V o l . 1 8 , N o . 2 A N T I M I C R O B I A L A GEN T S A N D C H EM o T H ER A P Y , A u g . 1 9 8 0 , p .

3 4 6 - 3 4 8
0 0 6 6 - 4 8 0 4 / 8 0 / 0 8 - 0 3 4 6 / 0 3 $ 0 2 . 0 0 / 0
N O T ES
C o m p a r a t i v e N e p h r o t o x i c i t i e s o f H i g h - Do s e N e t i l m i c i n a n d
T o b r a m y c i n i n R a t s
R I C H A R D A . P A R KER , * DA V I D N . GI L B ER T , DO N A L D C . H O UGH T O N , GEO R GE A . P O R T ER , A N D
WI L L I A M M . B EN N ET T
Di v i s i o n o f N e p h r o l o g y , Un i v e r s i t y o f O r e g o n H e a l t h Sc i e n c e s C e n t e r , P o r t l a n d, O r e g o n 9 7 2 0 1
T h e n e p h r o t o x i c p o t e n t i a l s o f n e t i l m i c i n a n d t o b r a m y c i n g i v e n i n do s e s o f 1 8 0
m g / kg p e r da y f o r u p t o 1 4 da y s we r e c o m p a r e d i n F i s c h e r r a t s . A t t h i s do s a g e ,
t o b r a m y c i n p r o du c e d m o r t a l i t y a n d s i g n i f i c a n t c h a n g e s i n r e n a l s t r u c t u r e a n d
f u n c t i o n ; n e t i l m i c i n e v o ke d m i n i m a l n e p h r o t o x i c i t y .
R e c e n t s t u di e s h a v e s h o wn t h a t t o b r a m y c i n
a n d n e t i l m i c i n a r e l e s s n e p h r o t o x i c t h a n g e n t a -
m i c i n i n v a r i o u s a n i m a l m o de l s ( 2 , 3 , 6 , 7 ) . A s
s h o wn i n a n e a r l i e r s t u dy ( 8 ) , da i l y do s e s o f 1 2 0
m g o f n e t i l m i c i n o r t o b r a m y c i n p e r kg p r o du c e
m i j n i m a l n e p h r o t o x i c i t y i n F i s c h e r 3 4 4 r a t s . T h e
c u r r e n t r e p o r t c o m p a r e s t h e n e p h r o t o x i c i t i e s o f
t h e s e t wo dr u g s a t da i l y do s e s o f 1 8 0 m g / kg .
M a l e F i s c h e r 3 4 4 r a t s we i g h i n g 2 2 0 t o 2 5 0 g
we r e h o u s e d i n m e t a b o l i c c a g e s , f e d a s t a n da r d
r a t c h o w, a n d a l l o we d f r e e a c c e s s t o wa t e r . T o -
b r a m y c i n o r n e t i l m i c i n i n a do s e o f 1 8 0 m g / kg
p e r da y wa s a dm i n i s t e r e d s u b c u t a n e o u s l y i n t wo
e q u a l do s e s . L i t t e r m a t e c o n t r o l s r e c e i v e d a n
e q u a l v o l u m e o f n o r m a l s a l i n e i n t wo di v i de d
do s e s . T h e r a t s we r e we i g h e d a t 3 - da y i n t e r v a l s
du r i n g t h e t r e a t m e n t p e r i o ds , a n d a p p r o p r i a t e
a dj u s t m e n t s i n dr u g do s e s we r e m a de .
A n i m a l s we r e s a c r i f i c e d i n g r o u p s o f s i x ( f o u r
t r e a t e d a n d t wo c o n t r o l ) a f t e r 3 , 7 , 1 0 , a n d 1 4
da y s o f t r e a t m e n t . A t o t a l o f 4 8 r a t s wa s u l t i l i z e d
du r i n g t h e s t u dy . O f t h e s e 1 6 r e c e i v e d t o b r a -
m y c i n , 1 6 r e c e i v e d n e t i l m i c i n , a n d 1 6 r e c e i v e d
n o r m a l s a l i n e o n l y . A t 1 2 h a f t e r t h e l a s t i n j e c -
t i o n , b l o o d wa s c o l l e c t e d f o r m e a s u r e m e n t s o f
u r e a n i t r o g e n ( T e c h n i c o n a u t o a n a l y z e r ) , c r e a t i -
n i n e ( m o di f i e d J a f f e r e a c t i o n ) , a n d e l e c t r o l y t e s
( f l a m e p h o t o m e t r y ) . O n e ki dn e y wa s f i x e d i n
s i t u v i a c a r di a c p e r f u s i o n f o r e x a m i n a t i o n b y
l i g h t m i c r o s c o p y a n d m e a s u r e m e n t o f a m i n o g l y -
c o s i de c o n c e n t r a t i o n b y m e t h o ds p r e v i o u s l y de -
s c r i b e d ( 5 ) . T h e r e m a i n i n g ki dn e y wa s r e m o v e d,
we i g h e d, a n d p l a c e d i n i c e - c o l d 0 . 9 % s a l i n e f o r
s l i c e t r a n s p o r t s t u di e s . R e n a l c o r t i c a l s l i c e s we r e
p r e p a r e d f r e e h a n d a n d p r o c e s s e d b y m e t h o ds
m o di f i e d f r o m H o o k a n d M u n r o ( 4 ) . T h e r e s u l t s
we r e e x p r e s s e d a s a s l i c e / m e di u m r a t i o ( S/ M ) ,
wh e r e S e q u a l s e i t h e r t h e m i l l i g r a m s o f p a r a -
a m i n o h i p p u r a t e ( P A H ) p e r g r a m o f we t t i s s u e
o r t h e c o u n t s p e r m i n u t e s o f n - [ 1 4 C ] m e t h y l n i -
c o t i n a m i de
( [ W4 C ] N M N )
a c t i v i t y p e r g r a m o f we t
t i s s u e , a n d M e q u a l s t h e P A H o r [ " 4 C ] N M N
c o n c e n t r a t i o n p e r m i l l i l i t e r o f m e di u m . R e n a l
t i s s u e a m i n o g l y c o s i de c o n c e n t r a t i o n s we r e de -
t e r m i n e d b y r a di o i m m u n o a s s a y a n d e x p r e s s e d
a s m i c r o g r a m s p e r g r a m o f we t we i g h t ( 8 ) . St a -
t i s t i c a l e v a l u a t i o n wa s a c c o m p l i s h e d wi t h St u -
de n t ' s t t e s t , wi t h P < 0 . 0 5 c h o s e n a s t h e m i n i -
m u m l e v e l f o r s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e .
T h e r e wa s n o m o r t a l i t y a m o n g n e t i l m i c i n -
t r e a t e d a n i m a l s . I n c o n t r a s t , o n l y o n e o f f o u r
t o b r a m y c i n - t r e a t e d r a t s s u r v i v e d t h e 1 0 - da y -
t r e a t m e n t i n t e r v a l , a n d t h i s s u r v i v o r h a d a s e -
r u m c r e a t i n i n e l e v e l o f 5 . 3 m g / dl . T h e t h r e e
a n i m a l s t h a t f a i l e d t o s u r v i v e di e d o n da y 8 a n d
9 o f dr u g a dm i n i s t r a t i o n . I n t h i s 1 4 - da y - t r e a t -
m e n t s t u dy , o n e o f f o u r r e c i p i e n t s o f t o b r a m y c i n
di e d o n da y 1 1 . R a t s t h a t f a i l e d t o c o m p l e t e
t o b r a m y c i n t r e a t m e n t e x h i b i t e d m o de r a t e n a s a l
b l e e di n g a n d s t a g g e r i n g g a i t b e f o r e de a t h . T h e r e
we r e n o o b s e r v e d s e i z u r e s o r o v e r t e v i de n c e o f
n e u r o m u s c u l a r p a r a l y s i s . R a t s r e c e i v i n g t o b r a -
m y c i n a n d s u r v i v i n g f o r 1 0 a n d 1 4 da y s we r e
l e t h a r g i c b u t m o b i l e . T h e r e we r e e s s e n t i a l l y n o
p h y s i c a l m a n i f e s t a t i o n s o f dr u g t o x i c i t y a m o n g
t h e n e t i l m i c i n - t r e a t e d a n i m a l s .
R e n a l f u n c t i o n da t a a r e s u m m a r i z e d i n F i g . 1 .
B y da y 3 , t h e r e we r e s i g n i f i c a n t di f f e r e n c e s i n
t h e l e v e l s o f s e r u m c r e a t i n i n e i n t h e t wo t r e a t -
m e n t g r o u p s ( P < 0 . 0 0 1 ) . B y 1 4 da y s , a n i m a l s
t h a t s u r v i v e d t o b r a m y c i n t r e a t m e n t h a d a m e a n
s e r u m c r e a t i n i n e l e v e l o f 3 . 2 m g / dl c o m p a r e d
wi t h a m e a n o f 0 . 6 7 m g / dl i n t h e n e t i l m i c i n -
t r e a t e d g r o u p ( P < 0 . 0 1 ) . Ur e a n i t r o g e n l e v e l s
f o l l o we d t h e s a m e p a t t e r n .
T h e c h a n g e s i n s l i c e a c c u m u l a t i o n o f P A H
a n d N M N a f t e r 9 0 m i n o f i n c u b a t i o n a r e a l s o
s h o wn i n F i g . 1 . Si g n i f i c a n t di f f e r e n c e s b e t we e n
n e t i l m i c i n - a n d t o b r a m y c i n - t r e a t e d a n i m a l s
we r e p r e s e n t a t a l l t r e a t m e n t i n t e r v a l s . C o m -
3 4 6
N O T ES 3 4 7
N
3 7 1 0 1 4
Do y o f T r e o t m i
F I G. 1 . Su m m a r y o f r e n a l f i
i o n t r a n s p o r t . Da t a f r o m c o n t r o l
t r e a t e d r a t s . Sy m b o l s : 0 , c o n t r (
m y c i n ( 1 8 0 m g / kg p e r da y ) ; A , n
p e r da y ) ; + , s i g n i f i c a n t l y di f f e r e
*, s i g n i f i c a n t l y di f f e r e n t v e r s u w
n e t i l m i c i n a t e a c h t i m e p o i n t . n
3 a n d 4 da y s , n = 1 a t 1 0 da y s ,
n = 2 f o r c o n t r o l r a t s a t e a c h t i n
u r e a n i t r o g e n .
p a r e d wi t h c o n t r o l s , t o b s a m 3
t i a l s t i m u l a t i o n f o l l o we d b y
s i o n o f P A H t r a n s p o r t . N e t i l
u l a t e P A H u p t a ke a n d i n du i
i m p a i r m e n t o f t r a n s p o r t a t 1 0
t r a n s p o r t wa s i m p a i r e d b y b
b r a m y c i n p r o du c i n g t h e g r e a
T h e c o n c e n t r a t i o n s o f n e t i
t e x e x c e e de d t h o s e o f t o b r a i
m e n t i n t e r v a l s . St a t i s t i c a l l y
e n c e s we r e n o t e d a t 3 da y s ( 1
g , P < 0 . 0 1 ) a n d 1 4 da y s o f d
( 1 , 2 1 3 v e r s u s 3 7 6
, u g / g ,
P < 0
T h e a n i m a l s t r e a t e d wi t h
o p e d p r o g r e s s i v e t u b u l a r n
a f t e r 1 0 da y s , 5 0 % o f t h e o u l
e x h i b i t e d de s t r u c t i o n o f t h e
c o n c l u s i o n o f 1 4 da y s , n e c r o s i L
b u t t u b u l a r r e g e n e r a t i o n p r e d
n e c r o s i s wa s m i n i m a l a m o n j
n e t i l m i c i n . V a c u o l i z a t i o n o f p
i t h e l i a l c e l l s wa s p r e s e n t i n e a
m e n t g r o u p ; h o we v e r , di s i n t e
i n g we r e o n l y r a r e l y o b s e r v e (
P r e v i o u s s t u di e s i n a n i m a l
t o de m o n s t r a t e a s i g n i f i c a n t
n e p h r o t o x i c i t i e s o f n e t i l m i c i
( 8 , 9 ) . H o we v e r , a c l e a r - c u t d
wh e n t h e dr u g s a r e a dm i n i s t l
m g / kg p e r da y : n e t i l m i c i n
t o x i c da m a g e , wh e r e a s t o b r a m y c i n i n du c e s p r o -
C R EA T I N I N E f o u n d r e n a l s t r u c t u r a l a n d f u n c t i o n a l a l t e r a t i o n s .
T h e c h a n g e s i n o r g a n i c i o n ( P A H a n d N M N )
t r a n s p o r t s e e n i n r e s p o n s e t o t h e s e dr u g s c o n -
f o r m t o t h e p a t t e r n t h a t we h a v e p r e v i o u s l y
- /
+
de s c r i b e d f o r a m i n o g l y c o s i de a n t i b i o t i c s ( 1 ) .
T h o s e dr u g s wh i c h a r e de s t i n e d t o p r o du c e o v e r t
r e n a l f a i l u r e i n du c e a n i n i t i a l s t i m u l a t i o n o f t h e
N M N s l i c e u p t a ke o f P A H , wh e r e a s t h o s e t h a t do n o t
p r o du c e s i g n i f i c a n t n e p h r o t o x i c i t y f a i l t o e n -
h a n c e P A H t r a n s p o r t . T h e m e c h a n i s m o f t h i s
s t i m u l a t i o n o f P A H t r a n s p o r t r e m a i n s t o b e
de t e r m i n e d. B o t h dr u g s i m p a i r e d o r g a n i c b a s e
. ( N M N ) t r a n s p o r t , a l t h o u g h t h e de g r e e o f i m -
. . p a i r m e n t wa s g r e a t e r a f t e r t o b r a m y c i n a dm i n -
*+
i s t r a t i o n . Dr u g - i n du c e d a l t e r a t i o n o f t h e o r g a n i c
3 7 1 0
1 4
b a s e t r a n s p o r t s y s t e m r e p r e s e n t s o n e o f t h e m o r e
e n t
s u b t l e m a n i f e s t a t i o n s o f a m i n o g l y c o s i de n e p h -
u n c t i o n a n d o r g a n i c r o t o x i c i t y .
a n d a m i n o g l y c o s i de - B o t h dr u g s we r e c o n c e n t r a t e d wi t h i n t h e r e n a l
o l a n i m a l s ; A , t o b r a -
c o r t e x , b u t , a s h a s b e e n t h e c a s e i n
p r e v i o u s
i e t i l m i c i n ( 1 8 0 m g / kg
s t u di e s , t h e a b s o l u t e c o r t i c a l c o n c e n t r a t i o n s o f
m n t v e r s u s n e t i l m i c i n ;
t h e t h e g a b s i de f a i l t o n c e i r a t i -
s
c o n t r o l . n
=
4 f o r t h e a m i n o g l y c o s i de s
f a i l e d t o p r e di c t t h e i r u l t i -
=
4 f o r t o b r a m y c i n a t m a t e n e p h r o t o x l c i t i e s .
a n d n = 3 a t 1 4 da y s . We h a v e p r e v i o u s l y s h o wn t h a t F i s c h e r r a t s
m e p o i n t . B UN , B l o o d t o l e r a t e do s e s o f t o b r a m y c i n u p t o 1 2 0 m g / kg
p e r da y wi t h o u t m o r t a l i t y ( 8 ) . I n c r e a s i n g t h e
do s e t o 1 8 0 m g / kg p e r da y e x c e e ds t h e m a x i -
m a l l y t o l e r a t e d do s e i n 5 0 % o f t h e a n i m a l s . N e -
r c i n i n du c e d a n i n i - t i l m i c i n ,
o n t h e o t h e r
h a n d,
i s we l l t o l e r a t e d i n
a p r o f o u n d de p r e s - do s e s u p t o 1 8 0 m g / kg p e r da y . P r e l i m i n a r y
m i c i n di d n o t s t i m - s t u di e s i n o u r l a b o r a t o r y , h o we v e r , h a v e s h o wn
c e d o n l y m o de r a t e t h a t 1 0 0 % m o r t a l i t y e n s u e s wh e n n e t i l m i c i n i s
a n d 1 4 da y s . N M N g i v e n i n a do s e o f 2 4 0 m g / kg p e r da y . T h e s e
. o t h dr u g s , wi t h t o - a n i m a l s di e o f a p p a r e n t a c u t e r e s p i r a t o r y p a r a l -
t t e r c h a n g e s . y s i s .
I m i c i n i n r e n a l c o r - Ex t r a p o l a t i o n o f t h e s e da t a c o m p a r i n g t h e
m y c i n a t a l l t r e a t - n e p h r o t o x i c i t i e s o f e q u a l do s e s o f n e t i l m i c i n a n d
s i g n i f i c a n t di f f e r - t o b r a m y c i n i n r a t s t o c l i n i c a l p r a c t i c e i s c o m p l i -
L , 3 8 4 v e r s u s 6 9 6 , L g / c a t e d b y t h e c u r r e n t do s a g e r e c o m m e n da t i o n s
[ r u g a dm i n i s t r a t i o n i n h u m a n s . T h e r e c o m m e n de d m a i n t e n a n c e
. 0 0 1 ) . do s e o f t o b r a m y c i n i s 4 . 5 m g / kg p e r da y , wh e r e a s
t o b r a m y c i n de v e l - t h a t o f n e t i l m i c i n i s 6 m g / kg p e r da y , a di f f e r e n c e
i e c r o s i s s u c h t h a t , o f 2 5 % . A l t h o u g h t h e c l i n i c a l r e l e v a n c e o f t h e
t e r c o r t i c a l t u b u l e s dr u g do s a g e s e m p l o y e d i n t h i s s t u dy i s q u e s t i o n -
e p i t h e l i u m . A t t h e a b l e , t h e do s e s we r e c h o s e n t o p r o du c e c h a n g e s
s wa s s t i l l a p p a r e n t ,
s u f f i c i e n t t o f o r m a b a s i s f o r c o m p a r i s o n . I t
l o m i n a t e d. T u b u l a r s h o u l d b e n o t e d t h a t , wh e n f a c t o r e d f o r b o dy
g
r a t s t r e a t e d wi t h s u r f a c e a r e a r a t h e r t h a n f o r b o dy m a s s , t h e do s e s
) r o x i m a l t u b u l a r e p - e m p l o y e d i n t h i s s t u dy a r e o n l y s i x t o s e v e n
c h n e t i l m i c i n t r e a t - t i m e s t h e a c c e p t e d h u m a n do s e s . T h e da t a de m -
g r a t i o n a n d s l o u g h - o n s t r a t e t h a t , a t 1 8 0 m g / kg p e r da y , n e t i l m i c i n
dg r a t i o n
a n d
s l o u g h -
i s l e s s
n e p h r o t o x i c
t h a n
t o b r a m y c i n .
I n
a ddi t i o n ,
m o de l s h a v e f a i l e d i n t h e do s e s e m p l o y e d i n r a t s , n e t i l m i c i n de m -
t di f f e r e n c e i n t h e o n s t r a t e s a f l a t do s e - r e s p o n s e r e l a t i o n s h i p a s
i n a n d t o b r a m y c i n r e g a r ds n e p h r o t o x i c i t y .
i f f e r e n t i a l de v e l o p s
e r e d i n do s e s o f 1 8 0
p r o du c e s m i n i m a l
T h i s wo r k wa s s u p p o r t e d b y t h e O r e g o n H e a r t A s s o c i a t i o n ,
t h e N a t i o n a l I n s t i t u t e s o f H e a l t h ( P u b l i c H e a l t h Se r v i c e g r a n t
R O 1 GM 2 2 9 2 8 ) , a n d El i L i l l y & C o .
V O L . 1 8 , 1 9 8 0
3 4 8 N O T ES
A N T I M I C R O B . A GEN T S C H EM O T H ER .
We a r e i n de b t e d t o J o a n De F e h r f o r t e c h n i c a l a s s i s t a n c e
a n d t o J e n n i f e r P a q u e t f o r e x c e l l e n t s e c r e t a r i a l s u p p o r t .
L I T ER A T UR E C I T ED
1 . B e n n e t t , W. M . , C . E. P l a m p , R . A . P a r ke r , D. N .
Gi l b e r t , D. C . H o u g h t o n , a n d G. A . P o r t e r . 1 9 7 9 .
R e n a l t r a n s p o r t o f o r g a n i c a c i ds a n d b a s e s i n a m i n o g l y -
c o s i de n e p b r o t o x i c i t y . A n t i m i c r o b . A g e n t s C h e m o t h e r .
1 6 : 2 3 1 - 2 3 3 .
2 . B o wm a n , R . L , F . J . Si l v e r b l a t t , a n d G. J . Ka l o y a n -
i de s . 1 9 7 7 . C o m p a r i s o n o f t h e n e p h r o t o x i c i t y o f n e t i l -
m i c i n a n d g e n t a s n i c i n i n r a t s . A n t i m i c r o b . A g e n t s
C h e m o t h e r . 1 2 : 4 7 4 - 4 7 8 .
3 . Gi l b e r t , D. N . , C . E. P l a m p , P . St a r r , W. KL B e n n e t t ,
D. C . H o u g h t o n , a n d G. P o r t e r . 1 9 7 8 . C o m p a r a t i v e
n e p h r o t o x i c i t y o f g e n t a m i c i n a n d t o b r a m y c i n i n r a t &
A n t i m i c r o b . A g e n t s C h e m o t h e r . 1 3 : 3 4 - 4 0 .
4 . H o o k, J . B . , a n d J . R . M u n r o . 1 9 6 8 . Sp e c i f i c i t y o f t h e
i n h i b i t o r y e f f e c t o f u r e m i c s e r u m o n p - a m i n o h i p p u r a t e
t r a n s p o r t . P r o c . So c . Ex p . B i o l . M e d. 1 2 7 : 2 8 9 - 2 9 1 .
5 . Ke e l e r , R . 1 9 6 8 . C o m p o s i t i o n a n d f u n c t i o n o f r a t ki dn e y s
a f t e r t r a n s i e n t n o r m o t h e r m i c i s c h e m i a . C a n . J . P h y s i o l .
P h a r m a c o l . 4 6 : 7 3 9 - 7 4 4 .
6 . L u f t , F . C . , R . B l o c h , R . S. Sl o a n , M . N . Y u m , R .
C o s t e l l o , a n d D. M a x we l l . 1 9 7 8 . C o m p a r a t i v e n e p h -
r o t o x i c i t y o f a m i n o g l y c o s i de a n t i b i o t i c s i n r a t s . J . I n f e c t .
Di s . 1 3 8 : 5 4 1 - 5 4 5 .
7 . L u f t , F . C . , KL N . Y u m , a n d S. A . Kl e i t . 1 9 7 6 . C o m p a r -
a t i v e n e p h r o t o u i c i t i e s o f n e t i l m i c i n a n d g e n t a m i c i n i n
r a t s . A n t i m i c r o b . A g e n t s C h e m o t h e r . 1 0 : 8 4 5 - 8 4 9 .
8 . O r m s b y , A . M . , R . A . P a r ke r , C . E. P l a m p , P . St e v e n s ,
D. C . H o u g h t o n , D. N . Gi l b e r t , a n d W. M . B e n n e t t .
1 9 7 9 . C o m p a r i s o n o f t h e n e p h r o t o x i c p o t e n t i a l o f g e n -
t a m c i n , t o b r a m y c i n a n d n e t i l m i c i n i n t h e r a t . C u r r .
T h e r . R e s . C l i n . Ex p . 2 5 : 3 3 5 - 3 4 3 .
9 . So b e r o n , L . , R . L . B o wm a n , E. P a s t o r i z u - M u n o z , a n d
G. J . Ka l o y a n i de s . 1 9 7 9 . C o m p a r a t i v e n e p h r o t o x i c i -
t i e s o f g e n t a m i c i n , n e t i l n i c i n a n d t o b r a m y c i n i n t h e r a t .
J . P h a r m a c o l . Ex p . T h e r . 2 1 0 : 3 3 4 - 3 4 3 .