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Departament de Biotecnologia
Figura 1.1.: Representacin de los principales fila recogidos en cada uno de los cinco reinos
del libro de Margulis (1982), segn una modificacin nuestra (De Joaqun De Juan, De qu
estn hechos los organismos, Universidad de Alicante, 1999).
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Caractersticas
Importancia
EUBACTERIA
Staphylococcus aureus
Oportunista.
Produce
fornculos
y
exotoxinas en los alimentos
Causa amigdalitis, otitis, fiebre reumtica
Produce meningitis y neumona
Su exotoxina acta sobre el Sistema
Nervioso y produce el ttanos
En el suelo. Su potente toxina, acta en el
sistema Nervioso y causa el botulismo
Produce la gonorrea
Flora intestinal normal. Pueden producir
diarreas,
infecciones
urinarias
y
meningitis
Producen fiebre tifoidea, intoxicaciones
alimentaras, etc.
Produce infecciones de las vas
respiratorias, otitis, meningitis,
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae
Clostridium tetani
Clostridium botulinum
Neisseria gonorrhoeae
Escherichia coli
Salmonella
Bacilos. Gram-
Haemofilus influenzae
RICKETTSIAS
Ricktesia rickttesii
ESPIROQUETAS
Treponema pallidium
ACTINOMICETOS
Mycobacterium
tuberculosis
Mycobacterium leprae
CLAMIDIAS
Chlamydia trachomatis
Causan la sfilis
Causante de la tuberculosis
Causante de la lepra
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Figura 2.2.: Tipos de clulas bacterianas. (A) Bacilos, de morfologa alargada; (B) Cocos,
cuya forma es esfrica; (C) Espirilos, que como su nombre indica recuerdan a un sacacorchos
y (D), ejemplos de bacterias muy pequeas con morfologa cocacea y espirilar. (De Alberts et
al., Introduccin a la Biologa Celular, Editorial Mdica Panamericana, 2006.)
Figura 2.3.: Tipos de cocos. (A) Mediante divisin en un solo plano: a) Diplococos y
estreptococos; (B) Divisin en dos planos: ttradas; (C) Divisin en tres planos: a) Sarcinas y
b) Estafilococos.
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B) Objetivo
Observar directamente, con el microscopio ptico, clulas procariotas
para percatarse de su pequeo tamao y de sus diferentes formas, as como
introducirse en el concepto de fijacin y en el uso de colorantes para aumentar
el contraste de las clulas por medios qumicos.
C) Material necesario
El siguiente material estar a tu disposicin en tu puesto de trabajo, en
la bancada del laboratorio de prcticas:
(1) Microscopio
(2) Mechero de alcohol
(3) Portaobjetos
(4) Cubreobjetos
(5) Aguja enmangada o asa de platino (asa microbiolgica) o una
pipeta Pasteur.
(6) Frasco lavador
(7) Solucin de azul de metileno al 1%
(8) Solucin de fucsina bsica
(9) Solucin de nigrosina
(9) Pinzas para portaobjetos
(10) Yogurt natural
D) Fundamento
EL yogurt es leche que ha sufrido la fermentacin lctica por accin de
dos bacterias (Figura 2.4.), el Lactobacillus (bacillus lacticus y bulgaricus) y el
Streptococcus lacti, por ello, ambas bacterias son abundantes en este
material.
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Figura 2.4.: Bacterias del yogurt. (A) Extensin de yogurt donde se pone de manifiesto la
presencia de bacillus lacticus con su tpica morfologa bacilar. (B) Aspecto de lactobacilus
observados con el microscopio electrnico de barrido. (C) Extensin de yogurt donde se pone
de manifiesto la presencia de Streptococcus lacti formando parejas (diplococos) o cadenas
(estreptococos). Las extensiones (A y C) estn teidas con azul de metileno.
Figura 2.5.: Aspecto ultraestructural de bacterias anlogas al bacillus lacticus observado con
microscopio electrnico de transmisin. A la izquierda, esquema explicativo de lo observado en
la figura de la derecha. Obsrvese que el material electrodenso del citoplasma se corresponde
con acumulos de ribosomas, mientras que la zona clara del interior es el lugar donde se ubica
el DNA. (Lynn Margulis y Karlene V. Schwartz, Cinco reinos, Labor, 1985).
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E) Procedimiento
a) Extensin del material:
Limpiar bien un portaobjetos (Figura 2.6.A.)
Con la ayuda de una pipeta Pasteur coloca una gota de agua
destilada sobre el porta limpio (Figura 2.6.B.)
Esteriliza el asa microbiolgica a la llama del mechero (Figura
2.6.C.) calentndola hasta que se ponga al rojo vivo.
Con el asa esterilizada (u otro objeto: palillo de dientes, pinza,
etc.) y tras haberla dejado enfriar unos segundos, toma una
pequea cantidad de yogurt y colcala sobre la gota de agua
destilada, a continuacin extiende suavemente la gota con el
material sobre toda la superficie del porta (Figura 2.6.D.).
b) Fijacin del material:
Sujeta el porta por uno de sus extremos y realizando una ligera
oscilacin, psalo suavemente sobre la llama del mechero, por la cara opuesta
a la de la extensin, hasta que se seque el material, procurando que el calor
no sea excesivo (Figura 2.6.E.). Con este proceder las bacterias mueren, se
altera la permeabilidad de sus membranas y el colorante pasa mucho mejor a
su interior. Tambin se las puede dejar secar al aire, bien dejndolas sobre la
bancada, durante algunos minutos, o bien con un secador de aire.
c) Tincin de las bacterias:
Coloca el porta, en el soporte y cbrelo con el colorante (Figura
2.6.J.) durante 3-5 minutos, si se tie con azul de metileno, o
durante 2-3 minutos si se utiliza fucsina bsica.
Lava la preparacin con agua destilada (Figura 2.6.F.) para
arrastrar el exceso de colorante y scala con papel de filtro
(Figura 2.5.K.), al aire o con un chorro de aire caliente.
Utilizando como colorante nigrosina, se puede obtener una
tincin negativa. Para ello coloca un poco de yogurt y un poco
de nigrosina en un extremo del portaobjetos, mezclando y
homogeneizando el material y el colorante.
Una vez homognea la mezcla, realiza un frotis con la ayuda
de otro portaobjetos (ver prctica sobre el frotis). El resto es
igual.
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Las levaduras (Figura 3.1.) tienen gran inters para la vida del hombre
tanto por su participacin en mltiples procesos de naturaleza industrial y
econmica, como la fermentacin del pan, de la cerveza y del vino; la sntesis
de algunas vitaminas, grasas y protenas, a partir de azucares sencillos y
nitrgeno amoniacal, as como en la produccin de alteraciones patolgicas en
los organismos animales (las candidiasis producidas por la Candida albicans,
en la piel y mucosas del hombre) como vegetales (la Nematospora coryli
puede infectar y destruir frutas y verduras).
B) Objetivo:
Observar directamente, con el microscopio ptico, clulas eucariotas del
reino hongos.
C) Material necesario
El siguiente material estar a tu disposicin en tu puesto de trabajo, en
la bancada del laboratorio de prcticas:
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(1) Microscopio
(2) Mechero de alcohol
(3) Portaobjetos
(4) Cubreobjetos
5) Aguja enmangada o asa de platino (asa microbiolgica) o una
pipeta Pasteur.
(6) Frasco lavador
(7) Solucin de azul de metileno al 1%
(8) Pinzas para portaobjetos
(9) Frascos con soluciones de levadura
D) Fundamento
Las levaduras pueden buscarse tanto en su hbitat natural (flores,
frutas, etc.) o comprarla en aquellos establecimientos donde se vende para la
fabricacin del pan o la cerveza. Se trata de levaduras que pertenecen al
genero Saccharomyces. En las farmacias se pueden comprar cpsulas (UltraLevura) con la cepa Saccharomyces boulardii, donde se expenden para
administrarla a pacientes tratados con antibiticos, para subsanar los
trastornos debidos a la destruccin de la flora intestinal
E) Procedimiento
a) Preparacin de la levadura:
Para realizar una solucin acuosa de levadura, pon agua con azcar en
un tubo de ensayo (Figura 2.6.H.). Agrgale un poco de levadura del comercio
y agitalo hasta que quede totalmente disuelta y con un aspecto lechoso
homogneo. Reparte la solucin en dos tubos. Coloca uno de ellos en una
estufa a 37 grados durante 24 horas para que la levadura se divida por
gemacin (Figura 3.2.).
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4. OBSERVACION DE PROTOZOOS
Figura 4.1.: Diferentes tipos de protistas recogidos aqu bajo el nombre comn de protozoos.
(De http://www.pirx.com/droplet/).
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A) Consideraciones previas
El inters de esta prctica radica en que los protozoos son organismos
unicelulares eucariotas, muy abundantes en la naturaleza. Los podemos
encontrar tanto en medios acuosos (marinos o no) como en medios terrestres
hmedos y parasitando a otros organismos (Figura 4.1.).
Los protozoos a pesar de ser unicelulares presentan una gran
diversidad de formas y especies, con una estructura celular, a veces,
compleja. Ciliados, flagelados y rizpodos se pueden encontrar prcticamente
en cualquier muestra de agua. En las Figuras 4.2. y 4.3. se recogen algunos
de los tipos ms comunes.
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B) Objetivo:
Observar directamente, con el microscopio ptico, clulas eucariotas del
reino protista, concretamente protozoos.
C) Material necesario
El siguiente material estar a tu disposicin en tu puesto de trabajo, en
la bancada del laboratorio de prcticas:
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(1) Microscopio
(2) Mechero de alcohol
(3) Portaobjetos
(4) Cubreobjetos
(5) Aguja enmangada o asa de platino (asa microbiolgica) o
una pipeta Pasteur.
(6) Frasco lavador
(7) Solucin de azul de metileno al 1%
(8) Pinzas para portaobjetos
(9) Solucin con protozoos
D) Fundamento
Los protozoos pueden buscarse en su hbitat natural, es decir en
medios acuosos de agua dulce o salada. Por lo tanto es fcil obtener muestras
para su observacin al microscopio. El cultivo que vas a utilizar ha sido
preparado en nuestro laboratorio.
E) Procedimiento
a) Preparar el material:
Realiza una solucin acuosa con protozoos de diferentes tipos ("cultivo
mixto"). Para ello pon agua corriente en un frasco bien limpio y dentro unos
granos de trigo, arroz, o unas barritas de paja o de heno, dejndolo destapado
a la intemperie durante unas horas o un da. Al cabo de varios das se habrn
desarrollado varias especies de ciliados, sobre todo de flagelados.
b) Preparacin del material para su observacin:
b1) "In vivo":
Limpiar bien un portaobjetos (Figura 2.6.A.)
Con la ayuda de una pipeta Pasteur toma una gota de la solucin
de protozoos (Figura 2.6.H.) y ponla sobre el porta limpio (Figura
2.6.I.).
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5.2. Una vez realizadas las tcnicas para cada tipo celular, las
observar al microscopio ptico con detenimiento y bajo diferentes aumentos.
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7. ANEXO
CUADRO 7.1.: REINO MONERA (PROCARIOTAS)
(De Joaqun De Juan, De que estn hechos los organismos, Universidad de Alicante, 1999)
ETIMOLOGA:
Etimolgicamente la palabra monera, fue introducida por Ernst Haeckel y significa
solitaria. El termino hace referencia a los microorganismos pertenecientes a los grupos
Bacteria y Archaea de la clasificacin de Woese et al. (1990).
ORGANIZACIN:
Organizacin unicelular (clulas aisladas o formando colonias).
COMPONENTES:
DNA circular (genforo) y disperso en el citosol sin membrana nuclear y sin
cromosomas (estructuras con DNA ms protenas)
RNA y protenas sintetizados en el citosol
Sin organelas membranosas. Enzimas oxidativas o fotosintticas en la membrana
celular o en invaginaciones de la misma
Ausencia de citoesqueleto (microfilamentos de actina, microtubulos y filamentos
intermedios) aunque poseen molculas precursoras y similares a la actina G (la MreB) y a la
tubulina (la FtsZ) carecen de corrientes citoplsmicas y de endocitosis/exocitosis.
Presencia, a veces, de flagelos simples compuestos de la protena flagelina, pero no de
microtubulos como en las eucariotas.
FUNCIONES:
Anaerobios o aerobios
Grandes variaciones en las vas metablicas
Divisin celular directa, generalmente por fisin binaria. Al no tener microtubulos carecen
de centrolos y de mitosis.
Reproduccin sexual escasa. A veces transmisin del material gentico mediante
conjugacin
DISTRIBUCIN:
Ms de 5000 especies (faltan muchas ms por identificar).
Una cucharada de tierra tiene cerca de 1010 bacterias. En las encas pueden haber 109
bacterias/cm2
En nuestra boca pueden haber tantas bacterias como humanos existen y han existido
INTERS:
De gran inters para la salud, la agricultura, la industria (envasados, pasteurizacin, etc.),
aire que respiramos, etc.
Pueden ser beneficiosas pues producen antibiticos (estreptomicina, eritromicina,
cloromicetina, kanamicina, ), vitamina K, etc.
Tambin pueden ser perjudiciales cuando actan como agentes patgenos en enfermedades
infecciosas bacterianas.
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(De Joaqun De Juan, De que estn hechos los organismos, Universidad de Alicante, 1999)
ETIMOLOGA:
La palabra protista, fue introducida por Ernst Haeckel y significa el primero. Este termino
protista hace referencia a organismos unicelulares, por ello Copeland introdujo la expresin
protoctista para referirse a este reino por incluir en l desde el ms pequeo eucariota
unicelular hasta multicelulares (que no pluricelulares) de gran tamao como pueden ser los
quelpos, algas gigantes que alcanzan hasta 60 m.
ORGANIZACIN:
Sus clulas son eucariotas
La mayora son unicelulares, aunque pueden formar colonias, cenocitos y estructuras
multicelulares, pero no tejidos.
Engloba a los protozoos, algas uni y multicelulares, hongos acuticos undulipodiados
(flagelados), mixomicetos y laberintulomicetos.
No son animales pues los animales se desarrollan desde blstulas.
No son plantas pues las plantas se desarrollan a partir de un embrin.
COMPONENTES:
Ncleo bien delimitado con carioteca y cromosomas
Orgnulos membranosos (retculo endoplsmico, aparato de Golgi, mitocondrias,
cloroplastos, lisosomas, etc.)
Presencia de citoesqueleto (especialmente microfilamentos de actna y microtubulos.
Muchos tienen undulipodios con la formula 9+2 (9 pares de microtubulos perifricos y un par
central), en algn estadio de su ciclo.
En general:
- Presencia de cloroplastos y pared celular en algas y hongos acuticos o protistas
fungoides.
- Ausencia de pared celular y cloroplastos en protozoos.
FUNCIONES:
Algunos son fotoautrofos, otros heterotrofos.
Aerobios y con respiracin mitocondrial.
REPRODUCCIN:
Sexual o asexual dependiendo del tipo
DISTRIBUCIN:
Ms de 60.000 especies (200.000 existentes y extintas).
Vida acutica, en ambientes muy hmedos o parasitando organismos
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ETIMOLOGA:
La palabra hongo deriva de la latina fungus. Estos organismos fueron separados como
un reino a parte por Whittaker.
ORGANIZACIN:
Sus clulas son eucariotas
Se incluyen en este reino solo los hongos eucariotas que forman esporas y carecen de
undulipodios, en todos los estadios de su ciclo vital. Por tanto se excluyen, los hongos
acuticos undulipodiados (flagelados), mixomicetos y laberintulomicetos
Organizacin unicelular, aunque pueden formar colonias, cenocitos y estructuras
multicelulares, pero no tejidos.
Las hifas son su estructura bsica en muchos tipos. Una hifa es una formacin alargada
formada por clulas en hilera separadas por septos (apocitos) o sin separacin entre ellas
(cenocitos).
Las hifas se agrupan en masas vegetativas, los micelios.
En los extremos de las hifas se forman esporas vegetativas llamadas conidias que al
germinar darn nuevas hifas.
COMPONENTES:
Ncleo bien delimitado con carioteca y cromosomas. Sus clulas pueden tener ms de
un ncleo que pueden ser haploides o dicarioticos.
Orgnulos membranosos (retculo endoplsmico, aparato de Golgi, mitocondrias,
lisosomas, etc.).
Carecen de cloroplastos.
Poseen citoesqueleto (especialmente microfilamentos de actna y microtubulos. Carecen
de undulipodios
Poseen pared celular de quitina, dura y rgida.
FUNCIONES:
Son heterotrofos,.consiguen los nutrientes por absorcin
Casi todos son aerobios.
REPRODUCCIN:
Sexual por conjugacin entre clulas de hifas vecinas de signo opuesto
No tienen desarrollo embriolgico, las esporas dan directamente hifas o clulas
vegetativas independientes. Tambin pueden tener reproduccin asexual.
DISTRIBUCIN:
Se estima que existen unas 10.000 especies.
La mayora son terrestres aunque se conocen algunas especies marinas.
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ETIMOLOGA:
La palabra planta deriva del latn plantare y significa enterrar con la planta del pie.
La palabra vegetal deriva del latn vegetare y significa animar, vivificar.
La palabra metafta deriva de los trminos griegos meta, ms all, y fitos, planta, lo
que viene a significar planta superior.
ORGANIZACIN:
Son organismos pluricelulares constituidos por clulas especializadas que se renen
para formar tejidos.
COMPONENTES:
Sus clulas se caracterizan por poseer plstidos verdes o cloroplastos, as como una
pared celular de celulosa.
FUNCIONES:
Todos son auttrofos, concretamente fotoauttrofos.
REPRODUCCIN:
Poseen reproduccin sexual.
Se desarrollan a partir de embriones.
Alternan generaciones diploides con haploides.
DISTRIBUCIN:
Se estima que existen unas 500.000 especies.
La mayora son terrestres.
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ETIMOLOGA:
La palabra animal deriva del latn animal, animalis y significa dotado de alma, de
movimiento.
La palabra metazoo de los trminos griegos meta, ms all, y zoo, animal, lo que viene a
significar animal superior.
ORGANIZACIN:
Son organismos pluricelulares constituidos por clulas especializadas que se renen
para formar tejidos.
Sus clulas son diploides.
Pueden ser macroscpicos y microscpicos
COMPONENTES:
Su pluricelularidad se debe a la aparicin de especializaciones de su superficie
(desmosomas, gap junctions, znulas adherens, etc.) y molculas de adhesin celular
(CAM) as como macromolculas de la matriz extracelular.
FUNCIONES:
Son heterotrofos. La mayora se nutren por ingestin y poseen desarrollados
mecanismos de fagocitosis/exocitosis
REPRODUCCIN:
Poseen reproduccin sexual.
Desarrollo por anisogamia (unin de dos gametos haploides diferentes) para dar un
huevo o zigoto diploide.
La divisin del zigoto da lugar a la mrula y luego a la blstula. El estadio de blstula es
caracterstico de todos los animales.
Alternan generaciones diploides con haploides.
DISTRIBUCIN:
Se encuentran tanto en medio acutico como terrestre
Son aproximadamente unas 38.000 especies
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8. FUENTES DE INFORMACIN
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9. AUTOEVALUACIN