ARTCULOS

RESPUESTA DEL HONGO FUSARIUM OXYSPORUM F. SP. CUBENSE, CAUSANTE DEL MAL DE PANAM, A
ALGUNOS EXTRACTOS VEGETALES Y FUNGICIDAS
Deisy Araujo, Dorian Rodrguez y Maria E. Sanabria
Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, Decanato de Agronoma, Postgrado de Fitopatologa. Apdo. 400, Barquisimeto,
Edo. Lara. Direccin actual del primer autor: Universidad del Zulia, Facultad de Agronoma, Maracaibo, Edo. Zulia.
Recibido: 12 de septiembre de 2007.

Aceptado: 31 de enero de 2008.

RESUMEN

ABSTRACT

Araujo, D., Rodrguez, D. y Sanabria, M.E. 2008. Respuesta del hongo

Fusarium oxysporum f. sp. cubense, causante del Mal de Panam a
algunos extractos vegetales y fungicidas. Fitopatol.Venez. 21:2-8.

Araujo, D., Rodrguez, D. and Sanabria, M.E. 2008. Reaction of the

fungus Fusarium oxysporum f. sp. cubense, pathogen of Panama
Disease, to some plant extracts and fungicides. Fitopatol. Venez.
21:2-8.

La produccin de cambur manzano (Musa AAB) en el pas se ha

reducido considerablemente debido a la enfermedad Mal de Panam,
causada por Fusarium oxysporum f. sp. cubense. Se desconoce un
manejo efectivo de la misma por lo que se evalu el efecto de extractos
vegetales etanlicos y fungicidas sobre el patgeno. Se estudi su
efectividad in vitro, evaluando los porcentajes de inhibicin del
crecimiento micelial, esporulacin y germinacin de microconidios.
Los extractos probados fueron de Phyllanthus niruri (Pn),
Heliotropium indicum (Hi) y Ricinus communis (Rc) en
concentraciones de 5; 7,5; 10; 20 y 25% y Citrupar80MR a 0,5; 1; 5 y 10
%; y los fungicidas carboxin+thiram (500; 1000; 2000 y 3000 ppm),
azoxystrobin (0,01; 0,1; 1; 2; 3 y 4 ppm), imazalil (0,01; 0,1 y 1 ppm) y
benomilo (1 y 2 ppm). Todos los productos mostraron un efecto
significativo sobre el crecimiento micelial, esporulacin y germinacin
de micrononidios; Citrupar80MR, R. communis, imazalil, benomilo y
carboxin+thiram fueron los mejores. En la evaluacin de los productos
sobre el Mal de Panam, en plantas a plena exposicin solar y bajo
cobertizo, se utilizaron los extractos al 5% y los fungicidas en las dosis
recomendadas. No se observaron sntomas de marchitez, el anlisis
al tejido del pseudotallo mostraron que los extractos de Pn, Rc, Hi,
as como los fungicidas carboxin+thiram y azoxystrobin poseen el
mejor efecto al inhibir la formacin de colonias. Se realiz, adems,
una prueba de los mismos tratamientos sobre el inculo inicial en
suelo infestado obtenindose el mejor efecto con carboxin+thiram.
Los resultados indicaron la posibilidad de incorporar extractos
vegetales y fungicidas como componentes de manejo de la enfermedad.

Production of apple banana (Musa AAB) in the country has been

reduced due to the Panama Disease, caused by Fusarium oxysporum
f. sp. cubense. Effective control management of the disease is unknown,
thus the effect of plant extracts and fungicides on the pathogen was
evaluated. Effectiveness in vitro was studied by determining the
percent of inhibition of mycelial growth, sporulation and micro-conidia
germination. Plant extracts tested were obtained from Phyllanthus
niruri (Pn), Heliotropium indicum (Hi) and Ricinus communis (Rc)
at concentrations of 5; 7,5; 10; 20 and 25% and Citrupar 80MR at 0,5; 1;
5 and 10%; and the fungicides carboxin+thiram (500; 1000; 2000 and
3000 ppm), azoxystrobin (0,01; 0,1; 1; 2; 3 and 4ppm), imazalil (0,01;
0,1 and 1 ppm) and benomyl (1 and 2 ppm). All the products showed a
significant effect on all the variables studied; Citrupar 80MR, R.
communis, imazalil, benomyl and carboxin+thiram were the best.
When evaluating the products on the Panama Disease on plants grown
under light-reduced shelter and at fully solar exposure, plant extracts
at 5% and fungicides at commercial rate recommended were used.
Wilt symptoms were not observed, analysis of pseudostem tissue
showed that extracts from Pn, Rc y Hi, as well as fungicides
carboxin+thiram and azoxystrobin had the best effect on reducing
fungal colony. A test of the same treatments on initial inoculum was
performed in infested soil and results indicated that carboxin+thiram
had the best effect. These results indicated the possibility of
incorporating plant extracts and fungicides as components of disease
management.

Palabras clave: control de enfermedad, extractos etanlicos.

Key words: disease control, ethanolic extracts.

INTRODUCCIN
El Mal de Panam, ocasionado por F. oxysporum Schlecht
f. sp. cubense (E. F. Smith), es una de las enfermedades ms
difciles de controlar y hasta ahora no existe un tratamiento
efectivo. En Venezuela, se ha observado en los estados Aragua
(31), Barinas (39) y Trujillo (30). En este ltimo estado, la
enfermedad se encontr con caractersticas epidmicas en el
80% de las fincas de cambur manzano, lo que redujo
considerablemente la superficie de siembra y amenaza con
destruir completamente la economa del sector.
Las experiencias sobre el manejo con prcticas
agronmicas, como la inundacin de los suelos, la seleccin
de la semilla y de los retoos y la aplicacin de Carbendazim,
permitieron solo reducir su incidencia (34). El uso de
antagonistas como Trichoderma harzianum Rifai,
Aspergillus ochraceus K. Wilh. y Penicillium funiculosum
Thom. (6,12,15,16), as como la solarizacin (13,35) han
demostrado cierto efecto en la disminucin del dao por
formas especiales de F. oxysporum.
2 Vol. 21, N 1, 2008

Los estudios en condiciones in vitro e in vivo han

determinado que el uso de fungicidas puede ser efectivo para
algunas formas especiales de F. oxysporum. La marchitez
causada por Fusarium en Ajonjol fue controlada por Pineda
y Avila (22) con propineb y dicarboximida, mediante el
tratamiento de las semillas. El captafol inhibi
completamente el crecimiento micelial, la produccin de
clamidosporas y los microconidios del hongo en tomate (33);
por otra parte, azoxystrobin, benomilo, procloraz,
propicoconazole y carbendazim demostraron tener efecto
sobre el micelio (1,23,37), controlando, adems, la
esporulacin del patgeno.
Sin embargo, en cuanto a F. oxysporum f. sp. cubense, el
uso de variedades resistentes es considerado como el mtodo
ms efectivo para su control y en esto se basan los grandes
proyectos de mejoramiento gentico (17,21,34). Esta ltima
prctica es factible para productores que no dependan de
la produccin de un nico rubro de explotacin y que no
se nieguen a la posibilidad de cambiar sus cultivos por
otro tipo de musceas cuando ste genere grandes ganancias.

En Venezuela, especficamente en el estado Trujillo, donde

se cultiva con fines de exportacin, el cambio no es una
alternativa muy conveniente, ya que el mercado de esta fruta,
en el exterior es altamente valorada y representa ingresos,
que para 1997 alcanzaron los 9 millardos de bolvares (30).
Los agricultores esperan un manejo de la enfermedad que
les permita obtener una produccin rentable. La aplicacin
de un producto, qumico o biolgico, que logre proteger a la
planta temporalmente, reduciendo la incidencia de la
enfermedad, dara la oportunidad al fruticultor de obtener
beneficios, an en presencia de la enfermedad.
La bsqueda de nuevas alternativas para el control de
patgenos que complementen la resistencia gentica
constituye una de las prioridades actuales en el manejo de
la enfermedad. En este sentido, el uso los productos naturales
es una de las medidas en las que se est haciendo nfasis, por
cuanto permite el control con un mnimo de dao al ambiente
y entre stos los extractos etanolicos (EE) de algunas plantas
han demostrado tener efecto fungisttico o fungicida en el
control de hongos que atacan hojas y tambin a los del suelo
en diversos patosistemas (3,4,9,11,18,19,24,28,38).
El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de EE de
hojas de flor escondida (Phyllanthus niruri L.), trtago
(Ricinus communis L.); rabo de alacrn (Heliotropium indicum
L.), el extracto comercial Citrupar80MR y los fungicidas
benomilo, imazalil, azoxystrobin, carboxin+Thiram sobre F.
oxysporum f. sp. cubense in vitro e in vivo.
MATERIALES Y MTODOS
Determinacin de la efectividad in vitro de extractos
etanlicos de plantas y fungicidas comerciales sobre
F. oxysporum f. sp. cubense.
Obtencin de extractos etanlicos (EE). Se
colectaron hojas de H. indicum y R. communis en Cabudare,
municipio Palavecino, estado Lara y plantas completas de
P. niruri en San Felipe, Sector San Jos, estado Yaracuy,
se secaron en una estufa a 60C y se pulverizaron en una
licuadora OsterMR por 2 min. El material molido de cada
una de las plantas se utiliz para la preparacin de los EE
siguiendo la metodologa de Marcano y Hasegawa (2002).
Se macer en etanol (96%) por 24 h, se filtr para obtener
el crudo por destilacin en un rotoevaporador BriknmannMR
a 100 C y se almacen bajo refrigeracin (10 C) hasta su
aplicacin en las pruebas de bioactividad. Por cada 500 g
de material seco, macerados en 400 ml de etanol, se
obtuvieron 5 ml del crudo y el procedimiento se repiti
varias veces hasta obtener la cantidad necesaria de EE.
Inhibicin del Crecimiento Micelial (ICM) y de la
Esporulacin (PIE). Cada uno de los extractos y Citrupar
80MR (extracto de semillas de toronja, Citrus paradisi)
fueron mezclados por separado con el medio agar papa
dextrosa (PDA), despus de la esterilizacin, a
concentraciones de 0; 0,5; 2,5; 5; 7,5 y 10 %, v/v;
carboxin+thiram a 0; 500; 1000; 2000 y 3000 ppm;
azoxystrobin a 0; 1; 2; 3 y 4 ppm; benomilo a 1 y 2 ppm;
imazalil a 0,01; 0,1; 1; 2; 3 y 4 ppm. La mezcla se verti en
cpsulas de Petri y una vez solidificado el medio, se coloc
un disco de micelio de 5 mm diam de un cultivo de F.
oxysporum f sp. cubense cepa F4-5 de 7 d de edad,
proveniente de una finca de cambur manzano del estado

Trujillo (10). Cada tratamiento fue repetido 5 veces e

incubado a temperatura ambiente (27 2 C). Se midi el
dimetro de la colonia cada 2 d, hasta que en el tratamiento
testigo (0%) alcanz el borde de la cpsula (9 cm).
Con los datos del dimetro del crecimiento micelial
obtenidos se calcul el ICM en cada uno de los tratamientos,
mediante la siguiente formula: ICM=[(do dc)/do]x100;
donde: ICM=Porcentaje de inhibicin del crecimiento
micelial, do=dimetro de colonia con la concentracin 0%,
dc=dimetro de colonia con la concentracin prueba.
Para la cuantificacin del PIE con EE y fungicidas, se
tomaron 5 discos de cada una de las repeticiones de los
tratamientos, utilizando un sacabocado de 5 mm diam., se
colocaron en 10 ml de agua destilada estril, se agit por 60
seg y se determin la concentracin de esporas/ml, utilizando
la cmara de Neubauer. Estos valores fueron convertidos a
esporas/cm2 de cultivo, para finalmente calcular el porcentaje
PIE mediante la formula: PIE=[(eo ec)/eo]x100; donde:
PIE=Porcentaje de Inhibicin de la Esporulacin,
eo=cantidad de esporas en la concentracin 0%, ec=cantidad
de esporas en la concentracin prueba.
Inhibicin de la Germinacin de Microconidios
(PIG). Se prepar una suspensin de microconidios de
F. oxysporum f. sp. cubense, para ello se tomaron 5 discos
al azar de 5 mm diam. de un cultivo de 8 d de la cepa F45 y se colocaron en un tubo de ensayo con 10 ml de agua
destilada estril y se agit por 1 min. Una alcuota de 0,1
ml fue distribuida sobre la superficie de las cpsulas Petri
que contenan agar agua (a:a) mezclado con los productos
bajo prueba, en las concentraciones antes sealada, cada
tratamiento fue repetido 5 veces. Las cpsulas se incubaron
a 27 2 C y se realizaron observaciones bajo el microscopio
(400X) cada 2 h por 24 h, contndose el nmero de esporas
germinadas por campo visual; se observaron 10 campos/
cpsula. Posteriormente, se determin el porcentaje de
microconidios germinados y se transform a PIG en las
cpsulas en tratamiento, con respecto al control, a las
24 h, calculado mediante la siguiente frmula:
PIG = [(go gc)/go] x 100; donde: PIG = Porcentaje de
Inhibicin de la Germinacin de microconidios,
go = cantidad de microconidios germinados en la
concentracin 0%, gc = cantidad de microconidios
germinados en la concentracin prueba.
Anlisis estadstico. Se utiliz un diseo
completamente al azar con 5 repeticiones. Se realizaron los
anlisis de varianzas a las variables ICM, PIE y PIG. Los
datos fueron transformados por la funcin Vx+5 y Vx+7
donde X corresponde a la variable. Las medias de los
tratamientos fueron comparadas usando la prueba de Tukey.
Para los clculos se utiliz el programa Statistix versin 5.1
para Windows.
Determinacin del efecto de EE y de fungicidas
sobre el inculo de F. oxysporum. f. sp. cubense en el
suelo.
Preparacin del inculo. La produccin masiva del
hongo se realiz en un sustrato preparado con 100 g de
arroz colocados en bolsas plsticas de alta densidad con
30 ml de agua destilada, todo esterilizado a 121C y 15 lb
de presin por 15 min. Al enfriarse el arroz, se colocaron
dos discos de 5 mm de dimetro del hongo cultivado en PDA,
se sell la bolsa y se incub a 27 2 C por 8 d para su
crecimiento.
Fitopatol. Venez. 3

Transcurrido este tiempo, se procedi a la preparacin del

inculo, para lo cual se tomaron bolsas con el arroz inoculado
y su contenido se suspendi en agua destilada, hasta retirar
la mayor cantidad de conidios del sustrato, luego se filtr a
travs de cuatro capas de gasa estril y se determin la
cantidad de conidios, utilizando la cmara de Neubauer. La
concentracin fue ajustada a 4x106 microconidios/ml (10).
Inoculacin del suelo: Se utiliz un sustrato compuesto
por una mezcla 2:1; tierra: cscara de arroz, esterilizado
con vapor de agua a 70 C por 4 h, luego se inocul con una
solucin de 4x10 6 microconidios del hongo/ml de agua
destilada estril, aplicando 200 ml de la suspensin/kg de
suelo (10). Cumplidos 5 d de la inoculacin se coloc el sustrato
en envases plsticos de 100 ml, se hicieron cuatro repeticiones
por tratamiento y se incub durante 5 d a 272 C.
La aplicacin de los tratamientos se realiz asperjando
20 ml de los productos sobre la superficie del sustrato en las
concentraciones recomendadas por la casa comercial, para
el caso de fungicidas y al 5% de concentracin para los EE,
obtenidos de un extracto puro diluido con agua destilada
estril. Las aplicaciones se realizaron cada 15 d hasta
completar 45 d.
Determinacin de la densidad de poblacin de F.
oxysporum f. sp. cubense en el sustrato. Para alcanzar
este objetivo se us la tcnica de dilucin en cpsulas Petri
sobre medio PDA, 1, 5 y 10 d despus de la aplicacin de los
tratamientos al suelo, tomando para ello 1 g de suelo por
repeticin/tratamiento y realizando diluciones de hasta 103
. Se tom una alcuota de 0,5 ml y se esparci en el medio.
Las cpsulas fueron incubadas a 272 C por 24 h.
Posteriormente, se cuantific el nmero de colonias formadas
en cada una.
Anlisis estadstico. Se utiliz un
diseo
completamente al azar con 4 repeticiones. Se realiz el
anlisis de varianza a la variable nmero de colonias
formadas a partir de 1 g de suelo. Las medias de los
tratamientos fueron comparadas usando la prueba de Tukey.
Para los clculos se utiliz el programa Statistix versin 5.1
para Windows
Determinacin del efecto de EE y fungicidas sobre
el control de la enfermedad in vivo. Se realizaron dos
experimentos, uno en el perodo febrero-mayo 2003, a plena
exposicin solar (Ensayo 1), y otro entre los meses de octubre
2003 y febrero 2004, bajo condiciones de cobertizo, sin
paredes y techo de fibra de vidrio transparente (Ensayo 2).
Los cormos de cambur manzano utilizados como semilla se
obtuvieron en una finca productora de la zona de San Jos,
estado Yaracuy. Antes de la siembra, se les realiz una
prueba de sanidad con el fin de asegurar que estuvieran
libres de patgenos, luego se sumergieron por 30 min en
una solucin de insecticida-nematicida (oxamilo) a una
concentracin de 0,5 L/100 L de agua y se dejaron secar
antes de sembrarlos en bolsas de polietileno negro
conteniendo 8 kg de suelo inoculado.
El sustrato utilizado para la siembra se inocul de igual
forma que se hizo para determinar la densidad de inculo.
Transcurridos 10 d de la inoculacin se procedi a la siembra
de los cormos, se fertiliz con una frmula completa (11-1811), a razn de 100 g/planta al momento de la siembra y
cada 30 d. Se utilizaron 4 plantas por tratamiento para un
total de 40 plantas en 10 tratamientos, la irrigacin se realiz
cada 3 4 d, segn se requera.
4

Vol. 21, N 1, 2008

Las concentraciones de Citrupar 80 MR , benomilo,

azoxystrobin, imazalil y carboxin+thiram utilizadas fueron
las recomendadas por las casas comerciales. Los extractos
de P. niruri, R. communis y H. indicum se aplicaron al 5%,
siguiendo el procedimiento ya mencionado, se asperj el
producto al suelo a razn de 100 ml/planta cada 15 d a partir
del momento de la siembra. Como testigos se incluyeron dos
tratamientos de plantas inoculadas y plantas no inoculadas,
ambos sin EE o productos.
Se evalo la incidencia de plantas marchitas a los cuatro
meses de sembradas y se determin la presencia del hongo
dentro de las mismas, tomando una muestra de 1 g de tejido
del pseudotallo a 5 cm de altura sobre el nivel del suelo, de
cada tratamiento y repeticin, la cual se coloc en tubos de
ensayo con 10 ml de agua destilada estril y se incub por
24 h a 27 2 C. Posteriormente, se tomaron 0,5 ml de la
dilucin, se esparcieron sobre AA incubndose por un
periodo de 48 h a igual temperatura, se cuantific el nmero
de colonias formadas y se confirm la identidad del hongo
mediante las caractersticas culturales, basadas en
coloracin de las colonias, tipo de crecimiento, forma y tipo
de micelio y los conidios.
Anlisis estadstico. Se utilizo un diseo
completamente al azar con 4 repeticiones. Se realiz el
anlisis de varianza a la variable nmero de colonias
formadas a partir de 1g de pseudotallo. Los datos fueron
transformados por la ecuacin Vx+12 , donde X corresponde
al nmero de colonias. Las medias de los tratamientos fueron
comparadas usando las pruebas de Tukey. Para los clculos
se utiliz el programa Statistix versin 5.1 para Windows.
Estudio histopatolgico. Para observar los daos
ocasionados por F. oxysporum f. sp. cubense en los tejidos de
las races de las plantas de cambur manzano sometidas a
los tratamientos, se colectaron secciones de la parte media
de este rgano, se lavaron con abundante agua corriente
para separar las partculas de suelo y posteriormente se
fijaron en FAA (5% de formalina 40%: 5% de cido actico
glacial: 90% de alcohol etlico 70%) (32).
Se prepararon secciones transversales y longitudinales
permanentes y semi-permanentes. Los segmentos de raz
fijados se deshidrataron en una serie ascendente de alcohol
butlico terciario (TBA), en xilol:alcohol (1:1) y por ltimo
en xilol (100%), se incluyeron en Paraplast y se colocaron
en una estufa a 56 C. Con la ayuda de un micrtomo de
deslizamiento Leica 800 MR se realizaron secciones
transversales y longitudinales de 15 m de espesor, las
mismas se tieron posteriormente directa y totalmente con
safranina, se desparafinaron y como medio de montaje se
utiliz el blsamo de Canad (32). Las lminas seleccionadas
se observaron y fotografiaron con un microscopio ptico
Olympus BX40.
RESULTADOS
Determinacin in vitro de la efectividad de EE y
fungicidas comerciales sobre F. oxysporum f. sp.
cubense.
Se encontraron diferencias significativas (P<0,05) entre
los tratamientos de EE en relacin a la ICM y PIE de
F. oxysporum f. sp. cubense. Todos los extractos, en
concentraciones de 10 %, causaron la inhibicin total del
crecimiento micelial y la esporulacin del hongo; sin embargo,

el efecto de P. niruri, R. communis y H. indicum sobre ICM

a esta concentracin fue estadsticamente similar al logrado
con el 7,5% del EE. Citrupar80MR no ejerci efecto alguno
sobre PIE en concentraciones menores a 10% (Cuadro 1).
En cuanto a los valores de PIG se observaron, igualmente,
diferencias significativas (P<0,05) entre los tratamientos.
Con Citrupar80 MR se observ un valor de PIG >80% con la
menor concentracin del producto (0,5%) y una inhibicin
total con concentraciones mayores. En cuanto a los otros
extractos, la concentracin mnima mas efectiva fue de 7,5%
para P. niruri y 10% para R. communis, con los cuales se
logr mas del 90% de inhibicin (Cuadro 1).
Con relacin a la evaluacin de los productos qumicos,
se encontraron diferencias significativas (P<0,05) entre los
tratamientos para ICM; en general, estos valores se
incrementaron con el aumento de la concentracin. Sin
embargo, imazalil y benomilo resultaron significativamente
mejores que carboxin + thiram y azoxystrobin al mostrar
inhibiciones superiores al 80%, con dosis muy bajas de
producto (Cuadro 2). Resultados similares se observaron
en cuanto a PIE, imazalil y benomilo fueron los ms
efectivos, seguidos por azoxystrobin (4 ppm). Por otra parte,
carboxin + thiram no mostr efecto sobre esta variable.
En cuanto al efecto sobre la germinacin de los conidios,
los resultados fueron contrarios, carboxin + thiram fue el
producto mas efectivo logrndose una PIG de 100 %
con2000 ppm del mismo (Cuadro 2). Los otros productos
tuvieron muy poco o ningn efecto sobre esta variable.
Cuadro 1. Porcentaje de Inhibicin del crecimiento micelial (ICM),
esporulacin (PIE) y germinacin de microconidios (PIG) de Fusarium
oxysporum f.sp. cubense por efecto de Citrupar80MR y los extractos
etanlicos de Phyllanthus niruri, Ricinus communis y Heliotropium
indicum a diferentes concentraciones.
Extracto

Concentracin (%)

P. niruri

2,5

32,6 c(1)

0,0 d

11,6 c

5,0

79,4 b

22,8 c

36,2 b

7,5

96,8 a

65,4 b

90,7 a

10,0

100,0 a

100,0 a

90,7 a

CV(2)
R. communis

2,45

CV

2,12
0,0 d

PIG (%)

12,3

30,8 c

5,0

65,4 b

1,2 c

73,9 b

7,5

88,2 a

60,2 b

81,4 b

10,0

100,0 a

100,0 a

98,1 a

20,8 c

Determinacin del efecto de EE y fungicidas sobre

el Mal de Panam. Transcurridas 16 semanas, no se
observaron sntomas de marchitez en las plantas de cambur
manzano, en ninguno de los 2 ensayos (plena exposicin y
cobertizo). El contaje de colonias/g de tejido vegetal, en el
experimento a plena exposicin, mostr diferencias
significativas (P<0,05) entre los tratamientos. P. niruri
ejerci el mejor control al no permitir la formacin de colonias
de F. oxysporum f. sp. cubense. H. indicum y Citrupar80MR
causaron el menor efecto al permitir la formacin del mayor
nmero de colonias/g de tejido, 775 y 567, respectivamente
(Cuadro 4). Por otra parte, todos los otros tratamientos se
comportaron estadsticamente similares al testigo.
En cuanto al experimento bajo cobertizo, el anlisis
estadstico mostr diferencias significativas (P<0,05)
entre los tratamientos (Cuadro 4). Carboxin+thiram,
axozystrobin, R. communis, P. niruri y H. indicum resultaron
estadsticamente similares, no permitiendo el desarrollo de
colonias de F. oxysporum f.sp. cubense. Benomilo,
Citrupar80MR e imazalil demostraron ser menos efectivos
alser comparados con los productos antes mencionados,
permitiendo el desarrollo de 60, 310 y 254 col/g de tejido,
respectivamente, pero fueron estadsticamente diferentes
entre ellos (Cuadro 4).
Cuadro 2. Porcentaje de Inhibicin del crecimiento micelial (ICM),
esporulacin (PIE) y germinacin de microconidios (PIG) de Fusarium
oxysporum f.sp. cubense por efecto de benomilo, carboxin + thiram,
azoxystrobin e imazalil a diferentes concentraciones.
Producto
Benomilo

Concentracin
ICM (%)
(ppm)

26,5 a

28,8 b(1)

37,8 b

90,6 a

98,6 a

0,82

1,63

33,1 a
15,65

500

16,4 d

0,00 a

1000

28,4 c

0,00 a

62,3 c
84,3 b

2000

47,0 b

0,00 a

100,0 a

3000

57,0 a

0,00 a

100,0 a

6,35

1,17

2,5

58,0 b

22,8 c

7,5 c

5,0

66,6 b

0,0 d

38,8 b

35,2 c

15,6 c

14,3 b

7,5

87,6 a

65,4 b

24,3 b

39,2 c

14,0 c

26,8 a

10,0

100,0 a

100,0 a

82,6 a

56,6 b

68,0 b

23,1

62,4 a

75,8 a

26,7 a

1,7

5,02

9,19

0,01

18,6 c

36,6 c

0,00 a

3,06

1,09

8,45

PIG (%)

CV(2)
Carboxin+Thiram

PIE (%)

3,62

CV
Citrupar80MR

PIE (%)

2,5

CV
H. indicum

ICM (%)

Efecto de EE y fungicidas sobre el inculo de

F. oxysporum f. sp. cubense en el suelo. En general, se
observ que los productos comerciales (fungicidas y
Citrupar80MR) fueron ms efectivos, reduciendo el nmero de
colonias que los extractos naturales (Cuadro 3). Carboxin +
thiram caus el mayor porcentaje de reduccin (95 %) con la
primera aplicacin, incrementndose su efecto con los
siguientes tratamientos. Los otros productos necesitaron hasta
dos aplicaciones adicionales para igualar el efecto del primero.

CV
Azoxystrobin

12,21

1,61

CV

0,5

58,2 d

0,00 b

89,3 b

1,0

68,2 c

0,00 b

100,00 a

5,0

81,2 b

0,00 b

100,00 a

0,1

50,2 b

39,0 b

0,00 a

10,0

100,0 a

100 a

100,00 a

88,0 a

100,0 a

0,00 a

1,12

0,17

1,74

Los anlisis estadsticos fueron realizados por separado para cada extracto.
(1)
Los valores promedios sealados con la misma letra son estadsticamente
iguales por tratamiento segn la prueba de Tukey (P<0,05). (2)CV=calculado
sobre los datos transformados.

Imazalil

CV

1,59

Los anlisis estadsticos fueron realizados por separado para cada extracto.
(1)
Los valores promedios sealados con la misma letra son estadsticamente
iguales por tratamiento segn la prueba de Tukey (P<0,05).
(2)
CV=calculado sobre los datos transformados.

Fitopatol. Venez. 5

Cuadro 3. Porcentaje de reduccin en el nmero de colonias formadas

a partir de 1 g de suelo inoculado con Fusarium oxysporum f. sp. cubense
tratado con benomilo e imazalil (0,5 g/ml de agua), azoxystrobin (250
mg/500 ml de agua), carboxin+thiram (5 ml/500mlde agua), Citrupar80MR
(2 ml/500ml de agua) y extractos etanlicos de Phyllanthus niruiri, Ricinus
communis y Heliotropium indicum al 5%.
Aplicacin

Tratamiento
Phyllanthus niruiri
Ricinus communis
Heliotropium indicum
Citrupar80MR
Benomilo
Imazalil
Azoxystrobin
Carboxin+thiram
Testigo

0
0
3,2
0
32,5
33,5
56,0
95,0
0

0
0
0
80,0
81,0
84,0
98,8
98,3
0

0
0
0
100,0
96,6
96,0
98,8
99,1
0

Evaluacin histopatolgica. En las secciones

transversales y longitudinales de la porcin media de las
races de cambur manzano del tratamiento testigo (sin
inocular) no se observaron alteraciones de los tejidos
conductores (Fig. 1A). En aquellas provenientes de races
de plantas inoculadas con F. oxysporum f. sp. cubense se
present un necrosamiento de los vasos del xilema por efecto
del hongo (Fig.1B y 1C ). Por otra parte, se formaron papilas
en los elementos xilemticos y en las clulas parenquimticas,
las cuales se tieron de ocre con safranina (Fig. 1C). Las
secciones provenientes de plantas inoculadas y tratadas con
EE y fungicidas no mostraron alteracin en el xilema.
DISCUSIN
Todos los extractos vegetales mostraron efecto inhibidor
sobre F. oxysporum f. sp. cubense en experimentos realizados
in vitro; el crecimiento micelial, la esporulacin y la
germinacin de microconidios fueron reducidos entre 80 y
100%, destacndose Citrupar80MR como el ms efectivo.
Estos resultados coinciden con Rodrguez y Montilla (28)
y Rodrguez et al. (29) quienes sealan que los EE de
P. niruri, R. comunis, H. indicum y Citrupar 80MR inhiben
el crecimiento de formas especiales de F. oxysporum, gracias
a la accin fungisttica de los extractos vegetales, la cual ha
sido demostrada en varios patosistemas (7,9,24).
Los fungicidas mostraron un efecto diferente en cada
variable: imazalil y benomilo fueron los ms efectivos en la
reduccin del crecimiento micelial; azoxystrobin y benomilo
en la inhibicin de la esporulacin y carboxin+thiram en la
germinacin de microconidios, atribuible al modo de accin
especfico (8). Los resultados coinciden con los obtenidos por
Alcano et al. (1) al evaluar estos productos contra F.
oxysporum f.sp. lycopersici; los autores sealan un efecto
inhibidor sobre dicho hongo, por lo que puede inferirse que
benomilo, azoxystrobin y carboxin+thiram tienen una accin
preventiva y curativa.
Las pruebas para determinar el efecto de los EE sobre el
inculo en el suelo resultaron en una mayor produccin
de conidios de F. oxysporum f.sp. cubense a medida
que aumentaba el nmero de aplicaciones, siendo mas evidente
6

Vol. 21, N 1, 2008

Cuadro 4. Comparacin de medias para la variable formacin de

colonias a partir de 1 g de tejido del pseudotallo de plantas de cambur
manzano (Musa AAB) inoculadas con Fusarium oxysporum f.sp.
cubense tratadas con benomilo e imazalil (0,5 g/ml de agua),
azoxystrobin (250 mg /500ml de agua), carboxin+thiram (5 ml /500 ml
de agua), Citrupar80MR (2 ml/500ml de agua) y extractos etanlicos
de plantas de Phyllanthus niruri, Ricinus communis, Heliotropium
indicum al 5%.
Tratamiento
Benomilo
Imazalil
Citrupar80MR
Carboxin+Thiram
Azoxystrobin
Heliotropium indicum
Phyllanthus niruri
Ricinus communis
Testigo sin tratamiento
CV(2)

Nmero de colonias/Ensayo
Plena exposicin(1)

Cobertizo

545 ab
370 ab
567 b
120 ab
90 ab
775 b
0a
250 ab
267 ab
35,46

60 b
254 c
310 d
0a
0a
0a
0a
0a
479 e
1,7

Los valores promedios sealados con la misma letra son estadsticamente

iguales por tratamiento segn la prueba de Tukey (P<0,05) .
(2)
CV=calculado sobre los datos transformados.
(1)

con el EE de P. niruri. Esto podra deberse a la presencia de

materia orgnica en los extractos vegetales lo cual estimul
el desarrollo saproftico del hongo. El efecto contrario de los
EE en esta investigacin, con relacin a las pruebas in vitro,
puede deberse a una baja concentracin de los metabolitos
secundarios en el mismo, como consecuencia de la volatilidad
de algunos de stos (2). Por otra parte, es posible que sufran
cambios en su composicin debido a los factores a los que son
sometidos una vez aplicados, entre ellos temperatura,
luminosidad y dilucin en el suelo, bajando su concentracin,
lo que hace que el efecto sobre el hongo no sea evidente (14).
Rodrguez (27) demostr que algunos fungicidas a baja
concentracin estimulan el crecimiento del hongo; dicho
efecto fue observado con Helminthosporium solani al ser
tratado con thiophanate-methyl. De igual manera, se
comportaron los EE de R. communis y H. indicum
ocasionando un incremento del nmero de conidios. Por otra
parte, Citrupar80MR no tuvo efecto alguno debido a que
mantuvo valores similares desde el comienzo hasta el final
del ensayo, lo cual hace pensar que estos productos no pueden
ser usados como curativos. Contrariamente, Bower y Locke
(5) encontraron una reduccin de la densidad poblacional
de F. oxysporum f.sp. chrysantemi en el suelo de 97,5; 96,1
y 99,9 % con extractos de Trifolium pratense, Cassia sp. y
Piper sp., respectivamente. Se podra suponer que los mismos
tienen un efecto directo sobre los propgulos del hongo.
Los fungicidas mostraron un mejor comportamiento:
benomilo redujo considerablemente el nmero de colonias
formadas con relacin al testigo, corroborando los estudios
realizados con otras formas especiales de F. oxysporum,
donde el producto ha demostrado un efecto inhibidor del
hongo (1). Sin embargo, Reid y Hausbeck (25) no lograron
controlar con benomilo a F. oxysporum f.sp. asparagi en
plntulas de esprragos.
Imazalil, carboxin+thiram y azoxystrobin tuvieron un
comportamiento similar, manteniendo el nmero de colonias
por debajo del testigo. Estos resultados muestran que los

Fig. 1. Seccin longitudinal del parnquima cortical de una raz sana de cambur manzano (Musa AAB) (A). Seccin transversal (B) mostrando
necrosamiento de los vasos xilemticos. Detalles del xilema necrosado por Fusarium oxysporum f.sp. cubense (C); Seccin longitudinal del
parnquima mostrando las papilas en las clulas de las plantas que recibieron tratamiento. Parnquima cortical (Pc), Raz secundaria (Rs);
Clulas parenquimticas (Cp); Parnquima cortical (Pc), Vasos del xilema (Vx), papilas (Pa).

fungicidas tienen un efecto sobre la produccin de conidios

y que pudieran ser usados en forma preventiva en el control
del patgeno. Por otra parte, carboxin + thiram resultaron
ser los mejores en la inhibicin de la germinacin de conidias,
sugiriendo tambin su uso de forma sistmica o de contacto.
En los estudios realizados con plantas de cambur
manzano en suelo infestado por el hongo no se observ el
desarrollo de sntomas de Mal de Panam en el periodo del
ensayo, incluyendo al testigo. Esto pudiera atribuirse al
hecho de que las mismas solo se mantuvieron en contacto
con el hongo por un periodo de 4 meses, lo cual pudiera no
ser suficiente para manifestarse la enfermedad en los inicios
del desarrollo, necesitndose en algunos casos un periodo
ms largo. Este resultado coincide con Sun y Su (37) quienes
sealaron que la aparicin de la enfermedad ocurre 9 meses
despus de la inoculacin del hongo. Contradictoriamente,
Gudez (10) encontr sntomas tpicos, caracterizados por
marchitamiento y amarillamiento de las hojas inferiores, a
los 2 meses de la inoculacin de plantas obtenidas por
divisin de cormos, las cuales son altamente susceptibles.
Con la aplicacin del EE de P. niruri no hubo formacin
de colonias, tanto en el ensayo realizado bajo cobertizo como
a plena exposicin solar. R. communis tambin redujo dicha
variable; no obstante, los resultados fueron distintos en
ambas condiciones ambientales; esto puede atribuirse a que
una misma forma especial de F. oxysporum puede reaccionar
de manera diferente bajo condiciones ambientales distintas
(5). El modo de accin de los extractos no ha sido
determinado, pero se piensa que puede ser absorbido por
las races y entrar en la corriente xilematica o tener efecto
sobre los propgulos del hongo antes de su penetracin. No
se encontr referencia alguna con relacin a la efectividad
de los extractos bajo condiciones de campo (plena exposicin
solar), pero se sospecha que las altas temperaturas y las
abundantes lluvias pudieran influir sobre la accin de stos
y sobre el patgeno.
La variacin de la respuesta de los productos qumicos en
la prueba a plena exposicin solar con relacin a la de cobertizo
puede ser atribuida a la degradacin que todo producto sufre
ante condiciones extremas de temperatura y humedad (8).
Las papilas observadas bloqueando los vasos del xilema
y tambin en las clulas parenquimticas se forman como
parte de los mecanismos de defensa de la planta ante
el ataque de F. oxysporum f. sp. cubense (26). Noruega
(20)seal que las plantas infectadas con F. oxysporum
mostraron cambios estructurales en estos tejidos, los cuales
pueden conducir a posibles alteraciones en la distribucin

de carbohidratos y ocasionar dificultad en el transporte de

agua, lo que conlleva a la sintomatologa de marchitez.
Por otra parte, en el presente trabajo, las plantas inoculadas
y tratadas con fungicidas y EE no mostraron alteraciones en
estos tejidos, lo que indic que los productos no permitieron
alteraciones en el sistema vascular o que stas no fueron
estimuladas por el patgeno a formar dichas estructuras.
Los resultados de esta investigacin abren la posibilidad
de usar productos naturales y qumicos que pudiesen ser
incorporados como componentes de las diferentes estrategias
de manejo del Mal de Panam, lo cual depender de cada
sistema de produccin en particular.
AGRADECIMIENTO
Los autores manifiestan su gratitud al Fondo Nacional
de Investigaciones Cientficas y Tecnolgicas (FONACIT)
Proyecto 2002000021 y al Consejo de Desarrollo Cientifico,
Humanistico y Tecnolgico (UCLA-CDCHT) Proyecto DOIRAG-2002, por el cofinanciamiento de esta investigacin.
Tambin agradecemos a la TSU Maria Isabel Rangel y al
Ing. Agr. Jos Lus Rodrguez, por su valiosa colaboracin
en las labores de campo y laboratorio, as como tambin al
Ing. Agr. M.Sc. Juan Pineda por sus valiosos aportes como
asesor de este trabajo.
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