BIOTECNOLOGIA EN MINERIA Y LIXIVIACION BACTERIANA

PRACTICA N 1
Formacin y Preparacin de medios de Cultivo (MicroorganismosLixiviantes)

Fisiologia Microbiana:Medio Liquido 9K para A. ferroxidans
Ingredientes 10X(g/L) 1X(g/L) Para 200 mL
(NH
4
)
2
SO
4
150 15 3
KCl 5 0,5 0,1
K
2
HPO
4
2,5 0,25 0,05
MgSO
4
.7H
2
O 25 2,5 0,5
Ca(NO
3
)
2
0,72 0,072 0,0144
H
2
SO
4
10N 50ml 5 1mL

FeSO.7H2O 330 33 6,6
S
0
50 5 1
Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O 50 5 1
Mineral(calcopirita) 100 10 2

O
2
(72%) Aireacin

CO
2
(0.036%) Aireacin

Procedimiento:
1. Se procede a pesar los insumos para 200mL de medio de cultivo.
2. Se realizaron tres medios uno rico en azufre , otro con FeSO
4
.7H2O y el ultimo con
el mineral (calcopirita).
3. Los insumos son llevados a cada Erlenmeyer (capacidad de Erlenmeyer 1000mL de
volumen) al cual se enrasa a 200mL (20% del volumen total). Se trabaja a un menor
volumen para exista una mayor proporcin de oxgeno, por tanto de CO
2
.
4. Se mide su ph, el cual se corrige con ayuda de micropipetas, pH-metro y cido
sulfrico diluido hasta llegar a un pH de 1,6.
5. Una vez corregido se derivan a dos matraces de menor volumen, en uno se
inoculara la bacteria y el otro servir de control.
6. En el primer matraz, se inoculan 10 uL de microorganimos con ayuda de
micropipetas. Los cuales fueron previamente adaptados al medio, para mayor
facilidad de crecimiento microbiano.
7. Los matraces se transladan a un agitador mltiple (shaker), con el fin de
homogenizar el medio.
8. Se evala el potencial y Ph cada da evidenciando su crecimiento en el cambio de
dichos parmetros.
9. Una vez terminada la oxidacin del HIERRO y/o AZUFRE (E = 490mv),se elimina
el sobrenadante.
NOTA: Si se desea aislar la bacteria, se elimina el sobrenadante, se filtra se peletiza
el sedimentado, se lava coac. Sulfrico, y somete a enfriamiento (-80C) para su
conservacin.




PRACTICA N2:
PREPARACIN DE MEDIOS SOLIDOS
1. Se procede de la misma manera q en la prctica N1, hasta el punto 3.
2. El medio debe estar en un rango pH (1.4 - 3-5)
3. Se utiliza la agarosa que le dar la gelificacin al medio, (8g/lt).
4. Se calienta a 80C por 5 min. Seguidamente se hace el plaqueo (15 a 20 ml por
placa) hasta su gelificacin.
5. Inocular las bacterias.