Chimie Pour La Santé

CLEFS CEA - N 60 - T 2011 42
CLEFS CEA - N 60 - T 2011

III. CHIMIE POUR LA SANT
ET LENVIRONNEMENT
La chimie fournit un langage universel permettant de dcrire les rgles
gnrales du fonctionnement du vivant, den comprendre les interactions
et les volutions, mais aussi de concevoir des techniques permettant
lhomme de ne pas demeurer passif vis--vis de son environnement. Compte
tenu de ses activits dans les technologies ddies la sant et de sa volont
de matriser lempreinte environnementale de ses dveloppements, cest
donc tout naturellement que le CEA sinvestit fortement dans les diffrentes
facettes de cette science polyvalente.
Les articles de ce chapitre fournissent des exemples concrets de la faon
dont les chimistes acquirent leurs connaissances sur la structure
et la ractivit molculaires des biomolcules, connaissances quils
exploiteront ensuite pour laborer des biocapteurs originaux, de nouveaux
outils biomdicaux ou des modles de migration des radionuclides dans
lenvironnement. Ces nombreuses applications, indpendantes en apparence,
partagent pourtant un ensemble de mthodes chimiques, allant du marquage
limagerie ou la mesure des interactions non-covalentes. Dans la ligne
de Frdric Joliot-Curie qui dmontra, avec ses collaborateurs, tout lapport
du radio-marquage en physiologie (synthse du driv radioactif de lhormone
thyrodienne en 1944), les quipes du CEA furent pionnires dans les mthodes
de marquage molculaire dont le principe est connu : incorporer des isotopes,
radioactifs ou stables, ou de fonctions chimiques faciles dtecter, dans des
molcules biologiques ou pharmacologiques qui deviendront alors faciles
suivre et cartographier, mme en quantits infimes dans les milieux
complexes. Les molcules marques servent galement rvler les liaisons
non-covalentes la base dune grande partie du fonctionnement du vivant. Ces
interactions rversibles entre molcules biologiques, ou, par exemple, entre
contaminants et cibles biochimiques, forment des quilibres quantifiables
en faisant appel aux approches complmentaires de la chimie en solution ou
de la chimie des collodes et des interfaces, suivant les cas. Ainsi devient-il
possible dapprocher les rgles fines contrlant deux caractristiques
remarquables des systmes biologiques, haute slectivit et grande
sensibilit, dont limportance vaut pour tous les domaines dapplication.
Lautre trait commun aux articles de ce chapitre concerne le recours
la chimie structurale. La capacit dcrire finement la gomtrie des atomes
dans les molcules tudies et les interfaces ractives, fournit des lments
essentiels pour se reprsenter les mcanismes aux diffrentes chelles
de complexit, notamment en les reliant du niveau atomique celui de ldifice
nanomtrique. Ce plan multi-chelle fascine autant par son esthtique
(par exemple, la superbe plastique de lADN ou des protines) que par
les perspectives quil ouvre en matire dingnierie rationnelle de nouvelles
molcules pour la pharmacie ou les biotechnologies.
ric Qumneur
Direction des sciences du vivant
CEA Centre de Fontenay-aux-Roses
Dtection de composs organiques volatils mis par des bactries par raction
chimique colorimtrique en solution et dans des matriaux tridimensionnels.
P. Avavian/CEA
43
44
Chimie pour la sant et lenvironnement
Chimie des traceurs pour
limagerie mdicale
R
adiographie conventionnelle, scanner, cho-
graphie, mais aussi imagerie par rsonance
magntique nuclaire (IRM), imagerie optique et
de fluorescence, tomographie par mission de posi-
tons (TEP) sont des techniques dimagerie mdicale.
Si les premires se limitent visualiser lanatomie
dorganes chez lhomme, les dernires permettent
de comprendre le fonctionnement de ces organes et
ceci sans recourir la chirurgie ! Mdecins et radiolo-
gues peuvent localiser aujourdhui une lsion, ou une
grosseur inattendue dans un tissu, avec une prcision
de lordre du millimtre. Pour le diagnostic des mala-
dies et le suivi thrapeutique des patients, il sagit
dune rvolution. Ces avances sont en partie dues au
dveloppement, ces dernires annes, de structures
molculaires innovantes : des molcules agissant la
manire de sondes et dotes de proprits pharma-
cologiques indites et propres chaque technique
dimagerie.
Au CEA, les chimistes concentrent leurs recherches
sur les trois techniques mentionnes prcdemment :
lIRM, limagerie optique et la TEP. Ces techniques
utilisent toutes des molcules traceur possdant
au sein de leurs structures chimiques :
une entit dite contrastante, lorigine de limage

(des espces magntiques pour lIRM, des radio-
isotopes pour la TEP : fluor-18 notamment et des
fluorophores pour limagerie de fluorescence) ;
une entit dite de ciblage, permettant au traceur,

inject chez le patient, daller vers sa cible biologique
ou son organe de destination.
Des marqueurs pour lIRM
et limagerie optique
Contrairement aux techniques dimagerie nuclaire,
ni lune ni lautre nutilisent de radiations ionisantes.
LIRM, base sur le phnomne de la rsonance

magntique nuclaire des noyaux datomes dhydro-
gne, donne accs de hautes rsolutions spatiales
avec une pntration illimite dans lorganisme. Mais
sa faible sensibilit impose dinjecter aux patients
des agents de contraste, base de gadolinium, pour
amliorer le diagnostic cela dans 40 % des examens
cliniques. De plus, la relaxivit des composs actuels
reste insuffisante pour limagerie molculaire. Y
pallier suppose dobtenir des agents de contraste
plus performants et des relaxivits leves haut
champ magntique. Des avances importantes ont
t obtenues par les chercheurs de lInstitut nano-
sciences et cryognie (Inac), notamment le Service
de chimie inorganique et biologique (SCIB). Leur
avance rsulte dune inclusion de gadolinium dans
des systmes macromolculaires, ou de taille nano-
mtrique et de la conception dun meilleur design des
molcules utilises pour complexer ce gadolinium.
Lintrt de cette stratgie rside dans un ajustement
plus pointu du nombre de molcules deau lies au
gadolinium, de la vitesse dchange de chacune de ces
molcules deau avec leau du milieu environnant, de
la vitesse de rotation brownienne du complexe et de
la relaxation lectronique paramtre peu explor.
Les complexes de gadolinium ainsi obtenus, bass
sur des molcules contenant des amines aromatiques
associes des groupes carboxylates, affichent une
relaxivit suprieure celle des agents de contraste
actuellement utiliss dans les examens cliniques, tout
en conservant une bonne stabilit physiologique.
Ils ont galement permis de corrler la structure de
lagent de contraste sa toxicit et certains para-
mtres molculaires dterminant la relaxivit.
Limagerie optique, technique complmentaire

lIRM, se distingue par une faible rsolution spatiale
mais une trs bonne sensibilit. Son principe repose
sur lutilisation dune camra capable de suivre le
devenir des marqueurs fluorescents mettant une
lumire colore (souvent dans le rayonnement visible
ou infrarouge) dans les cellules. Parmi les meilleurs
Aujourdhui, lutilisation de macromolcules et de nanostructures suscite lintrt croissant
de la communaut scientifique comme traceurs dimagerie. Leur mise au point appelle
lexpertise de chimistes, dorganiciens et dinorganiciens supramolculaires, de radiochimistes,
sans oublier celle de spcialistes de la chimie des matriaux, des collodes et du greffage
fonctionnel de surface. Tous ces chercheurs mettent en uvre leur savoir-faire pour
confectionner des structures molculaires innovantes, certaines (radio)marques.
Prparation de radiopharmaceutique : prlvement et pese dun chantillon pour synthse
(Service hospitalier Frdric-Joliot/SHFJ).
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a
n
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45 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
2 nm 4 nm 200 nm
20 nm
a b
5
0
n
m
huile
excipients
fluorophore
organique
c
Figure 1.
Trois approches dveloppes pour llaboration de traceurs fluorescents.
(a) Image de microscope lectronique transmission MET et srie dchantillons de
nanocristaux : sulfure de cuivre et dindium (CuInS
2
)/sulfure de zinc (ZnS).
(b) Exemple de nanocristaux de silicium enrobs dans une coquille de silice.
(c) Exemple de nanoparticules lipidiques dopes par des fluorophores organiques.
C
E
A
marqueurs fluorescents figurent les nanocristaux
semi-conducteurs, galement appels quantum dots.
Les nanocristaux base de slnide de calcium, qui en
font partie, sutilisent dj comme marqueurs biolo-
giques depuis 1998. Grce au confinement quantique,
leur longueur donde dmission sajuste leur taille.
En fonction du matriau utilis, la gamme spectrale
dmission varie du rayonnement ultraviolet (sl-
nide de zinc/ZnSe) au proche infrarouge (sulfure
de plomb/PbS, alliage indium-arsenic/InAs). Ces
quantum dots prsentent dautres avantages : un large
spectre dabsorption, des raies dmission troites,
un rendement quantique de fluorescence lev et
une grande photo-stabilit. Seule ombre au tableau :
la toxicit du cadmium. Do lide des chercheurs
de lInac, cette fois du service Structure et proprit
darchitectures molculaires (SPrAM), de dvelopper
des quantum dots sans cadmium pour le marquage
biologique in vitro et in vivo : les nanocristaux dits
cur/coquille composs de phosphure dindium
(InP) pour le cur et sulfure de zinc (ZnS) pour
la coquille
(1)
ou en sulfure de cuivre et dindium
(CuInS
2
/ZnS
(2)
) (figure 1 a).
Une seconde approche, dveloppe par le Service des
photons, atomes et molcules (Spam) de lInstitut
rayonnement matire de Saclay (Iramis), concerne
les nanocristaux de silicium qui offrent de multiples
atouts : absence de toxicit avre, luminescence
dans le domaine du rayonnement rouge/infrarouge,
synthse en phase gazeuse par des procds continus,
extrapolable plus grande chelle, et donc compa-
tible avec une production commerciale. Aprs leur
synthse, la technique consiste encapsuler les nano-
cristaux dans des particules de silice afin de permettre
une bonne stabilit dans les milieux biologiques
(figure 1 b). La surface de silice le rend facilement
disponible pour une fonctionnalisation par une fonc-
tion magntique par exemple
(3)
.
La dernire approche consiste encapsuler des fluo-
rophores organiques, dj approuvs pour leur usage
clinique, dans les nanoparticules lipidiques (diamtre
typique de 50 nm) labores partir dingrdients
pharmaceutiques : huile, lipides et excipients
(4)

(figure 1 c). Il sagit dune technique issue des comp-
tences dveloppes par le Laboratoire dlectronique
et de technologie de linformation (Leti/Dpartement
technique pour la biologie et la sant).
Complmentaires, limagerie optique et lIRM
peuvent se coupler et donc cumuler leurs avantages :
haute rsolution de lIRM et haute sensibilit de lima-
gerie optique. Lopration ncessite nanmoins le
dveloppement de composs multimodaux spci-
fiques. Ainsi, dans la famille des lanthanides, dont
le gadolinium (utilis en IRM) fait partie, dautres
lments chimiques, leuropium et le terbium notam-
ment, peuvent faire office de marqueurs optiques avec
la mme molcule (contenant des amines aromatiques
associes des groupes carboxylates). Compars aux
fluorophores purement organiques, ils possdent des
temps de vie longs leur permettant de saffranchir de
la fluorescence du milieu biologique. Ils prsentent
galement une forte rsistance la photo-dcom-
position et une bonne discrimination spectrale. Des
composs de lanthanides, capables dmettre dans le
rayonnement visible ou infrarouge de faon efficace,
cest--dire avec de trs bons rendements quantiques
de luminescence, ont t dvelopps
(5)
par les cher-
cheurs de LRICC du SCIB
(6)
. Reste que le design de
molcules complexantes, satisfaisant au cahier des
charges des deux techniques, demeure un challenge.
Des molcules pouvant rpondre ces critres et
conduire des sondes optiques et magntiques ont
t labores
(7)
et encapsules dans des nanosphres
de silice pour construire des traceurs multimodaux
(8)
.
Par ailleurs, les chercheurs de lInac
(9)
dveloppent
Mesure des proprits
optiques des composants de
terbium et deuropium.
D
.

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t
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C
E
A
(1) Li L. et al., J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 11588-11589.
(2) Li L. et al., Chem. Mater. 2009, 21, 2422-2429.
(3) Thse de doctorat de V. Maurice, Universit de Paris XI
(5 novembre 2010).
(4) Texier I. et al, J. Biomed. Opt. 2009, 14, 054005 ; Goutayer
M. et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 2010, 75, 137-147 ; Delmas
T. et al., Langmuir 2011, 10.1021/la104221q.
(5) Chatterton N. et al, Angew. Chem., Intl. Ed. Engl., 2005, 44,
7595-7598. Nonat A., Inorg. Chem, 2009, 48, 4207-4218.
(6) Laboratoire de reconnaissance ionique et chimie de
coordination/Service de chimie inorganique et biologique.
(7) Nonat A., Chem. Eur. J., 2006, 12, 7133-7150 et 2007,
13, 8489-8506.
(8) Samuel J., Chem. Commun. 2010, 2647-2649.
(9) Service de chimie inorganique et biologique (SCIB) et
service Structure et proprits darchitectures molculaires
(SPrAM).
46
des sondes bimodales en couplant des complexes de
gadolinium avec des nanocristaux fluorescents de
type quantum dots. Les premiers rsultats conduisent
des agents de contraste nanomtriques, haute
relaxivit, associant la modalit magntique et fluo-
rescente. Les deux images de la figure 2 ont t obte-
nues avec ces composs en collaboration avec lquipe
de Michel de Waard de lInserm (Grenoble Institut
des neurosciences/GIN-U836). De plus, pour pn-
trer dans les cellules, ou rpondre par une amplifi-
cation du signal IRM lors dun processus biologique,
les efforts en cours visent coupler ces composs
des molcules dintrt biologique (oligonuclotides,
peptides, protines, sucres...).
Molcules marques pour observation
atraumatique
Pratique dans les services de mdecine nuclaire,
et notamment au Service hospitalier Frdric-Joliot
(SHFJ) du CEA, la tomographie par mission de posi-
tons (TEP) figure parmi les techniques dimagerie
fonctionnelle haute rsolution spatiale. Elle se spci-
fie par une grande sensibilit de dtection permettant
de quantifier in vivo, de manire non-invasive et donc
atraumatique, des processus biologiques et physiolo-
giques spcifiques lhomme. Son principe repose
sur la distribution (pharmacocintique et pharmaco-
dynamique) dune structure molculaire radioactive
(agissant comme une sonde) permettant lobserva-
tion dvnements mtaboliques et neurochimiques
et donc lobtention dinformations fonctionnelles sur
lorgane vis. La TEP sopre en trois phases :
ladministration, gnralement par voie intra-

veineuse, dune molcule marque avec un isotope
radioactif (radiotraceur);
la visualisation, en trois dimensions, de lacti-

vit mtabolique dun organe, grce aux missions
produites par les positons issus de la dsintgration
de lisotope radioactif ;
le suivi et la cartographie du cheminement de ce

radiotraceur par dtection externe.
Le dveloppement de la TEP reste donc troite-
ment li la possibilit de disposer de radiotraceurs
spcifiques aux cibles pharmacologiques lies aux
processus pathologiques diagnostiquer (mala-
dies neurologiques, cancers...). Parmi ces radiotra-
ceurs, le fluor-18, metteur de positons vie brve
(109,8 minutes de priode radioactive), fabriqu
haut rendement par raction de transmutation
nuclaire (en cyclotron), se prsente comme un
radio-isotope de choix pour le dveloppement
de produits radiopharmaceutiques innovants.
Loncologie clinique lillustre en multipliant luti-
lisation de lun dentre eux, un driv radiofluor
du glucose, le 2-[
18
F] fluoro-2-deoxy-D-glucose
([
18
F] FDG). De par la maturit de sa radiochimie, le
fluor-18 permet galement le marquage de structures
molculaires plus complexes comme les peptides, les
protines et anticorps, les oligonuclotides et leurs
drivs (Peptide Nucleic Acids/PNAs, aptamres), les
polysaccharides et les nanoparticules ou nano-objets.
Nanmoins, si de nombreuses macromolcules
savrent dotes de proprits biologiques ou phar-
macologiques exceptionnelles, voire privilgies,
pour limagerie molculaire, la complexit de leurs
structures chimiques et leur haut poids molculaire
exigent le dveloppement de techniques de radio-
marquage spcifiques
(10)
et, en particulier, lorsque les
metteurs de positons vie brve comme le fluor-18
sont utiliss. Le radiomarquage de ces macromol-
cules, par conjugaison dun groupe prosthtique,
porteur du fluor-18, fait aujourdhui figure de para-
digme. Mme si le fluor molculaire fut utilis pour
le marquage de peptides et malgr les rcents dve-
loppements de la chimie du fluor nuclophile pour
raliser des marquages en une tape, le marquage
prosthtique des macromolcules reste aujourdhui
le plus dvelopp et le plus utilis. Cette stratgie peut
sapparenter un processus squentiel. Dans une
premire phase, elle consiste prparer un ractif
de faible poids molculaire porteur du fluor-18 et
dans la phase suivante le conjuguer la macro-
molcule vise chimio et rgioslectivement. Cette
approche prsente lavantage de pouvoir dissocier la
prparation chimique du ractif marqu au fluor-18
(multi-tapes et utilisant des ractifs et conditions
rarement compatibles avec la stabilit chimique des
macromolcules vises) de son couplage covalent
la macromolcule. Cette approche garantit, la
fois, la conjugaison dun unique groupe prosth-
tique sur la macromolcule et le maintien de ses
proprits pharmacologiques et biologiques
(11)
. Fort
de rsultats mthodologiques extrmement promet-
teurs en radiofluoration htro-aromatique, le CEA a
rcemment concentr ses efforts vers la prparation
et lutilisation de nouveaux ractifs chimioslectifs
intgrant un mme motif structural fluoropyridi-
nique (Figure 3 a)
(12)
.
(10) Doll F. et al, Fluorine-18 chemistry for molecular imaging
with Positron Emission Tomography. In Fluorine and Health:
Molecular Imaging, Biomedical Materials and Pharmaceuticals,
Tressaud A. & Haufe G. (Eds), Elsevier, Amsterdam, 2008,
Chap 1, 3-65.
(11) Kuhnast B. et al, Curr. Radiopharm. 2010, 3(3), 174-201.
(12) Doll F., Curr. Pharm. Design 2005, 11(25), 3221-3235.
a c
b
nouveau compos
DOTA
lumire
ultraviolette
Ln
Ln
N
N
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O
O
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H
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lumire proche
infrarouge mise

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A
Figure 2.
(a) Image IRM de cerveau de rat 30 minutes aprs linjection de lagent de contraste ; DOTA est
le nom dun agent de contraste commercial ; (b) Image confocale (imagerie optique) de cellules
avec les nouveaux marqueurs dvelopps (CEA, DSM, Inac-SPrAM et SCIB) ; (c) Quelques
exemples de nouvelles molcules conduisant de nouveaux marqueurs magntiques (Ln = Gd)
et optiques (Ln = Tb, Yb).
47 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
Une premire srie de composs, slective chimi-
quement des fonctions contenant un atome de
soufre (sulfhydryles), inclut les molcules codes
[
18
F] FPyME, un ractif prsentant une fonction
malimide et [
18
F] FPyBrA, un ractif prsentant une
fonction alpha-bromo-actamide. Une deuxime
srie de composs, slective chimiquement des
fonctions azides et/ou alcynes, synthtisable notam-
ment via un procd simplifi (mono-tape),
ouvre de nouvelles perspectives pour le marquage
des macromolcules par le fluor-18 en utilisant les
ractions slectives de cycloadditions. Cette classe
inclut la molcule code [
18
F] FPyKYNE. Les rac-
tifs [
18
F] FPyME et [
18
F] FPyBrA ont, ce jour, t
utiliss avec succs pour le marquage de diverses
macromolcules (figure 3 b) incluant des peptides
et des protines, des squences oligonuclotidiques
(simple brin, aptamre, SiRNA, Peptide Nucleic Acids/
PNAs) et plus rcemment des nano-objets. Citons
notamment le marquage au fluor-18 de deux apta-
mres : D4-36, une macromolcule ciblant le rcep-
teur transmembranaire la tyrosine kinase RET, et
TTA-01, une macromolcule ciblant la tnascine-C
humaine. Citons aussi le marquage de nanocristaux
semi-conducteurs (QD) encapsuls dans des micelles
phospholipidiques fonctionnalises.
Limagerie molculaire par IRM et la TEP offrent des
perspectives extraordinaires la recherche fonda-
mentale, notamment dans le domaine de la chimie
des traceurs. ceci prs que la conception dun
traceur innovant, injectable lhomme, suppose des
prcautions identiques lintroduction dun nouveau
mdicament dans la pharmacope. Lventualit
dune toxicit du produit devra toujours tre prise en
compte mme si, dans la plupart des cas, le patient ne
connatra quune administration unique du compos
dans des quantits trs faibles.
Les travaux mens par les diffrentes quipes du CEA
devraient prochainement dboucher sur de nouveaux
dveloppements dans le domaine du diagnostic
(visualisation non-invasive et atraumatique dv-
nements biochimiques pathologiques, lchelle de
lorgane, de la cellule, voire de la molcule) et de
la prise en charge du patient (validation defficacit
thrapeutique et aide la chirurgie interventionnelle).
> Marinella Mazzanti et Peter Reiss
Institut nanosciences et cryognie (Inac)
Direction des sciences de la matire
CEA Centre de Grenoble
> Isabelle Texier et Franoise Vinet
Institut Leti (Laboratoire dlectronique et de
technologie de linformation)
Direction de la recherche technologique
> Nathalie Herlin-Boime
Institut rayonnement matire de Saclay (Iramis)
CEA Centre de Saclay
> Bertrand Kuhnast et Frdric Doll
Institut dimagerie biomdicale (I2BM)
CEA/Service hospitalier Frdric-Joliot
CEA, Orsay
Mise en place des produits dans la cellule blinde du robot
Zymate XP (USA) ralise au Service hospitalier Frdric-Joliot.
C
.
B
o
u
l
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C
E
A
Figure 3.
(a) Ractifs marqus au fluor-18 par substitution nuclophile en srie htro-aromatique et
chimioslectivit dirige vers des fonctions sulfhydryle, phosphorothioate et azide.
(b) Application de [
18
F]FPyME, un ractif radiofluor de type malimide, au marquage
prosthtique daptamres (c-[
18
F]D4-36 et c-[
18
F]TTA-01) et de nanocristaux
semi-conducteurs (QD) encapsuls dans des micelles phospholipidiques fonctionnalises ;
(c) Images corps-entier obtenues via le tomographe HRRT chez le rongeur aprs injection
in vivo de laptamre c-[
18
F]TTA-01.
a
b
c
O
[
18
F]FPyME
de Bruin B. et al.
Bioconj. Chem.
2005, 16(2), 406-420
[
18
F]FPyBrA
Kuhnast B. et al.
Bioconj. Chem.
2004, 15(3), 61 7-627
c-[
18
F]QD
Ducong F. et al.
Bioconj. Chem.
2008, 19(9), 1921-1926
c-[
18
F]TTA-01
Kuhnast B. et al.
J. Label Compds
Radiopharm.
2009, 52(S1), S41
tomographe
HRRT
c-[
18
F]TTA-01
Rat (Wistar)
minutes
1 60 15 120 5 90 30 165
c-[
18
F]D4-36
Kuhnast B. et al.
J. Label Compds
Radiopharm.
2009, 52(S1), S181
A
A
A
A
A
A
A
A
A
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G
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G G
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F
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3 3
5
C
C
C
C
C
C
3-
5-
T
T
T
T
T
T
T
G
[
18
F]FPyKYNE
Kuhnast B. et al.
J. Label Compds Radi opharm.
2008, 51(9), 336-342
O
O
O O
O
18
F
18
F
18
F
N
N N N
H H
N
Br
HS
HS
SH
S
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O
O
N
N
18
F
48
Manipulation de
composs chimiques
sensibles loxygne de
lair sous atmosphre
inerte (argon) dans une
bote gants.
P
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A
v
a
v
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C
E
A
Drug design pour
optimiser les molcules
pharmacothrapeutiques
L
es mdecins antiques soignaient empiriquement
avec des produits naturels. Il faudra des sicles
pour que la science du mdicament identifie leurs
principes actifs, les fabrique par synthse chimique,
dchiffre les mcanismes daction... jusquaux annes
1970 o de nouveaux outils dexploration des protines
et des gnes permettront dapprhender le monde du
vivant au niveau molculaire. Do lapparition de
molcules pharmacophores programmes pour
atteindre leur cible et remplir leur fonction, qui donne-
ront naissance de nouveaux mdicaments dont voici
quelques exemples.
La maladie de Wilson bientt vaincue ?
Cest un dysfonctionnement de la rgulation du cuivre
dans lorganisme qui dclenche cette maladie rare attei-
gnant 1 000 1 500 personnes, en France. Le cuivre, en
saccumulant dans certaines parties du corps comme
les yeux, le systme nerveux central, le foie... provoque
des symptmes neurologiques, psychiques ou hpa-
tiques (cirrhose) susceptibles dentraner une trans-
plantation hpatique.
Une maladie de lexcs de cuivre
Oligo-lment indispensable la croissance, la solidit
des os, au fonctionnement des globules rouges et blancs,
le cuivre se rencontre dans une multitude daliments :
crustacs, brocolis, champignons ou chocolat... Il existe
dans deux tats doxydation solubles : ltat rduit
Cu (I) et ltat oxyd Cu (II). En excs dans lorganisme,
il peut gnrer des espces oxydantes trs nocives pour
les cellules. Do, la ncessaire rgulation de la concen-
tration du cuivre opre par un ensemble de protines
opration nomme homostasie du cuivre.
Pour comprendre cette maladie, il faut savoir que le
gne dficient, responsable de cette maladie, code pour
une protine du transport du cuivre dans le foie, appe-
le protine de Wilson
(1)
, ou ATP7B. Elle distribue
le cuivre aux enzymes qui en ont besoin ou lexcrte
vers la bile quand il se trouve en excs. Que cet excs
de cuivre ne slimine plus correctement, saccumule
dans lorganisme, et la maladie se dclenche. Des trai-
tements existent pour limiter labsorption du cuivre
alimentaire : la D-Pnicillamine et la trientine. Cette
pharmacope ancienne et peu spcifique prsente
un double inconvnient : une efficacit limite chez
certains patients et des effets secondaires importants.
Do lurgence dun nouveau mdicament.
Une dmarche rationnelle vers de nouveaux
traitements plus spcifiques
Pour les chercheurs de lInstitut nanosciences et cryo-
gnie (Inac), lamlioration du traitement de la maladie
de Wilson passe par la mise au point de chlateurs
capables daller chercher le cuivre stock en excs dans
le foie, sans interagir avec dautres ions mtalliques
essentiels. Encore fallait-il synthtiser des molcules
capables de piger le cuivre sous sa forme prdominante
dans les cellules le cuivre (I) dotes dun systme
de guidage vers le foie. Cette molcule possde deux
units : la premire chlatant le cuivre (I) et la seconde
ciblant les cellules du foie (les hpatocytes). Pour viter
de piger dautres mtaux essentiels, elle se prsente sous
Aujourdhui, pour doper lefficacit de nos mdicaments ou en crer de nouveaux,
les chercheurs ne se contentent plus dobserver et de tester les substances existantes : ils
en dessinent de nouvelles. Cest la technique dite Structure Based Drug Design (SBDD).
Trs sophistique, elle combine la fois les progrs de la chimie, de la biologie molculaire
et cellulaire, de la pharmacologie, mais aussi de la simulation numrique. Dsormais,
les chercheurs peuvent prdire les effets dune substance sur lorganisme avant mme
sa fabrication et sa mise sur le march : une rvolution dans la pharmacope.
(1) WILSON (Kinnier), mdecin neurologue britannique
(1878-1937) qui a notamment travaill avec Pierre Curie et
Joseph Babinski, titulaire de la chaire de neurologie au Kings
College. Il a dcrit la maladie qui porte son nom en 1912.
49 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
Microscope fluorescence
visualisant la protine de Wilson
dans des cellules hpatiques.
La non-fonctionnalit de cette
protine entrane une toxicose
cuprique grave, par accumulation
tissulaire de cuivre. P
.
A
v
a
v
i
a
n
/
C
E
A
C
E
A
principe daction
reconnaissance
foie
activation SH
SH
S
S
Cu
chlation
GSH
GSH
GSH
S
S
S
chlateur off
avant lentre dans
les cellules
(pont disulfure S-S)
4 sucres
(GalNAc)
guidage vers
le foie
chlateur on
aprs lentre dans
les cellules
(fonction SH)
S
candidat mdicament :
molcule prodrogue ciblant le foie
molcule bifonctionnelle
Figure 1.
Conception et principe daction dune molcule bifonctionnelle prodrogue, chlatant le cuivre(I)
et guide vers les cellules du foie. Les molcules bifonctionnelles prsentes comportent
un systme de guidage vers les cellules du foie (des sucres symboliss en bleu). Ces sucres
sont reconnus par des rcepteurs la surface des cellules du foie, ce qui permet lentre du
chlateur dans ces cellules. Le chlateur est dit Off (en rouge) avant son entre dans les cellules
car il ne peut pas chlater les ions Cu(I). Aprs son entre dans les cellules, le chlateur est
activ par du glutathion (GSH), il devient alors dans son tat On car les fonctions thiols (SH en
vert) sont libres. Il peut alors chlater le Cu(I).
forme prodrogue, cest--dire active seulement aprs
son entre dans les cellules vises (figure 1).
Stratgie pour chlater le cuivre (I) :

Ce sont les protines impliques dans lhomostasie
du cuivre qui servent de modles pour llaboration
de chlateurs du cuivre efficaces dans les cellules. En
effet, des transporteurs, comme les chaperonnes
cuivre, ou des squestrants , comme les mtallo-
thionines, fixent le cuivre ltat rduit Cu(I) grce
des cystines, cest--dire des acides--amins
naturels possdant un groupement thiol (SH). Ce
sont les fonctions chimiques thiols qui permettent
ces protines de lier efficacement et slectivement
le cuivre (I). Ces acides--amins servent de briques
de base pour construire lunit chlatante et obtenir
des molcules capables de mimer le pouvoir chla-
tant des protines du vivant. Les chlateurs labo-
rs au Service de chimie inorganique et biologique
(SCIB)
(2)
portent donc deux ou trois cystines greffes
sur une plateforme chimique et offrent ainsi plusieurs
fonctions thiols convergentes pour piger le cuivre
grce aux atomes de soufre.
Stratgie de ciblage des cellules du foie :

Pour cibler les chlateurs vers le foie, le SCIB exploite
une proprit des cellules du foie qui possdent,
leur surface, de nombreux rcepteurs capables de
reconnatre spcifiquement des sucres, comme la
N-actylgalactosamine. Il suffit dinsrer trois ou
quatre units de tels sucres, au sein dune mme mol-
cule, pour favoriser linteraction avec ces rcepteurs
et donc lentre de la molcule dans les cellules hpa-
tiques. Do lide de dcorer les chlateurs les plus
efficaces dunits sucres qui les guideront vers le foie.
Ces nouvelles molcules soufres savrent donc trs effi-
caces pour piger le cuivre lexclusion dautres mtaux
de lorganisme (calcium, zinc...). De plus, leur capacit
lier le cuivre dans des cellules du foie a t mise en
vidence rcemment par le Laboratoire chimie et biolo-
gie des mtaux (LCBM)
(3)
. Il sagit donc de nouveaux
chlateurs trs prometteurs pour lutter contre les
surcharges hpatiques en cuivre, cause de la maladie de
Wilson. Reste encore raliser les tests pour valider leur
utilisation en tant que candidats mdicaments.
De nouveaux agents dcorporants
de luranium
Dans lhypothse dun rejet accidentel de radionu-
clides au sein dune installation nuclaire ou dans
lenvironnement, les chercheurs du CEA tudient de
longue date les risques de contamination interne par
inhalation, ingestion ou blessure, en mode aigu ou
chronique, conduisant une toxicit chimique
(4)
et/ou
radiologique
(5)
selon llment causal. Depuis le dbut
des annes 2000, les recherches sintensifient en matire
de toxicologie nuclaire, spcialement celles ddies au
traitement de la contamination (ou dcorporation).
Cest justement en privilgiant lapproche chimique
que les chercheurs ont pu mettre au point de nouveaux
agents dcorporants de luranium. Cette approche a
permis la conception et la synthse de ligands suscep-
tibles de complexer, in vivo, lion uranyle (UO
2
2+
)
majoritairement prsent en milieu biologique, tout
en rpondant de puissantes contraintes pour ces
ligands : forte association avec le mtal, slectivit
par rapport aux cations biologiques (calcium, potas-
sium...), non toxicit et bonne biodisponibilit.
Ce rsultat dcoule de la mise en uvre de deux
stratgies :
une approche rationnelle, fonde sur des facteurs

physico-chimiques et striques comme ladaptation
gomtrique du ligand aux dimensions atomiques
de lion uranyle par modlisation molculaire
approche valide par lobtention de complexes dura-
nyle trs stables ;
une approche reposant sur la synthse de banque

de molcules et le criblage haut dbit, couram-
ment utilise par lindustrie pharmaceutique pour
la conception de nouveaux mdicaments. Les cher-
cheurs peuvent dsormais slectionner les ligands
conjuguant une forte affinit et une bonne slec-
tivit in vitro. Une chimiothque , compose de
(2) Service de lInstitut nanosciences et cryognie (Inac).
(3) Laboratoire de lInstitut de recherches en technologies et
sciences pour le vivant (iRTSV).
(4) Dose exprime en masse ou en mole.
(5) Dose exprime en gray (Gy) ou sievert (Sv).
50
P
.
A
v
a
v
i
a
n
/
C
E
A
gauche : conglation dune solution contenant un chlateur fluorescent.
droite : agitation dun racteur chimique pendant la synthse de peptides sur support solide.
plus de 300 ligands, a dj t soumise aux tapes de
criblage. Cette opration, mene au Service de chimie
bio-organique et de marquage (SCBM)
(6)
, a mis en
vidence les proprits remarquables dune famille de
molcules bisphosphonates (figure 2). Ces composs
se sont rvls trs efficaces pour complexer lion
uranyle avec des constantes dassociation trs leves
en milieu physiologique. Des tests in vivo ont dmon-
tr lefficacit dcorporante de ces bisphosphonates,
en termes de rtention, dexcrtion et de distribu-
tion au sein de diffrents organes. Ils ont galement
permis de slectionner la molcule 19 E (figure 2)
capable daugmenter lexcrtion de 10 % de luranium
inject et de diminuer denviron 50 % luranium fix
au niveau du rein.
Des travaux similaires importants ont t mens sur
dautres radionuclides dintrt : dune part, le pluto-
nium pour lequel il existe, ce jour, une molcule de
rfrence, le DTPA et une molcule en cours de dve-
loppement, le LIHOPO et dautre part, le csium pour
lequel la molcule de rfrence est le Bleu de Prusse.
Par ailleurs, dautres applications de la trientine et la
D-pnicillamine (cite pour le cuivre) ont t rcem-
ment testes pour le traitement de la contamination
par le cobalt ((Co (II)) et le polonium (Po (IV)), deux
cations proches de cations mous comme le cuivre
(Cu (I)) et donc ayant des affinits pour les mol-
cules soufres. Les perspectives dans le domaine du
traitement de la contamination concernent, dune
part, la vectorisation des ligands pour amliorer leur
efficacit et leur temps de rsidence dans lorganisme,
et dautre part, la recherche de formulations assimi-
lables par voie digestive.
Molcules bioactives pour
mdicaments innovants
Mieux comprendre certaines fonctions biologiques
pour concevoir de nouveaux mdicaments suppose
le dveloppement pralable de molcules biologique-
ment actives. Do les tudes, menes par les cher-
cheurs du SCBM, sur certaines molcules, naturelles
ou synthtiques, dont ils tudient les proprits en
collaboration avec des quipes de biologistes.
Lutter contre le cancer grce aux
inhibiteurs de glycosidases
Les glycosidases sont des enzymes capables de catalyser
la coupure des sucres par hydrolyse, un procd indis-
pensable pour gnrer des molcules de plus petit poids
molculaire (monosaccharides ou disaccharides).
Nanmoins, ces enzymes ralisent parfois des glyco-
sylations et des hydrolyses aberrantes responsables de
pathologies : diabte de type II, maladies gntiques
(grippe, maladie de Fabry et Gaucher). Do la nces-
saire mise au point dinhibiteurs de glycosidases dont
certains sont dj apparus sur le march : Glucobay
(antidiabtique), Zavesca (traitement de la maladie
de Gaucher), Relenza et Tamiflu (traitement de la
grippe).
Dvelopper de tels agents antiviraux, mais aussi anti-
tumoraux, supposait une meilleure connaissance des
mcanismes enzymatiques. En tudiant lun deux,
lhydrolyse des glycosidases, les chimistes du SCBM
sont parvenus concevoir de nouveaux inhibiteurs,
analogues de ltat de transition de cette raction. Ils ont
dmontr comment ces composs miment la struc-
ture du sucre hydrolyser, prsent dans le site actif,
durant la catalyse enzymatique. Suivait la prparation,
par synthse multi-tape, des inhibiteurs drivs du
glucose et du mannose dots dune fonction amidine
diversement substitue, puis les tests en prsence de
glycosidases (figure 3). Un des drivs du mannose se
rvlait alors 30 fois plus efficace que tous les autres
inhibiteurs dalpha-mannosidases
(7)
, une performance
qui en fait linhibiteur le plus puissant et le plus slectif
connu ce jour.
F
.
R
h
o
d
e
s
/
C
E
A
tude de leffet de
luranium sur le bl et
le colza.
N
P
P
OH
OH
OH
OH
n
O
O
O
P
P
P
P
OH
OH
OH
OH
HO
HO
HO
HO
O
O O
O
O O
O
N
N
N
N
O
C
E
A
Figure 2.
Exemples de structures
de ligands ayant un
potentiel en dcorporation
de luranium. En haut :
structure gnrale des
bisphosphonates ; en
bas : structure du dipode
bisphosphonate 19 E. (7) K
i
= 6 nM (K
i
= constante dinhibition et nM = nanomolaire).
(6) Service de lInstitut de biologie et de technologies de
Saclay (iBiTec-S).
51 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
C
E
A
Figure 3.
Structure de linhibiteur driv du D-mannose portant
une fonction thylamine exocyclique, meilleur inhibiteur de
mannosidase synthtis (K
i
tant la constante dinhibition).
HO
HO
HO
OH
OH
OH
HO
HO
N
N
NH
2
NH
H
2
N
H
N
D-mannoamidine
K
i
= 6 nM (-mannosidase)
conformation
bateau B
2,5
En parallle, les chercheurs du SCBM ont ralis des
tudes de cintique dinhibition et de co-cristallisa-
tion avec une bta-mannosidase humaine, issue des
bactries Bacteroides thetaiotaomicron. Les rsultats des
co-cristallisations RX (rsolution de 2,1 )
(8)
montrent
des inhibiteurs prsentant une conformation non
usuelle de type bateau
(9)
avec cette bta-manno-
sidase (figure 4). Ltat de transition de la raction
adopte vraisemblablement la mme conformation,
un rsultat quaucun laboratoire navait pu mettre en
vidence jusque-l. Les glycoamidines synthtises au
laboratoire, de conformation bateau
(10)
B
2,5
, sont donc
comme des inhibiteurs comptitifs de la bta-manno-
sidase de Bacteroides thetaiotaomicron mais proba-
blement aussi des inhibiteurs de ltat de transition.
Cette tude laisse prsager un avenir prometteur aux
inhibiteurs de glycosidases comme nouveaux agents
thrapeutiques, notamment anti-cancreux.
Molcules antioxydantes
Incident radiologique lors de traitements mdicaux
comme la radiothrapie, accident nuclaire, acte de
terrorisme... Il peut arriver que les rayonnements ioni-
sants, rayonnements de haute nergie, endommagent
les tissus dorganismes vivants
(11)
lADN tant lune
de leurs cibles privilgies. Do le dveloppement de
composs aptes contrecarrer les effets nocifs de ces
radiations sur lorganisme un enjeu majeur pour les
chercheurs du CEA.
Certes, un organisme vivant dispose de systmes de
protection contre les espces ractives de loxygne les
molcules antioxydantes (glutathion) ou les enzymes
(superoxyde dismutase) notamment. Cependant, en cas
de forte irradiation, leur action demeure
insuffisante. Restait donc conce-
voir des composs antioxydants
sachant protger lorganisme
et facilement absorbables
avant ou aprs lirradiation.
Une quipe pluridiscipli-
naire de chercheurs du
CEA
(12)
a mis en vidence
un produit antioxydant
exceptionnellement efficace :
la norbadione A (figure 5). Isole partir
du bolet bai, ce compos, apparent aux acides pulvi-
niques, a servi de point de dpart aux chercheurs du
SCBM pour raliser la synthse puis lvaluation dun
grand nombre de molcules analogues (figure 6) et
donc de dterminer les lments structuraux favo-
risant lactivit antioxydante
(13)
. La biodisponibilit
de ces composs ayant t augmente en modifiant
diffrentes fonctions, deux molcules montraient alors
un effet radioprotecteur important. Un projet dtude
concernant le dveloppement dune de ces molcules
est en cours dvaluation.
> Pascale Delangle et Christelle Gateau
> ric Ansoborlo
Dpartement radiochimie et procds
Direction de lnergie nuclaire
CEA Centre de Marcoule
> Marie-Pierre Heck et Thierry Le Gall
Institut de biologie et de technologies
de Saclay (iBiTec-S)
(8) Lorsquun inhibiteur montre une trs bonne affinit
pour une enzyme, il est possible, par une mthode de
radiocristallographie aux rayons X (RX), ralise dans
un synchrotron, dobtenir, aprs calcul de transforme de Fourier
inverse, la densit lectronique de la molcule ; plus la valeur de
la rsolution obtenue savre faible, plus les dtails obtenus seront
prcis : 2,1 est donc un rsultat trs fin. Pour une rsolution
atomique, il faudrait 1 .
(9) Ainsi nomme parce que la structure de la molcule ressemble
une coque de bateau lenvers.
(10) Linhibiteur a une forme de bateau : le cycle principal,
six atomes, peut se mettre dans une forme de chaise ou de bateau
et notre tude de co-cristallisation montre que, dans le site
enzymatique, linhibiteur se dforme en bateau.
(11) Cest par raction avec leau contenue dans lorganisme quils
produisent des espces ractives de loxygne (ion superoxyde ou
radical hydroxyle) capables de dtruire les biomolcules.
(12) Service de chimie bio-organique et de marquage (SCBM),
Service de pharmacologie et dimmuno-analyse (SPI),
Service interdisciplinaire sur les systmes molculaires et
les matriaux (SIS2M).
(13) Dans le cadre dune tude finance par la Direction
gnrale de larmement (DGA).
C
E
A
Figure 4.
Co-cristallisation de
linhibiteur avec BtMan2A
(bta-mannosidase 2 A). Sont
reprsentes en gris et vert,
les liaisons entre les atomes
avec, leurs extrmits, des
atomes doxygne (rouge),
des atomes dazote (bleu),
des atomes de carbone
(noir). Lenveloppe rouge
correspond la carte de
densit lectronique de
la molcule qui permet
de dterminer la structure
prcise de la molcule.
C
E
A
Figure 5.
Structure de la norbadione A, pigment du bolet bai.
HO
HO
HO2C
CO2H
OH
OH
OH
O
O
O
O
O
O
CO
2
H
OH
O O
O
R
3
R
2
R
1
O
OH
Figure 6.
Acide pulvinique, analogues avec sites de modification.
52
E.coli strile
aprs 1 nuit 37 C (gele de tryptophane DEV)
H. alvei
C
E
A
Figure 1.
Test de dtection de lindole gazeux gnr par les bactries. La pastille transparente de
capteur nanoporeux, dop de dimthyl-aminocinnamaldhyde (photo gauche), est dispose
sur une soucoupe contenant un desschant et dpose au centre de la bote de Petri.
Le desschant se justifie par le fait que les bactries croissent dans une atmosphre tide et
humide : leau peut entrer dans les pores et changer lacidit du nanoracteur qui deviendrait
alors moins efficace. La bote de Petri contient un milieu de culture glos dans lequel vont
crotre les colonies de bactries. Au bout de 7 heures, les colorations sont dj visibles et
sintensifient au cours du temps. La pastille devient verte en accumulant lindole gnr par
lEscherichia coli. Le test est ngatif pour lHafnia alvei qui nen produit pas ainsi que pour
lchantillon strile. La coloration est dans ce cas orange (voir figure 2).
De nouveaux capteurs
sensibles et slectifs
Discriminer des bactries pathognes pour diagnostiquer des maladies de manire non invasive,
tudier comment peut tre rpar lADN, se prmunir contre le terrorisme, dtecter des toxines
dagents biologiques ou valuer la rponse immunologique de certains patients infects par le
virus de lhpatite C Aussi htroclites soient-elles, ces recherches se retrouvent pourtant autour
dun dnominateur commun : la conception et lutilisation de capteurs innovants.
I
nstrument de base pour le prlvement de donnes
dans lenvironnement, le capteur doit encore rendre
exploitables les diffrentes grandeurs physiques en vue
de leur traitement ultrieur. Aujourdhui, une nouvelle
vague de capteurs arrive dans les laboratoires, fruits dune
R&D o la chimie joue un rle dterminant. En effet, de la
recherche lindustrie, les chimistes partagent des espaces
dinvestigation communs, ou proches, avec les physiciens
concepteurs de procds innovants de dtection, les biolo-
gistes qui les mettent lpreuve, les fabricants pour les
valoriser sur le march.
Cibler les COV, mme ltat de traces
Humer des odeurs pour discriminer les bactries patho-
gnes et pour diagnostiquer des maladies de manire
non invasive, le concept nest pas neuf et date dj dune
vingtaine dannes. Les marqueurs bien tablis sont, par
exemple, lammoniac coupl au CO
2
pour les infections
gastro-intestinales dues la bactrie Helicobacter pylori.
Dans la plupart des cas, il faut pouvoir dtecter, ltat de
trace, des composs organiques volatils (COV) mis par
ces micro-organismes. De nombreux laboratoires dans
le monde se sont mobiliss pour identifier les COV. Cette
opration a ncessit des moyens lourds de dtection tels
que la chromatographie en phase gazeuse (CPG), la tech-
nique de transfert de protons couple la spectromtrie
de masse ou dionisation chimique galement couple
la spectromtrie de masse, pour produire une banque de
donnes de marqueurs spcifiques. De nombreux COV
pouvant tre mis avec des concentrations diffrentes
par les diverses bactries, leur discrimination se heurte
une double difficult : dtecter certains COV faibles
teneurs (ppb) et quantifier leur vitesse de production
en fonction du temps. Mais actuellement, aucun des
nez lectroniques ou colorimtriques disponibles sur le
march ou dcrits dans la littrature ne remplissent ces
deux conditions. Do lide des chercheurs de conce-
voir des capteurs innovants capables dallier une sensi-
bilit et une slectivit leves en mme temps quune
quantification de la vitesse de production du mtabolite.
Leur principe repose sur des matrices nanoporeuses de
polymres hybrides organiques/inorganiques, produites
partir dalcoxydes de silicium, selon le procd sol-gel,
simple et peu coteux. Lintrt de ces matriaux, forte
surface spcifique dadsorption (600 750 m
2
.
g
-1
), rside
dans leur multifonctionnalit. Ils se comportent, en effet,
comme de vritables ponges pouvant accumuler les
COV tout en les filtrant grce au dimensionnement des
tailles de pores. De plus, une fois dops de molcules-
sondes aptes ragir spcifiquement avec les COV-cibles,
ces matriaux deviennent des nanoracteurs qui exal-
tent les ractions chimiques en apportant une slectivit
accrue au capteur.
Les chercheurs ont obtenu la preuve de lefficacit de
ce concept en cherchant discriminer deux bactries :
lEscherichia coli et lHafnia alvei la premire tant
capable de gnrer de lindole dans un milieu de culture
contenant du tryptophane, contrairement la seconde.
Do la mise au point dun capteur spcifique, ralis
avec un matriau dont la taille des pores, suffisamment
grande, permettait de piger les molcules dindole
(figure 1). Ce capteur a t dop avec une molcule-sonde,
laboration de
capteurs chimiques
transduction optique,
base de matriaux
nanoporeux dops de
molcules-sondes
pour la dtection de
polluants gazeux. C
.

D
u
p
o
n
t
/
C
E
A
53 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
le dimthyl-aminocinnamaldhyde (DMACA), dont la
raction avec lindole conduit la formation dun sel
dazafulvnium fortement color (bleu-vert), absorbant
dans le rayonnement visible avec un maximum centr
625 nm (figures 2 et 3). La vitesse de formation du chlorure
dazafulvnium est proportionnelle la concentration
dindole dans une large gamme de concentrations (5
.
10
-7

2
.
10
-4
mole
.
L
-1
) et la sensibilit atteinte avec une pastille
de ractif stablit de 0,1 40 nanomoles dindole avec un
prlvement de 20 L de la solution analyser. Ce concept
pourra stendre de nombreux COV-cibles, avec de
nombreuses applications la cl dans les domaines de la
sant et de lagroalimentaire. La recherche de marqueurs
pour le diagnostic prcoce des cancers, par exemple, se
trouve en pleine expansion. De mme, dans le domaine
de lagroalimentaire, le suivi de la fracheur des aliments
ou la dtection prcoce de leur contamination par des
bactries pathognes pendant leur processus de trans-
formation revtent une grande importance avec un fort
impact conomique pour les entreprises.
Quantifier la rparation de lADN
avec des biocapteurs
LADN se trouve constamment soumis des agents endo-
gnes ou exognes susceptibles de lendommager, voire de
gnrer des processus de mutagense ou de mort cellu-
laire. Heureusement, diffrents complexes enzymatiques
de rparation peuvent prendre en charge de telles lsions,
les liminer et ainsi restaurer lintgrit du message gn-
tique. La moindre dficience en capacit de rparation de
lADN peut entraner lapparition de cancers. Ces mca-
nismes de rparation agissent donc comme de vritables
gardiens du gnome . Par ailleurs, sachant que la surex-
pression des protines de rparation de lADN se trouve
lie la rsistance de certains cancers aux traitements
anti-tumoraux, lune des stratgies capables de limiter ce
phnomne consiste combiner le traitement chimio ou
radio-thrapeutique avec un inhibiteur de la rparation.
Ainsi, au regard du rle primordial jou par les systmes
de rparation de lADN, lambition des chercheurs vise-t-
elle mesurer, aussi prcisment que possible, les activits
enzymatiques de ces systmes.
Classiquement, la rparation de lADN, par excision/
resynthse
(1)
, est mesure laide de tests fonctionnels
utilisant des sondes nucliques radioactives couples
une analyse par lectrophorse. Longues et fastidieuses,
ces approches analytiques ne permettent pas les analyses
en routine et haut dbit dchantillons biologiques
nombreux. Aussi, les chercheurs du Laboratoire des
lsions des acides nucliques
(2)
ont-ils mis au point de
nouveaux biocapteurs ADN utilisant une dtection fluo-
rescente, en solution ou sur un support. Ces nouveaux
biocapteurs permettent dsormais lanalyse fonctionnelle,
facile et rapide, des enzymes de la voie dite rparation
par excision de bases (REB) ou encore des complexes
protiques de la rparation par excision de nuclotides
(REN), autrement dit, deux mcanismes de rparation
bass sur lexcision des lsions puis la resynthse dADN.
Un de ces biocapteurs innovants a pour objectif de mesu-
rer diffrentes activits de rparation de lADN. Il sagit
dun test fonctionnel, bas sur lutilisation de sondes
oligonuclotidiques fluorescentes ou pro-fluorescentes
(fluorescence initialement quenche). Comme le montre
la figure 4, les diffrents oligonuclotides contenant
chacun une lsion distincte sont synthtiss, puis, utili-
ss soit en solution (en format micro-tube ou micro-
plaque), soit fixs sur un support solide de type biopuces.
Ce biocapteur, miniaturis et multiplex (fixation simul-
tane de plusieurs squences) permet de mesurer lactivit
denzymes purifis mais aussi de quantifier des activits au
sein dextraits cellulaires (cellules cancreuses ou cellules
primaires de peau, du sang...). Il a conduit la dcouverte
et ltude dinhibiteurs de la rparation.
Une approche similaire a t dveloppe pour accder
la rparation de lADN en tant que rseau protique
fonctionnel. Elle utilise limmobilisation de plasmides
circulaires portant des lsions spcifiques de lADN sur des
biopuces recouvertes dhydrogel (figure 5). Des activits
de rparation, appartenant des mcanismes diffrents,
y sont quantifies simultanment, ce qui rend possible
la dtermination des voies spcifiquement actives ou
inhibes, co-rgules ou indpendantes, grce des outils
bio-informatiques ddis.
Outre le gain de temps et la convivialit des formats,
ce type dapproche prsente galement lavantage
doffrir une nouvelle dimension et une nouvelle impul-
sion aux recherches menes sur la rparation de lADN.
Celles-ci seront possibles, notamment en travaillant sur
des populations de grande taille, en faisant du criblage
haut dbit pour identifier des inhibiteurs, en tudiant
limpact des drogues (toxiques ou anti-cancreuses) sur
les mcanismes de rparation lobjectif court terme
tant alors de dvelopper une recherche translationnelle
et damener ces tests vers des applications cliniques et
pharmaceutiques.
Nanotechnologies pour dtecteurs
de gaz neurotoxiques
Le dveloppement du terrorisme international implique
de rflchir la manire de se prmunir contre des agres-
sions potentielles utilisant notamment des gaz de combat
(1) Il sagit dun processus faisant intervenir une coupure,
llimination de la lsion puis la synthse dADN intgre.
(2) Laboratoire du Service de chimie inorganique et biologique
(SCIB) de lInstitut nanosciences et cryognie (Inac).
C
E
A
Figure 2.
Souche standard commercialise par LGC Standards dont
le dpartement Recherche et technologie reprsente lInstitut
national de mtrologie britannique pour les analyses chimiques
et biochimiques : distributeur europen exclusif de biomatriel
American Type Culture Collection (ATCC) dont le numro indique
lorigine de la souche.
Escherichia coli
ATCC 11775
tryptophane
milieu agar
LB
milieu agar
Hafnia alvei
ATCC 13337
contrle
(Blanc)
N N N
+
N
H+
H3C CH3
indole DMACA chlorure dazafulvnium
CH3
CH3
Cl
-
O
C
H+
H
C
+
C
H
H H
C
E
A
Figure 3.
DMACA : 4-(N,N-dimthylamino)cinnamaldhyde
ou 4-(N,N-dimthylaminophnyl)propnal.
Chlorure dazafulvnium ou 3-[4-(N,N-dimthylaminophnyl)-
2-propnylidne]indollinine hydrochloride.
54
simples mettre en uvre et induisant des effets psycho-
logiques et un impact mdiatique fort. Comme la montr
lattaque au sarin dans le mtro de Tokyo, en 1995, lutili-
sation darmes chimiques par des terroristes peut toucher
en nombre les populations civiles. La rponse rapide des
attaques de gaz de combat ncessite la mise en place de
capteurs permettant une fonction dalerte extrmement
rapide et spcifique au type de gaz utilis afin de procder
immdiatement aux procdures de protection, dinter-
vention et de prise en charge dventuels blesss.
Aujourdhui, il existe divers dispositifs sensibles aux
gaz toxiques parfois insuffisants dans certains types de
surveillance ou dintervention. Dans lavenir, lessor des
nanotechnologies, notamment le couplage de la fonc-
tionnalisation chimique et des nanomatriaux, devrait
ouvrir de nouvelles perspectives pour la ralisation
de capteurs miniatures, trs sensibles et slectifs pour
la dtection de composs toxiques. Cest ainsi que des
tudes rcentes, menes sur lutilisation de nanofils de
silicium fonctionnaliss par des rcepteurs chimiques
Figure 4.
Reprsentation schmatique du test de dtection dactivit de rparation de lADN par excision par les enzymes de la REB laide de
sondes oligonuclotidiques pro-fluorescentes en solution (en haut) ou fluorescentes sur support (en bas).
La figure du haut montre un oligonuclotide auto-complmentaire, contenant une lsion dintrt, qui sorganise en duplex dit en
pingle cheveu dans laquelle les deux molcules chromophores, situes respectivement chaque extrmit de la structure,
sont trs proches. Lors de lexcitation du fluorochrome donneur, une longueur donde spcifique, lnergie mise par ce dernier est
absorbe par le chromophore quencheur . La fluorescence est alors teinte et aucun signal nest mesur (1). Lors de lincubation en
solution avec une enzyme de rparation reconnaissant la lsion, ou un extrait contenant des activits spcifiques de rparation, la lsion
est coupe et le fluorochrome donneur est libr simultanment en solution (2). Son excitation la longueur donde spcifique conduit
dans ces conditions une mission de fluorescence qui est quantifie et augmente avec le temps de digestion (3). On peut ainsi suivre,
en temps rel, des cintiques de coupure enzymatique (4) ; courbes rouge et jaune : quantification simultane de deux activits de
rparation caractristiques dun chantillon donn.
La figure du bas montre des oligonuclotides contenant des lsions de bases ou de sucre de lADN, marqus par un fluorochrome, qui
sont immobiliss par hybridation sur une lame de verre pralablement fonctionnalise, ce qui gnre des spots fluorescents (diamtre
250 m). La fixation simultane de lsions distinctes, des positions prdtermines du support, permet le multiplexage du test et
donc la quantification simultane de plusieurs activits de rparation spcifiques de chaque lsion (1). La biopuce ainsi prpare est
incube en prsence dun extrait cellulaire ou denzymes de rparation caractriser (2). La rparation des lsions fixes sur le support
par les enzymes contenues dans le milieu biologique est associe la coupure des oligonuclotides reconnus et llimination de la
fluorescence du support. Par quantification de la fluorescence rsiduelle laide dun scanner, on dtermine lefficacit de coupure des
diffrentes lsions par les enzymes contenues dans le milieu (3) ; les spots rouges de la biopuce avant la raction deviennent verts aprs
coupure. On tablit ainsi des cintiques de coupure des lsions par les enzymes du milieu et on dtermine un phnotype de rparation,
caractristique des capacits de rparation de lchantillon biologique initial (pourcentage de coupure de chaque lsion). Chaque lame
(75x25 mm) comporte 24 biopuces correspondant 24 ractions menes en parallle.
Figure 5.
Reprsentation schmatique du test de dtection dune activit de rparation de lADN par excision/resynthse par les complexes
protiques de la REB ou de la REN laide de sondes plasmidiques immobilises sur support.
Des plasmides contenant des lsions spcifiques en diffrentes quantits cres par des agents physiques ou chimiques (irradiation
ultraviolette, oxydation, photosensibilisation, traitement acide...) sont immobiliss des positions prdtermines sur un microsupport
recouvert dun hydrogel (1). Ce dernier permet la prservation, long terme, de lADN. La biopuce ainsi prpare est incube en
prsence dun extrait cellulaire caractriser (2). La raction dexcision des lsions et de resynthse dADN intgre par les enzymes
contenues dans lextrait biologique conduit lincorporation de fluorescence (toiles rouges), qui est ensuite mesure laide
dun scanner (3 : image de la biopuce en fausses couleurs). Lintensit de fluorescence mesure est proportionnelle la quantit
de lsions prsentes sur les plasmides (3 ratios lsion/ADN) et lefficacit des enzymes de rparation prsentes dans le milieu
biologique, et spcifiques de chaque type de lsion. Lhistogramme en (4) montre le phnotype de rparation dun chantillon avec
la mesure de 6 activits de rparation diffrentes (une par couleur).
1. oligonuclotides
pro-fluorescents contenant
une lsion spcifique
2. incubation avec
un lysat cellulaire
3. quantification de la fluorescence 4. dtermination du
phnotype de rparation
250
150
200
100
50
0
0 10 20 30
temps (min)
fluorescence quenche
excision
restauration de
fluorescence
1. oligonuclotides
fluorescents contenant
une lsion spcifique
2. incubation avec
un lysat cellulaire
immobilisation sur support
excision
limination de
fluorescence
C
E
A
1. ADN plasmidique contenant
des lsions spcifiques
2. incubation avec
un lysat cellulaire
immobilisation
sur support
excision/resynthse
incorporation dun
marqueur fluorescent
C
E
A
0
0
40
80
120
20
60
100
5 10 25 15 30 40 20 35 45
ThymG AbaS CisP AlkB 8oxo CPD-64 tmoin
f
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e
55 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
molculaires, ont permis de mettre en vidence une
excellente capacit dtecter immdiatement, et de faon
trs slective, des composs toxiques organophosphors
(OP) famille de molcules neurotoxiques laquelle
appartient le sarin. Le principe de ces nouveaux capteurs
repose sur des molcules rceptrices spcifiques ce type
de composs toxiques, prpares en plusieurs tapes de
synthse organique, puis greffes de trs petits fils de
silicium denviron 100 nm de diamtre. En prsence du
toxique cibl, les molcules greffes ragissent avec le
gaz et crent des charges lectriques. Situes proximit
immdiate du nanofil de silicium, celles-ci modifient
sensiblement le passage du courant lectrique dans le
silicium. Par une simple mesure dintensit lectrique
du dispositif, au cours du temps, il est alors possible de
savoir si les molcules ont ragi, et donc, si la prsence de
gaz toxique a t dtecte (figure 6).
Chimie flexible et polyvalente
pour les biopuces
Aujourdhui, grce des systmes miniaturiss comme
les biopuces, les chercheurs peuvent dtecter des mol-
cules-cibles prsentes dans un chantillon biologique
(marqueurs biologiques). Dans ce cas, les molcules-
sondes reconnaissant les cibles prsentes en solution
doivent tre fixes sur la surface de la biopuce. Dans
les annes 2000, lADN restait la cible de prdilection
et les chercheurs optimisaient leur chimie de manire
pouvoir fixer ce type de molcules. Depuis, le spectre duti-
lisation de ces objets a connu une large ouverture allant
bien au-del de linteraction ADN/ADN. Ainsi peut-on
dsormais dtecter des assemblages molculaires anti-
corps/ligands (toxines, allergnes...), voire plus complexes
comme des anticorps avec des cellules ou des bactries. La
chimie utilise pour la fixation de ces diffrentes classes
de molcules doit donc rpondre une srie de critres :
tre polyvalente ;
sadapter au mode de dtection de linteraction utilis :

fluorescence, rsonance plasmonique, mcano-capteur...
sadapter aux procds de micro, voire de nanostructu-

ration, ncessaires la construction de la biopuce.
Ainsi, le groupe Chimie pour la reconnaissance et
ltude dassemblages biologiques (Creab)
(3)
a dcid de
travailler sur la fonctionnalisation de couches fines dor
(quelques dizaines de nm) en raison de leurs proprits
optiques particulires, notamment mises en jeu lors de
mesures plasmoniques, mais aussi de la facilit de mise
en uvre dans les procds de microlectronique. Le
groupe a donc dvelopp des procds de dpts lectro-
chimiques permettant dimmobiliser des molcules sur
un grand nombre de supports conducteurs dont lor. Le
principe consiste fonctionnaliser les molcules-sondes
en utilisant un pyrrole puis les copolymriser avec du
pyrrole libre sur une surface conductrice. Cette raction
se droulant en milieu aqueux salin et pH neutre, cest-
-dire en condition physiologique, celle-ci reste compa-
tible avec de nombreuses molcules dintrt biologique,
et les interactions mesures aujourdhui peuvent savrer
trs diverses. Cela ouvre donc des domaines dapplica-
tion trs peu explors actuellement. De plus, les proc-
ds de dpts dvelopps permettent de fonctionnaliser
des surfaces, non seulement par des spots de polymre
fonctionnalis de quelques nanomtres dpaisseur dont
le diamtre peut tre ajust sur une gamme couvrant la
centaine de nanomtres jusquau millimtre, mais gale-
ment des surfaces de pores micro ou nanomtriques.
Cette grande flexibilit dutilisation permet de sadapter
facilement des besoins biologiques aussi varis que la
dtection de toxines rares dans un chantillon deau,
lanalyse de cellules sanguines, voire au nanoposition-
nement dobjets...
Cette grande souplesse dutilisation prsente un double
avantage : celui de sadapter un nombre important de
procds de dtection dinteractions, optiques ou lectro-
chimiques, avec ou sans traceurs, et celui de couvrir une
large gamme dapplications biologiques . Par exemple,
en matire de protection de lenvironnement, les cher-
cheurs peuvent dsormais dtecter de faon trs sensible
des toxines dagents biologiques ; dans le domaine de la
recherche mdicale, ces procds sutilisent galement
pour lvaluation de la rponse immunologique de
patients infects par le virus de lhpatite C, la recherche
doligosaccharides actifs biologiquement, lorganisation
et la caractrisation de cellules humaines sur des surfaces
microstructures, etc.
Il reste donc primordial que la chimie soit dveloppe en
troite collaboration avec les physiciens impliqus dans
les procds de dtection, avec les biologistes responsables
des applications, mais galement, le cas chant, avec les
industriels concerns par la valorisation des rsultats.
> Thu-Hoa Tran-Thi
> Sylvie Sauvaigo, Didier Gasparutto,
Thierry Livache et Andr Roget
> Jean-Pierre Simonato
Institut Liten (Laboratoire dinnovation pour
les technologies des nergies nouvelles et les
nanomatriaux)
Figure 6.
Reprsentation schmatique du systme de dtection base de nanofils de silicium comportant
des molcules sensibles greffes en surface. La mesure du courant est stable avant la prsence de
composs toxiques et une augmentation de la conductance lectrique sobserve aprs la raction
des molcules gazeuses sur le nanofil de silicium fonctionnalis. Sur les crans est affiche
lvolution, au cours du temps, de la conductance du nanofil fonctionnalis. droite, reprsentation
de la molcule de sarin.
C
E
A
molcules rceptrices
molcules gaz OP
cration de
charges
dtection
lectrique
temps
temps
c
o
n
d
u
c
t
a
n
c
e
c
o
n
d
u
c
t
a
n
c
e
OP
lment
semi-conducteur
(3) Il sagit dun groupe appartenant au Service structure
et proprits darchitectures molculaires
(SPrAM/UMR 5819) fonctionnant au sein de lInstitut
nanosciences et cryognie (Inac).
Matrice au pas de 20 m de
micro-dpts danticorps (haut)
spcifique de certaines cellules
sanguines (lymphocytes T).
tant donn la taille des spots
(5 m) et la taille des cellules
(10 m), seule une cellule
peut sinstaller sur le spot.
La matrice danticorps est
incube avec lchantillon
biologique et les cellules
reconnues sauto-organisent
donc suivant le motif dessin.
Les cellules sont ainsi plus
facilement tudiables et des
tudes sur les scrtions de
molcules mdiant lactivit
immunitaire peuvent tre
ralises (bas/Roupioz et coll.).
C
E
A
56
Capteurs gaz intgrant
des NEMS (pour Nano
Electro Mechanical
Systems).
P
.

A
v
a
v
i
a
n
/
C
E
A
Chimie pour micro et
nanosystmes fonctionnels
La chimie connat une volution radicale de ses concepts et de ses pratiques. Lapport
des micro et des nanotechnologies promet des ruptures majeures aussi bien dans
les domaines de la sant que de la protection de lenvironnement ou de la scurit civile.
D
epuis les annes 70, nous assistons une volu-
tion des concepts et des pratiques en chimie,
classiquement dcrite en chimies organique et min-
rale, chimie des matriaux et physico-chimie
(1)
. La
perspective se situe moins dans la dcouverte dune
molcule pour imaginer des applications que dans
la capacit de la chimie permettre la ralisation
de nouveaux objets multifonctionnels innovants.
Elle intervient donc linterface de diverses disci-
plines ou techniques. Ainsi, le traitement et lana-
lyse de signaux issus de capteurs chimiques et/ou
biologiques intgrant des micro et nanotechnologies
ouvrent, de faon non limitative, des perspectives
de ruptures majeures dans les domaines de la sant
(diagnostic et thranostique), du contrle envi-
ronnemental (qualits de leau et de lair) et de la
scurit civile (menaces chimiques et biologiques,
pandmies). La chimie doit ici fournir des architec-
tures multi-chelles complexes en vue dlaborer des
systmes chimiques, fonctions contrles, compa-
tibles avec les contraintes de fabrication et dusage
(le vivant notamment). La concentration, la capture,
le tri, la dtection ou encore la dlivrance despces
chimiques ou biologiques figurent sur la palette de
ces fonctions labores.
Miniaturiser les chantillons biologiques
et gagner sur les temps danalyse
Y parvenir suppose de concentrer les mtabo-
lites partir du sang total, sans procder, comme
aujourdhui, lextraction du plasma. En travaillant au
dveloppement de nouveaux mdicaments, les cher-
cheurs sont parvenus faire voluer les techniques
danalyse dans un double sens :
la diminution progressive du volume des chan-

tillons biologiques ncessaires une analyse : dsor-
mais, seulement 5 ml de sang total suffisent ;
lutilisation dun mme chantillon pour doser

simultanment le principe actif, ses mtabolites et ses
bio-marqueurs dactivit pharmacologique associs.
Tous les problmes nen sont pas pour autant rsolus.
En effet, ces techniques de dosage, bases sur la chro-
matographie liquide et la spectromtrie de masse
des chantillons plasmatiques, restent complexes car
elles ncessitent une extraction des composs dans
un volume denviron 100 l de plasma. Une relle
avance thique pour les futures tudes cliniques
chez les patients passe donc par la miniaturisation du
volume des chantillons biologiques. Un volume de
quelques microlitres permettrait de saffranchir de la
contrainte de la prise de sang, trs invasive. Un simple
prlvement par piquage du doigt est alors suffisant.
Lautre avance serait de pouvoir travailler directe-
ment sur le sang et simplifier ainsi ltape de prl-
vement avec, pour corollaire, un gain de temps et
une meilleure matrise des chantillons biologiques.
Sur cette voie, les chercheurs du Laboratoire dlec-
tronique et de technologie de linformation (Leti)
viennent de dmontrer la faisabilit dun concen-
trateur de mtabolites, partir dun volume minia-
turis de sang dune dizaine de microlitres, dans un
microracteur structur et fonctionnalis chimique-
ment en phase gaz aprs scellement (figure 1). Les
rsultats savrent prometteurs. En effet, aprs lli-
mination des cellules sanguines et des protines, un
(1) Citons lintroduction des concepts de chimie douce
(J. Livage, 1997), de chimie supramolculaire (J.-M. Lehn,
1987), de chimie verte (P. Anastas et J. Warner, 1998), de
click chemistry (K.B. Sharpless, 2001) ou encore de chimie
intgrative (R. Backov, 2005).
C
E
A
50 m
Figure 1.
Intrieur dun microracteur, structur par gravure profonde de
silicium, observ par microscopie lectronique balayage.
57 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
mdicament a pu tre extrait et purifi en 30 minutes
au lieu des 5 heures requises actuellement et cela,
partir dun chantillon de seulement 20 l de sang
total.
Capturer des protines pour
diagnostiquer les cancers
Aujourdhui, la cancrologie attend des chercheurs
de meilleurs moyens de diagnostic et des progrs
en matire de suivi thrapeutique. Si les techniques
demeurent encore limites, cest quelles sappuient
sur un dosage des marqueurs prsents dans le srum
des patients mais aussi quelles requirent des tapes
dextraction et de concentration pour aller identi-
fier lquivalent dun grain de sel dans une piscine !
Nanmoins, un pas pourrait avoir t franchi par
une quipe de recherche dirige par Franois Berger
de lInstitut des neurosciences de Grenoble. Au sein
de cette unit, les chercheurs du Leti ont apport une
forte contribution en dveloppant une technique de
prlvement miniaturise de biomarqueurs in situ
dans les tumeurs. Cette technique consiste utili-
ser un substrat de silicium de 600 m x 2 cm, struc-
tur sous la forme de microcolonnes octogonales
(hauteur : 50 m et diamtre : 80 m) puis fonction-
nalis chimiquement, avec par exemple une fonction
anionique, pour capturer slectivement, par interac-
tions lectrostatiques, les protines aprs apposition
de ce substrat par lintermdiaire dun outil chirurgi-
cal appropri (figure 2). La strilisation pralable de
ces dispositifs sopre sans altration de la chimie de
surface. Le substrat est ensuite directement analys
par spectromtrie de masse Seldi-TOF de Ciphergen.
Les premiers tests, raliss pour dterminer lem-
preinte protique dans des tumeurs sous-cutanes
provoques chez la souris, ont permis de valider le
principe de microbiopsie.
Dtecter des ions pour suivre
un tat physiologique
Dans le cadre du projet europen Nephron+, le Leti
a dvelopp un capteur de type Ion Selective Electrode
(ISE) pour assurer le suivi, en continu, des ions Na
+
et K
+
prsents dans le plasma aprs une boucle de
filtration du sang dun rein artificiel embarqu sur
une personne. Pour le fabriquer, les chercheurs
ont procd linclusion de molcules de capture
(calixarnes, ther-couronne) dans une membrane
de PVC, une architecture favorable qui permet de
mesurer la concentration en lectrolytes (figure 3).
Directement oprationnel dans le plasma sanguin, ce
capteur prsente le double avantage dtre biocom-
patible et non toxique.
Ce mme type de capteur a permis le suivi physio-
logique de pompiers en service, la concentration
en ions dans la sueur tant un indicateur de stress
(figure 4).
Prvenir les risques chimiques
et biologiques
Dtecter les gaz, puis les sparer, figure sur lventail
des mesures incontournables en matire de prven-
tion des risques chimiques ou biologiques dans len-
vironnement. La problmatique tient au fait que
dans un environnement complexe (puits ptroliers,
habitat, eau de rivire), les substances toxiques ne
figurent qu ltat de traces complexifiant ainsi leur
dtection. Il sagit donc dun dfi majeur lanc aux
chimistes. Relever ce dfi suppose la ralisation dun
systme danalyse compact, portable, peu coteux,
offrant des fonctionnalits et des performances qui-
valentes celles dun quipement de chromatogra-
phie en phase gazeuse coupl un spectromtre de
masse. Les chercheurs du Leti travaillent dvelop-
per un tel dispositif capable danalyser des mlanges
gazeux. Le futur appareil reposera sur une architec-
ture originale, comprenant une srie de dtecteurs de
type NEMS (pour Nano Electro Mechanical Systems),
Figure 3.
Principe de capture des ions Na
+
et K
+
.
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O O
Na
+
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O O
O
NH
NH
HN
HN
N
H
N
H
K
+
C
E
A
Figure 4.
Capteur lectrochimique dions sur support souple.
C
E
A
support polyimide
lectrode de rfrence
membrane slective
C
E
A
Si Si Si
O O O
COO
-
COO
-
COO
-
Na
+
Na
+
Na
+
surface de Si
Figure 2.
Chimie de capture de protines sur un substrat de silicium ( droite) et dtail de la structuration
du silicium observ par microscopie lectronique balayage ( gauche).
80 m
58
coupls une microcolonne de chromatographie.
Une telle intgration va permettre dobtenir la fois
une grande sensibilit et une rapidit de mesure sur
des chantillons complexes. Ces travaux sinscrivent
dans le contexte dune collaboration, runissant le Leti
et Caltech, et fonctionnant au sein dun Nanosystem
Partnership Program. Les industriels membres de ce
programme sont tous impliqus dans la dtection de
composs gazeux au sein de latmosphre (gaz acides
pour les aspects de scurit industrielle et les mesures
de COVs conformment la directive REACH) et
par la mise au point dun systme de monitoring des
gaz mis par lindustrie chimique (raffineries). Outre
les applications dans le domaine de la chimie, des
applications potentielles dans le domaine de la sant
sont envisageables, comme lidentification et le suivi
de biomarqueurs dans lhaleine qui supprimeront les
prlvements sanguins, ou la dtection de la respira-
tion de bactries !
Ici la chimie, par lintermdiaire de couches sensibles
aux gaz, intervient soit pour sparer, dans les micro-
colonnes de chromatographie, soit pour dtecter, au
niveau de la structure nanomtrique. Des interac-
tions rversibles, avec une spcificit et une slectivit
pour les gaz dtecter dans le cas dun monitoring en
continu, sont obtenues dans cette couche de quelques
dizaines de nanomtres localise par lectrogreffage
de sels de diazonium.
Crer une interface chimique entre
un objet et son environnement
Comme nous avons pu le voir par les exemples prc-
dents, les substrats sur lesquels la chimie intervient
sont de nature et de structure trs diverses.
Un agent de couplage va permettre dtablir un lien
entre un substrat inerte et la fonction que va lui
confrer la molcule active (figure 5).
Y figurent la fois des molcules bi-fonctionnelles,
des couches de polymres fonctionnels ou de
sol-gel. Le couplage de la molcule active seffec-
tue soit par lintermdiaire de liaisons covalentes
ou lectrostatiques, soit par adsorption. La nature
de ces molcules dpend de lapplication vise : les
molcules biologiques (ADN, protines, enzymes,
anticorps, saccharides, peptides) pour des applica-
tions dans le domaine du diagnostic in vitro, et les
molcules chimiques (alcanes hydrophobes anio-
niques et cationiques, polythylne glycol, calixa-
rnes) pour des applications dans le domaine de la
protomique ou des capteurs physiologiques. Une
fois ces molcules et ces procds associs rpertoris,
les chercheurs du Leti ont cr une sorte de grande
librairie sur les rayons de laquelle les composants
chimiques non toxiques et les ractions peu ner-
givores figurent en best sellers. Ce nouveau mtier
de chimie aux interfaces na pu natre au Leti quen
raison dun environnement spcifique, permettant le
partage des connaissances entre technologie, micro
fluidique, biologie et chimie. Outre les applications
dans les domaines mentionns plus haut, les comp-
tences acquises trouvent dautres dveloppements
dans les secteurs de lnergie et des nouvelles tech-
nologies de linformation. Ainsi, les chercheurs du
Leti sont-ils parvenus greffer le site actif dune
dune hydrognase sur des lectrodes pour raliser
une cellule de production dhydrogne ou encore
des molcules aux proprits intressantes pour la
ralisation de mmoires lectroniques.
Ces comptences, runies au sein de la plateforme
Chimie de la Direction de la recherche technologique
(DRT) ont aussi permis un nouveau dveloppement
dans la modification de surface de la matire molle,
et plus particulirement de nanoparticules lipidiques
Lipidots
TM
, pour des applications dans le domaine de
limagerie et de la thrapie (voir article p. 44).
> Franoise Vinet
Institut Leti (Laboratoire dlectronique
et de technologie de linformation)
Microcolonnes de silicium pour chromatographie en phase gaz.
P
.

A
v
a
v
i
a
n
/
C
E
A
lectrogreffage localis de sels de diazonium en bote gants.
P
.

A
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a
v
i
a
n
/
C
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A
C
E
A
Figure 5.
Schma de principe de
modification chimique de
substrat ou de nano-objet.
nano-
objet
molcule
active
agent de
couplage
ou
substrat
59 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
P
.

A
v
a
v
i
a
n
/
C
E
A
Robot de cristallisation
des protines.
Structure et activit
des protines
L
a fonction dune protine se trouve encode dans
sa squence : celle-ci dtermine non seulement
sa structure, mais aussi sa dynamique. La dynamique
est la structure des protines ce que fut la magie au
pantin Pinocchio.
Les nanomachines du vivant
Fabriques selon les instructions gntiques cryptes
dans lADN, les protines figurent comme les vritables
ouvrires du vivant et cela, aussi bien au-dehors
quau-dedans des cellules biologiques. Dans les proces-
sus complexes luvre au sein des organismes vivants,
chacune de ces protines interprte son, ou ses rles.
Dans le sang, par exemple, lhmoglobine permet dassu-
rer le transport de loxygne, et linsuline, de grer la
rgulation du taux de sucre. Ces rles trs spcifiques
conduisent une classification des protines selon leur
type de fonction biologique : enzymes, hormones, rcep-
teurs, anticorps, protines de signalisation, de transport,
de stockage...
Une de ces protines intresse particulirement les cher-
cheurs de lquipe Dynamique structurale des protines,
lInstitut de biologie structurale (IBS), un institut
co-financ par le CEA, le CNRS et luniversit Joseph
Fourier. Il sagit de lactylcholinestrase (AChE), linter-
rupteur off des synapses cholinergiques, cest--dire des
synapses utilisant lactylcholine (ACh) comme neuro-
transmetteur. De telles synapses se rencontrent au niveau
des jonctions neuromusculaires ainsi que dans les zones
du cerveau en charge des fonctions cognitives (orienta-
tion, mmoire, langage...) : il sagit donc dune enzyme
essentielle. La modulation de son activit sera souhaitable
lors des traitements symptomatiques du glaucome, de la
myasthnie (myasthena gravis) ou de la maladie dAlzhei-
mer. Par exemple, rien que pour cette dmence, quatre
des cinq mdicaments approuvs savrent tre des inhi-
biteurs rversibles de lAChE. Nanmoins, son inhibition
complte et irrversible sera ltale par exemple, lors de
lexposition une dose massive dinsecticides (mthami-
dophos, monocrotophos, parathion...) ou certains
agents neurotoxiques (VX, soman, sarin...).
Grande diversit des structures
tridimensionnelles
Notre mmoire gntique , lADN, scrit par succes-
sion de triplets dun alphabet 4 lettres les bases
de lADN ; il y a donc 4
3
= 64 caractres disponibles.
Nanmoins, au sein des protines traduites partir de
lADN, on ne trouve que 20 acides amins naturels . En
effet, les diffrents types dacides amins sont cods par
un nombre variable de caractres de lADN : on parle
de dgnrescence du code gntique.
Pour dcrire simplement une protine, on peut lenvisager
comme un collier compos par lalternance de vingt
perles diffrentes. Plus ou moins longs, plus ou moins
enrichis en chacun des types de perles , les diffrents
colliers de protines se distinguent avant tout par leur
squence en perles : cette squence va dterminer la
structure adopte par la protine. Ainsi, malgr lappa-
rente faible diversit de la bibliothque dacides amins
naturels, les protines se prsentent sous une multitude
de structures tridimensionnelles. La squence ou
structure primaire dune protine dicte galement
sa dynamique, qui savre tout aussi importante du point
de vue biologique. En effet, cest la subtile animation de
sa structure, par une combinaison de mouvements plus
ou moins longs et plus ou moins amples, qui confre, in
fine, sa fonction une protine. Pour filer la mtaphore,
figurons-nous un papillon : son envol relve autant du
battement de ses ailes que de leur forme.
Les protines peuvent tre classes en deux catgories :
les protines solubles, baignant en solution aqueuse, et
les protines membranaires, autrement dit insres dans
une membrane biologique. Dans ces deux catgories, la
vaste majorit des protines possde une structure tridi-
mensionnelle unique et spcifique, puisque adapte
leur(s) rle(s) biologique(s). Nanmoins, des protines
dites intrinsquement dplies ont t dcouvertes il y
a une dcennie environ. Elles se spcifient par labsence de
structure tridimensionnelle unique et sont mieux dcrites
partir dun ensemble de conformations transitant rapi-
dement les unes entre les autres.
Les sciences du vivant tiennent aussi leurs nanomachines : on les appelle les protines.
Chacune excute, au sein ou au profit dune cellule biologique, une ou plusieurs tches
spcifiques, rendant ainsi possibles les diffrents processus ncessaires au dveloppement et
la survie dun organisme. Mieux comprendre les protines est donc un dfi incontournable,
ne serait-ce quen vue dlargir la pharmacope.
60
H440
S200
E327
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Spectromtre de
rsonance magntique
nuclaire (RMN)
haut champ (800 MHz)
de lInstitut de biologie
structurale (IBS).
La rsonance magntique nuclaire (RMN) na pas

besoin de recourir aux cristaux mais ne concerne que
les protines de relativement petite taille (

300 acides
amins). La reconstruction dune structure par RMN
sera toujours indirecte car elle se base sur des mesures
de distances interatomiques dans la protine. Les
modles produits sont ceux qui satisfont au mieux ces
contraintes de distances. Une troisime mthode, la
cryo-microscopie lectronique, permet, dans certains cas
favorables, datteindre des rsolutions quasi atomiques,
voire atomiques.
Par consquent, 90 % des 70 000 structures de protines
dposes la Protein Data Bank (PDB) ont t rsolues
par cristallographie aux rayons X, contre 10 % par la
RMN. Le fleurissement, lchelle mondiale, de synchro-
trons dits de 3
e
gnration a largement contribu cet tat
de fait par exemple, lEuropean Synchrotron Radiation
Facility (ESRF/Installation europenne de rayonnement
synchrotron) situ Grenoble, le synchrotron SOLEIL
de Saclay ou lAdvanced Photon Source (APS) de Chicago.
Brillants et intenses, les faisceaux de rayons X dlivrs
par ces synchrotrons permettent de raliser, en une
minute, des expriences qui ncessiteraient plusieurs
jours avec une source de laboratoire. Le rayonnement
synchrotron a ainsi permis la rsolution de structures,
partir de cristaux de trs petite taille et dont le pouvoir
diffractant tait trs faible. Cest notamment le cas du
ribosome, un complexe macromolculaire gant capable
de traduire linformation gntique en protines, et dont
les cristaux prsentent les deux carences mentionnes.
Sans les synchrotrons de 3
e
gnration, Venkatraman
Ramakrishnan, Thomas Steitz et Ada Yonath nauraient
pu obtenir le prix Nobel de chimie, en 2009, pour leurs
travaux sur la structure et la fonction des ribosomes.
Chimie pour le vivant : conception
rationnelle de mdicaments base
sur la structure de protines
La plupart des mdicaments agissent en ciblant une
protine spcifique, implique dans tel ou tel dsordre
mtabolique. Selon le cas, sera recherche lactivation
LAChE entre dans la catgorie des
protines solubles et structures.
Sa structure tridimensionnelle
illustre les deux lments majeurs
de structure secondaire au sein
des protines (figure 1), savoir,
les hlices- (reprsents par des
rubans hlicodaux) et les feuillets-
(reprsentes par des flches) ; ces
derniers se trouvent relis par des
boucles souvent peu structures.
Comme nous lavons mentionn plus
haut, la fonction principale de lAChE est de catalyser
le clivage du neurotransmetteur ACh. Il sagit donc dune
enzyme, cest--dire une protine charge dacclrer
une raction chimique. Les enzymes sont invariable-
ment structures, leur structure globale correspondant
lossature la mieux adapte pour le fonctionnement
du site actif assurant la catalyse. Ainsi celui de lAChE
nimplique que trois protagonistes parmi les quelque
600 acides amins qui la composent : do lexpression
de triade catalytique (agrandie et en rouge dans la
figure 1). Cette triade se situe au fond dune gorge
troite (surface en vert dans la figure 1). Sa position a
rendu difficilement comprhensible lorganisation du
trafic du sub strat (ACh) et des produits au sein de la
gorge. Ce trafic est apparu dautant plus mystrieux que
lAChE figure parmi les enzymes les plus rapides de la
nature (jusqu 20 000 molcules dACh hydrolyses par
seconde). Une telle efficience catalytique ne peut tre
rationalise que par la prise en compte de sa dynamique.
Lexistence dune porte annexe de sortie, invisible dans la
structure de lenzyme au repos, a notamment t postu-
le ; son ouverture transitoire la base du site actif permet-
trait lvacuation rapide des produits de catalyse, librant
ainsi le site actif pour une nouvelle molcule de substrat.
Nous verrons plus bas comment cette hypothse a pu tre
confirme, grce des expriences qui ont littralement
film lAChE en action.
Comment dterminer la structure
dune protine ?
Pour rsoudre la structure dune protine rsolution
atomique, les chercheurs disposent de deux mthodes.
La cristallographie aux rayons X, exigeant que la

protine ait t pralablement cristallise. La cristalli-
sation dune protine est parfois longue et son issue
toujours incertaine. La radio-cristallographie corres-
pond nanmoins une mesure directe permettant
de localiser chacun des atomes constituant la protine.
Exprience de cristallographie aux rayons X lESRF, sur
la ligne de lumire FIP (French beamline for Investigation of
Proteins). Cette plateforme du Partnership for Structural Biology,
Grenoble, est finance en partie par le CEA. Cette ligne
permet notamment lvaluation de la qualit de diffraction de
trs petits cristaux de protines, sans les extraire de leur bote
de cristallisation (visible en bas droite).
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Figure 1.
Vue densemble
de la structure de
lactylcholinestrase.
Les hlices- et
feuillets- sont
reprsents par des
rubans hlicodaux
et des flches,
respectivement ; ce
sont les lments de
structure secondaire.
La surface verte
correspond la gorge
menant au site actif de
lenzyme ; les btonnets
rouges figurent les
chanes latrales des
acides amins de la
triade catalytique ,
cest--dire une srine,
une histidine et
un acide glutamique en
position 200 (S200), 440
(H440) et 327 (E327),
respectivement.
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61 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
Figure 2.
Une molcule de donpzil (orange) interagit dans la gorge (en
vert dans la figure 1) avec lactylcholinestrase, linhibant ainsi
rversiblement
(1)
. En rouge sont montrs les acides amins
de la triade catalytique et en bleu un tryptophane lentre de
la gorge qui sert de site priphrique de fixation de substrats.
La donpzil (commercialise sous le nom Aricept
MD
) est
utilise pour le traitement palliatif de la maladie dAlzheimer.
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ou linhibition de cette protine. Concernant lAChE,
cible de nombreuses molcules actives, quatre des cinq
mdicaments utiliss dans le traitement symptoma-
tique de la maladie dAlzheimer agissent en modu-
lant son activit. En effet, une diminution du taux
dACh tant invariablement observe dans le cerveau
des victimes de la maladie, linhibition rversible de
lAChE va permettre de le restaurer et donc de ralentir
la progression de la maladie. Parmi les mdicaments
inhibiteurs figure le donpzil, une molcule qui se
lie non seulement la base du site actif, mais aussi
dautres acides amins de la gorge (figure 2). Ceci
illustre comment la connaissance de la structure tridi-
mensionnelle dune protine peut assister la conception
rationnelle dun mdicament.
Quoique la chimie reste matresse du jeu en ce qui
concerne la synthse, la connaissance de la structure
dune protine permettra de simplifier grandement la
qute pour de nouvelles molcules actives, guidant la
conception (structure-based drug-design et docking) et
rationalisant les observations (rsolution de la structure
des complexes). Ainsi, un trs grand nombre de petites
molcules chimiques, constituant une chimiothque,
peut tre cribl dabord in silico, puis in vitro et in crys-
tallo, rpondant ainsi aux questions suivantes :
la molcule mrite-t-elle considration ?
si oui, la molcule est-elle active ?
si oui encore, comment rationnaliser voire amliorer

cette activit ?
Jusqu encore quelques annes, le Structure-based drug-
design se limitait au modle clef/serrure , selon lequel
un mdicament pouse forcment la structure de repos
du site actif de la protine-cible. Nanmoins, dautres
conformations dudit site savrent parfois plus propices
la fixation dun mdicament putatif. Le caractre
dynamique des structures protiques se trouve donc
pris en compte, de plus en plus rgulirement, dans la
conception de mdicaments. Ceci est au prix vident
dune complexit accrue, mais reflte mieux la ralit
biologique et peut parfois faire une diffrence majeure.
La cristallographie cintique pour
montrer les protines en action
Nous connaissons les structures de plus de
70 000 protines mais il ne sagit encore que dune collec-
tion dimages statiques dobjets pourtant dynamiques.
Une meilleure comprhension de leur fonctionnement
appelle la caractrisation de leur dynamique structu-
rale, autrement dit de lensemble des conformations
proches mais tout de mme diffrentes qui leur sont
accessibles. Pour une enzyme, cette caractrisation
savre particulirement importante puisque ce sont
les transitions entre sous-tats conformationnels qui lui
confrrent son activit in fine.
La cristallographie cintique est la cristallographie clas-
sique ce que le cinma est la photographie : elle a pour
but de visualiser les protines en action . Concrtement,
il sagit de dclencher, au sein mme du cristal, la raction
biochimique dont une protine est responsable, puis de
caractriser les diffrents sous-tats conformationnels
entre lesquels elle transite pour remplir son cycle cata-
lytique. Ici encore, lutilisation du rayonnement intense
dun synchrotron sera un avantage certain.
Dans le cas de lAChE, le droulement du trafic du
substrat et des produits enzymatiques depuis lentre
de la gorge site priphrique jusquau site actif a pu
tre film
(2)
(figure 3). La cristallographie cintique
a galement prouv lexistence dune porte annexe de
sortie pour lvacuation rapide des produits, dont lou-
verture synchrone a t permise en prenant avantage
soit dun flash laser, soit du rayonnement synchrotron
lui-mme
(3)
.
Dans un futur proche, les sources de rayons X de 4
e
gn-
ration, capables de produire un rayonnement mille
milliards de fois plus intense que celui des synchrotrons
actuels, fourniront des instantans de protines uniques
en action (lasers lectrons libres ou X-ray Free Electron
Lasers/XFEL). La preuve en a t fournie par le XFEL
de Stanford (tats-Unis)
(4)
. Deux autres XFELs sont
dj en construction : lEuropean XFEL Hambourg
et la SPring-8 SASE Compact Source au Japon. Certes,
il serait prmatur daffirmer que ces machines gantes
deviendront des cinmas molculaires . Une chose
parat dores et dj acquise : les rayons X ont encore
beaucoup nous apprendre sur les molcules et proces-
sus du vivant.
> Martin Weik et Jacques-Philippe Colletier
Institut de biologie structurale (IBS)
(1) Kryger (G), Silman (I), Sussman (J-L), Structure of
Acetylcholinesterase complexed with E2020 (Aricept) :
Implications for the Design of New Anti-Alzheimer Drugs ,
Structure 7, 297-307 (1999).
(2) Colletier (J-P), Fournier (D), Greenblatt (H-M), Stojan
(J), Sussman (J-L), Zaccai (G), Silman (I) et Weik (M),
Structural insights into substrate traffic and inhibition in
acetylcholinesterase , Embo Journal., 25, 2746-2756 (2006).
(3) Weik (M) et Colletier (J-P), Temperature-dependent
macromolecular X-ray crystallography , Acta Crystallographica
Section D, 66, 437-446 (2010).
(4) Chapman (H-N), Fromme (P) et al. Femtosecond X-ray
protein nanocrystallography , Nature, 470, 73-77 (2011).
Figure 3.
Une enzyme en action.
Diffrentes tapes clefs du
trafic de substrats et de
produits au sein de la gorge
(verte dans la figure 1)
de lactylcholinestrase,
identifies par
cristallographie cintique.
62
De la toxicologie
lcotoxicologie
Quelle soit minrale, organique ou biologique, nous vivons par et avec la chimie depuis
toujours. Mais, cest la rvolution industrielle du XIX
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sicle qui offrira un rle majeur
son industrie, posant demble la question de limpact des produits chimiques sur les
oprateurs, les consommateurs et bien sr lenvironnement.
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Culture de cellules
humaines pour des tudes
de toxicologie.
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uelques tapes jalonnent dj les avances en
matire de protection de la sant et de len-
vironnement : la limitation de lexprimentation
animale (1959)
(1)
, la directive europenne classant
les substances dangereuses (cancrognes, muta-
gnes, toxiques pour la reproduction/CMR) en 1967,
la cration de lEnvironmental Protection Agency
(EPA) amricaine ddie la sant humaine et la
sauvegarde des lments naturels (1970), lapparition
du concept de chimie verte dans les annes 90. Lanne
2007 fut marque, en France, par le Grenelle de len-
vironnement et pour lUnion europenne, par la
directive REACH (pour Registration, Evaluation and
Authorisation of Chemicals) crant un systme intgr
et unique denregistrement, dvaluation et dautori-
sation des substances chimiques. Dans ce contexte,
lOrganisation de coopration et de dveloppement
conomique (OCDE) publiait des recommanda-
tions pour les tests de produits chimiques incluant
la connaissance des proprits physico-chimiques,
de lcotoxicologie et de la toxicologie.
La toxicologie et la radiotoxicologie bnficient de
lessor des connaissances scientifiques, techniques
et bio-informatiques et du retour dexprience dans
le domaine des mdicaments. Ds 2002, le CEA a
initi un programme transverse ddi la toxicolo-
gie, visant une meilleure comprhension des impacts
dlments chimiques et/ou radionuclides issus de
lexploitation de lnergie nuclaire (tritium, iode,
csium, actinides) programme qui inclut, depuis
2010, limpact des nanoparticules sur les cosys-
tmes et le vivant. Ce programme pluridisciplinaire
suscite une trs forte interaction entre les chimistes
et les biologistes du CEA qui veulent comprendre les
aspects mcanistiques des toxiques et caractriser
leurs formes chimiques.
Les mtaux : des toxiques
environnementaux
La formation despces assimilables par les orga-
nismes reste un aspect cl du transfert de produits
toxiques de lenvironnement vers le vivant. Leau,
dans laquelle existent des formes complexes du
mtal avec des ligands organiques ou inorganiques,
constitue pour lhomme un mode direct de conta-
mination trophique. Une tude, ralise par des
chimistes et des biologistes du Laboratoire dtude
des protines cibles (Lepc)
(2)
et le Dpartement radio-
chimie et procds (DRCP)
(3)
, en collaboration avec
(1) Principe des 3 R ( remplacement par des modles
informatiques, rduction en maximalisant les informations
venant dun animal et raffinement en minimalisant la
douleur animale) labor par les chercheurs britanniques
William Russel et Rex Burch.
(2) Laboratoire de lInstitut de biologie environnementale et des
biotechnologies (Ibeb/Direction des sciences du vivant) situ
sur le centre du CEA Marcoule.
(3) Dpartement de la Direction de lnergie nuclaire (DEN),
situ sur le centre du CEA Marcoule.
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Germination in vitro
dArabidopsis thaliana.
Le semis a t effectu sur
un milieu glos nutritif
de faon strile. Aprs
48 heures passes 4 C et
dans lobscurit, les botes
sont mises en culture
dans une enceinte jusqu
obtention de plantules
transfrables pour diverses
manipulations (environ
une semaine).
Synthse des peptides.
Analyse et dosage
dchantillons contenant
des mtaux toxiques.
(4) Institut de la Direction des sciences du vivant.
(5) Unit mixte de recherche 5168 - CEA - CNRS - INRA -
Universit Joseph Fourier.
(6) Institut de biologie environnementale et biotechnologie/
Direction des sciences du vivant.
dans la squestration du cadmium. Une dmarche
similaire impliquant des approches combines de
transcriptomique et protomique souligne des diff-
rences significatives de rponses une exposition
luranyle de lignes cellulaires humaines (rein et
poumon). Ainsi, pour les cellules rnales, la proto-
mique rvle des modifications des protines du
cytosquelette et la transcriptomique montre des alt-
rations plus fines, en particulier limplication dun
rgulateur de la minralisation, dmarche valide par
lidentification de la protine implique.
Lutilisation de ces approches globales devrait
conduire lmergence dune toxicologie prdictive,
au dveloppement de modles exprimentaux ou
le Steilyturvakeskus (STUK), a montr que lasso-
ciation duranium, de calcium et de carbonates dans
des eaux de puits finlandaises, expliquait labsence
deffet sur la sant de la population. Paralllement,
des tudes associant lInstitut nanosciences et cryo-
gnie (Inac), lInstitut de recherches en technologies
et sciences pour le vivant (IRTSV)
(4)
et notamment
le Laboratoire de physiologie cellulaire vgtale
(PCV)
(5)
, ont montr que le transfert duranium des
racines vers les parties ariennes des plantes dpend
fortement de la forme chimique ou spciation de
luranium. Nanmoins, quelles que soient les voies
de contamination, les espces mtalliques peuvent
transiter, depuis un compartiment dentre (voies
digestives, ariennes, feuilles ou racines des plantes)
vers dautres compartiments (organes de stockages
notamment), en franchissant diverses barrires
anatomiques et cellulaires. Ces transferts dpendent
du mode dinteraction des mtaux avec les diffrents
ligands biologiques capables de dplacer successi-
vement le mtal partir de sa forme initiale den-
tre vers des formes liminables ou stockables. Les
tudes in vivo de biocintique et de biodistribution
ont permis de dterminer, lchelle des organismes
vivants, les organes et les compartiments o le mtal
saccumule en gnrant des effets toxiques majeurs :
perturbations mtaboliques, endocriniennes, immu-
nitaires (pour le monde animal) et modifications de
la croissance ou du dveloppement racinaire (pour
le monde vgtal).
Par ailleurs, les chercheurs de lIbeb
(6)
travaillent sur
les mcanismes daccumulation chez les bactries
capables de rduire certains oxydes mtalliques (sl-
nite, tellurite, pertechntate, uranyle) et de stocker
des formes insolubles dans le cytoplasme ou, sous
forme de prcipits, au niveau de leur paroi. Depuis
une dizaine dannes, les consquences dune expo-
sition chronique ou aigu aux toxiques sont tudies
in vitro, via lutilisation de lignes cellulaires en
culture. Si ces approches de type omique (trans-
criptomique, protomique, et mtabolomique) ne
remplacent pas lvaluation in vivo (exprimentation
animale), en revanche, elles liminent en amont des
molcules toxicit rdhibitoire.
Lanalyse comparative des transcriptomes renseigne
sur lactivit mtabolique de la cellule via la modula-
tion de lexpression de gnes dans des situations de
rponse des toxiques approches sappuyant sur
les puces ADN. Lanalyse comparative de protomes
et mtabolomes de cellules, exposes ou non des
toxiques, requiert lassociation de mthodes spara-
tives, comme llectrophorse, avec des techniques
didentification par spectromtrie de masse des
protines. Des approches combines de mtabo-
lomique, de transcriptomique ou de protomique
montrent que lexposition au cadmium (Cd) entrane
une modulation du mtabolisme du soufre chez la
levure S. cerevisiae et donc la surproduction de gluta-
thion, une molcule chlatant le cadmium. Chez la
plante Arabidopsis thaliana, lexposition au cadmium
module lexpression de phytochlatines impliques
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Irradiation de cellules humaines pour tudier limpact des rayons ultraviolets.
encore des mthodes alternatives de type in silico
ou mthodes QSAR (pour Quantitative Structure-
Activity Relationships).
Des techniques analytiques toujours
plus performantes
Adapt la dtection de traces, le dveloppement de
techniques analytiques performantes, ou approche
in analytico, permet de mieux caractriser les espces
chimiques dun milieu donn et daccder leur
spciation. Ces techniques, utilises sur des systmes
modles, puis couples des approches de mod-
lisation, peuvent prvoir lincidence de molcules
organiques ou minrales et du pH sur la biodis-
ponibilit des toxiques. Une approche, intgrant
lexprimentation et la modlisation par le dvelop-
pement et lvolution de logiciels de spciation
(7)
et
de bases de donnes
(8)
, a contribu une meilleure
connaissance des radionuclides
(9)
. Ces techniques
analytiques bnficieront la biologie. Ainsi, lana-
lyse lmentaire, associe aux techniques dimage-
rie telles que la microscopie lectronique balayage
ou en transmission, a permis de prciser la forme
chimique des mtaux prsents aux niveaux cellu-
laire et subcellulaire, notamment luranyle (sous sa
forme uranium VI-phosphate) dans les lysosomes
des cellules rnales. Par ailleurs, lexposition de kra-
tinocytes au cobalt entrane sa localisation prfren-
tielle dans le noyau et dans le cytoplasme ainsi quune
diminution du magnsium et du zinc intracellulaires.
Les techniques de spectromtrie de masse, associes
ou non, des mthodes sparatives, offrent gale-
ment des outils puissants la caractrisation des
complexes mtal-ligands forms. Des analyses rali-
ses par Electro Spray Ionization/ESI et Electrospray
Mass Spectrometry/ES-MS ont t employes pour
dterminer les diffrentes formes du Co
2+
en
prsence de petits ligands tels que certains acides
organiques ou amins et des peptides prsents dans
les milieux biologiques. Quant la spectroscopie de
fluorescence laser rsolue dans le temps (TRLFS),
elle permet de dterminer directement des stchio-
mtries et des constantes de formation de complexes
pour des lments fluorescents comme luranium
ou les terres rares : ceci a conduit, par exemple,
la caractrisation des diffrentes espces uranyle/
phosphate en fonction du pH du milieu, la dtec-
tion de complexes uranyle/protine (transferrine)
ou encore uranyle-peptides (peptides issus de la
calmoduline).
Toxicit lchelle molculaire
Il existe plusieurs tapes dans la comprhension des
mcanismes molculaires de toxicit des mtaux :
dabord, lidentification des protines-cibles trans-
portant et/ou favorisant leur accumulation dans les
cellules des organes-cibles, puis la dtermination des
paramtres physico-chimiques et thermodynamiques
caractrisant et quantifiant les interactions protine/
mtal, et enfin les consquences structurales ou fonc-
tionnelles en dcoulant. La spciation des mtaux
dans les milieux biologiques complexes (milieux de
culture, fluides biologiques ou extraits cellulaires)
savre souvent trs incomplte, notamment en ce
qui concerne lidentification des complexes mtaux/
protines. Leur isolement constitue une approche
permettant didentifier la formation de complexes
potentiels. Grce aux techniques de la chimie spara-
tive, le recours des mthodes chromatographiques,
mettant en jeu limmobilisation dun mtal (cobalt,
nickel) par un chlatant (acide nitrilotriactique/NTA
ou acide iminodiactique/IDA) greff sur une phase
stationnaire, conduit isoler les protines affines
pour ces mtaux. Des quipes de lInstitut de chimie
sparative de Marcoule (ICSM)
(10)
et du Lepc sont
parvenues obtenir une avance en immobilisant
de luranyle sur un support prsentant des amines
phosphoniques greffes. Depuis, les chercheurs
utilisent cette phase, dans des conditions physio-
logiques de pH et de force ionique, pour isoler et
identifier des protines affines pour luranyle partir
dextraits cellulaires. Une autre approche, dvelop-
pe au Laboratoire des interactions protine-mtal
(Lipm)
(11)
, en collaboration avec le Dpartement de
physico-chimie, vise isoler les complexes protine/
mtal forms dans les cellules. Cette approche
consiste coupler une sparation par lectropho-
rse sur gel, en condition non dnaturante, avec une
cartographie des gels (par TRLFS ou autoradiogra-
phie) pour identifier les interactions protine/mtal.
La spciation et lidentification de cibles potentielles
du mtal demeurent ncessaires mais non suffisantes
pour dcrire des phnomnes de toxicit. Grce la
dtermination des paramtres physico-chimiques et
thermodynamiques, il devient dsormais possible de
caractriser et de quantifier les interactions protine/
mtal. Ainsi, avec les technologies utilisant les phno-
mnes de rsonance plasmonique de surface, les
chercheurs du Lepc sont parvenus, en conditions
physiologiques et partir de trs faibles quantits
(7) Exemple du logiciel CHESS (pour Chemical
Equilibrium of Species and Surfaces).
(8) Exemple de la base de donnes BASSIST (pour Base
applique la spciation en solution, aux interfaces et aux
solubilits).
(9) Cette approche implique des quipes du CEA, de
lInstitut de radioprotection et de sret nuclaire (IRSN),
du Centre national de la recherche scientifique (CNRS) et
de plusieurs universits.
(10) Unit mixte de recherche : CEA-CNRS-UM2-ENSCM
(UMR 5257).
(11) Laboratoire de lUnit mixte de recherche (UMR6191) :
CEA/CNRS/Universit dAix-Marseille.
65 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
C
E
A
Figure 1.
Organisation spatiale des ligands (histidine 249, aspartate 63,
tyrosine 95, tyrosine 188 et carbonate) du site de fixation du
mtal de la transferrine. Cas du fer ( gauche, matrialis
par une sphre bleue) et de luranyle ( droite, uranium
matrialis par une sphre rose entoure de deux oxygnes-
sphres rouges). Les segments gris correspondent aux liaisons
carbone-carbone, les segments rouges aux oxygnes,
et les segments bleus aux azotes.
TYR95
TYR188
HIS249
ASP63
HIS249
TYR95
TYR188
ASP63
Fe
3+
UO
2
2+
de protines, dterminer laffinit de celles-ci pour
luranyle, dans une gamme allant du nano au micro-
molaire, en seulement quelques heures. Ce criblage
permet de couvrir de larges gammes daffinits. Les
principales difficults rencontres dans la mise en
uvre de techniques biophysiques classiques se trou-
vent contournes et cela sans connaissance a priori
de la protine pourtant utilise en de trs faibles
quantits.
Dans lavenir, les chercheurs devront complter
ces tudes pour identifier les consquences struc-
turales ou fonctionnelles de ces interactions. En
effet, certaines protines membranaires jouent
un rle dterminant, soit pour assimiler des subs-
tances indispensables, soit pour excrter les subs-
tances toxiques du fait de leur nature et de leur trop
forte concentration dans les cellules. Aujourdhui,
plusieurs quipes de lIbeb, lIRTSV et lIBS
travaillent sur ltude structurale et fonctionnelle de
ces transporteurs dans les plantes et les micro-orga-
nismes. Un rsultat notable a dj t obtenu avec
lidentification de transporteurs responsables de
lentre, ou de la squestration de certains toxiques,
dans les cellules ou les compartiments cellulaires de
stockage dans le cas de la vacuole des cellules vg-
tales. Lavenir consistera mettre en vidence des
motifs spcifiques ddis au transport des mtaux
et leur slectivit. Trs engag sur cette voie, le
Laboratoire des changes membranaires et signa-
lisation (LEMS) a dmontr que la surexpression
dun transporteur de type P1B-ATPase, AtHMA4
(pour Arabidopsis thaliana Heavy Metal Associated)
avait pour consquence une accumulation accrue de
cadmium dans les parties foliaires. Ce transporteur
prenant galement en charge le plomb et le cobalt,
cette dcouverte a donn lieu au dpt dun brevet
international sur lapplicabilit de ce procd dans
le domaine de la phytoremdiation.
Chez lhomme, certains mtaux se lient la transfer-
rine, protine majeure de lhomostasie du fer. Des
chercheurs de lIbeb ont dmontr que la liaison
de luranyle aux ligands des sites de fixation du fer
de cette protine ne conduisait pas au changement
de conformation ncessaire sa reconnaissance par
des rcepteurs cellulaires spcifiques (figure 1). Une
gomtrie finale a t propose par une approche
in silico, utilisant un algorithme spcifiquement dve-
lopp pour prdire des localisations de luranyle au
sein des protines. Limpossibilit, pour des cellules,
dinternaliser le complexe transferrine/uranyle a t
confirme, validant ainsi lensemble des rsultats
in vitro et in silico.
Les connaissances gnres par ces recherches
constituent un apport majeur pour lvolution des
rgles de protection et le dveloppement doutils de
dtection (biosenseurs), de biodpollution ou de
dcorporation.
Les chimistes au chevet du gnome
LADN est une cible privilgie des toxiques et
polluants. En effet, la modification de sa structure
chimique, par des agents physiques ou chimiques,
peut conduire lapparition de mutations, sources
de tumeurs. Ltude dimpact dun toxique suppose
donc un volet de gnotoxicologie, discipline o la
chimie joue un rle prpondrant.
Aujourdhui, des tudes de ractivit, ralises sur
des systmes modles, ont permis de caractriser
la nature chimique des dommages induits par les
gnotoxiques dans lADN : cassures de chanes et
produits de modification de la structure chimique
des bases (oxydation, alkylation...). Les apports
de la chimie analytique, de la synthse organique
et de la rsonance magntique nuclaire (RMN)
ont contribu identifier, au niveau cellulaire, un
nouveau dommage. Cette lsion, due aux rayonne-
ments ionisants, conjugue cassure, pontage et base
modifie. Dautres tudes privilgient des approches
de chimie quantique, notamment pour lucider les
mcanismes de formation des dommages.
Dsormais, les chercheurs savent identifier les lsions
susceptibles daffecter cellules et tissus (figure 2).
Pour mesurer ces lsions in vivo, la chimie analytique,
O O
O
O
O
OH O O
N N
N
N
N N O
+
HN HN
HN
HN
HN
HN
H
2
N
H
2
N
1) addition de OH
2) addition de O
2
OH
OO
O
OH
C
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A
Figure 2.
Mcanisme de formation de lsions oxydatives complexes dans lADN. Lattaque initiale dun seul radical conduit loxydation de deux bases adjacentes
du fait de la ractivit dun des radicaux intermdiaires. Limplication de loxygne molculaire (repre en rouge) a t mise en vidence par
spectromtrie de masse.
66
Des capteurs dops
Les aldhydes aliphatiques sont des
polluants majeurs prsents dans lair
intrieur. Le plus petit dentre eux, le
formaldhyde, appartient la classe des
cancrognes. Il se trouve dans des produits
aussi courants que les plastiques, les
rsines, les colles dagglomrs de bois,
les mousses disolation, les germicides,
insecticides et fongicides, et mme dans les
additifs antibactriens pour la conservation
des aliments ; les industries du papier, du
tannage du cuir, de la photographie, de la
soie artificielle, des teintures, des explosifs,
des cosmtiques... en utilisent aussi.
En lieu clos, la teneur en formaldhyde varie
entre 1 100 g.m
-3
et jusqu 500 g.m
-3
.
LAgence nationale de scurit sanitaire
de lalimentation, de lenvironnement et du
travail (Anses) prconise de ne pas dpasser
les 10 g.m
-3
pour une exposition chronique.
Do la conception de capteurs innovants,
forte capacit de pigeage, composs en
matriaux nanoporeux, dont la taille des
pores, adaptable au polluant, permet de
raliser un premier filtrage des composs
organiques volatils. Raction particuli-
rement slective, celle du formaldhyde
avec le Fluoral-P produit une molcule qui
absorbe et fluoresce dans le rayonne-
ment visible : la 3,5-diactyl-1,4-dihydro-
lutidine (DDL). Les capteurs sont donc
fortement dops en Fluoral-P pour une rac-
tion rapide dans les nanopores. La dtection
du formaldhyde sappuie sur la mesure
de labsorbance ou de la fluorescence de
la DDL. Sa vitesse de formation est propor-
tionnelle la concentration de formal-
dhyde et la gamme de mesure tablie pour
sonder la qualit de lair varie de 1 250 ppb.
Depuis la cration de la start-up ETHERA,
des appareils de mesure peu coteux sont
associs ces capteurs (voir page 70). Par
ailleurs, la grande surface dadsorption du
matriau, quivalente celle du charbon
actif, confre au capteur une deuxime fonc-
tion de dpollution sadditionnant celle
de dtection. Dautres capteurs colorim-
triques pour lair intrieur sont ltude,
notamment pour les composs volatils
prsents dans latmosphre des piscines
dont la nocivit a t rcemment rvle.
2 HCHO
formaldhyde DDL
+
Fluoral-P
NH
2
H
3
C
H
3
C
O O
N
H
H
3
C
CH
3
CH
3
CH
3
O
0,8
0,4
0,6
0,2
0
220 420 620
longueur donde (nm)
1 500
1 000
500
0
a
b
s
o
r
b
a
n
c
e
f
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e
Fluoral-P
DDL
DDL (fluo.)
gauche : reprsentation schmatique de la raction du Fluoral-P avec le formaldhyde et proprits optiques du Fluoral-P et de la dihydrolutidine
(DDL). La photo reprsente le capteur deux stades diffrents dexposition au formaldhyde : de transparent, le capteur devient jaune, orange puis
marron fonc quand il est satur. droite : spectres dabsorption du Fluoral-P (spectre bleu), de la DDL (spectre rouge) et spectre de fluorescence de
la DDL lorsquelle se trouve claire 410 nm (spectre vert).
C
E
A
en couplant la spectromtrie de masse et la chro-
matographie liquide, leur permet de dtecter prci-
sment des bases anormales au sein dchantillons
dADN ayant t hydrolyss en monomres afin den
faciliter lanalyse. En matire de pollution atmo-
sphrique, il est dsormais possible de quantifier les
adduits lADN de molcules organiques, notam-
ment le benzo[a]pyrne, contaminant cancrigne
atmosphrique.
La capacit des cellules rparer lADN endommag
et liminer les portions dfectueuses du gnome
est bien connue. Nanmoins, cette approche analy-
tique a permis de rvler que deux bases oxydes,
produites en position vicinale dans la double-hlice,
sliminent mal. Enfin, des informations indites sur
la rparation des dommages, induits par lexposition
au rayonnement ultraviolet solaire, ont t obtenues
dans la peau humaine.
La chimie de synthse, de caractrisation ou analy-
tique reste un axe de recherche majeur en gno-
toxicologie. La collaboration, au sein de mmes
laboratoires, de chimistes et de biologistes a permis
aux quipes du CEA doffrir des informations origi-
nales la communaut scientifique.
> ric Ansoborlo
Dpartement radiochimie et procds
> Catherine Berthomieu
Institut de biologie environnementale
et biotechnologie (Ibeb)
CEA Centre de Cadarache
> Thierry Douki et Jean-Luc Ravanat
> Thu-Hoa Tran-Thi
> Claude Vidaud
Institut de biologie environnementale
et biotechnologie (Ibeb)
67 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
avec lintgration de ces processus dans un modle
quil deviendra alors possible de prdire, avec une
meilleure confiance, la migration des contaminants
dans la gosphre mais aussi dvaluer leur impact sur
lenvironnement.
Un milieu naturel htrogne
et complexe
Le milieu naturel ressemble un milieu poreux dont la
complexit tient trois raisons principales :
la nature et la diversit des phases (minraux, vg-

taux, micro-organismes) qui le composent ;
lhtrognit granulaire ;
lorganisation texturale de ce milieu.

Cette organisation savre dautant plus complexe que
les chercheurs travaillent en environnement de surface
sur des sols soumis aux phnomnes de bioturbation
et aux milieux racinaires ou sur des sols marqus par
une empreinte dactivit humaine (sols urbains, friches
industrielles...). cette complexit vient sajouter
la variabilit naturelle des conditions hydriques du
milieu lie ses conditions hydrogologiques et la
pluviomtrie.
Chimie en solution
Une fois relchs dans lenvironnement, les radio-
nuclides et autres contaminants se combinent avec
dautres espces chimiques naturellement prsentes
dans cet environnement. La mobilit des radiolments
dans la gosphre et leur interaction avec les surfaces
minrales ou organiques dpendent fondamentalement
de leur forme chimique en solution. Parmi les espces
Chimie et migration
Aujourdhui, le contrle des activits industrielles et de leur impact sur lenvironnement,
mais aussi lacceptabilit des diffrents choix de socit en matire de dveloppement
industriel et de gestion des dchets, exigent une connaissance toujours plus fine des
processus pilotant le devenir des contaminants dans lenvironnement. Les tudes menes
par les chercheurs du CEA contribuent fortement lacquisition de donnes exprimentales
et leur intgration au sein de diffrents modles de migration.
D
sormais, les diffrentes rglementations rela-
tives la surveillance de lenvironnement et au
dveloppement durable, imposent aux industriels de
mettre en place un contrle strict de leurs installa-
tions et dlaborer des plans dassainissement capables
de pallier efficacement une contamination acciden-
telle. valuer limpact dune installation, en situation
nominale ou accidentelle suppose la mise en place
pralable doutils de modlisation capables dintgrer
la connaissance des diffrents processus contrlant la
migration des contaminants dans lenvironnement.
La mthode vaut galement en matire de gestion des
dchets nuclaires, notamment dans lhypothse dun
stockage en formation gologique profonde. En effet,
ct des recherches menes sur le conditionnement des
dchets et sur lvaluation des performances concer-
nant les matriaux de confinement, la connaissance
des processus pilotant le devenir des radionuclides
figure comme un enjeu majeur pour les chimistes. Et
pour cause : au regard des chelles de temps concernes,
cest--dire au del de 10 000 ans, ces radionuclides
seront librs dans la gosphre. Il appartient donc
aux chercheurs de construire des modles capables de
prdire le devenir de ces radionuclides et leur impact,
la fois sur lhomme et la biosphre et cela, sur des
chelles de temps inaccessibles lhomme.
Dans cette optique, le CEA apporte son soutien scien-
tifique et technique (laboration de programmes de
recherche, rponses des questions techniques...)
lAndra afin dvaluer les performances de confine-
ment de largilite du Callovo-Oxfordien, milieu pres-
senti pour linstallation dun futur lieu de stockage des
dchets ultimes.
Des processus coupls
La migration dun contaminant dans lenvironnement
intgre de nombreux champs scientifiques qui impo-
sent aux chercheurs de :
connatre la forme chimique (soluble ou particu-

laire) sous laquelle le contaminant est libr ;
comprendre le comportement chimique du conta-

minant en solution, notamment son interaction avec
les autres espces chimiques prsentes dans cette solu-
tion ou avec des phases htrognes solides comme les
mlanges de minraux ou des substances organiques ;
dterminer les proprits de transport du milieu

lui-mme dans lequel le contaminant sera dissmin.
la complexit de ces processus lmentaires, mis en jeu
lors des transferts de contaminants dans le milieu, une
difficult supplmentaire sajoute : pouvoir coupler ces
processus et ainsi parvenir une description plus fine et
la plus raliste possible des phnomnes observs. Cest
En vue des expriences
en laboratoire, la
prparation et la dcoupe
des chantillons sensibles
une perturbation
apporte par loxygne
de lair, doivent se faire
sous une enceinte place
sous atmosphre dazote.
La bote gants est ici
occupe par une scie
fil pour la dcoupe
dchantillons compacts.
P
.

S
t
r
o
p
p
a
/
C
E
A
68
c
o
n
c
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n
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s
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(
m
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k
g

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e

r
o
c
h
e
)
10
0
10
-4
10
-2
10
-6
10
-8
10
-10
10
-8
10
-6
10
-9
10
-7
10
-5
10
-4
Figure 1.
Courbe de rtention de Zn
++
sur un sdiment naturel. La rtention de Zn
++
sur un sdiment
constitu dun mlange de phases minrales (calcite, quartz, minraux argileux) est
reprsente ici par la seule contribution des minraux argileux. Les proprits de rtention
de ces phases avaient t caractrises au pralable et ont permis de construire un modle
reproduisant de faon satisfaisante les mesures de rtention faites sur le sdiment. La figure
fait apparatre en pointills les diffrents sites de rtention identifis sur les minraux
argileux. La somme de ces sites correspond la courbe en trait plein.
C
E
A
concentration de Zn dans la solution (mol/L)
frquentes dans le milieu naturel, se trouvent notam-
ment les ions carbonates, les sulfates, les acides orga-
niques issus de la dgradation de la matire organique,
ou des molcules organiques plus ou moins complexes
secrtes par les vgtaux (racines) et les champignons,
ainsi que les substances humiques (macromolcules
organiques intimement lies la matire minrale).
Dans le cas prcis de luranium VI
(1)
, sa complexation
avec les ions carbonates ou les acides organiques favo-
rise sa solubilisation dans le milieu et donc sa mobi-
lit. Dautres facteurs comptiteurs peuvent intervenir
sous contrle de lactivit bactrienne. Ainsi, certaines
bactries peuvent-elles rduire directement luranium
ou plus frquemment imposer des conditions physico-
chimiques favorables la rduction de luranium VI
en IV, ce qui a pour effet de limmobiliser sur place
sous forme de cristaux doxyde duranium (UO
2
). De
manire gnrale, le milieu naturel est le sige dune
multitude de ractions chimiques, plus ou moins
comptitrices, qui piloteront le devenir dun contami-
nant et ses possibilits de migration.
Pour satisfaire la connaissance de ces systmes complexes,
le Service dtude du comportement des radionuclides
(SECR) a dvelopp de nombreux outils analytiques
capables, la fois, de mesurer ces contaminants, mme
de faibles concentrations, mais aussi daccder leur
forme chimique. Les rsultats ainsi obtenus permettent
aux chercheurs denrichir et damliorer une base de
donnes thermodynamiques, rassemblant les connais-
sances sur les actinides et produits de fission, ncessaires
la modlisation de leur comportement dans lenviron-
nement. Cette base fonctionne sous lgide de lAgence
pour lnergie nuclaire (AEN).
Chimie aux interfaces
Ces contaminants, sous forme despces simples ou
complexes, interagissent avec les diffrentes surfaces
minrales en prsence, lesquelles peuvent dvelopper,
vis--vis des contaminants, dimportantes capacits
de rtention et ralentir leur migration dans le milieu
poreux. De faon gnrale, les minraux prsentent
une charge de surface (charge permanente et groupe-
ments chimiques ioniss), sige des ractions dadsorp-
tion dions. Les modles utiliss par le Laboratoire de
mesure et de modlisation de la migration de radionu-
clides (L3MR) pour dcrire ces ractions dadsorption
sappuient sur une compensation exacte des charges de
surface par les contre-ions. Lensemble form par la
surface minrale et les contre-ions est alors considr
comme lectriquement neutre. Le L3MR a contri-
bu depuis plus dune dizaine dannes acqurir les
proprits de rtention de ces phases minrales (carbo-
nates, oxydes, minraux argileux...) vis--vis de radio-
nuclides (uranium, amricium, curium, europium,
strontium, csium...) et dautres espces chimiques
courantes (hydrogne, sodium, potassium, calcium,
magnsium...). Avec des concentrations gnralement
plus leves que les radionuclides, celles-ci figurent en
comptiteurs majeurs pour ladsorption des radionu-
clides sur les surfaces minrales.
Grce aux rsultats obtenus, les chercheurs ont dve-
lopp des modles capables dintgrer lensemble de
ces proprits alimentant une base de donnes ther-
modynamiques. Les diffrentes phases minrales
figurent comme autant de briques lmentaires, dont
les proprits se trouvent dfinies dans cette base de
donnes. En associant ces briques lmentaires, il
devient alors possible de dcrire un ensemble plus
complexe, tel quun sol ou sdiment, et donc de prdire
le comportement dun contaminant dans ce milieu ce
que les chercheurs vrifient ensuite par des expriences
ralises en laboratoire. Il sagit l dun premier pas vers
llaboration dun modle applicable la migration de
contaminants dans des environnements naturels.
Ces diffrentes approches permettent notamment
didentifier les phnomnes dominants capables de
rguler la migration dun contaminant. Dans lexemple
de la contamination dun sdiment complexe de friche
industrielle par du zinc (figure 1), la capacit de rten-
tion du sdiment peut tre dcrite de faon satisfaisante
par la seule contribution des minraux argileux.
Transport des contaminants :
du laboratoire au site gologique
La migration des espces restes libres en solution
sopre ensuite dans le rseau poral du milieu golo-
gique. La vitesse de leur dplacement sera fonction
principalement des proprits texturales du matriau
et en particulier de sa porosit. Dans des milieux de
faible permabilit (sdiments indurs, roches...) o le
transport des espces est domin par le phnomne de
diffusion, la vitesse de migration dpend galement de
lencombrement de ces espces vis--vis du diamtre
des pores et de leur charge lectrique. Des espces
charges ngativement se trouvent repousses des
surfaces de pore, le plus souvent charges galement
ngativement, comme pour les minraux argileux. Ces
espces sont alors exclues dune partie de lespace poral
et diffusent moins rapidement que des espces non
charges. En revanche, les espces charges positive-
ment, fortement retenues sur les surfaces minrales,
migrent encore plus lentement.
Afin dtudier le comportement migratoire des
espces chimiques dans ces roches, le L3MR a mis en
(1) Luranium a quatre valences possibles (III, IV, V
et VI). Les valences IV et VI sont les plus rpandues dans
les environnements naturels et les minerais selon les
conditions doxydo-rduction existantes.
69 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
Couplage des processus
ou transport ractif
Une fois dtermins, les paramtres ncessaires la
description des processus chimiques, les proprits
physiques du milieu poreux (porosit) et les para-
mtres de transport (coefficient de diffusion) sont
intgrs dans des modles couplant les diffrents
processus chimiques au transport. En utilisant ce type
de modle, les chercheurs du L3MR ont pu simuler,
lchelle du laboratoire et dans des conditions bien
matrises, le profil de migration dun contaminant
lintrieur dun milieu poreux. Ces rsultats confor-
tent lapproche mene au L3MR, tant sur la caract-
risation des processus lmentaires que sur les choix
faits en matire de modlisation.
Au travers des expriences ralises, tant au L3MR
quen laboratoire souterrain, les chercheurs ont
pu valuer la capacit de prdiction des modles
place des expriences en laboratoire (voir encadr).
Confronts la complexit et la variabilit du milieu
naturel, les chercheurs y poursuivent ces investiga-
tions diffrentes chelles : depuis celle du centimtre
laide de cellules de diffusion, jusqu plusieurs
dcimtres dans des maquettes instrumentes. Des
dispositifs en colonne permettent de suivre, la fois,
la migration dun contaminant (radioactif ou non)
et dacqurir les proprits hydriques et physiques
du milieu tudi (figure 2). Il devient alors possible
de dterminer les proprits de transport, sous des
conditions hydriques varies (ce qui est le propre
des systmes naturels), puis de les intgrer dans des
modles de migration. Ainsi, dans le cadre de sa colla-
boration avec lAndra, le L3MR a contribu lim-
plantation dexpriences de migration directement
dans la formation gologique, au sein du Laboratoire
souterrain de Bure.
Les techniques de traage
Pour dterminer les proprits de migration
dlments chimiques, radioactifs ou non,
dans lenvironnement, les chercheurs font
largement appel aux techniques de traage.
Celles-ci reposent sur linjection dun
isotope stable, ou radioactif, naturellement
rare dans le milieu. Pour les tudes concer-
nant le stockage des dchets nuclaires,
les chercheurs privilgient les isotopes
radioactifs, facilement mesurables mme
de trs faibles concentrations. Cette carac-
tristique permet de pousser ltude de la
migration des diffrentes espces, mme
dans lenvironnement lointain de la source
de pollution, l o les concentrations sav-
rent extrmement faibles.
La cellule de diffusion, montre sur
le schma, figure parmi les techniques
pratiques par le Laboratoire de mesure
et modlisation de la migration des radio-
nuclides (L3MR) pour dterminer les
proprits de diffusion dun matriau
poreux compact les roches, par exemple.
Son principe consiste coller lchantillon,
ou linsrer, de manire tanche, dans un
corps cylindrique, en matriau inerte, en
le maintenant entre deux grilles poreuses,
au contact duquel arrive leau provenant de
deux rservoirs. La composition chimique
de leau de ces deux rservoirs doit appro-
cher au mieux celle de leau remplissant
les pores du milieu : il sagit dune condi-
tion indispensable la prservation des
proprits de lchantillon au cours dune
exprience dont il faut savoir quelle peut
durer de quelques mois plus dun an.
Ainsi, aprs une premire phase dqui-
libration chimique destine viter toute
volution du solide pendant lexprience,
lisotope, radioactif ou non, est inject dans
le rservoir dit amont de la cellule. Dans
lexprience de diffusion dite travers ,
lactivit de lisotope se mesure, au cours
du temps, dans le rservoir, la sortie de
lchantillon. Lajustement de la solution
de lquation de Fick, au cumul dactivit et
au flux diffusif surfacique mesurs, permet
de remonter aux proprits de diffusion du
traceur dans lchantillon.
Lorsque llment diffuse trop lente-
ment, ou se trouve fortement adsorb la
surface du solide, lchantillon est alors
extrait de la cellule, aprs une dure suffi-
sante, pour mesurer le profil de diffusion
du traceur dans la roche. Linformation
ainsi obtenue permet notamment de
remonter aux proprits de diffusion. Les
chercheurs utilisent diffrentes natures
de traceurs. Par exemple, leau tritie,
traceur inerte, permet de remonter aux
proprits physiques intrinsques du
milieu, cest--dire sa porosit et son
coefficient de diffusion effectif dans ce cas,
aucun processus chimique nentre en jeu.
Dautres lments, non inertes, peuvent
interagir avec les surfaces solides du milieu
comme certains cations qui sadsorbent
la surface de minraux argileux. Ainsi,
le comportement dun lment dpend
fortement de sa nature chimique. Les
techniques de traage sont aussi mises en
uvre sur des colonnes dans lesquelles
le passage du traceur peut tre mesur en
aval de la colonne (courbe de perce), ou
dans la colonne (profils), au cours du temps,
mais aussi dans le cadre dexpriences
insitu.
> Ccile Ferry
Dpartement de physico-chimie
pompe
chantillon
( 4 cm ; e 1 cm)
amont
C = C
O
C = O
aval
= D
e
C(x,t)
2
C(x,t)
t x
2
: facteur capacitif de lchantillon
C(x,t) : concentration de lisotope dans la solution interstitielle
D
e
: coefficient de diffusion effectif
Schma de principe dune cellule de diffusion dite travers . gauche : lchantillon est
pris en sandwich entre deux rservoirs dans lesquels on injecte le traceur (rservoir
en amont), et on mesure, dans le rservoir en aval, la quantit de traceur qui a travers
lchantillon au cours du temps. droite : injection de la solution de traage dans le rservoir
amont de cellules de diffusion.
P
.

S
t
r
o
p
p
a
/
C
E
A

(

d
r
o
i
t
e
)
70
Figure 2.
Colonne exprimentale BEETI (Banc dtude exprimentale du transport en insatur) remplie dun matriau granulaire (mlange de phases minrales,
sdiment ou sol) : la migration dun contaminant et les proprits physiques (porosit, teneur en eau) sont mesures laide de labsorption de rayons X dans
le matriau. Le gnrateur X se dplace tout le long de la colonne et permet dobtenir la teneur en eau et la concentration dun traceur sur toute la longueur
de la colonne, en fonction du temps.
le dispositif
gnrateur X
dichromatique
Profil de
concentration
dun traceur en
fonction du temps :
chacune des
couleurs reprsente
la concentration du
traceur en un point
donn de la colonne.
colonne avec
mlange
sable/argile
dtecteur
dichromatique
0,0
0
400
800
mm
0,1 0,2 0,3 0,4
porosit
teneur
en eau
de migration. Ainsi, dans les configurations o
les conditions exprimentales savrent stables et
bien matrises, les modles peuvent dsormais
reproduire les observations. Lapplication de ces
modles pour valuer la contamination des sites
pollus pose encore quelques difficults. En effet,
dans les environnements de surface, les conditions
savrent trs diffrentes, souvent mal dfinies
et variables dans le temps et lespace. Valider ces
modles appelle la mise en place dun suivi temporel
et spatial des paramtres de site (caractristiques
physico-chimiques du milieu, pluviomtrie...). Par
ailleurs, pour prendre en compte cette variabilit, les
modles doivent intgrer les cintiques des ractions
chimiques et biologiques susceptibles de se produire
dans le milieu. La mise en place dexprimentations
sur site destines valider les modles de migra-
tion ou ltude de cas rels permettra dacqurir les
connaissances ncessaires ltude de ces systmes
complexes et damliorer la capacit de prdiction
des modles de migration.
> Catherine Beaucaire
ETHERA : mesurer lair et le dpolluer avec un kit rapide, sensible, efficace
Particuliers sensibiliss la qualit de leur
habitat, personnes allergiques, person-
nels hospitaliers ou travaillant en zones
sensibles... la qualit de lair intrieur est
devenue un enjeu socital majeur. Face
cette prise de conscience et aux risques
long terme sur la sant (asthme, cancer...),
de nouvelles exigences rglementaires de
lair intrieur ont vu le jour. Ces dispositions
appelaient des solutions de mesure et de
traitement innovantes. Dans ce contexte, la
socit ETHERA dveloppe et commercialise
des kits de mesure et de dpollution capables
de simplifier le diagnostic, la surveillance et
llimination de la pollution chimique de lair
intrieur des btiments publics et privs.
Rapide, sensible, trs slective, lintrt de
cette technologie tient la simplicit de la
mesure optique directe qui supprime lexi-
gence des analyses en laboratoire, contrai-
gnantes et toujours trs coteuses. Son
succs repose sur un savoir-faire unique
en ingnierie des matriaux nanoporeux.
Synthtiss partir dun procd sol-gel,
ces matriaux pigent et concentrent les
polluants-cibles. Ensuite, en intgrant des
ractifs spcifiques, ces matriaux, initia-
lement transparents, changent de couleur
en fonction de la concentration du polluant.
Associs leurs lecteurs optiques, ils se
transforment en capteurs colorim-
triques. Disposant dune trs forte capacit
de capture des polluants, ces matriaux
permettent galement la ralisation, dans un
second temps, de systmes de dpollution.
court terme, ETHERA vise le march de la
mesure professionnelle des polluants de lair
intrieur dans les zones trs rglementes.
Ainsi propose-t-elle dj des dosimtres
portatifs individuels pour les travailleurs
du secteur hospitalier et des quipements
diagnostics pour les btiments publics. La
priorit vise mesurer le formaldhyde,
polluant le plus rpandu, mais de nouvelles
tudes devraient largir prochainement
loffre dautres gaz toxiques rglemente
tels le benzne ou la trichloramine. moyen
terme, ETHERA devrait proposer aux parti-
culiers proccups par la pollution de leur air
intrieur (moquettes, peintures, parquets...
rejetant des composs organiques volatils),
un kit colorimtrique capable de dtecter
simplement des polluants particulirement
toxiques mais qui sera galement dot dun
systme de dpollution.
La technologie ETHERA a t mise au point
dans un laboratoire commun CEA/CNRS du
mme nom.
> Yves Bigay
Prsident dETHERA
Badges dexposition intgrant les matriaux
nanoporeux.
E
T
H
E
R
A
t

(
h
e
u
r
e
s
)
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 -0,2
0
1
0
2
0
3
0
5
0
4
0
6
0
71 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
Analyses pour la sant et lenvironnement :
enjeux et perspectives
L
a chimie analytique se confronte
un dfi trs stimulant, celui de carac-
triser les espces prsentes dans len-
vironnement (eaux, sols, air) ou le milieu
biologique susceptible de les incorporer. Il
sagit dun pari ambitieux plusieurs titres :
dabord en raison du caractre complexe et
htrogne des milieux tudis mais aussi
parce que les lments chimiques dtects
(radioactifs ou non) se prsentent souvent
ltat dultra-traces (donc difficilement
reprables) et sous des formes physico-
chimiques extrmement varies. Les cher-
cheurs doivent ainsi identifier et quantifier les
lments prsents, mme de trs faibles
concentrations, par des techniques dana-
lyse, de prfrence in situ, mais galement
dterminer toutes les formes chimiques au
sein desquelles llment peut sengager.
Les chimistes nomment spciation , les
analyses dveloppes pour affiner leurs
connaissances sur ces formes qui dter-
minent la capacit des espces migrer
dans lenvironnement, leur biodisponibilit
et donc, au final, leur toxicit. Les enjeux de
cette spciation nont pas chapp lUnion
europenne qui a voulu inclure la connais-
sance de lensemble des formes chimiques
dans la directive europenne REACH
(1)
visant
protger les populations des risques indus-
triels lis la chimie.
Mthodologie de la spciation
La spciation associe diffrentes tech-
niques danalyse avec des codes de calcul
spcialement conus pour dterminer la
rpartition des formes chimiques partir de
la composition du milieu et des quilibres
physico-chimiques mis en jeu. La difficult
consiste prserver lintgrit structurelle
des diffrentes espces de manire les
identifier sans ambigut, les quantifier, voire
les cartographier. Deux catgories de tech-
niques analytiques complmentaires exis-
tent pour y parvenir.
Les techniques analytiques directes
Celles-ci permettent de travailler imm-
diatement sur un chantillon sans aucune
prparation particulire pralable comme
avec les techniques spectroscopiques ou la
spectromtrie de masse.
La spectroscopie laser rsolution tempo-

relle (SLRT), appele aussi fluorescence
laser rsolue en temps, se prsente comme
une technique particulirement approprie
pour sonder lenvironnement immdiat de
lion. Non-intrusif parce quil utilise exclu-
sivement des photons, ce procd exploite
les proprits de fluorescence de certains
lments, notamment les modifications de
cette fluorescence lies aux variations de
lenvironnement chimique de llment.
La SLRT a dmontr son efficacit pour
caractriser les espces et dterminer des
constantes de complexation (figure 1 et
encadr).
La rsonance magntique nuclaire (RMN)

se trouve plus particulirement ddie au
recueil dinformations sur la structure et la
stchiomtrie des complexes ainsi qu la
dtermination des constantes de complexa-
tion ; elle reste nanmoins une technique qui
pche par sa sensibilit parfois insuffisante.
La spectromtrie infrarouge (IR) sert

dterminer, par absorption molculaire
du rayonnement IR, la nature des liaisons
chimiques composant une molcule et donc
tablir des hypothses structurales. En
raison du caractre parfois trs complexe et
spcifique dun spectre IR, celui-ci constitue
une vritable carte didentit molculaire.
(1) Entre en vigueur le 1
er
juin 2007, la directive
europenne REACH (pour Registration,
Evaluation and Authorisation of Chemicals)
est un systme intgr denregistrement,
dvaluation, dautorisation et de restriction
des substances chimiques. Elle a pour objectif
damliorer la protection de la sant humaine
et de lenvironnement contre les risques que
peuvent poser les produits chimiques tout en
maintenant la comptitivit et en renforant
lesprit dinnovation de lindustrie chimique
europenne. Les exigences relatives la directive
REACH sont gres par une Agence europenne
des produits chimiques.
Appareil de spectrofluorimtrie laser
rsolution temporelle (SLRT), en bote gants.
C
E
A
C
E
A
Figure 1.
Spectres de fluorescence duranium (VI), obtenus par spectrofluorimtrie laser rsolution temporelle
(SLRT), dans 6 chantillons deaux naturelles de puits prlevs en Finlande o ces eaux taient
naturellement riches en uranium. Lanalyse des bandes dmission 465, 484, 505 et 526 nm confirme
la spciation, calcule laide de donnes thermodynamiques, de lU (VI) majoritairement sous forme
de complexes ternaires calcium-uranyl-carbonate.
longueur donde (nm)
450 480 510 460 490 520 540 470 500 530 550
i
n
t
e
n
s
i
t

d
e

f
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e
MMO B
72
du couplage de ces mthodes analytiques

avec des techniques de dtection dlments
par exemple, lICPMS (pour Inductively
Coupled Plasma Mass Spectrometry), ou de
molcules comme lESI-MS (pour Electro
Spray Ionization Mass Spectrometry). Grce
lICPMS, mthode danalyse lmentaire et
isotopique extrmement sensible, les cher-
cheurs peuvent dsormais dterminer la
spciation avec des concentrations pouvant
atteindre 10
12
mol.L
1
(figure 2) ; les dvelop-
pements actuels tendent donc au couplage
des diffrentes techniques sparatives avec
les spectromtries de masse organique
et inorganique seules capables de fournir
simultanment les deux types dinformation.
Il sagit dun procd particulirement int-
ressant, notamment pour sonder la fois le
mtal (inorganique) et le ligand (organique).
Lintrt de ces diffrentes techniques relve
de leur complmentarit dans la nature des
informations obtenues mais aussi dans la
gamme des concentrations accessibles.
Ainsi, grce un large panel de techniques
analytiques, les chercheurs peuvent dter-
miner, avec prcision, la spciation dun
lment dans les milieux naturels envi-
ronnementaux ou biologiques. Enfin, les
techniques dimagerie de haute rsolution,
bases sur lutilisation de faisceaux dions
ou du rayonnement synchrotron, viennent
complter cette palette de techniques dana-
lyse physico-chimiques avec pour objectif
dtablir la distribution des lments dans les
compartiments biologiques.
Techniques danalyse in situ
Restait encore saffranchir des diffrentes
tapes de prlvement, de conservation et de
traitement des chantillons tapes longues,
complexes et coteuses, susceptibles
dapporter des biais de mesure. Dans cette
optique, le Dpartement de physico-chimie
dveloppe de nombreux systmes innovants
ddis aux analyses in situ et en temps rel.
Ces systmes sappuient sur la spectroscopie
et sur lutilisation de lasers pour concevoir et
mettre en uvre des quipements robustes,
facilement transportables, avec des perfor-
mances proches de celles obtenues en
laboratoire. Sur la palette des rcents dve-
loppements en matire de caractrisation
des polluants figurent :
la CRDS (pour Cavity Ring Down

Spectroscopy), procd utilis pour
dceler les traces de gaz par spectro-
scopie dabsorption laser, utilisant des
diodes lasers. Grce cette technique,
illustre ci-aprs, compacte et robuste,
les chercheurs parviennent mesurer
La spectromtrie de diffusion Raman va

fournir les informations sur la structure
chimique et la composition molculaire dun
chantillon en le soumettant un rayon-
nement laser puis en analysant la lumire
ainsi diffuse. Il sagit dune mthode non
destructive complmentaire la spectro-
scopie infrarouge.
La spectromtrie dabsorption de rayons

ultraviolets et visibles repose, quant elle,
sur labsorption des radiations lumineuses
par la matire. Elle sapplique pour mesurer
des concentrations despces chimiques en
solution aqueuse ou autres.
Les techniques lectrochimiques, bases

sur les phnomnes doxydo-rduction se
produisant aux lectrodes remplissent deux
missions : dterminer la biodisponibilit des
lments puis tudier leurs complexes avec
des ligands organiques ou inorganiques.
La spectromtrie de masse consiste en un

ensemble de techniques danalyse capables
de dtecter et didentifier finement, soit des
lments (spectromtrie de masse inorga-
nique), soit des molcules (spectromtrie
de masse organique ou molculaire).
Dans ce cas, la caractrisation de la struc-
ture chimique des molcules sopre de
deux manires : ou par fragmentation, ou
en mesurant leur masse molculaire avec
une extrme prcision. La spectromtrie
de masse organique offre de nombreuses
combinaisons entre les diffrentes sources
dionisation et les diffrents analyseurs.
Grce la source lectro-spray (pour Electro
Spray Ionization/ESI), la plus frquemment
utilise, les chercheurs obtiennent, par
exemple, des ions multichargs, particuli-
rement intressants pour caractriser les
macromolcules.
Les techniques analytiques indirectes
Elles sappuient sur le couplage de tech-
niques sparatives (chromatographique ou
lectrocintique) et de dtection dlments.
Ce couplage rend possible la combinaison
de ltape de purification/sparation des
espces avec des techniques de dtection
extrmement sensibles.
Aujourdhui, les chercheurs tudient gale-
ment la spciation partir de microchan-
tillons, des niveaux de concentrations
extrmement faibles, dans des milieux
complexes, biologiques ou environnemen-
taux. Cette avance dcoule la fois :
des progrs raliss dans le domaine de

la nanochromatographie et de llectropho-
rse capillaire ; avec celle-ci, les chercheurs
peuvent sparer les espces chimiques en
fonction du rapport charge/taille, par migra-
tion diffrentielle, sous laction dun champ
lectrique ; ils peuvent ainsi sparer les
espces dun lment donn, selon leur tat
doxydation ou leur forme chimique, tout en
lui conservant son tat chimique initial ;
La complexation en quelques
mots et formules
Un lment chimique mtallique en solution dans leau et lectriquement charg
sentoure de molcules de charge oppose, quon appelle ligands, avec une force
(affinit) qui dpend de la nature des liaisons chimiques qui seront cres lors de
linteraction entre le cation mtallique et lanion. Quand laffinit nest pas trop forte, il
existe une succession dquilibres chimiques, fonction de la concentration en ligands,
qui tend lier de plus en plus de ligands. Par exemple, le plutonium pentavalent (PuO
2
+
),
en solution alcaline, tendra se lier avec des anions carbonates selon les quilibres
suivants :
PuO
2
+
+ CO
3
2
PuO
2
CO
3
+ CO
3
2
PuO
2
(CO
3
)
2
3
+ CO
3
2
PuO
2
(CO
3
)
3
5
.
Par exemple, selon la figure 2, on aura pH = 7,5 les quatre espces chimiques du
plutonium pentavalent simultanment prsentes en solution, des concentrations
relatives, diffrentes les unes par rapport aux autres : 5 % de PuO
2
+
et PuO
2
(CO
3
)
3
5
, 20 %
de PuO
2
(CO
3
)
2
3
et 70 % de PuO
2
CO
3
.
Couplage dun appareil dlectrophorse
capillaire EC ( gauche) avec lICPMS
(pour Inductively Coupled Plasma Mass
Spectrometry/ droite).
C
E
A
MMO B
73 CLEFS CEA - N 60 - T 2011
slectivement, et en temps rel, des traces
de petites molcules gazeuses comme le
monoxyde de carbone (CO), le sulfure dhy-
drogne (H
2
S), le mthane (CH
4
), lammoniac
(NH
3
), loxyde dazote (NO), le formaldhyde
(CH
2
O) et cela, sur des volumes de lordre
de 10 cm
3
, et avec des limites de dtection
infrieures 5.10
-11
mol.L
-1
. Originellement
ddie aux secteurs du nuclaire et de la
protection de lenvironnement, cette tech-
nique a trouv des dveloppements indits,
notamment en mdecine. En effet, ce type
danalyse, appliqu lair expir par un
patient, peut rvler la prsence de cellules
malignes dans le corps humain et donc
contribuer la dtection des cancers.
La spectroscopie dmission sur plasma

produit par laser (LIBS pour Laser Induced
Breakdown Spectroscopy) est un dispositif
initialement dvelopp pour effectuer des
analyses en milieu hostile par exemple,
lanalyse distance de matriaux radioactifs.
Il consiste focaliser un faisceau laser sur un
matriau pour vaporiser une faible quantit
de matire (infrieure au g) et crer ainsi
un microplasma. Ensuite, en se dsexcitant,
les atomes et les ions ainsi jects mettent
un spectre de rayons UV et visibles, constitu
de raies dont la longueur donde et lintensit
permettent didentifier et de quantifier les
lments prsents dans lchantillon. Il sagit
dun moyen particulirement efficace pour
lanalyse multi-lmentaire de tous les types
de matriaux et cela jusqu des concen-
trations de lordre de la partie par million
(ppm ou microgramme par gramme) pour les
lments les plus sensibles.
Les laboratoires sur puce , microsys-

tmes danalyse de faibles dimensions
(seulement quelques cm) dabord ddis la
biologie, notamment avec les biopuces pour
le diagnostic mdical, trouvent aujourdhui
de nouveaux dveloppements en matire
de protection de lenvironnement. Cette
avance vient de leur capacit intgrer les
diffrentes tapes de prparation (micro-
extraction) et de sparation (lectrochro-
matographie ou lectrophorse capillaire)
des constituants dans des microcanaux
de quelques dizaines de micromtres la
dtection sappuyant, quant elle, sur les
techniques spectromtriques (fluores-
cence, chimiluminescence, absorption des
rayons UV et visibles...) ou lectrochimiques.
Ces microsystmes savrent particuli-
rement efficaces pour lanalyse des traces
mtalliques et des polluants organiques.
Lexplication tient au fait que les capteurs
(chimiques, biologiques, optiques...) automa-
tisables permettent des analyses extrme-
ment rapides en cas de pollution accidentelle.
Il sagit de procds en plein essor dont les
chercheurs attendent un accs direct lana-
lyse de traces dans un milieu aussi complexe
que celui de lenvironnement.
Les mthodes dimmuno-analyse bases

sur lutilisation danticorps sappliquent
notamment la dtection et la quantifica-
tion de molcules biologiques avec lesquelles
elles vont former des complexes spcifiques.
Ces exemples non-exhaustifs de dvelop-
pement de techniques analytiques in situ
reprsentent vraisemblablement le futur
en matire de contrle et de surveillance de
lenvironnement. Actuellement, les efforts de
R&D se concentrent sur des systmes auto-
nomes, miniaturiss, plus rapides, sensibles
et slectifs, destins aux mesures absolues
et relatives, capables dassurer le suivi des
variations spatio-temporelles.
> Frdric Chartier
> Jean Aupiais
Dpartement analyse, surveillance,
environnement
Direction des applications militaires
CEA Centre DAM Ile-de-France
Figure 2.
Relation entre la vitesse v (exprime en centimtre par seconde) de lion plutonium ( ) dtecte
par EC-ICPMS (axe y, gauche) pour un pH de la solution variant de 5 12 (axe x) et la proportion
relative des diffrentes espces carbonates (rose vif pour le PuO2
+
, bleu pour le PuO2CO3
-
, vert
pour le PuO2(CO3)2
3-
et rose saumon pour le PuO2(CO3)3
5-
du plutonium pentavalent selon le mme pH
(axe y, droite). Les espces carbonates du plutonium PuO2
+

sont les espces les plus probables
dans les eaux de surface.
5 9
pH
v

(
c
m
.
s
-
1
)
7 11 6 10 8 12
0
-0,05
-0,03
-0,01
0,01
0,03
-0,04
-0,02
0,00
0,02
0,04
60
20
80
40
100
PuO
2
(CO
3
)
3
5
PuO
2
+

PuO
2
CO
3

PuO
2
(CO
3
)
2
3
Appareil embarqu de CRDS (pour Cavity Ring
Down Spectroscopy), ddi lanalyse in situ
de polluants gazeux. Il sagit dun systme
dvelopp par le Dpartement de
physico-chimie (DPC) situ sur le centre
du CEA de Saclay, en collaboration avec
luniversit Joseph Fourier de Grenoble.
C
E
A
Systme LIBS (pour Laser Induced Breakdown
Spectroscopy) fibres optiques pour lanalyse
des lments, commercialis par la Start-up
IVEA du CEA.
C
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A
C
E
A

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CLEFS CEA - N 60 - T 2011 42

CLEFS CEA - N 60 - T 2011

une entit dite contrastante, lorigine de limage

une entit dite de ciblage, permettant au traceur,

LIRM, base sur le phnomne de la rsonance

Limagerie optique, technique complmentaire

ladministration, gnralement par voie intra-

la visualisation, en trois dimensions, de lacti-

le suivi et la cartographie du cheminement de ce

Stratgie pour chlater le cuivre (I) :

Stratgie de ciblage des cellules du foie :

une approche rationnelle, fonde sur des facteurs

une approche reposant sur la synthse de banque

sadapter au mode de dtection de linteraction utilis :

sadapter aux procds de micro, voire de nanostructu-

la diminution progressive du volume des chan-

lutilisation dun mme chantillon pour doser

La rsonance magntique nuclaire (RMN) na pas

La cristallographie aux rayons X, exigeant que la

la molcule mrite-t-elle considration ?

si oui, la molcule est-elle active ?

si oui encore, comment rationnaliser voire amliorer

la nature et la diversit des phases (minraux, vg-

lorganisation texturale de ce milieu.

connatre la forme chimique (soluble ou particu-

comprendre le comportement chimique du conta-

dterminer les proprits de transport du milieu

La spectroscopie laser rsolution tempo-

La rsonance magntique nuclaire (RMN)

La spectromtrie infrarouge (IR) sert

du couplage de ces mthodes analytiques

la CRDS (pour Cavity Ring Down

La spectromtrie de diffusion Raman va

La spectromtrie dabsorption de rayons

Les techniques lectrochimiques, bases

La spectromtrie de masse consiste en un

des progrs raliss dans le domaine de

La spectroscopie dmission sur plasma

Les laboratoires sur puce , microsys-

Les mthodes dimmuno-analyse bases

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