GD Bioqumica I Enzimas

1- O sabor adocicado do milho recm-colhido devido ao alto nvel de acar nos gros. O milho
comprado no mercado (vrios dias aps a colheita) no mais to doce, porque cerca de 50%
do acar livre do milho convertido em amido um dia aps a colheita. Para preservar o sabor
doce do milho fresco as espigas descascadas so mergulhadas em gua fervente por alguns
minutos (branqueamento) e ento resfriadas em gua fria. O milho tratado dessa maneira e
depois guardado em congelador mantm seu sabor adocicado. Qual a base bioqumica deste
procedimento?

2- A enzima urease aumenta a velocidade de hidrlise da uria em pH 8,0 e a 20C por um fator
de 10
14
. Se uma dada quantidade de urease pode hidrolisar completamente uma dada
quantidade de uria em 5min a 20C e pH 8,0, quanto levaria para que a mesma quantidade
de uria seja hidrolisada na ausncia de urease? Suponha que ambas as reaes ocorram em
meio estreis, de forma que a uria no possa ser atacada por microorganismos.

3- O stio ativo de uma enzima consiste geralmente de uma fenda ou bolsa na superfcie da
mesma e na superfcie das paredes desta fenda esto as cadeias laterais dos aminocidos
necessrias para ligar o substrato e catalisar sua transformao qumica. A carboxipeptidase
com uma nica cadeia de 307 aminocidos uma enzima que remove em seqncia o resduo
C-terminal de substratos peptdicos. Os dois grupos catalticos essenciais no stio ativo so
fornecidos por Arg
145
e Glu
270
.
a) Se a cadeia de carboxipeptidase for uma -hlice perfeita, qual a distncia (em
nanmetros) entre Arg
145
e Glu
270
.
b) Explique como esses dois aminocidos, to distantes na seqncia primria, podem
catalisar uma reao que ocorre no espao de poucos dcimos de nanmetro.
c) Se apenas esses dois grupos catalticos esto envolvidos no mecanismo de hidrlise, por
que necessrio que a enzima contenha um nmero to grande de resduos de
aminocidos?

4- A enzima desidrogenase lctica de msculo catalisa a reao:




NADH e NAD
+
so, respectivamente, as formas reduzida e oxidada da coenzima NAD. Em
contraste com aquelas do NAD
+
, solues de NADH absorvem luz em 340nm. Esta
propriedade empregada na determinao da concentrao de NADH em soluo, pela
medida em um espectrofotmetro da quantidade de luz absorvida em 340nm pela soluo.
Explique como essas propriedades do NADH podem ser usadas para a montagem de um
ensaio quantitativo da desidrogenase lctica.


5- Quando uma soluo de enzima aquecida, ocorre uma progressiva perda da atividade
cataltica com o tempo. Esta inativao o resultado do desenovelamento da molcula da
enzima nativa para uma conformao enrolada ao acaso, devido ao aumento da energia
trmica das molculas de enzima. Uma soluo de hexoquinase incubada a 45C perde 50%
de sua atividade em 12min, mas quando a hexoquinase incubada a 45C na presena de
grandes concentraes de um dos substratos, ela perde apenas 3% de sua atividade aps o
mesmo perodo de tempo. Explique porque a desnaturao da hexoquinase retardada na
presena de um dos seus substratos.

6- - Suponha que uma enzima mutante se ligue a um substrato 100 vezes mais firmemente do
que a enzima nativa. Qual o efeito desta mutao na velocidade de catlise, se a ligao do
estado de transio no for afetada?


7- Demonstre, atravs de desenhos ou esquemas, o mecanismo de ao de um modulador
positivo sobre uma enzima alostrica.


8- Anticorpos so protenas que tem a capacidade de se ligar especificamente determinada
molcula denominada antgeno. A inoculao no organismo de um antgeno induz a formao
de anticorpos especficos contra esta substncia. Com os conhecimentos atuais de
enzimologia foi possvel vislumbrar a possibilidade de fazer com que determinados anticorpos
funcionassem como enzimas. Tais anticorpos so denominados anticorpos catalticos e
aceleram a velocidade de reaes qumicas para as quais foram desenhados.Se voc
necessitasse desenvolver um anticorpo cataltico que acelerasse a velocidade da reao
abaixo, que substncia voc utilizaria como antgeno para imunizar um animal? Justifique sua
reposta.


A B

9- Descreva quais os mecanismos envolvidos na reduo do G de transio em reaes
catalisadas por enzimas.

10- Qual a relao entre enzimas e equilbrio e velocidade de uma reao?



11 - Embora existam mtodos grficos para a determinao acurada dos valores de V
mx
e de K
m

de uma reao catalisada enzimaticamente, esses valores podem ser determinados rapidamente a
partir das velocidades iniciais obtidas em concentraes crescentes do substrato. Usando as
definies de K
m
e V
mx
estime, utilizando a equao de Michaellis-Menten, os valores aproximados
destas constantes para a reao enzimtica que fornece os seguintes resultados:

[S](
M
) Vo (
M
/min)

2,5 x 10
-6
28
4,0 x 10
-6
40
1 x 10
-5
70
2 x 10
-5
95
4 x 10
-5
112
1 x 10
-4
128


2 - Os dados experimentais abaixo foram coletados durante um estudo da atividade cataltica de
uma peptidase intestinal capaz de hidrolisar o peptdio glicilglicina:

Glicilglicina + H
2
O 2 glicina

[S](m
M
) Produto formado (mol/min)
1,5 0,21
2,0 0,24
3,0 0,28
4,0 0,33
8,0 0,40
16,0 0,45

A partir destes dados determine, por anlise grfica, os valores de K
m
e de V
mx
para esta
preparao de enzima e seu substrato.

3 - O soro humano contm uma classe de enzimas conhecidas como fosfatases cidas, que
hidrolisam steres fosfricos biolgicos em condies levemente cidas (pH 5,0):

O
-
O
-


ROPO
-
+ H
2
O > ROH + HOPO
-


O O

As fosfatases cidas so produzidas pelos eritrcitos, pelo fgado, rim, bao e glndula prosttica.
Do ponto de vista clnico, a enzima prosttica a mais importante, pois sua concentrao
aumentada no sangue , freqentemente, indicao de cncer da prstata. A fosfatase da prstata
fortemente inibida pelo on tartarato, enquanto as fosfatases de outros tecidos no so inibidas.
Como esta informao pode ser usada no estabelecimento de um mtodo para dosagem da
atividade da fosfatase cida da prstata no soro sangneo humano?

4- Baseado na tabela abaixo responder:

a) K
M
e Vmax na presena e ausncia de inibidor
b) Que tipo de inibidor este? Justifique.

[S] Velocidade (moles/min)
Sem Inibidor Com Inibidor
0.3 x 10
-5
M 10.4 4.1
0.5 x 10
-5
M 14.5 6.4
1.0 x 10
-5
M 22.5 11.3
3.0 x 10
-5
M 33.8 22.6
9.0 x 10
-5
M 40.5 33.8