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Practica de Laboratorio N 1

OBJETIVOS:
Determinar parmetros cinticos de una cepa de Aspergillus kawachi,
creciendo en medio lquido.
Establecer los perfiles de actividad amiloltica producida durante el cultivo.
Relacionar los perfiles de actividad enzimtica que produce la cepa con la
curva de crecimiento.
Datos de la prctica obtenidos a diferentes tiempos
M.
Cultivo
Almidn
(liq)
Almidn
(liq)
Almidn
(liq)
Almidn
(liq)
Almidn
(liq)
Almidn
(liq)
Almidn
(liq)

de

M.O.

A.
kawachi
A.
kawachi
A.
kawachi
A.
kawachi
A.
kawachi
A.
kawachi
A.
kawachi

Hr.
de
cultiv
o
0

Tara
papel
plato

P seco
total

P
seco
muestra

P
seco
(g/l)

1,151

1,153

0,002

0,025

1,149

1,153

0,004

0,050

20

1,149

1,206

0,057

0,712

27

1,147

1,256

0,109

1,363

44

1,151

1,296

0,145

1,813

46

1,142

1,295

0,153

1,913

52

1,143

1,303

0,16

2,000

CURVA DE CRECIMIENTO
Con los datos de la tabla anterior podemos graficar la curva de crecimiento
Horas
cultivo
0
5
20
27
44
46
52

de P
seco
(g/l)
ln X
3,6888794
0,025
5
2,9957322
0,050
7
0,3389753
0,712
7
0,3093212
1,363
5
0,5947071
1,813
1
0,6484112
1,913
9
0,6931471
2,000
8

Practica de Laboratorio N 1
1
0
Ln X

-1

f(x) = - 0x^2 + 0.22x - 3.81


R = 0.99
0 10 20 30 40 50 60

-2

Polynomial ()

-3
-4
tiempo

Graficando solo la parte exponencial de la curva podemos obtener la velocidad


especifica de crecimiento (), siendo este valor igual al de la pendiente en la
ecuacin de regresin lineal. Adems podemos calcular el tiempo de generacin
como: tg=Ln2/

Horas de cultivo
0
5
20
27

ln X
-3,68887945
-2,99573227
-0,33897537
0,30932125

pte ()
tg

0,1546
4,483

1/hr
hr

1
0
Ln X

-1

f(x) = 0.15x - 3.69


0 R =50.9910
15

20

25

30

-2
Linear ()

-3
-4
tiempo

AZUCARES TOTALES
Con los datos de las muestras patrn se construye la curva de calibracin para
evaluar el contenido de azucares totales.
Curva de calibracin
Concentracin
(ppm)
0
25
75

Absorbanci
a
0,497
0,667
0,955

Practica de Laboratorio N 1
100
150
200

1,045
1,154
1,369
1.500
R ==0.97
f(x)
0x + 0.56

1.000
absorvancia

0.500

Linear ()

Linear ()

0.000
0

50

100

150

200

250

conc.

Muestras

A partir de los datos obtenidos podemos calcular la variacin de las concentraciones


de azcar total en el tiempo, con la ecuacin de regresin lineal.
Debe hacerse un pasaje de unidad en las concentraciones, de ppm a g/l.
Horas
cultivo
0
5
20
27
44
46

de

Absorbancia
1,921
2,778
3,801
1,604
0,937
0,92

Az.
Total Az.
(ppm)
(g/l)
3229,05
3,23
5269,52
5,27
7705,24
7,71
2474,29
2,47
886,19
0,89
845,71
0,85

Total

10.00
8.00
6.00
az. total

4.00
2.00
0.00
0 5 101520253035404550
tiempo

La curva obtenida no es correcta, no debera haber aumentado (de 3,23g/l a


7,71g/l). Lo que pudo haber pasado es que en el medio el almidn no se lleg a
disolver bien, por lo que debe de haberlo hecho con el tiempo, y por eso es el pico.
AZUCARES REDUCTORES (principalmente glucosa)
Se realizan los mismos clculos que en el caso anterior.
Curva de calibracin

Practica de Laboratorio N 1

Concentracin
(ppm)
0
100
200
400
500
600
700
800
900
1000

Absorbancia
-0,008
-0,001
0,011
0,042
0,057
0,064
0,08
0,095
0,107
0,123
0.15
0.1

absorvancia

f(x) = 0x - 0.01
R = 1

0.05

Linear ()

0
-0.05

200

400

600

800

1000

1200

conc.

Muestra
Debe hacerse un pasaje de unidad en las concentraciones, de ppm a g/l.
Horas
cultivo
0
5
20
27
44
46

de Absorbanci
a
-0,003
-0,007
0,024
0,015
0,009
0,006

Az.
Reductor Az.
Reductor
(ppm)
(g/l)
465
0,465
265
0,265
1815
1,815
1365
1,365
1065
1,065
915
0,915

2
1.5
az. reductores

1
0.5
0
0

10 15 20 25 30 35 40 45 50
tiempo

En el punto 1 y 2 hay un error de medicin, porque no es correcto que haya una


disminucin, luego aumente y despus caiga de nuevo la concentracin.

Practica de Laboratorio N 1
Lo que en realidad ocurre es que aumenta glucosa porque la enzima degrada el
almidn, quedando solo glucosa, luego las clulas empiezan a consumir glucosa y
por eso disminuye.

ACTIVIDAD ENZIMATICA: -amilasa


Igual que anterior.
Curva de calibracin
Concentracin
(ppm)
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900

Absorbancia
0,102
0,13
0,159
0,213
0,256
0,263
0,294
0,339
0,395
0,423
0.6
0.4

absorvancia

f(x) = 0x + 0.1
R = 0.99

0.2

Linear ()

0
0

500

1000

conc.

Muestras
1 UE = 1 mmol Glu/minuto
Horas
cultivo
0
5
20
27
44
46

de

Abs
0,154
0,164
0,729
0,323
0,17
0,181

Conc. (ppm)
143,25
168,25
1580,75
565,75
183,25
210,75

UE
3,18
3,74
35,13
12,57
4,07
4,68

Practica de Laboratorio N 1
40.00
35.00
30.00
25.00
UE

20.00
15.00
10.00
5.00
0.00
0

10 15 20 25 30 35 40 45 50
tiempo

A la UE se lo divide en los 20 minutos que es el tiempo en que queda reaccionando,


a una temperatura de 40C, para que se produzca la enzima.

RENDIMIENTOS OBTENIDOS:

Se tomaron como valores finales aquellos que correspondan a los 27 min, ya que es
donde estn los valores de mximo.
Xf-Xi= 1,363g/l 0,025g/l = 1,338g/l
-(Sf-Si)= -(2,47g/l 3,23g/l) = 0,75g/l
Pf-Pi= 0,566g/l 0,14g/l = 0,42g/l
Entonces:
Yx/s = X/S= 1,77
Yp/s = P/S = 0,56

Practica de Laboratorio N 1

CONCLUSION

Realizando la prctica de un cultivo sumergido en un bioreactor discontinuo,


pudimos obtener los parmetros cinticos, as como tambin los perfiles de
crecimiento, consumo de sustrato y formacin de producto, efectuando todos los
clculos pertinentes.
Adems pudimos comprobar, comparando las graficas de crecimiento con la de
actividad enzimtica, que la enzima -amilasa es un metabolito primario, ya que
est asociado el crecimiento de la clula.