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UFPB
Reitor
Coordenador
Pr-Reitor de Graduao
Mrcio Bernardino da Silva
Valdir Barbosa Bezerra
Coordenao Pedaggica
UFPB Virtual
Coordenador
Coordenao de Estgio
Chefe
Ilustraes
Christiane Rose de Castro Gusmo
Figura
1.1
Esquema
ilustrativo
de
uma
clula
eucaritica.
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Endomembrane_system_diagram_en.svg
Modificado
de
1. UM POUCO DE HISTRIA
1665! Este o ponto de partida da nossa jornada pela clula. Neste ano, o cientista
britnico Robert Hooke publicou o livro intitulado Micrographia. Trata-se do primeiro registro de
um trabalho cientfico utilizando a microscopia como ferramenta de estudo para a observao e a
descrio de um material biolgico. Desde ento, uma srie de conquistas tecnolgicas
permitiram, aos cientistas, uma maior aproximao do mundo microscpico, revelando, aos
poucos, o maravilhoso mundo celular e at mesmo subcelular.
Diversos pesquisadores do sculo XVII contriburam para os primrdios da Biologia
Celular, ramo da cincia que estuda as clulas e que inicialmente era denominado de Citologia.
Alguns destes pesquisadores merecem destaque, como Antonie van Leeuwenhoek, microscopista
holands, que no ano de 1674 reportou a descoberta de protozorios flagelados. Um ano mais
tarde, o pesquisador relata a descoberta dos glbulos vermelhos sanguneos em humanos,
peixes, anfbios e sunos. Em 1677, Leeuwenhoek descreveu, pela primeira vez, o
espermatozide em diversas espcies, tais como: peixes, anfbios, aves, ces e seres humanos.
Leeuwenhoek acreditava que os espermatozides eram parasitas que residiam nos rgos
sexuais masculinos. No ano de 1683, o cientista holands, observou, pela primeira, uma bactria
ao estudar o trtaro dentrio, descrevendo em seguida a presena de bactrias e protozorios
nas fezes. Leeuwenhoek contribuiu, ainda, para o aprimoramento da microscopia, desenvolvendo
uma srie de microscpios e lentes especiais, marcando de vez o seu nome na histria da
biologia celular e da Microbiologia. Seus estudos sobre a morfologia dos espermatozides de
diversas espcies levaram o cientista alemo Nicolaas Hartsoeker, inventor do microscpio
simples parafuso-barril, a postular a hiptese do homnculo (figura 1.2), onde propunha que o
espermatozide continha um indivduo completamente pr-formado em seu interior. O
desenvolvimento de novos indivduos seria, portanto, apenas uma questo de crescimento do
homnculo. O conceito do homnculo ia de encontro hiptese hereditria do preformacionismo.
necessrio aprimorar o sistema ptico. Os trabalhos tericos do fsico alemo Ernst Karl Abbe, em
conjunto com o desenvolvimento de um sistema adequado de lentes, pelo, tambm alemo, Carl
Zeiss, permitiram um avano extraordinrio no campo da microscopia. Zeiss construiu uma srie
de lentes que permitiram a obteno de imagens no limite terico da luz visvel. Era o incio de
uma nova era.
Em 1924, os cientistas franceses Antoine Lacassagne e Jeanne Latts, ao injetarem
polnio radioativo em ratos e coelhos, desenvolveram uma nova metodologia para a observao
de rgos e tecidos animais sob microscopia ptica. A nova tcnica foi denominada
autohistorradiografia e abria novas possibilidades de investigao celular e tecidual.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa sobre os istopos radioativos e a sua aplicabilidade
nas cincias biolgicas!
(Model A Coulter Counter) foi produzido pelo americano Wallace H. Coulter, no ano de 1953,
sendo utilizado na contagem de eritrcitos e leuccitos do sangue. Os modelos subseqentes
comearam a agregar novas possibilidades de anlises de parmetros celulares ao equipamento,
como o tamanho celular, por exemplo, e que culminaria, no final da dcada de 1960, com a
incorporao da fluorescncia, no modelo criado pelo alemo Wolfgang Ghde. O americano
Leonard Arthur Herzenberg, na dcada de 1970, estenderia, ainda mais, as aplicaes da
citometria de fluxo ao criar o Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS), um equipamento que
permite a seleo de clulas viveis com base em propriedades especficas a partir do uso de
sondas moleculares fluorescentes (anticorpos conjugados com corantes fluorescentes ou corantes
fluorescentes com especificidade para determinados alvos celulares e moleculares). Nascia o
nosso tempo.
Na primeira dcada do sculo XXI, ampliamos as possibilidades tecnolgicas criadas
pelos cientistas do sculo passado. Tornamos os processos mais geis e o mais importante:
diminumos o custo dos equipamentos e reagentes, permitindo que a cincia se tornasse universal
e fosse feita, com qualidade, em todos os recantos do planeta.
4. MTODOS DE ESTUDO DA CLULA
Vamos conhecer de perto alguns dos principais mtodos de estudo da clula. importante
que, ao final da unidade, voc seja capaz de identificar o mtodo mais adequado para cada
estudo, ou seja, a abordagem experimental que permita que o seu objetivo seja alcanado.
4.1. MICROSCOPIA
A primeira pergunta que devemos nos fazer : por que os microscpios so necessrios
para o estudo das clulas? Precisamos, ento, nos lembrar do tamanho mdio das clulas e do
limite de resoluo do olho humano. A maioria das clulas mede entre 1 e 100 micrmetros (M).
Uma bactria pode medir entre 0,5 e 1 M, enquanto que um vulo de um ourio-do-mar, pode
medir at 200 M (figura 1.4). As estruturas internas de uma clula so ainda menores: as
mitocndrias medem cerca de 200 nM; os ribossomos, cerca de 50 nm; e uma protena globular,
cerca de 5 nm. O limite de resoluo do olho humano de apenas 100 M, ou seja, necessria
a utilizao de um equipamento que permita ampliar as clulas e as suas estruturas internas para
que possamos observ-las e estud-las.
4.1.1 MICROSCOPIA PTICA COMUM
O microscpio ptico comum utiliza a luz do visvel como fonte luminosa. A inveno do
primeiro microscpio composto, no ano de 1590, creditada aos holandeses Hans e Zacharias
Janssen. Nestes 400 anos, o microscpio foi recebendo uma srie de aprimoramentos tcnicos,
tornando-se o brao direito do bilogo celular. A figura 5 mostra um microscpio ptico comum e
seus principais componentes.
da
espcie
Echinometra
lucunter
10
Lente Ocular
Lente Objetiva
(aumento em x)
(aumento em x)
10
40
5,3
10
10
100
2,12
10
20
200
1,06
10
40
400
0,53
10
100
1000
0,21
Dimetro do Campo de
Observao (mm)
A resoluo mxima obtida com o microscpio ptico limitada pelo comprimento de onda
da luz no espectro do visvel (entre 400 e 700 nm). Um conceito importante em microscopia o
limite de resoluo, que vem a ser a menor distncia entre dois pontos que permite uma distino
entre os mesmos (individualizao dos pontos). Sob condies timas (comprimento de onda de
0,4 m e abertura numrica de 1,4), o limite terico de resoluo do microscpio ptico 0,2 m.
Outro conceito importante em microscopia o poder de resoluo, que depende tanto do
comprimento de onda da luz quando da abertura numrica do sistema de lentes utilizado e
inversamente proporcional ao limite de resoluo, ou seja, quanto menor o limite de resoluo,
maior o poder de resoluo. O poder de resoluo expressa capacidade do microscpio em
detalhar, qualitativamente, uma imagem. A abertura numrica de uma lente objetiva corresponde
sua capacidade em captar luz. Quanto maior a abertura numrica de uma lente, maior ser o
seu poder de resoluo. Algumas lentes requerem o uso de leos de imerso (entre a lente e o
material a ser observado) para proporcionarem um aumento na abertura numrica e
conseqentemente aumentarem o poder de resoluo.
4.1.2. FIXAO E COLORAO
A fixao o processo pelo qual preservamos um material biolgico para posterior anlise,
sendo fundamental por impedirmos a degradao qumica ou microbiolgica do espcime de
interesse. Durante o processo de fixao importante preservamos as estruturas celulares o mais
prximo possvel das condies naturais, mantendo assim as suas caractersticas morfolgicas
originais.
A fixao pode ser obtida por processos qumicos ou fsicos. A fixao fsica mais comum
a fixao por calor, muito utilizada na preparao de esfregaos sanguneos utilizados nos
hemogramas. Entretanto, os processos de fixao qumica so os mais utilizados. A fixao
qumica pode ocorrer por promover a ligao cruzada entre macromolculas, como no uso do
formaldedo ou glutaraldedo, ou por ao de agentes precipitantes/desnaturantes, como o
metanol, o etanol, a acetona e cido actico.
A colorao uma tcnica que tem como objetivo aumentar o contraste entre os
componentes celulares, proporcionando, assim, uma melhor visualizao destas estruturas. As
estruturas subcelulares apresentam uma densidade ptica muito semelhante, o que dificulta a
identificao e a visualizao das mesmas sob microscopia. O emprego dos corantes na biologia
celular bastante amplo e permite a observao de uma vasta gama de molculas e estruturas.
No entanto, os corantes utilizados em microscopia ptica comum requerem que as clulas sejam
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Figura 1.6 Estrutura qumica da Safranina (A), Eosina (B) e Azul de Metileno (C). Fontes:
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Safranin_Cl.svg; http://en.wikipedia.org/wiki/File:Eosin_Y.png;
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Methylene_blue-2d-skeletal.svg
:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma relao de diversos corantes usado em
biologia celular, contendo a estrutura qumica e informaes sobre as suas
aplicabilidades:
Stains File http://stainsfile.info/StainsFile/dyes/dyes.htm
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Figura 1.7 Fotomicrografia de contraste de fase de uma clula epitelial da cavidade oral.
Modificado de http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cheek_cell_phase_contrast.jpg.
lucunter
48
horas
aps
13
14
comprimento
de
onda
do
verde.
seu
grupamento
cromforo
p-
criando
protenas
fusionadas
com
propriedades
fluorescentes.
:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma base de dados de corantes fluorescentes:
Table of Fluorochromes http://pingu.salk.edu/flow/fluo.html
15
184
microfotografias
em
srie.
As
da
espcie
Echinometra
16
17
:: TA NA WEB!!! ::
Nos links abaixo voc ir encontrar uma srie de textos, imagens e
animaes sobre microscopia.
Nobel Prizes Microscopes
http://nobelprize.org/educational/physics/microscopes/1.html
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Velocidade de Centrifugao
Precipitado
Baixa
1.000 x G 10 minutos
Mdia
20.000 x G 20 minutos
Alta
80.000 x G 60 minutos
Super alta
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa e descubra o que so microssomos!
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20
UNIDADE 2
BIOMEMBRANAS
1. VISO GERAL
As membranas presentes nos seres vivos so denominadas biomembranas. As
biomembranas so fluidos bidimensionais, constitudos por uma bicamada lipdica, com espessura
mdia de 5 nm, e protenas associadas. A unidade e coeso das bicamadas lipdicas so
mantidas graas s interaes hidrofbicas entre os lipdeos que constituem as biomembranas.
Cerca de cinqenta por cento da massa das biomembranas conferida pelos lipdeos. Estima-se,
tambm, que cerca de trinta por cento de todas as protenas celulares estejam associadas s
biomembranas. As biomembranas so responsveis pela compartimentalizao celular. A
membrana plasmtica (figura 2.1) estabelece o limite celular, ao separar o contedo intracelular
do meio externo, e encontrada em todos os tipos celulares. As membranas internas formam o
sistema de endomembranas. Tais membranas so responsveis pela compartimentalizao
intracelular, delimitando as organelas, e conseqentemente os processos celulares que ocorrem
em cada uma delas. O sistema de endomembranas encontrado somente em clulas
eucariticas.
As bicamadas lipdicas so assimtricas, apresentando uma composio diferente entre
as duas monocamadas, ou faces, que a constituem. Na membrana plasmtica, essa assimetria
notvel em relao aos lipdeos presentes na face exoplasmtica (localizada na superfcie celular)
e na face citoslica (voltada para o citosol).
21
3. ESTRUTURA DE BIOMEMBRANAS
22
Sub-Tipo
Lipdeo (Abreviao)
Fosfatidiletanolamina
Fosfoglicerdeos
(PE)
Fosfatidilcolina (PC)
Fosfatidilserina (PS)
Fosfolipdeos
Fosfatidilinositol (PI)
Esfingolipdeos
Esterides
Esfingomielina (SM)
Glicoesfingolipdeos
Colesterol
23
24
glicolipdeos
com
N-acetilgalactosamina
terminal,
assim
como
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:: SAIBA MAIS... ::
Aspectos moleculares do Sistema Sangneo ABO (Ana Carla Batissoco &
Mrcia Cristina Zago Novaretti, Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia,
2003, nmero 25, pg. 47-58) http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v25n1/v25n1a08.pdf
:: FIQUE DE OLHO!! ::
A membrana plasmtica marcadamente assimtrica com relao
composio dos lipdeos presentes nos dois folhetos. Na monocamada interna da
membrana
plasmtica
fosfatidiletanolamina
encontramos,
fosfatidilinositol,
predominantemente,
enquanto
que
na
fosfatidilserina,
monocamada
:: TA NA WEB!!! ::
No link abaixo voc vai encontrar uma srie de animaes na lngua
portuguesa sobre estrutura de biomembranas, alm de outros assuntos de Biologia
Celular. Bom proveito!
Cell Biology Animation em Portugus http://www.johnkyrk.com/index.pt.html
26
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Alm do papel estrutural dos lipdeos de membrana, essas molculas
tambm esto envolvidas em uma srie de processos celulares vitais. Faa uma
pesquisa e descubra outros papis biolgicos para os lipdeos de membrana. Como
sugesto, procure sobre o envolvimento dos seguintes lipdeos em outros eventos
celulares e fisiolgicos: fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ceramida, esfingosina-1fosfato, e glicolipdeos.
27
28
bicamada lipdica. De forma geral, a bicamada lipdica permevel aos gases, como o dixido de
carbono (CO2), o xido ntrico (NO) e o oxignio (O2), por exemplo; s pequenas molculas de
carter hidrofbico, como os hormnios esterides; ou molculas pequenas polares, mas sem
carga, como o etanol. A bicamada muito pouco permevel gua e praticamente impermevel
aos ons e s molculas maiores, polares ou no, tais como a glicose, lactose, frutose,
aminocidos e nucleotdeos. Como ocorre, ento, o transporte destas molculas atravs das
biomembranas? Conforme discutimos na seo anterior, uma das atividades biolgicas das
protenas da membrana justamente realizar o transporte de ons e molecular atravs das
bicamadas lipdicas, e isto feito pelas protenas multipasso.
O transporte atravs das biomembranas classificado de acordo com a necessidade
energtica para a realizao deste transporte. Assim, temos dois tipos de transporte: passivo e
ativo. No transporte passivo no h gasto de energia, uma vez que as molculas ou ons so
transportados do compartimento de maior concentrao (da molcula ou on) para o
compartimento de menor concentrao (quadro A - figura 2.6). Ou seja, este tipo de transporte
ocorre favor do gradiente de concentrao e pode ou no ser mediado por protenas da
membrana. Quando o transporte no mediado por protenas da membrana denominamos
difuso simples (transporte de - figura 2.6) e quando o mesmo mediado por protenas, ele
denominado difuso facilitada (transporte de z - figura 2.6). Quem facilita? As protenas, sem as
quais esse transporte no poderia ocorrer. A difuso facilitada pode ser mediada por: protenas
carreadoras, como, por exemplo, a protena GLUT-4, que o transportador de glicose encontrado
no tecido adiposo e muscular cardaco e esqueltico; ou por canais inicos, que, como o nome
sugere, so protenas envolvidas no transporte de ons atravs das biomembranas, ons, estes,
que apresentam uma distribuio bastante distinta entre o meio extra e intracelular, como pode
ser observado na tabela 2.3. Os canais inicos podem ser regulados de diversas formas: por
interao com ligantes extracelulares; por interao com ligantes intracelulares, por meio de
alteraes na voltagem da membrana; ou mecanicamente (estiramento da membrana).
ons
Sdio
145
15
Potssio
5,0
140
Clcio
1,0 a 2,0
10-4
Magnsio
1,0 a 2,0
0,5
Cloreto
110
5 a 15
Hidrognio
4 x 10
-5
7 x 10-5
29
por exemplo, so atradas com maior velocidade para um compartimento com predominncia de
cargas negativas.
No transporte ativo, as molculas ou ons so transportadas contra o seu gradiente de
concentrao (quadros B, C e D - figura 2.6). Este tipo de transporte requer um gasto energtico,
uma vez que promove a diminuio da entropia e, conseqentemente, o aumento da energia livre
do sistema. O transporte ativo pode ser dirigido por hidrlise de ATP (trifosfato de adenosina),
sendo classificado como Transporte Ativo Primrio (quadro B - figura 2.6), ou pode ser dirigido por
gradiente eletroqumico, denominado Transporte Ativo Secundrio (quadros C e D - figura 2.6),
uma vez que o gradiente eletroqumico utilizado neste tipo de transporte gerado por um
transporte ativo primrio dependente do ATP. As protenas que realizam o transporte ativo
primrio so conhecidas como ATPases de membrana ou Bombas. Entre estas protenas
podemos destacar: a) a Na+K+-ATPase, que, para cada molcula de ATP hidrolisada, realiza o
transporte de 3 ons Na+ para o meio extracelular e 2 ons K+ para o interior da clula; b) as
protenas da superfamlia ABC (do ingls ATP-binding cassetes), que constituem a maior famlia
de protenas de membrana, sendo encontradas desde bactrias at seres humanos, e esto
envolvidas no transporte de uma srie de molculas, desde hormnios, nucleotdeos, pequenos
peptdeos at xenobiticos; c) a bomba de Ca2 da membrana plasmtica e da membrana do
retculo sarcoplasmtico, responsveis pelos baixos nveis citoslicos deste on; d) a bomba de
prton da membrana lisossomal, que mantm o pH cido desta organela. No caso dos
transportadores secundrios, destacamos os trocadores inicos, o Co-transportador Glicose-Na+,
responsvel pela absoro de glicose no trato digestrio, e os Co-transportadores de aminocidos
e Na+.
Os transportadores da membrana tambm podem ser classificados quanto ao tipo e
direcionamento do transporte efetuado. Protenas que transportam uma nica molcula, sem
gasto energtico, so denominadas Uniporte (quadro A figura 2.6). J os co-transportadores so
denominados Simporte (quadro C figura 2.6), quando transportam uma molcula e um ou mais
ons diferentes na mesma direo, ou Antiporte (quadro D figura 2.6), quando transportam uma
molcula e um ou mais ons diferentes em direes opostas. No co-transporte, a passagem de um
on a favor do gradiente de concentrao fornece a energia necessria para o transporte acoplado
de outro on, ou molcula, contra o gradiente de concentrao.
30
31
UNIDADE 3
ENDEREAMENTO DE PROTENAS
1. INTRODUO
A sntese de protenas que so codificadas a partir do genoma nuclear, nos organismos
eucariotos, pode ocorrer tanto nos ribossomos livres no citosol quanto nos ribossomos aderidos
face citoslica da membrana do Retculo Endoplasmtico Granuloso. Nestes organismos, a
sntese protica tambm pode ocorrer nas mitocndrias ou nos cloroplastos, a partir das
informaes contidas no DNA presente nestas organelas. Nesta unidade vamos discutir como as
protenas que so sintetizadas no citosol so endereadas aos seus destinos finais.
A primeira questo que devemos fazer : como a clula sabe para onde uma
determinada protena deve ser endereada? A resposta simples: a clula no sabe. Bem, mas
se a clula no sabe, como a protena chega, ento, ao seu destino correto? Quem respondeu a
essa pergunta pela primeira vez foi o cientista alemo Gnter Blobel no ano de 1970. Blobel
verificou que determinadas protenas apresentavam sequncias especficas de resduos de
aminocidos como parte de sua estrutura primria, e que estas sequncias eram responsveis
pelo endereamento da protena para um determinado compartimento celular. Estas sequncias
funcionam como verdadeiros cdigos postais biolgicos e so conhecidas como sequncia sinal
ou peptdeo sinal. Pelas suas contribuies no campo da biologia celular, Blobel foi contemplado
com o Prmio Nobel de Medicina e Fisiologia no ano de 1999.
2. SEQUNCIAS SINAIS
O endereamento de uma protena ao seu destino final crucial para garantir clula que
todos os processos fisiolgicos ocorram de forma adequada. As protenas de localizao
citoslica so as nicas que no apresentam uma sequncia sinal. Tais protenas so sintetizadas
nos ribossomos livres no citosol. As protenas das mitocndrias, dos cloroplastos, dos
peroxissomos, e do interior do ncleo (nucleoplasma), so sintetizadas nos ribossomos livres no
citosol (figura 3.1A). Por outro lado, as protenas do retculo endoplasmtico, do complexo
golgiense, dos endossomos, dos lisossomos, das vesculas secretoras e da membrana
plasmtica, so sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da membrana do retculo
endoplasmtico granuloso (figura 3.1B). O aspecto granuloso do retculo endoplasmtico deve-se
justamente presena dos ribossomos envolvidos na sntese destas protenas. nesta regio do
retculo, conhecida como retculo endoplasmtico granuloso (REG), onde ocorre a sntese da
cadeia polipeptdica de forma simultnea ao transporte da mesma para o interior do retculo
endoplasmtico (lmen do retculo).
Diversas sequncias sinais j foram descritas. A tabela 3.1 apresenta uma relao de
algumas sequncias sinais caractersticas para o endereamento para alguns compartimentos
celulares, incluindo sequncias sinais de reteno de protenas no retculo endoplasmtico e de
exportao de protenas do ncleo para o citosol. Estudos modificando as sequncias sinais
demonstraram que pequenas alteraes nas sequncias podem comprometer o endereamento
correto destas protenas para o seu destino final. Alm do mais, a insero de uma sequncia
sinal em uma protena de localizao citoslica, pode direcionar esta protena para um
determinado compartimento celular.
32
Destino
Sequncia Sinal
~Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val~
Exportao do Ncleo
~Leu-Ala-Leu-Lys-Leu-Ala-Gly-Leu-Asp-Ile~
Transporte
para
Retculo H3N+-Met-Met-Ser-Phe-Val-Ser-Leu-Leu-Leu-Val-Gly-Ile-Leu-Phe-
Endoplasmtico
Reteno
Trp-Ala-Thr-Glu-Ala-Glu-Gln-Leu-Thr-Lys-Cys-Glu-Val-Phe- Gln~
Retculo ~Lys-Asp-Glu-Leu-COO- (protenas solveis do lmen)
no
Endoplasmtico
Transporte
para
Mitocondrial
Transporte
Peroxissomos
Matriz H3N+-Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-Ile-Arg-Phe-Phe-Lys-Pro-AlaThr-Arg-Thr-Leu-Cys-Ser-Ser-Arg-Tyr-Leu-Leu~
para
os ~Ser-Lys-Leu-COOH3N+-----Arg-Leu-X5-His-Leu~
3. ENOVELAMENTO DE PROTENAS
33
dobradas, prevenindo o seu transporte precoce para o complexo golgiense. Uma enzima bastante
importante no dobramento de protenas no lmen do retculo endoplasmtico a Dissulfeto
Isomerase, que catalisa a quebra e o estabelecimento de pontes de dissulfeto entre resduos de
cistena, permitindo o rearranjo correto destas pontes de dissulfeto e seu posterior enovelamento.
No enovelamento das protenas globulares, os resduos de aminocidos com cadeia lateral
hidrofbica tendem a ficar no interior da mesma, enquanto que os resduos de aminocidos com
cadeia lateral hidroflica tendem a ficar na superfcie das protenas, permitindo, assim, que a
protena seja solvel.
34
35
36
:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc encontrar ilustraes mostrando a forma de inseres
destas protenas na membrana do REG.
Protena unipasso com sequncia sinal clivvel
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2224
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f47.jpg
Protena unipasso com sequncia sinal interna
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2225
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f48.jpg
Protena multipasso
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2227
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f49.jpg
37
insulina liberada pelas clulas das Ilhotas de Langerhans em resposta ao aumento da glicose na
corrente sangunea.
Figura 3.4 Diagrama ilustrativo do trfego vesicular. VEx = via de exportao. VR = via de
recuperao. VEn = via endoctica. SC = secreo constitutiva. SR = secreo regulada.
:: FIQUE LIGADO!! ::
Os lisossomos so organelas ricas em enzimas responsveis pela
degradao de uma srie de substratos de origem extracelular. Entre as enzimas
lisossomais podemos destacar as nucleases, proteases, glicosidases, lipases,
fosfatases, fosfolipases e sulfatases. Estas enzimas so conhecidas como hidrolases
cidas, uma vez que as reaes catalisadas por estas enzimas so reaes de
hidrlise que ocorrem em meio cido. A hidrlise enzimtica consiste em uma reao
qumica catalisada por uma enzima que utiliza a molcula de gua para clivar outra
molcula. O pH cido dos lisossomos mantido por uma bomba de prtons que
transporta, ativamente, prtons H+ para o lmen lisossomal. As hidrolases cidas so
sintetizadas no REG e transportadas, por vesculas, at os endossomos tardios, vindo
a constituir os lisossomos.
38
:: FIQUE DE OLHO!! ::
Diversos processos fisiolgicos dependem da fuso das vesculas de
secreo regulada com a membrana plasmtica, entre os quais podemos destacar
a secreo de insulina, a neurotransmisso e a fertilizao. Em todos os casos, o
aumento da concentrao de ons clcio diretamente responsvel pela fuso das
vesculas secretoras com a membrana plasmtica.
:: TA NA WEB!!! ::
No
endereo
http://www.johnkyrk.com/golgiAlone.pt.html
voc
ir
:: PERGUNTAS?? ::
Tanto o retculo endoplasmtico quanto o complexo golgiense possuem
protenas que desempenham suas atividades nestas organelas, sendo conhecidas
como protenas residentes do retculo ou do complexo golgiense. Faa uma
pesquisa e descubra quais so os mecanismos responsveis pela reteno destas
protenas nestas organelas.
39
UNIDADE 4
RETCULO ENDOPLASMTICO E COMPLEXO GOLGIENSE
1. INTRODUO
Grande parte das protenas sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da
membrana do retculo sofrem alteraes estruturais durante ou aps a sntese. A modificao
mais marcante a adio de resduos de acares, em um processo conhecido como
glicosilao. A adio dos carboidratos pode ocorrer tanto no retculo endoplasmtico quanto no
complexo golgiense. Alm da glicosilao de protenas outros processos biolgicos relevantes
ocorrem nestas duas organelas. Nesta unidade vamos conhecer um pouco mais sobre o papel
biolgico e a organizao estrutural destes compartimentos celulares.
2. RETCULO ENDOPLAMTICO
O retculo endoplasmtico pode ou no apresentar ribossomos aderidos face citoslica
de sua membrana. Quando os ribossomos esto presentes, o retculo nomeado retculo
endoplasmtico granuloso (REG). Na ausncia dos ribossomos, o retculo denominado retculo
endoplasmtico no-granuloso (RENG). Esta feio estrutural facilmente visualizada atravs da
microscopia eletrnica de transmisso e apresenta uma relao direta com o papel biolgico desta
organela. O retculo endoplasmtico, seja granuloso ou no, constitudo por uma extensa rede
de membranas, em formato de sacos achatados, dispostos em forma paralela, como pode ser
visualizado na figura 4.1.
40
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa e descubra quais so as molculas secretadas pelos
tipos celulares citados no pargrafo anterior e a sua relevncia biolgica.
41
:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma animao mostrando, de forma
esquemtica, como ocorre a glicosilao de protenas no retculo endoplasmtico
granuloso e sua subseqente exportao para o complexo golgiense.
Protein Glycosylation Animation http://www.cdgs.com/popupbasic.html
42
:: SAIBA MAIS... ::
Nos hepatcitos, em especial, o RENG est envolvido em processos de
destoxificao celular, transformando substncias hidrofbicas em compostos com
carter mais hidrossolvel, permitindo, assim, a sua excreo, principalmente por via
renal. O complexo enzimtico responsvel por esse processo conhecido como
citocromo P450 (CYP). Apesar do fgado ser o principal local de destoxificao celular
mediada pelo citocromo P450, outros rgos tambm expressam o complexo
(pulmo, rins, pele, crebro e intestino). O complexo citocromo P450 catalisa a
oxidao de substratos orgnicos, tais como intermedirios metablicos de lipdeos e
esterides, assim como substncias exgenas (xenobiticos) potencialmente txicas.
O CYP est envolvido na biotransformao de uma srie de frmacos. Em alguns
casos, as reaes enzimticas mediadas pelo CYP levam inativao e excreo de
um frmaco, em outros casos, o CYP responsvel pela bioativao do frmaco a
partir da sua converso em um metablito ativo.
:: FIQUE DE OLHO!! ::
Em alguns tipos celulares, como as clulas musculares da musculatura
lisa ou estriada, o RENG denominado retculo sarcoplasmtico. Nestas clulas
o RENG responsvel pelo armazenamento e eventual liberao de ons clcio.
A membrana do retculo sarcoplasmtico rica em bombas de clcio (SERCA ou
Ca2+-ATPase do retculo sarco/endoplasmtico) que promovem o transporte dos
ons clcio do citosol para o interior do retculo. Quando as clulas musculares
so estimuladas, canais de clcio so abertos na membrana do retculo
sarcoplasmtico, promovendo o aumento da concentrao de ons clcio no
citosol e a conseqente contrao muscular. importante ressaltar que o
armazenamento de clcio no retculo endoplasmtico no uma exclusividade
das clulas musculares, pois tambm se faz presente nos mais diversos tipos
celulares.
43
5. COMPLEXO GOLGIENSE
5.1 UM POUCO DE HISTRIA...
O complexo golgiense foi identificado, no ano de 1898, pelo mdico e pesquisador italiano
Camilo Golgi. Golgi estava interessado no estudo da morfologia do tecido nervoso e as tcnicas
de colorao, vigentes na poca, eram insatisfatrias para uma adequada visualizao tecidual.
Assim, Camilo desenvolveu uma srie de tcnicas de impregnao destes tecidos com metais.
Uma destas tcnicas, denominada reao negra, onde o tecido era tratado com dicromato de
potssio e posteriormente impregnado com nitrato de prata, formando cromato de prata, permitiu,
ao pesquisador, a identificao de uma rede intracelular que ele denominou aparato reticular
interno. Nascia o complexo de Golgi, conhecido, hoje, como complexo golgiense (CG).
:: TA NA WEB!!! ::
Conhea um pouco mais da vida e da histria de Camilo Golgi e de suas
contribuies
para
as
cincias
biolgicas
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/articles/golgi/
leuccito
complexo
humano
golgiense.
evidenciando
Modificado
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Human_
leukocyte,_showing_golgi_-_TEM.jpg
44
o
de
Envelope
granuloso
no-granuloso
(3);
(4);
Retculo
Ribossomos
45
Figura 4.4 - Processamento de oligossacardeos N-ligados no complexo golgiense. A oligossacardeo com 10 resduos de acar (retculo endoplasmtico). B - oligossacardeo rico em
manose (complexo golgiense). C - oligossacardeo complexo (complexo golgiense). Asn - resduo de
asparagina da glicoprotena alvo. A linha negra contnua representa a cadeia polipeptdica da
glicoprotena.
46
47
UNIDADE 5
MITOCNDRIA
1. UM POUCO DE HISTRIA
A mitocndria (do grego, mitos, linha + chondros, grnulo) entrou para a histria da cincia
em 1857, quando foi descrita pela primeira vez por Albert von Klliker, que relatou a presena de
grnulos em clulas musculares. A primeira denominao da organela, no entanto, foi cunhada
pelo histologista alemo Richard Altmann em 1894. Ao observar que os grnulos presentes em
alguns tipos celulares; se assemelhavam a bactrias, Altmann denominou-os de bioblastos,
considerando-os como a unidade bsica da atividade celular (figura 5.1). O termo mitochondrion
foi atribudo pelo mdico e pesquisador alemo Carl Benda, em 1898. A organela, contudo, s
recebeu um destaque maior a partir da metade do sculo XX. A Bioqumica foi a grande
responsvel pelo crescente interesse na mitocndria, uma vez que o estudo do metabolismo
aerbico convergia para a organela.
Figura
5.1
Ilustrao
de
clulas
de
fgado
de
anfbio
ricas
em
bioblastos.
Die
No final do sculo XIX, os trabalhos de Louis Pasteur e Eduard Buchner davam incio ao
estudo do metabolismo glicdico, estudando o processo de fermentao em microorganismos e
extratos celulares. Franz Knoop, no incio do sculo XX, apresentava seus estudos sobre a
oxidao de cidos graxos. Estava pavimentada, assim, a estrada que levaria a bioqumica de
encontro mitocndria. Os anos 1930 e 1940 foram fundamentais para o desenvolvimento da
bioqumica. Os trabalhos de Gustav Embdem, Otto Meyerhoff, e Jacob Parnas (via glicoltica,
1930-40); Hans Krebs (ciclo da uria, 1932 - ciclo do cido tricarboxlico, 1937); Nathan Kaplan e
Fritz Lipmann (coenzima-A, 1945); e Severo Ochoa e Feodor Lynen (sntese do citrato, 1951)
conferiram uma nova dimenso ao estudo do metabolismo celular. A histria da mitocndria
caminhava de mos dadas com as vias metablicas: na medida em que se desvendavam etapas
nos processos de oxidao de substratos energticos, a mitocndria ia sendo revelada.
48
A mitocndria foi isolada pela primeira vez em 1934, por Robert Bensley e Normand Hoerr.
Entretanto, somente com o estabelecimento da tcnica de centrifugao diferencial, por Martin
Behrens, a partir de 1938, que foi possvel obter preparaes mais purificadas da organela. Os
trabalhos do bilogo belga Albert Claude, no incio dos anos 40, foram de suma importncia para
o desenvolvimento de tcnicas que permitiriam o isolamento de mitocndrias e demais
componentes intracelulares. George Hogeboom, Walter Schneider e George Emil Palade, no final
da mesma dcada, refinaram as tcnicas desenvolvidas inicialmente por Claude, permitindo,
enfim, os estudos com mitocndrias bioquimicamente ativas. Com a mitocndria em mos,
Eugene Kennedy e Albert Lehninger dariam o passo decisivo. Os trabalhos desenvolvidos por
estes autores, entre os anos de 1948 e 1950, demonstrando que o ciclo do cido tricarboxlico, a
-oxidao e a fosforilao oxidativa ocorrem na mitocndria, foram cruciais para que a organela
fosse abraada, definitivamente, por todos aqueles que estudavam o metabolismo celular,
tornando-se um domnio quase exclusivo da bioqumica. A avalanche de estudos bioqumicos com
a organela culminaria, anos mais tarde, na formulao da Hiptese Quimiosmtica, pelo cientista
britnico Peter Mitchell, que correlacionava a impermeabilidade da membrana mitocondrial interna
com o transporte de prtons (H+), a gerao de um gradiente eletroqumico, e a sntese de ATP.
Mitchell, a bioqumica, e a mitocndria foram contemplados, no ano de 1978, com o Prmio Nobel
em Qumica.
Contudo, a mitocndria no era estudada somente sob o ponto de vista energtico. Em
1957 o grupo do pesquisador belga Chvremont identificou a presena de cidos nuclicos em
mitocndrias de clulas musculares, o que levantou suspeita sobre a existncia de um DNA
mitocondrial (DNAmt). As suspeitas iniciais de Chvremont seriam confirmadas seis anos depois.
Em 1963, dez anos aps a descrio da estrutura molecular do DNA por James Watson e Francis
Crick, Margit Nass e Sylvian Nass, atravs da microscopia eletrnica, observam em mitocndrias
de clulas embrionrias de aves, filamentos que julgavam ser de uma molcula de DNA. A
confirmao veio logo em seguida, a partir do isolamento de DNAmt de diversos tipos celulares,
dando incio a uma nova fase no estudo da organela.
2. VISUALIZANDO A MITOCNDRIA
A microscopia ptica comum apresenta uma srie de limitaes para a observao da
mitocndria. Apesar das restries impostas, foi esta tcnica que revelou ao mundo essa
fantstica organela. O primeiro mtodo empregado na colorao da mitocndria, utilizando o
corante fucsina, foi desenvolvido por Altmann em 1890. Os estudos de Altmann possibilitaram a
identificao da organela em diversos tipos celulares. Hoje sabemos que a mitocndria
encontrada em praticamente todas as clulas eucariotas. Desde os primeiros e elegantes estudos
microscpicos da organela, realizados pelo casal norte-americano Warren Harmon Lewis e
Margaret Reed Lewis em 1914, utilizando o corante bsico verde janus, at os dias de hoje, a
viso da mitocndria sofreu vrias transformaes.
Com o desenvolvimento de mtodos adequados de fixao, e de cortes ultrafinos para a
microscopia eletrnica, George Palade e Fritiof Sjstrand descreveram, de forma independente,
no ano de 1953, o perfil estrutural bsico da organela (figura 5.2). Ambos os modelos descreviam
a existncia de uma membrana mitocondrial externa e de uma membrana mitocondrial interna,
esta, altamente dobrada e convoluta. Os modelos propostos por Palade e Sjstrand divergiam
apenas na interpretao das cristas mitocondriais, que Palade descreveu como baffle-like, e
49
Sjstrand, como septa-like. Porm, foi o modelo proposto por Palade que acabou prevalecendo
e sendo incorporado por toda a literatura cientfica.
50
membrana interna quanto a externa so bicamadas lipdicas, diferindo, entretanto, nas suas
composies lipdicas e proticas. Entre as duas membranas encontramos o espao
intermembrana (figura 5.3).
Figura
5.3
Esquema
ilustrativo
da
estrutura
mitocondrial.
Modificado
de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Animal_mitochondrion_diagram_en_%28edit%29.svg
51
52
:: SAIBA MAIS... ::
Outra classe de protenas presente na MMI representada pelas protenas
desacopladoras (UCP, do ingls uncoupling protein). Essas protenas, ao
promoverem o influxo de prtons atravs da MMI, por uma via alternativa a da ATPsintase, levam ao desacoplamento da cadeia respiratria, dissociando o transporte
de eltrons, na MMI, da fosforilao do ADP. Desta forma, parte da energia gerada
pelo influxo de prtons para a matriz convertida em calor. Ou seja, estas protenas
so termognicas. Cinco protenas desta famlia j foram descritas: UCP1, expressa
no tecido adiposo marrom e relacionada termognese; UCP2, de ampla expresso
fisiolgica; UCP3, expressa na tecido adiposo marrom e na musculatura esqueltica,
e tambm relacionada termognese; e UCP4 e UCP5, expressas no crebro, e
associadas tanto termognese quanto regulao de espcies reativas de
oxignio. A UCP3 tem ganhado algum destaque na literatura pela suspeita de seu
envolvimento no mecanismo de ao do hormnio tireoidiano T3 na elevao da
taxa metablica basal.
53
1000 cpias em uma nica clula. O processo de replicao do DNA, transcrio do DNA, e
sntese protica realizada a partir do DNAmt feito na prpria organela; no entanto, esse
processo controlado por protenas codificadas pelo DNA nuclear.
O genoma mitocondrial apresenta um nmero variado de pares de bases nuclicas de
acordo com a espcie. Em humanos, o DNAmt constitudo por 16.569 pares de base, ao passo
que em algumas plantas superiores, o DNAmt chega a ter at 2.500.000 pares de base. No
somente no nmero de nucleotdeos que o DNAmt varia entre as espcies. O prprio cdigo
gentico mitocondrial apresenta algumas diferenas entre organismos distintos. Por exemplo, a
sequncia de nucleotdeos AUA, que codifica o aminocido isoleucina, no DNA nuclear, codifica o
aminocido metionina em mamferos; o aminocido serina, em Drosophila; e o aminocido
arginina em fungos e vegetais superiores. O cdigo gentico mitocondrial tambm se apresenta
bastante variado entre as espcies com relao sua capacidade de codificar protenas. O DNA
mitocondrial da Reclinomonas americana capaz de codificar 67 protenas, enquanto que o
genoma mitocondrial do Plasmodium falciparum responde por apenas 3 protenas. Entretanto,
independentemente da sua capacidade de codificao, o genoma mitocondrial codifica,
essencialmente, componentes envolvidos na converso de energia pela clula. Durante a
evoluo, algumas espcies, como Saccharomyces cerevisiae perderam parte do contedo do
genoma mitocondrial, uma vez que nem o DNA mitocondrial, nem o DNA nuclear, contm o gene
que codifica o complexo I da cadeia respiratria.
4. TEORIA ENDOSSIMBITICA
As primeiras idias sobre uma origem simbitica para uma organela surgiram no final do
sculo XIX, nos trabalhos do botnico alemo Andreas Franz Wilhelm Schimper, ao estudar a
diviso dos cloroplastos em plantas verdes. No entanto, foi o cientista russo Konstantin
Mereschkowsky o primeiro a conceber a teoria simbitica, ao publicar, em 1905, um artigo onde
discorria sobre a natureza e a origem dos cromatforos (plastdeos) no Reino Plantae.
Mereschkowsky expos com extrema clareza a hiptese de que os plastdeos seriam derivados de
uma cianobactria endossimbitica. Nos ano de 1923 e 1927, o cientista norte-americano Ivan
Emanuel Wallin publica dois trabalhos fundamentais: The Mitochondria Problem e
Symbionticism and the origin of species; onde sugere uma origem simbitica bacteriana para a
mitocndria, em contrapartida para uma origem citoslica proposta por alguns pesquisadores da
poca. Mais ainda, Wallin sugeria que o surgimento de novas espcies poderiam estar associado
infeces repetidas de um protoplasma primitivo por uma bactria e que esta teria se tornado
parte do prprio protoplama com um simbionte. As propostas simbiticas de Mereschkowsky e
Wallin foram fortemente criticadas na poca. Sem bases moleculares para darem suporte teoria
proposta por estes brilhantes cientistas, a simbiose ficar esquecida por algumas dcadas, at que
a pesquisadora norte-americana Lynn Margulis ressuscita a idia da simbiose no ano de 1967, ao
tambm propor que a mitocndria teria se originado de uma bactria ancestral de vida livre. As
idias de Margulis sobre a teoria simbitica foram amadurecendo e culminaram com a publicao
do livro Symbiosis in Cell Evolution, no ano de 1981, onde a cientista expe definitivamente as
bases celulares e moleculares que suportam a teoria endossimbitica.
A teoria endossimbitica postula que a mitocondria teria se originado da endocitose de
procariotos heterotrficos por clulas eucariticas. Tais procariotos seriam organismos aerbicos,
que utilizam o oxignio para a converso energtica a partir de substratos orgnicos. A teoria
54
postula que os procariotos teriam passado a viver no citoplasma dos eucariotos, tornado-se, ao
poucos, dependentes, metabolicamente, da clula hospedeira. Por outro lado, a simbiose teria
proporcionado clula eucaritica hospedeira um incremento na disponibilidade de ATP para a
realizao das suas atividades fisiolgicas, refletindo, posteriormente, em um aumento do grau de
complexidade estrutural e funcional da mesma, e que culminaria com a formao dos primeiros
organismos eucariotos multicelulares. Acredita-se que grande parte do genoma do organismo
procarioto foi transferida para o genoma nuclear da clula eucaritica, o que notvel pela
dependncia da transcrio e traduo efetivadas a partir do DNA nuclear para a constituio da
organela, e consequente perda da redundncia gentica. Tal fato justificaria a perda de autonomia
das mitocndrias nos dias de hoje.
Diversas evidncias estruturais e funcionais suportam a teoria endossimbitica. Entre
estas, podemos destacar:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
55
56
UNIDADE 6
NCLEO
1. VISO GERAL
O ncleo foi a primeira organela a ser descrita. Antonie van Leeuwenhoek ao descrever a
presena de lumens, em hemcias de salmo, no sculo XVII, foi o primeiro cientista a notar a
presena do ncleo (figura 6.1A). Entretanto, foi o botnico escocs Robert Brown, na primeira
metade do sculo XIX, quem nomeou a organela ao estudar os rgos e a forma de fecundao
em orqudeas. Outro cientista que foi fundamental para a descrio da estrutura nuclear foi o
bilogo alemo Walther Flemming com os seus estudos sobre a diviso celular em diversas
espcies, onde apresentava belssimas ilustraes revelando os cromossomos e o nuclolo
(figura 6.1B).
Figura 6.1 Ilustraes originais dos trabalhos de Antonie van Leeuwenhoek (1719) e
Walther Flemming (1882). A Eritrcitos de Salmo; B Clula da Glndula Salivar de Larvas de
Chironomidae.
57
Figura
6.2
Esquema
ilustrativo
da
estrutura
nuclear.
Modificado
de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Diagram_human_cell_nucleus.svg
2. ENVELOPE NUCLEAR
O ncleo limitado por um sistema de duas membranas denominado envelope nuclear,
que formado pela membrana nuclear interna e pela membrana nuclear externa, sendo esta
ltima contnua membrana no retculo endoplasmtico granuloso. A face nucleoplasmtica da
membrana nuclear interna recoberta por protenas filamentosas denominadas laminas
nucleares. No envelope nuclear esto presentes os poros nucleares, estruturas proticas
responsveis pelo transporte de protenas e RNAs entre o nucleoplasma e o citoplasma (figura
6.3).
58
nucleares: lamina do tipo A, lamina do tipo B e lamina do tipo C. A lamina nuclear do tipo B uma
protena integral da membrana nuclear interna, ancorada por lipdeo. As laminas do tipo A e C so
protenas perifricas que se associam, por meio de ligaes no-covalentes, s laminas do tipo B.
A lmina nuclear formada pela polimerizao das laminas nucleares. A interao entre as
laminas que constituem a lmina nuclear fundamental para a estruturao do envelope nuclear.
Durante o processo de mitose, as laminas nucleares so fosforiladas em resduos especficos de
aminocidos. Essa fosforilao reduz a interao entre as laminas nucleares, desfazendo a lmina
nuclear e, por sua vez, o envelope nuclear. Este processo permite que o material gentico, com o
auxlio das protenas que constituem o microtbulo, migre para os plos da clula.
2.2. COMPLEXO DE POROS NUCLEARES
Os complexos de poros nucleares, ou simplesmente poros nucleares, so estruturas
proticas responsveis pelo transporte bidirecional de ons e molculas entre o nucleoplasma e o
citoplasma. Cada poro constitudo por cerca de 100 protenas, possuindo uma massa molecular
estimada de aproximadamente 125 milhes de daltons. As protenas que constituem os poros so
denominadas nucleoporinas. De forma geral, uma clula de mamfero contm entre 3.000 e 4.000
poros nucleares. No entanto, o nmero de poros presentes no envelope nuclear pode variar
conforme o tipo celular ou o estado fisiolgico do mesmo. Quanto mais ativo for o processo de
transcrio gnica em uma determinada clula, maior o nmero de poros presentes no envelope
nuclear.
Os poros nucleares medem cerca de 120 nm. No entanto, o dimetro do canal formado
pelo poro pode variar entre 9 e 50 nm. Pequenas molculas, com at 5.000 daltons, so
transportadas livremente pelos poros nucleares. Por outro lado, o transporte de protenas ou
subunidades ribossomais, requer mudanas conformacionais no poro, de forma a aumentar o
dimetro da luz do canal, permitindo o transporte de molculas de at 26 nm. Como vimos na
unidade 3, o transporte de protenas atravs do poro nuclear mediado por protenas
denominadas importinas ou exportinas. A interao das importinas com as fibrilas citoplasmticas
dos poros nucleares que vai promover as mudanas conformacionais no poro de forma a
permitir a abertura da luz do canal e o transporte das macromolculas para o nucleoplasma.
:: PERGUNTAS?? ::
Quais so as protenas que so importadas para o ncleo? Qual o papel
biolgico de cada uma destas protenas?
3. NUCLEOPLASMA
O nucleoplasma a regio delimitada pelo envelope nuclear que contm o material
gentico e as macromolculas associadas ao controle da expresso gnica. Vamos, agora,
conhecer um pouco sobre as principais estruturas presentes no nucleoplasma.
59
As histonas so protenas ricas em resduos de aminocidos bsicos na sua regio aminoterminal. As histonas que constituem o nucleossomos so denominadas histonas nucleossomais e
incluem as histonas H2, H3A, H3B e H4. A compactao da molcula de DNA deve-se interao
entre as cadeias laterais carregadas positivamente das histonas e os grupamentos fosfatos da
molcula de DNA. Apesar de no constituir os nucleossomos, a histona H1 tambm importante
para a configurao estrutural da cromatina, ao se associar fibra de cromatina e aos prprios
nucleossomos.
O grau de condensao da cromatina pode ser regulado de diversas formas. A regulao
da condensao da cromatina uma das formas que as clulas eucariticas possuem para
controlar a expresso gnica. A condensao da cromatina inversamente proporcional
capacidade de transcrio gnica, ou seja, os genes s podem ser transcritos quando localizados
em regies menos condensadas da cromatina. Duas enzimas so fundamentais no controle do
grau de condensao da cromatina. A histona acetiltransferase (HAT) a enzima responsvel
pela adio de grupamentos acetila cadeia lateral de resduos de lisinas nas histonas,
diminuindo a interao destas protenas com a molcula de DNA, e promovendo, assim, a
descondensao da cromatina. A enzima histona desacetilase (HDAC), por sua vez,
60
responsvel pela remoo dos grupamentos acetila, portanto, pelo aumento da interao das
histonas com a molcula de DNA e pela condensao da cromatina.
Sob o ponto de vista estrutural e funcional, a cromatina pode ser classificada em
eucromatina e heterocromatina. A eucromatina caracterizada, morfologicamente, sob
microscopia eletrnica de transmisso, como a regio mais clara e menos densa da cromatina.
Por outro lado, a heterocromatina a regio mais eletrodensa sob microscopia eletrnica,
refletindo um maior grau de condensao da cromatina.
Os cromossomos so formados pela compactao da cromatina, e so encontrados
somente na fase de mitose do ciclo celular. O grau de compactao observado entre a fibra de
DNA e os cromossomos de cerca de 10.000 vezes. Essa compactao fundamental para que
o material gentico seja distribudo de forma homognea e ntegra, aps a devida duplicao,
para as clulas filhas durante a diviso celular. A anlise do padro cromossomial de uma dada
espcie gera um perfil especfico que denominamos caritipo, que inclui o nmero de
cromossomos, o tamanho dos cromossomos, bem como a localizao dos centrmeros (regio de
unio das cromtides irms e onde ocorre a ligao das protenas que compem o fuso mittico)
(figura 6.5).
:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar uma tabela com o nmero de
cromossomos em diferentes espcies
http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_organisms_by_chromosome_count
3.2 NUCLOLO
O nuclolo a regio do nucleoplasma onde se localizam os genes que codificam para o
RNA ribossomal (RNAr), sendo, ainda, o local da biognese dos ribossomos. Aps transcrio
destes genes, pela enzima RNA Polimerase I, o RNAr processado e as subunidades
ribossomais montadas no prprio nuclolo. O nuclolo aparece, sob microscopia eletrnica de
transmisso, como uma regio bastante eletrodensa (figura 6.6). Apesar de parecer homogneo,
uma anlise mais detalhada do nuclolo revela que este apresenta regies bem definidas sob o
ponto de vista estrutural e funcional. A estrutura nucleolar pode ser dividida em: centros fibrilares
(local de concentrao de genes e RNA Polimerase I); componente fibrilar denso (local de sntese
61
:: PERGUNTAS?? ::
9
relevncia biolgica?
9
62
UNIDADE 7
SINALIZAO CELULAR
1. VISO GERAL
A sinalizao celular um mecanismo de comunicao entre as clulas que se encontra
presente nas mais diversas formas de vida, desde organismos unicelulares, como bactrias,
fungos e protozorios, at seres multicelulares. Em organismos procariotos, a sinalizao extra e
intracelular crucial para o controle de diversos processos, tais como a formao do biofilme e a
virulncia. J em organismos eucariotos unicelulares, a sinalizao celular pode ser responsvel
pelo controle da reproduo sexual ou dos mecanismos de diferenciao celular, sendo
geralmente controlada por fatores ambientais. A complexidade dos organismos multicelulares
exibe um elevado grau de sofisticao extremamente dos sistemas de sinalizao celular, que
esto presentes na fertilizao, desenvolvimento embrionrio, morfognese e organognese,
crescimento, regulao do perodo reprodutivo, resposta aos estmulos ambientais, manuteno
da homeostasia e outros processos vitais.
O mecanismo de sinalizao celular envolve a participao de uma clula sinalizadora,
responsvel pela produo e, na maioria dos casos, liberao de uma molcula sinalizadora,
denominada ligante, e uma clula-alvo, que apresenta receptores (protenas que reconhecem
especificamente o ligante) que sero responsveis pela propagao do sinal e conseqente
resposta celular. A natureza qumica dos ligantes bastante diversa, incluindo desde gases, como
o xido ntrico, at pequenas molculas hidrofbicas, como lipdeos e esterides, ou mesmo
peptdeos e protenas. Por outro lado, os receptores celulares so protenas especficas que
podem estar localizadas nas membranas celulares ou solveis no citosol ou ncleo celular.
Vamos, a partir da prxima seo, conhecer melhor estes mecanismos de sinalizao
celular.
63
64
Figura 7.1 Esquema ilustrativo das formas de sinalizao celular . (A) De contato; (B) Parcrina;
(C) Autcrina; (D) Endcrina.
65
:: FIQUE LIGADO!! ::
A diapedese (figura 7.2) um processo fisiolgico onde os glbulos brancos deixam
a circulao sangunea em direo a um tecido danificado ou infectado. O processo
comea com a expresso de protenas na superfcie da clula endotelial que
revestem internamente os vasos sanguneos. Estas protenas, denominadas
Selectinas, so reconhecidas por protenas integrais da membrana plasmtica de
certos leuccitos, conhecidas como Integrinas, que, em uma sinalizao do tipo
dependente de contato, promove a adeso do leuccito parede vascular do vaso e
uma profunda alterao morfolgica no glbulo branco, permitindo assim, que o
mesmo atravesse o endotlio capilar e chegue ao local da infeco ou do dano
tecidual.
66
A molcula sinalizadora (ligante) s capaz de induzir uma resposta nas clulas que
expressam o receptor especfico para aquela molcula sinalizadora. Assim, clulas que no
expressam o receptor no respondem ao sinal mediado pela molcula sinalizadora. Isso permite
com que os organismos multicelulares controlem qual(ou quais) tipo(s) celular(es) ir(o)
responder a um determinado estmulo, permitindo uma coordenao adequada do status
fisiolgico do organismo.
Uma mesma molcula sinalizadora capaz de induzir a resposta em diferentes tipos
celulares, desde que eles apresentem receptores especficos para a molcula sinalizadora, que
podem ou no ser do mesmo tipo (ou famlia). O tipo de resposta, em cada clula-alvo, neste
caso, ir depender da especificidade da clula-alvo. Um dos exemplos mais marcantes a
resposta acetilcolina pelas clulas musculares cardacas, clulas musculares esquelticas e
clulas das glndulas salivares. As clulas musculares cardacas e as clulas musculares
esquelticas possuem um tipo distinto de receptor da acetilcolina. Assim, enquanto que nas
clulas musculares cardacas, a acetilcolina promove o relaxamento muscular, nas clulas
musculares esquelticas, o estmulo pelo mesmo ligante promove a contrao da musculatura.
Por outro lado, as clulas das glndulas salivares possuem o mesmo tipo de receptor das clulas
musculares cardacas, e quando estimuladas pela acetilcolina respondem com a secreo salivar.
Sob o ponto de vista fisiolgico, geralmente, a resposta celular depende de um conjunto
de sinais mltiplos e no de apenas um nico sinal mediado por uma nica molcula. Ou seja, a
resposta final o somatrio de estmulos ao qual uma determinada clula est submetida. Em
alguns casos, a ausncia de um estmulo modifica completamente a fisiologia celular, podendo,
inclusive, levar a clula morte.
:: FIQUE DE OLHO!! ::
A velocidade de resposta de uma clula a um determinado estmulo
depende da presena (expresso), ou no, da(s) protena(s) envolvida(s) na
efetivao da resposta. A reposta pode ser imediata quando requerer apenas a
alterao da funo de uma determinada protena (protena envolvida na
resposta celular e que j se encontra expressa na clula). Por outro lado, a
resposta pode ser lenta quando o estmulo extracelular requerer a alterao da
expresso gnica, e conseqente sntese da(s) protena(s) envolvida(s) na
resposta celular. Na resposta imediata, a clula responde ao estmulo em
questo de segundos ou minutos, j na resposta lenta, o estmulo s se tornar
efetivo aps minutos ou horas aps a ativao do receptor e disparo da
sinalizao.
4. RECEPTORES CELULARES
Os receptores celulares so classificados com relao sua localizao celular, podendo
ser receptores de superfcie celular ou receptores intracelulares.
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68
:: SAIBA MAIS... ::
A propagao do sinal no interior da clula tem por objetivo final a alterao
da atividade de protenas responsveis pela resposta ao estmulo externo, ativandoas ou inibindo-as. Na sinalizao mediada por receptores com atividade enzimtica
do tipo cinase ou fosfatase, a alterao conformacional das protenas finais da
cascata de sinalizao (protenas da resposta) ocorre por ao direta das enzimas da
via de sinalizao (fosforilao ou desfosforilao), levando modificao do estado
fisiolgico da clula.
Em alguns casos, entretanto, a ativao de protenas da cascata de
sinalizao ou mesmo da protena envolvida na resposta celular mediada por
molculas que so geradas pela ativao do receptor pelo estmulo extracelular ou
por ons que tem a sua concentrao citoslica aumentada em resposta ao estmulo
do receptor e das protenas da cascata de sinalizao. Essas molculas ou ons so
denominados segundo mensageiros e incluem: carboidratos (trifosfato de inositol ou
IP3), lipdeos (ceramida, eicosanides, diacilglicerol ou DAG), nucleotdeos cclicos
(monofosfato de adenosina ou AMPc e monofosfato de guanosina ou GPMc) e ons
(clcio). O clcio se destaca entre os segundo mensageiros, sendo seu papel
relevante em diversas atividades celulares, tais como: contrao muscular,
proliferao celular e fertilizao, entre dezenas de outras. O aumento da
concentrao citoslica do on clcio ativa diversas enzimas, diretamente, ou
mediante a interao destas enzimas com uma protena intracelular denominada
Calmodulina. A ligao do on clcio com a Calmodulina, forma o complexo Ca2+Calmodulina, que responsvel pela ativao uma srie de protenas com atividade
cinase ou fosfatases.
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70
:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc vai encontrar timas animaes sobre
sinalizao celular. Aproveite e exercite um pouco sobre o seu conhecimento sobre a
lngua inglesa.
Receptores Acoplados Protena G:
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__membranebound_receptors_that_activate_g_proteins.html
Receptores Acoplados Protena G e Canais de Clcio
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__membranebound_receptors__g_proteins__and_ca2__channels.html
O Segundo Mensageiro AMPc
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__second_messenger_
_camp.html
Receptores Intracelulares e Controle da Expresso Gnica
http://glencoe.mcgrawhill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter9/how_intracellular_receptors_regula
te_gene_transcription.html
Comunicao Hormonal
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__hormonal_communic
ation.html
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UNIDADE 8
CICLO CELULAR
1. VISO GERAL
Os eventos celulares e bioqumicos responsveis pela gerao de duas clulas filhas, a
partir de uma clula-me, so conhecidos como ciclo celular. A diviso celular e a gerao de
novas clulas so fundamentais para diversos processos celulares, tais como: o desenvolvimento
embrionrio; o crescimento do organismo; a regenerao ou a renovao tecidual; a reproduo
assexuada, e a formao de gametas.
O ciclo celular da maioria das clulas eucariticas passa por uma sequncia comum de
eventos: crescimento celular; replicao do material gentico (DNA); distribuio do material
gentico para as clulas filhas (cromossomos); e diviso celular (citocinese). O ciclo celular
dividido em duas fases distintas: intrfase e mitose. Cada uma destas fases apresenta
caractersticas morfolgicas e bioqumicas tpicas. Tanto a interfase quanto a mitose so divididas
em subfases. A intrfase dividida em trs subfases: G1, S e G2. A mitose dividida em prfase,
pr-metfase, metfase, anfase e telfase (figura 8.1). O estado quiescente, no qual uma clula
no est em processo de diviso celular, denominado G0.
A durao do ciclo celular depende, essencialmente, do tipo celular. Clulas embrionrias
possuem um ciclo celular extremamente curto, que em alguns casos pode levar apenas 30
minutos. Por outro lado, uma clula de mamfero em cultura pode levar at 24 horas para
completar o ciclo celular. A fase mais demorada do ciclo celular a fase S (Sntese), onde ocorre
a duplicao do material gentico. As fases G1 e G2 recebem este nome por representarem um
intervalo (em ingls, gap) entre a fase S e a fase M (Mitose).
Figura 8.1 Fases e subfases do ciclo celular. I - Intrfase; M - Mitose; P - Prfase; PM - Prmetfase; MT - Metfase; A - Anfase; T Telfase. Modificado de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cell_Cycle_2.svg
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A diviso celular de organismos procariotos segue outro padro, tendo em vista que tais
organismos no possuem um sistema de endomembranas, e, portanto, no apresentam ncleo.
Nestes organismos, a diviso celular conhecida como fisso binria (uma forma de reproduo
assexuada), sendo caracterizada pela duplicao do material gentico, crescimento celular, e
diviso celular.
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divididas em duas classes: ciclinas G1/S, que inclui as ciclinas D, A e E; e a ciclina G2/M, que
inclui a ciclina B.
As ciclinas formam dmeros funcionais com protenas cinases especficas, conhecidas
como cinases dependentes de ciclina (cdks). A formao do dmero ativa as protenas cdks que
passam a adicionar grupamentos fosfato em seus substratos (fosforilao). A adio destes
grupamentos, em protenas-alvo especficas, responsvel pela progresso do ciclo celular,
regulando desde a replicao do DNA, na fase S, at a condensao da cromatina, o desarranjo
do envelope nuclear e a formao do fuso mittico na fase M.
J foram descritas mais de 10 ciclinas diferentes em clulas animais. A figura 8.2 ilustra a
expresso e formao dos dmeros ciclina-cdk nas diferentes fases do ciclo celular de mamferos.
Figura 8.2 Esquema representando a expresso das ciclinas e a dimerizao dos complexos
ciclina-Cdk durante as fases do ciclo celular de mamferos. Em G1, a ciclina D pode se associar tanto
com a cdk 4 ou a cdk 6.
4. INTRFASE
A intrfase comea com a fase G1, que caracterizada, morfologicamente, por um
crescimento celular. Nesta fase ocorre uma intensa atividade biossinttica, com gerao de novas
organelas e a sntese de protenas que sero fundamentais para a replicao do DNA que
ocorrer na fase subseqente do ciclo. A progresso para a fase S s ocorre aps a verificao
da integridade do DNA (primeiro ponto de restrio ou verificao). Esta verificao de suma
importncia para o sucesso do ciclo celular, pois a clula filha precisa apresentar as mesmas
caractersticas genotpicas e fenotpicas da clula me, garantindo o exerccio de todas as
atividades fisiolgicas inerentes ao tipo celular original.
Em casos de danos no DNA, protenas responsveis pelo sistema de reparo do DNA iro
promover a ativao de uma protena denominada p53. A p53 atua como um fator de transcrio
(protena responsvel por induzir a expresso de um determinado gene), levando expresso da
protena p21. Esta protena forma um trmero com o complexo ciclina D/cdk 4 ou 6, inibindo a
atividade cinase da cdk. Desta forma, o ciclo celular interrompido at que o dano possa ser
reparado. Caso o dano no seja passvel de reparo, a protena p53 ir induzir a expresso de
protenas pr-apoptticas, como a protena bax ou NOXA, que sero responsveis pela induo
da morte celular daquela clula.
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:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa e descubra a relao entre mutaes nas
protenas p53, Rb e ras e o desenvolvimento de tumores humanos!
Aps a verificao da integridade do DNA, a clula progride para a fase S, onde o DNA
ser, finalmente, replicado. Diversas enzimas so importantes nesta etapa, com destaque para a
DNA polimerase, enzima responsvel pela catlise da polimerizao dos dexorribonucleotdeos
em uma fita de DNA. Durante a fase S, a taxa de transcrio e traduo drasticamente reduzida,
mantendo-se apenas a sntese de protenas (histonas) que sero importantes para a montagem
da cromatina a partir do DNA recm sintetizado.
Ao entrar na fase G2, a clula verifica, atravs de um sistema enzimtico extremamente
qualificado, a integridade do DNA recm-sintetizado (segundo ponto de restrio ou verificao).
Nesta fase inicia-se a sntese de protenas que sero fundamentais para a mitose, como as
tubulinas, que constituem o microtbulo, estrutura responsvel pela formao do fuso mittico.
5. MITOSE
Apesar de ser a fase mais curta do ciclo celular, a mitose um das fases mais fascinantes
do processo de diviso celular, tendo em vista as evidentes alteraes morfolgicas que
representam esta fase. As diversas fases da mitose podem ser visualizadas, com o auxlio de
corantes, sob microscopia ptica comum. Uma das preparaes mais usuais feita a partir do
esmagamento da raiz de Allium cepa (cebola) e posterior colorao com azul de metileno. Como
vimos anteriormente, a mitose sub-dividada em diversas fases, que passaremos a estudar
agora.
5.1 PRFASE
A entrada na mitose marcada pelo incio da condensao da cromatina, dando origem
aos cromossomos, e pela duplicao dos centrossomos, que sero responsveis pela
organizao do fuso mittico. Os cromossomos duplicados so unidos por estruturas proticas
(complexo de coeso) em uma regio denominada centrmero. As protenas envolvidas na unio
das cromtides irms (como so chamados os cromossomos aps a formao dos pares) so as
coesinas. J a condensao da cromatina regulada pelas protenas chamadas condensinas.
importante ressaltarmos, aqui, que todas as feies morfolgicas da mitose dependem
diretamente, ou indiretamente, da atividade do complexo ciclina B/cdk1, que tambm conhecido
como fator promotor da maturao (MPF) por ter sido descoberto na maturao de ocitos de
anfbios durante a meiose.
75
5.2 PR-METFASE
A entrada na pr-metfase caracterizada pelo desarranjo do envelope nuclear, fruto da
fosforilao das laminas nucleares pelo complexo ciclina B/cdk1. Assim, o material gentico tem
acesso ao citoplasma, onde os cromossomos podero se unir aos polmeros do microtbulo, em
uma regio localizada no centrmero e denominada cinetcoro, para dar incio formao do fuso
mittico. Em alguns eucariotos unicelulares, como as leveduras, por exemplo, o envelope nuclear
permanece integro durante a mitose. Neste caso, os cromossomos migram para os plos opostos
do ncleo, onde se ligam poro interna do envelope nuclear. Este tipo de mitose denominado
mitose fechada em contraposio mitose aberta, onde o envelope nuclear desfeito.
5.3 METFASE
A metfase marcada pela localizao dos centrossomos nos plos da clula e pelo
alinhamento das cromtides irms no plano equatorial da mesma. O alinhamento das cromtides
na placa metafsica, atravs do fuso mittico, garante, ao processo de diviso celular, que o
contedo gentico, duplicado na intrfase, seja distribudo de forma homognea para ambas as
clulas filhas. O alinhamento das cromtides irms no plano equatorial uma condio essencial
para o prosseguimento do ciclo celular. Este requisito considerado o terceiro ponto de restrio
(ou verificao) do ciclo.
5.4 ANFASE
Caso as cromtides irms estejam devidamente alinhadas no plano equatorial da clula,
um complexo protico, denominado Complexo Promotor da Anfase, ser ativado. Este complexo
responsvel pela degradao das coesinas, e conseqente separao das cromtides irms,
alm de induzir a degradao proteoltica da ciclina B, dando incio ao processo de inativao do
complexo ciclina B/cdk1.
A separao das cromtides irms marca o incio da anfase. Logo em seguida, tem-se
incio o processo de encurtamento dos microtbulos ligados aos cinetcoros. Este encurtamento,
alvo da instabilidade dos microtbulos e que parece estar associado inativao parcial dos
complexos ciclina B/cdk1, responsvel pela movimentao dos cromossomos em direo aos
plos da clula, o que reforado, ainda mais, pelo movimento dos centrossomos em direo s
extremidades celulares por meio dos microtbulos astrais, que o conectam membrana
plasmtica. Assim, no final da anfase, os cromossomos duplicados na fase S esto dispostos
nos plos opostos da clula. Cada extremidade celular, contm, assim, uma cpia idntica do
material gentico da clula me.
5.5 TELFASE
Podemos conceber a telfase como um processo reverso quele iniciado na mitose: o
envelope nuclear reorganizado, o fuso mittico desfeito e os cromossomos so
descondensados. O envelope nuclear reorganizado a partir da fuso das vesculas originadas
do seu desarranjo durante a pr-metfase. Acredita-se que estas vesculas se liguem aos
cromossomos atravs das laminas nucleares, dando incio a um processo de fuso vesicular que
76
:: SAIBA MAIS... ::
Uma das formas mais comuns de anormalidade cromossomial a aneuploidia, onde o
nmero de cromossomos de um indivduo no corresponde ao encontrado na sua
espcie. Na aneuploidia pode ocorrer tanto uma subtrao quando uma adio no
nmero de cromossomos originais. A aneuploidia gerada durante o processo de
diviso celular meitico do zigoto, quando as cromtides irms no so corretamente
segregadas para os plos da clula. Dois motivos principais parecem estar
correlacionados com a gerao da aneuploidia: a preservao do centrmero no incio
da anfase ou ausncia de ligao de algum cromossomo ao fuso mittico. A
aneuploidia mais comum em humanos a trissomia do cromossomo 21, que
encontrada na Sndrome de Down. A aneuploidia tambm encontrada em algumas
patologias humanas, como em determinados tipos de cnceres, onde os tumores so
aneuplides.
Se voc quer conhecer mais sobre a Sndrome de Down visite o endereo
http://www.fsdown.org.br
6. MEIOSE
A meiose um tipo especial de diviso celular, essencial para a reproduo sexuada, e
que ocorre apenas nas clulas germinativas. A meiose responsvel pela formao de gametas
haplides, ou seja, com a metade do contedo cromossomial das clulas somticas. Ao final da
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meiose, quatro clulas filhas haplides so geradas a partir de uma nica clula me, em duas
divises celulares seqenciais (figura 8.4).
A meiose dividida em duas fases distintas: meiose I e meiose II. A meiose I tem incio
logo aps a duplicao do material gentico na fase S da intrfase, e dividida em quatro fases:
prfase I, metfase I, anfase I e telfase I. Durante a prfase I, os cromossomos homlogos so
pareados, ocorrendo a permuta de material gentico (recombinao ou crossing-over) entre
estes cromossomos. Essa permuta responsvel pela diversidade gentica proporcionada pela
reproduo sexuada. Ao fim da meiose I, cada uma das duas clulas filhas contm um membro
de cada par de cromossomos homlogos, consistindo, estes, de duas cromtides irms.
A entrada na meiose II ocorre sem que as clulas geradas pela meiose I entrem na
intrfase, ou seja, no ocorre uma nova duplicao do material gentico. Ao trmino da telfase I,
as clulas entram diretamente na prfase II, seguindo ento para a metfase II, anfase II, e,
finalmente, para a telfase II.
Na anfase II, as cromtides irms so segregadas para os plos da clula. Assim, cada
clula dever conter apenas uma cpia de cada cromossomo homlogo, ou seja, ao trmino da
meiose teremos 4 clulas haplides. A exceo fica por conta da formao dos ocitos, durante a
oognese, onde apenas 3 clulas so geradas. A diploidia restaurada por ocasio da fertilizao
e formao de um novo indivduo.
:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc ir encontrar uma srie de animaes sobre o
ciclo celular:
http://www.johnkyrk.com/mitosis.pt.html (em portugus)
http://www.cellsalive.com/cell_cycle.htm
http://nobelprize.org/educational/medicine/2001/
78
UNIDADE 9
CITOESQUELETO
1. VISO GERAL
O citoesqueleto um sistema de protenas filamentosas presente tanto em organismos
eucariotos quanto em organismos procariotos. O termo citoesqueleto (originalmente,
cytosquelette) foi cunhado pelo embriologista e zoologista francs Paul Wintrebert, no ano de
1931, ao acreditar na existncia de uma rede intracelular resistente e elstica.
O citoesqueleto constitudo por trs sistemas filamentosos: microfilamentos (filamentos
de actina), microtbulos e filamentos intermedirios. O citoesqueleto participa de uma srie de
eventos celulares dinmicos, tais como: a diviso celular; o transporte intracelular de vesculas; o
movimento flagelar ou ciliar; mobilidade celular, e a fagocitose. Sendo importante, ainda, para a
determinao do formato celular e por conferir proteo contra estresses mecnicos. Veremos,
agora, as principais caractersticas estruturais e funcionais de cada tipo de filamento que compe
o citoesqueleto.
(+)
extremidade
mais;
(-)
extremidade
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Actin_filament_atomic_model.png
79
menos.
Modificado
de
Os filamentos de actina podem estar associados a diversas protenas, que promovem, por
exemplo, a sua interao com a membrana plasmtica, a formao de malhas ou feixes de
filamentos, o deslocamento de um filamento sobre outro, ou o aumento ou diminuio da
estabilidade do polmero.
Os filamentos de actina so responsveis pela formao de projees da membrana
plasmtica em processos de migrao celular e fagocitose, alm da estruturao das
microvilosidades presentes em clulas epiteliais. A actina F tambm importante na determinao
do formato celular e no processo de clivagem celular que ocorre durante a citocinese.
3. FILAMENTOS INTERMEDIRIOS
Os filamentos intermedirios possuem um dimetro de cerca de 8 a 10 nm, situando-se
entre os filamentos de actina e os microtbulos. Estes filamentos so importantes na sustentao
e estruturao do envelope nuclear, na coeso entre clulas epiteliais (junes clula-clula) e na
resistncia mecnica contra estresses fsicos. Os filamentos intermedirios so formados por uma
grande e diversa famlia de protenas fibrosas, que so classificadas em 6 tipos diferentes de
acordo com as homologias das sequncias de DNA e resduos de aminocidos (tabela 9.1).
Existem pelo menos 65 genes codificantes para protenas que constituem os filamentos
intermedirios em humanos. As protenas que formam os filamentos intermedirios no
apresentam stios de ligao a nucleotdeos, como as protenas relacionadas aos microfilamentos
ou aos microtbulos. A formao do polmero ocorre a partir de uma associao antiparalela
retorcida do tipo cabea-cauda, onde o domnio amino-terminal de uma cadeia polipeptdica
encontra-se justaposto ao domnio caboxi-terminal da outra cadeia.
TIPO
Protenas
Expresso
Queratinas cidas
Clulas epiteliais
II
Clulas epiteliais
Vimentina
Desmina
Clulas musculares
Periferina
Neurnios perifricos
Clulas da glia
-Internexina
Neurnios
Neurnios
III
IV
V
VI
Nestina
Clulas-tronco
de
diversos
tecidos
Sincoilina
Neurnios
Clulas musculares
Laminas nucleares
Expresso ubqua
Filesina
Faquinina
80
(nervoso,
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Existem mais de 30 patologias associadas a mutaes em genes que codificam para
protenas que constituem os filamentos intermedirios. Faa uma pesquisa e
descubra quais so as consequncias do comprometimento funcional destas
protenas.
:: TA NA WEB!!! ::
No endereo abaixo voc encontrar ilustraes sobre o modelo
organizacional dos filamentos intermedirios:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=cooper&part=A1808&rendert
ype=figure&id=A1813
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2957&rendert
ype=figure&id=A2984
4. MICROTBULOS
Os microtbulos so a terceira classe de protenas que constituem o citoesqueleto. O
dimetro mdio de um filamento de microtbulo de aproximadamente 25 nm, sendo o mais
espesso de todos os filamentos que compem o citoesqueleto. Os microtbulos esto envolvidos
em diversos processos celulares, incluindo a formao do fuso mittico durante a diviso celular, o
81
trfego intracelular de vesculas e organelas, e a formao dos clios e flagelos das clulas
eucariticas.
Assim como nos filamentos de actina, o microtbulo tambm formado pela polimerizao
de protenas globulares. Estas protenas, denominadas tubulinas e , formam os heterodmero
responsveis pelo elongamento do filamento. Os microtbulos, da mesma forma que a actina F,
tambm apresentam uma estrutura polarizada, onde a adio das subunidades de tubulina ocorre
na extremidade mais (+), e a dissociao destas subunidades, na extremidade menos (-). A
adio do heterotrmero ao polmero mediada pela ligao das subunidades de tubulina com o
trifosfato de guanosina (GTP). Aps a incorporao do heterotrmero no filamento, o GTP
hidrolisado em difosfato de guanosina (GDP), o que afeta a estabilidade do heterodmero no
filamento e permite uma eventual separao do mesmo. Este processo conhecido como
instabilidade dinmica e fundamental para todos os processos biolgicos regulados pelos
microtbulos.
A nucleao e organizao dos microtbulos ocorrem em regies especializadas no
citoplasma, denominadas centros organizadores dos microtbulos, e inclui os centrossomos,
estrutura supramolecular composta por um par de centrolos e os corpsculos basais. A protena
responsvel pela na nucleao dos microtbulos, nos centrossomos, a tubulina .
:: SAIBA MAIS... ::
Os microtbulos so o alvo farmacolgico de uma srie de frmacos
utilizados no tratamento de tumores humanos, entre os quais podemos citar a
vimblastina, a vincristina e o taxol. Faa uma pesquisa e descubra as bases
moleculares da utilizao destes compostos no tratamento do cncer.
5. CITOESQUELETO EM PROCARIOTOS
Os elementos do citoesqueleto presentes nos procariotos so importantes para a diviso
celular, e para a determinao do formato e da polaridade celular. Os componentes do
citoesqueleto dos organismos procariotos so semelhantes aos encontrados nas clulas
eucariticas. A protena FtsZ, por exemplo, responsvel pela formao do anel contrctil durante
a diviso celular, de forma semelhante ao anel de actina e miosina presente nas clulas
eucariticas. Duas outras protenas, denominadas MreB e crescentina, so responsveis pelo
formato celular no-esferoidal de algumas bactrias. A MreB se assemelham, estruturalmente,
actina, enquanto que a crescentina assemelha-se aos filamentos intermedirios, sendo
encontrada nas espcies Caulobacter crescentus e Helicobacter pylori.
5.1 PROTENAS MOTORAS
As protenas motoras so protenas associadas aos microtbulos ou aos filamentos de
actina, e que ao interagirem com outras protenas, organelas ou vesculas, permitem a
movimentao estas estruturas pela clula.
A protena miosina a protena motora associada aos filamentos de actina. Inicialmente
descrita em clulas musculares, sabemos, hoje, que a miosina encontrada nos mais variados
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