Sie sind auf Seite 1von 13

CURS 7

COCI PATOGENI
STAPHYLOCOCCUS
Definiie, taxonomie.
Stafilococii fac parte din familia Micrococcaceae, genul Staphylococcus.
Pn n anul 1997 au fost individualizate 33 de specii, dintre care 16 specii au fost izolate
de la om: Staphylococcus aureus i 15 specii de stafilococi coagulazo negativi.
Speciile de important medical sunt: Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis (care face parte din flora indigen), Staphylococcus saprophyticus care poate da
afeciuni n sfera uro-genital.
Caractere generale:
Caractere morfologice
Sunt coci Gram pozitivi, cu dim. de 0,8-1,5m, n diplo sau grmezi neregulate (staphylos =
ciorchine), necapsulati (cei mai multi), imobili, aerobi, facultativ anaerobi, saprofii sau patogeni.
Posed: catalaz, coagulaz, fosfataz, descompun glucoza prin fermentaie.
Caractere de cultur
Cresc pe medii simple i n special pe mediile hiperclorurate (10-15% NaCI).
Pe mediile solide formeaz colonii de tip "S" (smooth = neted).
Elaboreaz pigmenti endogeni:
- S. aureus elaboreaz pigment auriu
- S. epidermidis pigment alb i
- S. saprophyticus pigment galben.
Caractere biochimice
- elaboreaz pigmeni: auriu, alb, galben ;
- elaboreaz hemolizine alfa, beta mai puin gamma i delta;
- sunt rezisteni la NaCI pn la 15 % ;
- fermenteaz glucoza, fermenteaz manita;
- produce coagulaz, fibrinolizina, catalaz, fosfataz, mai ales tulpinile patogene pentru om.
Habitat
S. aureus colonizeaz nrile, colonul de unde contamineaz frecvent tegumentul.
S. epidermidis se gsete pe tegumente i mucoase, este prezent n infectiile intraspitaliceti
(nosocomiale) sau n infecii grave la persoane tarate.
S. haemolyticus a fost dingnosticat n: endocardit, septicemii, peritonit, ITU, plgi chirurgicale.
S. soprophyticus este diagnosticat n ITU, uretrite negonococice, prostatite, infectii ale plgilor,
uneori n septicemii.
Rezistent
- rezist la uscciune i ntuneric;
- sunt sensibili la dezinfectante i antiseptice n concentraii uzuale;
- ctig uor rezistenta la antibiotice;
- sunt distrui n 15 min la 55-60C;
- pasteurizarea este eficient.
1

Diagnosticul de laborator este bacteriologic


1. Recoltarea produselor patologice, n functie de afectiunea suspectat.
2. Examinarea macroscopic i microscopic (prin examen direct) a produsului patologic.
3. nsmntarea i izolarea (in funcie de produsul patologic).
4. Interpretarea rezultatelor
- Dup incubare la 37C 24-48 h, n bulion stafilococii tulbur uniform mediul, formnd un
depozit la fundul eprubetei.
- Pe geloz (mediul solid), dupa incubare 24-48h la 37C n aerobioz, apar colonii ce dim. de 12 mm "S", dar pot s fie i "R" (rough), "M (mucoase), "G" (glossy), n functie de morfologie.
- Pe geloz snge 5-7%, stafilococii patogeni produce hemoliz, care poate fi alfa, iar dup
prelungirea incubrii nc 24 h va aparea,o hemoliz beta (complet) n jurul coloniei.
- Tulpinile animale produc o beta hemolizin, care determin o hemoliz de tip cald-rece.
- Pe mediul solid cu manit (Chapmann) stafilococii pot fermenta manita dezvoltnd colonii
galbene, care de cele mai multe ori sunt patogene.
5. Caractere de patogenitate
Teste de patogenitate "in vitro''
a. Testul de pigmentogenez
b. Testul hemolizei
Stafilococii patogeni elaboreaz alfa hemolizina, care produce hemoliza total a hematiilor (beta
hemoliza).
c. Testul coagulaze: pe lam (Clumpinq factor) pentru coagulaza legata i n tuburi pentru
coagulaza liber.
d. 97 % dintre stafilococii patogeni elaboreaz coagulaza.
e. Testul fibrinolizinei
f. Testul evidentierii catalazei cu peroxid de hidrogen 30%.
g. Testul fosfatazei , folosete agar cu fosfat de fenolftalein 0,01>%.
Teste de patogenitate "in vivo'
- Administrarea toxinei stafilococice i.d. la iepure, pune n evident actiunea dermonecrotic,
prin aparitia unei zone de necroz la locul de inoculare.
- n cazul TIA, tulpina izolat din materiile fecale, vrsturi sau alimentele incrimmate, se
nsmneaz pe geloz semisolid 0 5% , se incubeaz n atm de 20% CO2 48h.
- Cultura se filtreaz i se fierbe 30 min la 100C.
- n acest fel, n filtrat rmne activ numai toxina stafilococic care rezist la fierbere i se va
pune n evident prin testul Domnan.
Testul Dolman: se inoculeaz la pisoi tnr, 1-3 ml filtrat, intraperitoreal, dup 15-20 min, apare
o stare de agitatie, nelimte, urmat de contractia muchilor abdominali, diaree, varsturi,
somnolenta. Dup 24-48 h animalul i revine la normal.
6. Testarea sensibilitii la antibiotice
- Se poate face prin antibiograma disc-difuzimetric pe mediul solid MellerHinton, sau prin E
test (unde se poate cunoate i CMI).
- Se folosesc substante antibacteriene din familiile: -lactamine simple sau n asociere cu
inhibitori de -lactamaze, aminoglicozide, macrolide, sulfamide, rifampicin, qhinolone.
Boala la om
2

La oameni, stafilococul poate provoca mai multe afeciuni:


- afeciuni cutanate: furuncule, foliculite, hidrosadenit, sicozis:
- bacteriemii, septicopiemii cu localizri viscerale: angine, otite, meningite, sinuzite;
- poate suprainfectia plgile tuturor leziunilor deschise;
- tulpinile care elaboreaz enterotoxina poate provoca TIA: sindromul pielii oprite (Lyell),
produs de o toxin cu aciune exfoliativa a supraepidermului (epidermolizina) / / - sindromul se
oc toxic stafilococic, produs de toxine endo i exotoxine;
- enterita stafilococic n urma administrarea ndelungate a antibioticelor (disbioze).
STREPTOCOCCUS
Streptococii fac parte din familia Streptococcaceoe, genul Streptococcus, unele specii
sunt patogene, altele fac parte din flora indigen a orofaringelui, tractului intestinal, pielii.
Cele mai importante specii pentru patologia uman sunt:
- Streptococcus pyogenes,
- Streptacoccus agalactiae,
- Enterococcus,
- Streptococii viridans,
- Streptococcus pneumoniae.
Morfologie:
Sunt coci dispui n lanturi, Gram pozitivi, sunt saprofii, patogeni sau condiionat patogeni.
Au dimensiuni de 0,5-1 m, au n peretele bacterian o concentratie de murein mare (80%), sunt
imobili, nesporulati, uneori pot prezenta capsul, ce le confer o mare virulenta.
Habitat: sunt ubiquitari (ntlnii peste tot) i n special pe tegumente i mucoase.
Caractere de cultur
Se cultiv pe medii lichide (bulion glucozat cu azid de sodiu i cristal violet 1/4000 cu 5%
snge ), iar pe mediu solid, geloz snge 5% (se recomanda sange de berbec), care poate s
contin cristal violet 1/4000 i acid nalidixic, mediu selectiv pentru streptococi.
Pe mediul lichid
Cei care au capsul (foarte patogeni) dau o turbiditate omogen mediului - formele 'S"sau sub
form de flocoane care se depun pe pereti sub form de fulgi i las un sediment pe fundul
eprubetei - formele "R".
Pe mediile solide
- Streptococii patogeni pe geloz-snge dau colonii de tip "S",
- cei care au capsul au aspect de colonii M",
- colonii mate (matt") rotunde, cu margini regulate, cu suprafaa mamelonat, de consistena
apoas cu tendint la confluena, care d aspectul de hart geografic, aspectul este determinat de
streptococii virulenti, care contin substana M:
- colonii glossy "G" rotunde, mici, cu suprafata bombat, lucioas, translucid, conin forme mai
putin virulente;
- colonii "R' (rough), uscate, cu margini neregulate, cu suprafete rugoase, forme degradate fr
structur antigenic.

Caractere de hemoliz
Dimensiunile coloniilor de streptococ sunt mult mai mici (cca. 0,5 mm) dect de
stafilococ (care au un diametru de 0,5-2 mm), sunt incolore i dau hemoliz.
n functie de elaborarea hemolizinei streptococii se mpart n 4 categorii:
1. Streptococi hemolitici (eloboreaz hemolizina ) ei metabolizeaz incomplet hemoglobino
i dau o culoare verde n jurul coloniilor.
Din aceast categorie fac parte streptococii viridans, ei sunt saprofii, condiionat patogeni.
2. Streptococii 1 hemolitici (elaboreaz hemolizina l ), ei metabolizeaz complet
hemoglobina, dar este o hemoliz n care mai sunt hematii nehemolizate - incomplet, marginile
coloniei sunt neclare.
n aceast categorie intr serogrupurile B i D streptococice, sunt saprofite sau condiionat
patogene.
3. Streptococii , hemolitici (elaboreaz hemolizina ), dau hemoliz beta, care este complet,
foarte ntins, coloniile avnd marginile clare.
Din aceast categorie fac parte serogrupurile: A(care este totdeauna patogen), C. G.
4. Streptococii , sunt nehemolitici, nu elaboreaz hemolizine, n aceasta categorie sunt multe
tulpini din serogrupul D.
Caractere biochimice
- elaboreaz hemolizine sau (, 1, , ) nu produc.
- sunt aerobi, dar pot fi si microaerofili sau chiar facultativ anaerobi cum sunt cei din grupul D
care sunt enterococii.
Rezistenta
- au rezistenta scazuta sunt distrusi de razele ultrviolete, dezinfectante si antiseptice la
concentratii uzuale;
- sunt distrusi la 55oC timp de 20 min.;
- Streptococul din grupa A este sensibil la pencilina G, care se administreaz parenteral/oral
- Streptococul din grupa B este rezistent la concentntii mari de NaCI 6.5%, la variatii mari de
temperetura, la actiunea bilei si a sarurilor biliare (ca si viridans), si la actiunea multor
antibiotice.
Structura antigenic
Streptococii au antigene somatice si solubile.
1. Antigene somatice:
a) Antigenul capsular, la cei cu capsula (formata din acid hialuronic)si care poate fi distrus de o
enzima proprie hialuronidoza.
b) Anigenul M se gaseste pe suprafata peretului, pe baza acestui antigen se imparte in 65 de
serotipuri iar organismul produce anticorpi anti- M.
c) Carbohidratul C (se gsete n profunzimea peretelui bacterian).
Pe baza atestui antigen, streptococii se mpart in 19 serogrupuri (notate de la A-W cu ex literelor
I i J), este clasificarea lui Lancefield, de aici lipsesc streptococii viridans care nu au substana
C.
2. Antigene solubile
Exotoxina se numete eritrotoxina are afinitate pentru piele, determin exantem (la nivelul
pielii), sau enantem (la nivelul mucoaselor).
4

Exotoxina apare doar cnd streptococii sunt lizogeni, deci purttori de bacteriofag. Exotoxina
determina scarlatina, exotoxina este aceeai pentru totii streptococii, de aceea anticorpii antiexotoxina, ofer protectie.
Alte antigene solubile:
- hialuronidaza,
- fibrinolizinele: streptolizina O, care va determina organismul s rspund prin formare de
anticorpi (ASLO) i streptolizina S care este responsabila de -hemoliz, proteinaze, DN- i RNoze,carbohidraze.
Diagnosticul de laborator
1. Diagnosticul bacteriologic
Se izoleaz streptococii din produsele patologice i se determind grupul seroiogic prin:
Testul la bacitracin se evideniaz grupul A (singurul sensibil la acest antibiotic). Reacia este
pozitiv cnd apare o zond de inhibiie a cresterii de 10 mm n jurul discului de bacirtracin de
0,04 UI sau 0.1 UI , dac colonia este de alt grup atunci colonia se dezvolt normal (este
rezistent).
Reacia de coaglutinare evideniaz grupurile A, B, C, G, D. Este o reacie de aglutinare pe
lam prin care anticorpii cunoscui, cuplati cu proteina A stafilococic, reacioneaz cu agentul
(antigenul) necunoscut. n acest fel complexele Ac-Ag sunt transformote n corpusculi si pot fi
vizualizai. Pentru acest test se folosete trusa STREPTIC.
Reacia de precipitare in inel se folosete pentru evidenierea grupelor serologice.
2. Diagnosticul imunologic
La 2-3 sptmni, de la debutul infeciei streptococice respiratorii acute (incorect tratate
sau netratate), se poate instala una din complicatiile grave nesupurative: glomerulonefrita acut
(GNA). reumatismul articular acut (RAA), seu febra reumatismal (FR), cardita reumatismal
(CR),coreea, eritemul nodos. Apar n urma mecanismului de hipersensibilizare de tip II
(citotoxc), III (complexe imune).
Diagnosticul imunologic se face uzual prin reacia ASLO (care reprezint titrul
anticorpilor anti streptolizin O) ea poate stabili: diagnosticul. prognosticul, eficienta
tratamentului.
Un titru mai mare de 200 u ASLO/ml arata o infectie streptococica in antecedente daca
dupa 3 saptamni de tratament nu scade titrul anticorpilor la normal, tratamentul se repet, dac
nu scade nseamn c s-a instalat reactia de hipersensibilizare, n acest caz pacientului (sub
tratament pe antibiotice de preferat penicilin) se determin lunar titrul ASLO, un titru care scade
arat vindecarea.
Patogenitate
Streptococii grup A pot da:
- infecii acute ale: tractului respirator (forma eruptiv- scarlatina, forma neeruptiv: angina,
faringita, etc)
- otita medie, sinuzita, meningita, pneumenie, bronhopneumonie, pleurezie, endocardita acuta.
Localizarea cutanat a infeciei streptococice este mai frecvent n zonele calde: intertrigo
impetigo, zablu (infecia comisurii bucale), celulite, abcese. flegmoane.
Erizipelul este o infecie streptococic cu localizare cutanat (atunci cnd exist o soluie de
continuitate): la nivelul gambelor, feei, cu caracter recidivant.
5

Virulena streptococilor piogeni este dat n special de proprietatea antifagocitar, care depinde
de prezena componentelor celulare de suprafaa: acidul hialuronic capsular i proteina M.
Streptococii viridans
Aceti streptococi dau hemoliz de tip a, n jurul coloniei i colonin vor fi verzi (dup
mentinerea peste noapte la 40 C, poate s mai apar la exterior un inel de hemoliz complet).
Sunt 5 grupuri de specii care pot da infecii umane.
Cele mai importante sunt:
- grupul mutans, cu specia S. mutans (cariogen),
- grupul salivarius, uiiele specii produc ureaz, un caracter distinct din acest gen,
- grupul sanguis, care hidrolizeaz aesculina,
- grupul mitis;
- grupul anginosus.
Localizare:
- Se gsesc n cavitatea bucal, tract urogenital, piele, sunt germeni saprofii conditionat
patogeni, ei pot da endocardita lent malign.
Nu contin n structura peretelui carbohidratul C, deci nu sunt inclui n clasificarea Lancefield.
Pentru diagnosticul diferential cu Streptococcus pneumoniae, care au acelai tip de
hemoliz (alfa), se efectueaz testul sensibilitii la optochin, al bilolizei i fermentrii inulinei,
toate sunt pozitive pentru pneumococ i negative pentru Streptococcus viridans.
Streptococii de grup D (Enterococcus)
Se mai numesc enterococi, cele mai cunoscute specii sunt: E. faecalis, E. faecium.
Pot produce hemoliz de tip a sau pe mediu de geloz-snge cca. 1/3 din tulpini, restul sunt
nehemolitici.
Pe agar cu bil-aesculin i azid de sodiu coloniile enterococilor sunt albe-cenuii cu holou
negru.
Se caracterizeaz prin:
- rezisten crescut la temperaturi ridicate (40-60oC).
- capacitate de dezvoltare la variaii mari de temperatur (ntre 10-45C).
- i la pH alcalin (9,6).
Enterococcus
- Enterococii sunt sferici, ovalari sau cocobacilari dispui n perechi sau lanturi scurte,
- Gram pozitivi, n majoritate imobili cu excepia speciilor: E-gallinarum i E.casseliflavus, care
sunt mobile.
- Ei determin infecii urinare, genitale, endocardite subacute (pn la 20 % din totalul lor).
Prezena n ap sau alimente a enterococilor arat contaminarea fecal a acestora, decelarea lor
servind ca test de poluare
Streptococcus pneumoniae (pneumococul)
Morfologie
- Sunt coci lanceolati dispui n diplo cu dimensiuni de 1/1,5m, pneumococii virulenti au
capsul care nconjur ambele celule, dispui cu capetele rotunjite fat in fat.
- Sunt imobili, nesporulai, Gram pozitivi, majoritatea sunt saprofiti, dar sunt i tulpini patogene
nu se gsesc n natur.
6

Caractere de cultur
Cresc numai pe medii ce conin snge, cei ncapsulati dau colonii de tip S'.
Sunt hemolitici, coloniile sunt mici, transparente i nconjurate de o, zon de hemoliz a, ca la
streptococii viridans.
Caractere biochimice
Sunt sensibili la bil, la optochin, fermenteaz inulina.
Rezisten
Sunt sensibili n mediul extern, se transmit prin picturile Pflugge, sunt distrui de razele
solare, de dezintectante la concentraii uzuale.
Majoritatea tulpinilor sunt sensibile la penicilin.
Structur antigenic
Are antigene somatice i solubile, cel mai important este Ag SSS (Substanta Solubil
Specific), din constituia capsulei, avnd o structur polizaharidica Ag SSS mparte
pneumococii n 83 de serotipuri (serotipul 3 d cea mai mare capsul).
Caractere de patogenitate
Pneumococii ncapsulai sunt patogeni prin multiplicare i invazivitate, nu are capacitate de
toxigenez.
Determin pneumonia franc lobar (localizat doar la nivelul unui singur lob).
Diagnosticul de laborator
Se practic diagnosticul bacteriologic, produsul patologic este sput, doar primele 14 grupuri
serologice sunt patogene.
Sputa n afeciunile pulmonare pneumococice este ruginie, puroiul este de consistent
cremoas, fibrinoas de culoare verzuie.
Frotiurile din produsele patologice se coloreaz Gram i albastru de metilen.
Se vor pune in eviden coci lanceolati, dispui in diplo sau lanuri scurte, nconjurai de
capsul, Gram pozitivi, leucocite, intra i extracelalari precum i detritusuri celulare.
Identificarea pneumococilor
Se face cu ajutorul unor teste biochimice i serologice:
Biloliza (fenomenul Neufeld) lizarea culturilor de pneumococi prin adugarea de bil, caracter
care l difereniaz de Str.viridans.
Testul sensibilitii la optochin (ethilhidrocuprein).
Pe o plac de geloz - snge se nsmnteaz un sector dintr-o cultur pur suspect, n centrul
ariei se depune un disc de optochin de 5g dup 24h la 37 C se citete rezultatul, tulpina de
pneumococ fiind foarte sensibil in jurul discului va apare o zon de inhibiie de 10 mm.
Fermentarea inulinei - se nsmnteaz o cultur pur de pneumococ n mediul Hiss ce
contine inulin, fermentarea inulinei schimb culoarea mediului, prin schimbarea pH-ului la acid
prin descompurerea zahrului. Acest caracter diferentiaz pneumococu de streptococii viridans
(Str. mitior i Str. milleri).
Identificarea serologic
Reacia de aglutinare.
Se realizeaz cu o suspensie de germeni n cultur pur, un mediu lichid care se pun n contact cu
serurile specifice de tip, la o reactie pozitiv apar aglutinine.
La noi se realizeaz identificarea serogrupurilor 1.2 i 3.
Tehnica de umflare a capsulei (reactia Neufeld), prin tratarea cu ser antipolizaharidic specific de
7

tip, are loc o mrire a capsulei.


Inocularea la oarece se practic pentru aprecierea virulentei tulpinii izolate. Se inoculeaz
oareci albi. Dup moartea sau sacrificarea animalului se autopsiaz i se pune n eviden
pneumococul n produsele patologice recoltate.
Tratament: penicilin, cefalosporine, eritromicin.
Antibiograma nu este necesar pentru c sunt sensibili la medicamentele de mai sus.
FAMILIA NEISSERIACEAE
Include patru genuri: Neisseria, Moraxella, Acinetobacter, Kingella.
n genul Neisseria, speciile importante pentru patologia umana sunt:
- Neisseria meningitidis (meningococul) i
- Neissaria gonorrhoeae (gonococul), dar pot fi amintite i specii saprofite (care fac parte din
grupul neisseriilor nepretentioase) ca: N. lactomica, N. sicca, N. subflava, N. mucasa. N.
elongata.
Germenii din acest gen sunt coci de form reniform, cu prtile adiacente concave, n diplo,
Gram negativi, uneori cu o tendint de a rezista decolorarii.
Toate speciile sunt aerobe, imobile, nu au flageli, unele tulpini posed pili.
Caractere generale
Temperatura optim de dezvoltare este ntre 35-37 C (sunt stenotermi - rezist la variaii mici
de temperatur).
Neisseriile patogene au cerinte nutritive complexe, pe cand cele saprofite se dezvolt pe medii
simple i la variatii mari de temperatur.
Echipamentul biochimic este reprezentat de un set relativ restrns de enzime, testul citocromoxidazei este unul din cele mai importante, el este pozitiv la genurile patogene pentru om i
negativ pentru cele nepatogene.
n acest curs se vor prezenta n special N. meningitidis i N. gonorrhoeae.
Neisseria meningitidis
Sunt coci ovalari, reniformi de dimensiuni de 0,6 - 1,0 Vm dispui n diplo Gram negativi. n
produsul patologic (LCR) sunt intra i extracelulari.
Habitat
- Se gasesc numai la oameni (bolnav, sau sanatoi).
- Sunt localizai pe tegumente, dar mai ales n concavitatea nazala i bucala.
Caractere morfologice
- germenii n diplo sunt nconjurai de o microcapsula.
- n peretele lor predomin antigenul O, nu mureina, fiind Gram-negativi.
- sunt germeni imobili, nesporulati.
- unele tulpini prezint pili n momentul izolarii, acestia pot s dispar dupa 1-2 subcultivari, nu
par s aiba prea mare important in virulena germenului.
Caractere de cultur
Pe medii solide
Cerinele nutritive sunt deosebite pentru Neisseriile patogene, eIe necesitnd factor, de cretere
speciali, de aceea se folosete:
8

- mediul Meller-Hinton, care contine casomina-acizi n locul peptonelor din carne;


- mediul Thayer - Martin, se pot obtine culturi i pe geloz-snge.
- geloz snge, geloza -ascit;
- geloza -ocolat.
Dupa 24 ore apar colonii S" mici cu diametrul de cca. 1 mm, transparente, alb- cenuiu, cu
margini neregulate, cu suprafaa neteda i lucioasa, nehemolitice.
La purtatorii sntoi se pot izola colonii R, colonii mai mari, opace, cu margini neregulat si
suprafaa granulara.
n mediile lichide (bulion M-N) crete srac dupa 2-3 zile, tulbur uor mediul sau lsnd un
mic depozit la fund.
Ca suport energetic utilizeaza glucoza din mediu n cantiti, mici de 2 .
Actiunea agentilor fizici, chimici i biologici
Temperatura optim pentru dezvoltare este de 35-37 C, meningococul se dezvolt mai
abundent n atmosfera umed, cu o concentratie de C02 de 5-10% mai ales la izolarea din
produsele patologice.
n pasajele ulterioare, prezenta C02 nu mai are aceeai importan.
Meningococul este sensibil la variatii de pH (pH optim este de 7,2 7,4) moare repede
(autolizeaz) la uscciune, nerezistnd n afara organismului n picaturile Pflgge mai mult de 30
min.
Fiind foarte sensibil la variatii de temperatura transportul LCR-ului de la patul bolnavului n
laborator pentru cultivare trebuie facut mentinndu-l la 37 C.
n cultur rezist 1-2 ore la 20-25C, autolizndu-se mai rapid dect la 370 C.
nsmnarea se face pe medii nclzite. Este sensibil la actiunea fenolului 1%, a alcoolului de
700 (10-15 min), la aciunea razelor solare, UV.
Sunt sensibili la aciunea sulfonamidelor, antibioticelor, penicilina fiind antibioticul de elecie
in tratamentul infectiilor meningococice.
Caractere biochimice i de metabolism
Este un germene strict aerob, posed, ca toi germenii din acest gen, o catalaz, o citocromoxidaz (se pune n evident astfel: se pune o colonie pe o hrtie de filtru care contine un
indicator: tetrametil-p-fenilendiamin, dac germenii sunt oxidazo-pozitivi, atunci culoarea
indicatorului va vira n purpuriu n 10 sec., un viraj mai tardiv nu este caracteristic).
De asemeni mai are i enzime zaharolitice, utiliznd pe cale oxidativ glucoza i maltoza i
nefermentand lactoza, fructoza i zaharoza.
Caractere de patogenitate
Meningococii sunt germeni patogeni, dar cu virulen sczut, 60-70% din infectiile
meningococice sunt inaparente. Cea mai frecvent localizare este cea nazal, foarte rar infecia
poate ajunge pe cale sanguin la meninge, unde va produce meningita (1 caz la 1000).
EI poate da: rinite meningococice (cel mai frecvent), sinuzite, faringite, meningita cerebro
spinal meningococic (MCSM).
Patogenitatea se datoreaz in special propriettilor sale antifagocitare date de ctre polizaharidul
capsular i de lipopolizaharidul care se afl n peretele bacterian.
Meningita fulminant (sindromul Waterhouse-Friederichsen)
9

Este o form supraacut a infeciei sanguine cu meningococ.


A fost considerat iniial ca o form fulgertoare de septicemie meningococic prin prbuirea
funciilor suprarenale datorit leziunilor hemoragice care se produc n aceast gland.
n aceast form fulminant, este caracteristic examenul LCR, este aproape clar, conine un
numr mic le PMN i un numar mare de germeni.
Decesul pacientului poate surveni n 24-36 ore, dac nu se face tratamentul corespunztor.
Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic
Produsele patologice sunt: snge, LCR, lichid peteial (la bolnav), exudate seroase, fragmente
de organe (de la cadavru), sau exudat faringian (la purttor).
Recoltarea se face in condiii de sterilitate.
Examenul direct al produselor patologice este foarte important - LCR, aspect macroscopic este
tulbure, purulent.
Proba se nsmneaz pe mediile amintite, fr s conin agenti selectivi.
Se vor face frotiuri i apoi coloratii Gram, albastru de metilen, May-Grnwald-Giemsa;
n cazul uneimeningite meningococice pe frotiu se vor vedea multe PMN diplococi Gram
negativi, reniformi, intra i extra celulari, imobili nconjurati de o capsul comun.
Amprente de organe de cadavru pot da unele indicaii.
Pentru alte produse, exudatul farirgian nu este concludent, datorit bogatei flore polimorfe unde
sunt multe Neisserii saprofite.
nsmnarea pe medii de cultur
Se folosesc mediile Meller-Hinton, Thayer-Martin, cu supliment HYL (snge lacat de cal 10
pri, autolizat de drojdie de bere 1 parte, autolizat de ficat de porc 2 pri).
nsmntarea din produsele patologice de la purttori sau din produsele suprainfectate, la
mediile de mai sus se adaug supliment selectiv LCN (lincomicin, colimicin, nistatin).
Se fac nsmntrile n conditiile descrise, dup 24-48 ore se fac citirile.
Identificarea
- Se selecteaz coloniile smooth, mici cu diametrul de cca. 1 mm, transparente, uor gri.
- Se examineaz biochimic pentru producerea citocromoxidazei (pe hrtie impregnat cu
tetrametil-p-fenilendiamin).
- Se fac frotiuri colorate Gram pentru prezena diplococilor Gram-negativi, n boabe de cafea"
faa n fa.
- Dac ndeplinesc cele trei criterii nseamn c aparin genului Neisseria.
- Identificarea serologic de grup din culturile pure, se fac aglutinri cu seruri polivalenie i apoi
cu monovalente, obinndu-se grupul de meningococ.
La noi cele mai frecvente sunt: A. B, C. Y i W-135.
Metode de identificare rapid
Coaglutinarea i latexaglutinarea (anticorpii antimeningococici sunt fixai pe proteina A
stafilococic respectiv pe particule de latex) se face direct din LCR.
Contraimunelecroforeza efectuat n gel de agar 1% cu tampon vernal cu pH 7.8. godeurile
dinspre anod sunt umplute cu LCR iar cele dinspre catod sunt umplute cu serurile
antimeningococice, cele mai frecvente serogrupuri n zona respectiv dup migrare 60-90 min, la
10

o intensitate de 3 mA pot fi urmrite aparitia benzilor de preciptare ntre godeurile cu lichid i


seruri antispecifice.
Metodele biologice moleculare.
Testarea sensibilittii la antibiotice (antibiogram) se face prin metoda disc-difuzimetric pe
mediul Meller-Hinton n atm. de CO2 la 37C i se citesc conform standardului indicat de
productorul de microcomprimate.
Confirmare
Coloniile care au aparinut genului Neisseria se vor repica pentru obinerea culturilor pure i apoi
se va face testare pentru fermentarea zaharurilor:
- fie se nsmnteaz pe medii: geloz cu zahar 1%, ser de cal 10%, indicator de albastru de
bromtimol, se incubeaz n atm. de C02 i se examineaz dup 24 ore.
- fie se nsmneaz pe galerii Api etc.
Fermentarea glucozei i maltozei i nefermentarea levulozei, lactozei l zaharozei, confirm
germenul in specia Neisseria meningitidis.
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria-gonorrhoeae sau gonococul produce infectia gonococic. Aceast bacterie a fost
descris de ctre Albert Neisser n 1879 n uretrite acute la brbati i n conjunctivita nounscutilor. Punerea n eviden a culturii de gonococ a fost n 1882 de ctre Leistikov i Leffler.
Habitat
N. gonorrhoeoe este un parazit strict pentru specia umana.
Se grefeaz pe celulele mucoase indemne, n special pe mucoasa genital i accidental pe alte
mucoase: rectala, faringiana, conjunctival.
Conjunctivita care poate ajunge pn la oftalmia gonococic la nou-nscut este o infectie
exogen Produs n timpul naterii atunci cnd mama are vaginit gonococic.
La brbat principala form de boa este uretrita gonococic, la femei vaginita i metrita.
Caractere morfo-tinctoriale
Sunt coci ovalari de 0,6-1,0 m, n diplo, cu prtile concave adiacente, asemntori boabelor de
cafea.
Sunt Gram negativi, imobili, nesporulai, nconjurati de o capsul comun. La suprafafaa
celulei au pili cu rol determinant n ataarea bacteriei de celula gazdei, deci se gsesc la speciile
virulente, lipsind la cele nevirulente sau la cele din colectiile vechi.
Caractere de cultur
Gonococul nu se dezvolt pe medii simple, este germenul cel mai greu de cultivat dintre toate
Neisseriile.
Se folosesc medile descrise la N. meningitidis, pentru produsele patologice se prefer mediile
cu suplimene selective (colimicin i lincomicin cte 300 g la 100 ml mediu final) sau
vancomicin, colistin, trimetoprim, nistatin.
Este necesar o atmosfer de 5-l0% CO2, la 35-37C.
Citirile se fac dup 24-48 ore. Gonococul produce colonii smooth de 0,5-1 mm, sau colonii de
tip M (mucoase), nepigmentate, transparente sau opace, nehemolitice.
Aciunea agentilor fizici, chimici i biologici
11

N. gonorrhoeae este foarte sensibil n afara organismului.


Este sensibil la uscciune, moare n 1-2 ore, nefiind viabil dect in secretiile purulente umede.
Este distrus de fenol 1% n 1-2 min, alcool medicinal 700 n 5-7 min.
Este sensibil la variaiile de temperatur i de pH (optim pH de 7,2-7,8).
Caractere biochirnice
Gonococul metabolizeaz glucoza, dar nu maltoza. Produc citocrom-oxidaza, testul catalazei este
pozitiv.
Sensibilitatea la antibiotice
n general este sensibil la pencilin n cca. 90%, dar pot fi i tulpini productoare de -lactamaz,
de aceea se recomanda antibiogram.
Caractere antigenice
Are antigene somatice "O" (care se pune n circulaie dup moartea bacteriei) i capsulare "K".
Patogenitate
Bolile produse la om sunt: uretrite gonococice sau blenoragia la ambele sexe, prostatite,
epididimite la brbai, cervicite, anexite, metrite la femei, conjunctivite, endocardite, artrite.
Toate cazurile de mbolnviri debuteaz cu o form acut cu simptome evidente (apare o
secretie abundent galben-verzuie la nivel genital).
Dac tratamentul nu este corect, boala trece n forma cronic, greu de depistat i tratat i
adenopatie satelit.
Imunitate
Imunitatea umoral este slab, de aceea apar reinfecii cu N. gonorrhoeae.
Nu exist un vaccin antigonococic cu proprieti profilactice.
Diagnosticul de laborator
Este bacteriologic
Produsele patologice sunt secretiile exudative ale mucoaselor inflamate.
Aceste au aspect purulent, opace, cremoase cu o tent glbuie i se desprind uor de pe mucoas.
Recoltarea
Se face cu ans sau cu tampoane sterile.
La brbai trebuie s se ptrund cu ansa sau cu tampoane cu diametrul de 2-3 mm, pe o
distan de 1-2 cm de la meat.
La femei recoltarea, se face din colul uterin, sau din sacul vaginal posterior, se va face cu valve
sau speculum, sterile.
Din alte exudate recolta se face cu tampoane sterile.
Examenul direct din probele recoltate
Se vor face frotiuri care se vor colora Gram i albastru de metilen, apoi se vor examina cu
imersie.
Frotiurile din uretrite acute conin PMN i coci n diplo in "boabe de cafea" intra i
extracelulari, Gram negativi.
n formele cronice prezenta n cantitate mare a florei polimorfe i fibrin, pot masca germenii
12

care au provocat infectia. De aceea se va face nsmntarea pe medii de cultur.


Cultivare
Se vor nsmna pe mediile amintite cu sau fr ageni selectivi.
Incubarea se va face n conditii de CO2 5-10% 1a 370C i n atmosfer umed.
Examinarea culturilor dup 24 - 48 ore.
Identificarea
Colonii mici cu diam. de 1-2 mm, transparente, uor gri, lucioase cu margini netede, reacia
oxidazei pozitiv m 5-10 secunde.
Pe frotiuri, diplococi Gram negativ n'boabe de cafea", capsulai, intra i extracelular,
Testul oxidazei pe hrtie sau slide-uri impregnate cu tetrametil-p-fenilendiamin,
Testul catalazei pozitiv.
Galerii Api NH unde identificarea poate fi realizat n cca. 4 ore.
Confirmare
Se testeaz fermentarea zaharurilor N. gonorrhoeae fermenteaz numai glucoza

13