADN rico en G-C que replica tempranamente y tienen muchos genes constitutivos Cuando un cromosoma est ms elongado puede mostrar un mayor nmero de bandas y esto se aprovecha para estudiarlo con mayores detalles. Esta metodologa que permite buscar alteraciones estructurales mnimas se conoce como bandeo de alta resolucin y se logra sincronizando el cultivo y con preparaciones hechas en profase o prometafase, es decir, antes que los cromosomas alcancen su compactacin mxima. Los cromosomas en la mitad de la metafase muestran un nivel de resolucin de 400 bandas mientras que los de alta resolucin alcanzan niveles de resolucin de 550 y hasta de 850

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA bandas.

Cultivo de Linfocitos en Sangre

CULTIVO (SIEMBRA) 1. Tomar de 3-5ml. de sangre con 0.1ml. de heparina sdica sin preservantes. 2. Cultivar la sangre en el medio de cultivo utilizado por el laboratorio (TC-199, HAM-F10 o RPMI 1640). A 5ml de medio de cultivo agregar 0.2ml de fitohemaglutinina y 0.1ml de FBS. Filtrarlo en tubo de centrfuga y agregar de 0.6 a 1.0ml de sangre total. 3. Guardar en estufa a 37C x 72 horas aproximadamente.

COSECHA 1. A las 72hrs agregar 0.05ml de colchicina (10ug/ml) para detener la divisin celular en metafase y dejar actuar por 40 en la estufa a 37C. 2. Centrifugar a 1000 rpm x 10. 3. Descartar el sobrenadante y agregar 5ml de la solucin hipotnica (KCL 0.075M), agitar 10-15 veces. Colocar a 37C, por 15 minutos. 4. Centrifugar a 1000 rpm x 10. 5. Descartar el sobrenadante, agregar 5ml de cido actico al 4%, homogenizar y centrifugar a 1000 rpm x 10. 6. Descartar el sobrenadante y agregar 5ml de fijador Carnoy (3 partes de metano: 1 parte de cido actico) en zona (por las paredes) dejar en reposo a T ambiente x 10 minutos. 7. Homogenizar la muestra y centrifugar a 1000 rpm x 10. 8. Repetir desde paso 6 hasta obtener una solucin clara (de 2 a 3 veces). 9. Descartar el sobrenadante y el sedimiento agregar 1ml de fijador carnoy, homogenizar y luego tirar de una a tres gotas de muestra sobre un portaobjeto y dejar secar al ambiente. 10. Teir con colorante Giemnsa por 2 a 3 minutos y observar al microscopio

4. MATERIALES
Ampliacin de fotografas de cromosomas humanos en metafase, teidos con Giemsa (bandeo G) Goma

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA Tijeras Regla graduada en milmetros Luna de aumento Hilo pabilo 0.5 m Calculadora Lminas y videos acerca de tcnica de cultivo de linfocitos y cariotipo.

4. MTODO

1. Contar los cromosomas de la ampliacin fotogrfica y recortar el contorno de cada uno de ellos. 2. Medir las longitudes de brazos largos y cortos; y la longitud total de los cromosomas y registrar los datos. 3. Ordenar los cromosomas por tamaos en una tabla, caracterizando los cromosomas humanos en M: metacntrico, SM: submetacntrico y A: acrocntrico; considerar como referencia los valores medios de las dimensiones de los brazos del cuadro adjunto. 4. Realizar la identificacin de los pares cromosmicos por su patrn de bandas G mostrando por modelo adjunto. 5. Representar el cariotipo colocando los cromosomas manteniendo los centrmeros en una misma lnea, los autosomas en orden decreciente de tamao y los cromosomas sexuales en el extremo inferior derecho

6. ACTIVIDAD
1) Construye el cariotipo del individuo a quien pertenece la fotografa propuesta. Anote la frmula cromosmica correspondiente.

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CARIOTIPO HUMANO

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A 1 2 3

B 4 5

C 6 7 8 9 10 11 12

D 13 14 15

E 16 17 18

F 19 20

G 21 22

H X Y

Frmula Cromosmica: 46 XY, cariotipo masculino normal

2) Realizar un dibujo de su observacin microscpica de lminas con cromosomas.

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3) En el siguiente texto que se refiere a la tcnica de cultivo de linfocitos para cariotipo, llevar los espacios vacos con los trminos que crea conveniente. Para la realizacin del cariotipo se necesitan 1-3 ml de sagre heparinizada. Tras ello, se realiza la siembra de la sangre perifrica (lo antes posible tras su extraccin, pero puede obtenerse un crecimiento aceptable hasta 2-3 das despus de la extraccin). El medio de cultivo donde se siembra la sangre es un medio que lleva suero fetal de ternera enriquecido y protegido con penicilina y estreptomicina, al que se le aade fitohemoaglutinina para estimular el crecimiento y transformacin de linfocitos T. Despus de 72 horas de cultivo, se detiene la divisin celular en metafase aadiendo colchicina (inhibe la formacin del huso mittico y la divisin dl centrmero). Posteriormente se aade una solucin hipotnica para que las clulas se hinchen y se lisen, con lo que los cromosomas se liberan y permanecen intactos los centrmeros, tras ello se fijan los cromosomas para que no se separen y luego se extienden en portaobjetos. Despus se tien con diversas tcnicas y entonces estn disponibles para el estudio.

7.CONCLUSIONES
Comprendimos los argumentos en los cuales se basa la tcnica del cultivo de linfocitos y el bandeo Giemsa (G) Reconocimos los cromosomas humanos y elaboramos un cariotipo a partir de una fotografa de cromosomas no divididos.

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CARIOTIPO HUMANO II CROMATINA SEXUAL

1.INTRODUCCIN
El cariotipo que puede realizarse por diversas tcnicas detecta anomalas cromosmicas numricas y estructurales. Hay que considerar realizar estudio de alta resolucin si existe sospecha de cromosomopata a pesar de un cariotipo previo normal. Las anomalas cromosmicas son las responsables de una proporcin significativa de enfermedades genticas, encontrndose en 1 de cada 150 recin nacidos vivos, y constituyen la principal causa de retraso mental y de abortos. Las anomalas cromosmicas se observan en el 50-60% y en el 20-30% de los abortos espontneos del primer y segundo trimestre, respectivamente. Las anomalas cromosmicas pueden ser numricas o estructurales y pueden afectar a uno o ms autosomas o a los cromosomas sexuales o a ambos simultneamente. Las aberraciones cromosmicas numricas incluyen las euploidas (nmeros cromosmicos mltiplos exactos del nmero haploide) como las triploidas y las tetraplodas y las aneuploidas (mltiplos inexactos del nmero haploide) como las

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA monosomas y trisomas. Las fallas en el proceso de divisin que llevan a estas anormalidades pueden ocurrir tanto durante la meiosis como durante la mitosis. Las anomalas estructurales son aquellas que se producen por alteracin de la secuencia normal de los fragmentos gnicos que componen un cromosoma. Se producen como consecuencia de roturas cromosmicas seguidas de reconstitucin, dando lugar a una combinacin anmala. Se producen de manera espontnea con una frecuencia baja y tambin inducidas por agentes externos llamados clastgenos, como la radiacin ionizante infecciones vricas y gran variedad de productos qumicos. Al igual que las anomalas numricas, las estructurales pueden estar presentes en todas las clulas del organismo o en forma de mosaico. Otros elementos causantes de las mutaciones estructurales son los transposones, que son genes mviles o saltarines capaces de cambiar su posicin en el genoma y de saltar de unos cromosomas a otros, de manera que el abandono de su posicin inicial y su reinsercin en otro cromosoma provoca normalmente variaciones genticas. Existen dos tipos de anomalas estructurales: las equilibradas y las desequilibradas. Las reordenaciones equilibradas mantienen el complemento cromosmico normal, es decir, no se pierde ni se gana material gentico. En cambio, en las reordenaciones desequilibradas existe prdida o ganancia de material gentico. Mientras que algunas reordenaciones son estables, pudiendo atravesar divisiones mitticas y meiticas sin alterarse, otras son inestables. Para ser estable, el cromosoma que ha sufrido la reordenacin sebe contener elementos estructurales normales, especialmente un centrmero funcional y dos telmeros. Entre las principales aberraciones estructurales estn las deleciones o prdidas, inversiones peri o paracntricas, anillos, duplicaciones, isocromosomas y translocaciones. El laboratorio de citogentica es fundamental para la gentica clnica. Es muy importante conocer las tcnicas actuales del laboratorio de citogentica. stas son, fundamentalmente el cariotipo, la hibridacin fluorescente in situ (FISH) y la hibridacin genmica comparativa (CGH). Debe realizarse cariotipo de alta resolucin si el paciente a pesar de tener un cariotipo previo realizado normal, presenta retraso mental, rasgos dismrficos y otros datos sugerentes de cromosomopata. La FISH es una tcnica mixta de citogentica molecular que nos permite el diagnstico rpido de anomalas cromosmicas muy pequeas en metafase e interfase. La CGH es otra tcnica mixta, mediante la que podemos realizar un rastreo completo del genoma y nos permite identificar deleciones o duplicaciones, translocaciones no balanceadas y marcadores cromosmicos.

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2.OBJETIVOS
Reconocer alteraciones cromosmicas cariotipos y su implicancia clnica. numricas y/o estucturales en

Sealar la nomenclatura de distintas alteraciones cromosmicas de acuerdo a normas del SINCH. Identificar el corpsculo de Barr o cromatina sexual en clulas nucleadas femeninas. Comprender el proceso de diferenciacin sexual y de inactivacin del cromosoma X.

3.MARCO TERICO
Clasificacin de Sinch:
Ha sido establecido un Sistema Internacional de Nomenclatura para Citogentica Humanapor medio del cual la descripcin del cariotipo normal y patolgico ha sido estandarizada. La forma de ordenar los cromosomas responde a un convenio ( Pars,1971) y se lleva a cabo teniendo en cuenta el tamao del cromosoma y la posicin del centrmero, asignando a cada uno un brazo corto (p) y un brazo largo (q). Las reglas bsicas ms importantes que hay que conocer son: Se especifica en primer lugar el nmero total de cromosomas, seguido de los cromosomas sexuales y, si las hay, las alteraciones que se encuentren. Los individuos denominados mosaicos se desriben separando cada constitucin cromosmica por una barra / . Las alteraciones se describen utilizando abreviaturas apropiadas, por eejemplo: del significa delecin, dup duplicacin, inv inversin, t translocacin, i isocromosoma, r cromosoma en anillo. Las ganancias o prdidas de cromosomas completos se indican con el signo + o antes del nmero del cromosoma implicado.

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Cromatina Sexual
Masa condensada de cromatina que constituye un cromosoma X inactivado. Cada cromosoma X que sobrepase la cifra de uno, forma un cuerpo de cromatina sexual en el ncleo de los mamferos. Pasaron muchos aos antes de que pudiera establecerse una diferencia entre las clulas masculinas y las femeninas durante la interfase. Pero gracias a los trabajos experimentales en neurofisiologa, de Barr y Bertram (1949), se observ por primera vez una diferencia morfolgica entre las clulas de las gatas y los gatos. Las primeras, presentan un pequeo corpsculo de una a dos micras de dimetro, adherido a la membrana nuclear, que no aparece en las clulas masculinas normales y que durante mucho tiempo se denomin corpsculo de Barr. Por las relaciones que guarda con la presencia de los cromosomas X, a este cromocentro se le llama actualmente cromatina X. Muy rpidamente, las observaciones realizadas por Barr se replicaron en otros tejidos por diferentes investigadores, lo que condujo al mejoramiento de los mtodos de estudio de esta cromatina en individuos sanos y enfermos. De estos ltimos, se realizaron estudios en individuos que presentaban alteraciones o fallas en la diferenciacin sexual con sndromes como el Turner y Klinelfelter. El desarrollo de estos mtodos permiti adems, estudiar una gran diversidad de clulas para la observacin de la ahora llamada cromatina sexual, tal es el caso de los neutrfilos, las neuronas, la mucosa vaginal y clulas de la mucosa bucal.

Anomalas cromosmicas
Estas anomalas pueden ser numricas (presencia de cromosomas adicionales) o estructurales (translocaciones, inversiones a gran escala, supresiones o duplicaciones). Las anomalas numricas, tambin conocidas como aneuploida, hacen referencia a cambios en el nmero de cromosomas, que pueden dar lugar a enfermedades genticas. La aneuploida se puede observar frecuentemente en clulas cancerosas. En los animales slo son viables las monosomas y las trisomas, ya que las nulisomas son letales en individuos diploides. Las anormalidades estructurales a menudo se derivan de errores en la recombinacin homloga. Ambos tipos de anomalas pueden ocurrir en los gametos y, por tanto, estarn presentes en todas las clulas del cuerpo de una persona

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA afectada, o puede ocurrir durante la mitosis y dar lugar a mosaicos genticos individuales que tiene normal y anormal algunas clulas.
Ploida: el nmero de receptores en un cariotipo

La poliploida (ms de dos conjuntos de cromosomas homlogos en las clulas) se produce principalmente en las plantas. Ha sido de gran importancia en la evolucin de estas segn Stebbins. La proporcin de las plantas con flores poliploides es de 30-35% y en el caso de las gramneas un valor mucho ms elevado, alrededor del 70%. La poliploida en plantas inferiores (helechos y psilotales) tambin es comn. Algunas especies de helechos han alcanzado niveles de poliploida muy por encima de los niveles ms altos conocidos en plantas con flores. La poliploida en animales es mucho menos comn, alcanzando importancia en algunos grupos. En humanos se han registrado casos de embriones y fetos triploides (69, XXX) e incluso tetraploides (92, XXXX) que con un gran porcentaje acababan en aborto natural; en el caso poco frecuente de neonatos con dicha carga cromosmica, sus esperanzas de vida no superaban los pocos das postparto debido a diversas alteraciones en todos sus rganos. La endopoliploida se produce cuando los tejidos adultos de las clulas han dejado de dividirse por mitosis, pero los ncleos contienen ms cantidad de cromosomas somticos originales. En muchos casos, los ncleos endodiploides contienen decenas de miles de cromosomas (no pueden contarse con exactitud). Las clulas no siempre contienen exactamente mltiplos (potencias de dos), razn por la cual el aumento en el nmero de conjuntos de cromosomas causados por la reproduccin no es del todo exacto. Este proceso (sobre todo estudiado en insectos y algunas plantas superiores) puede ser una estrategia de desarrollo para aumentar la productividad de los tejidos que son muy activos en la biosntesis. Este fenmeno ocurre espordicamente a travs del reino eucariota desde protozoo hasta el hombre; Este es diverso y complejo, y sirve a la diferenciacin y morfognesis de muchas formas. Vea paleopoliploida para la investigacin de duplicacin de antiguos cariotipos.

Aneuploida :
El trmino es principalmente usado cuando el nmero de cromosomas vara dentro del cruce poblacional de especies. Esto puede tambin ser usado dentro de un grupo de especies estrechamente relacionado. Clsicos ejemplos en plantas son el

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA gnero Crepis, donde el nmero gamtico (= haploide) forma las series x = 3, 4, 5, 6, y 7; y Crocus, donde cada nmero desde x = 3 hasta x = 15 es representado por al menos una especie. Evidencia de varios tipos muestran que las tendencias de evolucin han ido en direcciones diferentes, en diferentes grupos. Anomalas cromosmicas en humanos:

Sndrome de Turner, donde solo hay un cromosoma X (45, X o 45 X0) Sndrome de Klinefelter, se da en el sexo masculino, tambin conocido como 47 XXY. Es causada por la adicin de un cromosoma X. Sndrome de Edwards, causado por una trisoma (tres copias) del cromosoma 18. Sndrome de Down, causado por la trisoma del cromosoma 21. Sndrome de Patau, causado por la trisoma del cromosoma 13.

Tambin se detect la existencia de la trisoma 8, 9 y 16, aunque por lo general no sobreviven despus de nacer. No se han registrado casos en humanos de trisomas en el cromosoma 1, ya que todas acaban en aborto natural y no llegan a nacer. Hay algunos trastornos que se derivan de la prdida de un solo trozo de cromosoma, entre ellas:

Cri du Chat (maullido del gato) donde hay un brazo corto en el cromosoma 5. El nombre viene por el grito que causan los recin nacidos parecido al maullido de un gato debido a una malformacin de la laringe. Sndrome de supresin que se da por la prdida de una parte del brazo corto del cromosoma 1. Sndrome de Angelman; Un 50% de los casos falta un segmento del brazo largo del cromosoma 15. Estas anomalas cromosmicas tambin pueden ocurrir en clulas cancerosas de un individuo genticamente normales. Un ejemplo bien documentado es el de Cromosoma Filadelfia o la llamada translocacin Filadelfia que es una anormalidad gentica asociada a la leucemia mieloide crnica (LMC). Esta anormalidad afecta a los cromosomas 9 y 22. El 95 por ciento de los enfermos de leucemia mieloide crnica presenta esta anormalidad, mientras el resto de los enfermos padecen translocaciones crpticas invisibles a las preparaciones mediante el mtodo de banda G u otras translocaciones que afectan a otro u otros cromosomas de la misma forma que sucede con los cromosomas 9 y 22. Partes de dos cromosomas, el 9 y el 22, intercambian sus posiciones. El resultado es que parte del gen de regin de fractura (BCR, Breakpoint Cluster Region, en ingls) del cromosoma 22 (regin q11) se fusiona con parte del gen ABL del cromosoma 9 (regin q34). El gen ABL toma su nombre de Abelson, el nombre de un virus causante de leucemias precursor de una protena similar a la que produce este gen.

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d)Nomenclatura :
Desde de 1995 se emplean distintos smbolos para describir la anomala que sufre un cromosoma en concreto o un cariotipo, siguiendo las reglas que impone el ISCN (siglas inglesas procedentes de Sistema Internacional de Nomenclatura para Citogentica Humana). Es decir, la frmula cromosmica refleja la descripcin simplificada de un cariotipo. En la frmula cromosmica se registra el nmero total de cromosomas (incluidos los sexuales) seguido de una coma, tras la cual se escriben los cromosomas sexuales. Algunos de los smbolos y abreviaturas usados para describir los cariotipos son:

p: brazo corto del cromosoma. q: brazo largo del cromosoma. +: ganancia de un cromosoma completo. -: prdida de un cromosoma completo. tel: telmero r( ): cromosoma en anillo. Entre parntesis ponemos el cromosoma involucrado. del( )( ): delecin de. En el primer parntesis ponemos los cromosomas en los que se produce la delecin, y en el segundo de dnde a dnde se produce la delecin. ins: insercin de. dup: duplicacin de. inv( )( ): inversin de. En el primer parntesis ponemos los cromosomas en los que se produce la inversin, y en el segundo los extremos del segmento invertido. t: translocacin de. mar: fragmento de ADN que no se sabe de donde procede, y se le designa el nombre de "cromosoma marcador". dic: cromosoma dicntrico. dn: aberracin cromosmica no heredada de los padres sino surgida de novo. h: regin de heretocromatina. i: isocromosoma, es decir, cromosoma que tiene los dos brazos iguales ya sean dos brazos p o dos brazos 1. .ish: cariotipo estudiado por FISH. mat: rearreglo de un cromosma de origen materno. pat: rearreglo de un cromosma de origen paterno. psu dic: cromosoma pseudodicntrico, es decir, en el que solo uno de los centrmeros est activo.

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tri: trisoma. trp: triplicacin de una porcin de un cromosoma.

4.MATERIALES
Fotografas de cariotipos con alteraciones cromosmicas. Lminas preparadas de extendidos de mucosa oral y extendidos crvicouterinos (papanicolau).

5.Mtodo
1. Observar cuidadosamente los cariotipos presentados y determinar qu tipo de alteracin cromosmica presenta. 2. Observar al microscopio de luz las lminas de extendidos de mucosas oral y crvicovaginal identificando en las clulas, la cromatina sexual como un corpsculo intensamente teido adherido a la pared del ncleo. 3. Revisar las normas del SINCH y realizar la nomenclatura de los casos propuestos. 4. Revisar la bibliografa pertinente en relacin a los procesos de diferenciacin sexual y de inactivacin del cromosoma X.

6.Actividad
1) DESCRIBIR LAS SIGUIENTES FRMULAS DE CARIOTIPOS: 46,XY,del(4)(p16.3): Cariotipo masculino anormal con 46 cromosomas, con una delecin en el cromosoma 4 y su punto de quiebra es en la semibanda 3 de la banda 6 de la regin 1 de su brazo corto. Diagnstico: Sndrome de Wolf-Hirschhorn

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47,XY,+21/46,XY: Cariotipo masculino en Mosaico con dos lneas celulares, una con 46 cromosomas, un X y un Y, y otra con 47 cromosomas con un cromosoma 21 adicional. Diagnstico: Sndrome de Down con Alteracin Cromosmica en Mosaico

45,XY,-13,-14,t(13q;14q): Cariotipo masculino anormal con prdida de los

cromosomas 13 y 14, y una translocacin de la banda 4 de la regin 1 del brazo largo del cromosoma 14, a la banda 3 de la regin 1 del brazo largo del cromosoma 13.

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Diagnstico: Fenotipo no alterado en portadores, en caso contrario presentara un cariotipo con Disoma Uniparental (UDP)

46,XX,t(2;6)(q35;p21.3):

Cariotipo femenino anormal con una translocacin recproca de la banda 5 de la regin 3 del brazo largo del cromosoma 2 a la semibanda 3 de la banda 1 de la regin 2 del brazo corto del cromosoma 6. Diagnstico: Alteracin cromosmica recproca recurrente en tumores epiteliales

46,XX,dup(1)(q22-q25): Cariotipo femenino anormal con duplicacin de un segmento que va desde la banda 2 de la regin 2 del brazo largo del cromosoma 1 hasta la banda 5 de la regin 2 del brazo largo de ese mismo cromosoma. Diagnstico: Fuente de nuevo material gentico o base para nuevos cambios evolutivos.

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46,XY,del(5)(p14): Cariotipo masculino anormal con delecin de la banda 4 de la regin 1 del brazo corto del cromosoma 5. Diagnstico: Sndrome de Cri Du Chat o Maullido de Gato

46,XY,r(7)(p22q36): Cariotipo masculino anormal con un cromosoma anular en el cual los puntos de quiebra son la banda 2 de la regin 2 del brazo corto del cromosoma 7 y la banda 6 de la regin 3 del brazo largo de ese mismo cromosoma. Diagnstico: Alteracin cromosmica en anillo causante de Craneosinostosis y Microcefalia

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2) CUNTOS CORPSCULOS DE BARR ESPERARA ENCONTRAR EN LOS SIGUIENTES INDIVIDUOS:

XY X0 XX XXXY XXX XXXX XXY

= No tiene Corpsculo de Barr = No tiene Corpsculo de Barr = Posee un Corpsculo de Barr = Posee 2 Corpsculos de Barr = Posee 2 Corpsculos de Barr = Posee 3 Corpsculos de Barr = Posee un Corpsculo de Barr

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Nota: La cantidad de Corpsculos de Barr (Cromosomas X inactivos) siempre ser una unidad menor a la cantidad de cromosomas X que hayan en el cariotipo.

3) MEDIANTE UN DIBUJO, EXPLICAR LA FORMACIN CROMOSOMA ANULAR Y UN ISOCROMOSOMA Cromosoma Anular

DE

UN

DELECCION Se producen roturas a ambos lados del centrmero y posteriormente se unen los extremos, se forma un cromosoma en anillo. Este tipo de cromosoma anular es bastante frecuente en carcinomas sarcomas y leucemias y raras veces son detectados al nacer. El sndrome de cromosoma 15 en anillo, que resulta de la delecin de la parte del brazo corto del cromosoma 15 (15q25-26), se caracteriza por crecimiento retartado, estatura corta y anomalas faciales distintivas parecidas a las del sndrome de Russell-Silver

Isocromosoma
Son cromosomas metacntricos producidos durante la meiosis o mitosis, cuando el centrmero se divide transversalmente en lugar de longitudinalmente. Los cromosomas generados por esta divisin anormal son un cromosoma con los dos brazos largos del cromosoma original sin brazos cortos y un cromosoma con dos brazos cortos, pero sin brazos largos. Cada uno de estos isocromosomas constituye al mismo tiempo una delecin y un duplicacin simultneamente.Los isocromosomas no se presentan muy frecuentemente. Algunas veces se observan en el sndrome de Edwards.

4) ELABORAR UN ESQUEMA QUE EXPLIQUE LA VA DE DETERMINACIN DEL SEXO EN HUMANOS. INDICAR PROCESOS A NIVEL MOLECULAR.

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5) ELABORAR UN ESQUEMA QUE EXPLIQUE LA INACTIVACIN DEL CROMOSOMA X O DENOMINADA HIPTESIS DE LYON

EUCROMATINA ACETILADA

TRASCRIPCION DEL GEN XIST

EL TRANSCRITO RECUBRE TODO EL CROMOSOMA X

EL TRANSCRITO RECUBRE TODO EL CROMOSOMA X

ORIGINA CAMBIOS: DES-ACETILACION DE HISTONAS METILACION K27 DE H3 REPLICACION TARDIA DEL 36 CROMOSOMA RECLUTAMIENTO HISTONA MACRO H2A

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SE FORMA HETEROCROMATINA FACULTATIVA= SILENCIADO EL CROMOSOMOSA X

6) REALIZAR UN DIBUJO DE SU OBSERVACIN MICROSCPICA DEL CORPSCULO DE BARR EN LMINA DE EXTENDIDOS DE MUCOSA CERVICOVAGINAL.

Observacin: Aumento 100X Coloracin Extendido de mucosa cervicovaginal

Corpsculo de Barr

7) EN LOS SIGUIENTES CARIOTIPOS, DETERMINAR DE QU TIPO DE ALTERACIN CROMOSMICA SE TRATA Y REALIZAR LA NOMENCLATURA CORRESPONDIENTE. INDICAR AL MENOS 3 CARACTERSTICAS CLNICAS EN CADA UNO DE ELLOS. Alteracin: Cariotipo masculino anormal, con 47 cromosomas del cual un cromosoma 13 es adicional Sndrome de Patau

Nomenclatura: 47, XY + 13 Manifestaciones Clnicas:

Labio y/o Paladar Leporino

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Alteracin en la forma y el tamao de su orejas, dedos extra en las manos y en los pies Problema cardiaco

Alteracin: Cariotipo masculino anormal, con 47 cromosomas, dos cromosomas X y un cromosoma Y Sndrome de Kinefelter Nomenclatura: 47, XXY Manifestaciones Clnicas:
Azoorpermia Criptorquidia, micropene, escroto hipoplsico o malformaciones en los genitales Ginecomastia

Alteracin: Cariotipo masculino anormal, 46 cromosomas con delecin distal parcial del brazo largo del cromosoma 4 - Sndrome De Waardemburg Tipo II. Nomenclatura: 46 XY, (4)(q32) Manifestaciones Clnicas: Fisura velopalatina Extremidades cortas Panhipopituitarismo del

Alteracin: Cariotipo masculin anormal, con 47 cromosomas y

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA un cromosoma 21 adicional Sndrome de Down. Nomenclatura: 47, XY + 21 Manifestaciones Clnicas: Retraso de crecimiento e intelectual. Oreja redonda de implantacin baja Hendidura papebral

Alteracin: Cariotipo femenino anormal con 45 cromosomas y monosoma del cromosoma X Sndrome de Turner Nomenclatura: 45, X0 Manifestaciones Clnicas: Infertilidad Ausencia de perodos (ausencia de la menstruacin) Desarrollo retrasado o incompleto,incluye mamas pequeas y vello pbico disperso

7.Conclusiones
Reconocimos las alteraciones cromosmicas numricas y/o estucturales en cariotipos y su implicancia clnica. Sealamos la nomenclatura de distintas alteraciones cromosmicas de acuerdo a normas del SINCH. Identificamos el corpsculo de Barr o cromatina sexual en clulas nucleadas femeninas.

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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA Comprendimos el proceso de diferenciacin sexual y de inactivacin del cromosoma X.

8.Bibliografa
RL. Nussbaum, RR Masclnnes, HF Willard. Thompson y Thompson Gentica en medicina humana. Editorial Saunders, 7 edicin, 2008 Novo Villaverde, Francisco Javier. Gentica Humana. Conceptos, mecanismos y aplicaciones de la Gentica en el campo de la biomedicina. Pearson Educacin, S.A. Madrid. 2007. Karp Gerald. Biologa Celular y Molecular. Conceptos y Experimentos. Mc Graw Hill. 5 Edicin 2009.

9.Linkografa
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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO GENETICA The Cell: A molecular Approach, Fourth Edition by Geoffrey M. Cooper and Robert E. Hausman. http://www.sinauer.com/cooper/4e/index.html
Journal of medical genetics. http://jmg.bmj.com/

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