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Las acuaporinas y agua La homeostasis en las plantas

Por Kjellbom, Christer Larsson, Ingela Johansson, Maria Karlsson y Urban


Johanson
Las acuaporinas son protenas de los canales de agua de las membranas vacuolar
y de plasma. Cuando est abierto facilitan el movimiento pasivo de las molculas
de agua por un gradiente de potencial hdrico. En Arabidopsis, 30 genes se han
encontrado que el cdigo para acuaporina homlogos. Algunos de estos genes
codifican para protenas muy abundantes constitutivamente expresadas y algunas
son conocidas por ser regulado temporal y espacialmente durante el desarrollo y
en respuesta al estrs. La actividad de transporte de agua de dos acuaporinas se
regula a nivel de protenas por fosforilacin y desfosforilacin. En un momento
dado, las clulas expresan varios acuaporinas diferentes, y es probable que
vacuolar y la membrana plasmtica acuaporinas que actan en concierto son
responsables de la osmorregulacin citoslica que es necesario para el
mantenimiento de los procesos metablicos normales.
Los estudios de inhibicin de acuaporinas in vivo y anti sentido estudios de
mutantes sugieren que, adems de la osmorregulacin citoslica, acuaporinas son
importantes para el flujo mayor de agua en las plantas.
El movimiento transmembrana de agua, un relativamente polar molcula fue,
hasta hace poco, cree que puede lograr por la difusin de molculas de agua a
travs de la bicapa lipdica de las membranas de los organismos vivos. En
retrospectiva, la razn de esta suposicin no es evidente, como bicapas lipdicas
artificiales haban sido encontrado que es mucho menos permeable al movimiento
del agua trans bicapa en comparacin con las membranas biolgicas, tales
como el plasma membranas de eritrocitos y cells1 epiteliales renales. Sin
embargo, porque no hay canales de agua proteinceos o transportadores tenan
sido identificado, se cree que el agua cruz biolgica membranas sin la ayuda de
canales o transportadores especficos.
El transporte neto de agua a travs de membranas biolgicas es depende de
gradiente hidrosttica y osmtica. La hidrulica conductividad de una membrana
es proporcional a la del agua osmtica permeabilidad (PF), que es una propiedad
de cada membrana especfica, medido mediante la imposicin de un gradiente
osmtico o hidrosttica a travs la membrana. La permeabilidad por difusin (Pd),
que es tambin un propiedad especfica de cada membrana, es una medida de la
difusin libre de agua a travs de una membrana, tal como se mide por el
intercambio de agua sin un gradiente impuesto. Para un lpido sinttico bicapa, Pf
equivale aproximadamente Pd. Sin embargo, para las membranas biolgicas, Pf
se ha encontrado para ser mayor que Pd (Refs 3,4). Por ejemplo, mucho mayor
Pf: proporciones de Pd se han establecido para el movimiento de agua a travs de
la membrana de los eritrocitos. La activacin de Arrhenius de energa (es decir, la
dependencia de la temperatura) de la osmtica permeabilidad al agua de los
eritrocitos es similar a la de libre difusin de agua y mucho ms bajo que la
energa de activacin de difusin permeabilidad al agua de una bicapa lipdica
artificial. Tomados en conjunto, esto sugiere que los poros acuosos
transmembrana son responsables para la mayor parte del transporte de agua a
travs de la membrana de los eritrocitos.
A diferencia de permeabilidad al agua por difusin, que no puede ser inhibida por
medios qumicos, es posible inhibir la osmtica permeabilidad al agua por
reactivos qumicos conocidos para modificar covalentemente residuos de cistena,
lo que sugiere que las protenas son componentes del poro transmembrana. La
primera protena con actividad de transporte de agua ser identificado fue CHIP28
(formando protena integral de canal de 28 kDa), una de las principales protein5
membrana plasmtica de los eritrocitos. CHIP28 haba sido aislado y clonado por
casualidad y encontrado que tienen una alta homologa de secuencia a una
previamente aislado y clonado protena de la membrana plasmtica, la protena
intrnseca importante (MIP) del membrane6 celular fibra cristalino bovino. Cuando
los ovocitos fueron inyectados con ARNc correspondiente al ARNm CHIP28, y
despus se incubaron durante unos pocos das, permitiendo que la protena de
ovocitos maquinaria de sntesis de sintetizar y dirigir CHIP28 a la membrana de
plasma de ovocitos, los ovocitos transgnicas se hincharan mucho ms rpido de
ovocitos de control cuando se coloca en una solucin hipotnica. juntos con la
abundancia de la protena en las clulas conocidas CHIP28 para ser permeable a
agua 7, tales como eritrocitos y clulas epiteliales del rin , este CHIP28
identificado ( que ahora se llama acuaporinas 1 , AQP1 ) como el primer ejemplo
de un protein5 canal de agua .
Cuando los ovocitos se transfieren a una solucin hipotnica (cinco veces ms
diluido) por lo general toma de tipo salvaje ovocitos de una hora para hincharse 50
% y la rotura, en comparacin con los ovocitos transitoriamente que expresa una
protena de canal de agua, que la ruptura dentro de unos pocos minutos despus
de un aumento comparable en volumen. Los genes que codifican protenas
homlogas a la MIP del ojo de la lente - membrana celular de fibra pertenecen a la
familia de protenas MIP y se han encontrado en organismos que van desde las
bacterias hasta hongos, plantas, insectos y mamferos. Usando el sistema de
expresin de ovocitos, la mayor parte de la MIP homlogos ensayados son las
acuaporinas, es decir los canales de agua. Sin embargo, dos miembros de la
familia MIP, GlpF en E. coli y en la levadura FPS1, glicerol transporte, pero no
WATER8, 9. Por otra parte, unos precios mnimos tienen especificidad mixta, por
ejemplo el AQP3 humana permite el paso de glicerol, as como water10, y NOD26
de soja permite el paso de glicerol y forma mida adems de water11.
Basado en el anlisis bioqumico y estructural de dos dimensiones cristales de
AQP1, una estructura tridimensional 6 A tiene sido resolved12. AQP1 contiene
seis dominios transmembrana con tanto el C - y N-terminal en el lado citoplsmico
de la membrana, una topologa que se conserva en todos los homlogos de MIP
(Fig. 1). AQP1 parece existir como tetrmeros en la membrana nativa, aunque
cada monmero tiene activity13 transporte de agua.


Acuaporinas vegetales
Resultados consistentes con la presencia de las protenas transmembrana facilitar
flujo de agua en cells14 planta, y la identificacin de varias protenas principales
de membrana de plantas con una alta homologa de secuencia a AQP1 y MIP
(tambin conocido como AQP0) 15-22, llevado a la identificacin de una protena
del canal de agua en membranes23 planta.
Este canal de agua, g- TIP, se localiza en el tono plast (es decir, el membrana
vacuolar) 20. Hasta el momento, todas las acuaporinas de clulas de mamferos
estn localizadas en la membrana plasmtica, mientras que las clulas vegetales
contienen acuaporinas, tanto en el tono plast y la membrane24 - 27 en plasma.
En Arabidopsis, hay por lo menos 30 miembros de la family28 MIP (U. Johanson
et al., Sin publicar). De acuerdo a la secuencia de aminocidos similitudes,
Arabidopsis PIM tampoco pertenecen a los precios mnimos de la tono plast (es
decir, las protenas tono plast intrnseco, propinas), a los precios mnimos de
importacin de la membrana de plasma (es decir, las protenas intrnsecas de la
membrana plasmtica, PIPs), o para los NLM (NOD26 - como MIPS). Los PIPs,
Consejos NLM y forman tres grupos filogenticos distintos (Fig. 2). La PIP se
pueden dividir en dos subfamilias - PIP1 y PIP2 (Ref. 29). Todos los consejos se
dividen en tres subfamilias: aTIPs, dTIPs y gTIPs, a excepcin de Nt - TIPA, que
forma un grupo separado (M. Karlsson et al , No publicado) . Aparte de unos
pocos aminocidos conservados residuos de cido en posiciones especficas
caractersticas de cualquiera de la PIP1 o la subfamilia PIP2 , los miembros de la
subfamilia PIP1 tiene miembros de N- termini y la subfamilia PIP2 extendidos
tienen extendido C -terminales . Ambos subfamilias PIP han extendido N termini
en comparacin con los TIP (Ref. 25).
Doce de los precios mnimos expresados identificados en Arabidopsis son PTI, 12
son PIP y los seis homlogos Arabidopsis MIP restantes son NLM (Ref. 28, U.
Johanson et al. , sin publicar). La seis NLM tiene ms similitud con NOD26, una
acuaporina del ndulo de la raz de soja peribacteroid membrane30, aunque el
subcelular ubicacin de los miembros de este grupo de Arabidopsis (por ejemplo,
NLM1) no se conoce. Las plantas MIP homlogos que han sido probado para la
actividad de transporte de agua se han encontrado para ser agua channels28 , a
excepcin de NOD26 (Ref. 11 ) , Nt- Tipa (Ref. 31) y Nt - AQP1 (Ref. 32 ) , que ,
adems de agua , han sido notificado a ser permeable a los solutos pequeos no
cargados . Es razonable suponer que la mayora de la Arabidopsis restante MIPs
ser acuaporinas tambin. Sin embargo, no se sabe lo suficiente acerca de lo que
determina la especificidad del transporte para el canal de discernir especificidad
basada en la secuencia primaria solo. Independientemente de si la totalidad o slo
la mayora de los PIM de plantas son las acuaporinas, es evidente que un gran
nmero de las acuaporinas estn presentes en las plantas, algunos localizados en
el tonoplasto, algunos en la membrana plasmtica y algunos posiblemente
localizados en endomembranas 33, 34.
Regulacin transcripcional y postraduccional de las acuaporinas
Fusiones promotor - GUS, hibridaciones de mRNA in situ, en el norte manchas y
los estudios inmunolgicos han mostrado que la expresin de las acuaporinas est
regulado por el desarrollo de un tipo de clulas especficas manera. Algunos
acuaporinas se expresan constitutivamente y los cuantificados se han encontrado
para constituir hasta el 20 % del total integrante protein27 membrana. Algunos
genes AQUAPORIN estn regulados por la sequa [ clon 7 bis (Ref. 35 ) , RD28
(Ref. 22 ) ], mientras que otros son las reguladas [ IMCP y MIPC (Ref. 36 )] , y
algunos estn regulados por hormonas vegetales , tales como el cido abscsico [
AthH2 tambin nombrado PIP1b ( Refs 37,38 )] y cido giberlico [ At- GTIP (Ref.
39 )] .
AQP2 del rin recoger clulas epiteliales de los conductos, de NOD26 la
membrana peribacteroid, a- punta de la protena de almacenamiento de semilla de
frijol membrana vacuolar, y PM28A de la membrana plasmtica de espinacas
todas han demostrado ser phosphorylated
27 ,40 - 42
. En el caso de un - TIP y
PM28A, se ha demostrado que la fosforilacin y desfosforilacin regula la actividad
de transporte de agua, cuando el acuaporinas se expresan transitoriamente en
ovocitos 26, 43. In vivo, la grado de fosforilacin de Ser274 de PM28A, siete
aminocidos de los cidos de la C -terminal, se reduce a una disminucin
apoplstica conditions27 agua potencial sequa simulacin (Fig. 3). In vitro, la
usando aislados vesculas de membrana de plasma, el mismo residuo de serina
es fosforilada por una cota - membrana plasmtica Ca
2+
dependiente kinase27
protena, posiblemente un (protena de dominio - calmodulina como CDPK
quinasa)
44
. Al utilizar el sistema de ovocitos y la mutagnesis dirigida al sitio,
Ser115 tambin se muestra para influir en el transporte activo de agua de
actividad de PM28A (Ref. 26). Ser115 se encuentra en la primera citoplsmica
lazo en un sitio de fosforilacin consenso (Arg- Lys -x- SERX - x-Arg/Lys o slo
Lys -x -Ser- xx- Arg, donde x representa cualquier aminocido) para los mamferos
de la protena quinasa A o C. Este sitio es conservada en todas las acuaporinas
de membrana de plasma (es decir, en todos los miembros de las subfamilias PIP1
y PIP2). Un sitio de fosforilacin similares tambin se encuentra en la mayora de
las acuaporinas tono plast , aunque la mayora TIP tienen una treonina en lugar de
una serina en esta posicin ( M. Karlsson et al . , No publicado) . Adems de
PM28A, a- TIP es fosforilada en este sitio (Ser99) cuando se expresa en
ovocitos
43
.Por lo tanto, la posicin del sitio de fosforilacin correspondiente a
Ser115 de PM28A y Ser99 de A-Tip se conserva (fig. 3), pero la secuencia
consenso de aminocidos difiere al comparar los PIP con TIP
S
.

La figura. 1. Estructura bsica de las acuaporinas. El modelo es vlido para
ambos protenas intrnsecas de la membrana plasmtica (PIP) y tono plast
intrnseco protenas (consejos). El lado con la N- y C-terminales siempre se
enfrenta a la citosol mientras que el otro lado se enfrenta ya sea el apoplasto, en
el caso de los PIP, o la vacuola, en el caso de PTI. Hay seis transmembrana
hlices. El primer bucle citoslico y la tercera extracytosolic bucle, cada uno de los
cuales contienen un Pro -Ala - Asn cuadro conservado (NPA), son relativamente
hidrfobo y probablemente echar mano de la membrana desde lados opuestos,
creando una estructura transmembrana sptimo . La coloracin de las hlices
refleja la homologa interna, donde el N-terminal media de la protena es homloga
a la mitad C-terminal, aunque el dos mitades se insertan inversamente en la
membrana. Por lo tanto, la hlice 1 corresponde a hlice 4 , hlice de 2 a 5 hlice
y hlice 3 a hlice 6 . Residuos de serina conservadas que se sabe que son
fosforilados y desfosforilado in vitro , in planta y en el sistema de ovocito , con lo
que regula la actividad de transporte de agua de las acuaporinas , son tambin
representado . El residuo serina (Ser) en el primer bucle citoslico est presente
en todos los miembros de la subfamilia PIP1 y PIP2. En lugar de esta serina, la
mayora de los miembros de la subfamilia TIP tiene un residuo treonina. La serina
en el dominio C-terminal est presente en todos los miembros de la subfamilia
PIP2. Este modelo esquemtico se basa en la estructura de AQP1 (Ref. 61)
Un sitio de fosforilacin consenso (Lys -xxx -Ser -x- Arg) alrededor Ser274 se
conserva en todas las acuaporinas membrana plasmtica PIP2. Un consenso sitio
similar (Lys -xx -xx -Ser - Lys) tambin se encuentra en NOD26, que est
fosforilada en Ser262 en el extremo C-terminal regin por un CDPK localizada en
la membrana peribacteroid (Ref. 45). Los seis miembros de la subfamilia
Arabidopsis NLM tienen sitios putativo de fosforilacin (Lys / xx / Arg -x -Ser- xx-
Lys / Arg ) en este posicin (U. Johanson et al. , sin publicar) . Las subfamilias
PIP1 y TIP carecer de este sitio de fosforilacin C-terminal. El altamente
naturaleza conservada de los sitios de fosforilacin consenso correspondientes a
Ser274 y 115 entre las clases de MIPs vegetales sugieren fuertemente que estos
residuos son fosforilados y tambin de fosforilado en la planta , con lo que regula
el canal de agua actividad ( fig. 4 ) .

La figura. 2. Anlisis filogentico de los 27 miembros de la principal protena
intrnseca (MIP) de la familia. La facilitadores de glicerol de E. coli (Ec- GlpF) y
levadura (FPS1) transportan glicerol pero no el agua, y la AQP3 aquaglyceroporin
mamferos transporta glicerol, as como agua. Entre la planta MIPs, NOD26 del
ndulo soja peribacteroid membrana, perteneciente a la NLM (NOD26 - como MIP)
subfamilia, junto con Nt - AQP1 y Nt - TIPA, tambin se han reportado para ser
permeable a los solutos pequeos, no cargados, as como al agua. La familia MIP
restante miembros incluidos en el anlisis son o acuaporinas o su especificidad es
desconocida. La planta tono plast protenas intrnsecas (TIPS) comprende tres
subfamilias, adems de Nt- Tipa, que forma un grupo de su propia, mientras que la
membrana plasmtica planta de protenas intrnsecas (PIP) forman una clster
dividido representa la PIP1 y las subfamilias PIP2. MIPs que son capaces de
transportar glicerol u otros pequeos solutos no cargados se indican en gris. Las
secuencias fueron alineadas utilizando PileUp [ Wisconsin Package Versin 10.0,
Genetics Computer Group ( GCG ) , Madison, WI , EE.UU. ] , el rbol se construy
usando PAUP (Anlisis filogentico utilizando parsimonia , Versin 3.1 , distribuido
por el Illinois Natural History Survey, Champaign, IL , EE.UU. ) , y los nmeros
junto a los nodos son values62 bootstrap de 100 rplicas. Los valores de arranque
representan la proporcin de veces que aparece una rama en el rbol.
El AQP2 acuaporina se expresa en las clulas principales de la conducto colector
renal de los riones de mamferos y de la hormona Vaso presina regula la
permeabilidad al agua transcelular en este tejido. La vasopresina la unin a sitios
extracelular de un receptor en la membrana plasmtica baso lateral activa la
adenilato ciclasa. La AMPc dependiente de la protena quinasa A, fosforila AQP2
reside en vesculas periplsmicos haciendo que se fusionan con la apical
membrana plasmtica de las clulas principales, lo que aumenta la permeability46
agua. Un mecanismo de regulacin relacionados pudieron ser que operan en
plantas porque acuaporinas membrana plasmtica de la Subfamilia PIP1 se ha
demostrado por electrones inmunomarcaje microscopa se asocien a
plasmalemasomes invaginaciones de la membrana plasmtica que sobresale en
el citosol y en la vacuola central de Arabidopsis mesfilo cells33. Reciente
resultados inmunolgicos tambin indican que Miembros de la subfamilia PIP1
estn presentes en membranas intracelulares, as como en el membrane34 de
plasma. Sin embargo, los ataques directos de vesculas periplsmicos, en lnea
con el mecanismo descrito para AQP2, tiene no se ha mostrado en las plantas.
Porque vesculas periplsmicos son de adentro hacia afuera que no terminara en
la membrana plasmtica fraccin obtenida por el polmero acuosa de dos fases
tcnica, aunque los resultados para PM28A, que muestran alta constitutiva
abundancia en la membrana plasmtica, no hacer excluir a regulacin por parte de
la vescula de metas para otros acuaporinas. La subfamilia PIP1 members33
tienen un ms corto C-terminal regin en comparacin con la subfamilia PIP2
miembros y, por lo tanto, carecen de la consenso sitio de fosforilacin
correspondiente a Ser274 de PM28A. Esto apunta a un diferente mecanismo de
regulacin de la subfamilia PIP1 miembros, que podra incluir vescula
focalizacin. Focalizacin de vesculas, como consecuencia de la induccin
transcripcional de las acuaporinas codificadas por los genes conocidos ser la
sequa inducida - , ocurre probablemente pero este mecanismo es distinta de la
vescula fusin inducida por fosforilacin - descrito para AQP2, aunque la final el
resultado del juego - un aumento del nmero de las acuaporinas en la membrana -
es similar.
Acuaporinas especficos se expresaron en general en varios tejidos y rganos de
un plant
27, 47
. Sin embargo , dentro de los tejidos y rganos de la expresin est
fuertemente correlacionada con las clulas conocidas que se asocian con grandes
flujos de agua , tales como la epidermis de la raz, exodermal y clulas del
endodermo , las clulas del parnquima del xilema inmediatamente adyacente de
los vasos del xilema , floema compaero las clulas y las clulas que rodean el
floema en lminas foliares y stems
48
(R. Kaldenhoff , pers. commun . ) , cells38
guardia, y en las clulas en cierta desarrollo puntos de tiempo asociados con la
expansin de clulas o elongation
21, 38,47
.
Buffering fluctuaciones osmtica de la citosol
Al medir el aumento de la dispersin de la luz o el aumento de la extincin de
fluorescencia por espectrofotometra de flujo detenido, es posible seguir la
reduccin de volumen de tono plasto y plasma vesculas de la membrana cuando
se coloca en una solucin hipertnica. Cundo vesculas de membrana de un
cultivo en suspensin de clulas de tabaco eran supervisado de esta manera, una
diferencia de 100 veces en la permeabilidad al agua osmtica entre el tono plast y
las vesculas de membrana plasmtica fue grabado , con el tono plasto siendo el
ms permeable membrane49 . Vesculas tono plast raz de trigo son siete veces
ms permeable a water50 en comparacin con la membrana plasmtica de la raz
de trigo vesculas , y ocho veces menos permeable al agua en comparacin con
tono plast vesculas a partir de suspensiones celulares de tabaco. Se concluye
que el transporte de agua a travs de la membrana plasmtica de tabaco se
produce principalmente por difusin a travs de la bicapa lipdica. Por el contrario,
la permeabilidad al agua osmtica de la membrana plasmtica de trigo es tres
veces mayor que la permeabilidad difusional, que implican la implicacin de los
canales de agua. Sin embargo, la osmtica permeabilidad al agua de la membrana
plasmtica es sorprendentemente baja, en tanto la raz de trigo y la suspensin
de tabaco clulas, lo que indica que las acuaporinas son o bien no se expresa o se
cierran bajo la condiciones experimentales utilizadas.
En espinacas, las acuaporinas membrana plasmtica son muy abundantes, con
PM28A y B juntos que comprende tanto como 20 % de la total de protein27
membrana plasmtica integral. En este caso, las actividades de transporte de
agua de las acuaporinas en las dos membranas que se requerira para ser
diferente con el fin para el tono plast tener un nio de siete a 100 - veces mayor
permeabilidad al agua osmtica en comparacin con la membrana plasmtica.
Estudios de expresin de ovocitos no indican grandes diferencias en las tasas de
transporte de agua entre las puntas, PIP [ g -TIP (Ref. 23 ) , RD28 (Ref. 51) y
PM28A (Ref. 26 )] , aunque los niveles desconocidos de expresin en la
membrana del ovocito , y la incertidumbre en cuanto a si los canales estn
abiertos o no, lo hace introducir posibles errores en esa comparacin. Sin
embargo, para el tono plasto ser capaz de amortiguar las fluctuaciones osmtica
de la cytosol49, 50, sera lgico si el tono plasto tuvieron una mayor permeabilidad
al agua osmtica de la membrana plasmtica. esto podra o bien llevarse a cabo
por un constitutivamente mayor permeabilidad al agua osmtica para la tono
plasto en comparacin con el membrane49 de plasma , 50 , o dinmica despus
de la traduccin regulacin de la tono plasto y plasma membrana situada
acuaporinas , como se ejemplifica por la regulacin de un -TIP (Ref. 43 ) y PM28A
( Refs 26,27 ) .



La figura. 3. Topologa General de acuaporinas. Esta topologa bsica,
representada aqu por las primarias secuencia de la membrana plasmtica de las
acuaporinas PM28A, tiene una validez de membrana plasmtica intrnseca
protenas (PIP) y tonoplast protenas intrnsecas (PTI). La N-y C-terminales se
encuentran en la cara citoslica, mientras que los tres bucles extracytosolic
cualquiera enfrentan el apoplasto (PIP) o la vacuola (PTI). Los dos Asn-Pro-Ala
(NPA) Cajas conservados se representan en negro, y los lugares conservadas de
los sitios de fosforilacin consenso estn representados aqu por Ser115 y Ser274
de PM28A. Grupos fosfato se representan en blanco sobre gris.


La absorcin de agua y la planta entera balance hdrico
Hay bsicamente tres posibles rutas para el movimiento del agua en tejido de la
planta: la apoplstica, el simplstica y transcelular route52. Esta ltima se define
como el transporte de agua a travs de cada uno de clulas (es decir, el transporte
a travs de la membrana plasmtica y a travs de la membrana vacuolar de cada
clula sin la participacin de plasmodesmos). Sin embargo, debido a que es difcil
experimentalmente discriminar entre el movimiento simplstica y transcelular de
agua, que se denominan colectivamente como el movimiento de clula a clula de
water52. Las races de la mayora de las angiospermas contienen una capa de
clulas (tambin llamada hipodermis) exodermal, que es la ms externa capa de
clulas de la corteza justo dentro de la capa de clulas epidrmicas, que es la
capa ms externa de clulas de la raz. Las clulas forman una exodermal tira
Casparian impermeable al agua en las paredes radiales de la misma forma que las
clulas del endodermo (la capa celular interna de la corteza). Sin embargo, las
clulas exodermal formar una tira de Caspari en una etapa de desarrollo posterior
(es decir, ms lejos de la punta de la raz en comparacin con las clulas
endodrmicas). Hasta el Casparian exodermal se forma de tira, la corteza es
permeable al agua, lo que puede mover apoplastically hasta que alcanza el
Casparian endodrmico desnudarse. Las clulas en los exo-y endodermis ms
tarde desarrollan waterim permeable laminillas suberina cubren en su totalidad las
clulas, y en Adems tambin formar paredes celulares ms gruesas. Las tiras de
Caspary de los exo-y endodermis crean discontinuidades apoplstica y requerir el
transporte transmembrana de agua en el exo y clulas del endodermo en orden
para que el agua alcanzan el xilema.
Dentro la corteza y la estela, donde las clulas normalmente estn conectados por
plasmodesmos, el agua puede moverse symplastically, transcelular o
apoplastically, o por una combinacin de estas rutas. Para que el agua entrar en el
xilema, debe salir en ltima instancia de la endodermis o de las clulas del
parnquima del xilema de la estela, y as cruzar una membrana plasmtica, similar
a la manera en la que K
+
se ha demostrado que se publicar en el sap53 xilema.
Los patrones de expresin de varios acuaporinas , que son abundantes en las
capas de clulas de la raz externa , la endodermis , y las clulas del parnquima
del xilema [ PIP1b (Ref. 38 ) , MIPA , MIPB , MIPC (Ref. 36 ) , ZmTIP1 (Ref. 48 ) ,
y NtAQP1 , un homlogo tabaco PIP1b , R. Kaldenhoff , com. commun . ], son
consistente con las limitaciones anatmicas para el movimiento del agua y
sugieren que el transporte de agua transmembrana se debe facilitar .
El uso deIones de metales pesados, como el Hg
2+
, se sabe que inhiben el
transporte de agua actividad de algunos aquaporins54 de mamfero, algunos tono
plasto aquaporins23 y alguna planta membrana plasmtica aquaporins29 - aunque
algunos acuaporinas de membrana de plasma son mercuryinsensitive51. El uso
de mutagnesis dirigida al sitio, se ha demostrado que HG21 se une a residuos de
cistena en o cerca de la de poro acuosa de la canales de agua, inhibiendo con
ello transport55 agua, 56. Inhibicin Mercury se ha demostrado para acuaporinas
expresadas en oocytes5, 23, 29,56 , y de las acuaporinas en vesculas de
membrana nativas como la supervisin de - flow11 detenido , 50 . En general el
transporte de agua en plantas intactas o planta rganos tambin se ve afectada
drsticamente por el mercurio. Mediante la adicin de sub mM concentraciones
de HgCl
2
al medio de crecimiento de hidropnicos plantas cultivadas, la
conductividad hidrulica (Lp) en las races se reduce por 60-90 % en comparacin
con el controls
57, 58
. Esta reduccin en el flujo de agua Las plantas se
transformaron con un constructor de reconocimiento PIP1b (Ref. 59 ) . En ambos
brotes y races, las lneas anti sentido haban reducido niveles de PIP1b y PIP1a
ARNm. Las partes areas tenan la misma morfologa, independiente de la etapa
de desarrollo, mientras que la raz sistemas de plantas anti sentido eran cinco
veces ms grandes que la de tipo salvaje plantas. La tasa de absorcin de agua,
as como la presin del xilema de la raz de las plantas anti sentido no fue
alterada, lo que sugiere que el anti sentido plantas para compensar la reduccin
de la membrana plasmtica de la permeabilidad del agua en las races por el
aumento del tamao de los sistemas de races. Esta interpretacin se apoya en el
hecho de que la permeabilidad al agua osmtica de protoplasto anti sentido fue
tres veces inferior a la de tipo salvaje protoplasto. Adaptado de las referencias 26
y 59. A travs de las races no afecta a los flujos de iones en el xilema. La
inhibicin es en gran parte reversible tras la adicin de B - mercaptoetanol, y la
inhibicin, as como la fase de recuperacin, es de 15-20 min57. Adems, tcnicas
de presin - sonda se han utilizado para medir el agua permeabilidades de las
clulas individuales del gigante coralina Chara alga y la inhibicin por HgCl2 se
encontr que se reversible4. Estos resultados sugieren que la parte principal del
flujo de agua en las races, as como en una sola clulas, es dependiente y
limitada por el agua acuaporina mediada transporte. La parte restante del flujo de
agua que no puede ser inhibida por HgCl
2
se puede atribuir a aquaporins51 -
mercurio insensible y para difusin pasiva a travs de la bicapa lipdica.
Cuando se coloca en una solucin hipotnica, los protoplasto de las hojas de
Arabidopsis que haba sido transformada con una construccin anti sentido para la
acuaporinas PIP1b membrana plasmtica, sobrevivido considerablemente ms
largo en comparacin con el tipo salvaje protoplasts38. Alrededor 50 % de los
protoplasto antisentido de dos lneas independientes fueron siendo viable (es
decir, no haban reventado) despus de 2 h de incubacin en un solucin
hipotnica, momento en el cual todo el control de tipo salvaje protoplastos haban
reventado. Las lneas antisentido haban reducido la hoja y la expresin de la raz
de no slo la PIP1b sino tambin la transcripcin PIP1a. La permeabilidad al agua
osmtica de los protoplastos antisentido era reduccin de alrededor de tres veces
en comparacin con los protoplastos de tipo salvaje. Una comparacin de los
fenotipos de antisentido y de tipo salvaje plantas mostraron que las partes areas
de las plantas tenan la misma morfologa , independiente de la etapa de
desarrollo , mientras que la raz sistemas de los transformantes antisentido ,
calculado como masa de races , fueron cinco veces mayor en comparacin con el
plants59 de tipo salvaje (Fig. 4 ) . Por otra parte, la tasa de absorcin de agua y la
presin de la raz para la plantas antisentido no se vio alterada en comparacin
con la de tipo salvaje plantas, lo que sugiere que las plantas antisentido
compensar reducida de plasma permeabilidad de la membrana de agua mediante
el aumento del tamao de la sistema radicular.

La figura. 4. Cort plazo y largo plazo la regulacin del flujo de agua. (a) Una
modelo para la osmorregulacin citoslico a nivel de clulas individuales que
implica regulacin de la actividad de transporte de agua de las acuaporinas de
membrana plasmtica por la fosforilacin y desfosforilacin. Cuando la clula de la
planta detecta un potencial hdrico apoplstica bajado, las acuaporinas se
convierten en desfosforilado, lo que reduce la permeabilidad al agua de la
membrana plasmtica y reducir al mnimo la prdida de agua. Las acuaporinas de
la membrana vacuolar permanecen abiertas y permiten que el agua fluya hacia el
citosol para compensar la prdida de agua hacia el apoplasto. Abreviaturas: PK, la
protena quinasa; P, grupo fosfato. (b) Comparacin de la Fenotipo anti sentido
Arabidopsis (izquierda) con el tipo salvaje (derecha).



Conclusiones y perspectivas
Independientemente del hecho de que el transporte de agua en el xilema desde
las races a las partes superiores de una planta es accionado por un negativo
presin hidrosttica como resultado de la transpiracin en la fotosntesis partes de
una planta, el agua tiene que llegar al apoplasto estelar adyacente a los vasos del
xilema para ser accesible para el transporte xilema.
Las hiptesis sobre los mecanismos de la homeostasis del agua y el agua
transporte dentro de los tejidos y rganos, como races y hojas, tienen cambiado
considerablemente con el tiempo y podra seguir hacindolo. Sin embargo, la
evidencia de la importancia de las acuaporinas en el mayor flujo de agua y para la
homeostasis del agua no puede ser ignorada. La plasma y la membrana tono plast
acuaporinas son muy abundantes y son codificadas por muchos genes, que se
sabe que son temporalmente y espacialmente regulados durante el desarrollo y en
respuesta a la sequa - estrs.
Un estudio sistemtico de los patrones de expresin de Arabidopsis Homlogos
MIP (30 han sido identificados) se requiere para generar una visin integral de la
pauta general de expresin. Este se debe hacer tanto en la transcripcin y en el
nivel de protenas porque el volumen de negocios acuaporina parece ser variable,
por ejemplo, cuando la comparacin de las acuaporinas constitutivamente
expresadas e inducibles. El estudio deber proporcionar informacin relativa a la
cual las clulas son limitante para el flujo mayor de agua y, por lo tanto ,
importante para homeostasis del agua . Heterogeneidad lateral de los diferentes
acuaporinas en la membrana plasmtica es probablemente importante para el
paso de agua a travs de los tipos de clulas que representan barreras entre
diferentes compartimentos de rganos, tales como la capa de clulas endodrmico
la separacin de la corteza y la estela . Adems, el agua actividad de transporte
de algunos acuaporinas tambin est regulada en el nivel de protenas por
fosforilacin y desfosforilacin en uno de manera dependiente de la turgencia.
Con respecto a las posibles vas de transduccin de seal aguas arriba
responsable de regular la apertura y cierre de las acuaporinas es probable que las
protenas de membrana especficos supervisar la diferencia de potencial de agua
a travs de la membrana (es decir, funcionan como osmosensors), y, o bien
interactuar directamente y regular las acuaporinas o regular las acuaporinas
indirectamente, tal como mediante la regulacin de protenas quinasas y
fosfatasas. En la levadura, dos independientes y sin relacin Se han identificado
osmosensors. Ambos son protenas de membrana que regulan una cascada de
fosforilacin llamado el HOG (alta osmolaridad glicerol) va, a travs de vas de
fosforilacin. Un homlogo de Arabidopsis de uno de los osmosensors de levadura
se ha identificado y clonado, y su funcin se ha verificado por complementacin
funcional de un mutant60 levadura, identificando as una posible osmosensor
planta (K. Shinozaki , com. Commun.)
Tomados en conjunto, el gran nmero de genes que codifican las acuaporinas, la
expresin diferencial de genes de acuaporina en el tiempo y el espacio, la
focalizacin de la vescula probable de algunos acuaporinas y el heterogeneidad
lateral probable dentro de las clulas individuales, sugieren que acuaporinas estn
involucrados en un reglamento verstil y dinmica del movimiento del agua. As,
los resultados disponibles sugieren que, en conjunto, de membrana de plasma y
tono plasto acuaporinas no slo son amortiguar las fluctuaciones osmtica de la
citosol, pero tambin se orquestar el flujo global de agua en las plantas.
Agradecimientos
Damos las gracias a Ralf Kaldenhoff , Christophe Maurel y Kazuo Shinozaki para
divulgar los resultados no publicados y Bengt Widegren ayuda con las
comparaciones de secuencias . Las subvenciones de SJFR , NFR , el EUBiotech
programa ( BIO4 - CT98 -0024 ) y el Plan Estratgico de Suecia Red de
Biotecnologa Vegetal se agradece.