El papel de los TLR en la activacin de neutrfilos Los neutrfilos son las clulas efectoras inmunes innatas clave que

son reclutados rpidamente a los sitios de infeccin e inflamacin para proporcionar principios de defensa contra microorganismos invasores. Esta funcin se ve facilitada por la expresin de los receptores de tipo Toll (TLR) miembros de la familia de los neutrfilos, lo que permite el reconocimiento de un amplio repertorio de patrones moleculares asociados a patgenos (PAMP) y desencadena la respuesta a patgenos invasores. La activacin de TLR conduce a importantes procesos celulares, incluyendo especies reactivas de oxgeno (ROS) de generacin, la produccin de citoquina y aumento de la supervivencia, todos los cuales pueden contribuir a la patognesis de la inflamacin crnica de sealizacin cuando se convierte en mal regulada. A su vez, la inflamacin y el tejido lesin resulta en la liberacin de ligandos de TLR endgenos, conocidos como patrones moleculares asociados dao-(DAMPs), que son una clase de rpido crecimiento de los estmulos inflamatorios potentes. DAMPS actuar en una forma autocrina, alertando a la gran cantidad de dao, pero tambin puede amplificar la inflamacin que conduce a dao tisular adicional. Esta es una revisin reciente de la literatura sobre la funcin de TLR neutrfilos y la regulacin durante la enfermedad, y proporciona una visin general de la zona recientemente emergente de las respuestas de neutrfilos a DAMPS. Introduccin Inflamacin neutroflica es un componente esencial denuestra respuesta a los antimicrobianos, sin embargo, el potencial de esta respuesta inflamatoria que lleva a dao en el tejido local y la inflamacin adicional tambin est bien descrita. Producido en alrededor de 108 clulas / min y que representa aproximadamente el 70% de las clulas blancas de la sangre circulante, neutrfilos representan nuestras "unidades de respuesta rpida" cuando se enfrentan a la infeccin. Una parte apical de esta respuesta es la deteccin de microbios invasores a travs de patrones moleculares asociados a patgenos (PAMP) por receptores de tipo Toll (TLR), que tanto la amenaza de decodificacin (bacterias Gram-positivas o negativas, virus, hongos) y adaptar los necesaria respuesta a los antimicrobianos. Los neutrfilos expresan la mayora de los miembros de la familia TLR, a falta de slo los receptores intracelulares TLR3 y TLR7. Dado que los neutrfilos defienden principalmente contra las bacterias, es los TLRs situados en la superficie celular que son los ms bien estudiado en neutrfilos TLR biologa, sin embargo, los TLRs intracelulares tambin pueden desempear papeles importantes en las respuestas de patgenos. Tambin ganando atencin es la capacidad de TLRs para detectar molculas endgenas nombre patrones moleculares asociados a daos (HUMEDECE), que son producidos por las clulas en respuesta a una lesin o infeccin. Esta revisin tiene como objetivo poner de relieve la literatura reciente (por lo tanto, en algunas circunstancias crticas ocupar el lugar de las referencias originales) en funcinde TLR neutrfilos y la regulacin durante la enfermedad, y proporcionar una visin general de las respuestas de neutrfilos a DAMPS. TLRs superficie celular TLR2 y TLR4 son los ms estudiados de todos los TLRs neutrfilos, la mediacin de respuestas a las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, respectivamente. TLR2 heterodimerises con TLR1 para detectar pptidos triacilados o TLR6 para detectar pptidos acilados, mientras que TLR4 recognisesthe componente lpido A de lipopolisacridos (LPS). Los neutrfilos tambin expresan TLR co-receptores, incluyendo CD14 andCD11b/CD18, que cooperan withTLR4 o TLR2 en la membrana plasmtica. Por ltimo, TLR5 reconoce flagelina bacteriana. La ligacin de los TLRs la superficie celular se ha demostrado tener mltiples y de gran alcance efectos sobre los neutrfilos, incluyendo la produccin de citoquinas, especies reactivas de oxgeno (ROS) la generacin, el cebado, la expresin del receptor y la fagocitosis. Un elemento especialmente crtico de la funcin de neutrfilos es la regulacin de los neutrfilos vida. Los neutrfilos son clulas de vida corta y constitutivamente mueren por apoptosis, un mecanismo anti-inflamatorio de la eliminacin de clulas. La inhibicin de la apoptosis de los neutrfilos, por ejemplo, en el sitio de la infeccin, permite a estas clulas permanecen funcionalmente competente, sin embargo, esto tambin puede conducir a la liberacin del contenido celular txicos y en ltima instancia, inflamacin y lesin tisular. Incluso antes de su reconocimiento como un ligando TLR4, LPS era un mediador bien descrito de supervivencia de los neutrfilos. Hemos demostrado que en LPS hecho ejerce un efecto de supervivencia temprana (4 h), pero es un factor de supervivencia de los neutrfilos pobres en los puntos finales de tiempo (22 h), y proporcionado

pruebas de que las observaciones anteriores relativas a LPS como un factor clave de supervivencia de los neutrfilos pueden haber sido , en parte, debido a los efectos indirectos sobre las clulas monocticas presentar en cultivos de neutrfilos. Esto puede representar un mecanismo de proteccin que evita la generacin de poblaciones de larga duracin de los neutrfilos altamente activadas sino que tambin proporciona una funcin de monocitos / macrfagos en la regulacin de la inflamacin. Por otra parte, hemos demostrado que se requiere TLR4 y los componentes de sealizacin corriente abajo MyD88 y TIRque contiene el dominio adaptador de induccin de interfern-b (TRIF) (vase la seccin siguiente 'sealizacin de TLR') para la supervivencia temprana de los neutrfilos, lo que indica la sealizacin implica tanto brazos de theTLR4 va. En apoyo de esto, TLR4 anticuerpos de bloqueo fueron eficaces en la reversin de supervivencia de los neutrfilos inducida por la enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC) lquido de lavado bronquial (BAL) in vitro. Esto sugiere que en la vida til de neutrfilos aument observ en los pulmones de pacientes con EPOC puede ser, en parte, mediada byTLR4 agonistas. TLRs intracelulares Los TLRs intracelulares tienen que ver con ladeteccin de ARN y ADN patognicos dentro del endolysosome principalmente. TLR3 detecta viral de doble cadena (ds) RNA, TLR7 y TLR8 reconocen viral monocatenario (ss) ARN, mientras que TLR9 detecta dinucletidos CpG no metilados en ADN bacteriano. Los neutrfilos son sensibles a TLR8 andTLR9 ligandos, pero no responden a los activadores de TLR3 o TLR7. Agonistas de ssRNA virales que actan a travs de TLR8 se ha demostrado que inhiben la apoptosis de neutrfilos humanos, estimular la generacin de citoquinas, inducir ROS y la desgranulacin y el primer inflamatoria para la biosntesis de lpidos mediador. Los neutrfilos tambin expresan constitutivamente otros receptores de reconocimiento de patrones antivirales intracelulares incluyendo cido retinoico inducible gen-I (GAR-I) y la diferenciacin del melanoma protena asociada a 5 (MDA-5), que detectan la presencia de ARN de doble cadena. El ADN bacteriano activa los neutrfilos a travs de TLR9, la mejora de la funcin fagoctica, causando la regulacin de molculas de adhesin, la generacin de citoquinas (predominantemente interleucina (IL) -8 sino tambin IL-6 y factor de necrosis tumoral-alfa (TNF alfa)), ROS y especies reactivas de nitrgeno (RNS ) sntesis y la supresin de la apoptosis de neutrfilos. TLR sealizacin Dadas las limitaciones de estudiar las vas intracelulares en los neutrfilos humanos primarios, las complejas vas de sealizacin de TLR se han estudiado ampliamente en otras clulas y son el objeto de muchas revisiones elegantes. En breve, la iniciacin de lasealizacin a travs de la dimerizacin de unin / ligando del receptor es seguido por el reclutamiento adaptador, que divide ms o menos sealizacin de TLR en dos vas distintas. La va dependiente de MyD88 es utilizada por todos los TLR, con la excepcin de TLR3, y conduce a la activacin del receptor de interleucina-1 quinasa asociada (IRAK) de la familia de las quinasas y posteriormente receptor de TNF factor asociado (TRAF6) y TRAF3. Sealizacin de TLR2 y TLR4 sealizacin requieren, adems, el adaptador de puente Toll-receptor de interleucina-1 (TIR) protena adaptadora que contiene el dominio (TIRAP) / MyD88 adapterlike (Mal) para enlazar los receptores a los MyD88. La va dependiente de TRIF es utilizado por TLR3 y TLR4 a travs de la molcula adaptadora TRIF relacionada con adaptador de puente (TRAM), y conduce directamente a la activacin de TRAF3 y TRAF6. Ambas vas en ltima instancia, resultar en la translocacin nuclear de uno o ms factores de transcripcin (factor de predominantemente nuclear (NF)-kB, la protena activada por mitgeno (MAP) quinasas y los factores reguladores de interfern). Activacin del factor de transcripcin conduce a la expresin de las protenas efectoras, en particular, citocinas y quimiocinas. Aunque hay mucho en comn entre la va de sealizacin, diferentes ligandos activan mltiples vas en diferentes tipos de clulas que permiten una respuesta celular altamente adaptado. La funcin de un nmero de estos miembros dentro de la va de sealizacin de neutrfilos ha sido confirmado utilizando origen naturalo de laboratorio generado gen knockouts. Por ejemplo, los neutrfilos humanos primarios de las personas con una deficiencia IRAK4 autosmica recesiva han proporcionado informacin sobre el papel de esta quinasa en la fagocitosis, quimiotaxis y ROS generation.IRAK4 es una parte fundamental del programa de destruccin bacteriana en los sistemas humanos, jugando un papel clave en defensa inmune contra importantes organismos pigenos, en particular Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.Van Bruggen et al. espectculo IRAK4 se requiere para todas las respuestas TLR con la excepcin de TLR9, aunque interesante, neutrfilos IRAK4-deficientes no se vean

afectados en su capacidad de matar S. aureus, P. aeruginosa o Candida albicans, lo que sugiere que el mecanismo de muerte de neutrfilos es independiente de TLRs/IRAK4 en sistemas de clulas individuales, aunque in vivo, la activacin de los TLR puede todava ser asumido directamente o indirectamente a contribuir a las respuestas de neutrfilos eficaces a estos patgenos. Los neutrfilos tomadas de IRAK4 o ratones deficientes en TRIF muestran thatIRAK4, pero no TRIF, es crucial para la exocitosis de los orgnulos secretores de neutrfilos en respuesta a LPS. Ratones deficientes en MyD88 TRIF o ratones deficientes tambin han proporcionado pruebas para el papel fundamental de los estos adaptadores en la destruccin bacteriana, en modelos de infeccin, ambas cepas de ratones knockout mostraron supervivencia deteriorado reduce la eliminacin de bacterias, inflamacin de las vas y el aumento dela expresin de citoquinas. Adems, los ratones deficientes en MyD88 son incapaces de reclutar neutrfilos al sitio de una infeccin. Hemos descrito previamente la importancia de las redes de citoquinas dependientes de entre clulas de tejido residentes y de las clulas mononucleares en la regulacin de reclutamiento y la funcin de los neutrfilos. As, parece posible que la falta de MyD88 en no neutrfilos (clulas epiteliales, monocitos) se traducir en una reduccin de las respuestas de patgenos, sealizacin inflamatoria y IL-8 de produccin de estas clulas, lo que tendr consecuencias importantes para el reclutamiento de neutrfilos. TLRs neutrfilos y enfermedades Mucho se sabe acerca de los cambios funcionales de los neutrfilos despus de la ligadura de TLR agonistas sintticos o componentes patgenos, y la investigacin en esta rea contina describiendo los efectos proinflamatorios abrumadora de los agonistas de TLR. Ms recientemente una gran cantidad de investigacin se ha centrado en los efectos de la activacin de TLR por todo el patgeno. La regulacin directa y selectiva de la expresin de TLR de neutrfilos y la activacin por las tres clases de agentes patgenos (bacterias, hongos, virus) ha sido descrita. Por ejemplo, la bacteria Gram-negativa Helicobacter pylori mejora TLR2 y TLR4 la expresin en la superficie de los neutrfilos humanos, y el bloqueo de estos receptores inhibe la produccin inducida por H. pylori de IL-8 e IL-10, proinflamatorias y anti-inflamatoria citoquinas, respectivamente. El impacto recprocode regulacin de la expresin de TLR y la posterior produccin de citoquinas en la infeccin por H. pylori, todava no se ha descrito. El hongo Paracoccidioides brasiliensis tambin aumenta la expresin de TLR2 expresin en la superficie de los neutrfilos pero regula a la baja la expresin de TLR4. Curiosamente P. brasiliensis utiliza TLR4 en lugar de TLR2 para obtener acceso a los neutrfilos humanos, lo cual sugiere que la regulacin de la expresin de TLR es una respuesta del husped a la infeccin en lugar de un objetivo directo del patgeno. Bloqueo de TLR, particularmente TLR4, se ha demostrado que inhibe parcialmente neutrophilIL-8 e IL-10 de produccin en respuesta a P. infeccinbrasiliensis. Adems, la IL-8 se ha demostrado estar involucrados en el retraso de la muerte celular de neutrfilos en P. brasiliensis infeccin por mediacin de un efecto anti-apopttico, y permitiendo que el hongo de persistir intracelularmente, lo que sugiere que los TLR pueden ser utilizados por el hongo para garantizar su ownmultiplication.TLR4 tambin est regulado hacia abajo en la sangre perifrica y BAL neutrfilos aislados de nios con sincitial respiratoria grave virus (RSV) bronquiolitis comparacin con los controles. TLR4 reconoce RSV a travs de su protena de fusin de la superficie (F). Los datos presentados en forma de resumen indican que las protenas de RSV se unen a la sangre y los neutrfilos BAL, y los cidos nucleicos virales se han detectado dentro de los neutrfilos que indican infeccin activa de estas clulas. Sin embargo, laconsecuencia de neutrfilos regulacin de TLR durante la bronquiolitis por VRS es desconocido. Se desprende de los estudios antes de que quedan muchas preguntas con respecto a la importancia de la regulacin de la expresin de TLR superficie de los neutrfilos en respuesta a estmulos patgenos. Por ejemplo, se cree que TLR4 para seguir siendo funcional incluso en los niveles de expresin de superficie extremadamente bajas, por ejemplo, unos pocos cientos o menos receptores por clula en las clulas dendrticas inmaduras, por lo que la relevancia funcional de los niveles de expresin del receptor de ser upregulated o downregulated puede ser modesta. Otros factores a considerar son la capacidad de los agonistas de TLR para cebar o funcin tolerise neutrfilos. Cebado de neutrfilos puede mejorar su capacidad para el hogar de los tejidos, prolongar la vida til y por lo tanto la capacidad funcional en el sitio de la infeccin, y causar un aumento dramtico en la respuesta de estas clulas a un agente de activacin alternativa. El aumento de expresin de cebado asociadas con marcadores ha sido reportado en los neutrfilos de sangre perifrica durante las exacerbaciones graves de la EPOC, probablemente a causa de los

acontecimientos inflamatorios locales, y la expresin de estos marcadores cebado disminuye tras el tratamiento. Se ha informado recientemente de que la expresin de TLR4 (pero no TLR2) se regula positivamente en la infiltracin de neutrfilos detectados en el BAL de pacientes con EPOC. Por otra parte, el bloqueo de TLR4 aumento de laapoptosis de neutrfilos que sugiere un papel para TLR4, y potencialmente cebado, en la mejora de la vida til de neutrfilos durante la enfermedad. Sin embargo, la exposicin previa a ligandos de TLR tambin puede causar la tolerancia, un estado transitorio de la refractariedad a la estimulacin subsiguiente, que puede, por un lado proteger contra la hiperactivacin, pero tambin puede hacer que el husped susceptible a infecciones posteriores (revisado en). La tolerancia de neutrfilos a LPS se ha informado in vitro, y mientras esto se asoci con una disminucin de la superficie celular expresin de TLR4 es importante tener en cuenta que no se produjo una parlisis total de la funcin de los neutrfilos. Ms sobre comparableTLR4 expresin se informa sobre los monocitos normales y LPS-tolerante. As, mientras que la expresin de TLR ha demostrado ser alterado durante una serie de enfermedades, las consecuencias de esta regulacin requieren una mayor clarificacin. Las humedades y la activacin de neutrfilos TLR tambin pueden detectar molculas endgenas DAMPS denominados, que se producen a partir de tejido o clulas inmunes en respuesta a una lesin o infeccin (Tabla 1). Adems de iniciar respuestas protectoras, DAMPS han sido implicados en la patognesis de las infecciones agudas tales como la sepsis y los trastornos inflamatorios crnicos tales como enfermedad pulmonar y la artritis reumatoide. El concepto de DAMPS lleg por primera vez a la palestra con la identificacin de la protena de choque trmico 60 (Hsp60) como ligando TLR4. Enla actualidad hay muchos DAMPS conocidos para activar TLR2 y TLR4, incluyendo otros HSPs y componentes de ECM, por ejemplo, cido hialurnico (HA) y sulfato de heparina (revisado en elegantemente), aunque no est claro en qu medida la contaminacin microbiana juega un papel en algunos de estas observaciones. Otros TLRs tambin se han asignado ligandos DAMP: TLR1 / 2 para b-defensinas-3 y los TLRs virales (TLR3, TLR7 y TLR8) para la deteccin de cidos nucleicos auto. Este fenmeno puede ser particularmente importante para los neutrfilos, que a pesar de su papel bien definido como clulas inmunes innatas son reclutados a y se activan en la inflamacin estril y de hecho se ha demostrado que ser activado en respuesta a DAMPS. La protena de alta movilidad de protena B1 grupo nuclear (HMGB1), un activador de TLR2 / 4 que se activa o pasivamente liberada por las clulas lesionadas, conduce a NADPH oxidasa asamblea y la generacin de ROS, la regulacin positiva de la protena antiapopttica Bcl-xl, y la produccin de citoquinas pro-inflamatorias. Estudios in vivo apoyan esto mostrando la entrega intra-peritoneal e intra-traqueal de HMGB1 conduce a la acumulacin de neutrfilos y un anticuerpo de bloqueo a la HMGB1 reduce el nmero de neutrfilos en un modelo de lesin pulmonar inducida por LPS. Una vez ms, es probable que estos efectos sobre el reclutamiento de neutrfilos son al menos en parte indirecta, y reflejan un papel para las clulas de tejidos residentes (clulas epiteliales, macrfagos tisulares) en la inflamacin mediada por laHMGB1 en este contexto. Efectos similares se observan con theTLR2 / 4 activador, HA, en modelos de sepsis en ratas, aunque la naturaleza del efecto depende del peso molecular de las especies de HA.De inters, TLR4 se ha demostrado que desempean un papel regulador negativo en la sealizacin de HA, en donde el reclutamiento de neutrfilos y la inflamacin se incrementan en TLR4 "/" ratones despus de la administracin intra-traqueal de HA. Por otra parte, las ratas sometidas a cualquiera de inhalacin de humo de tabaco o sepsis inducida por la lesin pulmonar mostr menos infiltracin de neutrfilos en el pulmn y la mejora de la supervivencia cuando se pre-tratados con HA de alto peso molecular, lo que sugiere HA puede tener un papel protector en la inflamacin. S100A8 y protenas de unin a calcio S100A9are que estn involucrados en una serie de procesos celulares y se liberan abundantemente de los fagocitos durante la inflamacin. Como ligandos de TLR4, se han mostrado S100A8/A9 para activar los neutrfilos in vitro, lo que lleva a no slo a travs de la desgranulacin de las MAP quinasas, sino tambin en la regulacin de la generacin de ROS. En los estudios in vivo demuestran un papel para S100A8/A9 en la inflamacin, siendo particularmente importante para el reclutamiento de leucocitos en modelos de lesin y la infeccin. Se cree que mientras S100A8/A9 induce tejido de monocitos y la produccin de IL-8 in vitro y por lo tanto tiene el potencial para reclutar neutrfilos a travs de las clulas del tejido, tambin es posible que in vivo, estos DAMPS trabajo de una manera directa, llevando el neutrfilos a travs de la ltimas etapas de la migracin de fagocitos. Otros DAMPS estn implicados en la inflamacin mediada a travs de redes celulares. HSP72 se libera de las

clulas epiteliales bronquiales infectadas por virus, y se detect en los aspirados traqueales de los nios crticamente enfermos infectados con VRS. Por otra parte, tanto derivado de clulas y se purific HSP72 inducida por IL-8 y TNF-a travs de NF-kB en los neutrfilos humanos primarios, pero no en los neutrfilos aislados de los ratones deficientes en TLR4, que indica los efectos de HSP72 son TLR4-dependiente. Ms recientemente, se ha demostrado DAMPS mitocondriales (MTDs) que incluyen pptidos formilo y el ADN mitocondrial para activar los neutrfilos a travs de formilo del receptor-1 pptido andTLR9 respectivamente, causando influjo de Ca2 +, la activacin de p38 y ERK MAP quinasas, la metaloproteinasa de matriz (MMP) de liberacin, IL -8 generacin y la quimiotaxis mejoradas. En experimentos in vivo de este mismo estudio mostraron lesin pulmonar significativa y la infiltracin de neutrfilos en las vas respiratorias en ratas tratadas con MTD. Resumen La capacidad innata de los neutrfilos para reclutar rpidamente a los sitios de infeccin, mejora la depuracin fagoctica y reclutar ms clulas inmunes es crucial para eliminar una amenaza patgena. Sin embargo, si el intrincado equilibrio de patgeno / neutrfilos se perturba, el costo de este proceso para el anfitrin es a menudo la generacin de un entorno de pro-inflamatorias y la liberacin de factores nocivos tales como las proteinasas derivadas de neutrfilos y de ROS, lo que resulta en dao a los los tejidos y la produccin de DAMPS. Estas seales de peligro endgeno posteriormente inducir una cascada proinflamatoria mediante la activacin de los TLR, regulacin al alza de mediadores pro-inflamatorios y provocando un mayor dao tisular que conduce a mayores niveles de DAMPS. La creacin de este bucle autocrino pro-inflamatoria puede dar lugar a la inflamacin crnica o la enfermedad autoinmune. Por lo tanto la supresin de la capacidad de DAMPS para activar los TLR puede ser una alternativa racional a los enfoques actuales para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, y crea una gama de nuevas dianas potenciales. En efecto, existe una creciente evidencia de estudios en humanos que el bloqueo de estos mediadores puede mejorar la enfermedad y animal. El establecimiento de los mecanismos de activacin de TLR y la sealizacin son exclusivos de DAMPS y que son esenciales para PAMP, es el prximo objetivo. Esto puede permitir la identificacin y definicin de objetivos o caminos especficos, para apagar o al menos adaptar la respuesta a las seales de dao endgeno, preservando al mismo tiempo la respuesta de los neutrfilos a los patgenos. El objetivo final de estos estudios ser la identificacin de nuevas dianas para la intervencin teraputica inmunomoduladora para modular las enfermedades neutrfilos y la resolucin de las ayudas de la inflamacin.