Transestificacion de aceite con

metal y mediada
enzimticamente, seguimiento
por cromatografa en capa fina.
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA DE UNA REACCIN
ENZIMTICA EN PRODUCCIN DE BIODIESEL.
SHARON YOLOTZY RAMIREZ ROCHA 257582

Transestificacion de aceite con metal y mediada

enzimticamente, seguimiento por cromatografa en capa fina.
Cromatografa en capa fina de una reaccin enzimtica en
produccin de biodiesel.
Resumen;
Utilizamos la cromatografa en capa fina de una reaccin enzimtica en
produccin de biodiesel. En este caso los componentes de una mezcla se
separan por diferencia de solubilidad entre dos sistemas disolventes. Se utiliz
aceite vegetal y lipasa B candiada antartica inmovilizada. Se analiz el
biodiesel obtenido mediante cromatografa de capa fina, aqu se analizaron 3
tipos de cromatografas diferentes 1.aceite vegetal, 2, biodiesel a la primer y
segunda hora de experimento y 3. Biodiesel 1% y se determinacin los Rf de
las muestras eluidas en la placa cromatografica obtenida; obteniendo como
resultados a) Monoglicridos Rf= 0.123, b) Diglicridos Rf= 0.184, c)
Triglicridos Rf= 0.476, d) cidos grasos Rf= 0.815. e) Esteres Rf=
0.907.

Introduccin;
Transterificacion es el nombre con el que se conoce al tipo de reaccin
en el que los triglicridos presentes en los aceites vegetales y grasas
animales de combinan con un alcohol en presencia de un catalizador,
para formar una mezcla de esteres grasos (biodiesel) cuyos tamaos y
propiedades son similares a las del disel de petrleo y glicerina
(encinar, 2002), la reaccin global de Transterificacion puede
representarse por ( schuchart, 1998)
TG + 3ROH -> 3R CO2R + Glicerina
La cromatografa en capa fina es un caso de cromatografa de reparto en la que
los componentes de una mezcla se separan por diferencia de solubilidad entre
dos sistemas disolventes. Los elementos del sistema cromatografico son:
soporte, fase estacionaria (disolvente a), y fase mvil o eluyente (disolvente B).
Es una tcnica simple en cuanto al equipamiento necesario (placa y tanque
cromatografico) y de fcil desarrollo. El parmetro experimental asociado a la
tcnica es el Rf (coeficiente de reparto), relacionado con la solubilidad relativa
de un compuesto entre la fase estacionaria y fase mvil, y que depende de su
estructura qumica y su hidrosolubilidad/liposolubilidad. A modo de ejemplo, y
dentro de la presente prctica, se llevara a cabo la identificacin de biodiesel a
medida que ocurre la reaccin de Transestificacion de aceite vegetal.

El biodiesel es un biocombustible lquido que se obtiene a partir de

lpidos naturales como aceites vegetales o grasas animales, con o sin
uso previo, mediante procesos industriales de esterificacin y
transesterificacin, y que se aplica en la preparacin de sustitutos
totales o parciales del petrodisel o gasleo obtenido del petrleo

Objetivo;
Realizar cromatografa de capa fina de una mezcla de reaccin en la
produccin enzimtica de biodiesel.

Equipo material y sustancias

Material
Matraz 25ml
Barra magntica
Agitador magntico
Pipeta 10ml
Matraz volumtrico 100ml y 25ml
Vidrio de reloj
Vaso de precipitado 250ml
Propipetero
Frasco mbar

Reactivos
Aceite vegetal
Lipasa B candida antartica inmovilizada
Metanol
Metodologa
Hexano
cido sulfrico 40:25:35

Metodologa;
1. Colocar en un matraz de 25 ml, 8.4ml de aceite vegetal + 200mg de
lipasa B Canadida antartica inmovilizada (Novozyme 435)
2. Colocar una barra magntica y poner la mezcla en agitacin a una
temperatura de 25-26C durante 1 hora y media.
3. Aadir fracciones de 0.40ml de metanol cada 20minutos durante la hora
y media.

4. Tomar una gota con ayuda de un tubo capilar para cromatografa en

capa fina antes de cada adicin.
5. Analizar el biodiesel obtenido mediante C de capa fina de la siguiente
forma:
a) Colocar 5ml de una fase mvil (hexano/acetato de etilo/cido actico
94:5:5:0:5) en la cmara cromatografica.
b) Sobre una capa fina previamente cortada, 5cm de alto por 2.5 de ancho,
colocar una muestra de 1) aceite comercial, 2) biodiesel sintetizado a los
diferentes tiempos, 3) biodiesel comercial 1%
c) Eluir la placa por aprox. 20 minutos.
d) Secar y rociar con mezcla de revelado (etanol/metanol/cido sulfrico;
40:25:35) dejar reposar por 5 minutos y revelar con la pistola mediante
aire caliente.

Resultados;
Clculos y resultado del Factor de Retardo (Rf)
cromatografa.
Ecuacin Rf;

Rf =

di
D

(Ecuacin 1)

de la placa

1. Aceite vegetal
a) Monoglicridos
di
0.8 cm
Rf =
=
D
6.5 cm

d e

b) Diglicridos
di
1.2cm
Rf =
=
D
6.5 cm

= 0.6379

= 0.6379

2. biodiesel sintetizado
c) Triglicridos

Rf =

di
=
D

3.2cm
6.5 cm

123

= 0.6379

d) cidos grasos
di
5.3 cm
Rf =
=
D
6.5 cm

= 0.6379

3.
Biodiesel 1%
e) Esteres
di
5.9 cm
Rf =
=
D
6.5 cm = 0.6379

Discusin;
En la transesterificacin qumica usando un catalizador alcalino o cido el
proceso da un alto nivel de conversin de triglicridos a sus correspondientes
metil steres en cortos tiempos de reaccin, pero la reaccin tiene varias
desventajas: utiliza gran cantidad de energa, la recuperacin de glicerol es
difcil, el catalizador cido o alcalino tiene que separarse del producto, el
residuo de agua alcalina requiere de tratamiento, los cidos grasos libres y el
agua interfieren con la reaccin. Otra alternativa de catlisis es el empleo de
enzimas denominadas lipasas. Algunas de las lipasas ms utilizadas en
numerosos estudios de produccin de biodiesel son la Candida, Penicillium y las
Pseudomonas. (http://www.riieeme.mx/docs/tesismoraymabiodiesel2.pdf)
La lipasa es una enzima que se usa en el organismo para disgregar las grasas
de los alimentos para que se puedan absorber. Se han hecho una gran cantidad
e investigaciones usando enzimas como catalizador. Las mismas muestran que

se puede obtener un muy buen rendimiento. El uso de lipasas hace la reaccin

menos sensible a grandes cantidades de AGL (que son un problema en la
produccin comn)
En el articulo Production of biodiesel from vegetable oils using free enzymes;
Universidad del valle de Colombia; Chiguachi Leandro, Carlos Orrego. Donde se
utiliz el mismo mtodo que utilizamos en esta prctica Transestificacion de
aceite con metal y mediada enzimticamente, sustituyendo la cromatografa
en capa fina por la cromatografa de gases, obtuvieron como resultado que
cualquier tipo de aceite vegetal es apropiado para la produccin de biodiesel.
Existen 5 principales formas de produccin de biodiesel, proceso por lotes,
proceso sper crtico, reactor ultrasnico, mtodo de microondas y mtodo de
enzimas lipasas.

Resultados;
El proceso de separacin de los glicridos

Y el biodiesel

Empleando papel de capa fina como fase estacionario y hexano como fase
mvil, permite definir diferencias entre los Rf de los analitos. Los ms polares
fueron ms afines a la fase mvil y la mezcla de disolventes tena un carcter
no polar.
Rfs

1. Aceite vegetal
Monoglicridos
Rf =

di
D =

0.8 cm
6.5 cm

= 0.6379

di
D =

1.2cm
6.5 cm

= 0.6379

Diglicridos
Rf =

2. biodiesel sintetizado
Triglicridos
Rf =

di
D =

3.2cm
6.5 cm

= 0.6379

cidos grasos
Rf =

di
D =

5.3 cm
6.5 cm

= 0.6379

3. Biodiesel 1%
Esteres
Rf =

di
D =

5.9 cm
6.5 cm

= 0.6379

Bibliografa;
file:///C:/Users/Sharon/Downloads/600-614-1-PB%20(1).pdf
http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=231117829006
http://www.riieeme.mx/docs/tesismoraymabiodiesel2.pdf