Bacillus anthracis

Ordinul Bacillales cuprinde 10 familii (care au fost enumerate la familia

Staphylococcaceae)

(dup

J.P.

Euzby,

2006)

Familia Bacillaceae cuprinde bacterii Gram pozitive, formatoare de

endospori. Sporii rezist ani de zile la adpost de lumin solar i uscciune, fiind foarte rspndii n sol i n locuri cu praf i ntuneric, de unde i
denumirea lor de bacterii telurice.
Denumirea genului Bacillus

fost

introdus

nomenclatura

bacteriilor de ctre Ferdinand Cohn, n 1876, prin schimbarea numelui

Vibrio subtilis, creat anterior de Ehrenberg, n Bacillus subtilis.
Sunt germeni aerobi sau facultativ anaerobi, oxidazo-pozitivi i, majoritatea,
catalazo-pozitivi.
Genul Bacillus cuprinde 189 de specii bacteriene (J.P. Euzeby, 2006), majoritatea
saprofite i nepatogene putnd fi psihrofile, mezofile sau termofile, halotolerante
sau halofile, alcalofile sau acidofile.
Cresc bine pe medii simple de cultur. Majoritatea speciilor se gsesc n mediul
extern i colon, de unde ajung frecvent la nivelul mucoaselor, fiind nepatogene sau
ocazional patogene.
Bacillus anthracis este singura specie nalt patogen, epizootogen, fiind
transmis accidental omului.

Tabelul 1

F
i

e
B

Clostridium

Clostridiaceae

B
a
c

Tipul

Bp

Sp.

B.

cu
Sp.oc

azio

C
.
C

i
G
r
a
m

toxi
gen

Sp.
toxi

i
l

Spnal

A
n
a
e
r
o
b
i

g. i

Ch

viru

.
Sp.

p
o

oca

z.

pato

gen

i
v

Morfologie
B. anthracis este un bacil mare (4-8/1,2), drept, cu capetele retezate,
imobil, Gram pozitiv. Se grupeaz, de obicei, sub form de streptobacili.
n
frotiurile efectuate din culturi din medii lichide se ntlnesc filamente, iar
n
cele efectuate de pe medii solide apar dispui n lanuri lungi,
necapsulogeni
(formeaz capsul numai n medii cu ser, bicarbonatate, incubate n
atmosfer
cu dioxid de carbon).
n frotiurile efectuate din produse patologice se grupeaz n lanuri
scurte (D. Buiuc) i sunt capsulai, nesporulai. Formeaz o capsul
mare
care nconjoar continuu toi bacilii dintr-un lan (D. Buiuc) i se
3

coloreaz
metacromatic n roz cu albastru de metilen policrom. Se mai poate
evidenia
prin colorare negativ cu tu de China, coloraia Riss (corpul bacterian
rou,
capsula roz), coloraia Giemsa (corpul bacterian violet-nchis, capsula
roz).
Grosimea capsulei este n general de 0,2-1, iar n culturile vechi
grosimea
acesteia descrete.
Dup Manicev, capsula are o structur trilamelar format
din:
stratul intern, cu antigene mucopolizaharidice.
stratul extern, ce conine antigene capsulare peptidice;
stratul mijlociu, conine antigene proteice i
polizaharide;
Variantele acapsulogene provoac edeme mari locale, favoriznd
mobilizarea mijloacelor de aprare ale organismului. Tulpinile avirulente
sunt acapsulogene.
Bacilul antraxului este sporogen, sporulnd numai n contact cu
oxigenul atmosferic nu i n organism. Sporul are form oval, fiind situat
central i nu deformeaz celula vegetativ.
Sporularea este favorizat de adugarea n mediile de cultur a unor
substane, cum ar fi cazeina, zeama de lmie sau de roii, acidul

ascorbic precum i prezena ionilor de sodiu, potasiu, litiu i respectiv,

absena ionilor de mangan.

Condiii de cultivare i caractere culturale

Bacilul antraxului se dezvolt bine pe medii simple de cultur. Este
facultativ anaerob, condiiile de aerobioz, fiind optime n limite largi
de
temperatur (15-43C), temperatura optim de 35C, iar pH-ul de 7,27,4.

Aspecte culturale
n bulion, coloana de mediu este, de obicei, limpede, dar prezint un
depozit caracteristic cu aspect floconos mrimea lui fiind direct
proporional cu lungimea lanurilor de bacili. Dup agitare, depozitul
se desprinde de fundul eprubetei i se omogenizeaz n mediul de
cultur cu aspect caracteristic de fulgi de zpad (flocoane de vat).
Pe suprafaa agarului B. anthracis formeaz colonii mari, de 3-6 mm
diametru, opace, neuniforme, neregulate, nepigmentate (albe-cenuii),
turtite, mate, rugoase (de tip R), cu aspect de sticl pisat, nehemolitice
sau
slab hemolitice. Deseori, marginile coloniei sunt dantelate, cap de
meduz
(D. Buiuc) prezentnd expansiuni vizibile macroscopic, numite
cornioane;
examinate la microscop cu obiectiv mic sau cu lupa, apar nconjurate de

prelungiri laterale, ondulate, ca uviele de pr. La o mrire a

grosismentului
se observ c aceste prelungiri sunt formate din lanuri de bacili.
La tulpinile recent izolate, dup 2-3 zile, n centrul coloniei primare se
dezvolt o proeminen central n form de buton, numit colonie
fiic sau secundar. n culturile atenuate la 42,5C, pe lng coloniile
obinuite de tip R, pot aprea i colonii de tip S i chiar de tip M.

Tulpinile capsulate de B. anthracis, dac sunt cultivate pe agar nutritiv

cu ser sau 5-7% bicarbonat de sodiu, n borcane cu lumnare, formeaz
colonii mucoide, rotunde, convexe.
Coloniile formate de B. anthracis se caracterizeaz prin tenacitate,
deoarece dac ridicm uor marginea coloniei cu acul de nsmnare,
aceasta rmne erect, ca i albuul de ou, btut spum.
nsmnat n profunzimea mediilor semisolide cu un ac drept de
nsmnare, prin nepare, germenul formeaz o cultur mai dezvoltat
spre suprafaa mediului i mai srac n profunzime, fiind asemntoare
cu un brad rsturnat. Rezistena bacteriei n culturile bacteriene este
foarte lung (mai muli ani) datorit sporilor.
Pe cartof glicerinat, Bacillus anthracis, crete rapid i abundent,
formnd un strat alb-cenuiu, cu luciu mat, ce conine bastonae bogat
sporulate. Laptele este coagulat, iar cazeina se peptonizeaz. Acest
mediu
dup incubare cteva zile la 37C, devine mai limpede i se coloreaz
glbui; cu timpul se separ n dou straturi, unul superior constituit din
7

grsimi, altul inferior din zer. Dup 6 luni, la 37C, mediul devine brun,
iar
densitatea lui se reduce. Conine cantiti apreciabile de amoniac.
Pe serul coagulat, bacilii viruleni sunt capsulai dnd natere unor
colonii bombate, lucioase, iar cei neviruleni nu capsuleaz formnd
colonii
plane i aspre.
n mediile sintetice, tiamina reprezint un factor de cretere esenial.
Pe mediul selectiv PLET (Polimixin, Lizozim, EDTA) bacilul
antraxului
formeaz n 24 de ore nite colonii mici, n timp ce B. cereus nu se dezvolt
pe
acest mediu, constituind un criteriu de difereniere ntre cei doi germeni.

Proprieti biochimice
Nu prezint interes pentru identificare. Activitatea glucidolitic i
proteolitic

sunt

reduse.

Fermenteaz

fructoza,

glucoza,maltoza,

zaharoza.
Hidrolizeaz amidonul. Produce catalaz. Reacia indolului, ureazei i
hidrogenului sulfurat sunt negative. Activitatea hemolitic este
absent au slab. Reduce albastrul de metilen i nitraii n nitrii.
Reacia Voges Proskauer este pozitiv.
B. anthracis este adesea inclus n grupul B. cereus, format din B.
cereus, B. anthracis, B. thuringiensis i B. mycoides. Bacilul antraxului
se
difereniaz de B. cereus prin faptul c este imobil, nu produce hemoliz
pe
agarul cu snge, este sensibil la penicilin i la fagul g. Poate fi
difereniat
prin tehnicile genetice actuale de ceilali membrii ai grupului B. cereus.

Proprieti antigenice
La Bacillus anthracis au fost identificate trei tipuri de
antigene:
Antigene capsulare, reprezentate de polipeptida din care este format
capsula.
Antigene somatice de natura polizaharidic, care intervin sub form de
precipitinogen n reacia Ascoli-Valenti.
9

Fraciunea a doua a toxinei de natur proteic corespunznd antigenului lui

Gladstone, responsabil de proprietile imunogene ale vaccinurilor.

10

Ecologie
Bacilul antraxului se gsete n sol, sub form sporulat, fiind n
corelaie direct cu urmtorii factori de mediu: reacia alcalin sau
neutr,
temperatura de 21-27C, umiditatea de 60% (Davies, 1960). De aceea,
incidena antraxului scade progresiv cu creterea latitudinii. La aceeai
latitudine, distribuia sporilor n sol este inegal, ceea ce determin
caracterul
zonal al mbolnvirilor. Frecvena mai mare a cazurilor este n perioada
punatului. Insectele pot fi vectori ai germenului, n zonele cu clim
cald
i umed.

Sensibilitatea fa de factorii de mediu

Bacilul antraxului este patogen obligatoriu, existena sa depinznd
de faza de multiplicare ntr-un animal gazd. De aceea, dezvoltarea
microciclic n mediu, este extrem de rar.
Forma vegetativ este surprinztor de fragil, n timp ce sporul poate
supravieui decenii (timpul ntre infectarea gazdelor receptive poate fi,
de asemenea, de ani sau decenii).
Formele vegetative sunt distruse n 30 de minute la 60C. Sporii mor
n 10 minute la fierbere, n 3 ore la 140C cldur uscat, n 60 de
minute
n ap oxigenat 3%, n 15 minute n clorur de var 5%, formol 10%,
11

sod
caustic 2-5%. Antibioticele cele mai active sunt penicilina,
eritromicina,
tetraciclinele,teramicina i cloramfenicolul. Fa de streptomicin,
majoritatea tulpinilor dau mutante rezistente. n prezena penicilinei,
bacilii
se transform n forme sferoidale mari, care n lan dau aspectul unui
irag
de perle (Perlschnurtest).

Din sol se izoleaz cu uurin bacteriofagi activi fa de Bacillus

anthracis, Bacillus cereus, Bacillus mycoides (fagi CAM).

Patogenitatea
Bacillus anthracis acioneaz prin virulen i toxicitate. Virulena este
dat de capsul i de toxina produs n timpul fazei de cretere
exponenial.
Capsula reprezint un important factor antifagocitar care asigur
nmulirea
12

excesiv a bacteriei n organismul infectat, fiind compus din polimeri

ai acidului D-glutamic, dar poate conine i polizaharide. Sinteza ei este
mediat de poliamide i stimulat de albumina seric bovin.
Virulena este asigurat i prin intermediul unor enzime ca: lecitinaza,
proteaza i colagenaza.
Rezistena mai mare la infecie a unor specii cum sunt
cinele, porcul i

obolanul, se datoreaz unei enzime, gamma-

glutamilaz, capabil s degradeze capsula.

Toxina este format din trei proteine sinergice, dar separabile, produse
n faza logaritmic a creterii i denumite antigen protector (AP), factor
letal (FL) i factor edematogen (FE).
Administrarea intravenoas simultan a AP i a FL este letal pentru
oareci i obolani, n timp ce infectarea intradermic concomitent de
AP i de FE induce edem localizat la cobai sau iepuri.
Pe baza acestor considerente unii autori sunt de prere c AP+FL
reprezint toxina letal, iar AP+FE toxina edematogen ns n mod
natural cele trei fraciuni sunt produse ntotdeauna simultan.

FE este o metaloproteaz calciu i zinc dependent ce are capacitatea de

a produce modificri ale metabolismului apei i ionilor, aprnd astfel
edemul caracteristic n antrax. Rolul FE n infecie pare a fi acela de
prevenire a fagocitozei bacteriilor (PCB Turnbull, 2005).
Cauza major a decesului se pare c ar fi complexul FL+AP, care este
13

responsabil de producerea majoritii leziunilor tisulareGenele celor trei

toxine (paf, leg, cya) sunt localizate ntr-o plasmid de 119 Mda, fiind
coordonate de cerinele de bicarbonat i temperatur.

14

Infecia natural
Infecia natural se numete antrax, febris carbunculosa, carbon
bacteridien.
Antraxul este o infecie prin excelen septicemic, germenii
multiplicndu-se n snge, prin care sunt vehiculai n toate organele.
Evolueaz clinic cu tulburri generale, febr, circulatorii, digestive i
respiratorii.

Morfopatologic

se

caracterizeaz

prin

edeme

serohemoragice n esutul conjunctiv subcutanat, hemoragii subseroase,

aspectul asfixic al sngelui, hipertrofia i ramolismentul pulpei splenice.
Este cunoscut i sub denumirea de dalac, bub neagr, crbune sau
pustul malign.
Poarta de intrare o constituie mucoasa
bucofaringian lezat.
Contaminarea la erbivore (ovine, bovine) este masiv, sporii
ajungnd n organism odat cu furajele. Ptrunderea bacteriei n organism
este favorizat de frecvena soluiilor de continuitate datorate tipului de
alimentaie ceea ce explic incidena cea mai mare a bolii la erbivore.
Numrul mare al sporilor de contaminare precum i rezistena bacteriei
capsulate la fagocitoz este urmat de nmulirea considerabil a
germenului.
Concomitent Bacillus anthracis elaboreaz i toxine producnd o infecie
septicemic

cu

toxiemie,

cu evoluie hiperacut i letalitate peste 80%. Cadavrele deschise permit

sporularea bacililor n contact cu aerul i rspndirea germenului n sol.

15

O
pune astfel contaminat genereaz crbune i peste 30 de ani.
n solurile alcaline bogate n humus a fost dovedit supravieuirea
sporilor pn la 60 de ani, ceea ce i-a fcut pe cresctorii de animale din
unele pri s le denumeasc cmpii blestemate. Germenul are un
spectru
foarte larg de patogenitate, cuprinznd toate mamiferele i, foarte rar
psrile
datorit temperaturii corporale nefavorabile dezvoltrii acestei bacterii.
n timp ce erbivorele se infecteaz, de obicei, pe cale
digestiv,
porcinele i carnivorele se mbolnvesc prin consumul de carne
infectat.
La ovine, infecia se realizeaz uor i pe cale respiratorie, inhalnd
sporii
coninui n praful de pe terenurile contaminate. Este posibil i infecia
transcutanat la nivelul unor leziuni accidentale sau prin intermediul
insectelor hematofage. La om, infecia se realizeaz pe cale
digestiv,
respiratorie sau transcutanat.

16

Crbunele digestiv apare prin consum de carne contaminat

evolund cu gastroenterit acut, sindrom holeriform, evoluie mortal
n 1-2 zile.
Crbunele pulmonar, consecutiv inhalrii de spori, apare la blnari,
pielari fiind descrise mici explozii epidemice; se justific vaccinarea la anumite grupe de risc. Infecia evolueaz ca o bronhopneumonie
hiperacut, aproape totdeauna mortal.
Crbunele cutanat sau pustula malign apare dup ptrunderea sporilor prin soluiile de continuitate ale tegumentelor fiind, de
obicei,
o boal profesional ntlnit la agricultori, mcelari, tbcari. Pe
fondul
unui edem ntins, nedureros apare o vezicul, pustul, care se
nconjoar
de o coroan de alte vezicule; centrul se necrozeaz i se formeaz
escara
neagr; ganglionii regionali sunt inflamai. Aceasta este forma cea mai
benign a infeciei crbunoase, uor recunoscut clinic i tratabil. Se
mai
numete i carbuncul, bub neagr,.

17

18

Infecia experimental
Animalele de laborator sensibile sunt oarecele, cobaiul i iepurele.
Psrile pot fi infectate prin procedeul clasic, imaginat de Pasteur, prin
meninere n condiii de temperatur sczut. Cile de inoculare sunt
multiple:
intradermic,

intramuscular,

subcutanat,

intraperitoneal,

intravenoas.
Dac se inoculeaz intradermic un singur spor dintr-o tulpin virulent,
se
poate reproduce infecia la oarece, care este specia cea mai sensibil.
19

Diagnosticul la om
n antraxul cutanat, poarta de intrare o constituie o leziune a pielii.
Dup 3-5 zile apare o mic vezicul, iar n urmtoarele 2-3 zile centrul
veziculei se ulcereaz i se transform ntr-o crust foarte aderent,
uscat i neagr nconjurat de un inel de vezicule, care reprezint escara
specific antraxului. Consecutiv leziunilor apare i edemul.
Diagnosticul antraxului cutanat se realizeaz prin efectuarea de frotiuri
colorate MFadyean sau prin cultura bacteriologic a probelor pretratate
de lichid vezicular, obinute de sub marginile escarei.

Diagnosticul diferenial
Se realizeaz n cazul furunculozei, ectimei contagioase, ancrului
sifilitic primar, erizipelului i ulcerului tropical.
n formele pulmonare i intestinale, boala se manifest
printr-o faz supraacut cu febr uoar, indispoziie i gastroenterit cu
durata de la o zi la cteva zile. n faza acut apar simptome severe de
febr alternant hipotermie , oc, colaps i moarte n cteva ore.

20

n faza acut se poate recurge la efectuarea de frotiuri din snge

sau

fecale colorate MFadyean.

Dup moarte metodele de diagnostic sunt aceleai ca i n cazul

animalelor. O complicaie grav i rar o reprezint meningita, care este

ntlnit cu o frecven mai mare n Tamil Nadu, India.
Antraxul uman se poate mpri n: antrax industrial i non-industrial,
n funcie de modul de contaminare care se poate realiza, fie direct de la
animale, fie indirect prin manipularea i prelucrarea produselor
animale
contaminate.
Antraxul non-industrial este aproape ntotdeauna cutanat i afecteaz
de obicei oamenii care lucreaz cu animale, cum ar fi fermieri,
muncitori din abatoare, veterinari, .
rile care nregistreaz o cretere a incidenei sunt Africa sub
saharian, sub continentul Indian i Indonezian, anumite provincii din
China,
pri din Turcia i diferite ri din fosta URSS (P.C.B. Turnbull, 2005).
Majoritatea proceselor industriale distrug sporii, astfel nct produsele
finite apar libere de spori. Totui produsele reziduale obinute din
etapele iniiale de prelucrare (apa utilizat la splare) transport sporii de
antrax n mediu, iar acetia pot infecta animalele.
Dei este una dintre cele mai vechi boli, nu se cunoate nc n totalitate
modul n care animalul contracteaz boala sau factorii care
influeneaz
acest lucru.
21

Studiul antraxului experimental se realizeaz de obicei prin

determinarea dozei letale 50%, sau prin aerosoli.
n cazul unor studii n care infecia s-a realizat pe cale oral, n furaje,
s-a stabilit c pentru iniierea infeciei clinice sunt necesare doze extrem
de mari (mult mai mari dect cele ntlnite n zonele endemice sau
sporadice).
Transmiterea antraxului de la animal la animal este extrem de rar i se
pare c este mediat de nepturile unor insecte.
La oameni transmiterea de la individ la individ este foarte rar. Totui,
Heyworth n 1987, n cursul unei misiuni medicale n Zimbabwe, ar fi
contractat boala n timp ce pansa leziunea unui bolnav.
Infecia uman se produce cel mai frecvent prin contact cu animalele
bolnave, fiind o boal profesional.
n unele ri, n transmiterea bolii la om pot fi implicate unele
insecte. Omul pare s fie relativ rezistent la aceast infecie. n anumite
zone
din Africa sunt nregistrate rate sczute de infecie, dei rata expunerii
este
nalt.
ntr-un studiu efectuat la maimuele Rhesus s-a nregistrat o doz
letal 50% parenteral de 3000 de spori. Dozele letale 50% administrate
prin inhalare la maimue au variat de la 4130 la 760.000 de spori (PCB
Turnbull). Totui oamenii par s fie mult mai rezisteni dect
maimuele, datorit faptului c doza poate depinde de greutatea
corporal i pentru c omul are inclus n alimentaie i carnea.
Riscul de mbolnvire poate fi redus, printr-o igien industrial
adecvat n ceea ce privesc hainele de protecie, instituirea prompt a
tratamentului ct i vaccinarea.
22

Bibliografie:
1. Bell, C.A.,Uhl, J.R, Hadfield, R.F., Smith, T.F., Cockerill III, F.R. Detection of Bacillus anthracis DNA by LightCycler PCR .J.Clin.
Microbiol (2000)
2. Berger, B.J., English,S.,Chan,G.,

Knodel,

M.HMethionine

Regeneration and Aminotransferases in Bacillus subtilis, Bacillus

cereus, Bacillus anthracis. J.Bacteriol. .(2003).
3. Bourgogne, A., Drysdale, M, Hilsenbeck, S. G.,Peterson, S.
N.,Koehler,T.M.(2003).
4. Davison,S., Couture-Tosi,

E.,Candela,

-Identification of the Bacillu anthracis .(2005)

5. http://ro.wikipedia.org
6. http://en.wikipedia.org/wiki/Bacillus_anthracis

23

T.,Mockk,

M.,Fouet,

Cuprins
Bacillus anthracis 1
Morfologie 3
Condiii de cultivare i caractere culturale5
Proprieti biochimice 7
Proprieti antigenice 7
Ecologie 8
Sensibilitatea fa de factorii de mediu 8
Patogenitatea 9
Infecia natural11
Infecia experimental 14
Diagnosticul la om14
Diagnosticul diferenial 14
24

Bibliografie: 17

25