I.

INTRODUCCION

En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como poblaciones
mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos, necesitamos tenerlos como
cultivos puros.
Un cultivo puro es aquel en el que todos los microorganismos provienen de una sola clula.
La obtencin de un cultivo puro, a partir de una poblacin mixta, se lleva a cabo en dos etapas:
1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos queden lo
suficientemente separados sobre la superficie de un medio de cultivo slido, de manera
que luego de la incubacin ellos formen colonias visibles aisladas. Este proceso se cmo
como aislamiento. En esta placa tendremos diferentes tipos de colonias correspondientes
a los diferentes microorganismos presentes en la poblacin original.
2. Luego de tener las colonias aisladas, estn deben transferirse con el filamento a un que
contenga agar nutritivo estril para cultivar esa colonia aislada; este proceso se conoce
como trasplante.
Para garantizar la pureza del cultivo, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada.
Se considera que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso, todas las
colonias presenten las mismas caractersticas
El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento depender, entro otros factores, de los
requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia de
microorganismos que, por sus caractersticas y/o por la cantidad en que se encuentren en la
muestra, dificulten la obtencin de los microorganismos objeto del aislamiento. Este ltimo caso,
se deben utilizar medio de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de
grmenes contaminantes.
Basndose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles microorganismos
que se encuentren presentes en la misma y ese conocimiento ayudara en la seleccin del medio y
las condiciones del cultivo adecuado.









II. OBJETIVO

2.1 OBJETIVOS GENERAL

Evaluacin de microorganismos

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Evaluar cualitativamente los microorganismos que se encuentran en el medio
ambiente
Preparar los medios de cultivo para el desarrollo de los microorganismos




III. MARCO TEORICO

3.1 Medio de cultivo:

El medio de cultivo se emplea para tres fines principales:

Desarrollar y conservar cultivos
Estudiar la accin de los microorganismos sobre alguna sustancia del medio
Facilitar la produccin por los microorganismos en algn producto determinado o
combinacin de productos.

Los medios de cultivo varan en complejidad, la cual va desde los tejidos hasta las simples
mezclas de sales orgnicas. Muchos microorganismos requieren solo los medios de
cultivo orgnicos, otros necesitan medios especiales para su desarrollo o para ayudar a la
identificacin cuando las caractersticas del cultivo y las reaccin es especificas son los
factores determinantes

El medio de cultivo debe estar exento de sustancias que puedan inhibir el desarrollo de
los microorganismos que han de cultivarse.



3.2 Esterilizacin:

El autoclave es un instrumento para hervir el agua bajo presin y poder esterilizar desde
materiales de vidrio y los medios de cultivo, es decir liminar todo los microorganismos
presentes.

Para el manejo de la autoclave se debe de tener en cuenta lo siguiente:

Comprobar el nivel de agua y la carga
Cerrar hermticamente la tapa.
Abrir la vlvula de vapor y encender
Una vez que salga el vapor por la vlvula, esperar al menos cinco minutos para
expulsar todo el aire y cerrar la vlvula
Esperar que el manmetro descienda a cero y abrir entonces la llave de vapor.
Esperar unos 5 minutos y abrir la tapa, y despus de unos minutos quitar la carga.

3.3 Materiales:

Placas Petri

La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta de la
misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda colocar
encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte de la coleccin
conocida como material de vidrio. Tiene usos en microbiologa.

Matraz Erlenmeyer

Se utiliza para el armado de aparatos de destilacin o para hacer reaccionar sustancias
que necesitan un largo calentamiento. Tambin sirve para contener lquidos que deben
ser conservados durante mucho tiempo.

Bagueta

Varilla de Vidrio utilizada para agitar soluciones o lquidos, con el fin de homogenizar



Probeta

La probeta es un instrumento volumtrico que consiste en un cilindro graduado de vidrio
que permite contener lquidos y sirve para medir volmenes de forma aproximada.

Cocina elctrica

Una cocina elctrica es una variacin de la cocina que convierte
la electricidad en calor

Papel aluminio

El papel aluminio es una hoja fina de aluminio que, a consecuencia de ello, es
extremadamente maleable y permite numerosos usos en la vida cotidiana, entre las que
est la de poder hacer de envoltorio de diversos objetos conductores de electricidad y se
utiliza tambin como papel de embalaje para envolver alimento.

Agua destilada

El agua destilada es aquella sustancia cuya composicin se basa en la unidad
de molculas de H2O. Es aquella a la que se le han eliminado los iones e impurezas
mediante destilacin. La destilacin es un mtodo en desuso para la produccin de agua
pura a nivel industrial. Esta consiste en separar los componentes lquidos de una mezcla.

Agar plate count

Plate Count Agar (PCA), tambin llamado mtodos estndar de agar (SMA), es un medio
de crecimiento microbiolgico comnmente utilizado para evaluar o para monitorizar
"total" o el crecimiento de bacterias viables de una muestra. PCA no es un medio
selectivo.
La composicin del agar para recuento en placa puede variar, pero por lo general
contiene (w / v): [1]

0,5% de peptona
Extracto de levadura 0,25%
0,1% de glucosa
1,5% de agar
pH ajustado a neutro a 25 C

IV. MATERIALES Y METODOS

4.1 Materiales:

Placas Petri
Matraz Erlenmeyer
Bagueta
Probeta
Cocina elctrica
Papel aluminio
Agua destilada
Agar plate count
Papel Kraf

4.2 Mtodos

Desarrollar la prctica teniendo en cuenta el siguiente procedimiento:

a) Preparacin del medio de cultivo

En un matraz disolver el agar en polvo con agua destilada, luego llevar al fuego
para su completa disolucin. Tapar la boca del Erlenmeyer con cierta cantidad de
algodn.

b) Esterilizar el medio de cultivo y las placas Petri

c) Plaquear y fijar un lugar determinado del ambiente que se quiera analizar, dejando
al descubierto las placas Petri por un espacio de 5 a 10 minutos. cumplido el
tiempo necesario, anotar el lugar, fecha y nombre del estudiante, luego incubar a
una temperatura de 25 a 30"C, por un espacio de 4 a 5 das.

d) Observar el desarrollo de colonias y determinar:

Numero de colonias
Frecuencias de tipos de colonias
Caractersticas particulares: color, aspecto general, etc.