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Identificacin de Aminocidos y

Protenas
Nombre: Denise Moreta
Fecha:16/mayo/2011

1. Reaccin de Ninhidrina
Reaccin para la deteccin de
aminocidos, actualmente acoplada
a
sistemas
de
valoracin
automtica Tiene como objetivo
detectar y cuantificar cantidades de
aminocidos
libres.
Los
aminocidos, en general reaccionan
con la ninhidrina cuando son
calentados con un exceso de la
misma. Todos los aminocidos que
poseen un grupo amino libre
reaccionan y forman dixido de
carbono, amonaco y un aldehdo
que contiene un tomo de carbono
menos que el compuesto original.
Esta reaccin da lugar a la
formacin de un producto color
azul o prpura (que posteriormente
puede ser utilizado para cuantificar
el aminocido). En el caso de la
prolina, que estructuralmente no
posee el grupo amino libre, sino un
grupo imino, la coloracin final es
amarilla. El amonaco, la mayora de los polipptidos y las protenas pueden desarrollar
coloracin en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos, no liberan CO 2. La
coloracin azulada o violeta ser proporcional a la concentracin del aminocido.
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un oxidante energtico que por una
desaminacin oxidativa de los aminocidos conduce a la formacin del aldehdo
correspondiente, con liberacin de amoniaco y gas carbnico y formacin de la ninhidrina
reducida o hidrindrantina. La molcula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina,
condensa a travs del amoniaco produciendo una estructura denominada indanona o prpura
de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en
menor medida para la histidina. Presenta su mximo de absorbancia a los 570 nm,
exceptuando los tres aminocidos reseados anteriormente.

2. Reaccin de Biuret
El nombre de la reaccin procede del compuesto
coloreado formado por la condensacin de dos molculas
de urea con eliminacin de amonaco. Esta reaccin est
dada por aquellas sustancias cuyas molculas contienen
dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a
travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno. El
reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solucin acuosa
alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La
reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
Esta ltima reaccin provoca un cambio de coloracin: violeta prpura o violeta rosado.
Debe sealarse que el color depende de la naturaleza de las protenas; protenas y pptidos
dan un color rosado; la gelatina da un color azul.

3. Reaccin de Milln
La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula
proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como la
tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos
compuestos, slo la tirosina est presente en las protenas, de manera que slo las protenas
que tienen este aminocido ofrecen resultados positivos.
En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico del
reactivo) se condensan con el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo
o rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en
gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve
negativo, razn por la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina. Debe
tomarse en cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina, debe ser
previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en forma de xidos
amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado blanco que
progresivamente por accin del calor se torna rojo; pero las peptonas dan solamente una
solucin de color rojo.

4. Reaccin de Xantoproteica
Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos (tirosina, fenilalanina, triptfano. Esta
reaccin se debe la presencia de un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de
la molcula proteica que son de importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano.
La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio. Para esta
prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos
obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio
fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse
esa reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin final.

Las protenas que tienen en su composicin estos aminocidos tambin darn la reaccin.
La positividad se reconoce por la aparicin de un color amarillo o verde debido a la
formacin de nitrocompuestos

5. Prueba de los grupos SH:


Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que los contienen, se
reconocen por la formacin de una coloracin negra o gris.

4. Prueba de Sakaguchi
Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el grupo guanidinio como la
arginina ya que casi todas las protenas poseen ese aminocido.El reactivo que se utiliza
contiene -naftol e hipoclorito sdico, en medio alcalino. La aparicin de una coloracin
roja es indicativa de una reaccin positiva. El desarrollo de un color rojo marca la reaccin
positiva y se debe a la presencia del grupo guanidina, que caracteriza la arginina.

4. Reaccin de Xantoproteica
Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Esta reaccin se debe la presencia de
un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de
importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en
las condiciones que se realiza en el laboratorio.
Para esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos
obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio
fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse
esa reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin final.

5. Prueba de Hopkin-Cole

Implica la reaccin del grupo indol del triptofano con el cido glioxlico y las protenas que
lo contienen, en presencia de cido sulfrico concentrado. La positividad se reconoce por la
aparicin de un anillo color violeta-rojizo.

6. Prueba de Jaff
Si acontece la aparicin de una coloracin roja, se tratar de una prueba positiva para la
creatinina. Puede ser leda a 520 nm, detectndose hasta 5 g/mL.

7. Prueba de coagulacin:
Es una prueba para identificar: albminas, globulinas, glutelinas y prolaminas. La
positividad se manifiesta por la formacin de un cogulo. No se conoce exactamente el
mecanismo de reaccin, se cree que ocurre cierta deshidratacin de la molcula proteica.

8. Prueba de Sulfato de amonio:


Las protenas, como otros coloides son precipitadas por soluciones concentradas de sales de
amonio [NaCl. (NH4)2SO4 y NaSO4 ]. Aparentemente la precipitacin se debe a la
neutralizacin y deshidratacin de la molcula, seguida de agregacin y precipitacin.

9. Reaccin de Ehrlich
La presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados en la cadena lateral de los
Aminocidos se puede identificar mediante la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de
Sodio por formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo as detectar
la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando pptidos y protenas.
Bibliografia:
http://es.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADES-QUIMICAS-Y-FISICOQUIMICASDE-LAS-PROTEINAS

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