BIORREACTORES

PROCESS MONITORING AND CONTROL

PROCESS MONITORING AND CONTROL

Que parmetros controlar?

Temperatura
pH
Presin parcial de O2
Formacin de espuma

Temperature
Temperature is an important parameter of fermentation, since, a
deviation by a couple of degrees can diminish dramatically the
growth and biosynthesis
g
y
productivity.
y
The cultivation temperature is commonly monitored with an accuracy
not less than 0.5C.
The temperature in laboratory bioreactors is controlled by one of the
following ways:

A heater is located inside the bioreactor vessel, and cooling is

ensured by thin-wall pipes located in the upper cover, which are
connected with an electromagnetic valve with the cooling water.
water

Heating and cooling proceed in a thermostat, and this

p of a p
pump,
p, circulates through
g
thermostatted water,, with the help
the bioreactor jacket.

pH
pH control is based on the comparison of the adjusted "set point"
and pH real values.
Only sterilisable electrodes ("Mettler-Tolede" electrodes) are used.
The control of pH values is ensured with the help of peristaltic
pumps (silicone tubes are commonly used), correspondingly
metering out the acid and the alkali.
pH measurements should be accurate ( 0.02 pH units), since the
dynamics of pH values' changes provides valuable information on
the process kinetics.

pO2 (partial pressure of dissolved oxygen)

There are different pO2 control principles:
Varying the mixer
mixer's
s rotational speed n,
n assuming that pO2 ~ n.
n
Combining
C bi i the
th change
h
off the
th mixer's
i ' rotation
t ti speed
d n and
d the
th
amount of the inlet compressed air Q. It is assumed that pO2 ~
n, p
pO2 ~ Q.
Feeding up the substrate or its any component. It is assumed
that pO2 is proportional to the feeding up intensity.
intensity
Feeding up is normally realised with controlled peristaltic
pumps. This way is sometimes combined with the regulation of
th mixer's
the
i ' rotational
t ti
l speed
d n and
d the
th oxygen or air
i supply
l flow
fl
Q.

Foam
The appearance of foam is a very undesirable phenomenon
there is a risk to loose part of the fermentation broth
It is not p
possible
measurements.

to

perform
p

high-quality
g q
y

analyses
y

and

Elimination of foam
Additional metering of an antifoam (overdose can decrease dramatically
th mass exchange
the
h
parameters)
t
)

Mechanical metering of foam. (Special device installed in the bioreactor's

upper cover. If an intensive foaming begins, then the mechanical breaking of
foam will not help any more).

An optimal
p
solution is the combination of both the methods.
The application of Variant 1 is more widely used in laboratory
bioreactors.

Ej. Produccin de alcaloides monoterpenoindlicos con cultivos celulares de

Uncaria Tomentosa ua de gato en tanque agitado

Biorreactores para el cultivo de races

Bioreactor de lecho de goteo
con malla para inmovilizar a las races

Entrada de medio

Salida de aire

Malla de
inmovilizacin
Adicin de nutrientes

Aire

Reservorio

Aire

Bomba

Biorreactores para el cultivo de races

Bioreactor de lecho de niebla
(nutrient mist reactor)

Bomba
peristltica

Filtro de aire

Bomba de aire

Generador de niebla
Intensidad
On

Condensador
de niebla

Off

Controlador

Cmara
de cultivo

Biorreactor de lecho de niebla para cultivode races

The nutrient mist bioreactor (NMB) has proven to

h
have
d fi it advantages:
definite
d
t
low shear stress to the cultivated roots
high nutrient transfer rate due to a large mass
transfer area
rapid replenishment of nutrients
removal of toxic metabolites

Mist trickling reactor

A nutrient mist reactor is substantially the same as

aeroponic growth of plants as proposed by botanists

Growth of hairy roots in the 3 L

MTR on the 16th day

The oxygen uptake rate of hairy roots is not very high

However, it is important to maintain a sufficient PO2 in the reactor.

Biorreactores para cultivo de otros rganos

Para cultivo de rganos

MTB

Centaurium erythraea shoot culture in mist trickling bioreactor after 21 days.

Modelos para clulas inmovilizadas

Operacin de Biorreactores

1.Batch:
Son sistemas cerrados que se caracterizan por cambiar las
condiciones fisiolgicas y ambientales.
No hay entrada ni salida de medio de cultivo.

Operacin de Biorreactores

1. Batch alimentado:
Estos sistemas operan adicionando medio fresco,
fresco
pero sin remocin del existente.
Son muy tiles cuando se requiere una elevada
densidad celular en la etapa de iniciacin del
proceso que implica un alto consumo de nutrientes,
especialmente de fuente hidrocarbonada que suele
funcionar como sustrato limitante.

Variante del batch alimentado:

Draw-fill o semicontnuo:
Consiste en remover, al final de la operacin entre
un 80 y un 90 % del cultivo y reemplazarlo
p
por
p
medio fresco.

De esta manera puede eliminarse el perodo lag,

satisfacerse
sencillamente la necesidad de
contar
t con inculos
i l
d gran tamao
de
t
y a su vez
evitar la esterilizacin del reactor entre dos ciclos.

Operacin de Biorreactores
1. Continuo:

el caudal de entrada de medio fresco es igual al de salida de medio

utilizado.

Son utilizados
tili ados en cultivos
c lti os donde la velocidad
elocidad de crecimiento celular
cel lar es
constante por lo que existe un suministro constante de nutrientes o para
la remocin permanente de producto sobre todo en sistemas
inmovilizados.

Este tipo de operacin presenta grandes inconvenientes con respecto al

mantenimiento de las condiciones de asepsia del proceso, y se dificulta
debido a la tendencia a formar agregados de las clulas vegetales en
cultivo, la formacin de merengue y el lento crecimiento celular.

Para su buena aplicacin se requiere del diseo de sistemas que

permitan suplementar continuamente el medio de cultivo evitando la
remocin de las clulas y as minimizar lo que se denomina lavado del
cultivo.

Una variante es la Perfusin que implica la remocin y suministro de

medio dejando la biomasa ocluda en una malla.

Continuous Culture

Growth
Batch Culture

10

15

20

Time (days)

25

Remocin
de producto
in situ

Lquido-lquido:
Compuestos inmiscibles en agua, como solventes
orgnicos o lpidos (sistemas de dos fases agua-orgnico).
Ejemplos: migliol, hexadecano, dodecano.

Slido-lquido:
La segunda
g
fase es un material slido como resinas u otros
absorbentes. Generalmente resinas como XAD, RP18, etc.

Requerimientos:
- Autoclavables
- No txicos
- Fcil separacin del producto de inters
de la segunda
g
fase
- No modificacin del medio de cultivo
- Permanencia de las clulas en la fase acuosa

Adaptaciones para la extraccin in situ del producto

Diagrama de un tanque de agitacin mecnica

modificado p
para operar
p
con remocin in situ
del producto.
1: tanque;
2: malla de acero inoxidable p
para inmovilizar
races;
3: sensor de oxgeno;
4: malla acero inoxidable;
5: medidor DO; 6: agitador;
g
7: lana de vidrio;
8: resina XAD-2;
9: filtro de vidrio;
10: g
generador de aire;
11: condensador;
12: marco de la malla

Tomado de: Hairy Roots, Culture and Application, 1997.

Adaptaciones para la extraccin in situ del producto

Un bioreactor de agitacin por lquido

con loop externo

Ejemplo integrado

Ejemplo integrado

Produccin de shikonina por suspensiones celulares

de Lithospermum erythrorhizon

Shikonina
Yamasaki Plant Photo Gallery

Planta entera
- La extraccin se realiza en plantas de aproximadamente 3 aos.

Suspensiones celulares
- 2,4-D estimula el crecimiento pero no la produccin.
- Las bajas concentraciones de nitrgeno y la elicitacin inducen
la produccin de shikonina
shikonina.
- Se utilizan fermentadores de agitacin mecnica y tambor rotatorio.
- La productividad de shikonina es 840 veces superior a la de planta entera.

Proceso para la produccin de shikonina a partir de clulas

de Lithospermum
p
erythrorhizon
y
por Mitsui Petrochemical Ind.
p

Tomado de: Scraag. Plant Biotechnology, 1992.

Secuencia en la
optimizacin de
un proceso para
la produccin
d metabolitos
de
t b lit
secundarios

Seleccin de la planta por su contenido de

metabolitos secundarios para iniciar cultivos in
vitro
it
Establecimiento de cultivos in vitro

Estabilizacin y seleccin de cultivos

in vitro: velocidad de crecimiento,
crecimiento niveles de
producto, liberacin al medio

Optimizacin de medio de cultivo para produccin

por diseo factorial: nutrientes, precursores,
elicitacin, liberacin y remocin in situ

Optimizacin en bioreactores: escalado

Sistema de cultivo: batch, continuo, fed
fed-batch,
batch,
perfusin, en dos etapas.
Extraccin y purificacin del producto

Esquema de un proceso completo para la produccin de un

metabolito secundario por cultivo in vitro de clulas y rganos
vegetales
egeta es