POE COLIFORMES TOTALES

TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)

SMEWW-APHA-AWWA 22st Ed.
Blgo. Mblgo. Jos Carlos Azabache Asmat

POE COLIFORMES TOTALES
Objetivos
Describir las actividades especficas para el desarrollo del
ensayo, Numeracin de Coliformes totales en aguas.

Alcance
Agua natural, potable, residual, embotellada, tratada
POE COLIFORMES TOTALES
Coliformes totales:
Bacilo G , no esporulados
Aerobios, anaerobios facultativos, oxidasa negativos
Gas y cido por fermentacin de lactosa (35C 24h)
NMP:
Tcnica basada en formulas probabilsticas para estimar densidades
de poblacin microbiana
Se basa en la fermentacin de la lactosa con produccin de gas
a 35C, realizada en tubos mltiples.
POE COLIFORMES TOTALES
Autoclave a 121C3C.
Estufa a 170C10C.
Incubadora a 35C0.5C.
Refrigerador a 1C-4C.
pH metro.
Balanza de precisin: 200g - 0.01.
Vortex.

Frascos de vidrio: 250 ml y 500ml.

Tubos de ensayo: 20x150mm y 15x150mm.

Pipetas: 10ml y 1 ml.

Campanas de Durham.

Asa bacteriolgica.

Equipos, materiales

POE COLIFORMES TOTALES
Caldo lauril sulfato triptosa (CLS X y CLS 2X).
Caldo lactosa bilis verde brillante (Brila).
Diluyente agua de peptona.

Medios de cultivo

Fase presuntiva
c/tubo

CLS 2x
10 mL muestra




c/tubo

CLS x
1 mL muestra




c/tubo

CLS x
0.1 mL muestra




INCUBAR
35C +/- 0.5C
24h +/- 2h
Presuntivo
positivo
coliformes
totales
produccin de
gas y turbidez
Si a 24 h no
se observan
estas
condiciones,
completar 48h
POE COLIFORMES TOTALES
Fase confirmativa

INCUBAR
35C +/- 0.5C
24 a 48 h
Coliformes totales
produccin de gas
y turbidez
Serie 2 1 1
consultar tabla NMP

POE COLIFORMES TOTALES
C Brila
2 asadas muestra




Presuntivos
positivos CT




NMP PARA SERIE DE 5 TUBOS
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Reporte de resultados:

9,2 NMP Coliformes totales / 100 mL


POE COLIFORMES TOTALES
CONSIDERACIONES
Realizar esterilizacin de materiales con indicadores de temperatura

Previo a la inoculacin de los tubos se deber esterilizar la sala de
siembra exponiendo con luz UV durante 15 minutos.

Durante la transferencia del inculo a los tubos se debe exponer una
placa con APC durante 15 minutos, con el fin de comprobar que nuestra
sala de siembra se encuentra estril.

POE COLIFORMES TOTALES
Primer nivel o autocontrol

Control positivo:Escherichia coli ATCC 25922
Control negativo: Enterococcus faecalis ATCC 29212
Blanco del medio: sin crecimiento
Control del diluyente: sin crecimiento
Control de ambiente: <15ufc/min

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