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I)
OBJETIVOS
Tener conocimiento del Uso de las cmaras neubawer
Identificar los procedimientos para el montaje de la cmara neubawer
Conocer las frmulas para el recuento
II)
REVICIN BIBLIOGRFICA
Cmara de Neubauer
La cmara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biologa para
realizar el recuento de clulas en un medio lquido, que puede ser un cultivo celular,
sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc. Adems las cmaras de
recuento sirven para contar bacterias, esperma y esporas de hongo.
Reticulo Neubauer
En la retcula central, la cmara de Neubauer tiene un
cuadrado primario que contiene nueve cuadrados
secundarios, cada uno de ellos dividido a su vez en 16
cuadrados terciarios. El cuadrado secundario central
contiene no 16, sino 25 cuadrados, cada uno de ellos
dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los
bordes de este cuadrado central se cuentan los
hemates, utilizando slo los cuadrados de los bordes
del terciario central y uno de los centrales. En los
secundarios de los bordes superiores e inferiores de la cmara se hace el recuento
leucocitario.
EL PRINCIPIO DE CONSTRUCCIN
Todas las cmaras de recuento
muestran el mismo principio de
Construccin.
Dentro de una rectangular placa de
vidrio ptico especial del tamao de un
portaobjetos se encuentran en el tercio medio cuatro ranuras longitudinales, que
son paralelos a los laterales cortos.
Las dos grandes superficies laterales no estn tratadas y sirven para la rotulacin.
El soporte central y los dos soportes exteriores estn planamente esmerilados y
pulidos. La superficie del soporte central es un poquito ms baja que la de los dos
soportes exteriores. Los retculos de recuento estn grabadas en el soporte central
(fondo de la cmara).
Cuando se coloca un cubre- objetos sobre los soportes exteriores,
espacio capilar entre la cara inferior
del cubreobjetos y el soporte central
de la cmara de recuento.
se
crea
un
Adems, se diferencia:
El modelo normal: el retculo de recuento est grabado directamente en el vidrio.
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El modelo de lneas claras: primero se recubre el fondo de la cmara con metal y luego
el retculo de recuento est grabado en esta capa de metal.
Identificacin:
En las dos superficies laterales, no tratadas, estn indicadas las siguientes
informaciones:
El sistema del retculo
El nombre y la marca registrada de Marienfeld Superior
La profundidad de la cmara en milmetros
La superficie del cuadrado ms pequeo en mm2
FABRICACIN Y EXPLICACIONES DE CALIDAD:
Las cmaras de recuento son aparatos de precisin e instrumentos in-vitro
diagnosticos. Se utilizan principalmente en laboratorios mdicos. Por eso un cmara
recuento que es aplicada o distribuida en la Union Europea tiene que ser aprobada y
marcada con el simbolo CE.
Todas las cmaras de recuento vendidas por la empresa Marienfeld se fabrican de
acuerdo a los requisitos de la Ordenanza de Verificacin alemana y la norma DIN.
Fabricacin de cmaras de recuento de sangre:
La fabricacn slamente se describe brevemente. Se compone de diferentes pasos
parciales, controles intermediarios y un final control de calidad.
El campo central (el fondo de la cmara) y los dos campos exteriores son esmerilados y
pulidos. Hay que prestar especial atencin que estas superficies quedan
absolutamente planas y la profundidad exacta. Los requerimientos estn fijados en
la norma DIN 12874. El campo central est bajado segn la divisin del respectivo
sistema (por ejemplo Neubauer 0,1 mm). Se fabrican varias profundidades estandar y
especiales (p.ej. 0,2; 0,5; 0,01 y 0,02 mm).
Despus de estos pasos se graba la divisin (del retculo en cuestin) en el campo
central y seguido se realizan los procesos de impresin y secado al horno. Un contrl
final muy rgido que cumple con las exigencias de las normas DIN y la Oficina alemana
de Contraste termina la fabricacin.
Exigencias al control de calidad:
Las diferencias lmites segn la norma DIN 12847:
La profundidad de la cmara en la zona del retculo 2 % del valor nominal las distancias
inferiores a 0,4 mm entre las lneas del retculo 2 m
Las distancias superiores a 0,4 mm entre las lneas del retculo 0,5 % del valor nominal
los ngulos de la divisin del retculo 1 grado
La anchura de las lneas de divisin no debe de ser superior a 5 m
La tolerancia de planeidad, segn DIN 7184, parte 1:
El fondo de la cmara en la zona del retculo de recuento 2 m la superficie de apoyo 2
m las lminas cubreobjetos 3m (segn DIN 58884)
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III)
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Existe una convencin por la cual si las clulas tocan el lmite superior o el lmite
izquierdo del cuadro, deben contabilizarse, pero no se contabilizan si tocan el lmite
inferior o el lmite derecho.
En caso de que la concentracin celular sea muy alta, y sea fcil perderse en el recuento,
se suele utilizar un orden de conteo en forma de zig-zag, como el descrito en la Fig.7
6. Anotar en una hoja de resultados la cantidad de clulas contadas en el primer
cuadro.
7. Repetir el proceso para el resto de los cuadros que deseamos contar, anotando
el resultado de cada uno de ellos. Cuantos ms cuadros contemos, ms
precisin obtendremos en nuestra medida.
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El nmero de clulas es la suma de todas las clulas contadas en todos los cuadros.
El volumen es el volumen total de todos los cuadros donde hemos hecho el recuento.
Como el volumen de 1 cuadro grande es:
0,1 cm x 0,1 cm = 0,01 cm2 de superficie
0,01 cm2 * 0,1 mm (profundidad) =
0,01 cm2 * 0,01 cm = 0,0001 cm3 = 0,0001 ml
La frmula para recuento con cuadros grandes en cmara de Neubauer
Ejemplo:
Para una dilucin de 1: 10. Dilucin = 0,1
Para una dilucin de 1: 100, Dilucin = 0,01
Error
Errores de hasta 20% y 30% son comunes con este mtodo de recuento debido al
pipeteo, a los errores estadsticos por ser la muestra poco representativa, errores del
volumen de muestra realmente introducido en la cmara, etc.
Sin embargo, el hematocitmetro sigue uno de los mtodos ms ampliamente utilizados
en los laboratorios de todo el mundo.
Para acceder a un anlisis detallado del error que se est cometiendo en un recuento
determinado acceda a:
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IV)
CONCLUSIONES
El conteo en cmara es efectivo, siempre y cuando se realice con una muestra, para no
realizar este conteo con muchas muestras de concentracin desconocida podemos
valernos de una curva patrn, leyendo muestras ya contabilizadas en un
espectrofotmetro, as al leer Abs. De una mezcla podemos determinar la concentracin
por interpolacin en la curva patrn. Al obtener diferentes muestras en relacin al tiempo
con las que construimos la curva patrn tambin calcular la velocidad de reproduccin y
as utilizar los M.O. en procesos estandarizados. La velocidad de produccin de M.O.
depender siempre del sustrato, pero siempre llegar a una velocidad mxima como
explica el modelo de Michaelis-Menten
V)
BIBLIOGRAFIAS
1. Uso de las cmaras de recuento (Neubauer improved o ...
insilico.ehu.es/camara_recuento/
3.
5.
7.
pg. 10