Sie sind auf Seite 1von 31

Laboratorul 1

Metode fizice de dozare a glucidelor


Noiuni introductive
Glucidele sunt o clas important de substane naturale rspndite n regnul vegetal
i animal. Cu excepia unor derivai azotai glucidele sunt substane ternare formate din C, H
i O, iar ca structur chimic sunt polihidroxialdehide sau polihidroxicetone sau produi de
condensare ai acestora. Principalii reprezentani corespund formulei brute C n(H2O)m, din
care deriv denumirea de hidrai de carbon dat uneori glucidelor. n funcie de prezena n
molecula lor a gruprilor aldehidice sau cetonice (aldoze sau cetoze), de numrul atomilor
de carbon (tri-, tetr-, pent-, hex-)oze i natura componentelor eliberate prin hidroliza
enzimatic sau cu acizi minerali, glucidele se clasific n oze, denumite i monoglucide (ex.:
riboz, glucoz, galactoz, fructoz) i glucidele complexe (ozide) rezultate prin
condensarea mai multor oze de acelai fel sau diferite, respectiv oligoglucide (diglucide ca
de exemplu maltoza, lactoza, celobioza, etc), triglucide ca de exemplu rafinoza etc.
tetraglucide ca de exemplu stahioza, poliglucide omogene (rezultate prin policondensarea
aceluiai fel de oze, ca de exemplu: amidon, glicogen, celuloz, inulin, galactozani) sau
heterogene (rezultate prin policondensarea diferitelor oze, ca de exemplu hemiceluloza,
poliglucide bacteriene, gume i mucilagii vegetale, etc.) i heteroglucide, care pe lng oze
conin i o componen neglucidic (ca de exemplu glicozizi, mucopoliglucide, glicoproteide,
etc.).
Glucidele particip n proporie de peste 50% din materia uscat la construcia
majoritii organismelor vegetale ocupnd din punct de vedere cantitativ locul de frunte
printre substanele organice vegetale. n comparaie cu organismele vegetale, cantitatea de
glucide din organismele animale este mic, totui pentru om i animale importana lor
biologic este foarte mare ele reprezentnd principala surs energetic. Glucidele
furnizeaz 50-70% din energia total produs n organismele animale. Prin degradare
glucidele furnizeaz 4,1 kcal/g.
1. Metoda areometric
Principiul metodei
Un corp introdus ntr-un lichid se scufund mai mult sau mai puin dup cum
densitatea lichidului este mai mic sau mai mare. Densitatea lichidelor variaz n funcie de
concentraia substanelor dizolvate i de temperatur.
Areometrele sunt instrumente simple i comode care se bazeaz pe principiul lui
Arhimede. Sunt confecionate din sticl i au o form cilindric. Partea superioar este mai
subire i conine n interior o scal pe care sunt gradaiile. Partea inferioar conine o
anumit cantitate de mercur sau alice de plumb care determin cufundarea areometrului la
o anumit adncime i meninerea n poziie vertical.
Gradaiile areometrelor pot fi diferite n funcie de scopul pentru care sunt utilizate. n
funcie de acestea se cunosc urmtoarele categorii de areometre:
Areometre care indic densitatea: densimetre.
Areometre care indic coninutul procentual (n volum sau n greutate) al
substanelor dizolvate n lichid: alcoolmetre, zaharometre.
Cu alcoolmetrele se determin direct cantitatea procentual de alcool etilic pur din
soluiile apoase. Un grad alcoolic reprezint 1 ml alcool etilic pur la 100 ml lichid alcoolic la
temperatura de 20C.

Cu zaharometrele se determin direct cantitatea de zaharoz din soluii pure,


exprimat n grade la temperatura la care este gradat instrumentul. Exist zaharometre
gradate n grade Balling i zaharometre gradate n grade Brix.
Un grad zaharometric Balling corespunde la 1 gram zaharoz dizolvat n 100 grame
soluie la temperatura de 17,5C. Un grad zaharometric Brix corespunde la 1 gram zaharoz
dizolvat n 100 grame soluie la temperatur de 15C.
SOLUII DE ZAHAROZ
d t/4; dup com. de grad. norm.
Procente
greutate
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35

d 15/4

d 20/4

0,99913
1,00301
1,00693
1,01087
1,01484
1,01884
1,02287
1,02692
1,03100
1,03512
1,03925
1,04343
1,04762
1,05186
1,05612
1,06041
1,06473
1,06909
1,07347
1,07789
1,08233
1,08682
1,09134
1,09441
1,10046
1,10507
1,10972
1,11440
1,11911
1,12386
1,12863
1,13345
1,13831
1,14319
1,14811
1,15306

0,99823
1,00209
1,00599
1,00991
1,01386
1,01784
1,02185
1,02587
1,02993
1,03402
1,03813
1,04228
1,04646
1,05066
1,05490
1,05916
1,06345
1,06778
1,07213
1,07653
1,08094
1,08540
1,08990
1,09441
1,09896
1,10354
1,10817
1,11282
1,11750
1,12223
1,12698
1,13176
1,13659
1,14145
1,14634
1,15127

Procente
greutate
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70

d 15/4

d 20/4

1,15806
1,16308
1,16814
1,17325
1,17837
1,18355
1,18875
1,19400
1,19927
1,20460
1,20994
1,21534
1,22076
1,22623
1,23173
1,23721
1,24285
1,24847
1,25412
1,25981
1,26554
1,27131
1,27711
1,28296
1,28884
1,29476
1,30071
1,30672
1,31275
1,31882
1,32493
1,33109
1,33727
1,34350
1,34976

1,15624
1,16124
1,16628
1,17136
1,17648
1,18162
1,18679
1,19202
1,19727
1,20257
1,20789
1,21326
1,21865
1,22409
1,22958
1,23509
1,24063
1,24623
1,25186
1,25753
1,26323
1,26898
1,27476
1,28058
1,28644
1,29234
1,29817
1,30426
1,31026
1,31631
1,32241
1,32854
1,33470
1,34092
1,34716

Modul de lucru
nainte de efectuarea determinrii, areometrele se spal bine i se terg cu o crp
uscat. Lichidul de analizat bine omogenizat se introduce ntr-un cilindru potrivit pentru
areometrul utilizat. Cilindrul trebuie s fie foarte curat i uscat. La introducerea lichidului n
cilindru trebuie s se evite spumarea. n cazul n care avem la dispoziie densimetre din
trus se alege nti densimetrul universal (care cuprinde ntre 1-2) i se introduce n soluia
din cilindru, treptat, dndu-i drumul din mn n momentul n care se simte c acesta
plutete. Cnd areometrul s-a stabilizat, se citete n dreptul meniscului inferior densitatea
aproximativ. Se alege apoi densimetrul care conine domeniul de densitate determinat
aproximativ i se determin densitatea exact n acelai mod. Concomitent se determin i
temperatura lichidului. Cnd determinarea nu s-a fcut exact la temperatura la care este
etalonat densimetrul, este necesar s se fac o corecie de temperatur astfel:
dt1 = dt t 0,00026, n care:
dt1 densitatea lichidului la temperatura de etalonare;
dt densitatea lichidului la temperatura determinrii;
t diferena dintre temperatura lichidului i temperatura de etalonare.
Pentru fiecare grad peste temperatura de etalonare corecia se adaug, iar pentru
temperaturi mai mici corecia se scade.
n funcie de densitatea stabilit, din tabelul anexat se determin concentraia
procentual a soluiei de zaharoz, n funcie de densitatea determinat. Dac este necesar
se procedeaz la interpolare.
2. Metoda refractometric
Aceast metod este larg folosit n mai multe sectoare ale industriei alimentare,
datorit uurinei i rapiditii cu care se poate efectua, permind un control rapid i eficace
al proceselor de producie.
Principiul metodei
Metoda se bazeaz pe relaia ce exist ntre indicele de refracie i coninutul de
substan solubil dintr-o soluie.
Se tie c dac un fascicul de lumin trece dintr-un mediu mai puin dens (aerul, de
exemplu), ntr-un mediu mai dens (sticl), se refract adic i schimb direcia iniial,
apropiindu-se de normala care trece prin punctul de inciden. Notnd cu i unghiul razei
incidente i cu r unghiul razei refractate, indicele de refracie al mediului mai dens n raport
sin i
cu aerul este:
n
sin r
Cnd raza de lumin trece dintr-un mediu
mai dens n altul mai puin dens, raza refractat se
deprteaz de normal i formula este invers.
Indicele de refracie depinde de mai muli
factori:
- variaz invers proporional cu lungimea de und a
radiaiei incidente;
- variaz sensibil cu temperatura i cu concentraia
soluiilor.

Dac mrim unghiul de inciden al razei din mediul mai dens, crete mereu unghiul
de refracie pn ajunge la 90, adic tangent la suprafaa de separaie. Mrind mai departe
unghiul de inciden raza se va reflecta fr a trece n cellalt mediu. Acest unghi limit,
numit critic, cnd raza este tangent la suprafaa de separaie, se numete i unghi de
reflexie total intern , din care se calculeaz indicele de refracie, dup formula:

sin 90
1
n

sin sin
n multe aparate se folosete determinarea indicelui de refracie prin unghiul de
reflexie total.
n cmpul vizual toate razele cu i> nu ajung, cmpul fiind ntunecat, delimitarea
ntre acesta i cel corespunztor i< fiind foarte net.
Cnd determinarea se face n lumin alb, linia de demarcaie apare irizat cu
culorile ntregului spectru vizibil, ceea ce ar micora precizia determinrii. Pentru determinri
exacte se folosete lumina monocromatic, sau la refractometrele de construcie mai
modern, aberaiile cromatice pot fi nlturate cu ajutorul compensatorilor, sisteme de
prisme de sticl cu indici de refracie diferii, aezate n drumul razelor refractate i care
compenseaz efectul dispersiei, spectrul colorat disprnd.
Pentru determinarea indicelui de refracie se folosesc diferite tipuri de aparate:
Pulfrich, Abb, Zeiss, cu imersie etc.
Refractometrul Zeiss este format dintr-o parte cilindric fixat pe un suport i din
accesoriile: oglind, termometru i eventual o instalaie pentru meninerea temperaturii
constante.
Pe partea cilindric a aparatului sunt fixate dou prisme dreptunghiulare care sunt
nchise ntr-o cutie metalic. Prisma orizontal este fix, iar cea superioar este mobil i se
poate deschide cu ajutorul unui mner. Tot pe partea cilindric a aparatului se mai afl o
lunet cu ocular care se poate aeza n focar prin rotirea lui i n care apare o linie
orizontal, punctat sau dou linii ncruciate. n dreapta cmpului sunt marcate diviziunile
care indic procentul de substan uscat (de la 0 la 95%) iar n stnga sunt diviziunile care
arat indicele de refracie (1,300 1,540).

Fig. 2. Cmpul vizual al refractometrului.


Modul de lucru
Se deschide prisma dubl i cu ajutorul unei baghete de sticl se pun pe
suprafaa lustruit a prismei inferioare cteva picturi din lichidul de analizat, fr a o atinge
cu bagheta, apoi prismele se nchid. Cu ajutorul oglinzii se ndreapt razele de lumin n
deschiztura prismei superioare. Se ridic treptat n sus ocularul pn cnd cmpul vizual
se mparte n dou pri, una ntunecat i cealalt luminat. Dac limita de separaie nu
este nc net se rotete tamburul compensator pn ce apare n ocular o linie de
demarcaie clar. Se manevreaz din nou tamburul pn ce linia de separare se suprapune

exact peste intersecia liniilor ncruciate ale ocularului sau peste linia punctat. n acest
moment se face citirea. Se efectueaz 5-6 citiri, rezultatul final reprezentnd media
aritmetic a acestor citiri.
3. Metoda polarimetric
Principiul metodei
Metoda polarimetric se bazeaz pe activitatea optic a glucidelor n soluie,
adic pe proprietatea acestora de a roti la dreapta sau la stnga planul luminii polarizate
care strbate soluia.
Lumina se propag prin micri vibratorii. Vibraiile particulelor de lumin sunt
transversale, adic aceste particule oscileaz perpendicular pe direcia de propagare a
undelor care este nsi raza luminoas i se fac la lumina obinuit, n toate direciile. n
anumite condiii (prin reflexie, prin dubl refracie) vibraiile transversale ale luminii se
orienteaz ntr-un singur plan, adic se polarizeaz, iar lumina capt n acest caz unele
nsuiri care lipsesc luminii obinuite i se numete lumin polarizat. Planul unic n care au
loc vibraiile transversale se numete plan de vibraie. Planul perpendicular pe planul de
vibraie se numete plan de polarizare. Aceste dou planuri, ntotdeauna perpendiculare
ntre ele, formeaz un sistem solidar nct, rotind pe unul dintre ele cu un unghi oarecare n
jurul liniei de intersecie, se va roti i cellalt n acelai sens cu un unghi egal.
Puterea rotatorie sau activitatea optic, este proprietatea unor substane organice
(substane optic active), de a roti planul de polarizare cu un unghi oarecare, la dreapta sau
la stnga.
Substanele pot fi optic active, att n stare de fuziune ct i n stare lichid, aa cum
este de exemplu zaharoza.
Puterea rotatorie sau deviaia specific a unei substane reprezint unghiul cu care
este rotit planul luminii polarizate care strbate un strat de soluie de grosime de 1 dm i
care conine 1 g de substan dizolvat ntr-un mililitru.
Puterea rotatorie specific se calculeaz din datele experimentale i se noteaz cu
D
20 ceea ce arat c determinrile s-au fcut la 20C, cu lumina galben a sodiului
corespunztor liniei D din spectru ( lungimea de und 5895 ).
Pentru substanele optic active care se afl n stare lichid la temperatura ordinar i
examinate ca atare, adic nedizolvate, puterea rotatorie specific este unghiul de rotaie
raportat la un gram de substan, atunci cnd grosimea stratului lichid traversat de lumin
este de 1 dm.
n acest caz, puterea rotatorie specific este dat de formula:
D20 , unde:
ld
- unghiul de rotaie (la dreapta sau la stnga) observat i exprimat n grade i
fraciuni zecimale de un grad;
l lungimea tubului (grosimea stratului de lichid) la temperatura la care s-a fcut
citirea, n raport cu apa distilat, la 4 C, n dm.
n cazul soluiilor de substane optic active, puterea rotatorie specific este
dat de formula:
D20 100 , unde:
lc
l i au aceeai semnificaie ca mai sus;
c - concentraia, adic numrul de grame de substan optic activ, la 100 ml
soluie.

Dac se msoar unghiul i dac se cunosc l i D concentraia va fi:


20

100
20D l

Puterea rotatorie specific a unor glucide este urmtoarea:


Glucoz
+ 52,5
Galactoz
+ 80
Manoz
+ 15
Fructoz
- 93
Zaharoz
+ 66,5.

Polarimetrul
Polarimetrul este un aparat care servete pentru a determina unghiul de rotaie.
La un polarimetru deosebim dou pri eseniale: polarizorul i analizorul, ntre care
se aeaz tubul de lungime cunoscut, coninnd soluia de analizat.

Fig. 3. Schema polarimetrului: 1- analizor; 2- polarizor; 3 tub polarimetric; 4-surs


de lumin.
Polarizorul aezat la captul polarimetrului spre sursa de lumin transform lumina
normal n lumin polarizat, iar analizorul aezat spre ochiul observatorului, ne d
posibilitatea de a determina prin rotirea lui, la dreapta sau la stnga, mrimea unghiului cu
care a fost rotit planul de polarizare al luminii, care a strbtut soluia sau lichidul optic
activ.
Ambele piese sunt construite dup metoda fizicianului Nicol, care a folosit carbonatul
de calciu (spat de Islanda). Din acest motiv, piesele au fost denumite nicoli. Carbonatul de
calciu are proprieti birefringente. Pentru a construi nicolii se desprinde prin clivaj o bucat
de carbonat de calciu, sub form de romboedru alungit ( de 3 ori mai lung dect lat) i se
lefuiesc cele dou fee bazale, astfel ca unghiul cel mai ascuit pe care-l face una din
diagonalele bazei cu muchia lateral s fie de 68 n loc de 71, ct este el n mod natural.
Se taie apoi cristalul astfel lefuit dup un plan diagonal, perpendicular pe direcia celor
dou baze. Se lustruiesc feele rezultate prin secionare i se lipesc dup aceea una de
alta, cu balsam de Canada n poziia lor iniial. Nicolul astfel obinut se nnegrete pe feele
laterale i se monteaz ntr-un tub de asemenea nnegrit pe suprafaa interioar.
O raz de lumin care ptrunde n polarizor, este polarizat i n acelai timp se
desparte n dou: raza ordinar care respect legile refraciei i raza extraordinar care nu
respect legile refraciei (fenomenul de birefringen). Raza ordinar este puternic refractat
i cznd pe stratul de balsam de Canada sub un unghi mai mare dect unghiul limit al

reflexiei totale, este reflectat total i absorbit pe pereii nnegrii ai nicolului, n timp ce raza
extraordinar trece nestnjenit prin stratul de balsam de Canada i iese prin partea opus.
Exist astfel o singur raz de lumin polarizat; acesta este chiar scopul pentru care
cristalul romboedric de spath se prelucreaz n nicol.
Dac seciunile principale ale analizorului i polarizorului sunt paralele, intensitatea
fascicolului care trece este maxim, deoarece raza extraordinar care iese din polarizor
trece nestnjenit. Cnd planul seciunii principale al analizorului face cu cel al polarizorului
un unghi de 90 (nicoli ncruciai), raza de lumin polarizat ce vine din polarizor se va gsi
intrnd n analizor n aceeai situaie n care se gsete raza ordinar, de aceea vibraiile ei
fcndu-se n planul seciunii principale a polarizorului vor fi n analizor perpendiculare pe
planul seciunii principale a acestuia. Raza extraordinar din polarizor devenit raz
ordinar n analizor se va reflecta pe suprafaa balsamului de Canada i va fi absorbit de
feele laterale nnegrite ale nicolului, iar cmpul apare pentru observator complet ntunecat.
n cazul cnd seciunile principale ale polarizorului i analizorului fac ntre ele un
unghi oarecare, atunci raza extraordinar venind din polarizor se va desface la rndul ei,
intrnd n analizor, ntr-o raz ordinar i una extraordinar.
Modul de lucru
n prealabil se pune n funciune lampa cu vapori de sodiu pentru lumina
monocromatic. Apoi se controleaz punctul zero al aparatului. Pentru acesta se aduce
analizorul ntr-o poziie astfel ca banda din mijlocul cmpului s fie bine ntunecat. Se
clarific cmpul apropiind sau ndeprtnd de ochi luneta tubului analizor. Apoi se rotete
analizorul pn ce cmpul apare uniform luminat cu o lumin slab de penumbr. n felul
acesta se fixeaz punctul zero al aparatului care se citete pe cercul gradat.
Se introduce n aparat tubul cu soluia de analizat. Dac soluia este dextrogir
banda din mijlocul cmpului este ntunecat, iar de o parte i de alta a sa cmpul este
luminat. Dac soluia este levogir situaia se prezint invers.
Se rotete analizorul pn cnd cmpul apare uniform luminat ca la determinarea
punctului zero. Se citete unghiul pe scara gradat, iar zecimile de grad pe vernier.
Dac punctul zero determinat nu coincide cu punctul zero al aparatului, fraciunea se
va scdea cnd a fost pozitiv, se va aduna cnd a fost negativ, pentru substanele
dextrogire i invers n cazul celor levogire.
nainte de ntrebuinare tuburile polarimetrice trebuie bine splate i uscate. Discurile
de la capete trebuie s fie foarte curate. Pentru umplere se nchide mai nti tubul la unul
din capete, se aeaz n poziie vertical i se umple cu lichid pn ce se formeaz un
menisc convex. Se astup tubul cu discul de sticl, prin alunecare astfel ca s nu rmn
bule de aer n interior.
Modul de calcul
Cunoscnd D al substanei analizate i valoarea unghiului determinat
experimental, se calculeaz concentraia procentual a soluiei.
20

Laboratorul 2
Metode chimice de dozare a glucidelor
1. Metoda Schoorl
Principiul metodei
Glucidele reductoare reduc n mediu alcalin i la fierbere soluia Fehling producnd
transformarea hidroxidului cupric n oxid cupros, dup urmtoarele reacii:
CuSO4 + 2 NaOH

Cu (OH)2 + Na2SO4
COOK

COOK
CH OH
CH OH

CH O

+ Cu(OH)2

Cu + 2 H2O

CH O
COONa

COONa
Tartrat dublu de Na i K
COOK

COOK

CH O
Cu + 2 H2O
R - CHO + 2
CH O
Glucid
reductor
COONa

Cu2O + 2

CH OH
CH OH

+ R - COOH

COONa

2+

Excesul de Cu prezent n reacie se determin prin tratarea cu iodur de


potasiu n mediu acid, iodul corespunztor eliberat fiind titrat cu tiosulfat de sodiu conform
reaciilor:

2 CuSO4 + 4 KI
I2 + Na2S2O3

H2SO4

2 CuI + 2 K2SO4 + I2

2 NaI + Na2 S4O6

2+

Cantitatea total de Cu se stabilete pe o prob martor n care soluia de glucid


este nlocuit cu ap distilat.
Diferena ntre ml soluie de tiosulfat de sodiu folosit la titrarea probei martor i cei
folosii la titrarea probei de analizat permite evaluarea cantitativ a glucidelor reductoare,
prin folosirea tabelului corespunztor metodei Schoorl.
Reactivi:
soluie Fehling I ( 69,2 g sulfat de cupru la 1000 ml);
soluie Fehling II ( 346 g tartrat dublu de sodiu i potasiu i 100 g hidroxid de
sodiu la 1000 ml);
soluie iodur de potasiu, 10% ( proaspt preparat);
soluie de tiosulfat de sodiu, 0,1 n;
soluie de acid sulfuric, d= 1,11;
soluie de amidon, 1%
Modul de lucru
ntr-un balon Erlenmeyer se pipeteaz 10 ml soluie Fehling I i 10 ml soluie Fehling
II i 10 ml soluie de analizat. Amestecul se fierbe timp de 2 minute, dup care se rcete cu
atenie ntr-un curent de ap rece. Excesul de sulfat de cupru se trateaz cu soluie de

iodur de potasiu n mediu acid. n acest scop, se adaug n prob 15 ml acid sulfuric d =
1,11 i 20 ml iodur de potasiu 10%. n urma acestui reacii se elibereaz iodul, proces care
se observ prin virajul culorii de albastru la galben-brun. n cazul n care acest viraj nu se
produce nseamn c nu s-a realizat mediu acid suficient, deci nu s-a eliberat iodul; se va
mai aduga acid pn la eliberarea iodului. Pentru evitarea pierderilor, iodul trebuie titrat
imediat cu soluie de tiosulfat de sodiu 0,1n. Titrarea se face pn la culoare galben
deschis, se adaug soluie de amidon 1% (aproximativ 1 ml) i se continu titrarea pn
cnd n locul unde cade pictura nu se mai schimb culoarea fa de restul soluiei.
n paralel cu proba de analizat se realizeaz i o prob martor cu: 10 ml soluie
Fehling I, 10 ml soluie Fehling II i 10 ml ap distilat. n rest se procedeaz la fel ca i n
cazul probei de analizat.
Determinarea zahrului invertit i a glucozei dup Schoorl
Soluie de
tiosulfat n/10, cm3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25

Cupru,
mg
6,4
12,7
19,1
25,4
31,8
38,2
44,5
50,9
57,3
63,6
70,0
76,3
82,7
89,1
95,4
101,8
108,1
114,4
120,8
127,2
133,5
139,8
146,2
152,6
159,0

Glucoz
, mg
3,2
6,3
9,4
12,6
15,9
19,2
22,4
25,6
28,9
32,3
35,7
39,0
42,4
45,8
49,3
52,8
56,3
59,8
63,3
66,9
70,7
74,5
78,5
82,6
86,6

Zahr
invertit
3,2
6,4
9,7
13,0
16,4
19,8
23,2
26,5
29,9
33,4
36,8
40,3
43,8
47,3
50,8
54,3
58,0
61,8
65,5
69,4
73,3
772
81,2
85,6
89,2

Modul de calcul
Se noteaz cu Vm volumul de tiosulfat de sodiu 0,1n folosit la titrarea probei martor
i care corespunde cantitii de sulfat de cupru luat n analiz.

Se noteaz cu Vp volumul de tiosulfat de sodiu, 0,1 n folosit la titrarea probei de


analizat i care corespunde cantitii de sulfat de cupru n exces.
Diferena Vm Vp corespunde cantitii de cupru redus de ctre zahrul luat n
analiz. n funcie de aceast diferen se ia din tabelul Schoorl cantitatea corespunztoare
de zahr reductor. Dac este cazul se face interpolare.
2. Dozarea zaharozei
Principiul metodei
Zaharoza din produsele alimentare, n mediu acid i la cald, este transformat n
zahr invertit, iar acesta se dozeaz printr-o metod cunoscut de determinare a glucidelor
reductoare.
C12H22O11+ H2O

HCl

zaharoz

C6H12O6 + C6H12O6
fructoz
glucoz

Reactivi:
- acid clorhidric, d=1,19;
- hidroxid de sodiu, soluie 33%;
- fenolftalein, soluie alcoolic 1%.
Modul de lucru
O cantitate de 10g produs se trece ntr-un balon cotat de 100 ml, se aduce la
semn cu ap distilat, se omogenizeaz i, dac este cazul, se filtreaz. Din soluie obinut
se iau 20 ml ap distilat. Balonul se nclzete pe o baie cu ap la 67-70C. Temperatura
se observ la un termometru introdus n balon. Din momentul n care termometrul arat
67C se ine exact 5 minute. Se rcete apoi balonul pn la 20C, se scoate termometrul
splndu-se cu ap distilat, care se prinde n balon. Se neutralizeaz cu NaOH 33% n
prezena fenolftaleinei i se rcete din nou. Se aduce la semn, se omogenizeaz i se
determin glucidele reductoare rezultate prin metoda Schoorl sau Bertrand.
Modul de calcul
Se calculeaz cantitatea de zahr invertit din proba analizat i se raporteaz
la 100 g produs innd seama de diluiile efectuate.
Zahrul invertit se transform n zaharoz astfel: din reacia de hidroliz rezult
c la 1 mol de zaharoz ( 342), corespunde 1 mol zahr invertit (360). Deci:
360 g zahr invertit 342 g zaharoz
1 g zahr invertit 0,95 g zaharoz.

Laboratorul 3
Metode chimice de dozare a glucidelor
1. Metoda Bertrand
Principiul metodei
Glucidele reductoare reduc, n mediu alcalin i la fierbere, soluia Fehling,
producnd transformarea hidroxidului cupric n oxid cupros, dup urmtoarele reacii:
Oxidul cupros rezultat este solubilizat prin tratare cu sulfat feric n mediu acid.
CuSO4 + 2 NaOH

COOK

COOK
CH OH
CH OH

Cu (OH)2 + Na2SO4

+ Cu(OH)2

COONa
Tartrat dublu de Na i K

CH O

Cu + 2 H2O

CH O
COONa

COOK
CH O
Cu + 2 H2O
R - CHO + 2
CH
O
Glucid
reductor
COONa

COOK
Cu2O + 2

CH OH
CH OH

+ R - COOH

COONa

Sulfatul feros produs se determin prin titrare cu permanganat de potasiu conform reaciilor:
Cu2O + Fe2(SO4)3 + H2SO4
10 FeSO4 + 2 MnSO4 + 8 H2SO4

2 FeSO4 + 2 CuSO4 + H2O


5 Fe2(SO4)3 + 2 MnSO4 + K2SO4 + 8 H2O

Se stabilete cantitatea de cupru care a reacionat cu glucidele reductoare ceea ce


permite, prin folosirea unor tabele, evaluarea cantitativ a glucidelor.
Metoda Bertrand poate fi folosit pentru determinarea cantitativ a diferitelor
monoglucide i a diglucidelor reductoare ca de ex. maltoz, lactoz. Diglucidele
nereductoare trebuie n prealabil hidrolizate i transformate n monoglucide pentru a putea
fi determinate prin aceast metod.
Reactivi:
soluie Fehling I ( 40 g sulfat de cupru la 1000 ml ap distilat);
soluie Fehling II ( 200 g sare Seignette i 150 g hidroxid de sodiu la 1000 ml
ap distilat);
soluie feric ( 50 g sulfat feric i 200 g acid sulfuric concentrat la 1000 ml ap
distilat);
soluie de permanganat de potasiu 0,1 n.
Modul de lucru
ntr-un balon Erlenmeyer se introduc 20 ml soluie Fehling I i 20 ml soluie Fehling
II. Se nclzete balonul pe sit pn la fierbere, apoi se adaug 10 ml soluie de analizat.
Se fierbe coninutul balonului exact 3 minute. Se formeaz un precipitat rou de oxid cupros,
pe care-l lsm s se depun meninnd balonul n poziie nclinat. Dup depunerea
precipitatului, se filtreaz lichidul albastru, printr-un filtru cu plac poroas G4 montat la o
tromp de vid.

n timpul filtrrii precipitatul trebuie s fie tot timpul acoperit cu lichid pentru a nu se
oxida.
Dup filtrarea lichidului, precipitatul de spal cu ap distilat fierbinte, de dou sau
trei ori, avnd grij ca de fiecare dat precipitatul s se depun i s fie acoperit cu ap
distilat.
Se demonteaz apoi filtrul de la vasul de tromp, se arunc coninutul vasului de
tromp, se spal i se monteaz din nou.
Precipitatul rmas n balon se dizolv cu 20 ml soluie feric, agitndu-se bine.
Soluia se trece cantitativ pe filtru pentru a dizolva i precipitatul de oxid cupros care a fost
antrenat n operaiile preliminare de filtrare. Filtrarea se realizeaz de aceast dat ncet. Se
trece apoi cantitativ filtratul din vasul cu tromp, ntr-un balon Erlenmeyer (avnd grij s se
spele bine). Coninutul balonului se titreaz cu o soluie de permanganat de potasiu 0,1 n
pn la culoarea roz, culoare care trebuie s se menin timp de 30 secunde.
Modul de calcul
Se calculeaz titrul soluiei de permanganat de potasiu 0,1 n n raport cu cuprul (E Cu
= 63,57).
0,1 63.57
= 0,006357 g/ml = 6,357 mg/ml
t KMnO4 /Cu
1000
Cunoscnd titrul soluiei de permanganat de potasiu i volumul de permanganat
utilizat la titrare, se stabilete cantitatea de cupru care a fost redus de glucidele existente
n volumul de prob luat n analiz.
n funcie de cantitatea de cupru redus se afl din tabelele Bertrand, cantitatea de
glucid reductor.
innd cont de diluiile efectuate se calculeaz cantitatea de glucide din 100 ml
soluie sau din 100 g produs analizat.
Observaie:
De reinut c att metoda Bertrand ct i metoda Schoorl se bazeaz pe
proprietile reductoare ale glucidelor simple;
n ambele cazuri este necesar ca n prob s existe exces de sulfat de cupru,
pentru a prinde ntreaga cantitate de zahr n reacie. Acest exces se observ prin
meninerea culorii albastre a soluiei dup ce a avut loc reacia la fierbere ntre soluiile
Fehling i zahr. n cazul n care nu rmne sulfat de cupru n exces (soluia nu mai are
nuan albastr), se reia determinarea cu o cantitate mai mic de zahr i cu aceleai
volume de soluie Fehling. Nu se pot modifica volumele de soluie Fehling deoarece
calculele sunt legate de tabele care au fost ntocmite cu cantitile de reactivi indicate n
modul de lucru;
Metoda Bertrand este o metod direct deoarece se dozeaz direct cuprul
redus de ctre zahrul luat n analiz. La aceast metod trebuie avut grij ca precipitatul
rou de oxid cupros s fie acoperit n permanen cu un strat de soluie sau de ap pentru
a-l proteja mpotriva oxidrii;
Metoda Schoorl este o metod indirect deoarece cuprul redus de zahr se
determin ca diferen dintre ntreaga cantitate de cupru bivalent ( proba martor) i cupru
bivalent n exces ( proba de analiz).

Determinarea glucozei dup metoda Bertrand


Glucoz
[mg]

Cupru
[mg]

Glucoz [mg]

Cupru
[mg]

Glucoz
[mg]

Cupru
mg

10

20,4

41

79,3

71

131,4

11

22,4

42

81,1

72

133,1

12

24,3

43

82,9

73

134,7

13

26,3

44

84,7

74

136,3

14

28,3

45

86,4

75

137,9

15

30,2

46

88,2

76

139,6

16

32,2

47

90,0

77

141,2

17

34,2

48

91,8

78

142,8

18

36,2

49

93,6

79

144,5

19

38,1

50

95,4

80

146,1

20

40,1

51

97,1

81

147,7

21

42,0

52

98,9

82

149,3

22

43,9

53

100,6

83

150,9

23

45,8

54

102,1

84

152,5

24

47,7

55

104,1

85

154,9

25

49,6

56

105,8

86

155,6

26

51,5

57

107,6

87

157,2

27

53,4

58

109,3

88

158,8

28

55,3

59

111,1

89

160,4

29

57,2

60

112,8

90

162,0

30

59,1

61

114,5

91

163,6

31

60,9

62

116,2

92

165,2

32

62,8

63

117,9

93

166,7

33

64,6

64

119,6

94

168,4

34

66,5

65

121,8

95

169,9

35

68,3

66

125,0

96

171,5

36

70,1

67

124,7

97

173,1

37

72,0

68

126,4

98

174,6

38

73,8

69

128,1

99

176,2

39

95,7

70

129,8

100

177,8

40

77,5

Determinarea maltozei dup metoda Bertrand


Maltoz
[mg]

Cupru
[mg]

Maltoz
[mg]

Cupru
[mg]

Maltoz
[mg]

Cupru
[mg]

10

11,2

41

45,2

71

77,6

11

12,3

42

46,3

72

78,6

12

13,4

43

47,4

73

79,7

13

14,5

44

48,5

74

80,8

14

15,6

45

49,5

75

81,8

15

16,7

46

50,6

76

82,9

16

17,8

47

51,7

77

84,0

17

18,9

48

52,8

78

85,1

18

20,0

49

53,9

79

86,1

19

21,1

50

55,0

80

87,2

20

22,2

51

56,1

81

88,3

21

23,3

52

57,1

82

89,4

22

24,4

53

58,2

83

90,4

23

25,5

54

59,3

84

91,5

24

26,6

55

60,3

85

92,6

25

27,7

56

61,4

86

93,7

26

28,9

57

62,5

87

94,8

27

30,0

58

63,5

88

95,8

28

31,1

59

64,6

89

96,9

29

32,2

60

65,7

90

98,0

30

33,3

61

66,8

91

99,0

31

34,4

62

67,9

92

101,1

32

35,5

63

68,9

93

101,1

33

36,5

64

70,0

94

102,2

34

37,6

65

71,1

95

103,2

35

38,7

66

72,2

96

104,2

36

39,8

67

73,3

97

105,3

37

40,9

68

74,3

98

106,3

38

41,9

69

75,4

99

107,4

39

43,0

70

76,5

100

108,4

40

44,1

Determinarea zahrului invertit dup metoda Bertrand


Zahr
invertit
[mg]

Cupru
[mg]

Zahr
invertit
[mg]

Cupru
[mg]

Zahr
invertit
[mg]

Cupru
[mg]

Zahr
invertit
[mg]

Cupru
[mg]

10

20,6

33

64,8

56

105,7

79

143,7

11

22,6

34

66,7

57

107,4

80

145,3

12

24,6

35

68,5

58

109,2

81

146,9

13

26,5

36

70,3

59

110,9

82

148,5

14

28,5

37

72,2

60

112,6

83

150,0

15

30,5

38

74,0

61

114,3

84

151,6

16

32,5

39

75,9

62

115,9

85

153,2

17

34,5

40

77,7

63

117,6

86

154,8

18

36,4

41

79,5

64

119,2

87

157,4

19

38,4

42

81,2

65

120,9

88

157,9

20

40,4

43

83,0

66

122,6

89

159,5

21

42,3

44

84,8

67

124,2

90

161,1

22

44,2

45

86,5

68

125,9

91

162,6

23

46,1

46

88,3

69

127,5

92

164,2

24

48,0

47

90,1

70

129,2

93

165,7

25

49,9

48

91,9

71

130,8

94

167,3

26

51,7

49

93,6

72

132,4

95

168,8

27

53,6

50

95,4

73

134,0

96

170,3

28

55,5

51

97,1

74

135,6

97

171,9

29

57,4

52

98,8

75

137,2

98

173,1

30

59,3

53

100,6

76

138,9

99

175,0

31

61,6

54

102,3

77

140,5

100

176,5

32

63,0

55

104,0

78

142,1

2. Dozarea amidonului din produsele alimentare


Principiul metodei
Se hidrolizeaz amidonul n mediu acid i la cald, iar glucoza rezultat se
dozeaz dup o metod cunoscut de dozare a glucidelor reductoare.
(C6H10O5)n + (n - 1)H2O
HCl
nC6H12O6

Reactivi:
acid clorhidric, d= 1,125;
acid clorhidric, d= 1,19;
hidroxid de sodiu 30-40%;
fenolftalein soluie alcoolic 1%;
fosfowolframat de sodiu, soluie 4%.

Modul de lucru
Se cntresc 2g din produsul de analizat bine mrunit, se trec cantitativ ntru-un
pahar Berzelius mpreun cu 50 ml acid clorhidric cu d = 1,125, se omogenizeaz bine i se
introduc ntr-o baie de ap care se fierbe. Paharul cu proba de analizat se fierbe astfel 30
minute, timp n care se omogenizeaz cu o baghet de sticl i care se las tot timpul n
pahar. Dup nclzire, proba se rcete, apoi se trece cu atenie ntr-un balon cotat de 100
ml. Paharul se spal cu 20 ml acid clorhidric d = 1,19 care se trece tot n balonul cotat.
Peste proba din balon se adaug 4 ml fosfowolframat de sodiu 4%, se aduce la semn
cu ap distilat, se omogenizeaz cu atenie i se filtreaz prin filtru cutat, ntr-un balon
Erlenmeyer curat i uscat.
Din filtrul obinut se iau 20 ml, se introduc ntr-un balon cotat de 100 ml, se adaug
20 ml ap distilat i se neutralizeaz cu hidroxid de sodiu concentrat n prezena
fenolftaleinei. Dup rcire, coninutul balonului cotat se aduce la semn i se omogenizeaz.
Din soluia obinut se iau 10-20 ml i se determin glucoza prin metoda Schoorl sau
Bertrand.
Modul de calcul
Din reacia de hidroliz a amidonului rezult c:
180 g glucoz162 g amidon;
1 g glucoz 162/180= 0,9 g amidon.
n funcie de cantitatea de glucoz determinat prin metoda Schoorl sau Bertrand,
de diluiile efectuate i de relaia dintre glucoz i amidon se calculeaz cantitatea de
amidon dintr-o sut de grame de produs.

Laboratorul 4
Lipide
Noiuni generale
Lipidele sunt o clas eterogen de compui naturali, esteri ai alcoolilor cu acizi grai
superiori, larg rspndii n organismele vii, caracterizate n general prin structur hidrofob
apolar, care le confer solubilitatea n solveni organici i insolubilitatea n ap.
Solubilitatea lor diferit n diferii solveni organici ( eter, cloroform, benzen, tetraclorur de
carbon, toluen, aceton, alcooli i amestecuri ale acestora) st la baza metodelor de
extracie i separare fracionat a lipidelor. Sunt constitueni universali ai organismelor vii. n
bacterii sunt localizate aproape n totalitate (95%) n membrana celular i numai n mic
parte n citoplasm. Plantele se caracterizeaz, n general, printr-o compoziie constant n
lipide complexe i acizi grai, asociate n special membranelor lamelare ale cloroplastelor i
prezint capacitatea de a sintetiza acizii grai polinesaturai n cursul maturizrii seminelor.
n general, n regnul vegetal, lipidele se ntlnesc n cantiti nu prea mari, excepie fcnd
seminele plantelor oleaginoase (floarea-soarelui, soia, msline, susan, in, cnep, rapi,
nuca de cocos) care conin nsemnate cantiti de lipide, cunoscute sub denumirea
general de uleiuri. La animale, lipidele sunt distribuite n toate celulele, compoziia n
diferite tipuri i proporia lor prezentnd unele caracteristici n funcie de esut ( de exemplu
celula i esutul nervos conin un complex de lipide diferit calitativ fa de lipidele din
esutul adipos).
n funcie de localizarea lor intracelular se disting lipidele structurale sau de
constituie i lipidele de rezerv. Originea lipidelor animale poate fi exogen (lipide
provenite din aportul alimentar) i endogen ( produse prin biosintez, din metabolii simpli
provenii mai ales din metabolizarea glucidelor. Datorit eterogenitii lor chimice,
clasificarea lipidelor este mai mult sau mai puin arbitrar. Se pot distinge ns lipide simple
(homolipide) care cuprind gliceridele, ceridele, etolidele, steridele i lipide complexe
(heterolipide) subdivizate n glicerofosfolipide cu azot (lecitine, cefaline, serinfosfolipide) i
fr azot (acizi fosfatidici, inozitofosfatide, cardiolipide) i sfingolipide cu fosfor
(sfingomieline) i fr fosfor (ceramide, cerebrozide, gangliozide)i lipide derivate
(nesaponificabile), care cuprind compuii rezultai din hidroliza lipidelor simple i complexe
i care pstreaz caracterul de solubilitate n solveni organici (de exemplu acizii grai,
alcoolii alifatici superiori, steroizii, carotinozizii, vitaminele liposolubile). Principalele roluri i
funcii ale lipidelor sunt: constituie o important surs energetic a organismelor (lipidele
furnizeaz 9,4 kcal/g) au rol plastic intrnd n structura diferitelor componente celulare i
subcelulare, n asociaie cu proteinele
intr n structura membranelor celulare i
organismelor subcelulare intervenind n reglarea permeabilitii i transportului prin aceste
membrane, particip direct sau indirect n diferite procese metabolice, vehiculeaz pe calea
lichidelor biologice substanele nepolare liposolubile (unele vitamine, unii hormoni, acizii
grai eseniali etc.) i au rol de protecie mecanic i termic, asigur elasticitatea dermei i
previn uscarea acesteia etc.
1. Dozarea lipidelor prin metoda gravimetric (Metoda Soxhlet)
Principiul metodei
Lipidele din diferite produse alimentare (carne, brnzeturi, fin etc.) se
solubilizeaz i se extrag cu ajutorul unor solveni organici (eter etilic, eter de petrol etc.).
Dup ndeprtarea solventului, reziduul obinut se cntrete. Solubilizarea i extracia
lipidelor se realizeaz cu ajutorul aparatului Soxhlet (fig. 1).

Fig. 1. Aparatul Soxhlet

Descrierea aparatului
Aparatul pentru extracie se compune din trei
pri:
- un balon cu fund plat pentru distilare;
- un dispozitiv de extracie format dintr-un corp
cilindric nchis la partea exterioar i care comunic cu
balonul prin dou tuburi laterale, unul drept, mai larg
care, plecnd din poriunea inferioar a dispozitivului
i terminndu-se n partea superioar a corpului
cilindric, stabilete comunicaia
ntre corpul
dispozitivului de extracie i prin prelungirea acestuia
cu balonul de distilare.
Prin acest tub circul vaporii de solveni. Al
doilea tub ndoit i mai ngust pleac din partea
inferioar a corpului cilindric se ndreapt spre partea
superioar a acestuia, apoi coboar i trecnd prin
peretele prelungirii nguste a dispozitivului de extracie
se termin n interiorul deschiderii acestei prelungiri.
Acest tub face s comunice partea inferioar a
corpului dispozitivului de extracie cu balonul de
distilare prin sifonare i constituie calea de ntoarcere a
solventului n acest balon;
- un refrigerent ascendent cu bule avnd captul
inferior rodat care se monteaz n orificiul rodat al
corpului dispozitivului de extracie.

Modul de lucru
Balonul de distilare se ine 2-3 ore ntr-o etuv la 105C, pn ce ajunge la greutate
constant. Cntrirea se face la balana analitic. O cantitate de produs de analizat (ntre
5-10 g) se cntrete la balana analitic pe o hrtie de filtru degresat. Din aceast hrtie
se realizeaz un cartu care se introduce n dispozitivul de extracie. Se ataeaz
dispozitivul de extracie la balonul de distilare (uscat i tarat). Prin partea superioar a
dispozitivului de extracie se toarn solventul organic (de ex. eter etilic) pn cnd nivelul
su se ridic peste nlimea cotului tubului de sifonare. n felul acesta solventul va sifona n
balonul de distilare.
Dup sifonare se mai adaug nc 20-30 ml solvent care va rmne n corpul
dispozitivului de extracie. Se ataeaz apoi refrigerentul i aparatul se monteaz pe o baie
de ap nclzit electric. Se nclzete astfel nct solventul s distile ncet.
Vaporii acestuia vor trece prin corpul dispozitivului de extracie i ajungnd n
refrigerentul ascendent, se vor condensa i vor cdea sub form de picturi peste cartuul
ncrcat cu produsul de analizat, extrgnd o parte din grsimea acestuia. Nivelul
solventului crescnd mereu, va acoperi cartuul i cnd va depi nlimea cotului tubului
de sifonare, se va scurge prin sifon n balonul de distilare antrennd cu el o parte din lipidele
produsului analizat. Aici, solventul prin nclzire va distila din nou, lipidele extrase rmnnd
n balon. Dup 15-20 de sifonri ( 3-4 ore) se ntrerupe nclzirea i dup rcire se
demonteaz balonul. Se distil apoi solventul din balon, iar dup ndeprtarea complet a
solventului se usuc balonul la 105C pn la greutate constant. Se las balonul s se
rceasc ntr-un exsicator i se cntrete la balana analitic.

Modul de calcul
Diferena dintre greutatea final i cea iniial a balonului reprezint lipidele extrase
din cantitatea de produs luat n analiz.
Rezultatul se exprim calculnd cantitatea de lipide din 100 g produs.
M M
i 100 , n care:
% lipide f
G
Mi - greutatea balonului gol;
Mf greutatea balonului cu lipidele extrase;
G masa de produs luat n analiz.

2. Indici de caracterizare a grsimilor alimentare


2.1. Determinarea indicelui de saponificare
Saponificarea acilglicerolilor are loc n prezena hidroxizilor alcalini, la fierbere, cu
formarea srurilor corespunztoare ale acizilor grai ( spunuri) i glicerin. Procesul de
saponificare este folosit n industrie pentru fabricarea spunurilor. n funcie de compoziia
chimic a diferiilor acilgliceroli, cantitatea de hidroxizi necesar saponificrii este mai
mic. Valoarea care caracterizeaz acilglicerolii din punct de vedere al masei moleculare,
se numete indice de saponificare.
Indicele de saponificare reprezint cantitatea de hidroxid de sodiu sau potasiu n mg,
necesar pentru saponificarea acizilor grai liberi i esterificai, dintr-un gram de grsime (
uleiuri vegetale sau grsimi animale)
Indicii de saponificare ai unor grsimi alimentare sunt urmtorii:
- unt
220-240
- untur
193-203
- ulei de floarea soarelui
186-198
Principiul metodei
Metoda const n saponificarea la fierbere a acizilor grai liberi i esterificai din lipide
cu ajutorul hidroxidului de potasiu; excesul de hidroxid de potasiu rmas dup saponificare
se titreaz cu acid clorhidric n prezena fenolftaleinei ca indicator.
Cantitatea de hidroxid de potasiu necesar pentru saponificarea unui gram de lipide
depinde de masa molecular a lipidelor. Cu ct masa molecular a lipidelor este mai mare,
cu att se vor afla mai puine molecule ntr-un gram i deci se va consuma mai puin KOH
pentru saponificare. Deci, lipidele cu mas molecular mare vor avea indicele de
saponificare mai mic i invers.
Reacii:
CH2-O-CO-R

CH2-OH

CH-O-CO-R + 3 KOH

CH-OH + 3 R-COOK

CH2-O-CO-R

CH2-OH

Reactivi:
hidroxid de potasiu, soluie alcoolic, 0,5 N;
acid clorhidric, 0,5 N;
benzen sau toluen;
fenolftalein, soluie alcoolic 1%

Modul de lucru
ntr-un balon de saponificare se cntresc 2 g grsime, se adaug 20 ml
benzen sau toluen i 25 ml KOH 0,5 N. Se pregtete n paralel o prob martor, tot ntr-un
balon de saponificare i cu aceleai cantiti de reactivi ca la proba de analizat. Dup
ataarea refrigerenilor, ambele baloane se aeaz pe o baie de ap sau nisip electric, se
aduc la fierbere i se menin 30 minute. Apoi se titreaz, fiind nc calde cu HCl 0,5 N n
prezena fenolftaleinei ca indicator.
Modul de calcul
Indicele de saponificare se calculeaz cu relaia:
28,05(Vm V )
Is
M
n care:
Vm volumul soluiei de HCl 0,5 N utilizat pentru titrarea probei martor, ml;
V volumul de soluie de HCl 0,5 N utilizat pentru titrarea probei de analizat, ml;
M masa de produs luat n analiz, g;
28,05 titrul de HCl n raport cu hidroxidul de potasiu, mg/ml.

2.2. Determinarea indicelui de iod (Metoda Hanus)


Halogenarea acilglicerolilor are loc prin adiia de halogeni la dublele legturi ale
acizilor grai nesaturai care intr n compoziia acilglicerolilor. De exemplu:

CH2 O CO (CH2) CH CH (CH2) CH3


n
n
CH O CO (CH2) CH CH (CH2) CH3
n
n
CH2 O CO (CH2) CH CH (CH2) CH3
n
n

+ 3 IBr

CH2 O CO (CH2) CH CH
n
Br
I

(CH2)n CH3

CH O CO (CH2) CH CH
n
I Br

(CH2) CH3
n

CH2 O CO (CH2) CH CH
n
I
Br

(CH2) CH3
n

Cantitatea de halogeni ( I2 sau Br2), exprimat n grame fixate de 100 g grsime,


caracterizeaz gradul de nesaturare al grsimii respective.
Indicele de iod reprezint cantitatea de iod, exprimat n grame, care poate fi
adiionat de 100 g grsimi alimentare.
Valoarea indicelui de iod caracterizeaz deci gradul de nesaturare al lipidelor,
respectiv proporia de acizi grai nesaturai prezeni n structura lipidelor.

Un indice de iod ridicat nseamn o cantitate mare de acizi grai nesaturai, ceea ce
influeneaz ndeosebi stabilitatea grsimilor alimentare n timpul pstrrii lor.
Principiul metodei
Metoda Hanus se bazeaz pe faptul c grsimile alimentare dizolvate n cloroform
acioneaz monobromura de iod la dublele legturi; excesul de monobromur de iod pune
n libertate iodul din iodura de potasiu . Iodul eliberat se titreaz cu o soluie de tiosulfat de
sodiu.
Reaciile care au loc sunt urmtoarele:
CH3

COOH + IBr

CH=CH

CH3

Acid gras
IBr + KI
I2 + 2 Na2S2O3

CH CH
I

COOH

Br

KBr + I2
2 NaI + Na2S4O6

Reactivi:
- soluie Hanus: 13 g iod se dizolv n 100 ml acid acetic glacial i se adaug 8,2 g
brom ( 2,8 ml). Soluia se aduce la 1000 ml cu acid acetic. Se pstreaz la ntuneric;
- tiosulfat de sodiu, soluie 0,1 n;
- iodur de potasiu, soluie 10%;
- amidon, soluie 1%.
Modul de lucru
ntr-un balon conic cu dop rodat se introduce o prob de 0,2 0,4 g ulei care se
dizolv n 10 ml cloroform. ntr-un alt balon se introduce cloroform fr ulei ( proba martor):
n ambele baloane se adaug dintr-o biuret cte 25 ml soluie Hanus i se nchid cu dopul
rodat. Baloanele se in la ntuneric timp de 15 minute, agitnd din cnd n cnd. Se adaug
apoi n fiecare balon cte 15 ml iodur de potasiu 10% i se titreaz excesul de iod cu
soluie de tiosulfat de sodiu 0,1 N, n prezen de amidon.
Modul de calcul
Indicele de iod se stabilete prin relaia:

(Vm V) 0,01269 100


, n care:
M
Vm volumul de tiosulfat de sodiu 0,1 N utilizat la titrarea probei martor, ml;
V volumul de tiosulfat de sodiu 0,1 N, utilizat la titrarea probei analizate, ml;
M cantitatea de ulei analizat, g;
0,01269 titrul soluiei de tiosulfat de sodiu 0,1 N, n raport cu iodul, g/ml.
I

iod

2.3. Determinarea indicelui de aciditate


Degradarea grsimilor i uleiurilor sau a produselor cu coninut ridicat de grsime,
datorit proceselor de hidroliz i mai ales proceselor de oxidare, are loc n diferite stadii ale
proceselor
tehnologice,
dar n special n timpul depozitrii ndelungate.
Acest fapt are ca efect
nrutirea calitii produselor, scderea valorii
nutritive i pagube importante pentru ntreprinderi.
Transformrile degradative ale grsimilor cunoscute sub denumirea de rncezire
cuprind pe lng procesul de autooxidare, reacii hidrolitice de descompunere i alte reacii
care n ansamblu constituie un fenomen complex, care conduce la schimbarea profund a
gustului i mirosului produselor. Prin hidroliza triacilglicerolilor se pun n libertate acizii grai
i glicerina. Hidroliza se poate produce la una, dou sau la toate cele trei legturi esterice:
Rncezirea hidrolitic se produce mai ales la uleiurile brute cu un oarecare coninut
de ap i enzime ( lipaze) provenite din seminele sau materiile prime respective.
Din cauza prezenei fazei apoase, rncezirea hidrolitic este mai frecvent la
produsele care conin ap ( unt i produse lactate, margarin) i mai puin frecvent la
uleiurile vegetale.
n general rncezirea hidrolitic nu produce schimbri sensibile ale gustului i
mirosului. n acest caz, mirosul i gustul strin, neplcut apare datorit punerii n libertate a
acizilor grai cu caten scurt care intr n compoziia grsimilor din lapte, reaciile de
hidroliz afectnd n special calitatea produselor lactate. Totodat, aceste reacii
favorizeaz desfurarea celorlalte tipuri de degradri.
Prin determinarea indicelui de aciditate se pune n eviden faza incipient de
degradare a grsimilor.
Indicele de aciditate se poate exprima n mai multe moduri:
1. Prin cantitatea de hidroxid de potasiu, n miligrame, necesar pentru neutralizarea
acizilor grai liberi dintr-un gram de grsime.
2. Producerea de acid oleic
3. n grade de aciditate adic: numrul de mililitri hidroxid de potasiu 1N necesari
pentru a neutraliza acizii grai liberi din 100 g grsime.
Prin STAS 12-1962 se limiteaz aciditatea exprimat n acid oleic astfel:
Ulei de floarea soarelui rafinat:
- calitatea I, maximum 0,1%;
- calitatea a II-a, maximum 0,4%;
- nerafinat, maximum 2%.
CH2 OOC R1
CH OOC R2
CH2 OOC R3

+ H2O
- R1 COOH

CH2 OH
CH OOC R2
CH2 OOC R3

+ H2O
- R3 COOH

CH2 OH
CH

OOC R2

CH2 OH

+ H2O
- R2 COOH

CH2 OH
CH OH
CH2 OH

Principiul metodei
Metoda const n neutralizarea acizilor grai liberi cu hidroxid de potasiu, n
prezena fenolftaleinei.
R-COOH + KOH R-COOK + H2O

Reactivi
- hidroxid de potasiu, soluie 0,1N;
- amestec alcool - benzen 1:2
- fenolftalein, soluie alcoolic 1%.
Modul de lucru
Se cntresc 5 g produs ntr-un balon Erlenmeyer i se dizolv n 10-20 ml amestec
alcool benzen.
Se titreaz apoi cui hidroxid de potasiu 0, 1 N n prezena fenolftaleinei, pn la
culoarea roz care se menine timp de un minut. n cazul n care amestecul se tulbur la
titrare, se nclzete uor, prin introducerea balonului n ap cald.
Modul de calcul
Indicele de aciditate se calculeaz cu relaiile:
5,6104 V
1.
mg KOH/g
Ia
M
n care:
V - volumul de hidroxid de potasiu 0,1N ntrebuinat la titrare, n ml;
M - masa produsului luat pentru determinare, n g;
5,6104 - titrul soluiei de KOH 0,1 N , mg/ml

2.

0,0282 V
g% acid oleic
100
M
V volumul de hidroxid de potasiu 0,1N ntrebuinat la titrare n ml;
M - masa produsului luat pentru determinare, n g;
0,0282 - titrul luat pentru determinare, n g
Ia

2.4. Determinarea indicelui de peroxid


S-a stabilit c nceputul reaciei de oxidare a grsimilor este nsoit de formarea
peroxizilor prin adiia oxigenului molecular la dublele legturi ale acizilor grai, ca de
exemplu:

R1 CH CH R2 + O2

R1 CH
O

CH R2
O

Lipidele oxidate sau alimentele care conin asemenea lipide nu mai pstreaz
valoarea nutritiv i calitile senzoriale iniiale.
Peroxizii sau formele activate ale oxigenului, pot produce multe daune organismelor
vii, mergnd de la inactivarea unor substane utile pn la distrugerea sau moartea
celular.
Majoritatea autorilor consider c peroxizii lipidelor din alimente nu sunt inactivai n
tractul gastrointestinal. Ei trec n snge, ptrund n ficat, n esutul adipos i diferite alte

esuturi. n urma folosirii sistematice n alimentaie a grsimilor peroxidate, capacitatea


antioxidant natural a organismului nu poate face fa aportului exogen de peroxizi i, ca
urmare, acetia pot avea efecte nocive, producnd dezorganizarea metabolismului celular.
Prind determinarea indicelui de peroxid se pune n eviden faza incipient de
oxidare a grsimilor, avnd n vedere c peroxizii sunt primii produi de oxidare ai acestor
compui.
Indicele de peroxid se poate exprima n mai multe moduri. Mai importante sunt:
1. Numrul de mililitri tiosulfat de sodiu 0,01 N necesari pentru titrarea iodului
eliberat de peroxizii dintr-un gram de grsime.
2. Cantitatea de iod n grame pus n libertate de peroxizii din 100 g grsime.
3. Miliechivaleni de oxigen activ pentru 1 kg grsime.
Principiul metodei
Metoda se bazeaz pe proprietatea peroxizilor de a elibera iodul din iodura de
potasiu n mediu slab acid.
R

HC O
HC O
R
Peroxid

HC
+ 2 KI + 2 CH3-COOH
HC

O + I2+ 2 CH3-COOK + H2O

R
Epoxid

Iodul eliberat se titreaz cu tiosulfat de sodiu 0,01 N.


Reactivi
- cloroform acid acetic glacial 2:1;
- iodur de potasiu, soluie saturat proaspt preparat;
- tiosulfat de sodiu 0,01N.
Modul de lucru
ntr-un flacon iodometric se cntresc la balana analitic, 1-2 g grsime. Dac
grsimea este solid se nclzete unor pe o baie de ap pn se lichefiaz. Se adaug
apoi 10 ml amestec de cloroform acid acetic i 1ml soluie saturat de iodur de potasiu.
Din acest moment, balonul se agit n plan orizontal exact 3 minute. Iodul eliberat se
titreaz imediat cu tiosulfat de sodiu 0,01 n n prezen de amidon ca indicator.
Pentru a determina iodul liber care ar exista n iodura de potasiu, sau iodul
eliberat de oxigenul care s-ar afla dizolvat n solvent, se realizeaz o prob martor n
aceleai condiii.

1.

Modul de calcul
Indicele de peroxid se poate calcula dup relaiile:
V Vm
ml Na2S2O3 0,01N/g
Ip
M

2.

Ip

0,001269(V Vm )
100 g I2/100 g
M

(V Vm ) 0,01
(miliechivaleni de oxigen/kg ), n care:
1000
M
V volumul de tiosulfat de sodiu 0,01N folosit la titrarea probei de grsime, ml;
Vm volumul de tiosulfat de sodiu 0,01N folosit la titrarea probei martor, ml;
M masa de produs luat n analiz, g;
0,001269 titrul soluiei de tiosulfat de sodiu 0,01N n raport cu iodul, g/ml;
0,01 - normalitatea soluiei de tiosulfat de sodiu.
3.

Ip

Relaia 3 s-a stabilit astfel:


1 miliechivalent oxigen =

16
0,016 g
1000

0,01 16
0,00016g
1000
Cantitatea de oxigen corespunztoare la 1000 g produs:
(V Vm ) 0,00016
1000 .
M
Transformat n miliechivaleni:
(V Vm ) 0,00016
(V Vm ) 0,01
Ip
1000
1000
0,016 M
M
t Na 2 S 2O3 / O2

Laboratorul 5
PROTIDE
Noiuni generale
Protidele reprezint componente chimice primordiale ale materiei vii care prin
structura i proprietile lor definesc esena vieii constituind baza material a existenei i a
manifestrilor specifice ale acesteia.
Protidele sunt deci constitueni universali i indispensabili ai tuturor formelor de via,
asigurnd organizarea i meninerea structurii morfologice a celulelor, precum i
manifestarea funciilor i activitilor vitale ale acestora. Sunt biomacromolecule constituite
din uniti de monomeri cu mas molecular mic denumii aminoacizi care se unesc
covalent unul de altul prin condensare. Au caracter informaional aflndu-se ntr-o strns
interdependen cu acizii nucleici. Protidele ndeplinesc diferite roluri: structural sau plastic
reprezentnd principalii constitueni ai citoplasmei i organitelor celulare, ai umorilor i
lichidelor biologice, catalitic, intervenind n calitate de enzime i hormoni n realizarea
reaciilor biochimice metabolice specifice vieii, n coordonarea i reglarea acestora n
condiii compatibile cu viaa, imunologic de aprare, de transport a unor substane
importante pentru via, contractil i de rezisten mecanic de protecie, energetic, fizicochimic, etc.
Compoziia chimic elementar a majoritii protidelor este similar; toate sunt
substane cel puin cuaternare coninnd C, O, H i N; altele conin n mod frecvent i S i
sau P, iar altele i metale ca: Fe, Cu, Mg, etc.
n funcie de numrul aminoacizilor constitueni, ca i a existenei unor compui de
alt natur care pot intra n structura anumitor protide, acestea se clasific n: peptide
(oligopeptide i polipeptide), proteide (holoproteide i heteroproteide).
Peptidele sunt constituite dintr-un numr relativ restrns de aminoacizi; oligopeptidele
conin n structura lor pn la 10 aminoacizi, iar polipeptidele rezult din condensarea unui
numr superior de aminoacizi.
Proteidele reprezint ansambluri macromoleculare rezultate din condensarea unui
numr mare de aminoacizi i posed mase moleculare ridicate.
Holoproteidele - denumite n mod curent proteine - sunt constituite numai din
aminoacizi.
Heteroproteidele (proteine conjugate) au o structur complex, coninnd pe lng
aminoacizi i o component neproteic denumit component prostetic. Componenta sau
gruparea prostetic poate fi de natur chimic diferit (glucide, lipide, acizi nucleici, nucleu
porfirinic, metale) i asocierea ei la componenta proteic propriu-zis confer
heteroproteidei proprieti i funcii biochimice specifice.

1. Dozarea aminoacizilor (Metoda SRENSEN)


Principiul metodei
Metoda se bazeaz pe proprietatea aminoacizilor de a reaciona cu aldehida formic
la nivelul gruprilor aminice, cu formarea de derivai metilenici. Aminoacidul amfoter devine
astfel un compus metilenic, cu funciune carboxilic liber, care poate fi titrat cu hidroxid de
sodiu n prezen de fenolftalein.
NH2
R CH

N
+H

CHO

R CH

CH2

R CH
COOH

H2O

COOH

COOH

CH2

N
+ NaOH

CH2

CH

H2O

COONa

Reactivi
- formol, soluie 40% (neutralizat n prezena fenolftaleinei);
- hidroxid de sodiu, soluie 0,01 N;
- fenolftalein, soluie alcoolic 1%
Modul de lucru
Se cntresc 10 g produs de analizat, se mojareaz cu 20 ml ap distilat 40C i
se duce cantitativ ntr-un cilindru gradat de 100 ml. Se aduce la volum de 100 ml cu ap
distilat, se omogenizeaz bine i se las timp de 10 minute pentru extracie, omogeniznd
de cteva ori n acest interval. Proba astfel pregtit, se filtreaz printr-un filtru cutat i uscat
ntr-un balon Erlenmeyer curat i uscat. Din filtratul obinut se iau 20 ml ntr-un balon
Erlenmeyer, se neutralizeaz cu NaOH 0,1 n n prezena fenolftaleinei pn la slab roz; se
adaug apoi 10 ml formol 40% i se titreaz cu NaOH 0,1 n pn la slab roz.
Cantitatea de aminoacizi din proba analizat se exprim n procente de azot sau de
glicocol, dup relaia:
% g azot aminic (glicocol)V= t
, n care:
100 d
t titrul soluiei de NaOH 0,1 N exprimat
M n azot sau glicocol E% g azot aminic
(glicocol) (E glicocol= 75; E azot =14), g/ml;
V volumul de NaOH 0,01N utilizat la titrarea probei dup ce s-a adugat
formolul, ml;
M masa de produs analizat, n g;
d diluia cu care s-a lucrat.

2. Dozarea azotului amoniacal


Principiul metodei
Amoniacul format n urma degradrii proteinelor ca urmare a alterrii alimentelor se
determin prin distilare n mediu slab alcalin creat cu ajutorul oxidului de magneziu. Distilatul
se prinde ntr-o soluie de acid sulfuric 0,1 N cu scopul de a fixa amoniacul. Dup distilare,
excesul de acid sulfuric se titreaz cu soluie de hidroxid de sodiu 0,1N n prezena unui
indicator(de exemplu rou de Congo).
Mediul alcalin slab creat n timpul distilrii are rolul de a deplasa amoniacul din
combinaiile sale.
2 NH 4 + Mg(OH)2

2NH3 + H2SO4

2NH3 + 2H2O + Mg++


(NH4)2SO4

Reactivi necesari
- oxid de magneziu;
- acid sulfuric 0,1N;
- hidroxid de sodiu 0,1N;
- rou de Congo sau alt indicator.
Modul de lucru
Se cntresc 5-10 g produs de analizat care a fost bine mojarat n prealabil.
Cantitatea cntrit se introduce ntr-un balon de distilare, peste care se adaug 300 ml ap
distilat i 1 gram de oxid de magneziu. Balonul se cupleaz la un refrigerent descendent
prin intermediul unui deflegmator (fig 5.). Captul inferior al refrigerentului, se prrelungete
cu o alonj; aceasta se introduce ntr-un vas ce conine ap distilat, 10 ml acid sulfuric 0,1
N i indicator. Alonja trebuie s fie cufundat n lichidul din vas pentru a evita volatilizarea
amoniacului care distil. Balonul se nclzete pn la fierbere i se distil timp de 25 min.
n timpul distilrii reacia soluiei din vasul de colectare a distilatului trebuie s fie acid.
Dup distilare, se spal alonja i interiorul refrigerentului cu ap distilat care se prinde n
vasul de colectare; excesul de acid sulfuric din vasul de colectare se titreaz apoi cu
hidroxid de Na 0,1N.
Modul de calcul
Cantitatea de amoniac se stabilete cu relaia:
(V - V1 ) 0,0017
g NH3 %
100 , n care:
M
V volumul de soluie de H2SO4 0,01 N introdus n vasul de prins distilatul, ml;
V1 volumul de soluie de NaOH 0,1 N cu care s-a titrat excesul de acid sulfuric, ml;
M masa de produs luat n analiz, g;
0,0017 titrul soluiei de H2SO4 0,1 N n raport cu amoniacul g/ml.

3. Dozarea azotului total (Metoda Kjeldahl)


Azotul intr n compoziia multor substane chimice ntlnite n organismele animale
i vegetale: proteine, peptide, aminoacizi, acizi nucleici etc. (N-proteic, N-peptidic, N-aminic,
N-nucleic), azot anorganic, etc.
Toate formele de azot existente ntr-un preparat biologic sau ntr-un produs alimentar
sunt cuprinse sub denumirea de azot total.
Pentru determinarea azotului total, frecvent se folosete metoda Kjeldahl.
Principiul metodei
Substanele organice coninute n produsul de analizat, prin fierbere cu acid sulfuric
concentrat n prezena catalizatorilor, se descompun elibernd elementele lor constitutive
sub diferite forme: carbonul ca dioxid de carbon, hidrogenul i oxigenul ca ap, fosforul ca
acid fosforic sau fosfor mineral, iar azotul este transformat cantitativ n amoniac.
Drept catalizatori, n prima etap, se folosesc: sulfat de cupru, mercur, seleniu, etc. n
prezena acestora are loc oxidarea substanelor organice, accelerndu-se punerea n
libertate a oxigenului din acidul sulfuric, conform reaciilor:
Hg + H2SO4
HgO + SO2 + H2O
4HgO
2Hg2O + O2
sau:
CuSO4
CuO + SO3
4 CuO
2 Cu2O + O2
Cu2O + H2SO4
2CuO + SO3 + H2O
Proteine + [O]
CO2 + NH3 + H2O
Amoniacul rezultat n urma mineralizrii reacioneaz cu acidul sulfuric aflat n exces,
formnd sulfat de amoniu:
2NH3 + H2SO4
(NH4)2SO4
n urmtoarea etap, sulfatul de amoniu rezultat n mediu puternic alcalin se
scindeaz cu eliberarea amoniacului, conform reaciei:
(NH4)2SO4 + 2NaOH
Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O
Amoniacul eliberat este distilat prin antrenare cu vapori de ap i captat ntr-un volum
cunoscut de acid sulfuric de o anumit concentraie, legndu-se sub form de sulfat de
amoniu. Excesul de acid sulfuric este tratat cu o soluie de hidroxid de sodiu de aceeai
normalitate.
Reactivi
- acid sulfuric d = 1,84;
- acid sulfuric 0,1 N;
- Hidroxid de sodiu 0,1 N;
- Hidroxid de sodiu 33%;
- Sulfat de cupru - pulbere;
- Sulfat de sodiu - pulbere;

- Indicator rou de Congo sau alt indicator.


Modul de lucru
ntr-o fiol de cntrire tarat n prealabil, se cntresc 1-2 g produs cu o precizie de
0,005 (se cntrete o cantitate din produs astfel calculat ca s conin ntre 20 i 40 mg
azot). Se trece apoi cantitativ coninutul fiolei n balonul Kjeldahl, fr a atinge gtul
balonului. Se adaug 0,5 g catalizator, 20 ml H2SO4 de d = 1,8 i se aeaz o plnie la gtul
balonului. Balonul Kjeldahl se monteaz n poziie nclinat ntr-un stativ metalic sub ni,
pe sit metalic i se nclzete la flacra unui bec de gaz. Coninutul balonului, n decursul
primelor minute de mineralizare devine negru i spumos. Pentru evitarea pierderii probei n
timpul mineralizrii se recomand ca nclzirea s fie efectuat treptat i numai dup ce
coninutul a ncetat s spumeze se intensific nclzirea, mrind flacra becului de gaz sau
cobornd balonul. n general, mineralizarea se consider terminat cnd lichidul din balon sa
decolorat
i
a
devenit
transparent.
Dup
rcirea
balonului
Kjeldahl n care s-a realizat
mineralizarea se adaug cu pipeta
n acest balon 50-100 ml ap
distilat, se omogenizeaz, apoi se
trece cantitativ ntr-un balon cotat
de 250 ml, se aduce la semn cu
ap distilat i se omogenizeaz.
Din balon se iau pentru distilare 25
ml din soluia bine omogenizat.
Distilarea are loc la aparatul
Parnas-Wagner (fig.1)., compus
dintr-un balon de distilare, un
deflegmator, un refrigerent cu
alonj i generator de vapori.
Soluia de analizat se
introduce n balonul de distilare,
apoi la captul refrigerentului se
monteaz un vas conic n care se
introduc 10 ml acid sulfuric 0,1 N,
indicator i o cantitate de ap
distilat, astfel ca alonja din
captul refrigerentului s ptrund
cu 1-2 cm n soluia de prindere a
Fig. 1. Aparatul Parnas-Wagner
distilatului. Dup ce vasul a fost
1. Balon de distilare; 2 Deflegmator; 3. Generator de vapori; .
montat, n balonul de distilare se
4.Vas de evacuare; 5. Refrigerent
introduc 20 ml hidroxid de sodiu
33%, dup care ntreaga instalaie
se etaneaz pentru a evita pierderile de amoniac. Distilarea se consider terminat atunci
cnd o pictur de distilat nu mai d reacie alcalin cu hrtia roie de turnesol. n acest caz
alonja este splat cu poriuni mici de ap distilat care sunt prinse n vasul conic.
Excesul de acid sulfuric se titreaz cu soluie de NaOH 0,1N.

Modul de calcul
Cantitatea de azot total se calculeaz cu relaia:
(V V2 ) 0,014 100
% Azot 1
d , n care:
M
V1 ml H2SO4 0,1 N adugai iniial;
V2 ml de NaOH 0,1 N cu care se titreaz excesul de H2SO4 0,1N;
M masa probei luat pentru analiz, n g;
d diluia efectuat;
0,0014 titrul H2SO4 0,1 N, n g/ml.
Pentru a exprima rezultatul n substane proteice, cantitatea de azot calculat se
nmulete cu 6,25 deoarece la 1g azot corespund 6,25 g proteine. Coeficientul 6,25 s-a
stabilit innd cont c n proteine azotul se gsete n medie de 16%.
Coeficientul de transformare a azotului n protein, difer de la un produs la altul
dup cum urmeaz:
Carne i produse din carne
6,25
Lapte
6,38
Gelatin
5,55
Gru
5,70
Fin de gru
5,60
Soia
6,00

Das könnte Ihnen auch gefallen